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一種中草藥的抗病毒功能的檢測方法與流程

文檔序號:11626198閱讀:376來源:國知局

本發(fā)明涉及的是抗病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域,具體的說是一種中草藥的抗病毒功能的檢測方法。



背景技術(shù):

隨著集約化、高密度養(yǎng)殖的迅速發(fā)展,養(yǎng)殖業(yè)頻繁爆發(fā)疾病,造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失,成為了目前影響海水養(yǎng)殖穩(wěn)定發(fā)展的關(guān)鍵問題。其中,病毒由于其傳播速度快,能夠在短時(shí)間內(nèi)造成養(yǎng)殖個(gè)體大量死亡,是目前養(yǎng)殖業(yè)中最為普遍、又危害極為嚴(yán)重的病害。并且其宿主范圍廣,從魚類、兩棲類、爬行類直到哺乳類都有病例報(bào)道,有些還是人畜共患病原。

本發(fā)明針對以上缺陷,提供了一種中草藥抗病毒功能的檢測方法,便于抗病毒。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足,提供了一種中草藥的抗病毒功能的檢測方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:

一種中草藥的抗病毒功能的檢測方法,步驟如下:

一、樣品處理

1、中草藥預(yù)處理:將選擇的中草藥產(chǎn)品,如果是固體或制劑,進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)熬煮成為液體湯藥;如果是液體產(chǎn)品,直接進(jìn)行1500rpm離心5min,去除沉淀;

2、用0.45μm濾器過濾上述過程得到的上清液為樣品,放-20℃冰箱中保存;

二、樣品最佳濃度的選擇

1、設(shè)置不同濃度梯度50%(即250ul完全培養(yǎng)基+250ul中草藥樣品)、10%、1%、0.1%,28℃孵育epc細(xì)胞24h;

2、觀察epc細(xì)胞的存活情況,選擇合適濃度;

三、抗病毒功能檢測

1、實(shí)驗(yàn)前先用選擇好的樣品濃度孵育epc細(xì)胞24h,并設(shè)立不加中草藥樣品和用epc中草藥樣品的對照組;

2、所有孔吸出原培養(yǎng)基用0.1moisvcv孵育細(xì)胞1h后,吸出培養(yǎng)基再用10%fbs+mem培養(yǎng)基孵育細(xì)胞,觀察24h時(shí)細(xì)胞的病變情況并收集樣品;

3、提取上述樣品rna,反轉(zhuǎn)錄為cdna,分別檢測與抗病毒反應(yīng)相關(guān)的mx1的轉(zhuǎn)錄水平以及svcv-g的復(fù)制水平。

本發(fā)明的有益效果為:中草藥具有明顯的抗病毒效果,不但能夠提高養(yǎng)殖生物的免疫力,提高對外界環(huán)境的抗逆性,還具有無毒、無藥物殘留、使用安全方便的優(yōu)點(diǎn),具有一定的適用性。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白,以下結(jié)合具體實(shí)施方式,對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解,此處所描述的具體實(shí)施方式僅用以解釋本發(fā)明,并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)施例:

一種中草藥的抗病毒功能的檢測方法,步驟如下:

一、樣品處理

1、中草藥預(yù)處理:將選擇的中草藥產(chǎn)品,如果是固體或制劑,進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)熬煮成為液體湯藥;如果是液體產(chǎn)品,直接進(jìn)行1500rpm離心5min,去除沉淀;

2、用0.45μm濾器過濾上述過程得到的上清液為樣品,放-20℃冰箱中保存;

二、樣品最佳濃度的選擇

1、設(shè)置不同濃度梯度50%(即250ul完全培養(yǎng)基+250ul中草藥樣品)、10%、1%、0.1%,28℃孵育epc細(xì)胞24h;

2、觀察epc細(xì)胞的存活情況,選擇合適濃度;

三、抗病毒功能檢測

1、實(shí)驗(yàn)前先用選擇好的樣品濃度孵育epc細(xì)胞24h,并設(shè)立不加中草藥樣品和用epc中草藥樣品的對照組;

2、所有孔吸出原培養(yǎng)基用0.1moisvcv孵育細(xì)胞1h后,吸出培養(yǎng)基再用10%fbs+mem培養(yǎng)基孵育細(xì)胞,觀察24h時(shí)細(xì)胞的病變情況并收集樣品;

3、提取上述樣品rna,反轉(zhuǎn)錄為cdna,分別檢測與抗病毒反應(yīng)相關(guān)的mx1的轉(zhuǎn)錄水平以及svcv-g的復(fù)制水平。

實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果

運(yùn)用50%濃度中草藥樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測,發(fā)現(xiàn)epc細(xì)胞6h內(nèi)死亡,死亡率高達(dá)90%;10%濃度中草藥樣品對epc細(xì)胞有較大毒性,死亡率40%;1%濃度中草藥樣品對細(xì)胞幾乎沒有損傷。

實(shí)驗(yàn)證明,所篩選的中草藥具有明顯的抗病毒效果。

對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言,顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié),而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下,能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此,無論從哪一點(diǎn)來看,均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定,因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。

此外,應(yīng)當(dāng)理解,雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述,但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案,說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見,本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個(gè)整體,各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合,形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。



技術(shù)特征:

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種中草藥的抗病毒功能的檢測方法,步驟是:一、樣品處理:(1)、中草藥預(yù)處理:將選擇的中草藥產(chǎn)品,如果是固體或制劑,進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)熬煮成為液體湯藥;如果是液體產(chǎn)品,直接進(jìn)行1500rpm離心5min,去除沉淀;(2)、用0.45μm濾器過濾上述過程得到的上清液為樣品,放?20℃冰箱中保存;二、樣品最佳濃度的選擇:(1)、設(shè)置不同濃度梯度50%(即250ul完全培養(yǎng)基+250ul中草藥樣品)、10%、1%、0.1%,28℃孵育EPC細(xì)胞24h;(2)、觀察EPC細(xì)胞的存活情況,選擇合適濃度;三、抗病毒功能檢測;本發(fā)明提供的中草藥具有明顯的抗病毒效果,不但能夠提高養(yǎng)殖生物的免疫力,提高對外界環(huán)境的抗逆性,還具有無毒、無藥物殘留、使用安全方便的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)研發(fā)人員:王文琪;徐申波;陳師勇;李建;王鑫
受保護(hù)的技術(shù)使用者:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:2017.04.12
技術(shù)公布日:2017.08.01
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