本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領域，尤其涉及一種乳酸菌組合物的分離方法及其應用。
背景技術(shù)：
真菌是一類生命力極強的腐敗微生物，其中由酵母菌和霉菌污染所導致的的飼料損失已有大量報道。目前已經(jīng)確定有超過200種霉菌在特定食品、動物飼料中生長時會產(chǎn)生對人和動物有害的物質(zhì)，主要有黃曲霉毒素類、串珠鐮刀菌素、赫曲霉毒素類、棒曲霉素、單端孢霉烯類和玉米赤霉烯酮6大類。由于這些毒素具有致癌致畸性，對神經(jīng)、肝腎也有毒害作用，因此這些腐敗真菌在造成巨大經(jīng)濟損失的同時，也對公眾的健康構(gòu)成了極大威脅。如發(fā)生在20世紀60年代英國雞場的“火雞x病”，幾個月內(nèi)10多萬只雛火雞相繼死亡，結(jié)果1963年由spensley證實這種病是由黃曲霉菌產(chǎn)生的黃曲霉毒素b1引起。
國內(nèi)外對抑制黃曲霉毒素進行了大量研究。但是這些傳統(tǒng)方法都存在一定的弊端，比如物理方法會造成營養(yǎng)成分的損失，化學防腐劑則會對人和動物的健康及環(huán)境帶來危害。因此，目前急需一種抑制黃曲霉菌的乳酸菌組合物。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種能夠抑制黃曲霉菌的乳酸菌組合和該種乳酸菌的分離方法。本發(fā)明通過采用雙層平板法來篩選具有抑制黃曲霉菌活性的乳酸菌，從而為改善和提高青貯飼料品質(zhì)提供了優(yōu)良的菌種。
為了解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明提供了一種乳酸菌組合物的分離方法，所述乳酸菌由新疆的發(fā)面面肥中分離獲得，所述乳酸菌包括類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌。
進一步地，該乳酸菌組合物的分離方法具體包括如下步驟：
(1)每稱取10g發(fā)面面肥加入到盛有90ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器密封置于搖床上以120r/min搖動2h，即得沉淀一和上清液一，吸取1ml上清液一加入到另一盛有9ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器置于漩渦混合器上漩渦震蕩，即得菌液；
(2)取100μl步驟(1)中制備的菌液涂布于乳酸菌平板培養(yǎng)基表面，并將乳酸菌平板培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)48～72h，即得單菌落；
(3)挑取單菌落在乳酸菌固體培養(yǎng)基上劃線，并將乳酸菌固體培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)48～72h，重復劃線分離培養(yǎng)3次，即得單菌株，將單菌株接入乳酸菌液體培養(yǎng)基中，并將乳酸菌液體培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)24h，即得乳酸菌液，將所制備的乳酸菌液和等體積的甘油混合后并封裝置于-70℃的條件下保存，備用；
(4)稱取10g發(fā)霉花生放入盛有90ml無菌蒸餾水的容器中，并將容器密封置于搖床上以120r/min搖動2h，即得沉淀二和上清液二，吸取1ml上清液二加入到另一盛有9ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器置于漩渦混合器上漩渦震蕩，即得菌懸液；
(5)取100μl步驟(4)中制備的菌懸液涂布于曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基表面，并將曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基置于28℃的條件下培養(yǎng)4～7天，即得黃曲霉菌落，挑取黃曲霉菌落所產(chǎn)的孢子在曲霉素瓊脂固體培養(yǎng)基上劃線分離，即得黃曲霉菌株；
(6)將黃曲霉菌株接種在馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基表面，并將馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基置于28℃的條件下培養(yǎng)3～5天，待黃曲霉菌株產(chǎn)生大量孢子時，加入5ml滅菌生理鹽水于裝有馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基的試管中，并將試管置于漩渦混合器上漩渦震蕩5min，即得黃曲霉懸濁液，用無菌紗布過濾除去營養(yǎng)菌絲體，并將黃曲霉懸濁液的濃度調(diào)整為105個/ml，即得黃曲霉孢子液，備用；
(7)將乳酸菌固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中作為下層平板，待其凝固后，用接種環(huán)沾取步驟(3)中備用的乳酸菌液在下層平板上劃2條2～3cm的平行直線，將培養(yǎng)皿置于37℃的條件下培養(yǎng)24～36h至長出菌苔，再將步驟(6)中備用的黃曲霉孢子液倒入培養(yǎng)皿中，覆蓋在含有乳酸菌菌苔的下層培養(yǎng)基上，并將培養(yǎng)皿置于28℃的條件下培養(yǎng)48～72h，即得抑制黃曲霉菌的乳酸菌。
進一步地，所述乳酸菌固體培養(yǎng)基為將10g的蛋白胨、10g的牛肉膏、5g的酵母粉、20g的檸檬酸二胺、0.05g的硫酸鎂、2g的磷酸氫二鉀、5g的乙酸鈉、1g的吐溫80、0.05g的硫酸錳、1g的碳酸鈣以及15g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌15min制得。
進一步地，所述馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基為將200g的馬鈴薯、20g的葡萄糖以及8g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌20min制得。
進一步地，所述曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基為將20g的酵母粉、10g的蛋白胨、0.5g的檸檬酸鐵銨、1ml的0.2％的二氯硝基苯胺、0.1g的氯霉素以及15g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌15min制得。
本發(fā)明還提供了上述的分離方法所制得的乳酸菌組合物在抑制黃曲霉菌方面的應用，所述乳酸菌組合物包括類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌。
優(yōu)選地，所述乳酸菌組合物由類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌中任意兩種的菌液以1％的接種量1:1兩兩組合而成。
優(yōu)選地，所述乳酸菌組合物由類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌三種的菌液以1％的接種量1:1鼻裂混合而成。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所達到的有益效果：
(1)本發(fā)明中篩選出來的類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌對黃曲霉菌均有抑制作用，兩兩混合后抑菌效果顯著提高，其中，兩兩混合的抑菌效果較好的是類芽孢桿菌液和屎腸球菌液組合，抑菌區(qū)直徑可達到5.3～5.4cm；將類芽孢桿菌液、屎腸球菌液和乳酸乳球菌液三者混合后抑菌效果最佳，抑菌區(qū)直徑達到6.2～6.4cm；屎腸球菌液的抑菌效果顯著高于其他單個菌液的抑菌效果，屎腸球菌液的抑菌區(qū)直徑達到4.5～5.0cm。
(2)本發(fā)明中的類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌均能在40℃和45℃條件下生長，說明本發(fā)明中的類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌能夠在高溫條件下生長；本發(fā)明中的類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌能在nacl濃度達到3％或6.5％的情況下生長，說明本發(fā)明篩選出來的菌株能夠在鹽漬地區(qū)的存活；同時篩選出來的菌株還能在酸性的條件下生存。
(3)本發(fā)明中在制備乳酸菌液時，需要重復劃線分離培養(yǎng)3次；重復劃線培養(yǎng)是為了確定無雜菌；本發(fā)明中將乳酸菌液和等體積的甘油混合后并封裝置于-70℃的條件下保存；向乳酸菌液中加入甘油，可使乳酸菌液的冰點降低，在緩慢凍結(jié)條件下，能使細胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細胞，從而減少冰晶的形成。
附圖說明
以下結(jié)合附圖及具體實施方式對本發(fā)明作進一步詳細說明。
圖1是本發(fā)明中黃曲霉菌落的示意圖；
圖2是本發(fā)明中乳酸菌液對黃曲霉菌的抑制效果圖。
具體實施方式
以下實施例僅用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
1材料的來源
1.1樣品來源：2016年7月從新疆阿克蘇地區(qū)隨機采集發(fā)面面肥、發(fā)霉花生、發(fā)霉玉米及變質(zhì)青貯樣品。將樣品封于密封袋中，貼上標簽、標明采樣時間和地點后運回實驗室，于4℃條件下，由塔里木大學畜牧科技重點實驗室草食家畜營養(yǎng)研究室保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2菌種來源：從發(fā)面面肥樣品中分離獲得乳酸菌，從發(fā)霉花生、發(fā)霉玉米及變質(zhì)青貯飼料中分離獲得黃曲霉菌，由塔里木大學畜牧科技重點實驗室草食家畜營養(yǎng)研究室保存?zhèn)溆谩?/p>
實施例1
一種乳酸菌組合物的分離方法，所述乳酸菌組合物由新疆的發(fā)面面肥中分離獲得，所述乳酸菌組合物包括類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌。
具體地，上述乳酸菌組合的分離方法步驟如下：
(1)稱取10g發(fā)面面肥加入到盛有90ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器密封置于搖床上以120r/min搖動2h，即得沉淀一和上清液一，吸取1ml上清液一加入到另一盛有9ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器置于漩渦混合器上漩渦震蕩，即得菌液；
(2)取100μl步驟(1)中制備的菌液涂布于乳酸菌平板培養(yǎng)基表面，并將乳酸菌平板培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)48h，即得單菌落；
(3)挑取單菌落在乳酸菌固體培養(yǎng)基上劃線，并將乳酸菌固體培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)48h，重復劃線分離培養(yǎng)3次，即得單菌株，將單菌株接入乳酸菌液體培養(yǎng)基中，并將乳酸菌液體培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)24h，即得乳酸菌液，將所制備的乳酸菌液和等體積的甘油混合后并封裝置于-70℃的條件下保存，備用；
(4)稱取10g發(fā)霉花生放入盛有90ml無菌蒸餾水的容器中，并將容器密封置于搖床上以120r/min搖動2h，即得沉淀二和上清液二，吸取1ml上清液二加入到另一盛有9ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器置于漩渦混合器上漩渦震蕩，即得菌懸液；
(5)取100μl步驟(4)中制備的菌懸液涂布于曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基表面，并將曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基置于28℃的條件下培養(yǎng)4天，即得黃曲霉菌落，挑取黃曲霉菌落所產(chǎn)的孢子在曲霉素瓊脂固體培養(yǎng)基上劃線分離，即得黃曲霉菌株；
(6)將黃曲霉菌株接種在馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基表面，并將馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基置于28℃的條件下培養(yǎng)3天，待黃曲霉菌株產(chǎn)生大量孢子時，加入5ml滅菌生理鹽水于裝有馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基的試管中，并將試管置于漩渦混合器上漩渦震蕩5min，即得黃曲霉懸濁液，用無菌紗布過濾除去營養(yǎng)菌絲體，并將黃曲霉懸濁液的濃度調(diào)整為105個/ml，即得黃曲霉孢子液，備用；
(7)將乳酸菌固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中作為下層平板，待其凝固后，用接種環(huán)沾取步驟(3)中備用的乳酸菌液在下層平板上劃2條2cm的平行直線，將培養(yǎng)皿置于37℃的條件下培養(yǎng)24h至長出菌苔，再將步驟(6)中備用的黃曲霉孢子液倒入培養(yǎng)皿中，覆蓋在含有乳酸菌菌苔的下層培養(yǎng)基上，并將培養(yǎng)皿置于28℃的條件下培養(yǎng)48h，即得抑制黃曲霉菌的乳酸菌組合物。
在本實施例中，所述乳酸菌固體培養(yǎng)基為將10g的蛋白胨、10g的牛肉膏、5g的酵母粉、20g的檸檬酸二胺、0.05g的硫酸鎂、2g的磷酸氫二鉀、5g的乙酸鈉、1g的吐溫80、0.05g的硫酸錳、1g的碳酸鈣以及15g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌15min制得。
在本實施例中，所述馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基為將200g的馬鈴薯、20g的葡萄糖以及8g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌20min制得。
在本實施例中，所述曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基為將20g的酵母粉、10g的蛋白胨、0.5g的檸檬酸鐵銨、1ml的0.2％的二氯硝基苯胺、0.1g的氯霉素以及15g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌15min制得。
實施例2
一種乳酸菌組合物的分離方法，所述乳酸菌組合物由新疆的發(fā)面面肥中分離獲得，所述乳酸菌組合物包括類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌。
具體地，上述乳酸菌組合物的分離方法步驟如下：
(1)稱取10g發(fā)面面肥加入到盛有90ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器密封置于搖床上以120r/min搖動2h，即得沉淀一和上清液一，吸取1ml上清液一加入到另一盛有9ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器置于漩渦混合器上漩渦震蕩，即得菌液；
(2)取100μl步驟(1)中制備的菌液涂布于乳酸菌平板培養(yǎng)基表面，并將乳酸菌平板培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)60h，即得單菌落；
(3)挑取單菌落在乳酸菌固體培養(yǎng)基上劃線，并將乳酸菌固體培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)60h，重復劃線分離培養(yǎng)3次，即得單菌株，將單菌株接入乳酸菌液體培養(yǎng)基中，并將乳酸菌液體培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)24h，即得乳酸菌液，將所制備的乳酸菌液和等體積的甘油混合后并封裝置于-70℃的條件下保存，備用；
(4)稱取10g發(fā)霉花生放入盛有90ml無菌蒸餾水的容器中，并將容器密封置于搖床上以120r/min搖動2h，即得沉淀二和上清液二，吸取1ml上清液二加入到另一盛有9ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器置于漩渦混合器上漩渦震蕩，即得菌懸液；
(5)取100μl步驟(4)中制備的菌懸液涂布于曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基表面，并將曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基置于28℃的條件下培養(yǎng)6天，即得黃曲霉菌落，挑取黃曲霉菌落所產(chǎn)的孢子在曲霉素瓊脂固體培養(yǎng)基上劃線分離，即得黃曲霉菌株；
(6)將黃曲霉菌株接種在馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基表面，并將馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基置于28℃的條件下培養(yǎng)4天，待黃曲霉菌株產(chǎn)生大量孢子時，加入5ml滅菌生理鹽水于裝有馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基的試管中，并將試管置于漩渦混合器上漩渦震蕩5min，即得黃曲霉懸濁液，用無菌紗布過濾除去營養(yǎng)菌絲體，并將黃曲霉懸濁液的濃度調(diào)整為105個/ml，即得黃曲霉孢子液，備用；
(7)將乳酸菌固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中作為下層平板，待其凝固后，用接種環(huán)沾取步驟(3)中備用的乳酸菌液在下層平板上劃2條2.5cm的平行直線，將培養(yǎng)皿置于37℃的條件下培養(yǎng)30h至長出菌苔，再將步驟(6)中備用的黃曲霉孢子液倒入培養(yǎng)皿中，覆蓋在含有乳酸菌菌苔的下層培養(yǎng)基上，并將培養(yǎng)皿置于28℃的條件下培養(yǎng)60h，即得抑制黃曲霉菌的乳酸菌組合物。
在本實施例中，所述乳酸菌固體培養(yǎng)基為將10g的蛋白胨、10g的牛肉膏、5g的酵母粉、20g的檸檬酸二胺、0.05g的硫酸鎂、2g的磷酸氫二鉀、5g的乙酸鈉、1g的吐溫80、0.05g的硫酸錳、1g的碳酸鈣以及15g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌15min制得。
在本實施例中，所述馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基為將200g的馬鈴薯、20g的葡萄糖以及8g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌20min制得。
在本實施例中，所述曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基為將20g的酵母粉、10g的蛋白胨、0.5g的檸檬酸鐵銨、1ml的0.2％的二氯硝基苯胺、0.1g的氯霉素以及15g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌15min制得。
實施例3
一種乳酸菌組合物的分離方法，所述乳酸菌組合物由新疆的發(fā)面面肥中分離獲得，所述乳酸菌組合物包括類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌。
具體地，上述乳酸菌組合物的分離方法步驟如下：
(1)稱取10g發(fā)面面肥加入到盛有90ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器密封置于搖床上以120r/min搖動2h，即得沉淀一和上清液一，吸取1ml上清液一加入到另一盛有9ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器置于漩渦混合器上漩渦震蕩，即得菌液；
(2)取100μl步驟(1)中制備的菌液涂布于乳酸菌平板培養(yǎng)基表面，并將乳酸菌平板培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)72h，即得單菌落；
(3)挑取單菌落在乳酸菌固體培養(yǎng)基上劃線，并將乳酸菌固體培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)72h，重復劃線分離培養(yǎng)3次，即得單菌株，將單菌株接入乳酸菌液體培養(yǎng)基中，并將乳酸菌液體培養(yǎng)基置于30℃的條件下培養(yǎng)24h，即得乳酸菌液，將所制備的乳酸菌液和等體積的甘油混合后并封裝置于-70℃的條件下保存，備用；
(4)稱取10g發(fā)霉花生放入盛有90ml無菌蒸餾水的容器中，并將容器密封置于搖床上以120r/min搖動2h，即得沉淀二和上清液二，吸取1ml上清液二加入到另一盛有9ml無菌蛋白胨水的容器中，并將容器置于漩渦混合器上漩渦震蕩，即得菌懸液；
(5)取100μl步驟(4)中制備的菌懸液涂布于曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基表面，并將曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基置于28℃的條件下培養(yǎng)7天，即得黃曲霉菌落，挑取黃曲霉菌落所產(chǎn)的孢子在曲霉素瓊脂固體培養(yǎng)基上劃線分離，即得黃曲霉菌株；
(6)將黃曲霉菌株接種在馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基表面，并將馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基置于28℃的條件下培養(yǎng)5天，待黃曲霉菌株產(chǎn)生大量孢子時，加入5ml滅菌生理鹽水于裝有馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基的試管中，并將試管置于漩渦混合器上漩渦震蕩5min，即得黃曲霉懸濁液，用無菌紗布過濾除去營養(yǎng)菌絲體，并將黃曲霉懸濁液的濃度調(diào)整為105個/ml，即得黃曲霉孢子液，備用；
(7)將乳酸菌固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中作為下層平板，待其凝固后，用接種環(huán)沾取步驟(3)中備用的乳酸菌液在下層平板上劃2條3cm的平行直線，將培養(yǎng)皿置于37℃的條件下培養(yǎng)36h至長出菌苔，再將步驟(6)中備用的黃曲霉孢子液倒入培養(yǎng)皿中，覆蓋在含有乳酸菌菌苔的下層培養(yǎng)基上，并將培養(yǎng)皿置于28℃的條件下培養(yǎng)72h，即得抑制黃曲霉菌的乳酸菌組合物。
在本實施例中，所述乳酸菌固體培養(yǎng)基為將10g的蛋白胨、10g的牛肉膏、5g的酵母粉、20g的檸檬酸二胺、0.05g的硫酸鎂、2g的磷酸氫二鉀、5g的乙酸鈉、1g的吐溫80、0.05g的硫酸錳、1g的碳酸鈣以及15g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌15min制得。
在本實施例中，所述馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基為將200g的馬鈴薯、20g的葡萄糖以及8g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌20min制得。
在本實施例中，所述曲霉菌瓊脂固體培養(yǎng)基為將20g的酵母粉、10g的蛋白胨、0.5g的檸檬酸鐵銨、1ml的0.2％的二氯硝基苯胺、0.1g的氯霉素以及15g的瓊脂溶于1l去離子水后并在121℃的條件下滅菌15min制得。
實驗與結(jié)果
以實施例2所篩選的乳酸菌組合物和黃曲霉菌落，做實驗總結(jié)如下：
1、從發(fā)霉花生中篩選出來的黃曲霉菌落呈放射狀，孢子呈淡黃色；在馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基上生長，培養(yǎng)基背面呈亮橙色，如圖1所示。
2、將實施例2的分離出的乳酸菌組合物篩選后發(fā)現(xiàn)，有3株乳酸菌對黃曲霉菌有抑制作用，如圖2所示，其中這3株乳酸菌分別為類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌，具體抑菌效果如下表所示。
表1乳酸菌液對黃曲霉菌的抑制效果表
注：同列數(shù)據(jù)后標不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)。
由表1可知，本發(fā)明篩選出來的類芽孢桿菌、屎腸球菌和乳酸乳球菌對黃曲霉菌均有抑制作用，兩兩混合后抑菌效果顯著提高，其中，兩兩混合的抑菌效果較好的是類芽孢桿菌液和屎腸球菌液組合，抑菌區(qū)直徑可達到5.3～5.4cm；將類芽孢桿菌液、屎腸球菌液和乳酸乳球菌液三者混合后抑菌效果最佳，抑菌區(qū)直徑達到6.2～6.4cm；屎腸球菌液的抑菌效果顯著高于其他單個菌液的抑菌效果，屎腸球菌液的抑菌區(qū)直徑達到4.5～5.0cm。
3、對具有抑菌活性的類芽孢桿菌液、屎腸球菌液和乳酸乳球菌液分別進行產(chǎn)氣實驗、溫度生長實驗和耐酸耐堿實驗，結(jié)果如表2和表3所示。
表2乳酸菌液產(chǎn)氣試驗和溫度生長試驗測定結(jié)果表
注：“+”表示生長，“-”表示不生長，“w”表示弱生長，下同。
由表2可以看出，在產(chǎn)氣試驗中3株乳酸菌液發(fā)酵葡萄糖均不能產(chǎn)氣，說明均為同型發(fā)酵乳酸菌；在溫度生長試驗中，3株乳酸菌液均能在5℃條件下生長，在10℃條件下除屎腸球菌液生長良好，其余2株菌液生長較弱，在40℃和45℃條件下，3株乳酸菌液均生長良好。
表3乳酸菌耐酸耐鹽試驗測定結(jié)果
由表3可以看出，在耐酸耐鹽試驗中，nacl為3％和6.5％時，3株菌均能良好生長；在ph＝3的條件下，3株乳酸菌液均不能生長；在ph＝4的條件下，3株菌生長較弱；在ph值為5～7時，3株菌生長狀況良好。
4、對具有抑菌活性的類芽孢桿菌液、屎腸球菌液和乳酸乳球菌液進行碳源發(fā)酵實驗，結(jié)果如表4和表5所示。
表4乳酸菌碳源發(fā)酵試驗
表5乳酸菌碳源發(fā)酵試驗
由表4和表5可知,3株乳酸菌液均可利用d-葡萄糖、d-麥芽糖、d-甘露糖、纖維二糖、d-甘露醇、d-果糖、蔗糖及d-山梨醇；類芽孢桿菌液不能發(fā)酵乳糖、d-半乳糖、l-山梨糖、d-松三糖、木糖醇、d-棉籽糖、l-鼠李糖、d-木糖及d-蜜二糖；屎腸球菌液不能發(fā)酵l-山梨糖、d-松二糖、木糖醇、d-棉籽糖及l(fā)-鼠李糖；乳酸乳球菌液不能利用l-山梨糖、木糖醇、d-棉籽糖、l-鼠李糖及d-木糖。
綜上所述，本發(fā)明中篩選出來的類芽孢桿菌液、屎腸球菌液和乳酸乳球菌液對黃曲霉菌有明顯的抑菌效果，并且，將3株菌液混合后抑菌效果最佳。
本技術(shù)領域中的普通技術(shù)人員應當認識到，以上的實施例僅是用來說明本發(fā)明，而并非用作為對本發(fā)明的限定，只要在本發(fā)明的實質(zhì)精神范圍內(nèi)，對以上所述實施例的變化、變型都將落在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)。