一種脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于藥用脂肪酸酰胺的合成技術領域，涉及一種脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法。
【背景技術】
[0002]脂肪酸單乙醇胺是一種重要的油溶性非離子型表面活性劑，廣泛應用于潤滑劑、表面活性劑和洗滌劑等領域中，而且脂肪酸單乙醇酰胺通過羧甲基化、磷酸酯化、硫酸酯化和乙氧基化改性可制取多種易生物降解的表面活性劑，具有廣闊的應用前景。
[0003]此外，脂肪酸單乙醇酰胺作為一種新的內源性信號分子在動植物組織中的脂質介質的功效倍受人們關注(Kilaru et.al.,Chem B1divers 2007，4:1933-1955)。功能性的脂肪酸乙醇酰胺主要包括棕櫚酸單乙醇酰胺，油酸單乙醇酰胺，花生四烯酸單乙醇酰胺和二十碳五烯酸單乙醇酰胺(ΕΡΕΑ)。棕櫚酸單乙醇酰胺在大豆油、花生油和蛋黃中都有發(fā)現(xiàn)，并被報道具有抗炎活性(Kuehl et al..J Am Oil Chem Soc 1957，79:5577_5578)。油酸單乙醇酰胺是內源性大麻素花生四烯酸乙醇酰胺的天然類似物(Thabuis et al.,Lipids2008，43: 887-894)，在脂質代謝和食物攝入的控制中起到重要作用，是治療心血管疾病及肥胖藥物研究中熱點。油酸單乙醇酰胺主要是通過結合過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)及調節(jié)脂肪組織中脂肪酸轉運體(FAT/CD36)的表達增加腸道脂肪酸攝取的方法來調節(jié)反饋和能量穩(wěn)態(tài)，并且影響飽腹感信號傳導生物標記物的合成(Fu etal.，Neuropharmaco1gy 2005，48:1147-1153)。多不飽和脂肪酸單乙醇酰胺也表現(xiàn)出生物功能性，二十碳五稀酸單乙醇酰胺顯示出抗增殖活性、抗癌活性(B r ο w n e t a 1.，Carcinogenesis 2010，31:1584-1591)與抗炎活性(Balvers et al.,B1chim B1physActa 2010,1801:1107-1114)，作為機體代謝信號分子，在生物體老化中起重要作用(Lucanic et al.,Nature 2011,473:226-229)0
[0004]脂肪酸單乙醇酰胺的合成主要為化學法。傳統(tǒng)化學法常用的?；w包括脂肪酸酰氯和脂肪酸甲酯(或乙酯)，反應溫度高(180°C)，高溫對產品的產率、顏色和氣味都會有影響，化學催化劑對-NH2基團的選擇性差，會產生胺酯和酰胺酯副產物。此外，脂肪酸酰氯價格較高，且脂肪酸酰氯具有毒性和腐蝕性。

【發(fā)明內容】

[0005]本部分的目的在于概述本發(fā)明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發(fā)明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發(fā)明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發(fā)明的范圍。
[0006]鑒于上述和/或現(xiàn)有合成脂肪酸單乙醇酰胺中存在的問題，提出了本發(fā)明。
[0007]因此，本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有常規(guī)化學合成的不足之處，提供一種工藝簡易、操作方便且能有效制備脂肪酸單乙醇酰胺的合成方法。
[0008]為解決上述技術問題，本發(fā)明提供如下技術方案:一種脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法，其包括，將脂肪酸單甘酯和單乙醇胺按一定比例在溶劑反應體系下充分混合，并加入一定量的脂肪酶，在適宜的溫度下攪拌，進行酰胺化反應，制備脂肪酸單乙醇酰胺;其中，脂肪酸單甘酯與單乙醇胺混合的摩爾比為1:1?1:2;酰胺化溫度為20?70°C，反應時間為2?5h;所述一定量的脂肪酶其質量百分比為10%?20%。
[0009]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述脂肪酸單甘酯是飽和脂肪酸單甘酯，且飽和脂肪酸單甘酯為棕櫚酸單甘酯、月桂酸單甘酯、肉豆寇酸單甘酯或硬脂酸單甘酯中的一種或幾種。
[0010]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述脂肪酸單甘酯是不飽和脂肪酸單甘酯，且不飽和脂肪酸是油酸單甘酯、亞油酸單甘酯、亞麻酸單甘酯、花生四烯酸單甘酯、二十碳五烯酸單甘酯或二十二碳六烯酸單甘酯中的一種或幾種。
[0011]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述有機溶劑為己烷、石油醚、正己烷、乙酸乙酯、丙酮和氯仿中的一種或幾種。
[0012]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述脂肪酶催化劑為Novozym 435、Lipozyme 435、Lipozyme RM IM或Lipozyme TL IM中的一種或幾種。
[0013]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述有機溶劑為己烷。
[0014]作為本發(fā)明所述的脂肪酸單乙醇酰胺的酶法合成方法的一種優(yōu)選方案，其中:所述脂肪酶催化劑為Novozym 435。
[0015]本發(fā)明的有益效果:
[0016]1、本發(fā)明首次采用單甘酯為?；w酶法合成脂肪酸乙醇酰胺；
[0017]2、與化學法相比，酶法合成選擇性更好，單甘酯只與乙醇胺的-NH2反應，不與-OH反應；
[0018]3、使用的脂肪酸和脂肪酸乙酯(或甲酯)作為?；w時，脂肪酸和脂肪酸乙酯與乙醇胺的相溶性很差，反應效率相對較低，甘油三酯與乙醇胺的酶法反應，因此極性相差太大，互溶性很差，沒有脂肪酸乙醇胺的形成，單甘酯因為具有一定的極性，與乙醇胺的互溶性更好，因此反應效率更高。
【附圖說明】
[0019]圖1為實施例1中油酸單甘酯與單乙醇胺酰胺化產物油酸單乙醇酰胺的核磁示意圖；
[0020]圖2為實施例1的油酸單甘酯與單乙醇胺酰胺化產物油酸單乙醇酰胺的正相液相色譜示意圖；
[0021]圖3為實施例2的棕櫚酸單甘酯與單乙醇胺酰胺化產物棕櫚酸單乙醇酰胺的正相液相色譜示意圖；
[0022]圖4為實施例3的花生四烯酸單甘酯與單乙醇胺酰胺化產物花生四烯酸單乙醇酰胺的正相液相色譜示意圖。
【具體實施方式】
[0023]為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結合說明書附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】做詳細的說明。
[0024]在下面的描述中闡述了很多具體細節(jié)以便于充分理解本發(fā)明，但是本發(fā)明還可以采用其他不同于在此描述的其它方式來實施，本領域技術人員可以在不違背本發(fā)明內涵的情況下做類似推廣，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施例的限制。
[0025]其次，此處所稱的“一個實施例”或“實施例”是指可包含于本發(fā)明至少一個實現(xiàn)方式中的特定特征、結構或特性。在本說明書中不同地方出現(xiàn)的“在一個實施例中”并非均指同一個實施例，也不是單獨的或選擇性的與其他實施例互相排斥的實施例。
[0026]實施例1:
[0027]在反應爸中加入2mmo I油酸單甘酯、2mmol單乙醇胺和0.5ml己燒，在攪拌下加入質量百分比為10%脂肪酶Lipozyme 435，密閉反應釜，攪拌升溫至45°C，反應時間為2小時。在反應結束時，通過過濾分離脂肪酶，溶劑減壓蒸發(fā)去除。經HPLC分析，油酸單乙醇酰胺產率為99.85%。
[0028]如圖1和圖2所示，圖1為實施例