一種利用羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高f值寡肽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及水產(chǎn)加工廢棄物的綜合利用技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種利用羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高F值寡肽的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]中國(guó)為羅非魚(yú)的生產(chǎn)與出口大國(guó)，年產(chǎn)量150萬(wàn)噸以上，羅非魚(yú)的加工品主要為魚(yú)片，在加工過(guò)程中將產(chǎn)生大量魚(yú)排等廢棄物。羅非魚(yú)廢棄物的迄今仍很不充分，主要被用作生產(chǎn)魚(yú)粉的原料，甚至丟棄，不僅浪費(fèi)，而且污染環(huán)境。
[0003]高F值寡肽(HighFischer Rat1 Oligopeptides，HFRP)是指蛋白質(zhì)水解得到的由2?9個(gè)氨基酸組成的寡肽混合物，F(xiàn)值是指支鏈氨基酸(即纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸)與芳香族氨基酸(即苯丙氨酸、酪氨酸)含量的摩爾比值(支/芳比)，高F值寡肽的F值應(yīng)在20以上。高F值寡肽具有輔助治療肝性腦病、抗疲勞、治療苯丙酮尿病等功能。
[0004]羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉蛋白質(zhì)的支/芳比與傳統(tǒng)的制備高F值寡肽的原料的支/芳比接近，故羅非魚(yú)碎肉可以作為制備高F值寡肽的原料。但迄今未見(jiàn)有利用羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高F值寡肽的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，提供一種羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高F值寡肽的方法。
[0006]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的:
一種利用羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高F值寡肽的方法，包括以下步驟:
(1)將羅非魚(yú)魚(yú)排洗凈并分離獲得絞碎羅非魚(yú)碎肉，將絞碎羅非魚(yú)碎肉加水勻漿后，加入蛋白酶，，在溫度40?60°C條件下水解0.5?24h，水解結(jié)束后，煮沸滅酶，冷卻至室溫后過(guò)濾收集上清液；
(2)取上清液，按質(zhì)量比加入0.3?1.5g活性炭，吸附0.5?2h，去除活性炭，經(jīng)截留分子量為1000 Da的膜過(guò)濾即得羅非魚(yú)碎肉高F值寡肽溶液。
[0007]優(yōu)選地，步驟(1)中，分離獲得絞碎羅非魚(yú)碎肉的方法有很多種，可用震蕩、水流沖洗、煮熟等各種方法將碎肉與魚(yú)骨分離，然后濾除水，得到羅非魚(yú)碎肉；另外還要求所用的魚(yú)排必須為未發(fā)生腐敗的魚(yú)排，可為新鮮的或凍結(jié)的。
[0008]優(yōu)選地，這里羅非魚(yú)碎肉與蛋白酶發(fā)生水解反應(yīng)，反應(yīng)的溫度低于蛋白酶的失活溫度，水解時(shí)間0.5h以上，具體的，可為0.5?6h。
[0009]優(yōu)選地，步驟(1)中的水解反應(yīng)可適量添加水，從而提高水解效率，這里羅非魚(yú)碎肉與水的質(zhì)量體積比為1:2?20(m/v)。
[0010]更優(yōu)選地，步驟(1)中的水解反應(yīng)可適量添加水，從而提高水解效率，這里羅非魚(yú)碎肉與水的質(zhì)量體積比為1:10?15(m/v)。
[0011 ]優(yōu)選地，步驟(1)中所述蛋白酶為堿性蛋白酶。
[0012]優(yōu)選地，步驟(1)是將絞碎羅非魚(yú)碎肉加水勻漿后，i.周pH為7?10。
[0013]優(yōu)選地，步驟(2)是加入活性炭前，將上清液調(diào)pH值至5?7，在室溫下吸附。
[0014]作為一種優(yōu)選方案，上述步驟(5)中的活性炭的用量是每克羅非魚(yú)碎肉添加l.0g?1.5g。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:
本發(fā)明提供了一種利用羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高F值寡肽的方法，包括以下步驟:(1)將羅非魚(yú)排洗凈并分離獲得絞碎羅非魚(yú)碎肉，將絞碎羅非魚(yú)碎肉加水勻漿后，加入蛋白酶，水解0.5?24h，水解結(jié)束后，煮沸滅酶，冷卻至室溫后過(guò)濾收集上清液；(2)取上清液，按質(zhì)量比加入0.3?1.5g活性炭，吸附0.5?2h，去除活性炭，經(jīng)截留分子量為1000 Da的膜過(guò)濾即得羅非魚(yú)碎肉高F值寡肽溶液，用此方法獲得的寡肽F值最高可達(dá)40，可高效獲得寡肽，并且能提高羅非魚(yú)加工廢棄物的利用率，具有廣泛和實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的簡(jiǎn)單修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍；若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。獲得的高F值寡肽分子量一般在1000 Da以下，F(xiàn)值在20以上，且F值越高越好。
[0017]實(shí)施例1
制備高F值寡肽的方法，包括以下步驟:
(1)原料預(yù)處理:將羅非魚(yú)排洗凈，按質(zhì)量比1:5加入水，煮沸5min，冷卻至室溫，震蕩令魚(yú)肉脫落，挑出魚(yú)骨后靜置5min，令魚(yú)肉沉淀，傾出上層水，然后過(guò)濾收集羅非魚(yú)碎肉。
[0018](2)用絞肉機(jī)將收集的羅非魚(yú)碎肉進(jìn)一步絞碎。
[0019](3)取絞碎的羅非魚(yú)碎肉20g置于反應(yīng)容器中，按質(zhì)量體積比1:12加入水，用食品級(jí)碳酸鈉溶液調(diào)pH為8.5，按照800U/g碎肉的比例加入堿性蛋白酶(諾維信產(chǎn))，在溫度45°C條件下水解6h，水解結(jié)束后，煮沸滅酶2min，冷卻至室溫后過(guò)濾去殘?jiān)占锨逡骸?br>[0020](4)取上清液，用2mol/L食用醋酸調(diào)節(jié)上清液pH值至6.0，在室溫下加入20g食品級(jí)活性炭，吸附0.5h，然后過(guò)濾分離活性炭和寡肽混合物，即得到羅非魚(yú)碎肉高F值寡肽粗品。
[0021](5)將所得到的高F值寡肽粗品經(jīng)截留分子量為1000 Da的膜過(guò)濾，所得到的透過(guò)液即為羅非魚(yú)碎肉高F值寡肽液，其F值為22.4，獲得F值寡肽0.94g(產(chǎn)品得率為35%)。
[0022]實(shí)施例2
制備高F值寡肽的方法，包括以下步驟:
(1)原料預(yù)處理:將羅非魚(yú)排洗凈，按質(zhì)量比1: 10加入水，煮沸5min，冷卻至室溫，震蕩令魚(yú)肉脫落，挑出魚(yú)骨后靜置5min，令魚(yú)肉沉淀，傾出上層水，然后過(guò)濾收集羅非魚(yú)碎肉。
[0023](2)用絞肉機(jī)將收集的羅非魚(yú)碎肉進(jìn)一步絞碎。
[0024](3)取絞碎的羅非魚(yú)碎肉20g置于反應(yīng)器中，按質(zhì)量體積比1:15加入水，用食品級(jí)碳酸鈉溶液調(diào)pH為9.0，按照1200U/g碎肉的比例加入堿性蛋白酶(諾維信產(chǎn))，在溫度50°C條件下水解5h，當(dāng)水解結(jié)束后，煮沸滅酶2min，冷卻至室溫過(guò)濾，收集上清液。
[0025](4)取上清液，用2mol/L食用醋酸調(diào)整pH值至5.0，使活性炭在其最適pH范圍內(nèi)。在室溫下加入30g食品級(jí)活性炭，吸附l.0h，然后過(guò)濾分離活性炭和寡肽混合物，即得到羅非魚(yú)碎肉高F值寡肽粗品。
[0026](5)將得到的高F值寡肽粗品經(jīng)截留分子量為1000 Da的膜過(guò)濾，所得到的透過(guò)液即為羅非魚(yú)碎肉高F值寡肽液，其F值為40，獲得F值寡肽1.53g(產(chǎn)品得率為46%)。
[0027]實(shí)施例3
實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例2，唯一不同的是，在溫度40°C條件下水解5h，最終獲得的寡肽液的F值為23，產(chǎn)品得率為36%。
[0028]實(shí)施例4
實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例2，唯一不同的是，步驟(3)中，按質(zhì)量體積比1:10加入水進(jìn)行水解反應(yīng)，最終獲得的寡肽液的F值為30，產(chǎn)品得率為39%。
[0029]對(duì)比例1
實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例2，唯一不同的是，在溫度70°C條件下水解5h，最終獲得的寡肽液的F值為7.0，產(chǎn)品得率為12.3%。
[0030]對(duì)比例2
實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例2，唯一不同的是，步驟(3)中，按水解時(shí)間為lOmin進(jìn)行水解反應(yīng)，最終獲得的寡肽液的F值為8.0，產(chǎn)品得率為14%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種利用羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高F值寡肽的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將羅非魚(yú)魚(yú)排洗凈并分離獲得絞碎羅非魚(yú)碎肉，將絞碎羅非魚(yú)碎肉加水勻漿后，加入蛋白酶，40?60°C條件下水解0.5?24h，水解結(jié)束后，煮沸滅酶，冷卻至室溫后過(guò)濾收集上清液； (2)取上清液，按每克羅非魚(yú)碎肉添加0.3?1.5g活性炭，吸附0.5?2h，去除活性炭，經(jīng)截留分子量為1000 Da的膜過(guò)濾即得羅非魚(yú)碎肉高F值寡肽溶液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高F值寡肽的方法，其特征在于，步驟(1)中所述蛋白酶為堿性蛋白酶。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高F值寡肽的方法，其特征在于，步驟(1)是將絞碎羅非魚(yú)碎肉加水勻漿后，調(diào)pH為7?10。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高F值寡肽的方法，其特征在于，步驟(2)是加入活性炭前，將上清液調(diào)pH值至5?7，在室溫下吸附。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于水產(chǎn)加工廢棄物的綜合利用技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種利用羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉制備高F值寡肽的方法，該方法利用蛋白酶水解羅非魚(yú)魚(yú)排碎肉，將魚(yú)肉蛋白水解為各種肽，再利用活性炭吸附去除水解液中芳香族氨基酸含量較高的肽，經(jīng)過(guò)濾獲得上清液，再經(jīng)截留分子量為1000？Da的膜過(guò)濾，即可獲得F值大于20，分子量低于1000？Da的高F值寡肽溶液；用此方法獲得的寡肽F值最高可達(dá)40，可高效獲得寡肽，并且能提高羅非魚(yú)加工廢棄物的利用率，具有廣泛和實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。
【IPC分類(lèi)】C12P21/06
【公開(kāi)號(hào)】CN105483194
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201511005174
【發(fā)明人】范春華, 李夢(mèng)茹, 杜敬河, 伍蓉莉, 杜欣欣, 段杉
【申請(qǐng)人】華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年4月13日
【申請(qǐng)日】2015年12月29日