本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種荒漠植物霸王的微衛(wèi)星分子標(biāo)記及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：霸王(sarcozygiumxanthoxylonbunge)隸屬于蒺藜科，霸王屬。是分布于我國西北部干旱荒漠區(qū)的小灌木，在蒙古地區(qū)也有分布。該植物多生長于干旱的砂地、多石礫地以及覆沙地上，是荒漠灌叢植被的主要優(yōu)勢種和建群種之一。其抗逆性強(qiáng)，生態(tài)可塑性大，具有較好的飼用價值和適口性。霸王草地也成為我國西北地區(qū)的主要放牧地。然而在我國的分布地區(qū)多為生態(tài)脆弱地帶，尤其因?yàn)殚L期過度放牧退化迅速荒漠化日趨嚴(yán)重，現(xiàn)有霸王群落多分布相對稀疏，且破壞嚴(yán)重，生物量低。由于自然、歷史以及現(xiàn)實(shí)的種種原因，目前我國仍然承受著不同程度的荒漠化的嚴(yán)重困擾。根據(jù)第三次全國荒漠化監(jiān)測的數(shù)據(jù)來看，我國荒漠化面積達(dá)到了263.62萬km2，占我國國土面積的27.46％。干旱是世界農(nóng)牧業(yè)面臨的最嚴(yán)重問題之一，特別是我國北方地區(qū)干旱現(xiàn)象尤為嚴(yán)重。即使在我國濕潤和半濕潤地區(qū),也常常受到旱災(zāi)的侵襲。干旱對世界作物產(chǎn)量的影響,在自然環(huán)境脅迫中居首位,其危害相當(dāng)于其他自然災(zāi)害之合。因此,植物抗旱性研究一直是各國科學(xué)家關(guān)注的重要問題,是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。對植物霸王多態(tài)性的研究可為研究植物抗旱機(jī)制的研究提供基礎(chǔ)材料。微衛(wèi)星標(biāo)記(microsatellite)，又稱為短串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandemrepeats,strs)或簡單重復(fù)序列(simplesequencerepeats，ssr)，是均勻分布于真核生物基因組中的簡單重復(fù)序列，由2～6個核苷酸的串聯(lián)重復(fù)片段構(gòu)成。由于其有數(shù)量多、特異的pcr擴(kuò)增、穩(wěn)定性好、在基因組內(nèi)分布均勻、多態(tài)性信息豐富、易于檢測等特性等諸多優(yōu)點(diǎn)成為近年來應(yīng)用廣泛的分子標(biāo)記之一。然而，關(guān)于霸王屬植株的基因組微衛(wèi)星多態(tài)性在分子標(biāo)記開發(fā)方面的報道還未見到。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明首先提供一種蒺藜科植物霸王的微衛(wèi)星位點(diǎn)，包括seqidno1～seqidno9的序列的任意一種，即包括以下序列的任意一種：sxb-1(seqidno1)ggccttttcggactttttatcggctaaccactcacagaaagcggcaaattgttgtttcttgtttttgtcactaaagggtagttgtttttcttgttcttgtttggtatgagagttttggctatgggagtgcaggagttgtttggcggagttgttgttgttaggatcagggaattgacgagggaacaaatatgttgttttgtgtggcatctttctttctttctttcttgattctaatcagacacacaaacacggtcttgttctttcttttttgttttgttcgagctcgattagccgtcgtctcttgtcttttgcatgtccatagccaagctcgatctctctctctctctctctctagtctagtgtctataaaaccttgaatgaatgaatgaatgaacgaacagagagggttgtttattgatttgatcaaaccaacaaaagctaattacagtactagctacttctcttgcgatcaactttctttcacacaataacactttctsxb-2(seqidno2)tgtgcttactgtgcatcagttagcaaagttccttcgattggttcttcaaagccacgctccaccagactccagagaccctttgccttcaagagattctccattatttcgctccagtgatcatagtgaccatcaaaatgaggaattttggtaagtgttttatcctcactcattctctcggttttgaattctcacaggctgctgcctctcactgactcccagtgttgattctctgataccaaatgtaagatataagagctttagatagagaaaacttgtttatttatttatttatttattcaatggaagactaggctcttatatagctaatagtctgttacacacgatcttatcagaaagtaaaataagtctaagaaatagccactaccaacataaacaaaagacttaatcaaataggctaactaacctactaattgggagcttattccaatsxb-7(seqidno3)tgaaaagatgcaataaaattgatatttatgggttatgtgaagaccagagaatacaaaagctctacacaagacctgggtttgtttatacttgtaaaaagttggaaatacttaacttctatactccagcttcaggaggagtgagtgagtgagtgagtgttacagaatgggaataaatgtatataaggaataattaggagacaggatttattttactttccttaattagaggatttaacattgtatatttttatgtgcgtgtgtagttttctctattcaatgaattaataacagtcttttctttaatagaaagcagaaactatggtatcttcaaacttctgtactatctgtttgatacatttttccattactacagaggtaataagaggtctaacctgcatgsxb-10(seqidno4)gaacatgccttcccggtatcacagtactctattgtagtgatacaaatataagttacaaaatactaatatatgtgtataagctaaaatatcaaaaatcatatacatgtgtatgtctgtgcctgtacatatctcatggaataacacaaccaaccaaccaaccaacctgcttgctagctattgccccaatctgacttccccgaggacgactatggaagtatttttcagattcttcttcagaaactttctgcacagatccttccactcttacctaatacacggtaactaatgtcagttttagtcctcctatagcttataaatactatatatgctgtctaatagaagaaagcagcctaacagaaagcagaccctttgcgcaaggtccaacaacttgctttatccacacaagattatgagccaatttggcttggcttattggcttatcagctggtcagaccagtttatcggcagtaagctgcttatsxb-12(seqidno5)cacattggatggtgtaactcccacactgcagcggcgaagattcgaacttgcactattggacacaatttactatccgttttaccgttaagctgcttctgcgagggaaaaaaatatgagttaactcggaggtttggattagacagaataataggggggaaaaaaaataatatcataagttatgatttatttatttatttattttgtggttatagaccatctgtttgagttcggatggagccaggtaagaaacatggggctaagtcttttacgataagtttttaccacatttacatttgcatgcctaaagatttgaatttgagatccctaattaaattagaataatcgggtaccaacttattgacagagaagcttggaaacaaatgtgcattgatgattgatataaatatgtgtsxb-15(seqidno6)aaatgcgtactttttatcagtttattcaaagaatgcccgcatcctgatgagaaacaaaggctggagctcagtagaagactcagcttagatgcaaggcaagtcaagttttggtttcaaaaccgtaggacacaaatgaaggtaatacagtaaaccattgatatatgagtgttttttcttcttcttttgttttattgtttgtgagaattttgtttgtttgtttgtttgtttgtgagacagactcaaatggaacgtcatgagaatacactgctaaggcatgaaaacgaaaagttaagggcagagaacatgtctataagggatgcaatgaggaatccgatttgtagcaactgtggtggtccagctgttataggggaaatctcttttgaagagcagcaacttaggsxb-16(seqidno7)ttgaagctgatttctcattaaaaaattaatgtatggaaagataaaaaaaaagaattaggtgtgttaaacaggccaagccgcggcctgctagagctagcccgtttgacccgccaagtaaacgggctaaaaaaatcaactcgatcccgcctaattggcgggtttccaacccgtttgacagctctagttttgaaattctattatagtgcaaagagtttttttttaaaattttatttatttatttatttaccatgagtgttcaagtgcttaggttgttggttagggaattcttgaatccactaaagtctcaggtttcactccaccgtcagaggtggagctagaaaattggtgttacaggggtcatatatggtctagcggccaagcctacacaatattaatgtagtttataaaatttasxb-18(seqidno8)aacgttattagaatccactatgaaattaatcattttaatattgaataatgaccaatacttcaagtttaatgtatgttacaaatcacgaagcccttgaacctaattatcaaattagtagcaaattggcatataaccgttgcacttaaaaatattatactttacccgatattaatgcaatcaagatagactcattatttatatattaatgtcaggtaatagatatatattgaaaaaatacgttatctattatgctatgcaataattcaattccaccatttcaataggtcactcatttaacctagttgggctctcctcattctaacattttaaaacaaaacttaccaaaccatagcttcatttatttatttatttatttatttttaatcttctaaaggaaaatctggtggtatagccaaacaacacccttcccccctgcatgaacgtcttttcsxb-20(seqidno9)ggcgatatcctaccctacccatgtttacccggtgacccctatccgcttccaaatagatcatttattttagtagaatagaacataggtatataagttttaagtaaataaaatataacatcaagcgagccaaagctaaaggacatgtacgcaattgactatattgacactgagctcagttgtattaccatttttcttttatttatttatttatttattattatttttttttttgcgcaaagcaaatttaccagacagtactttgagcaaccctagcaatgcgtatgacatgctttcttcataaattgccaaaatattcctgttgttaactatgtggacaaaagtataatagccatgatggttggccaacgtgacaatgcaaatattcaattccctattcct本發(fā)明還提供了上述霸王屬蒺藜科植株的微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物對，所述引物對的序列依次為序列表seqidno10～no27的序列，即為以下序列對：本發(fā)明的另一目的在于提供上述霸王的微衛(wèi)星位點(diǎn)及其特異性引物對的篩選方法，包括以下步驟：1)收集樣品并提取dna；2)對步驟1)獲得的dna片段化處理，構(gòu)建dna-seq文庫，并對所述dna-seq進(jìn)行高通量測序；3)檢測微衛(wèi)星位點(diǎn)并設(shè)計(jì)微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物對；4)篩選并檢測微衛(wèi)星位點(diǎn)及其特異性引物對。優(yōu)選地，本發(fā)明所述霸王的微衛(wèi)星位點(diǎn)及其特異性引物對的篩選方法中，所述步驟1)中提取dna步驟為ctab法。優(yōu)選地，本發(fā)明所述霸王的微衛(wèi)星位點(diǎn)及其特異性引物對的篩選方法中，所述步驟2)中dna-seq高通量測序使用illuminahiseq測序平臺進(jìn)行高通量測序；優(yōu)選地，所述dna-seq高通量測序采用illuminahiseq測序平臺的雙端測序模式。優(yōu)選地，本發(fā)明所述霸王的微衛(wèi)星位點(diǎn)及其特異性引物對的篩選方法中，所述所述步驟3)檢測微衛(wèi)星序列并設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物包括以下步驟：采用batchprimer3在線分析工具對所述步驟2)組裝完成的序列檢測微衛(wèi)星位點(diǎn)序列并在微衛(wèi)星位點(diǎn)的側(cè)翼序列上進(jìn)行引物設(shè)計(jì)；所述微衛(wèi)星位點(diǎn)檢測的條件為重復(fù)單元為2個堿基時，重復(fù)次數(shù)需大于等于6；重復(fù)單元為3個堿基時，重復(fù)次數(shù)需大于等于5；重復(fù)單元為4、5和6個堿基時，重復(fù)次數(shù)需大于等于4；所述微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物設(shè)計(jì)的原則為pcr擴(kuò)增目的片段為100～200bp，引物gc含量為40～60％，上下游引物退火溫度(tm)在50～60℃之間且差異小于5℃。優(yōu)選地，本發(fā)明所述霸王的微衛(wèi)星位點(diǎn)及其特異性引物對的篩選方法中，所述步驟4)中篩選微衛(wèi)星特異性引物的方法為：使用霸王基因組dna對步驟3)獲得的特異性引物對進(jìn)行pcr擴(kuò)增并檢測，篩選能夠穩(wěn)定擴(kuò)增出目標(biāo)條帶并具有多態(tài)性的引物對。更優(yōu)選地，所述擴(kuò)增微衛(wèi)星位點(diǎn)的pcr反應(yīng)體系如下：2×taqpcrsupermix(北京全式金生物技術(shù)有限公司)15μl，10μm上下游引物各1μl(上游引物使用熒光標(biāo)記)，dna模板1μl，用超純水補(bǔ)齊至30μl；所述擴(kuò)增微衛(wèi)星位點(diǎn)的pcr條件為95℃預(yù)變性5min；95℃變性30sec，適宜退火溫度下退火30sec，72℃延伸30sec，反應(yīng)34個循環(huán)；72℃延伸10min。優(yōu)選地，本發(fā)明所述霸王的微衛(wèi)星位點(diǎn)及其特異性引物對的篩選方法中，所述微衛(wèi)星特異性引物檢測方法為：使用1％瓊脂糖-eb凝膠電泳檢測步驟4)所述的pcr產(chǎn)物，挑選在霸王個體中均擴(kuò)增得到單一目標(biāo)條帶的微衛(wèi)星pcr產(chǎn)物進(jìn)行基因分型分析；基因分型的結(jié)果使用genmarker軟件進(jìn)行讀取，并輸入excel文件；使用excelmircosatellitetoolkit程序統(tǒng)計(jì)各微衛(wèi)星位點(diǎn)的期望雜合度(expectedheterozygosity,he)、觀測雜合度(observedheterozygosity，ho)和多態(tài)性信息含量(polymorphicinformationcontent,pic)，以檢測所述微衛(wèi)星位點(diǎn)的多態(tài)性狀況，篩選出上述三個多態(tài)性數(shù)值均大于0.5的微衛(wèi)星特異引物。因此，本發(fā)明還提供了霸王的微衛(wèi)星特異性引物在霸王屬蒺藜科植株基因的標(biāo)記、定位與qtl分析，品種鑒定，種群及進(jìn)化研究，分子標(biāo)記輔助育種中的應(yīng)用。附圖說明圖1為本發(fā)明的一個實(shí)施例中的霸王基因組dna抽提結(jié)果電泳圖；圖2為本發(fā)明的一個實(shí)施例中的微衛(wèi)星位點(diǎn)的pcr產(chǎn)物電泳圖。具體實(shí)施方式以下通過具體實(shí)施例進(jìn)一步對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行說明，應(yīng)理解以下僅為本發(fā)明的示例性說明，并不用于限制本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍。實(shí)施例1霸王的微衛(wèi)星特異引物的篩選1、收集樣本并提取dna在內(nèi)蒙古阿拉善右旗地區(qū)采集霸王樣品，采摘葉片后使用硅膠保存，共采集樣品16份。dna抽提使用ctab法：1)稱取樣品0.02g，充分研磨，放入標(biāo)記好的ep試管內(nèi)。2)加入1.5mlctabfree液，加入5ul的dtt溶液，搖勻；冰浴10min。3)離心，10000rpm，15min，去上清；如果上清十分粘稠，使用ctabfree液再清洗一次；4)加入800μl3*ctab液(65℃預(yù)熱)和5uldtt溶液，混勻，65°c水浴1h，期間多次搖勻；5)冷卻至室溫，離心，10000rpm，15min，取上清。6)加入等體積氯仿：異戊醇(v:v2＝24:1)，混勻，放入恒溫?fù)u床中10min，離心，12000rpm，15min，取上清；7)重復(fù)上一步1-2次，直至中間蛋白層不出現(xiàn)；9)加入1/2體積5mol/lnacl及等1-2倍體積-20℃預(yù)冷的異丙醇，室溫，放置1h；10)12000rpm，15min，棄上清；11)75％乙醇洗兩次，每次加1000μl，放置5min后，12000rpm，離心6min，慢慢倒掉乙醇，注意不要倒掉瓶底的dna。12)用1000μl無水乙醇洗滌一次，風(fēng)干；13)加入100μlte，-20℃保存?zhèn)溆?，瓊脂糖電泳檢測結(jié)果(見圖1)。2、dna-seq高通量序列得到霸王基因組dna后，本發(fā)明實(shí)施例對霸王基因組dna進(jìn)行dna-seq高通量測序。在本發(fā)明的實(shí)施例中，所述dna-seq高通量測序優(yōu)選的委托晶能生物技術(shù)(上海)有限公司進(jìn)行；具體使用illuminahiseq測序平臺進(jìn)行高通量測序，進(jìn)一步優(yōu)選的采用illuminahiseq測序平臺的雙端測序模式。根據(jù)測序數(shù)據(jù)的低質(zhì)量分?jǐn)?shù)集中于末端的分布特點(diǎn)，利用trimgalore軟件對測序數(shù)據(jù)從3’端動態(tài)去除接頭序列片段和低質(zhì)量片段,利用fastqc軟件對預(yù)處理數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)量控制分析。共得到72467354條原始序列，去除低質(zhì)量片段后得到70537866原始序列。采用velvetopt(velvet優(yōu)化程序)進(jìn)行組裝，得到最后的組裝序列，并對100bp以下的contig進(jìn)行過濾，最終成功組裝的序列為632978條序列。3、檢測微衛(wèi)星序列和引物設(shè)計(jì)針對每條組裝的contig序列，采用batchprimer3在線分析工具檢測ssr序列并進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。微衛(wèi)星檢測的條件為重復(fù)單元為2個堿基時，重復(fù)次數(shù)需大于等于6；重復(fù)單元為3個堿基時，重復(fù)次數(shù)需大于等于5；重復(fù)單元為4、5和6個堿基時，重復(fù)次數(shù)需大于等于4。所述引物設(shè)計(jì)的原則為擴(kuò)增目的片段為100～200bp，引物gc含量為40～60％，上下游引物退火溫度(tm)在50～60℃之間且差異小于5℃。在此條件下，共篩選得到49679條微衛(wèi)星序列并設(shè)計(jì)10831對引物。4、高多態(tài)性微衛(wèi)星引物的檢測和篩選在10831個引物對中隨機(jī)選擇40個，對上游引物進(jìn)行熒光標(biāo)記后，使用這40對引物對上述16份樣品的dna進(jìn)行擴(kuò)增。pcr反應(yīng)體系如下：2×taqpcrsupermix(北京全式金生物技術(shù)有限公司)15μl，10μm上下游引物各1μl(上游引物使用熒光標(biāo)記)，dna模板1μl，用超純水補(bǔ)齊至30μl。pcr反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性5min；95℃變性30sec，適宜退火溫度下退火30sec，72℃延伸30sec，反應(yīng)34個循環(huán)；72℃延伸10min。挑選在16個霸王個體中均擴(kuò)增得到單一目標(biāo)條帶的微衛(wèi)星pcr產(chǎn)物進(jìn)行基因分型分析。其中，對sxb-1位點(diǎn)使用16個霸王個體的pcr擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果見圖2。使用tamara350熒光分子量標(biāo)準(zhǔn)在abi377dna測序儀中使用聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行基因分型?；蚍中偷慕Y(jié)果使用genmarker軟件進(jìn)行讀取，并輸入excel文件；使用excelmircosatellitetoolkit程序統(tǒng)計(jì)各微衛(wèi)星位點(diǎn)的期望雜合度(expectedheterozygosity,he)、觀測雜合度(observedheterozygosity，ho)和多態(tài)性信息含量(polymorphicinformationcontent,pic)，以檢測所述微衛(wèi)星位點(diǎn)的多態(tài)性狀況，篩選出上述三個多態(tài)性數(shù)值均大于0.5的微衛(wèi)星特異引物。篩選得到9個霸王高多態(tài)性的微衛(wèi)星特異性引物對，見表1。表1霸王微衛(wèi)星特異性引物的遺傳多態(tài)性數(shù)據(jù)locushehopicsxb-10.69590.66670.6541sxb-20.78550.91670.7329sxb-70.70660.70830.6536sxb-100.62060.66670.531sxb-120.65960.66670.5975sxb-150.68260.91670.6109sxb-160.83160.750.7914sxb-180.62230.6250.5609sxb-200.83510.50.7933以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。sequencelisting<110>內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院<120>一種荒漠植物霸王的微衛(wèi)星分子標(biāo)記及其應(yīng)用<160>27<170>patentinversion3.5<210>1<211>499<212>dna<213>sarcozygiumxanthoxylonbunge<400>1ggccttttcggactttttatcggctaaccactcacagaaagcggcaaattgttgtttctt60gtttttgtcactaaagggtagttgtttttcttgttcttgtttggtatgagagttttggct120atgggagtgcaggagttgtttggcggagttgttgttgttaggatcagggaattgacgagg180gaacaaatatgttgttttgtgtggcatctttctttctttctttcttgattctaatcagac240acacaaacacggtcttgttctttcttttttgttttgttcgagctcgattagccgtcgtct300cttgtcttttgcatgtccatagccaagctcgatctctctctctctctctctctagtctag360tgtctataaaaccttgaatgaatgaatgaatgaacgaacagagagggttgtttattgatt420tgatcaaaccaacaaaagctaattacagtactagctacttctcttgcgatcaactttctt480tcacacaataacactttct499<210>2<211>449<212>dna<213>sarcozygiumxanthoxylonbunge<400>2tgtgcttactgtgcatcagttagcaaagttccttcgattggttcttcaaagccacgctcc60accagactccagagaccctttgccttcaagagattctccattatttcgctccagtgatca120tagtgaccatcaaaatgaggaattttggtaagtgttttatcctcactcattctctcggtt180ttgaattctcacaggctgctgcctctcactgactcccagtgttgattctctgataccaaa240tgtaagatataagagctttagatagagaaaacttgtttatttatttatttatttattcaa300tggaagactaggctcttatatagctaatagtctgttacacacgatcttatcagaaagtaa360aataagtctaagaaatagccactaccaacataaacaaaagacttaatcaaataggctaac420taacctactaattgggagcttattccaat449<210>3<211>399<212>dna<213>sarcozygiumxanthoxylonbunge<400>3tgaaaagatgcaataaaattgatatttatgggttatgtgaagaccagagaatacaaaagc60tctacacaagacctgggtttgtttatacttgtaaaaagttggaaatacttaacttctata120ctccagcttcaggaggagtgagtgagtgagtgagtgttacagaatgggaataaatgtata180taaggaataattaggagacaggatttattttactttccttaattagaggatttaacattg240tatatttttatgtgcgtgtgtagttttctctattcaatgaattaataacagtcttttctt300taatagaaagcagaaactatggtatcttcaaacttctgtactatctgtttgatacatttt360tccattactacagaggtaataagaggtctaacctgcatg399<210>4<211>480<212>dna<213>sarcozygiumxanthoxylonbunge<400>4gaacatgccttcccggtatcacagtactctattgtagtgatacaaatataagttacaaaa60tactaatatatgtgtataagctaaaatatcaaaaatcatatacatgtgtatgtctgtgcc120tgtacatatctcatggaataacacaaccaaccaaccaaccaacctgcttgctagctattg180ccccaatctgacttccccgaggacgactatggaagtatttttcagattcttcttcagaaa240ctttctgcacagatccttccactcttacctaatacacggtaactaatgtcagttttagtc300ctcctatagcttataaatactatatatgctgtctaatagaagaaagcagcctaacagaaa360gcagaccctttgcgcaaggtccaacaacttgctttatccacacaagattatgagccaatt420tggcttggcttattggcttatcagctggtcagaccagtttatcggcagtaagctgcttat480<210>5<211>411<212>dna<213>sarcozygiumxanthoxylonbunge<400>5cacattggatggtgtaactcccacactgcagcggcgaagattcgaacttgcactattgga60cacaatttactatccgttttaccgttaagctgcttctgcgagggaaaaaaatatgagtta120actcggaggtttggattagacagaataataggggggaaaaaaaataatatcataagttat180gatttatttatttatttattttgtggttatagaccatctgtttgagttcggatggagcca240ggtaagaaacatggggctaagtcttttacgataagtttttaccacatttacatttgcatg300cctaaagatttgaatttgagatccctaattaaattagaataatcgggtaccaacttattg360acagagaagcttggaaacaaatgtgcattgatgattgatataaatatgtgt411<210>6<211>399<212>dna<213>sarcozygiumxanthoxylonbunge<400>6aaatgcgtactttttatcagtttattcaaagaatgcccgcatcctgatgagaaacaaagg60ctggagctcagtagaagactcagcttagatgcaaggcaagtcaagttttggtttcaaaac120cgtaggacacaaatgaaggtaatacagtaaaccattgatatatgagtgttttttcttctt180cttttgttttattgtttgtgagaattttgtttgtttgtttgtttgtttgtgagacagact240caaatggaacgtcatgagaatacactgctaaggcatgaaaacgaaaagttaagggcagag300aacatgtctataagggatgcaatgaggaatccgatttgtagcaactgtggtggtccagct360gttataggggaaatctcttttgaagagcagcaacttagg399<210>7<211>413<212>dna<213>sarcozygiumxanthoxylonbunge<400>7ttgaagctgatttctcattaaaaaattaatgtatggaaagataaaaaaaaagaattaggt60gtgttaaacaggccaagccgcggcctgctagagctagcccgtttgacccgccaagtaaac120gggctaaaaaaatcaactcgatcccgcctaattggcgggtttccaacccgtttgacagct180ctagttttgaaattctattatagtgcaaagagtttttttttaaaattttatttatttatt240tatttaccatgagtgttcaagtgcttaggttgttggttagggaattcttgaatccactaa300agtctcaggtttcactccaccgtcagaggtggagctagaaaattggtgttacaggggtca360tatatggtctagcggccaagcctacacaatattaatgtagtttataaaattta413<210>8<211>450<212>dna<213>sarcozygiumxanthoxylonbunge<400>8aacgttattagaatccactatgaaattaatcattttaatattgaataatgaccaatactt60caagtttaatgtatgttacaaatcacgaagcccttgaacctaattatcaaattagtagca120aattggcatataaccgttgcacttaaaaatattatactttacccgatattaatgcaatca180agatagactcattatttatatattaatgtcaggtaatagatatatattgaaaaaatacgt240tatctattatgctatgcaataattcaattccaccatttcaataggtcactcatttaacct300agttgggctctcctcattctaacattttaaaacaaaacttaccaaaccatagcttcattt360atttatttatttatttatttttaatcttctaaaggaaaatctggtggtatagccaaacaa420cacccttcccccctgcatgaacgtcttttc450<210>9<211>399<212>dna<213>sarcozygiumxanthoxylonbunge4<400>9ggcgatatcctaccctacccatgtttacccggtgacccctatccgcttccaaatagatca60tttattttagtagaatagaacataggtatataagttttaagtaaataaaatataacatca120agcgagccaaagctaaaggacatgtacgcaattgactatattgacactgagctcagttgt180attaccatttttcttttatttatttatttatttattattatttttttttttgcgcaaagc240aaatttaccagacagtactttgagcaaccctagcaatgcgtatgacatgctttcttcata300aattgccaaaatattcctgttgttaactatgtggacaaaagtataatagccatgatggtt360ggccaacgtgacaatgcaaatattcaattccctattcct399<210>10<211>21<212>dna<213>人工序列<400>10gttgttgttgttaggatcagg21<210>11<211>21<212>dna<213>人工序列<400>11gacatgcaaaagacaagagac21<210>12<211>21<212>dna<21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