類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于治療或預(yù)防幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的多肽。
【背景技術(shù)】：
[0002] 幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（juvenile rheumatoid arthritis，JRA)是小兒時(shí)期一種 常見的結(jié)締組織病，以慢性關(guān)節(jié)炎為其主要特點(diǎn)，并伴有全身多系統(tǒng)的受累，包括關(guān)節(jié)、皮、 肌、肝、脾、淋巴結(jié)。年齡較小的患兒往往先有持續(xù)性不規(guī)則發(fā)熱，其全身癥狀較關(guān)節(jié)癥狀更 為顯著。
[0003] 對(duì)于少兒患風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者進(jìn)行治療時(shí)，除用非留體類抗炎藥對(duì)癥治療外， 應(yīng)盡早開始用慢作用藥。免疫抑制劑毒性較大，只在嚴(yán)重情況下才謹(jǐn)慎使用。對(duì)于病癥較 輕的患者，選擇阿司匹林等適宜于兒童的非留體類抗炎藥物。由于兒童較易對(duì)阿司匹林產(chǎn) 生中毒癥狀。其他藥物，如布洛芬、萘普生、雙氯酚酸鈉（扶他林）、金制劑、青霉胺、氯喹、柳 氮磺毗啶、甲氨喋呤等，但這類藥物的毒副作用也較大。此外，對(duì)于全身型，有多關(guān)節(jié)、多系 統(tǒng)損害或少關(guān)節(jié)炎型合并虹膜睫狀體炎的重度少兒類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者，選用強(qiáng)的松、地 塞米松等糖皮質(zhì)激素。但這些藥物只能起到改善癥狀，對(duì)骨破壞無(wú)改變作用，而且具有阻礙 兒童生長(zhǎng)發(fā)育，引起骨質(zhì)疏松和降低對(duì)其他疾病抵抗力等不良反應(yīng)，因此不能作為常規(guī)藥 物大量使用。另外，由于身體機(jī)能等各方面的原因，少兒對(duì)一些抗風(fēng)濕藥物的不良反應(yīng)要比 成年病人更敏感。因此，急需開發(fā)更安全、有效的新型抗幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物。
[0004] 類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF)是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清中針對(duì)IgG FC片段上 抗原表位的一類自身抗體。類風(fēng)濕因子是由于感染因子（細(xì)菌、病毒等）引起體內(nèi)產(chǎn)生的 以變性IgG(-種抗體）為抗原的一種抗體，故又稱抗抗體。常見的類風(fēng)濕因子有I gM型、 IgG型、IgA型和IgE型。人體內(nèi)普遍存在著類風(fēng)濕因子，并起著一定的生理作用。IgA-RF 與骨質(zhì)破壞有關(guān)，早期IgA-RF升高常提示病情嚴(yán)重。因此，IgA-RF可作為幼年型類風(fēng)濕關(guān) 節(jié)炎發(fā)病的早期發(fā)病的治療靶點(diǎn)。抑制IgA-RF可有效治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，但是并沒 有成熟開發(fā)的IgA-RF抑制多肽問(wèn)世。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明目的是針對(duì)現(xiàn)有治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一種IgA-RF多肽 拮抗劑，適用于臨床的治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明技術(shù)方案是提供一種類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽，其序列為 EFVFLLKGHEDLRQDERVMQ，及在治療或預(yù)防幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
[0007] 有益結(jié)果：
[0008] 本發(fā)明中的類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽序列EFVFLLKGHEDLRQDERVMQ，可以靶向抑制 類風(fēng)濕因子IgA，抑制類風(fēng)濕因子IgA受體產(chǎn)生的生理或病理的效應(yīng)，達(dá)到預(yù)防或治療幼年 型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的效果。
[0009] 發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)獲知類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽能夠抑制佐劑型幼年大鼠類 風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和DBA/1幼年小鼠膠原型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)展，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明具有顯著的治 療類風(fēng)濕型關(guān)節(jié)炎的效果。說(shuō)明本發(fā)明設(shè)計(jì)的類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽科學(xué)、合理、可行有 效，能作為治療或預(yù)防幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 本發(fā)明多肽由上海吉爾合成。
[0011] 實(shí)施例1
[0012] 類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽在膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用
[0013] 構(gòu)建膠原型小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，研究類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽對(duì)小鼠膠原誘導(dǎo) 性關(guān)節(jié)炎（collagen induced arthritis，CIA)的治療作用。采用小鼠作為受試動(dòng)物，SPF 級(jí)DBA/1小鼠90只（由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（Sino-British SIPPR Lab. Animal Ltd)提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)碼：SCXK (滬）2008-0016)，雄性，4-5周齡，隨機(jī)分成 6組，分別是正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，多肽低中高3個(gè)劑量組（0. 4,0. 8,1. 6mg/kg)和陽(yáng)性 藥對(duì)照組（甲氨蝶呤2mg/kg)。除正常組外，第0天各實(shí)驗(yàn)組建立小鼠 CIA模型，方法是 雞軟骨II型膠原（c II )用0. lmol/1醋酸溶解成4mg/ml的溶液，于4°C冰箱過(guò)夜。實(shí)驗(yàn)當(dāng) 天用 II 型膠原與含 4mg/ml Myeobaeterium tuberculosis strain H37Rv 的完全弗氏佐劑 (CFA)等體積充分乳化，待DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮內(nèi)每只注射乳化劑50 μ 1進(jìn)行致 敏，21d后用4mg/ml的II型膠原（c II )與不完全弗氏佐劑（IFA)等體積充分乳化后以相同 劑量的乳化劑于尾部進(jìn)行再次免疫。造模第30d起皮下注射給藥：多肽的3個(gè)劑量組（0. 4， 0. 8,1. 6mg/kg):每日兩次，連續(xù)10天；陽(yáng)性藥對(duì)照組（甲氨蝶呤2mg/kg):每五天一次，連 續(xù)3次；正常對(duì)照組和模型對(duì)照組（生理鹽水）：連續(xù)10天。分別于造模后第40天關(guān)節(jié)評(píng) 分、檢測(cè)左右后足足踝直徑來(lái)觀察藥物對(duì)小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎的影響。
[0014] 類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽在膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用具 體結(jié)果如下：類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽對(duì)小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腫脹度率的影響，陽(yáng)性對(duì) 照組、類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽高、中、低劑量組關(guān)節(jié)腫脹度率與模型組比較，均有極顯著 性差異（P〈〇.〇l)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽對(duì)小鼠膠原型關(guān) 節(jié)炎足爪腫脹度率的影響，陽(yáng)性對(duì)照組、類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽高、中、低劑量組足爪腫 脹度率與模型組比較，均有極顯著性差異（P〈〇. 01)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多肽對(duì)膠 原型關(guān)節(jié)炎小鼠關(guān)節(jié)評(píng)分的影響，多肽低、中、高劑量組四肢評(píng)分顯著低于模型對(duì)照組（P < 0. 01)，與模型對(duì)照組比較極顯著性差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0015]
[0017] 表1類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽對(duì)膠原型關(guān)節(jié)炎的影響（means土SD)*P〈0. 05 ; **Ρ〈0·01(和模型組比較）
[0018] 結(jié)論：類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽對(duì)小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎具有治療作用。
[0019] 實(shí)施例2
[0020] 類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽對(duì)佐劑型大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用
[0021 ] 構(gòu)建佐劑型大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，研究多肽對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎（Ad juvant arthritis，AA)大鼠的治療作用。采用大鼠作為受試動(dòng)物，SPF級(jí)SD大鼠（由上海西普 爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（Sino-British SIPPR Lab. Animal Ltd)提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證 號(hào)碼：SCXK (滬）2008-0016)，雄性，體重為100g-120g，隨機(jī)分成6組，分別是正常對(duì)照組， 模型對(duì)照組，類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽低中高3個(gè)劑量組（0. 2,0. 4,0. 8mg/kg)和陽(yáng)性藥對(duì) 照組（甲氨蝶呤lmg/kg)。除正常組外，第0天各實(shí)驗(yàn)組建立大鼠 AA模型，方法是在大鼠 的左側(cè)后足足跎注射含滅活的結(jié)核分枝桿菌（H37RA，10mg/ml)完全弗氏佐劑0.1 ml造成大 鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型。造模第10天起皮下注射給藥：多肽的3個(gè)劑量組（0. 2,0. 4,0. 8mg/ kg):每日兩次，連續(xù)10天；陽(yáng)性藥對(duì)照組（甲氨蝶呤lmg/kg):每五天一次，連續(xù)3次；正常 對(duì)照組和模型對(duì)照組（生理鹽水）：連續(xù)10天。分別于造模后第21天關(guān)節(jié)評(píng)分、檢測(cè)左右 后足足踝直徑來(lái)觀察藥物對(duì)大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎的影響。
[0022] 多肽在佐劑性大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用，具體結(jié)果如下：類風(fēng)濕因 子IgA抑制多肽對(duì)大鼠原發(fā)性關(guān)節(jié)炎左后足踝直徑的影響，大鼠陽(yáng)性對(duì)照組、類風(fēng)濕因子 IgA抑制多肽的低、中、高劑量組左后足踝直徑與模型組比較，有極顯著性差異（P〈0.01); 類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽對(duì)大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎右后足踝直徑的影響，大鼠陽(yáng)性對(duì)照組、 類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽低、中、高劑量組右后足踝直徑與模型組比較，有顯著性差異 (P〈0. 05)。類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽對(duì)佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)評(píng)分的影響，多肽低、中、高 劑量組四肢評(píng)分顯著低于模型對(duì)照組（P < 〇. 05)，與模型對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義。
[0023] 表2類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽對(duì)佐劑型關(guān)節(jié)炎的影響（means土SD)
[0025] · *Ρ〈0· 〇5 ;林P〈0. 01 (和模型組比較）
[0026] 結(jié)論：類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)炎具有治療作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 類風(fēng)濕因子IgA抑制多肽，其特征在于其序列為EFVFLLKGHEDLRQDERVMQ。2. 權(quán)利要求1的抑制多肽在治療和預(yù)防幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病中的應(yīng)用。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述抑制多肽的用途，其特征在于：可通過(guò)多種給藥方式治療和預(yù) 防幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病，包括皮下或肌肉注射，靜脈注射或者靜脈滴注，口服給藥如藥 丸、膠囊等，鼻噴劑等。
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制類風(fēng)濕因子IgA，能預(yù)防和治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的多肽。其序列為EFVFLLKGHEDLRQDERVMQ是全新的序列，本發(fā)明的有益效益是可用于治療幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【IPC分類】A61P29/00, A61P19/02, A61K39/395, C07K16/42
【公開號(hào)】CN105061600
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510556863
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請(qǐng)人】蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2015年9月5日