一種組合物及其應(yīng)用、含有該組合物的穩(wěn)定劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別設(shè)及一種組合物及其應(yīng)用、含有該組合物的穩(wěn)定 劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛋白質(zhì)是一種具有復(fù)雜的空間立體結(jié)構(gòu)的大分子物質(zhì)，易受外界條件的影響發(fā)生 變性。蛋白質(zhì)穩(wěn)定性與組成中的氨基酸種類有關(guān)系，最常見的是半脫氨酸，蛋白質(zhì)對溶液 pH、空氣中的氧等外界因素都較為敏感，容易發(fā)生結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變，影響活性。
[0003] 巧調(diào)憐酸酶(化1C i neur i η, CN)是目前所知唯--種依賴化2 YCaM (巧調(diào)素）的蛋白 憐酸酶，由A，B亞基W1:1的比例組成。A亞基(CNA)是催化亞基，B亞基(CNB)是調(diào)節(jié)亞基。CN 在免疫激活通路中發(fā)揮重要作用，示T細胞活化的關(guān)鍵沒。CN作為大分子酶蛋白，易失活，不 穩(wěn)定，而CNB作為該酶的調(diào)節(jié)亞基，能促進CNA的活性，且相對分子質(zhì)量小，性質(zhì)穩(wěn)定。由研究 表明CNB能刺激T細胞和NK細胞增殖W及增強NK細胞的殺傷活性，增強巨隧細胞吞隧能力等 免疫功能，且重組人巧調(diào)憐酸酶B亞基（Recombinant human Calcineurin B subunit, rhCNB)是開發(fā)中的基因工程創(chuàng)新腫瘤藥物。
[0004] rhCNB具有明顯的殺傷腫瘤細胞的作用，單體是一種含有兩個琉基結(jié)構(gòu)的蛋白，在 生產(chǎn)、放置等過程中，易受溫度、水分、pH值、光照、氧化等因素影響形成二聚體、Ξ聚體等多 聚體結(jié)構(gòu)，造成各組分比例不穩(wěn)定，無法定量控制的特點。
[0005] 因此，提供一種能有效穩(wěn)定重組人巧調(diào)蛋白憐酸酶B亞基組分比例的組合穩(wěn)定劑 具有重要的現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明提供一種組合物及其應(yīng)用、含有該組合物的穩(wěn)定劑。本發(fā)明為了 解決rhCNB各組份比例穩(wěn)定可控的難題，完成藥物臨床申報穩(wěn)定性考察，滿足藥物申報的要 求，通過大量的實驗，得到了本發(fā)明中的穩(wěn)定劑組合物，有效的解決了 rhCNB生產(chǎn)、膽存過程 中不穩(wěn)定的問題。
[0007] 本發(fā)明提供了一種能夠穩(wěn)定rhCNB組分比例的穩(wěn)定劑組合物，由無機鹽、氨基酸、 糖類、多元醇、表面活性劑按一定比例組成的組合物，其中不同成分分別對rhCNB的單體、二 聚體、多聚體等組分起各自的穩(wěn)定作用，并能形成協(xié)同與疊加，使rhCNB有效成份(含二聚體 和單體)純度達99 % W上，其中二聚體穩(wěn)定控制在98 % W上，雜質(zhì)多聚體含量小于0.5 %，達 到生物藥品本項指標(biāo)國際先進水平。
[000引為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供W下技術(shù)方案：
[0009] 本發(fā)明提供了一種組合物，包括氯化物、氨基酸、糖類或表面活性劑中的一種或兩 者W上的混合物。
[0010] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，W質(zhì)量份計，包括如下組分： 氣化物 0.犯~0.1份 義基酸 0.05~0.25份
[0011] 膽類 2如10份 泉巧活帷劑 0,1 ·-0.5份c>
[0012] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述氯化物為氯化巧或氯化鋒。
[0013] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述氨基酸為色氨酸或賴氨酸。
[0014] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述糖類為海藻糖、薦糖或甘露醇中的一種或 兩者W上的混合物。
[0015] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述表面活性劑為非離子型表面活性劑。
[0016] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述非離子型表面活性劑為聚山梨醋-80。
[0017] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，W質(zhì)量份計，包括如下組分： 氯化約或氯化辭 0.02~0.1份 色氨酸或賴氨酸 0.05~0.25份
[001引海藻搪 0.2~2份 篇糖 0.2~2份 甘露醇 1~10份
[0019] 聚山梨縣-80 化1~0.5紛
[0020] 在本發(fā)明的另一些具體實施方案中，W質(zhì)量份計，包括如下組分： 氣化約 0.02~(U紛 色氨酸 0.05~0.25份 海藻糖 0.2~2份
[0021] 蕉糖 0.2~2份 甘露醇 1~10份 聚山梨醋-80 0.1~0.5份
[0022] 在本發(fā)明的另一些具體實施方案中，W質(zhì)量份計，包括如下組分： 氯化舞 娘斗.1份 猶氨酸 0.05'、.0.25份 海藻糖 0.2~2份
[0023] 慕糖 0.2-2份 甘露醇 1~10份 聚山梨醋-80 々.1~0.5份
[0024] 本發(fā)明還提供了所述組合物在用于制備人巧調(diào)蛋白憐酸酶B亞基穩(wěn)定劑中的應(yīng) 用。
[0025] 本發(fā)明還提供了一種提高人巧調(diào)蛋白憐酸酶B亞基組分穩(wěn)定性的穩(wěn)定劑，包括所 述組合物和水。
[0026] 本發(fā)明還提供了一種提高人巧調(diào)蛋白憐酸酶B亞基組分穩(wěn)定性的穩(wěn)定劑的制備方 法，在本發(fā)明的一些具體實施方案中，包括如下步驟：
[0027] 步驟1:按配比稱量氯化巧或氯化鋒、色氨酸或賴氨酸、海藻糖、薦糖、甘露醇、聚山 梨醋-80;
[00%]步驟2:將氯化巧或氯化鋒、色氨酸或賴氨酸、海藻糖、薦糖、甘露醇混合，再加入50 ~150份注射用水?dāng)埌瑁频没旌弦?再加入活性炭攬拌，過濾除炭，制得第一溶液；
[0029] 步驟3:取配方量的聚山梨醋-80,加入注射用水，再加入活性炭，攬拌，過濾除炭， 制得第二溶液；
[0030] 步驟4:將步驟2制得的第一溶液和步驟3制得的第二溶液混合，過濾除菌。
[0031] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，步驟2中注射用水的溫度為20~60°C。
[0032] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，步驟2中所述再加入50~150份注射用水?dāng)埌璧?轉(zhuǎn)速為30~200巧m。
[0033] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，步驟2中所述活性炭為活化的活性炭，所述活性 炭占所述混合液的體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%~0.5%。
[0034] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，步驟2中所述再加入活性炭攬拌的時間為10~ 30min〇
[0035] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，步驟3中所述用注射用水沖洗的次數(shù)為2~4次。
[0036] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，步驟3中所述活性炭為活化的活性炭，所述活性 炭占所述混合液的體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%~0.5%。
[0037] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，步驟3中所述攬拌的時間為10~30min。
[0038] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述制備方法步驟4中所述過濾除菌為經(jīng)0.2μπι 濾忍過濾除菌。
[0039] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述rhCNB(W蛋白質(zhì)量計）與所述組合物或穩(wěn) 定劑的質(zhì)量比為1: 1。
[0040] 即：
[0041] 組合物或穩(wěn)定劑是由氯化巧或氯化鋒、色氨酸或賴氨酸、海藻糖、薦糖、甘露醇、聚 山梨醋-80共同組成，其配比如下：
[00創(chuàng)①氯化巧0.02~0.1份、色氨酸0.05~0.25份、海藻糖0.2~2份、薦糖0.2~2份、甘 露醇1~10份、聚山梨醋-800.1~0.5份、rhCNB蛋白1份。
[0043] ②氯化鋒0.02~0.1份、賴氨酸0.05~0.25份、海藻糖0.2~2份、薦糖0.2~2份、甘 露醇1~10份、聚山梨醋-800.1~0.5份、rhCNB蛋白1份。
[0044] 本發(fā)明提供了一種組合物，包括氯化物、氨基酸、糖類或表面活性劑中的一種或兩 者W上的混合物。本發(fā)明為了解決rhCNB各組份比例穩(wěn)定可控的難題，完成藥物臨床申報穩(wěn) 定性考察，滿足藥物申報的要求，通過大量的實驗，得到了本發(fā)明中的穩(wěn)定劑組合物，有效 的解決了 rhCNB生產(chǎn)、膽存過程中不穩(wěn)定的問題。
[0045] 本發(fā)明提供了一種能夠穩(wěn)定rhCNB組分比例的穩(wěn)定劑組合物，由無機鹽、氨基酸、 糖類、多元醇、表面活性劑按一定比例組成的組合物，其中不同成分分別對rhCNB的單體、二 聚體、多聚體等組分起各自的穩(wěn)定作用，并能形成協(xié)同與疊加，使RhCNB有效成分純度達 99% W上，其中二聚體穩(wěn)定在98% W上，雜質(zhì)多聚體含量小于0.5%，達到生物藥品本項指 標(biāo)國際先進水平。
[0046] 加入本發(fā)明提供的組合穩(wěn)定劑，在37°C條件下儲存6個月，rhCNB組分比例和生物 活性沒有明顯變化，各項質(zhì)量指標(biāo)也無明顯變化。
【附圖說明】
[0047] 為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技