UsiRNA復合物的制作方法
【專利說明】
[0001] 本申請是申請?zhí)枮?00980148743. 0,申請日為2009年12月3日，發(fā)明名稱為 "UsiRNA復合物"的中國專利申請的分案申請。
技術領域
[0002] 本發(fā)明涉及雙鏈RNA復合物，該雙鏈RNA復合物的過客鏈中具有一個或更多個羥 甲基取代的核苷酸單體。本發(fā)明的RNA復合物可用于治療用途、診斷用途或科研用途。該 復合物包括能夠下調(diào)基因表達的短干擾RNA復合物（siRNA雙鏈體），該短干擾RNA復合物 包含反義鏈和連續(xù)或不連續(xù)的過客鏈（"有義鏈"）。這些鏈中的至少一條具有一個或更多 個本發(fā)明的羥甲基取代的核苷酸單體，所述羥甲基取代的核苷酸單體可位于3'端、5'端、3' 端和5'端二者和/或位于內(nèi)部。
[0003] 序列表
[0004] 本申請包括經(jīng)EFS-Web隨此提交的序列表，該序列表是于2009年11月27日生成 的ASCII文件，名稱為08-19PCT. txt，大小為98, 574個字節(jié)，其完整內(nèi)容由此通過引用并入 本文。
【背景技術】
[0005] RNA干擾（RNAi)提供了一種使靶基因表達沉默的方法。它為基礎研究提供了用于 研究遺傳和生物化學途徑和個體基因以及基因產(chǎn)物功能的方法。因此，RNAi已成為制藥業(yè) 中靶驗證的關鍵工具并且已經(jīng)進行了大量投資，其目的在于基于能夠介導針對其異常表達 與疾病狀態(tài)或狀況有關的基因進行RNA干擾的RNA復合物，進行藥物開發(fā)。
[0006] 然而，RNA復合物作為RNAi治療劑發(fā)揮作用的能力受到諸如序列特異性或"脫靶" 效應、效力、核酶穩(wěn)定性以及非特異性細胞因子誘導之類的問題的限制。
[0007] 本發(fā)明提供了用于改進RNA復合物的RNAi活性同時減弱或消除RNAi中與RNA復 合物相關的不利問題的化合物、組合物、方法以及用途。其中，本申請?zhí)峁┝诵滦突衔锖?組合物，其用于制備和使用具有改進的效力和核酶穩(wěn)定性并且具有減弱或消除的"脫靶"效 應和/或細胞因子誘導的RNA復合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供了 RNA復合物，所述RNA復合物具有并入RNA鏈中的一個或更多個羥 甲基取代的單體以用于RNA指導的基因調(diào)節(jié)或基因分析，特別是RNA干擾。因此，本發(fā)明的 一個目的是提供與通常使用的RNA復合物相比具有減弱的脫靶效應的RNA復合物。另一目 的是提供具有減弱的干擾素反應的RNA復合物。又一目的是提供在針對在細胞培養(yǎng)中或體 內(nèi)的酶解穩(wěn)定性方面具有改進的特性的RNA復合物。還一目的是提供在細胞培養(yǎng)中或體內(nèi) 相對于未修飾的RNA復合物表現(xiàn)出提高的基因調(diào)節(jié)功能（例如，基因沉默效應）的RNA復 合物。還一目的是提供靶向特定器官或組織和能夠穿透細胞膜的RNA復合物。本發(fā)明還提 供了適于將羥甲基取代的單體并入寡核苷酸的單體及其合成方法。
[0009] -方面，本發(fā)明提供了一種核酸，所述核酸包含有義鏈和反義鏈以及具有15至24 個堿基對的雙鏈區(qū)，其中所述有義鏈5'端的最后三個位置中的任一個或更多個位置被相同 或不同的羥甲基取代的核苷酸單體占據(jù)。
[0010] 另一方面，所述核酸還包括有義鏈3'端的最后兩個位置中的一個或兩個被相同或 不同的羥甲基取代的核苷酸單體占據(jù)的核酸。
[0011] 又一方面，所述核酸還包括反義鏈3 '端的最后兩個位置中的一個或兩個被相同或 不同的羥甲基取代的核苷酸單體占據(jù)的核酸。
[0012] 另一方面，本發(fā)明提供了一種核酸，所述核酸包含有義鏈和反義鏈以及具有15至 24個堿基對的雙鏈區(qū)，反義鏈5、6、7以及8位中的一個或更多個位置被相同或不同的羥甲 基取代的核苷酸單體占據(jù)，其中反義鏈的位置從反義鏈5'端的1位開始計數(shù)。
[0013] 另一方面，所述核酸還包括有義鏈3'端的最后兩個位置中的一個或兩個被相同或 不同的羥甲基取代的核苷酸單體占據(jù)的核酸。
[0014] 又一方面，所述核酸還包括反義鏈3'端的最后兩個位置中的一個或兩個被相同或 不同的羥甲基取代的核苷酸單體占據(jù)的核酸。
[0015] 另一方面，所述核酸具有19或20個堿基對的雙鏈區(qū)。
[0016] 另一方面，所述有義鏈和所述反義鏈各自的長度為21或22個核苷酸單體。
[0017] 另一方面，所述核酸具有平端或3'端懸端。
[0018] 另一方面，所述反義鏈具有含至少15個連續(xù)核苷酸單體的區(qū)域，所述15個連續(xù)核 苷酸單體與SEQ ID N0:12、34、56、78、100、124或147的任何15個連續(xù)的核苷酸單體相對 應。在一個相關的方面，所述反義鏈具有含至少15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個連 續(xù)核苷酸單體的區(qū)域所述15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個連續(xù)核苷酸單體與3￡〇10 勵：12、34、56、78、100、124或147的任何15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個連續(xù)的核苷 酸單體相對應。
[0019] 一方面，本發(fā)明提供了一種核酸，所述核酸包含有義鏈和反義鏈以及具有25至40 個堿基對的雙鏈區(qū)，其中所述反義鏈3'端的最后一個位置和所述有義鏈3'端的最后一個 位置被相同或不同的羥甲基取代的核苷酸單體占據(jù)。
[0020] 另一方面，所述反義鏈3'端的最后兩個位置被相同或不同的羥甲基取代的核苷酸 單體占據(jù)。
[0021] 一方面，本發(fā)明提供了一種核酸，所述核酸包含有義鏈和反義鏈以及具有25至40 個堿基對的雙鏈區(qū)，其中所述有義鏈的21、22以及23位中的一個或更多個位置被相同或不 同的羥甲基取代的核苷酸單體占據(jù)，其中所述有義鏈的位置從所述有義鏈5'端的1位開始 計數(shù)。
[0022] -方面，本發(fā)明提供了一種核酸，所述核酸包含有義鏈和反義鏈以及具有25至40 個堿基對的雙鏈區(qū)，其中所述反義鏈的18、19、20、21以及22位中的一個或更多個位置被相 同或不同的羥甲基取代的核苷酸單體占據(jù)，其中所述有義鏈的位置從所述反義鏈3'端的1 位開始計數(shù)。
[0023] 另一方面，所述核酸還包括所述反義鏈3'端的最后兩個位置中的一個或兩個被相 同或不同的羥甲基取代的核苷酸單體占據(jù)的核酸。
[0024] 另一方面，所述核酸還包括所述有義鏈3'端的最后兩個位置中的一個或兩個被相 同或不同的羥甲基取代的核苷酸單體占據(jù)的核酸。
[0025] 另一方面，所述反義鏈具有含至少15個連續(xù)核苷酸單體的區(qū)域，所述15個連續(xù)核 苷酸單體與SEQ ID N0:169、185、201、217或233的任何15個連續(xù)的核苷酸單體相對應。
[0026] 在一個相關的方面，所述反義鏈具有含至少15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、 25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39 或 40 個連續(xù)核苷酸單體的區(qū)域，所述 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39 或 40 個連續(xù)核苷酸單體與 SEQ ID N0:169、185、201、217 或 233 的任何 15、16、17、18、19、20、 21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39 或 40 個連續(xù)的核苷酸單 體相對應。
[0027] 另一方面，所述羥甲基取代的核苷酸單體為2' -3' _開環(huán)-核苷酸單體。
[0028] 另一方面，所述羥甲基取代的核苷酸單體選自下述單體D、F、G、H、I或J :
[0029]
【主權項】
1. 一種寡聚物，所述寡聚物包含一個或更多個2' -3' -開環(huán)單體和一個或更多個核糖 核酸單體，且寡