本發(fā)明涉及基因工程和蛋白質(zhì)工程，具體涉及一種脂肪酶突變體及其應用。
背景技術：
1、脂肪酶是一類具有多種催化能力的酶，可以催化三酰甘油酯及其他一些水不溶性酯類的水解、醇解、酯化、轉(zhuǎn)酯化及酯類的逆向合成反應，除此之外還表現(xiàn)出其他一些酶的活性，如磷脂酶、溶血磷脂酶、膽固醇酯酶、酰肽水解酶活性等。脂肪酶不同活性的發(fā)揮依賴于反應體系的特點，如在油水界面促進酯水解，而在有機相中可以酶促合成和酯交換。
2、脂肪酶的性質(zhì)研究主要包括最適溫度與ph、溫度與ph穩(wěn)定性、底物特異性等幾個方面。迄今，已分離、純化了大量的微生物脂肪酶，并研究了其性質(zhì)，它們在分子量、最適ph、最適溫度、ph和熱穩(wěn)定性、等電點和其他生化性質(zhì)方面存在不同。總體而言，微生物脂肪酶具有比動植物脂肪酶更廣的作用ph、作用溫度范圍，高穩(wěn)定性和活性，對底物有特異性。
3、目前脂肪酶在醫(yī)藥、油脂加工、生物柴油等領域的應用還不夠廣泛，因此開發(fā)性能優(yōu)良的脂肪酶，并降低其生產(chǎn)成本，對于促進該酶的應用具有重要的意義。
技術實現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的是提供一種脂肪酶突變體。所述突變體的耐熱性得到顯著提高，有利于促進其廣泛應用。
2、本發(fā)明涉及一種脂肪酶突變體，是氨基酸序列為seq?id?no:1的脂肪酶第313位氨基酸由pro突變?yōu)閘eu。
3、所述突變體的氨基酸序列為seq?id?no：5。
4、本發(fā)明還涉及編碼上述脂肪酶突變體的dna分子。
5、本發(fā)明還涉及包含上述dna分子的重組表達載體。
6、本發(fā)明還涉及一種宿主細胞，包含上述重組表達載體。
7、將上述的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入宿主細胞中，重組表達的脂肪酶突變體的耐熱性得到顯著提升。
8、所述宿主細胞為畢赤酵母（ pichia?pastoris）。
9、本發(fā)明還涉及所述脂肪酶突變體在固定化脂肪酶生產(chǎn)中的應用。
10、本發(fā)明還涉及一種固定化脂肪酶，是通過將上述脂肪酶突變體與固定化載體結(jié)合制備得到的。
11、與野生型脂肪酶rl相比，本發(fā)明提供的包含p313l單點突變的脂肪酶突變體耐熱性得到顯著提高，其在80℃條件下處理3min后，酶活殘留率高達75.77%，取得意料不到的技術效果。
12、綜上所述，本發(fā)明提供的脂肪酶突變體具有更強的耐熱性，有利于促進其在油脂加工等領域的廣泛應用。
1.一種脂肪酶突變體，其特征在于，所述突變體是氨基酸序列為seq?id?no：1的脂肪酶的第313位氨基酸由pro變?yōu)閘eu。
2.編碼權利要求1所述脂肪酶突變體的dna分子。
3.包含權利要求2所述dna分子的重組表達載體。
4.包含權利要求3所述重組表達載體的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為畢赤酵母（pichia?pastoris）。
5.權利要求1所述脂肪酶突變體在固定化脂肪酶生產(chǎn)中的應用。