一種高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌r的發(fā)酵培養(yǎng)基及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物，特別是一種高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]微生物必須在產(chǎn)品中保持能夠生存，處于潛伏狀態(tài)或是具有代謝活性。此因素具有兩個決定性方面，產(chǎn)品的耐久性以及當(dāng)被施用至田地中時產(chǎn)品定殖將要被刺激或被保護的作物的根部的能力。在處理不具有形成抵抗結(jié)構(gòu)的能力的細胞時可能會出現(xiàn)一些問題，因為該培養(yǎng)物隨著時間的推移逐漸地喪失生存力，此外它們在土壤中的存活能力非常低。于是，人們想到利用它們的代謝產(chǎn)物形成產(chǎn)品，對于此目的要考慮的最重要的標(biāo)準之一是能獲得有相當(dāng)高濃度的代謝產(chǎn)物。
[0003]巴西固氮螺菌{Azospirillum brasilense)是一種行自由生活、好氧的固氮微生物，廣泛存在于禾木科植物的根際土壤中，可與這些禾本科植物在微好氧的條件下進行聯(lián)合固氮作用，具有作為生物肥料的潛能。巴西固氮螺菌的促生長作用不僅在于其具有較強固氮能力，而且在于其能夠合成植物生長素吲哚乙酸。吲哚乙酸屬吲哚類化合物，是植物體內(nèi)普遍存在的內(nèi)源生長素，又名茁長素、生長素。吲哚乙酸能誘導(dǎo)番茄單性結(jié)實和坐果，增加甜菜塊根產(chǎn)量和含糖量等，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中被廣泛使用。綜上所述，吲哚乙酸對植物生長均有促進作用。但現(xiàn)在市售的吲哚乙酸大都是化學(xué)合成的，生產(chǎn)工藝復(fù)雜；而且利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)吲哚乙酸的報道并不多見，目前除報道有固氮螺菌在添加了色氨酸的LB培養(yǎng)基(簡稱LBT培養(yǎng)基)上能產(chǎn)吲哚乙酸外，還未見到有通過其它培養(yǎng)基使巴西固氮螺菌發(fā)酵高產(chǎn)吲哚乙酸的報道；目前巴西固氮螺菌作為微生物菌劑尚未規(guī)?；褂茫湓蛑饕?(I)發(fā)酵單位活菌數(shù)較低，一般僅有30-50億/ml ; (2)保存時間較短，液體菌劑在室溫下保存僅3個月；(3)發(fā)酵成本高。因此，巴西固氮螺菌規(guī)模化應(yīng)用首要要解決的問題是其發(fā)酵培養(yǎng)基的問題，提高發(fā)酵水平，降低發(fā)酵成本、增加活菌數(shù)和其代謝產(chǎn)物產(chǎn)量，有益于應(yīng)用效果的體現(xiàn)和該類菌劑及其代謝產(chǎn)物的商品化。據(jù)調(diào)查，配制I L LBT培養(yǎng)基約需3.06元，配制成本較高，并且通過該培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)吲哚乙酸的量較低，不利于工業(yè)化生產(chǎn)，因此，如何高產(chǎn)吲哚乙酸是本領(lǐng)域技術(shù)人員所關(guān)心的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基及其應(yīng)用，可有效解決高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基，提高吲哚乙酸產(chǎn)出的問題。
[0005]本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，本發(fā)明高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基是由以下重量百分比計的:果糖0.1?1%、氮源0.5?2%、NaCL 0.1?1.0%、CuSO4 0.01?0.05%、色氨酸0.01?0.15%和余量為水制成，其中，先將色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m濾膜過濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、氮源、NaCL和CuSO4用水溶解，121 °C滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)pH為8.0 ?10.0 ;
所述的氮源為豆柏粉或大豆粉，豆柏粉為大豆榨油后的一級壓榨豆柏粉，大豆粉為黃豆粉；
所述的水為蒸餾水或純凈水；
該發(fā)酵培養(yǎng)基在作為高產(chǎn)吲哚乙酸巴西固氮螺菌R的發(fā)酵培養(yǎng)基中的應(yīng)用。
[0006]所述的巴西固氮螺菌R，分類命名為巴西固氮螺菌brasilense),2012年4月23日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為:CGMCCNO 6029，地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號。
[0007]本發(fā)明提供發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件簡單，操作方便，生產(chǎn)成本低，吲哚乙酸產(chǎn)量高，易于工業(yè)化生產(chǎn)，節(jié)能環(huán)保，經(jīng)濟和社會效益巨大。
【具體實施方式】
[0008]以下結(jié)合實施例和具體情況對本發(fā)明的【具體實施方式】作詳細說明。
[0009]本發(fā)明在具體實施中，可由以下實施例給出。
[0010]實施例1
本發(fā)明在具體實施中，由以下重量百分比計的:果糖0.3?0.7%、氮源0.9?1.2%、NaCL 0.3?0.7%,CuSO4 0.02?0.03%、色氨酸0.06?0.11%和余量為水制成，其中，先將色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m濾膜過濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、氮源、NaCL和CuSO4用水溶解，121°C滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)pH為8.0?10.0。
[0011]實施例2
本發(fā)明在具體實施中，由以下重量百分比計的:果糖0.55%、豆柏1.25%、NaCL 0.55%、CuSO4 0.03%、色氨酸0.08%和余量為水制成，其中，先將色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，0.22 μ m濾膜過濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、豆柏、NaCL和CuSO4用水溶解，121 °C滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)pH為
8.0。
[0012]實施例3
本發(fā)明在具體實施中，還可由以下重量百分比計的:果糖0.2%、豆粉1.9%、NaCL 0.2%、CuSO4 0.04%、色氨酸0.02%和余量為水制成，其中，先將色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，
0.22 μ m濾膜過濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、豆粉、NaCL和CuSO4用水溶解，121 °C滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)pH為
9.0 ο
[0013]實施例4
本發(fā)明在具體實施中，也可由以下重量百分比計的:果糖0.9%、豆粉0.6%、NaCL 0.9%、CuSO4 0.02%、色氨酸0.14%和余量為水制成，其中，先將色氨酸用0.0lM NaOH溶液溶解，
0.22 μ m濾膜過濾除菌，成質(zhì)量濃度為10.2115%色氨酸溶液；再將果糖、豆粉、NaCL和CuSO4用水溶解，121 °C滅菌25min，冷卻至室溫，然后加入色氨酸溶液混勻，用鹽酸或NaOH調(diào)pH為
10.0o
[0014]所述的高產(chǎn)吲哚乙酸的巴西固氮螺菌R發(fā)酵培養(yǎng)基的應(yīng)用，方法是:
1、菌種的活化:挑取巴西固氮螺菌R斜面菌種，在LB培養(yǎng)基平板上三區(qū)劃線，置30°C培養(yǎng)箱