野生松茸馴化母種制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及松茸培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種野生松茸馴化母種制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]松鸞Tricholoma matsutake Sing.是世界著名的野生食用菌之一。近幾年來(lái)云南出口的松茸已占世界主要市場(chǎng)——日本市場(chǎng)銷(xiāo)售量的60%以上，年出口松茸創(chuàng)匯達(dá)到4000萬(wàn)美元以上，2004年達(dá)到5361萬(wàn)美元，出口量為1280.85噸，其中鮮松茸973.5噸，松茸制品307.35噸。據(jù)調(diào)查，德欽縣和香格里拉縣農(nóng)民經(jīng)濟(jì)收入的60%以上來(lái)源于松茸。松茸產(chǎn)業(yè)的持續(xù)、健康發(fā)展將為山區(qū)農(nóng)民脫貧致富、邊疆少數(shù)民族地區(qū)的農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、社會(huì)的穩(wěn)定提供重要經(jīng)濟(jì)保障。
[0003]—個(gè)多世紀(jì)的松茸馴化研究表明，直接采用純培養(yǎng)菌種實(shí)現(xiàn)松茸人工栽培是一種難以實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)，為此，非常有必要進(jìn)行人工馴化栽培技術(shù)開(kāi)發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種野生松茸馴化母種制備方法。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0006]野生松茸馴化母種制備方法，包括如下步驟:
[0007]S1、采集自然野外生長(zhǎng)的松茸，取發(fā)育完全的子實(shí)體菌蓋部分，切掉菌柄，用75%的酒精棉球擦凈菌蓋表面，菌褶朝下用滅過(guò)菌的鐵鉤勾住懸掛于滅菌的三角瓶中，用無(wú)菌棉塞封口過(guò)夜，收集孢子印，用無(wú)菌水制成孢子液；
[0008]S2、加入到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖菌，進(jìn)行液體多孢自交，搖菌條件為:轉(zhuǎn)速140r/min，培養(yǎng)溫度為25°C，得松茸混合菌絲液；
[0009]S3、將所得的松茸混合菌絲液在潔凈室接種于栽培瓶的培養(yǎng)料上，用透氣蓋封口，并置于14?15°C的培養(yǎng)室內(nèi)暗培養(yǎng)25?30d，在2?6d時(shí)，進(jìn)行超聲波水浴培養(yǎng)，超聲波的頻率和功率分別設(shè)定為68kHz和600W，超聲波處理時(shí)間為lOmin?90min，超聲間歇比為20s/5s ?30s/5s；
[0010]S4、待菌絲長(zhǎng)滿栽培瓶后，感染處理松茸的優(yōu)勢(shì)伴生樹(shù)種，澆水900ml?1000ml，
蓋好覆蓋物，人工馴化，即可得到穩(wěn)定性強(qiáng)，可用于繁殖生產(chǎn)的松茸母種。
[0011 ] 其中，所述步驟S2中的液體培養(yǎng)基每升含:
[0012]葡萄糖20?24g、酵母膏0.3?0.5g、蛋白胨0.5?0.7g、葛仙米凍干粉3?5g、氨基酸螯合鎂0.05?0.07g、磷酸二氫鉀0.1?0.2g、水溶性淀粉40?60g，其余為無(wú)菌水。
[0013]其中，所述步驟S3中的培養(yǎng)料通過(guò)以下步驟制備:
[0014](1)稱(chēng)取松樹(shù)木肩36?48份、魔芋粉8?10g、大蒜素0.5?0.6份、風(fēng)化煤8?10份置于汽爆罐內(nèi)，先通入氮?dú)庵疗迌?nèi)壓力為0.7?1.3MPa，爆破處理8?25min ;然后迅速通入蒸汽至汽爆罐內(nèi)壓力為1.3?1.7MPa，蒸汽爆破處理0.5?2.5min，得混合物；
[0015](2)將所得的混合物自然降溫至常溫后，加入氮化硅超微粉3?7份、甲殼素纖維4?6份、海藻酸纖維3?5份混合攪拌均勾，并通過(guò)加入水調(diào)整水分含量為總重量的64?68%，得培養(yǎng)基料備用。
[0016]其中，所述葛仙米凍干粉通過(guò)以下步驟制備:
[0017]取50?55份葛仙米，清洗，用研磨機(jī)磨成粗粉，然后用90?95°C熱水浸泡50?85min，撈出瀝干后，加入10?12份常溫純凈水，和勻，然后按照接種量1?1.5%的比例接種微生物發(fā)酵劑，保持溫度38°C，發(fā)酵52?58小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后低溫烘干，研磨成細(xì)粉。
[0018]其中，所述微生物發(fā)酵劑的成分為:按照菌株數(shù)量比乳酸桿菌:地衣芽孢桿菌:谷氨酸棒桿菌為:1: 1.2: 2的比例配制成1.5X107菌株/ml的發(fā)酵劑。
[0019]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0020]通過(guò)培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法的合理改進(jìn)，實(shí)現(xiàn)了松茸母種的人工馴化，改變了松茸生產(chǎn)完全依靠自然的現(xiàn)狀，而且還實(shí)現(xiàn)了松茸產(chǎn)品的穩(wěn)產(chǎn)、高產(chǎn)和優(yōu)質(zhì)。同時(shí)，本發(fā)明還有效地保護(hù)了松茸種質(zhì)資源及其所依賴(lài)的生態(tài)環(huán)境，為實(shí)現(xiàn)了松茸生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展提供了一條有效的途徑。
【具體實(shí)施方式】
[0021]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0022]以下實(shí)施中，所述步驟S2中的液體培養(yǎng)基每升含:
[0023]葡萄糖20?24g、酵母膏0.3?0.5g、蛋白胨0.5?0.7g、葛仙米凍干粉3?5g、氨基酸螯合鎂0.05?0.07g、磷酸二氫鉀0.1?0.2g、水溶性淀粉40?60g，其余為無(wú)菌水。
[0024]所述步驟S3中的培養(yǎng)料通過(guò)以下步驟制備:
[0025](1)稱(chēng)取松樹(shù)木肩36?48份、魔芋粉8?10g、大蒜素0.5?0.6份、風(fēng)化煤8?10份置于汽爆罐內(nèi)，先通入氮?dú)庵疗迌?nèi)壓力為0.7?1.3MPa，爆破處理8?25min ;然后迅速通入蒸汽至汽爆罐內(nèi)壓力為1.3?1.7MPa，蒸汽爆破處理0.5?2.5min，得混合物；
[0026](2)將所得的混合物自然降溫至常溫后，加入氮化硅超微粉3?7份、甲殼素纖維4?6份、海藻酸纖維3?5份混合攪拌均勾，并通過(guò)加入水調(diào)整水分含量為總重量的64?68%，得培養(yǎng)基料備用。
[0027]所述葛仙米凍干粉通過(guò)以下步驟制備:
[0028]取50?55份葛仙米，清洗，用研磨機(jī)磨成粗粉，然后用90?95°C熱水浸泡50?85min，撈出瀝干后，加入10?12份常溫純凈水，和勻，然后按照接種量1?1.5%的比例接種微生物發(fā)酵劑，保持溫度38°C，發(fā)酵52?58小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后低溫烘干，研磨成細(xì)粉。
[0029]其中，所述微生物發(fā)酵劑的成分為:按照菌株數(shù)量比乳酸桿菌:地衣芽孢桿菌:谷氨酸棒桿菌為:1: 1.2: 2的比例配制成1.5X107菌株/ml的發(fā)酵劑。
[0030]實(shí)施例1
[0031]S1、采集自然野外生長(zhǎng)的松茸，取發(fā)育完全的子實(shí)體菌蓋部分，切掉菌柄，用75%的酒精棉球擦凈菌蓋表面，菌褶朝下用滅過(guò)菌的鐵鉤勾住懸掛于滅菌的三角瓶中，用無(wú)菌棉塞封口過(guò)夜，收集孢子印，用無(wú)菌水制成孢子液；
[0032]S2、加入到液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖菌，進(jìn)行液體多孢自交，搖菌條件為:轉(zhuǎn)速140r/min，培養(yǎng)溫度為2