本發(fā)明涉及改性蛋白加工
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的制備方法。
背景技術(shù)：
：淀粉和蛋白質(zhì)是兩類重要的天然高分子聚合物，具有廉價(jià)易得、可降解和良好的生物相容性等特性。長(zhǎng)期以來世界各國(guó)都十分重視淀粉和蛋白質(zhì)資源的開發(fā)利用，尤其是二者的改性修飾一直是研究熱點(diǎn)。在兩者共存，一些物理化學(xué)條件適宜時(shí)，則發(fā)生共聚改性現(xiàn)象，即大分子上的部分基團(tuán)可以互相連接復(fù)合，從而改善和賦予體系一些獨(dú)特的功能性質(zhì)、加工特性和及品質(zhì)特性，最終擴(kuò)大其在食品工業(yè)和其他工業(yè)中的應(yīng)用，如可用作可食用膜、可用于開發(fā)低脂肪食品、藥物緩釋體系等。目前，淀粉-蛋白復(fù)合物的制備，主要有如下4種方法：(1)干法反應(yīng)通過控制自發(fā)美拉德反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)，將淀粉與蛋白粉以一定質(zhì)量比混合后用去離子水溶解后冷凍干燥，凍干樣品置于底部裝有飽和kbr溶液，濕度為79％的反應(yīng)器中，于60℃下反應(yīng)數(shù)小時(shí)至幾周；(2)濕法反應(yīng)淀粉與蛋白質(zhì)的水溶液在一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，蛋白質(zhì)和淀粉按一定質(zhì)量比混合，緩沖溶液稀釋后置于密封離心管水浴加熱接枝；(3)電合成帶有兩根不銹鋼電極的電池槽中裝滿質(zhì)量分?jǐn)?shù)淀粉和蛋白水溶液，通電后不時(shí)取下復(fù)合物凝膠，干燥即得復(fù)合物；(4)擠壓法淀粉與蛋白質(zhì)按一定比例混合后采用螺桿機(jī)壓機(jī)處理，并選擇合適的擠壓溫度、水分含量、螺桿轉(zhuǎn)速等相關(guān)技術(shù)參數(shù)。但是上述方法由于僅憑自發(fā)的美拉德反應(yīng)，淀粉與蛋白不能充分復(fù)合，并且一般的制備法淀粉表面可與蛋白復(fù)合的顆粒成分(蛋白和脂質(zhì))較少，再加之條件要求嚴(yán)格，導(dǎo)致所制得的淀粉-蛋白復(fù)合物的復(fù)合率低，不便于用于復(fù)合物后期的使用與加工。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于克服了上述缺陷，提供一種蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的制備方法，該方法制備出的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的復(fù)合率高。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：本發(fā)明提供了一種蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：步驟1：將蓮子淀粉溶于酸性溶液中，加入淀粉酶進(jìn)行酶解反應(yīng)24～48h，接著調(diào)節(jié)體系為堿性，然后離心去除上清液得沉淀，將沉淀進(jìn)行洗滌后去除上清液，干燥并粉碎得到蓮子多孔淀粉；步驟2：將磷脂與步驟1的蓮子多孔淀粉混合后后用微波-超聲波聯(lián)合處理16～20min，得粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物；步驟3：將蛋白、步驟2所得粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物及水混合后進(jìn)行超高壓處理，然后離心去除上清液得濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物，接著將濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物干燥至恒重后粉碎、過篩，得到終產(chǎn)品。本發(fā)明還提供了一種蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：步驟1：將蓮子淀粉溶于ph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中，于53～57℃條件下加熱8～12min后加入α-淀粉酶與葡萄糖淀粉酶的復(fù)合酶，保溫反應(yīng)24～48h，接著利用1mol/l的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系為堿性，然后于5000r/min的轉(zhuǎn)速下離心15min去除上清液得沉淀，將沉淀進(jìn)行洗滌后去除上清液，將離心所得物于48～52℃常壓條件下干燥至恒重然后粉碎、過篩得到蓮子多孔淀粉，其中蓮子淀粉與ph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的料液比為1∶1.5～2.5，料液比的單位為g/ml，所述1mol/l的氫氧化鈉溶液與ph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的體積比為1∶10；步驟2：將磷脂與步驟1的蓮子多孔淀粉混合后后用微波-超聲波聯(lián)合處理16～20min，得粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，用無水乙醇洗滌粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，然后冷凍干燥至恒重，得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，其中，所述蓮子多孔淀粉與磷脂的質(zhì)量比為1∶5～7，微波-超聲波聯(lián)合處理的條件包括微波功率為150～160w，超聲波功率為350～400w，溫度為70～90℃；步驟3：將蓮子蛋白與步驟2所得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物分別溶解于蒸餾水后再混合得混合液，向混合液中添加ph為4.7的磷酸鹽緩沖溶液，接著將添加有ph為4.7的磷酸鹽緩沖溶液的混合液進(jìn)行間歇式超高壓處理20～30min，再進(jìn)行洗滌，然后離心去除上清液得濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物，接著將濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物于48～52℃常壓條件下干燥至恒重后粉碎、過篩，得到終產(chǎn)品，其中，所述蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物與蓮子蛋白的混合的質(zhì)量比為1∶5～7，所述間歇式超高壓處理的條件包括壓力為200～250mpa，溫度為60～80℃，每運(yùn)行5min停歇30s。本發(fā)明的有益效果在于：(1)利用淀粉酶將普通蓮子淀粉制備成蓮子多孔淀粉來增大淀粉的表面積，利用微波-超聲波聯(lián)合處理輔助多孔淀粉吸附磷脂以增加淀粉表面的脂質(zhì)成分，并利用非熱力技術(shù)超高壓提高蛋白質(zhì)的表面疏水作用，大大增加淀粉與蛋白的復(fù)合指數(shù)，制備出高復(fù)合率的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物；(2)本發(fā)明的制備方法未采用高溫操作，可以有效保持淀粉與蛋白的結(jié)構(gòu)，制備出的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的性能更佳，方便后續(xù)的使用與加工。具體實(shí)施方式為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、構(gòu)造特征、所實(shí)現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實(shí)施方式詳予說明。本發(fā)明最關(guān)鍵的構(gòu)思在于：通過將酶法制備的蓮子多孔淀粉置于微波-超聲波條件下來吸附磷脂以增大淀粉對(duì)蛋白質(zhì)的吸附量，并利用超高壓作用使淀粉與蛋白相互作用，進(jìn)而制得復(fù)合率高的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物。一種蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：步驟1：將蓮子淀粉溶于酸性溶液中，加入淀粉酶進(jìn)行酶解反應(yīng)24～48h，接著調(diào)節(jié)體系為堿性，然后離心去除上清液得沉淀，將沉淀進(jìn)行洗滌后去除上清液，干燥并粉碎得到蓮子多孔淀粉；步驟2：將磷脂與步驟1的蓮子多孔淀粉混合后后用微波-超聲波聯(lián)合處理16～20min，得粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物；步驟3：將蛋白、步驟2所得粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物及水混合后進(jìn)行超高壓處理，然后離心去除上清液得濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物，接著將濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物干燥至恒重后粉碎、過篩，得到終產(chǎn)品。本發(fā)明的工作原理及過程為：由于經(jīng)申請(qǐng)人研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)有利于淀粉顆粒表面吸附更多的蛋白質(zhì)，而極性的磷脂相比中性的糖脂、甘油三酸脂能吸附更多的蛋白質(zhì)，故而，將蓮子淀粉通過一定條件酶解制備成多孔淀粉，利用多孔淀粉表面積更大的優(yōu)點(diǎn)來增加淀粉表面的脂質(zhì)含量，進(jìn)而增加淀粉對(duì)蛋白的吸附。微波-超聲波聯(lián)合處理輔助多孔淀粉吸附磷脂，使得純磷脂通過滲透、擴(kuò)散作用進(jìn)入到多孔淀粉內(nèi)部，增加淀粉表面的脂質(zhì)成分，以利于淀粉表面吸附更多的蛋白質(zhì)。超高壓作為非熱力技術(shù)在不破壞小分子物質(zhì)的前提之下對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)產(chǎn)生影響，極大地提高蛋白質(zhì)的表面疏水作用，結(jié)合淀粉得到高復(fù)合指數(shù)(高復(fù)合率)的復(fù)合物。從上述描述可知，本發(fā)明的有益效果在于：(1)利用淀粉酶將普通蓮子淀粉制備成蓮子多孔淀粉來增大淀粉的表面積，利用微波-超聲波聯(lián)合處理輔助多孔淀粉吸附磷脂以增加淀粉表面的脂質(zhì)成分，并利用非熱力技術(shù)超高壓提高蛋白質(zhì)的表面疏水作用，大大增加淀粉與蛋白的復(fù)合指數(shù)，制備出高復(fù)合率的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物；(2)本發(fā)明的制備方法未采用高溫操作，可以有效保持淀粉與蛋白的結(jié)構(gòu)，制備出的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的性能更佳，方便后續(xù)的使用與加工。進(jìn)一步的，所述步驟1的酸性溶液為ph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，所述淀粉酶為α-淀粉酶與葡萄糖淀粉酶的復(fù)合酶，其中復(fù)合酶中α-淀粉酶的酶活為10000u·g-1，葡萄糖淀粉酶的酶活為3700u·g-1。由上述描述可知，選擇ph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液作為酶解條件可以減小ph值的波動(dòng)對(duì)酶解反應(yīng)的影響，選擇α-淀粉酶與葡萄糖淀粉酶的復(fù)合酶使得蓮子淀粉被酶解得更充分。進(jìn)一步的，所述步驟1的具體操作為：將蓮子淀粉溶于ph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中，于53～57℃條件下加熱8～12min后加入中溫α-淀粉酶(10000u·g-1)與葡萄糖淀粉酶(3700u·g-1)的復(fù)合酶，保溫反應(yīng)24～48h，接著利用1mol/l的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系為堿性，然后離心去除上清液得沉淀，將沉淀進(jìn)行洗滌后去除上清液，干燥至恒重然后粉碎、過篩得到蓮子多孔淀粉，其中蓮子淀粉與ph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的料液比為1∶1.5～2.5，料液比的單位為g/ml。由上述描述可知，上述條件有助于酶解更充分且提高酶解效率，同時(shí)利用強(qiáng)堿溶液——?dú)溲趸c溶液調(diào)節(jié)體系ph以終止酶解反應(yīng)，使用方便。進(jìn)一步的，步驟2中，微波-超聲波聯(lián)合處理的條件包括：微波功率為150～160w，超聲波功率為350～400w，溫度為70～90℃。由上述描述可知，將微波-超聲波間歇處理的條件控制在上述范圍有利于蓮子多孔淀粉吸附更多磷脂且增加吸附的牢固性，進(jìn)而便于后期吸附更多蛋白，進(jìn)一步提高蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的復(fù)合率。進(jìn)一步的，在步驟2與步驟3之間還包括利用無水乙醇洗滌粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，然后冷凍干燥至恒重，得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物。由上述描述可知，利用游離磷脂與蓮子多孔-磷脂復(fù)合物在無水乙醇的溶解度的不同，將未游離磷脂洗去，避免游離磷脂直接與蛋白復(fù)合，以提高蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的純度。進(jìn)一步的，步驟3中，所述超高壓處理為間歇式超高壓處理，所述間歇式超高壓處理的條件包括：壓力為200～250mpa，溫度為60～80℃，處理時(shí)間為20～30min，每運(yùn)行5min停歇30s。其中，處理時(shí)間為每次運(yùn)行時(shí)間之和。由上述描述可知，采用間歇式超高壓處理及控制其處理?xiàng)l件在上述范圍不僅可以提高蛋白的表面疏水作用增加后續(xù)復(fù)合率，還能起到殺菌效果。進(jìn)一步的，步驟3中，所述蛋白為蓮子蛋白，所述蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物與蓮子蛋白的混合的質(zhì)量比為1∶5～7。由上述描述可知，采用蓮子蛋白作為復(fù)合物的蛋白質(zhì)，進(jìn)一步提高蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的復(fù)合率。進(jìn)一步的，步驟1及步驟3的干燥為于48～52℃常壓條件下進(jìn)行干燥。由上述描述可知，于48～52℃常壓條件下進(jìn)行干燥避免溫度太高破壞淀粉及復(fù)合物的結(jié)構(gòu)以保持復(fù)合物的性能的穩(wěn)定性。本發(fā)明還提供一種蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：步驟1：將蓮子淀粉溶于ph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中，于53～57℃條件下加熱8～12min后加入中溫α-淀粉酶(10000u·g-1)與葡萄糖淀粉酶(3700u·g-1)的復(fù)合酶，保溫反應(yīng)24～48h，接著利用1mol/l的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系為堿性，然后于5000r/min的轉(zhuǎn)速下離心15min去除上清液得沉淀，將沉淀進(jìn)行洗滌后去除上清液，將離心所得物于48～52℃常壓條件下干燥至恒重然后粉碎、過篩得到蓮子多孔淀粉，其中蓮子淀粉與ph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的料液比為1∶1.5～2.5，料液比的單位為g/ml，所述1mol/l的氫氧化鈉溶液與ph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的體積比為1∶10；步驟2：將磷脂與步驟1的蓮子多孔淀粉混合后后用微波-超聲波聯(lián)合處理16～20min，得粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，用無水乙醇洗滌粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，然后冷凍干燥至恒重，得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，其中，所述蓮子多孔淀粉與磷脂的質(zhì)量比為1∶5～7，微波-超聲波聯(lián)合處理的條件包括微波功率為150～160w，超聲波功率為350～400w，溫度為70～90℃；步驟3：將蓮子蛋白與步驟2所得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物分別溶解于蒸餾水后再混合得混合液，向混合液中添加ph為4.7的磷酸鹽緩沖溶液，接著將添加有ph為4.7的磷酸鹽緩沖溶液的混合液進(jìn)行間歇式超高壓處理20～30min，再進(jìn)行洗滌，然后離心去除上清液得濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物，接著將濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物于48～52℃常壓條件下干燥至恒重后粉碎、過篩，得到終產(chǎn)品，其中，所述蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物與蓮子蛋白的混合的質(zhì)量比為1∶5～7，所述間歇式超高壓處理的條件包括壓力為200～250mpa，溫度為60～80℃，每運(yùn)行5min停歇30s。本發(fā)明的工作原理及過程為：由于經(jīng)申請(qǐng)人研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)有利于淀粉顆粒表面吸附更多的蛋白質(zhì)，而極性的磷脂相比中性的糖脂、甘油三酸脂能吸附更多的蛋白質(zhì)，故而，將蓮子淀粉通過一定條件酶解制備成多孔淀粉，利用多孔淀粉表面積更大的優(yōu)點(diǎn)來增加淀粉表面的脂質(zhì)含量，進(jìn)而增加淀粉對(duì)蛋白的吸附。微波-超聲波聯(lián)合處理輔助多孔淀粉吸附磷脂，使得純磷脂通過滲透、擴(kuò)散作用進(jìn)入到多孔淀粉內(nèi)部，增加淀粉表面的脂質(zhì)成分，以利于淀粉表面吸附更多的蛋白質(zhì)。超高壓作為非熱力技術(shù)在不破壞小分子物質(zhì)的前提之下對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)產(chǎn)生影響，極大地提高蛋白質(zhì)的表面疏水作用，結(jié)合淀粉得到高復(fù)合指數(shù)(高復(fù)合率)的復(fù)合物。從上述描述可知，本發(fā)明的有益效果在于：(1)利用淀粉酶將普通蓮子淀粉制備成蓮子多孔淀粉來增大淀粉的表面積，利用微波-超聲波聯(lián)合處理輔助多孔淀粉吸附磷脂以增加淀粉表面的脂質(zhì)成分，并利用非熱力技術(shù)超高壓提高蛋白質(zhì)的表面疏水作用，大大增加淀粉與蛋白的復(fù)合指數(shù)，制備出高復(fù)合率的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物；(2)本發(fā)明的制備方法未采用高溫操作，可以有效保持淀粉與蛋白的結(jié)構(gòu)，制備出的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的性能更佳，方便后續(xù)的使用與加工。實(shí)施例11材料與方法1.1材料蓮子蛋白、蓮子淀粉、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、中溫α-淀粉酶(10000u·g-1)與葡萄糖淀粉酶(3700u·g-1)、lmol/l氫氧化鈉、磷脂、無水乙醇、ph為4.7的磷酸鹽緩沖溶液1.2主要儀器dk-s24型電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；tu-1901紫外-可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；5l-hpp-600mpa型超高壓處理裝置，包頭科發(fā)高壓科技有限責(zé)任公司；sl-sm型微波超聲波聯(lián)合反應(yīng)系統(tǒng)，南京順流儀器制造有限公司；tg16-ws型離心機(jī)，常州市金壇高科儀器廠；bas224s型電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司。1.3試驗(yàn)方法1.3.1一種蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：步驟1：稱取25g蓮子淀粉于于250ml三角瓶中，加入50mlph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中，配制成淀粉乳懸液，于55℃條件下加熱10min后加入中溫α-淀粉酶(10000u·g-1)與葡萄糖淀粉酶(3700u·g-1)的復(fù)合酶，保溫反應(yīng)24h，接著加入1mol/l的氫氧化鈉溶液5ml以終止反應(yīng)，然后于5000r/min的轉(zhuǎn)速下離心15min去除上清液得沉淀，將沉淀進(jìn)行洗滌后去除上清液，將離心所得物于50℃常壓條件下干燥至恒重然后粉碎、過篩得到蓮子多孔淀粉；步驟2：將磷脂與步驟1的蓮子多孔淀粉按5∶1的質(zhì)量比混合后后用微波-超聲波聯(lián)合處理(微波-超聲波聯(lián)合處理的微波功率為150w，超聲波功率為350w，溫度為70℃)16min，得粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，用無水乙醇洗滌粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，然后冷凍干燥至恒重，得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物；步驟3：將蓮子蛋白與步驟2所得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物分別溶解于蒸餾水后再混合得混合液，向混合液中添加ph為4.7的磷酸鹽緩沖溶液進(jìn)行稀釋，置于聚丙烯真空袋中用真空包裝機(jī)封口，充分搖勻后放入進(jìn)行間歇式超高壓處理(間歇式超高壓處理的壓力為200mpa，溫度為60℃，每運(yùn)行5min停歇30s)20min，再進(jìn)行洗滌，然后離心去除上清液得濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物，接著將濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物于50℃常壓條件下干燥至恒重后粉碎、過篩，得到終產(chǎn)品，其中，所述蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物與蓮子蛋白的混合的質(zhì)量比為1∶5。1.3.2產(chǎn)品復(fù)合指數(shù)(復(fù)合率)的測(cè)定通過測(cè)定離心后上清液中的蓮子蛋白的量。用初始蓮子蛋白的量與上清液中的蓮子蛋白量的差值可計(jì)算出聚合物的復(fù)合率。上清液中蓮子蛋白的濃度測(cè)定：將超高壓處理后的溶液離心得上清液，取1ml上清液用蒸餾水定容至100ml，以標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液做校正標(biāo)準(zhǔn)定量蛋白質(zhì)，用分光光度計(jì)測(cè)278nm處吸收。根據(jù)下式計(jì)算蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的復(fù)合指數(shù)：ci＝(minitial-msupernatant)/minitial×100；式中:ci為蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的復(fù)合指數(shù)；minitial為初始蓮子蛋白的質(zhì)量；msupernatant為上清液中蓮子蛋白的質(zhì)量。其中蛋白質(zhì)含量m(mg)＝a×v×d/slopestd×103；式中a為樣品測(cè)試吸光度；v為樣品提取體積；d為稀釋因子，通常為1ml稀釋成100ml，即稀釋因子為100；slopestd為蛋白溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。所測(cè)結(jié)果均重復(fù)測(cè)定三次，取均值，產(chǎn)品復(fù)合指數(shù)的測(cè)定結(jié)果見表1。實(shí)施例2其他同實(shí)施例1，不同之處在于蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的制備，具體如下：步驟1：稱取25g蓮子淀粉于于250ml三角瓶中，加入50mlph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中，配制成淀粉乳懸液，于55℃條件下加熱10min后加入中溫α-淀粉酶(10000u·g-1)與葡萄糖淀粉酶(3700u·g-1)的復(fù)合酶，保溫反應(yīng)24h，接著加入1mol/l的氫氧化鈉溶液5ml以終止反應(yīng)，然后于5000r/min的轉(zhuǎn)速下離心15min去除上清液得沉淀，將沉淀進(jìn)行洗滌后去除上清液，將離心所得物于50℃常壓條件下干燥至恒重然后粉碎、過篩得到蓮子多孔淀粉；步驟2：將磷脂與步驟1的蓮子多孔淀粉按6∶1的質(zhì)量比混合后后用微波-超聲波聯(lián)合處理(微波-超聲波聯(lián)合處理的微波功率為155w，超聲波功率為375w，溫度為80℃)18min，得粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，用無水乙醇洗滌粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，然后冷凍干燥至恒重，得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物；步驟3：將蓮子蛋白與步驟2所得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物分別溶解于蒸餾水后再混合得混合液，向混合液中添加ph為4.7的磷酸鹽緩沖溶液進(jìn)行稀釋，置于聚丙烯真空袋中用真空包裝機(jī)封口，充分搖勻后放入進(jìn)行間歇式超高壓處理(間歇式超高壓處理的壓力為225mpa，溫度為70℃，每運(yùn)行5min停歇30s)25min，再進(jìn)行洗滌，然后離心去除上清液得濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物，接著將濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物于50℃常壓條件下干燥至恒重后粉碎、過篩，得到終產(chǎn)品，其中，所述蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物與蓮子蛋白的混合的質(zhì)量比為1∶6。復(fù)合指數(shù)的評(píng)價(jià)方法同實(shí)施例1，產(chǎn)品復(fù)合指數(shù)的測(cè)定結(jié)果見表1。實(shí)施例3步驟1：稱取25g蓮子淀粉于于250ml三角瓶中，加入50mlph值為5.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中，配制成淀粉乳懸液，于55℃條件下加熱10min后加入中溫α-淀粉酶(10000u·g-1)與葡萄糖淀粉酶(3700u·g-1)的復(fù)合酶，保溫反應(yīng)24h，接著加入1mol/l的氫氧化鈉溶液5ml以終止反應(yīng)，然后于5000r/min的轉(zhuǎn)速下離心15min去除上清液得沉淀，將沉淀進(jìn)行洗滌后去除上清液，將離心所得物于50℃常壓條件下干燥至恒重然后粉碎、過篩得到蓮子多孔淀粉；步驟2：將磷脂與步驟1的蓮子多孔淀粉按7∶1的質(zhì)量比混合后后用微波-超聲波聯(lián)合處理(微波-超聲波聯(lián)合處理的微波功率為160w，超聲波功率為400w，溫度為90℃)20min，得粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，用無水乙醇洗滌粗制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物，然后冷凍干燥至恒重，得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物；步驟3：將蓮子蛋白與步驟2所得精制的蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物分別溶解于蒸餾水后再混合得混合液，向混合液中添加ph為4.7的磷酸鹽緩沖溶液進(jìn)行稀釋，置于聚丙烯真空袋中用真空包裝機(jī)封口，充分搖勻后放入進(jìn)行間歇式超高壓處理(間歇式超高壓處理的壓力為250mpa，溫度為80℃，每運(yùn)行5min停歇30s)30min，再進(jìn)行洗滌，然后離心去除上清液得濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物，接著將濕態(tài)的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物于50℃常壓條件下干燥至恒重后粉碎、過篩，得到終產(chǎn)品，其中，所述蓮子多孔淀粉-磷脂復(fù)合物與蓮子蛋白的混合的質(zhì)量比為1∶7。復(fù)合指數(shù)的評(píng)價(jià)方法同實(shí)施例1，產(chǎn)品復(fù)合指數(shù)的測(cè)定結(jié)果見表1。對(duì)比例淀粉-蛋白復(fù)合物的干法反應(yīng)制備：通過控制自發(fā)美拉德反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)。將淀粉與蛋白粉按1:7混合后用去離子水溶解調(diào)至6％(m/v))后冷凍干燥。凍干樣品置于底部裝有飽和kbr溶液，濕度為79％的反應(yīng)器中，干熱反應(yīng)控制在60℃進(jìn)行，反應(yīng)持續(xù)5d。復(fù)合指數(shù)的評(píng)價(jià)方法同實(shí)施例1，產(chǎn)品復(fù)合指數(shù)的測(cè)定結(jié)果見表1。表1蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物復(fù)合指數(shù)(復(fù)合率)的測(cè)定結(jié)果復(fù)合物復(fù)合指數(shù)實(shí)施例152.76％實(shí)施例258.16％實(shí)施例360.22％對(duì)比例29.30％由表1可知，本發(fā)明制備的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物相比于對(duì)比例，其復(fù)合指數(shù)提高了1倍。綜上所述，本發(fā)明提供的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的制備方法，利用淀粉酶將普通蓮子淀粉制備成蓮子多孔淀粉來增大淀粉的表面積，利用微波-超聲波聯(lián)合處理輔助多孔淀粉吸附磷脂以增加淀粉表面的脂質(zhì)成分，并利用非熱力技術(shù)超高壓提高蛋白質(zhì)的表面疏水作用，大大增加淀粉與蛋白的復(fù)合指數(shù)，制備出高復(fù)合率的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物；本發(fā)明的制備方法未采用高溫操作，可以有效保持淀粉與蛋白的結(jié)構(gòu)，制備出的蓮子淀粉-蛋白復(fù)合物的性能更佳，方便后續(xù)的使用與加工。以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的
技術(shù)領(lǐng)域：
，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12