本發(fā)明涉及生物，尤其是涉及一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、紐約食管鱗狀細胞癌-1(ny-eso-1)是一種癌-睪丸抗原1b，由位于x染色體xq28區(qū)域的ctgag1b基因編碼。ny-eso-1其限制性表達于生殖細胞，胎盤細胞和腫瘤細胞。

2、ny-eso-1在多種腫瘤類型中表達，包括神經(jīng)母細胞瘤、骨髓瘤、黑色素瘤、滑膜肉瘤、膀胱癌、食管癌、肝細胞癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌和乳腺癌。在這些腫瘤類型中，ny-eso-1的表達頻率有很大差異，最常見的表達腫瘤為神經(jīng)母細胞瘤(82％)、滑膜肉瘤(80％)、黑色素瘤(46％)和卵巢癌(43％)。其他類型的腫瘤中ny-eso-1蛋白的表達在20-40％之間。因此ny-eso-1是一個重要的免疫治療靶點。

3、ny-eso-1屬于癌-睪丸抗原家族，是家族成員中免疫原性最強的腫瘤相關(guān)抗原之一。ny-eso-1在健康成人組織中的限制性表達，由治療引起的脫靶毒性風險比較低，ny-eso-1已成為腫瘤免疫治療的最有前途的靶點之一。針對此靶點，通過對識別結(jié)合此靶標蛋白的結(jié)合蛋白進行改造，可以達到治療腫瘤的目的。目前的雙抗蛋白藥(kimmtrak)產(chǎn)品，也是將識別結(jié)合該靶標蛋白的結(jié)合蛋白與t細胞表面cd3受體的抗體連接。

4、但目前，雙抗蛋白藥種類少，因此，亟需更多的結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白用于制備雙抗蛋白藥。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白。

2、本發(fā)明的第二個目的是提供編碼上述蛋白的核苷酸序列。

3、本發(fā)明的第三個目的是提供一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白的制備方法。

4、本發(fā)明的第四個目的是提供上述蛋白在制備治療腫瘤藥物中應(yīng)用。

5、本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：

6、一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白，所述一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

7、編碼上述蛋白的核苷酸序列。

8、一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白的制備方法，包括如下步驟：

9、1)將一種結(jié)合ny-eso-1抗原的前體蛋白的氨基酸序列進行大腸桿菌宿主密碼子優(yōu)化，得到編碼所述前體蛋白的核苷酸序列，將編碼所述前體蛋白的核苷酸序列構(gòu)建到pet21b質(zhì)粒上，得到質(zhì)粒1；

10、所述一種結(jié)合ny-eso-1抗原的前體蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.8所示；所述編碼所述前體蛋白的核苷酸序列如seq?id?no.9所示；

11、2)將質(zhì)粒1轉(zhuǎn)化到表達菌e.coli?bl21(de3)中，在含有抗生素的lb平板上培養(yǎng)；

12、3)挑取單菌落進行誘導培養(yǎng)；

13、4)純化，收集蛋白，加入凝血酶透析過夜酶切；

14、5)進一步純化，得到一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白。

15、上述一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白在制備治療腫瘤藥物中應(yīng)用。

16、本發(fā)明具有如下有益效果：

17、實驗證明，本發(fā)明的結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白可以高親和力識別結(jié)合ny-eso-1抗原，kd＝6.65μm。

技術(shù)特征：

1.一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白，其特征在于所述一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

2.編碼權(quán)利要求1所述蛋白的核苷酸序列。

3.權(quán)利要求1的一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白的制備方法，其特征是包括如下步驟：

4.權(quán)利要求1的一種結(jié)合ny-eso-1抗原的蛋白在制備治療腫瘤藥物中應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種結(jié)合NY?ESO?1抗原的蛋白，其制備方法包括如下步驟：將一種結(jié)合NY?ESO?1抗原的前體蛋白的氨基酸序列進行大腸桿菌宿主密碼子優(yōu)化，將所述前體蛋白的核苷酸序列構(gòu)建到pET21b質(zhì)粒上，得到質(zhì)粒1；將質(zhì)粒1轉(zhuǎn)化到大腸桿菌；誘導培養(yǎng)；純化，收集蛋白，加入凝血酶透析過夜酶切；進一步純化，得到一種結(jié)合NY?ESO?1抗原的蛋白，實驗證明，本發(fā)明的結(jié)合NY?ESO?1抗原的蛋白可以高親和力識別結(jié)合NY?ESO?1抗原K<subgt;D</subgt;＝6.65μM。

技術(shù)研發(fā)人員：葉升,許家鈺,關(guān)鳳慧
受保護的技術(shù)使用者：天津大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/23