一種香草蘭豆莢的發(fā)酵方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，更具體的說是涉及一種香草蘭豆莢的發(fā)酵方法。
【背景技術(shù)】
[0002]香草蘭原產(chǎn)墨西哥，屬蘭科攀緣藤本植物。香草蘭是高級食用香料，有“食用香料之王”之稱，豆莢約含有2?3%的香蘭素，廣泛用于食品工業(yè)中，如名貴香煙、高級茶酒、冰淇淋、巧克力、飲料及醫(yī)藥和日化工業(yè)等。
[0003]剛采收的香草蘭鮮豆莢沒有香氣，需要經(jīng)殺青、發(fā)汗、干燥、陳化直至生香方為成品。至今已開發(fā)了多種香草蘭豆莢的發(fā)酵方法，其中被廣泛采用的有馬達加斯加法、墨西哥法和波旁法，但是這些方法都未能將香草蘭豆莢中的前體香蘭素葡萄糖苷全部轉(zhuǎn)化為香蘭素。近年來不斷有研宄報道了添加外源的酶制劑和一些植物提取物，如β-D-葡萄糖苷酶、纖維素酶、果膠酶、茶葉的丙酮提取物以及乙醇提取物等來促進前體物的轉(zhuǎn)化，雖然能夠大幅提升香蘭素的含量，但同時也會破壞香草蘭原有的風(fēng)味香氣，大大降低香草蘭香，增加其他的香氣。此外，由于添加了多種化學(xué)物質(zhì)，制備的香草蘭豆莢在安全性上存在隱患，而且這些外加的試劑價格昂貴，限制了新開發(fā)技術(shù)的進一步推廣應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種香草蘭豆莢的發(fā)酵方法，使得該方法能夠提高香草蘭豆莢中香蘭素的含量。
[0005]本發(fā)明的另外一個目的在于提供一種香草蘭豆莢的發(fā)酵方法，使得該方法能夠提高香草蘭豆莢原有香草蘭香，并降低其他雜香的影響。
[0006]為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0007]一種香草蘭豆莢的發(fā)酵方法，包括:
[0008]步驟1、將清洗好的香草蘭鮮莢殺青、發(fā)汗、干燥；
[0009]步驟2、經(jīng)步驟I處理的香草蘭豆莢表面消毒、然后向其表面均勻噴灑保藏編號為CGMCC N0.8629的菌懸液，然后真空密閉陳化，獲得香草蘭成品豆莢。
[0010]本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中的一些缺陷，選擇特定的菌株作為香草蘭豆莢發(fā)酵中的唯一菌株，再結(jié)合特殊的消毒方法，不僅提高香草蘭豆莢中香蘭素的含量，同時提高香草蘭豆莢原有香草蘭香，并降低其他雜香的影響。
[0011]作為優(yōu)選，所述殺青為:
[0012]將清洗好的香草蘭鮮莢置于70±3°C水浴中殺青3-5min。
[0013]作為優(yōu)選，所述發(fā)汗為:
[0014]置于50°C烘箱中發(fā)汗5d。
[0015]現(xiàn)有發(fā)酵中并無加入菌株的先例，因此本發(fā)明需要增加表面消毒這一配合本發(fā)明方案的步驟，在實際消毒過程中，本發(fā)明對比了采用升汞、雙氧水、微波等其他消毒方法，其中，升汞消毒后可能會為香草蘭豆莢帶來安全隱患；而雙氧水消毒不徹底，最后會出現(xiàn)雜菌影響發(fā)酵；而微波消毒，香草蘭豆莢明顯開裂、褶皺，呈失水狀，無法繼續(xù)發(fā)酵?；诖?，本發(fā)明提供了優(yōu)選的表面消毒方法，依次用75%乙醇消毒30s、l%次氯酸鈉消毒15s、75%乙醇消毒30s。
[0016]作為優(yōu)選，所述菌懸液的OD值為0.4-0.6 ;更優(yōu)選地，所述菌懸液的OD值為0.5。
[0017]作為優(yōu)選，所述菌懸液由以下方法配制獲得:
[0018]按1:100比例接種保藏編號為CGMCC N0.8629的菌株至LB液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)，然后離心收集菌體，菌體用無菌水漂洗兩次并離心收集，懸浮獲得菌懸液。更優(yōu)選地，按1:100比例接種保藏編號為CGMCC N0.8629的菌株至LB液體培養(yǎng)基，160轉(zhuǎn)，30°C，培養(yǎng)18h，然后7000rpm離心3min收集菌體，菌體用無菌水漂洗兩次并離心收集，懸浮獲得菌懸液。
[0019]作為優(yōu)選，所述陳化在25°C、蔭蔽條件下陳化6個月。
[0020]按照本發(fā)明所述發(fā)酵方法制備的香草蘭成品豆莢在香味方面凸顯香草蘭本身的香味，而很大程度上降低其他雜香因發(fā)酵而增加的程度，甚至降低了其中的一些雜香的風(fēng)味。同時和直接發(fā)酵陳化的對照方案相比，本發(fā)明的產(chǎn)品中香蘭素有顯著提高。
[0021]基于此，本發(fā)明還提供了保藏編號為CGMCC N0.8629的菌株在香草蘭豆莢發(fā)酵中的應(yīng)用。
[0022]由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明改變傳統(tǒng)直接發(fā)酵的方式，選擇特定的菌株加入其中，并結(jié)合調(diào)整的其他發(fā)酵措施，制備出高品質(zhì)香草蘭豆莢，在提高香蘭素的基礎(chǔ)上依然保證了純正的香草蘭本身的風(fēng)味香氣，優(yōu)于采用化學(xué)試劑輔助的發(fā)酵方法。
生物保藏說明
分類命名:芽孢桿菌，Bacillus sp.于2013年12月23日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研宄所，保藏編號為CGMCC N0.8629。
【附圖說明】
[0023]圖1所示為本發(fā)明發(fā)酵方法制備的香草蘭豆莢和對照組在香蘭素含量方面對比的柱形圖，a、b分別為香草蘭豆莢香蘭素含量經(jīng)過統(tǒng)計分析后歸入的不同組，顯示實驗組與對照組有顯著性差異；
[0024]圖2所示為本發(fā)明發(fā)酵方法制備的香草蘭豆莢和對照組在產(chǎn)品香味方面對比的雷達圖。
【具體實施方式】
[0025]本發(fā)明公開了一種香草蘭豆莢的發(fā)酵方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述芽孢桿菌已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0026]下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明。
[0027]實施例1:本發(fā)明所述發(fā)酵方法
[0028]菌懸液配制:
[0029]按1:100比例接種保藏編號為CGMCC N0.8629的菌株至LB液體培養(yǎng)基，160轉(zhuǎn)，300C，培養(yǎng)18h，然后7000rpm離心3min收集菌體，菌體用無菌水漂洗兩次并離心收集，懸浮獲得菌懸液(OD = 0.5)。
[0030]選擇發(fā)育正常，粗細均勻，完整未發(fā)生破裂，形狀為自然生長的三角條形莢果狀。選好豆莢后，再將附著在香草蘭果實上的泥土、有害微生物、農(nóng)藥等其它雜質(zhì)洗凈，洗豆莢溫度控制在40°C以下，流動水漂洗。
[0031]將洗凈的豆莢置于70 ±3 °C水浴中殺青3-5min，后置于50 °C烘箱中發(fā)汗5天，其后置于通風(fēng)良好的室內(nèi)架上干燥約3-7周。
[0032]將豆莢用75%乙醇30s，I %次氯酸鈉15s，75%乙醇30s進行表面消毒，后將豆莢切成2-4cm小段，取菌懸液均勻噴灑豆莢表面，靜置20min后，真空包裝，25°C、蔭蔽環(huán)境下陳化6個月。
[0033]實施例2:香蘭素含量對比試驗
[0034]實驗組:實施例1方案；
[0035]對照組:按照實施例1中除消毒、發(fā)酵環(huán)節(jié)外的操作進行，然后將干燥好的豆莢切成2-4cm小段直接真空包裝，25°C、蔭蔽環(huán)境下陳化6個月。
[0036]香蘭素的提取與測定:準確稱取0.5g香草蘭豆莢于微波提取瓶中，再與50mL、70% (v/v)乙醇水溶液充分混合，設(shè)置微波裝置的微波功率為100W，20min。提取后的混合物經(jīng)冷卻、過濾處理后，再定容至50mL，每個樣品平行測量三次。提取液經(jīng)0.45 μπι膜過濾后，用 HPLC 分析。HPLC 條件:反相 C18 柱(Zorbax Eclipse PlusC18，4.6 mmX10mm, 3.5 μ m，安捷倫)；進樣量5 μ L ;檢測器檢測波長280nm ;流速1.0mL/min ;柱溫26°C ;流動相20%甲醇和80%酸化水(0.5%醋酸)等梯度洗脫。
[0037]測定結(jié)果見圖1，其中對照組香蘭素含量為3.21 ±0.15%，實驗組3.58±0.05%，統(tǒng)計分析表明實驗組顯著高于對照組。
[0038]實施例3:香草蘭豆莢香氣感官分析
[0039]實驗組:實施例1方案；
[0040]對照組:按照實施例1中除消毒、發(fā)酵環(huán)節(jié)外的操作進行，然后將干燥好的豆莢切成2-4cm小段直接真空包裝，25°C、蔭蔽環(huán)境下陳化6個月。
[0041]分析方法:將0.5 g香草蘭豆莢粉末置于50 mL三角瓶中，15個感官評定員經(jīng)過系統(tǒng)專業(yè)培訓(xùn)后，在溫度22±2°C，濕度45±5%環(huán)境中，對不同發(fā)酵方法加工的香草蘭豆莢進行風(fēng)味評定，評定香氣為香草蘭香、甜香、果香、煙香、木香、花香。
[0042]測定結(jié)果見圖2，由圖中分析結(jié)果看出，本發(fā)明方案制備的香草蘭豆莢突出香草蘭香而不增加其它雜香所占比重。
[0043]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種香草蘭豆莢的發(fā)酵方法，其特征在于，包括: 步驟1、將清洗好的香草蘭鮮莢殺青、發(fā)汗、干燥； 步驟2、經(jīng)步驟I處理的香草蘭鮮莢表面消毒、然后向其表面均勻噴灑保藏編號為CGMCC N0.8629的菌懸液，然后真空密閉陳化，獲得香草蘭成品豆莢。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述發(fā)酵方法，其特征在于，所述殺青為: 將清洗好的香草蘭鮮莢置于70±3°C水浴中殺青3-5min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述發(fā)酵方法，其特征在于，所述發(fā)汗為: 置于50°C烘箱中發(fā)汗5d。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述發(fā)酵方法，其特征在于，所述消毒為: 依次用75%乙醇消毒30s、I %次氯酸鈉消毒15s、75%乙醇消毒30s。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述發(fā)酵方法，其特征在于，所述菌懸液的OD值為0.4-0.6。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述發(fā)酵方法，其特征在于，所述菌懸液由以下方法配制獲得: 按1:100比例接種保藏編號為CGMCC N0.8629的菌株至LB液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)，然后離心收集菌體，菌體用無菌水漂洗兩次并離心收集，懸浮獲得菌懸液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述發(fā)酵方法，其特征在于，所述菌懸液由以下方法配制獲得: 按1:100比例接種保藏編號為CGMCC N0.8629的菌株至LB液體培養(yǎng)基160轉(zhuǎn)，30°C，培養(yǎng)18h，然后7000rpm離心3min收集菌體，菌體用無菌水漂洗兩次并離心收集，懸浮獲得菌懸液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述發(fā)酵方法，其特征在于，所述陳化在25°C、蔭蔽條件下陳化6個月。
9.保藏編號為CGMCCN0.8629的菌株在香草蘭豆莢發(fā)酵中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體公開了一種香草蘭豆莢的發(fā)酵方法。本發(fā)明所述發(fā)酵方法將清洗好的香草蘭鮮莢殺青、發(fā)汗、干燥，然后將經(jīng)處理的香草蘭豆莢表面消毒并向其表面均勻噴灑保藏編號為CGMCC No.8629的菌懸液，然后真空密閉陳化，獲得香草蘭成品豆莢。本發(fā)明改變傳統(tǒng)直接發(fā)酵的方式，選擇特定的菌株加入其中，并結(jié)合調(diào)整的其他發(fā)酵措施，制備出高品質(zhì)香草蘭成品豆莢，在提高香蘭素的基礎(chǔ)上依然保證了純正的香草蘭本身的風(fēng)味香氣，優(yōu)于采用化學(xué)試劑輔助的發(fā)酵方法。CGMCC No.862920131223
【IPC分類】C12P7-24
【公開號】CN104630288
【申請?zhí)枴緾N201510053356
【發(fā)明人】谷風(fēng)林, 陳永敢, 王慶煌, 趙青云, 吳桂蘋, 房一明
【申請人】中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年2月2日