降膽固醇、耐氧動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種bz11的發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物的培養(yǎng)基，特別涉及降膽固醇、耐氧雙歧桿菌乳亞種BZll的發(fā) 酵培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 膽固醇是人類生存所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，對人體具有十分重要的生理功能。它既是 構(gòu)成細(xì)胞的主要成分，又能在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化成類固醇激素，并且膽固醇還是合成膽汁酸的前 體、維生素 D3的原料。人體內(nèi)的膽固醇主要來自于自身合成和日常食物中攝取，當(dāng)飲食中 膽固醇攝入量過高時(shí)血清中膽固醇含量會(huì)增高，而血清中膽固醇過高是引發(fā)冠心病、動(dòng)脈 粥樣硬化、腦中風(fēng)等心腦血管疾病的重要因素。研宄發(fā)現(xiàn)與擁有正常血脂的人相比，高膽固 醇血癥的人患心臟病的風(fēng)險(xiǎn)是正常血脂人的3倍。目前，除了通過合理飲食以外，運(yùn)用生物 轉(zhuǎn)化法，特別是用益生菌對膽固醇進(jìn)行降解已成為研宄的趨勢。
[0003] 具有高膽固醇去除率的菌株非常少，而篩選具有高膽固醇去除率的雙歧桿菌菌株 是未來的一個(gè)重要研宄方向。雙歧桿菌的篩選國內(nèi)外均有報(bào)道，有從人源篩選的，有從動(dòng) 物源篩選的，也有從傳統(tǒng)食品中篩選的。不過目前國內(nèi)大多數(shù)研宄單位開展的優(yōu)良乳酸菌 篩選來源十分有限，許多不同單位保藏和研宄的菌株可能來源于同一出處，這不利于有效 的開發(fā)新乳酸菌株。因而開辟新的菌種來源很重要，開辟新渠道很有可能篩選到新的優(yōu) 良的益生乳酸菌。而貴州特色資源香豬正是一個(gè)篩選益生乳酸菌的好資源，且香豬器官 結(jié)構(gòu)和功能與人體相似，從香豬中篩選出來的乳酸菌易于為人體接受和利用。為此，申請 人已研宄出《一株香豬源性降膽固醇、耐氧雙歧桿菌BZ11》，且申請了中國專利，申請?zhí)枮?201510018144. 4,該申請件已于2015年5月公布。
[0004] 目前中國專利數(shù)據(jù)庫中，涉及桿菌培養(yǎng)基的申請件多達(dá)上百件，例如， ZL2010105960593號(hào)《一種副豬嗜血桿菌5型高密度發(fā)酵培養(yǎng)基及應(yīng)用》、ZL201110099582X 號(hào)《一種應(yīng)用于微生物肥料的枯草芽孢桿菌深層發(fā)酵培養(yǎng)基》、ZL2012102784847號(hào)《一種蘇 云金芽胞桿菌乳化發(fā)酵培養(yǎng)基》、ZL2013100415664號(hào)《一種促進(jìn)地衣芽孢桿菌BL63516生 長的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)方法》和ZL2013101899388號(hào)《一種枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基》 等。迄今為止，尚無涉及降膽固醇、耐氧動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種BZll的培養(yǎng)基的申請件。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明旨在提供降膽固醇、耐氧動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種BZll的發(fā)酵培養(yǎng)基，使從香 豬中篩選出來的動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種BZll通過該發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)得以提高菌體生長量， 進(jìn)而提高該菌株的降膽固醇能力。
[0006] 本發(fā)明的又一目的在于提供BZll的培養(yǎng)方法，使前述的發(fā)酵培養(yǎng)基得以實(shí)際應(yīng) 用。
[0007] 發(fā)明人提供的降膽固醇、耐氧動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種BZll的發(fā)酵培養(yǎng)基，是由如 下組分組成的：葡萄糖0. 89g、麥芽糖I. 08g、大豆蛋白胨0. 89g、酵母提取物0. 89g、胰蛋 白胨0. 51g、胡蘿卜汁14. 33mL、卷心菜汁17. 78mL、半胱氨酸鹽酸鹽0. 05g、鹽溶液4mL、吐 溫-800.1 mT,,水 10OmT,；
[0008] 所述鹽溶液的成分為：CaCl20. 2g、MgSO4 · 7H20 0· 48g、K2HP04lg、KH2P04lg、 NaHC0310g、NaCl 2g、水 1000mL。
[0009] 上述降膽固醇、耐氧動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種BZll已于2014年12月18日保藏于中 國普通微生物菌種保藏管理中心（CGMCC)，該中心地址是：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1 號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研宄所，其保藏編號(hào)為CGMCC NO. 10224,簡稱為動(dòng)物雙歧桿菌 乳亞種BZll。
[0010] 上述組分中，胡蘿卜汁、卷心菜汁均是用常規(guī)方法制備的。
[0011] 發(fā)明人提供的BZll的培養(yǎng)方法是：先將動(dòng)物雙歧桿菌BZll接種于種子培養(yǎng)基，于 37°C，二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天制得發(fā)酵用種子液；接著將發(fā)酵種子液按照10%的接種 量接種于上述發(fā)酵生產(chǎn)培養(yǎng)基中，在37°C、二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，即得。
[0012] 上述種子培養(yǎng)基（PTYG培養(yǎng)基）的各組分為：胰蛋白胨0. 5g、大豆蛋白胨0. 5g、酵 母提取物lg、葡萄糖lg、半胱氨酸鹽酸鹽〇. 〇5g、鹽溶液4mL、吐溫-800.1 mU水IOOmL ;制備 方法是將培養(yǎng)基煮沸驅(qū)氧，于121°C下滅菌20min，即得；
[0013] 所述鹽溶液的成分為 CaCl2O. 2g、MgSO4 · 7H20 0· 48g、K2HP04lg、KH2P04lg、 NaHC0310g、NaCl 2g、水 1000mL。
[0014] 本發(fā)明的香豬源降膽固醇、耐氧動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種BZll的發(fā)酵生產(chǎn)培養(yǎng)基，是 一種優(yōu)化培養(yǎng)基，用于發(fā)酵培養(yǎng)動(dòng)物雙歧桿菌BZ11，可有效提高其菌體生長量，提高其降膽 固醇能力，且發(fā)酵方法條件溫和，易于控制，有利于擴(kuò)大化生產(chǎn)。采用本優(yōu)化培養(yǎng)基，發(fā)酵培 養(yǎng)菌株2天后，采用平板涂布的方法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，其活菌數(shù)達(dá)到IO11數(shù)量級，與優(yōu)化前相 比提高一個(gè)數(shù)量級；且采用鄰苯二甲醛（OPA)法測其膽固醇去除率，其降膽固醇能力與優(yōu) 化前相比提高了 8. 26%。本發(fā)明適用于培養(yǎng)益生菌雙歧桿菌。
【附圖說明】
[0015] 圖1為麥芽糖和胰蛋白胨對菌體生長量__值）的交互影響響應(yīng)面圖。
[0016] 圖2為麥芽糖和胰蛋白胨對菌體生長量（(?_值）的交互影響等高線圖。
[0017] 圖3為麥芽糖和胡蘿卜汁對菌體生長量（(?_值）的交互影響響應(yīng)面圖。
[0018] 圖4為麥芽糖和胡蘿卜汁對菌體生長量（(?_值）的交互影響等高線圖。
[0019] 圖5為胰蛋白胨和胡蘿卜汁對菌體生長量（(?_值）的交互影響響應(yīng)面圖。
[0020] 圖6為胰蛋白胨和胡蘿卜汁對菌體生長量（(?_值）的交互影響等高線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 本發(fā)明用下列實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于下列 實(shí)施例。
[0022] 實(shí)施例1 BZll培養(yǎng)基的制備
[0023] (1)制備種子培養(yǎng)基（PTYG培養(yǎng)基）：取胰蛋白胨0. 5g、大豆蛋白胨0. 5g、酵母提 取物lg、葡萄糖lg、半胱氨酸鹽酸鹽〇.〇5g、鹽溶液4mL、吐溫-800.1 mU水100mL，煮沸驅(qū) 氧，分裝于50mL的具塞三角瓶，于121°C滅菌20min，即得種子培養(yǎng)基；所述鹽溶液成分為 Cacl2O. 2g、MgSO4 · 7H20 0· 48g、K2HP04lg、KH2P04lg、NaHC0 310g、NaCl 2g、水 1000 mL ;
[0024] (2)發(fā)酵種子液的制備：將平板培養(yǎng)的動(dòng)物雙歧桿菌接種于種子培養(yǎng)基中，在 37°C下、二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，即為發(fā)酵種子液；
[0025] (3)制備發(fā)酵培養(yǎng)基：同制備種子培養(yǎng)基的方法；
[0026] (4)發(fā)酵培養(yǎng)基中菌體濃度的測定：以菌體的OD值表示。將菌懸液按接種量10% (w/v)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，放置于二氧化碳培養(yǎng)箱中，37°C培養(yǎng)2天，然后取出，用紫外分 光光度計(jì)測其在600nm處的吸光值（A6J，用空白培養(yǎng)基作為對照，即可測定菌體濃度； [0027] (5)活菌數(shù)的測定：將純化菌株菌懸液接入到優(yōu)化后的培養(yǎng)基中，放置于二氧化 碳培養(yǎng)箱中，37 °C下培養(yǎng)2天后稀釋到合適的梯度，進(jìn)行