本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖育苗及養(yǎng)成中藻類的繁殖的淡水微藻常溫液態(tài)保存領(lǐng)域，通過調(diào)節(jié)微藻ph，并添加適當(dāng)均質(zhì)劑等成分來延長液態(tài)淡水微藻的常溫保存時間。
背景技術(shù)：
微藻是指一些微觀的單細(xì)胞、群體或絲狀的藻類，大多數(shù)是浮游藻類，生物量大、分布廣。藻類通過熱解可獲得生物質(zhì)燃油，是重要的可再生生物能源；通過農(nóng)業(yè)化學(xué)技術(shù)可從一些富含脂肪的微藻中提取油脂，用于制備食用油或生物柴油；藻類中還含有多種維生素、胡蘿卜素、蛋白質(zhì)、脂肪酸等成分，是藥用活性物質(zhì)的重要來源；藻類還可用于污水處理等。藻類生物與人類的生存和發(fā)展有極其密切的關(guān)系，是重要的可再生生物資源。
微藻藻種的保藏技術(shù)一直是制約生產(chǎn)、藻種正常供應(yīng)和長期保存的重要因素。在科研與生產(chǎn)中，微藻藻種可實(shí)現(xiàn)短期保藏，但存在著保藏時間短、易染雜菌、不便于運(yùn)輸、復(fù)活過程繁瑣等的缺陷。而長期保存微藻需要降低溫度，但是過低的溫度又會造成藻種的死亡，而且用固體培養(yǎng)基長期保藏會造成固體培養(yǎng)基表面干燥，所以也需要定期移種，造成污染和雜菌生長，不利于運(yùn)輸。目前常用液體傳代保藏法保藏藻種，這種方法保種時間短，在低溫下僅能保藏3個月，營養(yǎng)鹽消耗也快，易污染，工作量也大，容易造成保種的失敗。因此需要開發(fā)出理想的易于復(fù)活使用的中長期藻種保存方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了適應(yīng)生產(chǎn)需求，針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種適應(yīng)生產(chǎn)需要的的中長期保存微藻藻種的方法，本發(fā)明方法具有能夠避免雜菌污染、保存效果好、時間長、并且在常溫下能夠保存、便于運(yùn)輸以及可方便復(fù)活使用等諸多優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案是：
本發(fā)明配方中，所保存的微藻藻種可以選自普通小球藻、螺旋藻等單細(xì)胞藻類之任何一種。本發(fā)明方法中，所收集的藻種培養(yǎng)液生長狀態(tài)良好，最優(yōu)選藻液處于生長的穩(wěn)定期。
本發(fā)明方法中該配方包含以下成分：a細(xì)胞數(shù)量≥1020cfu/ml的藻類濃縮液50-80%；b藻類營養(yǎng)液10-30%；c均質(zhì)劑：0.1-0.25%。
本發(fā)明將ph調(diào)至11即可,所用均質(zhì)劑是瓊脂粉、右旋糖苷、海藻酸鈉混合物，比例為：12:5:1。
藻類營養(yǎng)液成分：nh4no3=50-100mg；k2hpo4=5mg；fec6h5o7=0.1-0.5mg；淡水=1000ml。
本發(fā)明技術(shù)方案通過擴(kuò)增培養(yǎng)，在無菌條件下培養(yǎng)到指定細(xì)胞濃度，無菌灌裝，避免有害細(xì)菌等滋生污染產(chǎn)品。
本發(fā)明可以通過以下具體步驟得到進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)：
(1)藻類的培養(yǎng)：將純培養(yǎng)的藻種進(jìn)行一級、二級擴(kuò)種培養(yǎng)藻種的一級培養(yǎng)：在超凈工作臺下，將保種的純培養(yǎng)的藻種接種到1l三角瓶中（裝有600ml藻類生長培養(yǎng)基），置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)，調(diào)節(jié)溫度25℃，光照強(qiáng)度5000lx，每天搖瓶6次，當(dāng)藻種濃度超過106cfu/ml時得到一級藻類培養(yǎng)液。藻類二級培養(yǎng)：在無菌操作下，將一級培養(yǎng)藻種按照1:3比例接種到10l廣口瓶中，調(diào)節(jié)溫度25℃，光照強(qiáng)度5000lx，每天搖瓶6次，當(dāng)藻種濃度超過106cfu/ml時得到二級藻類培養(yǎng)液。大量培養(yǎng)：無菌接種到100l的塑料桶中，調(diào)節(jié)溫度25℃，光照強(qiáng)度5000lx，進(jìn)行充氣培養(yǎng)，期間可補(bǔ)充培養(yǎng)液，使藻種濃度達(dá)到106cfu/ml。
(2)將處于穩(wěn)定生長期的藻液通過鏡檢，確定無雜菌后離心收集藻泥。
(3)將步驟(2)的藻泥加入配制藻類營養(yǎng)液，制成藻種細(xì)胞懸液，藻細(xì)胞密度大約≥1020cfu/ml。
(4)配制均質(zhì)劑：將瓊脂粉、右旋糖苷、海藻酸鈉按照12:5:1的比例混合，溶于藻類營養(yǎng)液中，加熱煮沸5min，冷卻備用。
(5)向(3)中加入0.1-0.25%的均質(zhì)劑，淡水微藻將ph調(diào)至11。
(6)將(5)步驟的藻種細(xì)胞懸液無菌分裝在密封的藻種用商品瓶中，避免空氣中的雜菌污染。
本發(fā)明所采用均質(zhì)劑能使商品藻種在保存過程中保持均一的狀態(tài)，避免藻種沉底。同時，通過控制藻液保存的ph環(huán)境，來延長藻種保存時間。采用本發(fā)明的技術(shù)方案保存藻種可以達(dá)到以下效果(1)在ph=11的條件下保存淡水微藻，藻種的代謝活動停止，繁殖受到抑制，保存藻種的時間延長，本發(fā)明保存藻種可以長達(dá)4個月。(2)添加常規(guī)的均質(zhì)劑的基礎(chǔ)上使產(chǎn)品性質(zhì)更加穩(wěn)定。(3)液態(tài)藻種在常溫下即可保存，不受溫度和設(shè)備的限制，便于運(yùn)輸。
本發(fā)明使用方法：用池水稀釋50倍后全池均勻潑灑，每瓶使用2—3畝，根據(jù)水色決定使用次數(shù)。
試驗(yàn)實(shí)施例：淡水微藻常溫液態(tài)保存方法生產(chǎn)使用效果試驗(yàn)結(jié)果如下：
按照以上方法測定不同時期苗場池中藻種濃度，在1號、2號苗池中分別噴灑使用本發(fā)明制備方案保存3個月和4個月微藻液，用池水稀釋50倍后全池均勻潑灑，測定5d、10d、15d后苗池中微藻的濃度，并進(jìn)行對比