菌中 的一種或多種。
[0011] 本發(fā)明還涉及球毛殼菌FSR-74在防治植物真菌病害中的防病機理,所述植物優(yōu) 選為人參,所述真菌優(yōu)選為引起人參根腐病的腐皮鐮孢菌(F.solani)、引起人參銹腐病的 毀滅柱孢菌(C.destructans)、引起人參黑斑病的人參鏈格孢菌(A.panax)、引起人參立 枯病的立枯絲核菌(R.solani)、引起人參疫病的惡疫霉菌(P.cactorum)和引起人參灰霉 病的灰葡萄孢菌(B.cinerea)。球毛殼菌FSR-74通過競爭作用搶占空間位置和營養(yǎng)物質 有效抑制人參病原菌菌絲生長;通過重寄生作用并釋放抑菌活性物質導致病原菌菌絲及分 生孢子畸形,抑制病原菌生長及孢子萌發(fā)。
[0012] 本發(fā)明還涉及一種球毛殼菌FSR-74的微生物制劑,其可通過以下方法制備得到: (1) 將球毛殼菌FSR-74試管斜面種活化,取2個5mm菌餅接種于用250mL三角瓶裝 的100mL馬鈴薯葡萄糖(PDB)液體培養(yǎng)基中,在170r/min,25 °C下培養(yǎng)48h,獲得種子液; (2) 將球毛殼菌FSR-74種子液以10% (體積比)接種于發(fā)酵培養(yǎng)液中培養(yǎng),在170r/ min,25°C下培養(yǎng)96h,獲得培養(yǎng)液; (3) 將培養(yǎng)液經2層無菌紗布過濾,濾液經血球計數板計數,將孢子懸浮液分散至6 g?L4羧甲基纖維素鈉(CMC)溶液中,得孢子懸浮液,孢子含量為2X10 5cfu?ml/1; (4)將球毛殼菌FSR-74培養(yǎng)液在8000r/mim離心20min,過濾,上清即為發(fā)酵液。
[0013] 本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74及其發(fā)酵液對人參具有田間防病和促生長的作用。
[0014] 本發(fā)明的優(yōu)點在于,保藏號為CGMCCNo. 9690的球毛殼菌FSR-74對分別引起人參 根腐病、銹腐病、黑斑病、立枯病、疫病、菌核病和灰霉病的腐皮鐮孢菌(Z7. so/afli)、毀滅柱 孢菌(C 人參鏈格孢菌(A 立枯絲核菌(TP. so/afli)、惡疫霉菌(/*. 人參核盤菌(51 和灰葡萄孢菌(漢ciflerea)等7種病原菌具有 不同程度的防治效果,對峙培養(yǎng)時對人參病原菌生長抑制率達46. 67%~73. 33%,發(fā)酵液培養(yǎng) 時對人參病原菌生長抑制率達41. 45%,FSR-74的發(fā)酵液對人參具有促生長作用, 無毒無致病性,對人畜安全,不污染環(huán)境;同時,生防菌株FSR-74孢子懸浮液直接施加到土 壤中對植物進行灌根或涂葉處理即可發(fā)揮其抑菌、殺菌作用,能顯著改善人參根際微生物 群落結構,形成一個生物多樣化的人參根際土壤微生態(tài)環(huán)境,從而有效持久地控制人參真 菌性病害的發(fā)生。
【附圖說明】 圖1 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株對毀滅柱孢菌菌 絲的生長平板抑制作用。 圖2 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74株對腐皮鐮孢菌如仏/^)菌絲的生長平板 抑制作用。 圖3:本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株對人參鏈格孢菌(J/teraaria 菌絲的生 長平板抑制作用。 圖4:本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株對人參核盤菌(5Wero(i/7iascA/aseflg)菌絲的 生長平板抑制作用。 圖5:本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株對立枯絲核菌so/a/ji)菌絲的生 長平板抑制作用。 圖6 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株對惡疫霉菌從ora 菌絲的生 長平板抑制作用。 圖7 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株對灰葡萄孢菌ci/7erea)菌絲的生長 平板抑制作用。 圖8 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株抑制腐皮鐮孢菌>so/a/7i)菌絲生長的 顯微觀察。 圖9 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株抑制惡疫霉菌從oracacterws)菌絲生 長的顯微觀察。 圖10 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株抑制立枯絲核菌so/a/ji)菌絲生 長的顯微觀察。 圖11 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株抑制毀滅柱孢菌 菌絲生長的顯微觀察。 圖12 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株抑制人參鏈格孢菌(J/teraaria/7a/?az)菌絲生 長的顯微觀察。 圖13 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株抑制灰葡萄孢菌ci/7erea)菌絲生長 的顯微觀察。 圖14:本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株發(fā)酵液對腐皮鐮孢菌菌絲 生長的抑制作用。 圖15 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株發(fā)酵液對惡疫霉菌從oracacter?)菌 絲生長的抑制作用。 圖16 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株發(fā)酵液對人參鏈格孢菌(J/teraaria 菌 絲生長的抑制作用。 圖17 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株發(fā)酵液對灰葡萄孢菌ci/7erea)菌絲 生長的抑制作用。 圖18 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株發(fā)酵液抑制毀滅柱孢菌(Cj^i/^rocar/70/7 菌絲生長的顯微觀察。 圖19 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株發(fā)酵液抑制腐皮鐮孢菌sohfli)菌 絲生長的顯微觀察。 圖20:本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株發(fā)酵液抑制人參鏈格孢菌(J/teraaria菌絲生長的顯微觀察。 圖21 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株發(fā)酵液抑制惡疫霉菌從oracacter?) 菌絲生長的顯微觀察。 圖22 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株發(fā)酵液對灰葡萄孢菌ci/7erea)菌絲 生長的顯微觀察。 圖23:本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株發(fā)酵液抑制人參鏈格孢菌(J/teraaria孢子萌發(fā)的顯微觀察。 圖24 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株對人參的促生長作用(A:空白液體培養(yǎng)基,B:澆 注球毛殼菌FSR-74發(fā)酵液)。 圖25 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株對毀滅柱孢菌引起的人參銹腐病的防治效果(A: 無菌水灌根,B:球毛殼菌FSR-74孢子懸浮液灌根)。 圖26 :本發(fā)明的球毛殼菌FSR-74菌株對人參鏈格孢菌引起的人參黑斑病的防治效果(A:無菌水涂抹葉片,B:球毛殼菌FSR-74孢子懸浮液涂抹葉片)。
【具體實施方式】
[0015] 實施例1 球毛殼菌(Chaetomiumglobosum)FSR-74菌株的分離和保藏 該菌株自吉林省撫松縣榆樹人參栽培地多年生人參健株的根際土壤分離得到。采集 上述土壤樣品,去除表面枯落物后過2mm篩。稱取新鮮土壤樣品10g,放入裝有玻璃珠和 90mL無菌生理鹽水的三角瓶中,充分振蕩30min,使樣品與無菌水混合均勾,制得土壤懸 濁液。在無菌條件下取1mL振蕩液,加入9mL無菌生理鹽水,按梯度依次制成10_2、10_3、 1〇_ 4的稀釋液。分別吸取100UL各稀釋液加入到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)平板上, 采用平板稀釋法均勻涂布,每處理3次重復,25 °C培養(yǎng)箱培養(yǎng)7d。挑選單菌落轉接到馬鈴 薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)平板培養(yǎng)長出菌落后,采用單孢分離法進行分離純化,純化菌株 于4 °C保存。
[0016] 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)配方為:土豆200g/L,葡萄糖10g/L,瓊脂15g/ L,蒸餾水 1000mL,2yg/mL青霉素,pH為 6. 8~7. 2。
[0017] 該菌株在在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)平板上25 °C培養(yǎng)時生長較慢,菌落 淺褐,橄褐或棕褐色,具灰白色或橄褐色氣生菌絲,背面棕褐色,常具橄褐色滲出物,菌落邊 緣常呈不整齊的波裂狀。FSR-74菌株的子囊果表生,以褐色假根固著于基質表面,在反射 光下為橄綠色至橄褐色,倒卵形至近球形,直徑160~240ym,高約220~300ym;子囊果壁 由暗褐色交錯絲組織構成;頂生毛大量而密集,曲折狀、波浪狀或稍呈螺旋狀卷曲,褐色,具 隔,基部隔膜較明顯,不分枝,表面具密集疣點,基部寬約2. 5~4ym;側生毛曲折狀,分隔 明顯;子囊棍棒狀,27~36X11~15ym,內有8個子囊孢子,子囊壁容易消解;子囊孢子檸檬 形,兩側扁,兩端各具一細尖,成熟時褐色,8. 5~11X7~8. 5ym,具單個頂生芽孔。
[0018] 該菌株于2014年9月19日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中 心,保藏號為CGMCCNo.