本申請(qǐng)是發(fā)明專利申請(qǐng)200880121225.5的分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)申請(qǐng)日為2008年12月17日，名稱為“間質(zhì)性膀胱炎的治療”。本發(fā)明涉及抗-ngf抗體在治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎(interstitialcystitis)和/或痛性膀胱綜合征(painfulbladdersyndrome)和/或膀胱疼痛綜合征(bladderpainsyndrome)相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)中的用途。
背景技術(shù)：
：間質(zhì)性膀胱炎(ic)是一種來源未知的慢性膀胱疾病，其特征是疼痛(例如骨盆疼痛)癥狀和下泌尿道癥狀(luts)，例如增加的尿頻/尿急。更近期以來，該術(shù)語已發(fā)展為包括伴隨ic的痛性膀胱綜合征(pbs)(macdiarmidsa等，revurol2007；9(1):9-16)或膀胱疼痛綜合征(bps)(vandermerve等，europeanurology53(2008)60-67)，即ic/pbs/bps，集合描述這種癥狀復(fù)合情況。ic/pbs/bps的患病率(prevalencerate)為每100,000個(gè)女性中有67至230個(gè)具有臨床確認(rèn)疾病從，盡管該數(shù)字很可能比這更高，這是由于不足診斷(under-diagnosis)或通常誤診(mis-diagnosis)為子宮內(nèi)膜異位癥、再發(fā)性尿道感染(recurrenturinarytractinfection)、膀胱過動(dòng)癥(overactivebladder)或外陰痛(vulvodynia)(forrestjb等，clinicalcourier2006；24(3):1-8)。ic對(duì)生活質(zhì)量具有顯著影響，影響旅行、家庭關(guān)系和就業(yè)(sladed等，urol1997；49(5asuppl):10-3)，并且伴隨著抑郁癥狀(rothrockne等，jurol2002；167:1763-1767)。針對(duì)ic，少有充分進(jìn)行的、有安慰劑對(duì)照的、隨機(jī)化的療法試驗(yàn)，并且治療通常由多式試錯(cuò)法(multimodaltrial-and-errorapproach)組成，如對(duì)interstitialcystitisdatabase研究中患者的一篇綜述所證明(rovnere等，jurol2000；56:940-5)，其中報(bào)道了183種不同類型的治療。沒有一種病因?qū)W已被鑒定，并且其最可能是一種具有若干泌尿科發(fā)作的多因子過程，所述泌尿科發(fā)作引起上皮細(xì)胞功能障礙的自身永存(self-perpetuating)過程、c-神經(jīng)纖維活化和肥大細(xì)胞的增殖，導(dǎo)致惡化的組織損傷、瘢痕形成和纖維化。炎癥對(duì)c纖維的反復(fù)刺激和膀胱中感覺神經(jīng)的上調(diào)最終導(dǎo)致永久性改變(中樞化)，引起痛覺過敏、慢性膀胱疼痛和排尿功能障礙(forrestjb等，clinicalcourier2006；24(3):1-8)。盡管對(duì)ic的基本原因沒有達(dá)成一致，但是已有的數(shù)據(jù)導(dǎo)向下述推測：可能涉及上皮功能障礙、肥大細(xì)胞活化和神經(jīng)原性炎癥三種病理生理機(jī)制(nazifo等，urol2007；69(suppl4a):24-33)。持續(xù)需要針對(duì)間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征的疼痛和/或下泌尿道癥狀而言提供新穎、有效的治療，但沒有不良影響或目前可獲得的療法的局限療效。已報(bào)道在患有間質(zhì)性膀胱炎的患者中測試了重組人抗-ngf(神經(jīng)生長因子)抗體(dimitrakov,等，j.urology.vol171(4),supplement,363(2004))。盡管該研究的目的是“在大量先前治療中失敗的、具有顯著神經(jīng)損傷和神經(jīng)性疼痛組件的一組ic患者中”評(píng)價(jià)效率和安全性，但是僅使用泌尿神經(jīng)損傷標(biāo)記物水平報(bào)道了對(duì)神經(jīng)損傷的影響。需要注意到，其未報(bào)道在治療病癥的疼痛和/或下泌尿道癥狀中的功效。之前有報(bào)道稱抗-ngf抗體e3在疼痛的治療中有用，所述疼痛包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疼痛、骨關(guān)節(jié)炎疼痛和手術(shù)后疼痛(見例如wo2004/058184)。然而，考慮到間質(zhì)性膀胱炎的病因?qū)W和對(duì)該病癥機(jī)制的了解不足，不能夠容易地預(yù)測到抗-ngf抗體(例如抗體e3)可以被用于治療與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：在本發(fā)明的一個(gè)方面中提供了用于治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)的方法，所述方法包括施用有效量的抗-ngf拮抗劑抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗體：(a)以小于約2nm的kd結(jié)合ngf；(b)以約100pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活，其中所述ic50在存在約15pm人ngf時(shí)測量；和/或(c)以約10pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活，其中所述ic50在存在約1.5pmngf時(shí)測量。與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛包括下腹部(骨盆)疼痛；膀胱疼痛；恥骨上疼痛；陰道疼痛；陰莖、睪丸、陰囊和會(huì)陰疼痛；尿道疼痛；性交障礙(dyspareneuria)；當(dāng)膀胱充滿時(shí)可能提高的疼痛、壓力或不適。下泌尿道癥狀包括三組泌尿癥狀，其可定義為儲(chǔ)尿(刺激性)癥狀、排尿(阻塞性)癥狀及排尿后癥狀。儲(chǔ)尿癥狀包括尿急、尿頻、夜尿、急迫性尿失禁及壓力性尿失禁，這些與膀胱過動(dòng)癥(oab)及良性前列腺增生(bph)相關(guān)。排尿癥狀包括尿無力(hesitancy)、排尿不順(poorflow)、排尿斷斷續(xù)續(xù)(intermittency)、用力排尿(straining)及排尿困難(dysuria)。排尿后癥狀包含尿末滴瀝(terminaldribbling)、排尿后滴尿(post-voiddribbling)及殘尿感(senseofincompleteemptying)。膀胱過動(dòng)癥(oab)定義為尿急(含或不含急迫性尿失禁)，通常會(huì)伴隨有尿頻和夜尿[abrams等.,neurourologyandurodynamics21:167-178(2002)]。oab在男性及女性中的流行程度相近，美國人口中有大約16％患有此癥狀[stewart等,prevalenceofoveractivebladderintheunitedstates:resultsfromthenobleprogram；abstractpresentedatthe2ndinternationalconsultationonincontinence,july2001,paris,france]。術(shù)語“潮濕oab(obdwet)”及“干燥oab(obddry)”分別描述患有或未患有尿失禁的oab患者。之前，oab的主要癥狀被認(rèn)為是尿失禁。然而，隨著新術(shù)語的出現(xiàn)，這對(duì)大量未失禁的患者(即干燥oab患者)明顯是無意義的。因此，來自liberman等[‘healthrelatedqualityoflifeamongadultswithsymptomsofoveractivebladder:resultsfromauscommunity-basedsurvey’；urology57(6),1044-1050,2001]的2001年的研究檢驗(yàn)了所有oab癥狀對(duì)以社區(qū)為基礎(chǔ)的美國人口樣本的生活品質(zhì)的影響。該研究闡明，與對(duì)照比較時(shí)，患有oab而沒有任何明顯漏尿的個(gè)體具有受損的生活品質(zhì)。bph是一種慢性進(jìn)行性疾病，其會(huì)導(dǎo)致例如急性尿滯留、再發(fā)性泌尿道感染、膀胱結(jié)石和腎臟機(jī)能障礙的并發(fā)癥。在男性中，與bph相關(guān)的luts的流行程度及平均嚴(yán)重性會(huì)隨著年齡增加而增加。bph導(dǎo)致前列腺體積增加、造成尿道及膀胱出口阻塞和膀胱功能的繼發(fā)性改變。該效應(yīng)可由儲(chǔ)尿(刺激性)及排尿(阻塞性)癥狀二者表現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明已經(jīng)顯示，抗-ngf拮抗劑抗體能夠抑制或阻斷與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)。在一些實(shí)施方式中，在施用抗-ngf拮抗劑抗體后約24小時(shí)內(nèi)，疼痛和/或下泌尿道綜合征得到緩解。在一些實(shí)施方式中，在施用抗-ngf拮抗劑抗體后約4天內(nèi)，疼痛和/或下泌尿道癥狀得到緩解。在一些實(shí)施方式中，在觀察到個(gè)體病癥改善的指征之前或無所述指征時(shí)，疼痛和/或下泌尿道癥狀得到緩解。在本發(fā)明的又一方面中，提供了用于治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)的方法，所述方法包括施用有效量的包含下述重鏈可變區(qū)的抗-ngf抗體，所述重鏈可變區(qū)包含：(a)seqidno:3中所示的cdr1區(qū)；(b)seqidno:4中所示的cdr2區(qū)；和(c)seqidno:5中所示的cdr3區(qū)。在本發(fā)明的另一方面中提供了用于治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)的方法，所述方法包括施用有效量的包含下述輕鏈可變區(qū)的抗-ngf抗體，所述輕鏈可變區(qū)包含：(a)seqidno:6中所示的cdr1區(qū)；(b)seqidno:7中所示的cdr2區(qū)；和(c)seqidno:8中所示的cdr3區(qū)?？?ngf拮抗劑抗體可還包含下述重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含：(a)seqidno:3中所示的cdr1區(qū)；(b)seqidno:4中所示的cdr2區(qū)；和(c)seqidno:5中所示的cdr3區(qū)。抗-ngf抗體可包含下述重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含與seqidno.1的氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，所述輕鏈可變區(qū)包含與seqidno.2的氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，其中所述抗體特異性結(jié)合ngf。抗-ngf抗體的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)可包含一個(gè)或多個(gè)各自的框架突變。在一個(gè)方面中，框架突變可以用互補(bǔ)的鼠框架殘基代替人框架殘基。突變可在重鏈可變區(qū)中包含v71k取代?？?ngf拮抗劑抗體可包含下述重鏈可變區(qū)和/或可包含下述輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含seqidno:1的氨基酸序列，所述輕鏈可變區(qū)包含seqidno:2的氨基酸序列?？?ngf拮抗劑抗體可以是包含seqidnos:1和2中所述氨基酸序列的抗體?？?ngf拮抗劑抗體可以是包含seqidnos:16和17中所示氨基酸序列的抗體?？?ngf拮抗劑抗體可包含下述重鏈和輕鏈，所述重鏈包含與seqidnos:16的氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，所述輕鏈包含與seqidnos:17的氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，其中所述抗體特異性結(jié)合ngf。抗-ngf拮抗劑抗體可與本文定義的抗-ngf拮抗劑抗體競爭ngf結(jié)合?？?ngf拮抗劑抗體可與包含下述重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的抗體競爭ngf結(jié)合，所述重鏈可變區(qū)包含seqidno:1的氨基酸序列，所述輕鏈可變區(qū)包含seqidno:2的氨基酸序列?？?ngf拮抗劑抗體可以是人源化的?？贵w可以是特異性結(jié)合人和嚙齒類ngf的抗體e3?？贵we3描述于wo2004/058184中，其內(nèi)容通過引用整體并入本文。e3的重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別展示于seqidno.1和2(wo2004/058184的圖1a和1b)中。抗體e3的cdr部分(包括chothia和kabatcdr)圖示于wo2004/058184的圖1a和1b中。下文還展示了e3重鏈和輕鏈和各個(gè)擴(kuò)大的cdr的氨基酸序列(見下文“抗體序列”)。抗體e3高度有效地隔離ngf并防止其與其受體相互作用。e3及其鼠前體抗體911已顯示在病理學(xué)疼痛(包括關(guān)節(jié)炎、癌癥疼痛和手術(shù)后疼痛)的非臨床動(dòng)物模型中是有效的鎮(zhèn)痛藥。在另一方面中，抗體包含抗體e3的片段或區(qū)域(在本文中可互換地稱作“e3”)。在一個(gè)實(shí)施方式中，片段是wo2004/058184的圖1b和本文seqidno.17中所示的抗體e3的輕鏈。在另一個(gè)實(shí)施方式中，片段是wo2004/058184的圖1a和本文seqidno.16中所示的抗體e3的重鏈。在另一實(shí)施方式中，片段含有來自抗體e3輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)。還在另一實(shí)施方式中，片段含有來自分別展示于wo2004/058184的圖1a和1b和本文seqidnos.17和16中的抗體e3輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)cdr。在另一方面中，抗體包含由保藏號(hào)為atccno.pta-4893或atccno.pta-4894的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼的輕鏈。在另一方面中，抗體包含由保藏號(hào)為atccno.pta-4895的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼的重鏈。在另一方面中，抗體包含(a)由保藏號(hào)為atccno.pta-4894或atccno.pta-4893的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼的輕鏈；和(b)由保藏號(hào)為atccno.pta-4895的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼的重鏈(本文中為了便利，將保藏的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸稱作具有atccnospta-4894、pta-4893和pta-4895的保藏號(hào))。在另一方面中，抗體包含由保藏號(hào)為atccno.pta-4894或atccno.pta-4893的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼的輕鏈的輕鏈可變區(qū)。在另一方面中，抗體包含由保藏號(hào)為atccno.pta-4895的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼的重鏈的重鏈可變區(qū)。在另一方面中，抗體包含(a)由保藏號(hào)為atccno.pta-4894或atccno.pta-4893的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼的輕鏈的輕鏈可變區(qū)，和(b)由保藏號(hào)為atccno.pta-4895的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼的重鏈的重鏈可變區(qū)。還在另一方面中，抗體包含(a)由保藏號(hào)為atccno.pta-4894的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼的一個(gè)或多個(gè)cdr；和/或(b)由保藏號(hào)為atccno.pta-4895的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼的重鏈。在一些實(shí)施方式中，抗體可以是全長抗體，其可以是igg2亞類的?？贵w可包含人重鏈igg2a恒定區(qū)。在一些實(shí)施方式中，抗體包含人輕鏈κ恒定區(qū)。在一些實(shí)施方式中，抗體包含經(jīng)修飾的恒定區(qū)，例如免疫惰性的恒定區(qū)，例如其不引發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的裂解，或者不刺激抗體-依賴型細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc)。在其它一些實(shí)施方式中，恒定區(qū)如eur.j.immunol.(1999)29:2613-2624；pctwo9958572中所述被修飾?？贵w可包含含有a330p331到s330s331的突變的人重鏈igg2a恒定區(qū)(氨基酸編號(hào)參照野生型igg2a序列)。在一些實(shí)施方式中，抗體可以是抗體片段，例如fab或fab’2片段，或是單鏈抗體。在另一方面中，抗體包含任何以下內(nèi)容中的一個(gè)或多個(gè)：a)seqidnos.1-8中所示的e3抗體的一個(gè)或多個(gè)cdr(wo2004/058184的圖1a和1b)；b)來自seqidno.1和5中所示的抗體e3的重鏈的cdrh3(wo2004/058184的圖1a)；c)來自seqidno.2和8中所示的抗體e3的輕鏈的cdrl3(wo2004/058184的圖1b)；d)來自seqidno.2、6-8中所示的抗體e3的輕鏈的三個(gè)cdr(wo2004/058184的圖1b)；e)來自seqidnos.1、3-5中所示的抗體e3的重鏈的三個(gè)cdr(wo2004/058184的圖1a)；和f)來自seqidnos.1-8中所示的抗體e3的輕鏈的三個(gè)cdr和重鏈的三個(gè)cdr(wo2004/058184的圖1a和1b)。在另一方面中，抗體可包含以下內(nèi)容中的一個(gè)或多個(gè)：a)來自seqidnos.1-8中所示的抗體e3的一個(gè)或多個(gè)(一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè))cdr(wo2004/058184的圖1a和1b)；b)來自seqidnos.1和5中所示抗體e3的重鏈的cdrh3的cdr(wo2004/058184的圖1a)；和/或c)來自seqidnos.2和8中所示的抗體e3的輕鏈的cdrl3的cdr(wo2004/058184的圖1b)。在一些實(shí)施方式中，cdr可以是kabatcdr、chothiacdr或kabat與chothiacdr的組合(在本文中稱作“擴(kuò)大”或“合并”的cdr)。在一些實(shí)施方式中，多肽包含本文所述任何cdr構(gòu)型(包括組合、變異等)。在一個(gè)方面中，抗體包含含有seqidno:9的重鏈可變區(qū)，其中i34為s、l、v、a或i；并且n35被n、t或s取代。在本文中為了便利，本文上下文或涉及氨基酸時(shí)“被取代”或“是”是指給定位置上的氨基酸的選擇。顯然，取代或選擇可以是本文seqid中所示的氨基酸。在另一方面中，抗體包含含有seqidno:10的重鏈可變區(qū)，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；且l63是l或v。在另一方面中，抗體包含含有seqidno:11的重鏈可變區(qū)，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；并且其中y110是y、k、s、r或t。在另一方面中，抗體包含含有seqidno:11的重鏈可變區(qū)，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在另一方面中，抗體包含含有seqidno:11的重鏈可變區(qū)，其中g(shù)98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g(shù)99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在另一方面中，抗體包含含有seqidno:12的輕鏈可變區(qū)，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q。在另一方面中，抗體包含含有seqidno:13的輕鏈可變區(qū)，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t。在另一方面中，抗體包含含有seqidno:14的輕鏈可變區(qū)，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在另一方面中，抗體包含含有seqidno:14的輕鏈可變區(qū)，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在一個(gè)方面中，抗體包含seqidno:9中所示氨基酸序列，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35是n、t或s。在另一方面中，抗體包含seqidno:10中所示氨基酸序列，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v。在另一方面中，抗體包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；并且其中y110是y、k、s、r或t。在另一方面中，抗體包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在另一方面中，抗體包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中g(shù)98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g(shù)99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在另一方面中，抗體包含seqidno:12中所示氨基酸序列，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q。在另一方面中，抗體包含seqidno:13中所示氨基酸序列，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t。在另一方面中，抗體包含seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在另一方面中，抗體包含seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在另一方面中，抗體包含含有以下的重鏈可變區(qū)：seqidno:9的cdr1區(qū)，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35是n、t或s；seqidno:10的cdr2區(qū)，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和seqidno:11的cdr3區(qū)，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；其中y110是y、k、s、r或t。在一些實(shí)施方式中，重鏈可變區(qū)包含seqidno:11的cdr3區(qū)，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；其中y110是任何氨基酸。在其它一些實(shí)施方式中，重鏈可變區(qū)包含seqidno:11的cdr3區(qū)，其中g(shù)98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g(shù)99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在一些實(shí)施方式中，抗體還包含抗體輕鏈可變區(qū)。在另一方面中，抗體包含含有以下的輕鏈可變區(qū)：seqidno:12的cdr1區(qū)，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；seqidno:13的cdr2區(qū)，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和seqidno:14的cdr3區(qū)，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在一些實(shí)施方式中，輕鏈可變區(qū)包含seqidno:14的cdr3區(qū)，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在一些實(shí)施方式中，抗體還包含抗體重鏈。在另一方面中，抗體包含(a)包含以下的重鏈可變區(qū)：seqidno:9的cdr1區(qū)，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35是n、t或s；seqidno:10的cdr2區(qū)，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和seqidno:11的cdr3區(qū)，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；其中y110是y、k、s、r或t；和(b)包含以下的輕鏈可變區(qū)：seqidno:12的cdr1區(qū)，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；seqidno:13的cdr2區(qū)，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和seqidno:14的cdr3區(qū)，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在一些實(shí)施方式中，輕鏈可變區(qū)包含seqidno:14的cdr3區(qū)，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在一些實(shí)施方式中，重鏈可變區(qū)包含seqidno:11的cdr3，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；其中y110是任何氨基酸。在其它一些實(shí)施方式中，重鏈可變區(qū)包含seqidno:11的cdr3區(qū)，其中g(shù)98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g(shù)99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在一些實(shí)施方式中，抗體還包含抗體輕鏈。在另一方面中，抗體包含：seqidno:9中所示氨基酸序列，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35是n、t或s；seqidno:10中所示氨基酸序列，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；其中y110是y、k、s、r或t。在一些實(shí)施方式中，抗體包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；并且其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在其它一些實(shí)施方式中，多肽包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中g(shù)98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g(shù)99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在一些實(shí)施方式中，抗體還包含抗體輕鏈可變區(qū)。在另一方面中，抗體包含：seqidno:12中所示氨基酸序列，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；seqidno:13中所示氨基酸序列，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在一些實(shí)施方式中，抗體包含seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在一些實(shí)施方式中，抗體還包含抗體重鏈可變區(qū)。在另一方面中，抗體包含(a)seqidno:9中所示氨基酸序列，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35是n、t或s；seqidno:10中所示氨基酸序列，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；并且其中y110是y、k、s、r或t；和(b)seqidno:12中所示氨基酸序列，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；seqidno:13中所示氨基酸序列，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在一些實(shí)施方式中，抗體包含seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在一些實(shí)施方式中，抗體包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；其中y110是任何氨基酸。在其它一些實(shí)施方式中，多肽包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中g(shù)98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g(shù)99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在一些實(shí)施方式中，抗體還包含抗體輕鏈可變區(qū)。在另一方面中，抗體包含含有以下的重鏈可變區(qū)：(a)seqidno:9的cdr1區(qū)，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35被n、t或s取代；(b)seqidno:10的cdr2區(qū)，其中m50是i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和(c)seqidno:11的cdr3區(qū)，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；并且其中y110是y、k、s、r或t；其中抗體結(jié)合ngf。在另一方面中，抗體包含含有以下的輕鏈可變區(qū)：(a)seqidno:12的cdr1區(qū)，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；(b)seqidno:13的cdr2區(qū)，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和(c)seqidno:14的cdr3區(qū)，其中k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r；其中抗體結(jié)合ngf。在另一方面中，抗體包含(a)含有以下的重鏈可變區(qū)：(i)seqidno:9的cdr1區(qū)，其中i34被s、l、v、a或i取代；并且n35被n、t或s取代；(ii)seqidno:10的cdr2區(qū)，其中m50是i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和(iii)seqidno:11的cdr3區(qū)，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g(shù)103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；其中y110是y、k、s、r或t；和(b)包含以下的輕鏈可變區(qū)：(i)seqidno:12的cdr1區(qū)，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；(ii)seqidno:13的cdr2區(qū)，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和(iii)seqidno:14的cdr3區(qū)，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r；其中抗體結(jié)合ngf。除非另有說明，一個(gè)位置中氨基酸的選擇(例如取代)與任何其它位置中氨基酸的選擇無關(guān)地進(jìn)行選擇。在一些實(shí)施方式中，抗體包含本文所述任何cdr構(gòu)型(包括組合、變異等)。從本文的描述中可以看出，本文使用的可變區(qū)編號(hào)是順序編號(hào)。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解，存在大量抗體編號(hào)系統(tǒng)(例如kabat編號(hào)和chothia編號(hào))，以及如何將順序編號(hào)轉(zhuǎn)化為另一編號(hào)系統(tǒng)，例如kabat編號(hào)或chothia編號(hào)。在另一方面中，抗體包含選自seqidno:46或50的氨基酸序列(例如cdr3序列)。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體還包含一個(gè)或多個(gè)seqidnos:3、4、5、6、7和8中所示氨基酸序列。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體還包含seqidnos:9、10、11、12、13、14和15中所示氨基酸序列中的一條或多條。在另一方面中，抗體包含選自以下的氨基酸序列(例如cdr區(qū)，例如cdrh1和/或cdrh2區(qū))：(a)seqidnos:28和/或29；(b)seqidnos:30和/或31；(c)seqidnos:32和/或33；(d)seqidnos:34和/或35；(e)seqidnos:36和/或37；(f)seqidnos:38和/或39；和(g)seqidnos:40和41。在一些實(shí)施方式中，抗體包含選自seqidnos:28、30、32、34、36、38和40的氨基酸序列(例如cdrh1區(qū))。在一些實(shí)施方式中，抗體包含選自seqidnos:29、31、33、35、37、39和41的氨基酸序列(例如cdrh2區(qū))。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體還包含seqidnos:3、4、5、6、7和8中所示氨基酸序列中的一條或多條。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體還包含seqidnos:9、10、11、12、13、14和15中所示氨基酸序列中的一條或多條。在另一方面中，抗體包含選自以下的氨基酸序列(例如cdr區(qū)，例如cdrl1和/或cdrl2區(qū))：(a)seqidnos:18和/或19；(b)seqidnos:20和/或21；和(c)seqidnos:22和/或23。在一些實(shí)施方式中，多肽包含選自seqidnos:18、20和22的氨基酸序列(例如cdrl1區(qū))。在一些實(shí)施方式中，抗體包含選自seqidnos:19、21和23的氨基酸序列(例如cdrl2區(qū))。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體還包含seqidnos:3、4、5、6、7、8中所示氨基酸序列中的一條或多條。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體還包含seqidnos:9、10、11、12、13、14和15中所示氨基酸序列中的一條或多條。在另一方面中，抗體包含選自以下的氨基酸序列(例如cdr區(qū)，如cdrl3和/或cdrh3區(qū))：(a)seqidnos:51和/或52；(b)seqidnos:55和/或56；(c)seqidnos:57和/或58；(c)seqidnos:59和/或60；(d)seqidnos:61和/或62；(e)seqidnos:63和/或64。在一些實(shí)施方式中，抗體包含選自seqidnos:51、55、57、59、61和63的氨基酸序列(例如cdrl3區(qū))。在一些實(shí)施方式中，抗體包含選自seqidnos:52、56、58、60、62和64的氨基酸序列(例如cdrh3區(qū))。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體還包含seqidnos:18、19、30和31中所示氨基酸序列中的一條或多條。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體還包含seqidnos:3、4、5、6、7和8中所示氨基酸序列中的一條或多條。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體還包含seqidnos:9、10、11、12、13、14和15中所示氨基酸序列中的一條或多條。在另一方面中，抗體可包含：(a)含有以下的重鏈可變區(qū)：(i)seqidno:30的cdr1區(qū)；(ii)包含seqidno:31序列的cdr2區(qū)；(iii)選自由seqidno:11、56、58、60、62和64組成的組的cdr3區(qū)；和(b)含有以下的輕鏈可變區(qū)：(i)seqidno:18的cdr1區(qū)；(ii)seqidno:19的cdr2區(qū)；(iii)選自由seqidno:14、55、57、59、61和63組成的組的cdr3區(qū)。在另一方面中，抗體包含seqidnos:61、63、18、19、30和31中所示氨基酸序列中的一條或多條(例如cdr區(qū))。在另一方面中，抗體可選自本領(lǐng)域已知的抗-ngf抗體，例如wo2005019266(包括抗體4d4、14d10、6g9、7h2、14f11和4g6)或wo2006131951(包括抗體hu-αd11)中所述抗體?？贵w可與ngf(尤其是人ngf)上相同的表位結(jié)合，作為本領(lǐng)域已知的抗-ngf抗體，例如wo2005019266(包括抗體4d4、14d10、6g9、7h2、14f11和4g6)或wo2006131951(包括抗體hu-αd11)中所述的抗體或本文定義的抗體，和/或可與這類抗體競爭結(jié)合ngf。在一些實(shí)施方式中，切割本文所述任何抗-ngf抗體重鏈的c-端賴氨酸。在多種情況下，抗-ngf抗體的重鏈和輕鏈可任選地包含信號(hào)序列。在一個(gè)方面中，抗體是以高親和性結(jié)合ngf(例如人ngf)的抗-ngf拮抗劑抗體。在一些實(shí)施方式中，高親和性是(a)以小于約2nm(例如約1nm、800pm、600pm、400pm、200pm、100pm、90pm、80pm、70pm、60pm、50pm、40pm、30pm、20pm、10pm、5pm中任一或更小)的kd和/或比約6x10-5s-1更慢的koff結(jié)合ngf；和/或(b)(在存在約15pmngf時(shí))以約200pm、150pm、100pm、80pm、60pm、40pm、20pm、10pm中任一或更小的ic50抑制(降低和/或阻斷)小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活；和/或(c)(在存在約1.5pmngf時(shí))以約50pm、40pm、30pm、10pm、20pm、10pm、5pm、2pm、1pm中任一或更小的ic50抑制(減少和/或阻斷)小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活；和/或(d)(在存在約15pmngf時(shí))以約150pm、125pm、100pm、80pm、60pm、40pm、30pm、20pm、10pm、5pm中任一或更小的ic50抑制(減少和/或阻斷)小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的大鼠ngf-依賴型存活；和/或(e)(在存在約1.5pmngf時(shí))以約30pm、25pm、20pm、15pm、10pm、5pm、4pm、3pm、2pm、1pm中任一或更小的ic50抑制(減少和/或阻斷)小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的大鼠ngf-依賴型存活；和/或(f)和/或以比trka受體更高的親和性結(jié)合ngf。在另一方面中，抗體(a)以小于約2nm(例如約1nm、800pm、600pm、400pm、200pm、100pm、90pm、80pm、70pm、60pm、50pm、40pm、30pm、20pm、10pm、5pm中任一或更小)的kd和/或比約6x10-5s-1更慢的koff結(jié)合ngf(例如人ngf)；和/或(b)(在存在約15pmngf時(shí))以約200pm、150pm、100pm、80pm、60pm、40pm、20pm、10pm中任一或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活；和/或(c)(在存在約1.5pmngf時(shí))以約50pm、40pm、30pm、10pm、20pm、10pm、5pm、2pm、1pm任一或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活；和/或以高于trka受體的親和性結(jié)合ngf。在一些實(shí)施方式中，抗體(a)以小于約2nm的kd結(jié)合ngf；和/或(b)以約100pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活，其中在存在約15pmngf時(shí)測量所述ic50；和/或(c)以約10pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活，其中在存在約1.5pmngf時(shí)測量所述ic50，其中在存在約15pmngf時(shí)測量所述ic50。在一些實(shí)施方式中，抗體(a)以小于約100pm的kd結(jié)合ngf；和/或(b)以約20pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活，其中在存在約15pmngf時(shí)測量所述ic50；和/或(c)以約2pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活，其中在存在約1.5pmngf時(shí)測量所述ic50。在一些實(shí)施方式中，上述抗體是經(jīng)分離的。在一些實(shí)施方式中，所述抗體是基本經(jīng)純化的。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體是經(jīng)親和性成熟的。在一些實(shí)施方式中，抗體包含人框架序列。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體包含一個(gè)或多個(gè)非人框架殘基。在一些實(shí)施方式中，抗體以2nm或更小的kd結(jié)合ngf(例如人ngf)。在一些實(shí)施方式中，抗體相對(duì)于非人氨基酸序列(例如可變區(qū)序列，例如cdr序列，例如框架序列)而言包含一個(gè)或多個(gè)(例如2、3、4、5、6、7、8或更多)人氨基酸取代。在一些實(shí)施方式中，抗體相對(duì)于親本多肽氨基酸序列(例如抗體911的氨基酸序列，例如seqidnos9-14中任一或更多)包含至少1個(gè)、至少2個(gè)或更多，例如至少3、4、5、6或更多個(gè)氨基酸取代。在一些實(shí)施方式中，相對(duì)于親本抗體(例如mab911)的親和性而言，抗體的結(jié)合親和性被改變(在一些實(shí)施方式中被提高)。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體的結(jié)合親和性比ngf(例如人ngf)的trka受體的親合力更低。在一些實(shí)施方式中，抗體是人抗體。在其它一些實(shí)施方式中，抗體是人源化抗體。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體是單克隆抗體。在一些實(shí)施方式中，抗體是經(jīng)親和性成熟的抗體。本發(fā)明利用包含下述多核苷酸的多核苷酸(包括經(jīng)分離的多核苷酸)，所述多核苷酸編碼上文實(shí)施方式中任何抗體。在另一方面中，本發(fā)明提供了包含下述多核苷酸的經(jīng)分離的多核苷酸，所述多核苷酸編碼抗體e3(在本文中可互換地稱作“e3”)的片段或區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方式中，片段是wo2004/058184的圖1b中所示抗體e3的輕鏈。在另一實(shí)施方式中，片段是wo2004/058184的圖1a中所示抗體e3的重鏈。還在另一實(shí)施方式中，片段含有來自抗體e3輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)。還在另一實(shí)施方式中，片段含有來自wo2004/058184的圖1a和1b中所示抗體e3的輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)(cdr)。在另一方面中，本發(fā)明是包含編碼抗體e3的多核苷酸的經(jīng)分離的多核苷酸。在一些實(shí)施方式中，多核苷酸包含wo2004/058184的圖2和3中所示任一多核苷酸或二者。在另一方面中，本發(fā)明利用下述經(jīng)分離的多核苷酸，所述多核苷酸編碼具有保藏號(hào)atccno.pta-4893或atccno.pta-4894的e3輕鏈。在另一方面中，本發(fā)明是經(jīng)分離的多核苷酸，其編碼具有保藏號(hào)atccno.pta-4895的e3重鏈。還在另一方面中，經(jīng)分離的多核苷酸包含(a)具有保藏號(hào)atccno.pta-4893或pta-4894的多核苷酸編碼的可變區(qū)，和(b)具有保藏號(hào)atccno.pta-4895的多核苷酸編碼的可變區(qū)。在另一方面中，經(jīng)分離的多核苷酸包含(a)具有保藏號(hào)atccno.pta-4893或pta-4894的多核苷酸編碼的一個(gè)或多個(gè)cdr；和/或(b)具有保藏號(hào)atccno.pta-4895的多核苷酸編碼的一個(gè)或多個(gè)cdr。在另一方面中，本發(fā)明利用編碼本文所述任何抗體(包括抗體片段)或多肽的多核苷酸。在另一方面中，本發(fā)明利用包含本文公開的任何多核苷酸的載體(包括表達(dá)載體和克隆載體)和宿主細(xì)胞。在另一方面中，本發(fā)明利用下述宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含編碼e3輕鏈的多核苷酸和編碼e3重鏈的多核苷酸，其中編碼e3輕鏈的多核苷酸具有保藏號(hào)atccno.pta-4893和/或atccno.pta-4894，編碼e3重鏈的多核苷酸具有保藏號(hào)atccno.pta-4895。在一些實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞包含下述多核苷酸，所述多核苷酸含有：(a)具有保藏號(hào)atccno.pta-4893或pta-4894的多核苷酸編碼的可變區(qū)，和/或(b)具有保藏號(hào)atccno.pta-4895的多核苷酸編碼的可變區(qū)。在一些實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞包含編碼以下的多核苷酸：(a)具有保藏號(hào)atccno.pta-4893或pta-4894的多核苷酸編碼的一個(gè)或多個(gè)cdr；和/或(b)具有保藏號(hào)atccno.pta-4895的多核苷酸編碼的一個(gè)或多個(gè)cdr。在一些實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。在另一方面中，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)的抗-ngf拮抗劑抗體。抗-ngf拮抗劑抗體可如本文所述。本發(fā)明的另一方面提供了抗-ngf拮抗劑抗體在制造下述藥物中的用途，所述藥物用于治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)?？?ngf拮抗劑抗體可如本文所述。在另一方面中，本發(fā)明是用于治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)的藥物組合物，其包含本文所述的任何多肽(包括抗體，例如抗體e3)、多核苷酸或載體，例如包含抗體e3或抗體e3片段和可藥用賦形劑的藥物組合物。在另一方面中，本發(fā)明提供了包含本文所述任一種或多種組合物的試劑盒和組合物。這些試劑盒可用于本文所述的任何方法，所述試劑盒通常在合適的包裝中并與適當(dāng)?shù)恼f明書一起提供。本發(fā)明還提供了描述用于本文所述任何用途的任何組合物和試劑盒，無論在上下文中是作為藥物的用途和/或用于制造藥物的用途。本發(fā)明的每個(gè)方面優(yōu)選的特征如經(jīng)適當(dāng)變動(dòng)(mutatismutandis)，則等同地適用于每個(gè)其它方面。發(fā)明詳述本文公開的本發(fā)明提供了通過施用治療有效量的抗-ngf拮抗劑抗體，在個(gè)體中治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)的方法。本文公開的本發(fā)明還提供了用于治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)的抗-ngf拮抗劑抗體。還提供了抗-ngf拮抗劑抗體用于制造藥物的用途，所述藥物用于治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)。本文公開的本發(fā)明提供了以高親和性結(jié)合ngf(例如人ngf)的抗-ngf拮抗劑抗體的用途。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明利用結(jié)合ngf的人源化抗體e3。本發(fā)明還利用結(jié)合ngf的e3多肽(包括抗體)，和編碼e3抗體和/或多肽的多核苷酸。本發(fā)明還提供了結(jié)合ngf的、來自于e3的抗體和多肽的用途。一般技術(shù)除非另有說明，本發(fā)明的實(shí)施會(huì)施用分子生物學(xué)(包括重組技術(shù))、微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，其屬于本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)。這類技術(shù)在文獻(xiàn)中詳盡解釋，例如molecularcloning:alaboratorymanual,secondedition(sambrook等，1989)coldspringharborpress；oligonucleotidesynthesis(m.j.gait編,1984)；methodsinmolecularbiology,humanapress；cellbiology:alaboratorynotebook(j.e.cellis編,1998)academicpress；animalcellculture(r.i.freshney編,1987)；introductiontocellandtissueculture(j.p.matherandp.e.roberts,1998)plenumpress；cellandtissueculture:laboratoryprocedures(a.doyle,j.b.griffiths,andd.g.newell編,1993-1998)j.wileyandsons；methodsinenzymology(academicpress,inc.)；handbookofexperimentalimmunology(d.m.weirandc.c.blackwell編)；genetransfervectorsformammaliancells(j.m.millerandm.p.calos編,1987)；currentprotocolsinmolecularbiology(f.m.ausubel等，eds.,1987)；pcr:thepolymerasechainreaction,(mullis等，eds.,1994)；currentprotocolsinimmunology(j.e.coligan等，eds.,1991)；shortprotocolsinmolecularbiology(wileyandsons,1999)；immunobiology(c.a.janewayandp.travers,1997)；antibodies(p.finch,1997)；antibodies:apracticalapproach(d.catty.編,irlpress,1988-1989)；monoclonalantibodies:apracticalapproach(p.shepherdandc.dean編,oxforduniversitypress,2000)；usingantibodies:alaboratorymanual(e.harlowandd.lane(coldspringharborlaboratorypress,1999)；theantibodies(m.zanettiandj.d.capra編,harwoodacademicpublishers,1995)；和cancer:principlesandpracticeofoncology(v.t.devita等編,j.b.lippincottcompany,1993)。定義“抗體”是能夠通過位于免疫球蛋白分子可變區(qū)中的至少一個(gè)抗原識(shí)別位點(diǎn)與靶標(biāo)(例如碳水化合物、多核苷酸、脂質(zhì)、多肽等)特異性結(jié)合的免疫球蛋白分子。在本文中使用時(shí)，該術(shù)語不僅包括完整的多克隆或單克隆抗體，而且也包括其片段(例如fab、fab’、f(ab’)2、fv、dab)、單鏈抗體(scfv)、其突變體、嵌合抗體、雙抗體、包含抗體部分的融合蛋白，和包含抗原識(shí)別位點(diǎn)的免疫球蛋白分子的任何其它經(jīng)修飾的表型?？贵w包括任何種類的抗體，例如igg、iga或igm(或其亞類)，并且抗體不必須是任何具體的種類。根據(jù)其重鏈恒定結(jié)構(gòu)域的抗體氨基酸序列，可以將免疫球蛋白指定為不同的種類。存在五種主要的免疫球蛋白類別：iga、igd、ige、igg和igm，其中若干種可以被進(jìn)一步分成亞類(同種型)，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2。對(duì)應(yīng)于不同種類免疫球蛋白的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別被稱作α、δ、ε、γ和μ。不同種類免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)象是公知的?？贵w的“可變區(qū)”是指單獨(dú)或組合的抗體輕鏈可變區(qū)或抗體重鏈可變區(qū)。重鏈和輕鏈可變區(qū)各自由通過三個(gè)互補(bǔ)性決定區(qū)(cdr，也稱作高變區(qū))連接的四個(gè)框架區(qū)(fr)組成。每條鏈中的cdr通過fr與來自其它鏈的cdr近距離結(jié)合在一起，有助于形成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。存在至少兩種確定cdr的技術(shù)：(1)基于跨物種序列變異性的途徑(即kabat等，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,(第5版，1991,nationalinstitutesofhealth,bethesdamd))；和(2)基于抗原-抗體復(fù)合物的晶體學(xué)研究的途徑(chothia等，(1989)nature342:877；al-lazikani等(1997)j.molec.biol.273:927-948))。在本文中使用時(shí)，cdr可表示通過任一途徑或通過兩種途徑的組合定義的cdr?？贵w的“恒定區(qū)”是指單獨(dú)或組合的抗體輕鏈的恒定區(qū)或抗體重鏈的恒定區(qū)?！癴v”是含有完整的抗原識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段。在雙-鏈fv物類中，該區(qū)域由緊密、非共價(jià)結(jié)合的一條重鏈可變結(jié)構(gòu)域和一條輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的二聚體組成。在單鏈fv物類中，一條重鏈可變結(jié)構(gòu)域和一條輕鏈可變結(jié)構(gòu)域可以通過柔性(flexible)的肽連接子共價(jià)連接，使得輕鏈和重鏈可以結(jié)合成與雙鏈fv物類中類似的二聚體結(jié)構(gòu)。每個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的三個(gè)cdr在該構(gòu)型中相互作用，在vh-vl二聚體的表面上定義了抗原結(jié)合特異性。然而，即便單個(gè)可變的結(jié)構(gòu)域(或者僅包含抗原特異性的3個(gè)cdr的一半fv)也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力，盡管通常比整個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的親和性更低。fab片段還含有輕鏈的恒定結(jié)構(gòu)域和重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域(ch1)。fab'片段與fab片段的區(qū)別在于在重鏈ch1結(jié)構(gòu)域的羧基端添加了少量殘基，包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸。f(ab)2片段是包含通過鉸鏈區(qū)二硫鍵連接的兩個(gè)fab片段的二價(jià)片段。單鏈抗體(scfc)是其中vl和vh區(qū)通過合成的連接子配對(duì)形成單價(jià)分子的抗體，所述合成的連接子使得它們被制成單個(gè)蛋白質(zhì)鏈(bird等science,242:423-426(1988)和huston等，proc.natl.acad.sci.usa,85:5879-5883(1988))。雙抗體(diabodies)是二價(jià)的雙特異性抗體，其中vh和vl結(jié)構(gòu)域在單一的多肽鏈上表達(dá)，但是使用過短的連接子，使得相同鏈上兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間不能配對(duì)，從而強(qiáng)迫結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)，并產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)?？贵w可具有一個(gè)或多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。如果存在多于一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，則所述結(jié)合位點(diǎn)可以彼此相同或不同。例如，天然存在的免疫球蛋白具有兩個(gè)相同的結(jié)合位點(diǎn)，單鏈抗體或fab片段具有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，而“雙特異性”或“雙功能”抗體(雙抗體)具有兩個(gè)不同的結(jié)合位點(diǎn)?！敖?jīng)分離的抗體”是下述抗體，所述抗體(1)不與在天然狀態(tài)下伴隨它的天然結(jié)合的組分(包括其它天然結(jié)合的抗體)結(jié)合，(2)不含來自相同物種的其它蛋白質(zhì)，(3)由來自不同物種的細(xì)胞表達(dá)或(4)天然不存在?！皢慰寺】贵w”是指均勻的抗體群體，其中單克隆抗體由涉及抗原選擇性結(jié)合的氨基酸(天然存在或非天然存在)組成。單克隆抗體的群體是高度特異性的，指向單一的抗原位點(diǎn)。術(shù)語“單克隆抗體”不僅包括完整的單克隆抗體和全長單克隆抗體，而且包括其片段(例如fab、fab’、f(ab’)2、fv)、單鏈(scfv)、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白，和免疫球蛋白分子的任何其它經(jīng)修飾的構(gòu)型，所述構(gòu)型包含具有所需特異性和結(jié)合抗原能力的抗原識(shí)別位點(diǎn)。其不旨在限制抗體的來源或者制造抗體的方式(例如通過雜交瘤、噬菌體選擇、重組表達(dá)、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等)。在本文中使用時(shí)，“人抗體”表示下述抗體，所述抗體具有對(duì)應(yīng)于人生產(chǎn)的抗體的氨基酸序列，和/或使用本領(lǐng)域已知或本文公開的用于制造人抗體的任何技術(shù)制造。人抗體的這一定義包括包含至少一種人重鏈多肽或至少一種人輕鏈多肽的抗體。一個(gè)這樣的例子是包含鼠輕鏈和人重鏈多肽的抗體。人抗體可以使用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)生產(chǎn)。在一些實(shí)施方式中，人抗體選自噬菌體文庫，其中所述噬菌體文庫表達(dá)人抗體(vaughan等，1996,naturebiotechnology,14:309-314；sheets等，1998,pnas,(usa)95:6157-6162；hoogenboomandwinter,1991,j.mol.biol.,227:381；marks等，1991,j.mol.biol.,222:581)。人抗體也可以通過將人免疫球蛋白基因座引入轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如小鼠)中來制造，所述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中內(nèi)源免疫球蛋白基因被部分或完全滅活。該途徑描述于美國專利nos.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；和5,661,016中?；蛘?，可以通過使下述人b淋巴細(xì)胞不死化(immortalizing)來制備人抗體，所述人b淋巴細(xì)胞生產(chǎn)針對(duì)靶抗原的抗體，這類b淋巴細(xì)胞可從個(gè)體中回收或已被體外免疫。見例如cole等，monoclonalantibodiesandcancertherapy,alanr.liss,p.77(1985)；boerner等，1991,j.immunol.,147(1):86-95；和美國專利no.5,750,373?！扒逗峡贵w”是指下述抗體，其中重鏈和輕鏈氨基酸序列各自的一部分與來自具體物種或?qū)儆诰唧w種類的抗體中相應(yīng)的序列同源，而鏈的剩余區(qū)段與另一鏈中相應(yīng)的序列同源。典型地，在這些嵌合抗體中，輕鏈和重鏈的可變區(qū)均模擬來自于一種哺乳動(dòng)物物種的抗體的可變區(qū)，而恒定部分與來自于另一物種的抗體的序列同源。這種嵌合形式的一個(gè)明顯的優(yōu)點(diǎn)是，例如可變區(qū)可使用容易從非人宿主生物獲得的b細(xì)胞或雜交瘤，便利地源于目前已知的來源，與源于例如人細(xì)胞制備物的恒定區(qū)組合。雖然可變區(qū)具有易于制備的優(yōu)點(diǎn)并且特異性不受其來源影響，但是與來自非人來源的恒定區(qū)相比，抗體被注射時(shí)人的恒定區(qū)更不可能引發(fā)來自人受試者的免疫應(yīng)答。然而，該定義不限于這一具體例子?！肮δ躥c區(qū)”具有天然序列fc區(qū)的至少一種效應(yīng)物功能。示范性的“效應(yīng)物功能”包括c1q結(jié)合；補(bǔ)體依賴型細(xì)胞毒性(cdc)；fc受體結(jié)合；抗體依賴型細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc)；吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如b細(xì)胞受體；bcr)的下調(diào)等等。這類效應(yīng)物功能通常需要fc區(qū)與結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如抗體可變區(qū))結(jié)合，并可使用本領(lǐng)域已知用于評(píng)價(jià)這類抗體效應(yīng)物功能的多種實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)。“天然序列fc區(qū)”包含與自然中存在的fc區(qū)氨基酸序列相同的氨基酸序列?！白凅wfc區(qū)”包含下述氨基酸序列，所述氨基酸序列與天然序列fc區(qū)通過至少一個(gè)氨基酸修飾而不同，但是保留天然序列fc區(qū)的至少一種效應(yīng)物功能。優(yōu)選地，變體fc區(qū)與天然序列fc區(qū)相比或與親本多肽的fc區(qū)相比具有至少一個(gè)氨基酸取代，例如在天然序列fc區(qū)中或親本多肽的fc區(qū)中從約一個(gè)到約10個(gè)氨基酸取代，優(yōu)選地從約1個(gè)到約5個(gè)氨基酸取代。本文的變體fc區(qū)會(huì)優(yōu)選地與天然序列fc區(qū)和/或親本多他的fc區(qū)具有至少約80％的序列同一性，和最優(yōu)選地至少約90％的序列同一性，更優(yōu)選地至少約95％的序列同一性。在本文中使用時(shí)，“抗體依賴型細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性”和“adcc”是指細(xì)胞介導(dǎo)的下述反應(yīng)，其中表達(dá)fc受體(fcrs)的非特異性細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如天然殺傷(nk)細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)識(shí)別靶細(xì)胞上結(jié)合的抗體，隨后引起靶細(xì)胞的裂解?？梢允褂皿w外adcc實(shí)驗(yàn)，例如美國專利號(hào)5,500,362或5,821,337中所述實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)感興趣的分子的adcc活性。適用于這類實(shí)驗(yàn)的效應(yīng)物細(xì)胞包括外周血單核細(xì)胞(pbmc)和nk細(xì)胞?；蛘撸蛄硗?，可以體內(nèi)評(píng)價(jià)感興趣的分子的adcc活性，例如在動(dòng)物模型，如clynes等，1998,pnas(usa),95:652-656中公開的動(dòng)物模型中評(píng)價(jià)。在本文中使用時(shí)，“fc受體”和“fcr”描述結(jié)合抗體fc區(qū)的受體。優(yōu)選的fcr是天然序列人fcr。另外，優(yōu)選的fcr是結(jié)合igg抗體的fcr(γ受體)，并且包括fcγri、fcγrii和fcγriii亞類的受體，包括這些受體的等位基因變體和替代性剪切的形式。fcγrii受體包括fcγriia(“活化受體”)和fcγriib(“抑制受體”)，它們具有主要在其細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中有差異的相似氨基酸序列。fcr綜述于ravetchandkinet,1991,ann.rev.immunol.,9:457-92；capel等，1994,immunomethods,4:25-34；和dehaas等，1995,j.lab.clin.med.,126:330-41中?！癴cr”還包括新生兒受體fcrn，其負(fù)責(zé)將母體igg轉(zhuǎn)移至胎兒(guyer等，1976,j.immunol.,117:587；和kim等，1994,j.immunol.,24:249)。“補(bǔ)體依賴型細(xì)胞毒性”和“cdc”是指在存在補(bǔ)體時(shí)靶標(biāo)的裂解。通過補(bǔ)體系統(tǒng)第一組分(c1q)對(duì)與同種抗原絡(luò)合的分子(例如抗體)的結(jié)合，起始補(bǔ)體活化通路。為了評(píng)價(jià)補(bǔ)體活化，可進(jìn)行例如如gazzano-santoro等，j.immunol.methods,202:163(1996)中所述的cdc實(shí)驗(yàn)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“e3”、“3e”和“抗體e3”可互換地使用，其表示分別包含seqidno:1和seqidno:2(wo2004/058184的圖1a和1b)中所示重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列的抗體?？贵we3的cdr部分(包括chothia和kabatcdr)圖示于wo2004/058184的圖1a和1b中。wo2004/058184的圖2和圖3展示了分別編碼分別包含圖1a和1b中所示重鏈和輕鏈可變區(qū)的重鏈和輕鏈的多核苷酸。e3的產(chǎn)生和表征描述于wo2004/058184的實(shí)施例中，其整體內(nèi)容通過引用并入本文。e3伴隨著不同的生物功能，包括但不限于能夠結(jié)合ngf和抑制ngf生物活性和/或ngf信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)的下游通路；和能夠抑制小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的ngf-依賴型存活。如本文中所討論的，用于本發(fā)明的抗體可具有這些特征中的任一種或多種。在一些實(shí)施方式中，術(shù)語“e3”是指以下多核苷酸編碼的免疫球蛋白：(a)編碼e3輕鏈的保藏號(hào)為atccno.pta-4893或atccno.pta-4894的多核苷酸，和(b)編碼e3重鏈的保藏號(hào)為atccno.pta-4895的多核苷酸。在本文中使用時(shí)，抗體的“免疫特異性”結(jié)合是指發(fā)生在抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)與抗體所識(shí)別的特異性抗原之間的抗原特異性結(jié)合相互作用(即elisa或其它免疫測定中抗體與蛋白質(zhì)反應(yīng)，并且不與無關(guān)的蛋白質(zhì)可檢測地反應(yīng))。與抗體或多肽“特異性結(jié)合”或“優(yōu)先結(jié)合”(在本文中可互換使用)的表位是本領(lǐng)域公知的術(shù)語，測定這類特異性結(jié)合或優(yōu)先結(jié)合的方法也是本領(lǐng)域公知的。如果與替代性的細(xì)胞或物質(zhì)相比，分子與具體的細(xì)胞或物質(zhì)反應(yīng)或結(jié)合得更頻繁、更迅速、具有更大持續(xù)時(shí)間和/或具有更大親和性，則稱所述分子顯示“特異性結(jié)合”或“優(yōu)先結(jié)合”。如果與其它物質(zhì)的結(jié)合相比，抗體以更大的親和性、親合力、更容易和/或以更大的持續(xù)時(shí)間結(jié)合，則抗體“特異性結(jié)合”或“優(yōu)先結(jié)合”靶標(biāo)。例如，特異性或優(yōu)先結(jié)合ngf表位的抗體是下述抗體，與其它ngf表位或非ngf表位的結(jié)合相比，所述抗體以更大的親和性、親合力、更容易和/或以更大的持續(xù)時(shí)間結(jié)合所述表位。通過閱讀該定義還應(yīng)理解，例如特異性或優(yōu)先結(jié)合第一靶標(biāo)的抗體(或片段或表位)可與第二靶標(biāo)特異性或優(yōu)先結(jié)合，或者不與第二靶標(biāo)特異性或優(yōu)先結(jié)合。同樣，“特異性結(jié)合”或“優(yōu)先結(jié)合”不必須要求(盡管可包括)排他性結(jié)合。通常但非必須，提到結(jié)合表示優(yōu)先結(jié)合。術(shù)語“多肽”、“寡肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”在本文中可互換使用，它們表示任何長度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是線性或分支的，其可包含經(jīng)修飾的氨基酸，并且可以被非氨基酸中斷。所述術(shù)語還包括天然或通過干預(yù)被修飾的氨基酸聚合物；例如，二硫鍵形成、糖基化、脂質(zhì)化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修飾，例如與標(biāo)簽組分綴合。還包括在所述定義內(nèi)的是例如含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸類似物(包括例如非天然氨基酸等)以及本領(lǐng)域已知的其它修飾的多肽。應(yīng)當(dāng)理解，因?yàn)楸景l(fā)明的多肽以抗體為基礎(chǔ)，所以多肽可以作為單鏈或結(jié)合的鏈而存在。在本文中可互換使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何長度的核苷酸的聚合物，并且包括dna和rna。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經(jīng)修飾的核苷酸或堿基、和/或它們的類似物，或可以被dna或rna聚合酶摻入聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含經(jīng)修飾的核苷酸，例如甲基化的核苷酸及其類似物。存在對(duì)核苷酸結(jié)構(gòu)的修飾時(shí)，它們可以在聚合物裝配之前或之后賦予。核苷酸序列可以被非核苷酸組分中斷。多核苷酸可在聚合后被進(jìn)一步修飾，例如通過與標(biāo)簽組分綴合來修飾。其它類型的修飾包括例如“加帽(caps)”，用類似物取代一個(gè)或多個(gè)天然存在的核苷酸，核苷酸間修飾，例如具有不帶電鍵(例如磷酸甲酯、磷酸三酯、磷酸酰胺化物、氨基甲酸酯等等)和帶電鍵(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等等)的多核苷酸、含有懸突片段例如蛋白質(zhì)(例如核酸酶、毒素、抗體、信號(hào)肽、多聚-l-賴氨酸等等)的多核苷酸、帶有插入劑(吖啶、補(bǔ)骨脂素(psoralen))的多核苷酸、帶有螯合劑(例如金屬、放射性金屬、硼、氧化金屬等等)的多核苷酸、帶有烷基化劑的多核苷酸、帶有經(jīng)修飾的鍵的多核苷酸(例如α端基異構(gòu)核酸等等)，以及未經(jīng)修飾的多核苷酸形式。另外，通常存在于糖中的任何羥基可以例如被磷酸酯基、磷酸基替換，被標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基保護(hù)，或被活化來制備與其它核苷酸的其它鍵，或可以與固體支持物綴合?？梢詫?'和3'端oh磷酸化或用1到20個(gè)碳原子的胺或有機(jī)帽化(capping)基團(tuán)片段取代。其它羥基也可以被衍生為標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基。多核苷酸也可以含有本領(lǐng)域普遍已知的核糖或脫氧核糖的類似形式，包括例如2’--o-甲基-、2’-o-烯丙基、2’-氟-或2’-疊氮基-核糖、碳環(huán)糖類似物、α-端基異構(gòu)糖、差向異構(gòu)糖(epimericsugar)例如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、非環(huán)狀類似物和脫堿基核苷類似物例如甲基核糖核苷?？梢杂锰娲赃B接基團(tuán)代替一個(gè)或多個(gè)磷酸二酯鍵。這些替代性鏈接基團(tuán)包括但不限于下述實(shí)施方式，其中磷酸酯被p(o)s(“硫代酯(thioate)”)、p(s)s(“二硫代酯(dithioate)”)、“(o)nr2(“酰胺化物(amidate)”)、p(o)r、p(o)or’、co或ch2(“formacetal”)替換，其中每個(gè)r或r’獨(dú)立地為h或任選地含有醚(-o-)鍵、芳基、鏈烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或araldyl的取代或未經(jīng)取代的烷基(1-20c)。多核苷酸中所有鍵不必須相同。前文的描述適用于本文涉及的所有多核苷酸，包括rna和dna。術(shù)語“同一性”是指兩條氨基酸序列或兩條核酸序列之間的“同一性”百分比。通常通過針對(duì)最佳比對(duì)的目的(例如為了與第二序列最佳比對(duì)，可在第一序列中引入缺口)比對(duì)序列并比較相應(yīng)位置上的氨基酸殘基或核苷酸，來測定同一性百分比?！白罴驯葘?duì)”是得到最高同一性百分比的兩條序列的比對(duì)。通過比較序列中相同氨基酸殘基或核苷酸的數(shù)量來確定同一性百分比(即同一性％＝相同位置的數(shù)量/位置總數(shù)x100)?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的數(shù)學(xué)算法完成兩條序列之間同一性百分比的測定。用于比較兩條序列的數(shù)學(xué)算法的一個(gè)例子是如中karlin和altschul(1993)proc.natl.acad.sci.usa90:5873-5877修飾的karlin和altschul(1990)proc.natl.acad.sci.usa87:2264-2268的算法。altschul,等(1990)j.mol.biol.215:403-410的nblast和xblast程序整合了這樣的算法。可以用nblast程序、評(píng)分＝100、詞長＝12運(yùn)行blast核苷酸搜索，以獲得與本發(fā)明的核酸分子同源的核苷酸序列?？梢杂脁blast程序、評(píng)分＝50、詞長＝3來運(yùn)行blast蛋白質(zhì)搜索，以獲得與本發(fā)明的蛋白質(zhì)分子同源的氨基酸序列。為了就比較的目的獲得有缺口的比對(duì)，可以如altschul等，(1997)nucliecacidsres.25:3389-3402中所述利用gappedblast?；蛘?，可以使用psi-blast進(jìn)行檢測分子(id.)之間遠(yuǎn)距離關(guān)系(distantrelationships)的迭代搜索。使用blast、gappedblast和psi-blast程序時(shí)，可以使用各個(gè)程序(例如xblast和nblast)的默認(rèn)參數(shù)。見http://www.ncbi.nlm.nih.gov。用于比較序列的數(shù)學(xué)算法的另一例子是myers和miller,cabios(1989)的算法。屬于gcg序列算法軟件包一部分的align程序(2.0版)整合了這樣的算法。本領(lǐng)域已知的序列分析的其它算法包括如torellisandrobotti(1994)comput.appl.biosci.,10:3-5中所述的advance和adam；和pearson和lipman(1988)proc.natl.acad.sci.85:2444-8中所述的fasta。在fasta中，ktup是設(shè)定搜索靈敏度和速度的控制選項(xiàng)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“神經(jīng)生長因子”和“ngf”是指神經(jīng)生長因子及其保持ngf至少部分生物活性的變體。在本文中使用時(shí)，ngf包括所有哺乳動(dòng)物物種的天然序列ngf，包括人、犬、貓、馬或牛。“ngf受體”是指與ngf結(jié)合或被ngf活化的多肽。ngf受體包括任何哺乳動(dòng)物物種的trka受體和p75受體，所述哺乳動(dòng)物包括但不限于人、犬、貓、馬、靈長類或牛。在本文中使用時(shí)，“抗-ngf拮抗劑抗體”(可互換地稱作“抗-ngf抗體”)是指能夠結(jié)合ngf并抑制ngf生物活性和/或ngf信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)的下游通路的抗體?？?ngf拮抗劑抗體包括阻斷、拮抗、阻抑或降低(包括顯著地阻斷、拮抗、阻抑或降低)ngf生物活性的抗體，包括ngf信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)的下游通路，例如受體結(jié)合和/或?qū)gf的細(xì)胞應(yīng)答的引發(fā)。就本發(fā)明的目的而言，應(yīng)當(dāng)明確地理解術(shù)語“抗-ngf拮抗劑抗體”包括所有前文鑒別的術(shù)語、標(biāo)題和功能狀態(tài)和特征，藉此ngf自身、ngf生物活性(包括但不限于其介導(dǎo)任何手術(shù)后疼痛的能力)、或生物活性的后果以任何有意義的程度被大量無效、降低或中和。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體結(jié)合ngf并阻止ngf二聚體化和/或結(jié)合ngf受體(例如p75和/或trka)。在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體結(jié)合ngf并阻止trka受體二聚體化和/或trka自磷酸化。本文中提供了抗-ngf拮抗劑抗體的例子。ngf的“生物活性”通常是指結(jié)合ngf受體和/或活化ngf受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的能力。生物活性包括但不限于以下任一種或多種：結(jié)合ngf受體(例如p75和/或trka)的能力；促進(jìn)trka受體二聚體化和/或自磷酸化的能力；活化ngf受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的能力；促進(jìn)細(xì)胞分化、增殖、存活、生長和細(xì)胞生理學(xué)的其它改變的能力，所述改變包括(在神經(jīng)元的情況下，包括外周和中樞神經(jīng)元)神經(jīng)元形態(tài)、突觸發(fā)生、突觸功能、神經(jīng)遞質(zhì)和/或神經(jīng)肽釋放和損傷后再生的改變；促進(jìn)小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元存活的能力；和介導(dǎo)與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的能力。在本文中使用時(shí)，“基本純凈”是指至少50％純凈(即不含污染物)、更優(yōu)選地至少90％純凈、更優(yōu)選地至少95％純凈、更優(yōu)選地至少98％純凈、更優(yōu)選地至少99％純凈的材料。“宿主細(xì)胞”包括個(gè)體細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物，其可以是或者曾經(jīng)是用于整合多核苷酸插入物的載體的受體。宿主細(xì)胞包括單個(gè)宿主細(xì)胞的后代，并且所述后代由于天然、偶然或故意的突變而不必須與原始的親本細(xì)胞(在形態(tài)上或基因組dna互補(bǔ)體上)完全相同。宿主細(xì)胞包括用本發(fā)明的多核苷酸體內(nèi)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。在本文中使用時(shí)，“治療”是獲得有益或期望的臨床結(jié)果的途徑。就本發(fā)明的目的而言，有益或期望的臨床結(jié)果包括但不限于以下一種或多種：改善或減輕與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的任一方面。就本發(fā)明的目的而言，有益或期望的臨床結(jié)果包括但不限于以下一種或多種：包括減輕與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(包括疼痛的任一方面)的嚴(yán)重性、使其減輕(例如縮短疼痛時(shí)間、降低疼痛敏感度或感覺)。藥物、化合物或藥物組合物的“有效量”是足以實(shí)現(xiàn)有益或期望結(jié)果的量，所述結(jié)果包括臨床結(jié)果，例如疼痛感覺的減輕或降低?？梢栽谝淮位蚨啻问┯弥惺┯糜行Я?。就本發(fā)明的目的而言，藥物、化合物或藥物組合物的有效量是足以對(duì)與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛或下泌尿道癥狀進(jìn)行治療、減輕、降低其強(qiáng)度和/或預(yù)防的量。在一些實(shí)施方式中，“有效量”可降低靜止時(shí)的疼痛(靜止痛)或機(jī)械誘導(dǎo)的疼痛(包括運(yùn)動(dòng)后疼痛)或二者，并且可以在疼痛刺激之前、期間或之后施用。如臨床語境中所理解的，有效量的藥物、化合物或藥物組合物可與另一藥物、化合物或藥物組合物組合實(shí)施，或不與它們組合實(shí)施。因此，“有效量”可以在施用一種或多種治療劑的上下文中考慮，如果與一種或多種其它試劑組合時(shí)可實(shí)現(xiàn)期望的結(jié)果，則單一試劑可以被認(rèn)為以有效量給予。“降低”與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征的“發(fā)病率”表示降低嚴(yán)重性(其可包括降低對(duì)其它藥物和/或通常用于該病癥的療法的需要和/或(例如暴露)量，所述藥物包括例如麻醉劑)、持續(xù)時(shí)間和/或頻率(包括例如在個(gè)體中延遲或提高疼痛時(shí)間)之任何。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，個(gè)體在它們對(duì)治療的應(yīng)答方面可不同，例如，“在個(gè)體中降低與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的發(fā)病率的方法”反應(yīng)基于下述合理預(yù)期來施用抗-ngf拮抗劑抗體，所述預(yù)期是這種施用可能引起所述具體個(gè)體中發(fā)病率的降低。“改善”與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀表示與不施用抗-ngf拮抗劑抗體時(shí)相比，與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的一種或多種癥狀減輕或改良?！案纳啤边€包括縮短或降低癥狀的持續(xù)時(shí)間?！皽p輕”與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀表示在個(gè)體或個(gè)體群體中縮小疼痛和/或下泌尿道癥狀的一個(gè)或多個(gè)不期望的臨床表現(xiàn)的程度。在本文中使用時(shí)，“延遲”疼痛的發(fā)生表示延遲、妨礙、減緩、延緩、穩(wěn)定和/或推遲與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的進(jìn)展。該延遲可以具有變化的時(shí)間長度，取決于被治療的疾病史和/或個(gè)體。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所明白的，足夠或顯著的延遲可有效地包括預(yù)防，因?yàn)閭€(gè)體不發(fā)生疼痛?！把舆t”癥狀發(fā)生的方法是與不使用所述方法時(shí)相比，降低在給定時(shí)間框中發(fā)生癥狀的可能性，和/或降低給定時(shí)間框中癥狀的程度。這類比較典型地以臨床研究為基礎(chǔ)，所述臨床研究使用統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著數(shù)量的受試者。在本文中使用時(shí)，“疼痛”是指任何病因?qū)W的疼痛，包括急性和慢性疼痛，和具有炎癥成分的任何疼痛。在本文中使用時(shí)，“疼痛”包括傷害感受(nociception)和疼痛感覺，并且可以使用疼痛評(píng)分和本領(lǐng)域公知的其它方法客觀和主觀地評(píng)價(jià)疼痛。如本領(lǐng)域所公知的，疼痛可以是原發(fā)或繼發(fā)的疼痛。在本文中使用時(shí)，“與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛”是指下腹部(骨盆)疼痛；膀胱疼痛；恥骨上疼痛；陰道疼痛；陰莖、睪丸、陰囊和會(huì)陰疼痛；尿道疼痛；性交障礙；當(dāng)膀胱充滿時(shí)可能提高的疼痛、壓力或不適。在本文中使用時(shí)，“與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的下泌尿道癥狀”是指三組泌尿癥狀，其可定義為儲(chǔ)尿(刺激性)癥狀、排尿(阻塞性)癥狀及排尿后癥狀。儲(chǔ)尿癥狀包括尿急、尿頻、夜尿、急迫性尿失禁及壓力性尿失禁，這些與膀胱過動(dòng)癥(oab)及良性前列腺增生(bph)相關(guān)。排尿癥狀包括尿無力、排尿不順、排尿斷斷續(xù)續(xù)、用力排尿及排尿困難。排尿后癥狀包含尿末滴瀝、排尿后滴尿及殘尿感?！鞍螂走^動(dòng)癥(oab)”定義為尿急(含或不含急迫性尿失禁)，通常會(huì)伴隨有尿頻和夜尿[abrams等.,neurourologyandurodynamics21:167-178(2002)]。oab在男性及女性中的流行程度相近，且美國人口中有大約16％患有此癥狀[stewart等,prevalenceofoveractivebladderintheunitedstates:resultsfromthenobleprogram；abstractpresentedatthe2ndinternationalconsultationonincontinence,july2001,paris,france]。術(shù)語“潮濕oab(obdwet)”及“干燥oab(obddry)”分別描述患有或未患有尿失禁的oab患者。之前，oab的主要癥狀被認(rèn)為是尿失禁。然而，隨著新術(shù)語的出現(xiàn)，這對(duì)大量未失禁的患者(即干燥oab患者)明顯是無意義的。因此，來自liberman等[‘healthrelatedqualityoflifeamongadultswithsymptomsofoveractivebladder:resultsfromauscommunity-basedsurvey’；urology57(6),1044-1050,2001]的2001年的研究檢驗(yàn)了所有oab癥狀對(duì)以社區(qū)為基礎(chǔ)的美國人口樣本的生活品質(zhì)的影響。該研究闡明，與對(duì)照比較時(shí)，患有oab而沒有任何明顯漏尿的個(gè)體具有受損的生活品質(zhì)?！癰ph”是一種慢性進(jìn)行性疾病，其會(huì)導(dǎo)致例如急性尿滯留、再發(fā)性泌尿道感染、膀胱結(jié)石和腎臟機(jī)能障礙的并發(fā)癥。在男性中，與bph相關(guān)的luts的流行程度及平均嚴(yán)重性會(huì)隨著年齡增加而增加。bph導(dǎo)致前列腺體積增加、造成尿道及膀胱出口阻塞和膀胱功能的繼發(fā)性改變。該效應(yīng)可由儲(chǔ)尿(刺激性)及排尿(阻塞性)癥狀二者表現(xiàn)。“生物樣品”包括從個(gè)體獲得的多種樣品類型，并可用于診斷或監(jiān)測實(shí)驗(yàn)中。該定義包括生物來源的血和其它液體樣品，例如活檢標(biāo)本或阻止培養(yǎng)物或來自其中的細(xì)胞，及其后代。該定義還包括在獲得后以任何方式操作的樣品，所述操作例如用試劑處理、增溶、或富集某些組分例如蛋白質(zhì)或多核苷酸、或?yàn)榱饲衅哪康陌裼诎牍腆w或固體基質(zhì)中。術(shù)語“生物樣品”包括臨床樣品，還包括培養(yǎng)物中的細(xì)胞、細(xì)胞上清液、細(xì)胞裂解物、血清、血漿、生物流體(biologicalfluid)和組織樣品?！皞€(gè)體”或“受試者”是脊椎動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選為人。哺乳動(dòng)物包括但不限于農(nóng)場動(dòng)物(例如牛)、運(yùn)動(dòng)動(dòng)物、寵物(例如貓、狗和馬)、靈長類、小鼠和大鼠。在本文中使用時(shí)，“載體”表示能夠在宿主細(xì)胞中遞送(優(yōu)選表達(dá))一個(gè)或多個(gè)感興趣的基因或序列的構(gòu)建體。載體的例子包括但不限于病毒載體、裸dna或rna表達(dá)載體、質(zhì)粒、粘粒或噬菌體載體、與陽離子縮合劑(cationiccondensingagent)結(jié)合的dna或rna表達(dá)載體、封裝在脂質(zhì)體中的dna或rna表達(dá)載體，和某些真核細(xì)胞例如生產(chǎn)者細(xì)胞(producercell)。在本文中使用時(shí)，“表達(dá)控制序列”表示指導(dǎo)核酸轉(zhuǎn)錄的核酸序列。表達(dá)控制序列可以是啟動(dòng)子(例如組成型或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子)或增強(qiáng)子。表達(dá)控制序列與要轉(zhuǎn)錄的核酸序列可操作地連接。在本文中使用時(shí)，“可藥用載劑”包括與活性成分組合時(shí)允許活性成分保留生物活性并且不與受試者的免疫系統(tǒng)反應(yīng)到材料。例子包括但不限于任何標(biāo)準(zhǔn)藥物載劑，例如磷酸鹽緩沖的鹽水溶液、水、乳液例如油/水乳液，和多種類型的潤濕劑(wettingagent)。用于氣霧劑或腸胃外施用的優(yōu)選的稀釋劑是磷酸鹽緩沖的鹽水或正常(0.9％)鹽水。通過公知的常規(guī)方法(見例如remington'spharmaceuticalsciences，第18版，a.gennaro編,mackpublishingco.,easton,pa,1990；和remington,thescienceandpracticeofpharmacy，第20版，mackpublishing,2000)配制包含這類載劑的組合物。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“koff”旨在表示抗體從抗體-抗原相互作用中解離的關(guān)閉速率常數(shù)(offrateconstant)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“kon”旨在表示具體抗體-抗原相互作用的開啟速率(on-rate)或結(jié)合速率(associationrate)。在本文中使用時(shí)，術(shù)語“kd”旨在表示抗體-抗原相互作用的解離常數(shù)，其得自koff與kon的比例，并表述為摩爾濃度(m)?？梢允褂帽绢I(lǐng)域公知的方法測定抗體的kd值。測定抗體kd值的一種方法是使用表面等離子體共振，典型地使用生物傳感器系統(tǒng)，如系統(tǒng)。使用抗-ngf拮抗劑抗體治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的方法本發(fā)明提供了在個(gè)體(包括人以及非人的哺乳動(dòng)物)中治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的方法。因此，在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了在個(gè)體中治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的方法，包括施用有效量的抗-ngf拮抗劑抗體。本文中描述了合適的抗-ngf拮抗劑抗體。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了在個(gè)體中降低與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的發(fā)病率、使其改善、抑制、減輕和/或延遲其發(fā)生的方法。因此，在一些實(shí)施方式中，在患有間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征的個(gè)體中，在發(fā)生與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀之前施用抗-ngf拮抗劑抗體?？梢酝ㄟ^任何合適的途徑對(duì)個(gè)體施用抗-ngf拮抗劑抗體。不同施用途徑的例子在本文中描述。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體每周一次、每兩周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次、每十五周一次、每二十周一次、每二十五周一次、或每二十六周一次地施用。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體每個(gè)月一次、每兩個(gè)月一次、每三個(gè)月一次、每四個(gè)月一次、每五個(gè)月一次或每六個(gè)月一次地施用。疼痛緩解或下泌尿道癥狀的緩解可以通過緩解時(shí)程(timecourse)來表征。因此，在一些實(shí)施方式中，在施用抗-ngf拮抗劑抗體后約24小時(shí)內(nèi)觀察到緩解。在其它一些實(shí)施方式中，在施用抗-ngf拮抗劑抗體后約36、48、60、72小時(shí)或4天內(nèi)觀察到緩解。在一些實(shí)施方式中，疼痛和/或下泌尿道癥狀的頻率和/或強(qiáng)度減小，和/或疾病患者的生活品質(zhì)提高。在一些實(shí)施方式中，在單劑量的抗-ngf拮抗劑抗體后，提供的疼痛緩解的持續(xù)時(shí)間至少約7天，至少約14天，至少約21天，至少約28天，至少約35天，至少約42天，至少約49天，至少約56天，至少約63天，至少約70天，至少約77天，至少約84天，至少約180天，或更久。疼痛緩解或下泌尿道癥狀緩解可以通過疼痛數(shù)字評(píng)價(jià)量表(painnumericalratingscale,nrs)的改變、o’leary-sant間質(zhì)性膀胱炎癥狀指數(shù)(icsi)的改變、o’leary-sant間質(zhì)性膀胱炎問題指數(shù)(icpi)的改變、pelvicpainandurgency/frequency(puf)癥狀評(píng)分的改變和/或排尿變量(例如排尿頻率、夜尿頻率、失禁發(fā)作頻率、每次排尿排泄的平均體積、平均間質(zhì)性膀胱炎疼痛嚴(yán)重性、泌尿急性發(fā)作、平均睡眠擾動(dòng)評(píng)分、與性行為疼痛評(píng)分相關(guān)的平均疼痛評(píng)分、全局應(yīng)答評(píng)價(jià)、報(bào)告治療影響評(píng)價(jià)的專利(patentreportingtreatmentimpactassessment)、治療失敗、生物標(biāo)記物、安全性端點(diǎn)(safetyendpoint)和/或藥物代謝動(dòng)力學(xué)度量)的改變來表征。生物標(biāo)記物可包括ngf、糖蛋白-51(gp-51)、抗增殖因子(apf)和hb-表皮生長因子(hb-egf)等等。用于本發(fā)明方法(涉及與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀)中的示范性抗-ngf抗體是抗-ngf拮抗劑抗體，其表示阻斷、阻抑或降低(包括顯著阻斷、阻抑或降低)ngf生物活性的任何抗體，所述生物活性包括ngf信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)的下游通路，例如受體結(jié)合和/或?qū)gf的細(xì)胞應(yīng)答的引發(fā)。術(shù)語“拮抗劑”暗示沒有特定機(jī)制的生物活動(dòng)(無論是什么)，并被認(rèn)為明確地包含和包括與ngf的所有可能的藥理學(xué)、生理學(xué)和生物化學(xué)相互作用及其后果，其可以通過多種不同的和化學(xué)上相異的組合物實(shí)現(xiàn)。就本發(fā)明的目的而言，應(yīng)當(dāng)明確地理解，術(shù)語“拮抗劑”包括所有前文鑒別的術(shù)語、標(biāo)題和功能狀態(tài)和特征，藉此ngf自身、ngf生物活性(包括但不限于其介導(dǎo)任何手術(shù)后疼痛的能力)、或生物活性的后果以任何有意義的程度被大量無效、降低或中和。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體結(jié)合ngf(與之物理相互作用)、結(jié)合ngf受體(例如trka受體和/或p75受體)、和/或降低(阻礙和/或阻斷)下游ngf受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體結(jié)合ngf(例如hngf)并且不顯著地與相關(guān)的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白例如nt-3、nt4/5、和/或bdnf結(jié)合。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體不伴隨著不良的免疫應(yīng)答。還在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體被人源化(例如本文所述的抗體e3)。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體是抗體e3(如本文所述)。在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體包含抗體e3的一個(gè)或多個(gè)cdr(例如1、2、3、4、5個(gè)，或在一些實(shí)施方式中來自e3的所有6個(gè)cdr)。在其它一些實(shí)施方式中，抗體是人的。還在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體包含seqidno.1(wo2004/058184的圖1)中所示重鏈可變區(qū)的氨基酸序列和/或seqidno:2(wo2004/058184的圖1b)中所示輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體包含經(jīng)修飾的恒定區(qū)，例如免疫惰性的恒定區(qū)，例如其不引發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的裂解，或者不刺激抗體依賴型細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc)。在其它一些實(shí)施方式中，恒定區(qū)如eur.j.immunol.(1999)29:2613-2624；pctwo9958752中所述被修飾。用于本發(fā)明方法中的抗體通過以下任何(一種或多種)特征來表征：(a)能夠結(jié)合ngf；(b)能夠降低和/或抑制ngf生物活性和/或ngf信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)的下游通路；(c)能夠降低和/或抑制小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的ngf-依賴型存活；(d)與nt3、nt4/5和/或bdnf無任何顯著的交叉反應(yīng)性；(e)能夠治療和/或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀；(f)能夠提高ngf的清除率；(g)能夠降低或抑制trka受體的活化，如例如使用激酶受體活化測定(kira)所檢測的(見美國專利no.6,027,927)。就本發(fā)明的目的而言，抗體以抑制ngf和/或ngf信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能介導(dǎo)的下游通路的方式，與ngf反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體識(shí)別人ngf。還在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體特異性結(jié)合人ngf。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體不與相關(guān)的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白例如nt-3、nt4/5和/或bdnf顯著結(jié)合。還在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體能夠結(jié)合ngf并有效抑制ngf與其trka和/或p75受體的體內(nèi)結(jié)合和/或有效抑制ngf活化其trka和/或p75受體。還在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體是單克隆抗體。還在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體被人源化(例如本文所述的抗體e3)。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體是人的。見例如wo2005/019266，其描述了抗體4d4、14d10、6g9、7h2、14f11和4g6。在一些實(shí)施方式中，抗體是識(shí)別人ngf上一個(gè)或多個(gè)表位的人抗體。在另一實(shí)施方式中，抗體是識(shí)別人ngf上一個(gè)或多個(gè)表位的小鼠或大鼠抗體。在另一實(shí)施方式中，抗體識(shí)別選自下組的ngf上的一個(gè)或多個(gè)表位，所述組由靈長類、犬、貓、馬和牛組成。還在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體與選自以下任一個(gè)或多個(gè)的抗體結(jié)合基本相同的ngf表位：mab911、mab912和mab938(見hongo,等，hybridoma19:215-227(2000))；本文定義的抗體(例如抗體e3)；和/或wo20050019266中所述抗體(包括抗體4d4、14d10、6g9、7h2、14f11和4g6)或wo2006131951中所述抗體(包括抗體hu-αd11)。在其它一些實(shí)施方式中，抗體與mab911結(jié)合相同的表位。在另一實(shí)施方式中，抗體包含免疫惰性(例如不引發(fā)補(bǔ)體介導(dǎo)的裂解或者抗體依賴型細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc))的恒定區(qū)?？梢允褂妹绹鴮＠鹡o.5,500,362中公開的方法評(píng)價(jià)adcc活性。在一些實(shí)施方式中，恒定區(qū)如eur.j.immunol.(1999)29:2613-2624；pctwo9958752中所述被修飾。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體是稱作“e3”的人源化小鼠抗-ngf單克隆抗體，本文所述任何e3相關(guān)抗體，或其任何片段。下文概括了與親本鼠抗-ngf單克隆抗體911相比以高親合力和緩慢的解離動(dòng)力學(xué)結(jié)合人ngf的抗體e3的結(jié)合特性。e3以約50倍于親本小鼠抗體911的結(jié)合親和性結(jié)合人ngf。抗體kdkoffkon911(fab)3.7nm9x10-5s-12.2x104m-1s-1e3(fab)0.07nm<4x10-5s-16x105m-1s-1e3抗體和相關(guān)抗體還顯示強(qiáng)大的拮抗人ngf的能力，如通過wo2004/058184的實(shí)施例2和3中所述體外實(shí)驗(yàn)所評(píng)價(jià)的，所述wo2004/058184的內(nèi)容通過引用并入本文。例如，抗體e3在存在15pm人ngf時(shí)以約21pm的ic50，在存在1.5pm的人ngf時(shí)以約1.2pm的ic50拮抗小鼠e13三叉神經(jīng)神經(jīng)元的ngf-依賴型存活。因此，在另一方面中，可以通過以下進(jìn)一步鑒定和表征本發(fā)明的抗體和多肽：(h)以低解離動(dòng)力學(xué)(在一些實(shí)施方式中以小于約2nm的kd和/或比約6x10-5s-1更慢的koff)與人ngf高親和性結(jié)合；和/或(i)能夠在約15pmngf(在一些實(shí)施方式中為人ngf)下以約100pm或更小的ic50和/或在約1.5pmngf下以約20pm或更小的ic50抑制(阻斷)小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的ngf-依賴型存活?？捎糜诒景l(fā)明中的抗體可包括單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片段(例如fab、fab’、f(ab’)2、fv、fc等等)、嵌合抗體、雙特異性抗體、雜綴合物抗體(heteroconjugateantibody)、單鏈(scfv)、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白、人源化抗體、人抗體，和包含具有所需特異性的抗原識(shí)別位點(diǎn)的免疫球蛋白分子的任何其它經(jīng)修飾的構(gòu)型，包括抗體的糖基化變體、抗體的氨基酸序列變體、和共價(jià)修飾的抗體。抗體可以是鼠、大鼠、人或任何其它來源(包括嵌合抗體或人源化抗體)。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明利用包含下述輕鏈的抗體，所述輕鏈由保藏號(hào)為atccno.pta-4893或atccno.pta-4894的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼。在另一方面中，抗體包含下述重鏈，所述重鏈由保藏號(hào)為atccno.pta-4895的宿主細(xì)胞生產(chǎn)的多核苷酸編碼。本發(fā)明還利用e3的多種配制物和等同的抗體片段(例如fab、fab’、f(ab’)2、fv、fc等等)、單鏈(scfv)、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白，和包含具有所需特異性的抗原(ngf)識(shí)別位點(diǎn)的e3的任何其它經(jīng)修飾的構(gòu)型。通過上文所述任何(一種或多種)標(biāo)準(zhǔn)來鑒定和表征e3的等同抗體，包括e3的抗體和多肽片段(其可以是或不是抗體)，和包含e3多肽片段的多肽。因此，本發(fā)明利用以下任何，或包含以下任何的組合物(包括藥物組合物)：(a)抗體e3；(b)抗體e3的片段或區(qū)域；(c)seqidno.17(wo2004/058184的圖1b)中所示抗體e3的輕鏈；(c)seqidno.16(wo2004/058184的圖1a)中所示抗體e3的重鏈；(d)來自抗體e3輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)；(e)seqidnos.3-8(wo2004/058184的圖1a和1b)中所示抗體e3的一個(gè)或多個(gè)cdr(1、2、3、4、5或6個(gè)cdr)；(f)來自seqidno.5(wo2004/058184的圖1a)中所示抗體e3重鏈的cdrh3；(g)來自seqidno.8(wo2004/058184的圖1b)中所示抗體e3輕鏈的cdrl3；(h)來自seqidnos.6-8(wo2004/058184的圖1b)中所示抗體e3輕鏈的三個(gè)cdr；(i)來自seqidno.3-5(wo2004/058184的圖1a)中所示抗體e3重鏈的三個(gè)cdr；(j)來自seqidnos3-8(wo2004/058184的圖1a和1b)中所示抗體e3輕鏈的三個(gè)cdr和重鏈的三個(gè)cdr；和(k)包含(b)到(j)中任一項(xiàng)的抗體?？贵we3的cdr部分(包括chothia和kabatcdr)圖示于wo2004/058184的圖1a和1b中，并且由以下氨基酸序列組成：(a)重鏈cdr1("cdrh1")gfsligydln(seqidno:3)；(b)重鏈cdr2("cdrh2")iiwgdgttdynsavks(seqidno:4)；(c)重鏈cdr3("cdrh3")ggywyatsyyfdy(seqidno:5)；(d)輕鏈cdr1("cdrl1")rasqsisnnln(seqidno:6)；(e)輕鏈cdr2("cdrl2")ytsrfhs(seqidno:7)；和(f)輕鏈cdr3("cdrl3")qqehtlpyt(seqidno:8)。確定cdr區(qū)是本領(lǐng)域的公知技術(shù)。應(yīng)當(dāng)理解在一些實(shí)施方式中，cdr可以是kabat和chothiacdr的組合(也稱作“合并的cdr”或“擴(kuò)大的cdr”)。在一些實(shí)施方式中，cdr包括kabatcdr。在其它一些實(shí)施方式中，cdr是chothiacdr。在一些實(shí)施方式中，抗體包含至少一個(gè)cdr與e3的至少一個(gè)cdr、至少兩個(gè)、至少三個(gè)、至少四個(gè)、至少5個(gè)cdr基本同源(或在一些實(shí)施方式中與e3的所有6個(gè)cdr基本同源，或源于e3)。其它一些實(shí)施方式包括具有至少2、3、4、5或6個(gè)cdr與e3的至少2、3、4、5或6個(gè)cdr基本同源或者源于e3。就本發(fā)明的目的而言，應(yīng)當(dāng)理解結(jié)合特異性和/或總體活性(其可以在治療和/或預(yù)防疼痛或抑制e13.5小鼠三叉神經(jīng)神經(jīng)元的ngf-依賴型存活方面)通常保留，盡管與e3相比活性程度可變化(可能更大或更小)。在一些實(shí)施方式中，抗體可包含具有以下任何的e3的氨基酸序列：e3序列的至少5個(gè)連續(xù)氨基酸、至少8個(gè)連續(xù)氨基酸、至少約10個(gè)連續(xù)氨基酸、至少約15個(gè)連續(xù)氨基酸、至少約20個(gè)連續(xù)氨基酸、至少約25個(gè)連續(xù)氨基酸、至少約30個(gè)連續(xù)氨基酸，其中至少3個(gè)氨基酸來自e3的可變區(qū)。mab911的擴(kuò)大的cdr序列展示于wo2004/058184的圖1a和1b中，和本文的seqidnos:9-14中。在一些實(shí)施方式中，可變區(qū)來自e3的輕鏈。在另一實(shí)施方式中，可變區(qū)來自e3的重鏈。在另一實(shí)施方式中，5個(gè)(或更多)連續(xù)氨基酸來自seqidnos3-8(wo2004/058184的圖1a或1b)中所示e3的互補(bǔ)性決定區(qū)(cdr)。在另一實(shí)施方式中，抗體包含具有以下任何的e3的氨基酸序列：e3序列的至少5個(gè)連續(xù)氨基酸、至少8個(gè)連續(xù)氨基酸、至少約10個(gè)連續(xù)氨基酸、至少約15個(gè)連續(xù)氨基酸、至少約20個(gè)連續(xù)氨基酸、至少約25個(gè)連續(xù)氨基酸、至少約30個(gè)連續(xù)氨基酸，其中e3序列包含以下任一個(gè)或多個(gè)：cdrh1的氨基酸殘基l29、cdrh2的i50、cdrh3的w101和/或cdrh3的a103；和/或cdrl1的氨基酸殘基s28、cdrl1的n32、cdrl2的t51、cdrl3的91e和/或cdrl3的h92。如本文公開內(nèi)容中明確的，使用順序氨基酸編號(hào)規(guī)劃(sequentialaminoacidnumberingscheme)來表示可變區(qū)中的氨基酸殘基(也就是說，每個(gè)可變區(qū)中的氨基酸殘基順序編號(hào))。如本領(lǐng)域所公知的，比較兩個(gè)抗體或多肽例如e3抗體和e3變體(或懷疑為e3變體的多肽)時(shí)kabat和/或chothia編號(hào)系統(tǒng)是有用的。本領(lǐng)域公知需要時(shí)(例如用于在e3和另一多肽之間進(jìn)行比較時(shí))如何將順序編號(hào)轉(zhuǎn)化為chothia和/或kabat編號(hào)。wo2004/058184的圖23展示了使用順序、chothia和kabat編號(hào)來編號(hào)的e3可變區(qū)。另外，為了便于比較，通常認(rèn)為框架殘基通常(但不總是)具有大致相同的殘基數(shù)量。然而，cdr的尺寸可以變化(即其可能具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的插入和/或缺失)。比較e3抗體和候選e3變體(例如在cdr區(qū)的情況下來自比要比對(duì)的抗體e3更長的候選序列)時(shí)，可遵循以下步驟(盡管其它方法是本領(lǐng)域已知的)。將候選抗體序列與e3抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)比對(duì)。比對(duì)可以手動(dòng)進(jìn)行，或者使用普遍接受的計(jì)算機(jī)程序通過計(jì)算機(jī)進(jìn)行?？梢酝ㄟ^使用大部分fab序列共有的一些氨基酸殘基來簡化比對(duì)。例如，輕鏈和重鏈各自典型地具有兩個(gè)半胱氨酸，其通常存在于保守的位置上。應(yīng)當(dāng)理解候選變體抗體的氨基酸序列可以更長(即具有插入的氨基酸殘基)或更短(具有缺失的氨基酸殘基)?？梢詫?duì)殘基編號(hào)添加后綴，來表明額外殘基的插入，例如殘基34abc。對(duì)于與e3序列比對(duì)例如殘基33和35但是在它們之間沒有殘基與殘基35比對(duì)的候選序列而言，殘基35單純地不指定給一個(gè)殘基。在另一途徑中，普遍公知比較不同長度的cdr時(shí)可以在結(jié)構(gòu)等同(例如抗原-抗體復(fù)合物中相同的位置)的氨基酸之間進(jìn)行比較。例如，chothia編號(hào)(al-lazikani等，上文)通常(但不是在所有情況下)在結(jié)構(gòu)正確的位置上進(jìn)行插入和缺失。結(jié)構(gòu)等同物也可以使用x-射線晶體學(xué)或雙突變周期分析來演繹或證明(見pons等，(1999)prot.sci.8:958-968)。就kd而言，抗-ngf抗體對(duì)ngf(例如hngf)的親合力可以是約0.10到約0.80nm，約0.15到約0.75nm和約0.18到約0.72nm。在一些實(shí)施方式中，kd為約2pm、約5pm、約10pm、約15pm、約20pm、約40pm，或大于約40pm。在一些實(shí)施方式中，kd在約2pm和22pm之間。在其它一些實(shí)施方式中，kd小于約10nm、約5nm、約4nm、約3.5nm、約3nm、約2.5nm、約2nm、約1.5nm、約1nm、約900pm、約800pm、約700pm、約600pm、約500pm、約400pm、約300pm、約200pm、約150pm、約100pm、約90pm、約80pm、約70pm、約60pm、約50pm、約40pm、約30pm、約10pm、約5pm。在一些實(shí)施方式中，kd為約10nm。在其它一些實(shí)施方式中，kd小于約10nm。在其它一些實(shí)施方式中，kd為約0.1nm或約0.07nm。在其它一些實(shí)施方式中，kd小于約0.1nm或小于約0.07nm。在其它一些實(shí)施方式中，kd是約10nm、約5nm、約4nm、約3.5nm、約3nm、約2.5nm、約2nm、約1.5nm、約1nm、約900pm、約800pm、約700pm、約600pm、約500pm、約400pm、約300pm、約200pm、約150pm、約100pm、約90pm、約80pm、約70pm、約60pm、約50pm、約40pm、約30pm、約10pm之任一到約2pm、約5pm、約10pm、約15pm、約20pm或約40pm之任一。在一些實(shí)施方式中，kd是約10nm、約5nm、約4nm、約3.5nm、約3nm、約2.5nm、約2nm、約1.5nm、約1nm、約900pm、約800pm、約700pm、約600pm、約500pm、約400pm、約300pm、約200pm、約150pm、約100pm、約90pm、約80pm、約70pm、約60pm、約50pm、約40pm、約30pm、約10pm之任一。還在其它一些實(shí)施方式中，kd是約2pm、約5pm、約10pm、約15pm、約20pm、約40pm，或大于約40pm。可以使用本領(lǐng)域公知的方法測定抗體對(duì)ngf的親合力。測定抗體對(duì)ngf的親合力的一種方式是通過測量抗體單功能fab片段的親合力來實(shí)現(xiàn)。為了獲得單功能fab片段，可以用木瓜蛋白酶切割或重組表達(dá)抗體(例如igg)?？梢酝ㄟ^表面等離子體共振(blacore3000tm表面等離子體共振(spr)系統(tǒng)，biacore,inc,piscawaynj)來測定抗體的抗-ngffab片段的親合力?？梢愿鶕?jù)制造商的說明，用n-乙基-n'-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(edc)和n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)活化cm5芯片。可以將人ngf(或任何其它ngf)稀釋進(jìn)10mm乙酸鈉ph4.0中，并以0.005mg/ml的濃度注射在活化的芯片上。使用跨越個(gè)體芯片通道的可變的流動(dòng)時(shí)間，實(shí)現(xiàn)兩種抗原密度范圍：對(duì)詳細(xì)的動(dòng)力學(xué)研究而言100-200個(gè)應(yīng)答單位(ru)，對(duì)篩選實(shí)驗(yàn)而言500-600ru。用乙醇胺封閉芯片。再生研究顯示pierce洗脫緩沖液(產(chǎn)品編號(hào)21004,piercebiotechnology,rockford,il)和4mnacl(2:1)的混合物有效地去除了結(jié)合的fab，同時(shí)將芯片上hngf的活性保持超過200次注射。所有的biacore實(shí)驗(yàn)使用hbs-ep緩沖液(0.01mhepes,ph7.4,0.15nacl,3mmedta,0.005％表面活性劑p29)作為運(yùn)行緩沖液。將經(jīng)純化的fab樣品的系列稀釋液(0.1-10x評(píng)價(jià)的kd)以100μl/分鐘注射1分鐘，并允許至多2小時(shí)的解離時(shí)間。使用已知濃度(通過氨基酸分析測定)的fab作為標(biāo)準(zhǔn)，通過elisa和/或sds-page電泳測定fab蛋白質(zhì)的濃度。通過使用biaevaluation程序?qū)?shù)據(jù)與1:1langmuir結(jié)合模型(karlsson,r.roos,h.fagerstam,l.petersson,b.(1994).methodsenzymology6.99-110)擬合，同時(shí)獲得動(dòng)力學(xué)結(jié)合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(kd)值被計(jì)算為koff/kon。該方案適用于測定抗體與任何ngf的親合力，所述ngf包括人ngf、另一脊椎動(dòng)物(在一些實(shí)施方式中為哺乳動(dòng)物)的ngf(例如小鼠ngf、大鼠ngf、靈長類ngf)，還適用于與其它神經(jīng)營養(yǎng)蛋白例如相關(guān)的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白nt3、nt4/5和/或bdnf一起使用。在一些實(shí)施方式中，抗體結(jié)合人ngf，并且不顯著結(jié)合來自另外的脊椎動(dòng)物物種(在一些實(shí)施方式中為哺乳動(dòng)物)的ngf。在一些實(shí)施方式中，抗體結(jié)合人ngf以及一種或多種來自另外的脊椎動(dòng)物(在一些實(shí)施方式中為哺乳動(dòng)物)的ngf。還在其它一些實(shí)施方式中，抗體結(jié)合ngf并且不與其它神經(jīng)營養(yǎng)蛋白顯著地交叉反應(yīng)(例如相關(guān)的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白nt3、nt4/5和/或bdnf)。在一些實(shí)施方式中，抗體結(jié)合ngf以及至少一種其它神經(jīng)營養(yǎng)蛋白。在一些實(shí)施方式中，抗體結(jié)合哺乳動(dòng)物物種例如馬或狗的ngf，但是不與來自另外的哺乳動(dòng)物物種的ngf顯著結(jié)合。表位可以是連續(xù)或不連續(xù)的。在一些實(shí)施方式中，抗體與選自以下的抗體結(jié)合基本相同的人ngf表位：如hongo等，hybridoma,19:215-227(2000)中所述的mab911、mab912和mab938；和本文所述的抗體(例如抗體e3)；和/或wo2005019266中所述抗體(包括抗體4d4、14d10、6g9、7h2、14f11和4g6)或wo2006131951中所述抗體(包括抗體hu-αd11)，其整體內(nèi)容通過引用并入本文。在另一實(shí)施方式中，抗體與mab911結(jié)合相同的hngf表位。還在另一實(shí)施方式中，抗體與mab909結(jié)合基本相同的表位。hongo等，上文。例如，表位可包含以下一種或多種：hngf可變區(qū)1(氨基酸23-35)中殘基k32、k34和e35；hngf可變區(qū)3(氨基酸81-88)中殘基f79和t81；可變區(qū)4內(nèi)殘基h84和k88；hngf的可變區(qū)5(氨基酸94-98)和c-端(氨基酸111-118)之間的殘基103；hngf前-可變區(qū)1(氨基酸10-23)中殘基e11；hngf可變區(qū)2(氨基酸40-49)和hngf可變區(qū)3(氨基酸59-66)之間的y52；hngfc-端中的殘基l112和s113；hngf的可變區(qū)3中的殘基r59和r69；或hngf的前-可變區(qū)1中的殘基v18、v20和g23。另外，表位可包含一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)1、可變區(qū)3、可變區(qū)4、可變區(qū)5、n-端區(qū)、和/或hngf的c-端。還在另一實(shí)施方式中，抗體顯著地降低hngf的殘基r103的溶劑可達(dá)性(accessibility)。應(yīng)當(dāng)理解，盡管上述表位涉及人ngf，但是本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)人員能夠?qū)⑷薾gf的結(jié)構(gòu)與其它物種的ngf比對(duì)，并且很可能鑒定這些表位的復(fù)本。在一些實(shí)施方式中，用于本發(fā)明中的抗體可以約200pm、150pm、100pm、80pm、60pm、40pm、20pm、10pm之任一或更小的ic50(在存在約15pmngf時(shí))抑制(降低和/或阻斷)小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體或肽可以約50pm、40pm、30pm、10pm、20pm、10pm、5pm、2pm、1pm之任一或更小的ic50(在存在約1.5pmngf時(shí))抑制(降低和/或阻斷)小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的人ngf-依賴型存活。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體或肽可以約150pm、125pm、100pm、80pm、60pm、40pm、30pm、20pm、10pm、5pm之任一或更小的ic50(在存在約15pmngf時(shí))抑制(降低和/或阻斷)小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的大鼠ngf-依賴型存活。在一些實(shí)施方式中，抗體可以約30pm、25pm、20pm、15pm、10pm、5pm、4pm、3pm、2pm、1pm之任一或更小的ic50(在存在約1.5pmngf時(shí))抑制(降低和/或阻斷)小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的大鼠ngf-依賴型存活。測量小鼠e13三叉神經(jīng)神經(jīng)元的ngf-依賴型存活的方法是本領(lǐng)域已知的，并描述于例如wo2004/058184的實(shí)施例2中。鑒定抗-ngf拮抗劑抗體可以使用本領(lǐng)域已知的方法鑒定或表征用于本發(fā)明中的抗-ngf拮抗劑抗體，其中檢測和/或測量ngf生物活性的降低、改善或中和?？梢允褂胮ctwo04/065560中描述的方法?？梢允褂昧硪环椒ǎ缑绹鴮＠鹡os.5,766,863和5,891,650中描述的激酶受體活化(kira)實(shí)驗(yàn)來鑒定抗-ngf劑。該elisa-型實(shí)驗(yàn)適用于通過測量受體蛋白酪氨酸激酶(下文稱作“rptk”)例如trka受體的激酶結(jié)構(gòu)域的自磷酸化作用來定性或定量測量激酶活化，以及適用于鑒定和表征選擇的rptk例如trka的潛在拮抗劑。實(shí)驗(yàn)的第一階段涉及激酶受體例如trka受體的激酶結(jié)構(gòu)域的磷酸化，其中受體存在于真核細(xì)胞的細(xì)胞膜中。受體可以是內(nèi)源受體，或者可以將編碼受體的核酸或受體構(gòu)建體轉(zhuǎn)化進(jìn)細(xì)胞中。典型地，用基本均質(zhì)的這類細(xì)胞的種群(通常為哺乳動(dòng)物細(xì)胞系)涂覆第一固相(例如第一測定板的孔)，使得細(xì)胞與固相粘附。通常細(xì)胞是粘附的，并因此天然地與第一固相粘附。如果使用“受體構(gòu)建體”，則其通常包含激酶受體和標(biāo)記多肽的融合物。標(biāo)記多肽被實(shí)驗(yàn)的elisa部分中的捕獲劑(通常是捕獲抗體)識(shí)別。然后與ngf一起向具有粘附細(xì)胞的孔中添加分析物例如候選ngf拮抗劑(包括抗-ngf拮抗劑抗體)，使得酪氨酸激酶受體(例如trka受體)暴露于ngf和分析物(或與它們接觸)。該實(shí)驗(yàn)使得能夠鑒定通過其配體ngf抑制trka活化的拮抗劑(包括抗體)。暴露于ngf和分析物后，使用裂解緩沖液(其中具有溶解洗滌劑)和輕柔攪動(dòng)使粘附細(xì)胞溶解，從而釋放細(xì)胞裂解物，所述細(xì)胞裂解物可以直接進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的elisa部分而不需要濃縮或澄清細(xì)胞裂解物。隨后對(duì)藉此制備的細(xì)胞裂解物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的elisa階段。作為elisa階段中的第一個(gè)步驟，用捕獲劑(通常為捕獲抗體)涂覆第二固相(通常是elisa微量滴定板的孔)，所述捕獲劑特異性結(jié)合酪氨酸激酶受體，或者在受體構(gòu)建體的情況下特異性結(jié)合標(biāo)記多肽。進(jìn)行第二固相的涂覆，使得捕獲劑與第二固相粘附。捕獲劑通常是單克隆抗體，但是如本文實(shí)施例中所述，也可以使用多克隆抗體。然后將細(xì)胞裂解物暴露于粘附捕獲劑或與之接觸，使得受體或受體構(gòu)建體與第二固相粘附(或在其中被捕獲)。然后進(jìn)行洗滌步驟，從而去除未結(jié)合的細(xì)胞裂解物，留下捕獲的受體或受體構(gòu)建體。然后將粘附或捕獲的受體或受體構(gòu)建體暴露于抗-磷酸酪氨酸抗體或與之接觸，所述抗體識(shí)別酪氨酸激酶受體中磷酸化的酪氨酸殘基。在一些實(shí)施方式中，抗-磷酸酪氨酸抗體與下述酶(直接或間接)綴合，所述酶催化非放射性彩色試劑的顏色改變。因此，可以通過隨后試劑的顏色改變來測量受體的磷酸化。酶可與抗-磷酸酪氨酸抗體直接結(jié)合，或者綴合分子(例如生物素)可與抗-磷酸酪氨酸抗體綴合并且酶可隨后通過綴合分子與抗-磷酸酪氨酸抗體結(jié)合。最后，例如通過彩色試劑的顏色改變來測量抗-磷酸酪氨酸抗體與捕獲的受體或受體構(gòu)建體的結(jié)合。也可以通過將候選試劑與ngf孵育并監(jiān)測一種或多種以下特征來鑒定抗-ngf拮抗劑抗體：(a)與ngf結(jié)合并抑制ngf生物活性或ngf信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能介導(dǎo)的下游通路；(b)抑制、阻斷或降低ngf受體活化(包括trka二聚體化和/或自磷酸化)；(c)提高ngf的清除率；(d)治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的任何方面；(e)抑制(降低)ngf合成、生產(chǎn)或釋放。在一些實(shí)施方式中，通過將候選試劑與ngf孵育并監(jiān)測ngf的結(jié)合和/或伴隨的生物活性的減少或中和，來鑒定ngf拮抗劑(例如抗-ngf拮抗劑抗體)?？梢杂媒?jīng)純化的ngf多肽，或用天然表達(dá)或被轉(zhuǎn)染為表達(dá)ngf多肽的細(xì)胞進(jìn)行結(jié)合實(shí)驗(yàn)。在一些實(shí)施方式中，結(jié)合實(shí)驗(yàn)是競爭性結(jié)合實(shí)驗(yàn)，其中評(píng)價(jià)候選試劑(例如抗體)與已知抗-ngf拮抗劑抗體競爭ngf結(jié)合的能力。實(shí)驗(yàn)可以以多種方式進(jìn)行，包括elisa方式。在其它一些實(shí)施方式中，通過將候選試劑與ngf孵育并監(jiān)測結(jié)合和伴隨的對(duì)trka受體二聚體化和/或自磷酸化的抑制來鑒定ngf拮抗劑(例如抗-ngf拮抗劑抗體)。在初始鑒定后，可以通過已知用于測試靶向生物活性的生物測定法來進(jìn)一步證實(shí)和精制候選抗-ngf拮抗劑抗體的活性。或者可以使用生物測定法來直接篩選候選者。例如，ngf促進(jìn)應(yīng)答細(xì)胞中大量形態(tài)學(xué)可識(shí)別的改變。這些包括但不限于，促進(jìn)pc12細(xì)胞的分化和增強(qiáng)來自這些細(xì)胞的神經(jīng)炎的生長(greene等，procnatlacadsciusa.73(7):2424-8,1976)，促進(jìn)神經(jīng)突從應(yīng)答性感受和交感神經(jīng)節(jié)的外植體向外生長(levi-montalcini,r.andangeletti,p.nervegrowthfactor.physiol.rev.48:534-569,1968)和促進(jìn)ngf依賴型神經(jīng)元例如胚胎背根神經(jīng)節(jié)、三叉神經(jīng)神經(jīng)節(jié)或交感神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的存活(例如chun&patterson,dev.biol.75:705-711,(1977)；buchman&davies,development118:989-1001(1993))。因此，抑制ngf生物活性的實(shí)驗(yàn)需要與ngf加分析物一起培養(yǎng)ngf應(yīng)答細(xì)胞，所述分析物例如為候選ngf拮抗劑(包括抗-ngf拮抗劑抗體)。在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間后，可以測定細(xì)胞應(yīng)答(細(xì)胞分化、神經(jīng)突向外生長或細(xì)胞存活)。也可以在如hongo等，hybridoma19:215-227(2000)所述的胚胎大鼠背根神經(jīng)節(jié)存活生物測定中，通過監(jiān)測候選試劑抑制ngf介導(dǎo)的存活的能力，來評(píng)價(jià)候選ngf拮抗劑抗體阻斷或中和ngf生物活性的能力?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的步驟制造用于本發(fā)明中的抗體，所述步驟中的一些闡述于wo2004/058184的實(shí)施例中?？梢酝ㄟ^蛋白水解或抗體的其它降解，通過如wo2004/058184中所述的重組方法(即單個(gè)或融合的多肽)，或通過化學(xué)合成來生產(chǎn)抗體。便利地通過化學(xué)合成制造抗體的多肽，特別是至多約50個(gè)氨基酸的較短多肽?；瘜W(xué)合成的方法是本領(lǐng)域已知的，并可商業(yè)獲得。例如，可以使用固相方法，通過自動(dòng)化多肽合成儀生產(chǎn)e3抗體。還見美國專利nos.5,807,715；4,816,567；和6,331,415。也可以使用已知的合成蛋白質(zhì)化學(xué)，包括涉及交聯(lián)劑的合成蛋白質(zhì)化學(xué)，體外制備嵌合和雜合的抗體。例如，可以使用二硫鍵取代反應(yīng)或者通過形成硫醚鍵來構(gòu)建免疫毒素。用于這一目的的合適試劑的例子包括iminothiolate和甲基-4-mercaptobutyrimidate。在另一種備選方案中，可以使用本領(lǐng)域公知的步驟重組制造抗體。在一些實(shí)施方式中，將包含編碼抗體e3可變和輕鏈區(qū)的序列的多核苷酸克隆進(jìn)載體中，用于在宿主細(xì)胞(例如cho細(xì)胞)中表達(dá)或繁殖。在另一實(shí)施方式中，將wo2004/058184的圖2和3中所示多核苷酸序列克隆進(jìn)一個(gè)或多個(gè)載體中，用于表達(dá)或繁殖。編碼感興趣的抗體的序列可以保持在宿主細(xì)胞中的載體中，并且所述宿主細(xì)胞可隨后被擴(kuò)展和冷凍用于將來使用。本文中進(jìn)一步描述了載體(包括表達(dá)載體)和宿主細(xì)胞。用于在植物或奶中重組表達(dá)抗體的方法已公開。見例如peeters等，(2001)vaccine19:2756；lonberg,n.andd.huszar(1995)int.rev.immunol13:65；和pollock等，(1999)jimmunolmethods231:147。制造抗體衍生物(例如人源化、單鏈等等)的方法是本領(lǐng)域已知的。本發(fā)明還包括本發(fā)明抗體(例如e3)的單鏈可變區(qū)片段(“scfv”)。通過使用短連接肽連接輕和/或重鏈可變區(qū)來制造單鏈可變區(qū)片段。bird等，(1988)science242:423-426。連接肽的一個(gè)例子是(ggggs)3(seqidno:15)，其在一個(gè)可變區(qū)的羧基端和其它可變區(qū)的氨基端之間橋接約3.5nm。其它序列的連接子已描述和使用(bird等，(1988))。連接子可隨后被修飾為另外的功能，例如附著藥物或與固體支持物附著?？梢灾亟M或合成地生產(chǎn)單鏈變體。為了合成生產(chǎn)scfv，可以向合適的宿主細(xì)胞中引入含有編碼scfv的多核苷酸的合適質(zhì)粒，所述宿主細(xì)胞為真核(例如酵母、植物、昆蟲或哺乳動(dòng)物細(xì)胞)或原核(例如e.coli)?？梢酝ㄟ^常規(guī)操作例如連接多核苷酸來制造編碼感興趣的scfv的多核苷酸。可以使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)純化技術(shù)分離得到的scfv。還包括其它形式的單鏈抗體，例如雙抗體。雙抗體是二價(jià)的、雙特異性的抗體，其中vh和vl結(jié)構(gòu)域在單一多肽鏈上表達(dá)，但是使用過短而不允許相同鏈上兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間配對(duì)的連接子，從而強(qiáng)迫所述結(jié)構(gòu)域與另一鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)，并產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)(見例如holliger,p.,等，(1993)proc.natl.acadsci.usa90:6444-6448；poljak,r.j.,等，(1994)structure2:1121-1123)?？贵w可以是雙特異性抗體——對(duì)至少兩種不同抗原具有結(jié)合特異性的單克隆抗體。可以使用本文公開的抗體制造雙特異性抗體。用于制造雙特異性抗體的方法是本領(lǐng)域已知的(見例如suresh等，1986,methodsinenzymology121:210)。傳統(tǒng)上，雙特異性抗體的重組生產(chǎn)是以兩條重鏈-輕鏈對(duì)的共同表達(dá)為基礎(chǔ)中，其中兩條重鏈具有不同的特異性(millstein和cuello,1983,nature305,537-539)根據(jù)制造雙特異性抗體的一種途徑，將具有期望的結(jié)合特異性(抗體-抗原結(jié)合位點(diǎn))的抗體可變結(jié)構(gòu)域與免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域序列融合。融合優(yōu)選地與包含至少部分鉸鏈ch2和ch3區(qū)的免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)進(jìn)行。優(yōu)選含有輕鏈結(jié)合必需位點(diǎn)的第一重鏈恒定區(qū)(ch1)存在于至少一種融合物中。將編碼免疫球蛋白重鏈融合物和(需要時(shí))免疫球蛋白輕鏈的dna插入單獨(dú)的表達(dá)載體中，并共同轉(zhuǎn)染進(jìn)合適的宿主生物中。在構(gòu)建中使用不等比例的三種多肽鏈提供最佳結(jié)果的實(shí)施方式中，這在調(diào)節(jié)三種多肽片段的相互比例中提供了巨大的靈活性。然而，當(dāng)至少兩種多肽鏈以等比例表達(dá)得到高產(chǎn)量時(shí)，或比例不具有具體重要性時(shí)，可能將兩種或所有三種多肽鏈的編碼序列插入一個(gè)表達(dá)載體中。在一種途徑中，雙特異性抗體由雜種免疫球蛋白重鏈組成，其在一條臂上具有第一結(jié)合特異性，并且在另一條臂上具有雜種免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(duì)(提供第二結(jié)合特異性)。該不對(duì)稱的結(jié)構(gòu)(僅在雙特異性分子一半中具有免疫球蛋白輕鏈)便于將期望的雙特異性化合物與不想要的免疫球蛋白鏈組合中隔離。該途徑描述于1994年3月3日公開的pct公開no.wo94/04690中。包含兩種共價(jià)接合的抗體的雜綴合物抗體也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這類抗體已被用于將免疫系統(tǒng)細(xì)胞靶向至不想要的細(xì)胞(美國專利no.4,676,980)，和用于治療hiv感染(pct申請(qǐng)公開nos.wo91/00360和wo92/200373；ep03089)?？梢允褂萌魏伪憷慕宦?lián)方法制造雜綴合物抗體。合適的交聯(lián)劑和技術(shù)是本領(lǐng)域公知的，并且描述于美國專利no.4,676,980中?？贵w可以是例如如本領(lǐng)域已知和本文所述的人源化抗體。本發(fā)明包括對(duì)抗體e3的修飾，包括不顯著影響它們特性的功能等同的抗體，和具有增強(qiáng)或降低的活性的變體。多肽的修飾是本領(lǐng)域中的常規(guī)實(shí)踐，并進(jìn)一步在實(shí)施例中例證。經(jīng)修飾的多肽的例子包括下述多肽，所述多肽具有不顯著有害地改變功能活性的氨基酸殘基取代(包括保守取代)、一個(gè)或多個(gè)氨基酸缺失或添加，或使用化學(xué)類似物。在本文中使用時(shí)，多肽“變體”是下述多肽，其與天然蛋白質(zhì)差異為一個(gè)或多個(gè)取代、缺失、添加和/或插入，使得多肽的免疫反應(yīng)性不被大量減小。也就是說，變體特異性結(jié)合抗原的能力相對(duì)于天然蛋白質(zhì)可以被增強(qiáng)或不變，或者相對(duì)于天然蛋白質(zhì)可以被減小少于50％，優(yōu)選地少于20％。多肽變體優(yōu)選地與經(jīng)鑒定的多肽顯示至少約80％、更優(yōu)選地至少約90％、最優(yōu)選地至少約95％的同一性(如本文所述測定)?？梢酝ㄟ^向抗體dna中引入合適的核苷酸改變或者通過肽合成來制備抗體的氨基酸序列變體。這類變體包括例如從本文所述的seqidno:1或2的氨基酸序列中缺失和/或插入和/或取代殘基。制造缺失、插入和取代的任何組合以實(shí)現(xiàn)最終構(gòu)建體，條件是最終構(gòu)建體具有期望的特征。氨基酸改變也可以改變抗體的翻譯后過程，例如改變糖基化位點(diǎn)的數(shù)量或位置。用于鑒定抗體中屬于誘變或修飾的優(yōu)選位置的某些殘基或區(qū)域的一種有用方法稱作“丙氨酸掃描誘變”，并由cunningham和wells,1989,science,244:1081-1085描述。鑒定殘基或目標(biāo)殘基組(例如帶電的殘基如arg、asp、his、lys和glu)，并用中性或帶負(fù)電的氨基酸(最優(yōu)選丙氨酸或多聚丙氨酸)替換，來影響氨基酸與抗原的相互作用。然后通過在取代位點(diǎn)上或?qū)θ〈稽c(diǎn)引入進(jìn)一步或其它的變體，來精制對(duì)取代展示功能靈敏度的這些氨基酸位置。因此，預(yù)先確定了用于引入氨基酸序列變異的位點(diǎn)時(shí)，不需要預(yù)先確定突變自身的性質(zhì)。例如，為了分析給定位點(diǎn)上突變的表現(xiàn)，在靶密碼子或區(qū)域中進(jìn)行ala掃描誘變或隨機(jī)誘變，并針對(duì)期望的活性篩選表達(dá)的抗體變體。也可以使用如本文所述的文庫篩選誘變，來鑒定抗體中適用于誘變或修飾的位置。氨基酸序列插入包括氨基端和/或羧基端融合物，其長度范圍從一個(gè)殘基到含有一百或更多殘基的多肽，還包括單個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的序列內(nèi)插入物。末端插入物的例子包括具有n-端甲硫氨酰(methionyl)殘基的抗體或與表位標(biāo)簽融合的抗體?？贵w分子的其它插入變體包括下述酶和多肽與抗體的n-端或c-端的融合物，所述酶和多肽提高抗體的血清半衰期。取代變體在抗體分子中去除至少一個(gè)氨基酸殘基并在該處插入不同的殘基。對(duì)取代誘變而言最感興趣的位點(diǎn)包括高變區(qū)，但是也考慮fr改變。保守取代展示于表1中題目“保守取代”下。如果這類取代導(dǎo)致生物活性的改變，則可以引入更重大的改變并篩選產(chǎn)物，所述改變?cè)诒?中命名為“示范性取代”或如下文關(guān)于氨基酸種類所進(jìn)一步描述的。表1：氨基酸取代抗體生物特性的重大修飾通過選擇下述取代來完成，所述取代對(duì)以下的影響顯著不同：(a)維持取代區(qū)域中多肽主鏈的結(jié)構(gòu)，例如片層或螺旋構(gòu)型，(b)維持分子在靶位點(diǎn)處的疏水性或電荷，或(c)側(cè)鏈的松密度(bulk)。天然存在的殘基根據(jù)常見的側(cè)鏈特性被分為多組：(1)疏水的：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；(2)中性親水的：cys、ser、thr；(3)酸性的：asp、glu；(4)堿性的：asn、gln、his、lys、arg；(5)影響鏈方向性的殘基：gly、pro；和(6)芳香族的：trp、tyr、phe。通過將這些種類之一的成員更換為另一種類來制造非保守性取代。任何不涉及維持抗體正確構(gòu)型的半胱氨酸殘基也可以被取代，通常被取代為絲氨酸，從而改進(jìn)分子的氧化穩(wěn)定性并防止異常交聯(lián)。相反，可以對(duì)抗體添加半胱氨酸鍵來改善其穩(wěn)定性，尤其是當(dāng)抗體是抗體片段如fv片段時(shí)。氨基酸修飾的范圍可以從改變或修飾一個(gè)或多個(gè)氨基酸到完全重新設(shè)計(jì)區(qū)域例如可變區(qū)?？勺儏^(qū)中的改變可改變親合力和/或特異性。在一些實(shí)施方式中，在cdr區(qū)中制造不多于一到五個(gè)保守的氨基酸取代。在其它一些實(shí)施方式中，在cdr3結(jié)構(gòu)域中制造不多于一個(gè)到三個(gè)保守的氨基酸取代。還在其它一些實(shí)施方式中，cdr結(jié)構(gòu)域是cdrh3和/或cdrl3。修飾還包括糖基化和非糖基化的多肽，以及具有其它翻譯后修飾(例如用不同的糖糖基化、乙?；土姿峄?的多肽?？贵w在恒定區(qū)中保守的位置上被糖基化(jefferis和lund,1997,chem.immunol.65:111-128；wright和morrison,1997,tibtech15:26-32)。免疫球蛋白的寡糖側(cè)鏈影響蛋白質(zhì)的功能(boyd等，1996,mol.immunol.32:1311-1318；wittwe和howard,1990,biochem.29:4175-4180)和糖蛋白部分之間的分子內(nèi)相互作用，這可影響糖蛋白的構(gòu)象和展示的三維表面(hefferis和lund，上文；wyss和wagner,1996,currentopin.biotech.7:409-416)。寡糖也可以基于特異性識(shí)別結(jié)構(gòu)，發(fā)揮將給定的糖蛋白靶向至某些分子的作用。還報(bào)道了抗體的糖基化影響抗體-依賴型細(xì)胞毒性(adcc)。具體地，報(bào)道了下述cho細(xì)胞具有改善的adcc活性(umana等，1999,maturebiotech.17:176-180)，所述cho細(xì)胞具有四環(huán)素調(diào)節(jié)的β(1,4)-n-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶iii(gntiii)的表達(dá)，所述酶是催化二等分glcnac形成的糖基轉(zhuǎn)移酶。抗體的糖基化典型地是n-連接或o-連接的。n-連接的是指碳水化合物部件與天冬氨酸殘基的側(cè)鏈結(jié)合。三肽序列天冬氨酸-x-絲氨酸和天冬氨酸-x-蘇氨酸(其中x是除脯氨酸之外的任何氨基酸)是碳水化合物部件與天冬氨酸側(cè)鏈酶促結(jié)合的識(shí)別序列。因此，多肽中這些三肽序列任一的存在產(chǎn)生潛在的糖基化位點(diǎn)。o-連接的糖基化是指n-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一的糖與羥基氨基酸結(jié)合，所述羥基氨基酸最常見的是絲氨酸或蘇氨酸，盡管也可以使用5-羥基脯氨酸或5-羥基賴氨酸。對(duì)抗體添加糖基化位點(diǎn)便利地通過改變氨基酸序列來完成，使其含有一個(gè)或多個(gè)上述三肽序列(對(duì)n-連接的糖基化位點(diǎn)而言)。也可以通過對(duì)原始抗體序列添加或取代為一個(gè)或多個(gè)絲氨酸或蘇氨酸殘基來制造改變(對(duì)o-連接的糖基化位點(diǎn)而言)。也可以改變抗體的糖基化模式而不改變根本的核苷酸序列。糖基化很大程度上取決于用于表達(dá)抗體的宿主細(xì)胞。因?yàn)橛糜诒磉_(dá)作為潛在療法的重組糖蛋白(例如抗體)的細(xì)胞類型很少是天然細(xì)胞，所以可以期望抗體糖基化模式的變異(見例如hse等，1997,j.biol.chem.272:9062-9070)。除了宿主細(xì)胞的選擇以外，在抗體的重組生產(chǎn)期間影響糖基化的因素包括生長模式、培養(yǎng)基配制、培養(yǎng)密度、氧合作用、ph、純化流程等等。已提出多種方法來改變具體宿主生物中實(shí)現(xiàn)的糖基化模式，包括引入或過表達(dá)涉及寡糖生產(chǎn)的某些酶(美國專利號(hào)5,047,335；5,510,261和5,278,299)。糖基化或某些類型的糖基化可以從糖蛋白上酶促去除，例如使用內(nèi)切糖苷酶h(endoh)來去除。另外，重組宿主細(xì)胞可以被遺傳工程改造為在加工某些類型的多糖時(shí)有缺陷。這些技術(shù)和相似的技術(shù)是本領(lǐng)域公知的。其它修飾方法包括使用本領(lǐng)域已知的偶聯(lián)技術(shù)，包括但不限于酶促手段、氧化取代和螯合。修飾可以被用于例如結(jié)合用于免疫測定法的標(biāo)簽。經(jīng)修飾的e3多肽使用本領(lǐng)域確定的步驟制造，并可使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)篩選，其中一些描述于下文和實(shí)施例中。其它抗體修飾包括如1999年11月18日公開的pct公開no.wo99/58572中所述經(jīng)修飾的抗體。除了指向靶分子的結(jié)合結(jié)構(gòu)域以外，這些抗體包含效應(yīng)物結(jié)構(gòu)域，其具有與人免疫球蛋白重鏈的恒定結(jié)構(gòu)域的全部或部分基本同源的氨基酸序列。這些抗體能夠結(jié)合靶分子而不引發(fā)顯著的補(bǔ)體依賴型裂解，或細(xì)胞介導(dǎo)的靶標(biāo)破壞。在一些實(shí)施方式中，效應(yīng)物結(jié)構(gòu)域能夠顯著結(jié)合fcrn和/或fcγriib。這些典型地基于源于兩個(gè)或更多人免疫球蛋白重鏈ch2結(jié)構(gòu)域的嵌合結(jié)構(gòu)域。以這種方式修飾的抗體尤其適用于慢性抗體療法，以避免炎癥和常規(guī)抗體療法的其它不良反應(yīng)。本發(fā)明還利用包含一個(gè)或多個(gè)來自本發(fā)明抗體或多肽的片段或區(qū)域的融合蛋白。在一些實(shí)施方式中，提供下述融合多肽，所述融合多肽包含seqidno.2(wo2004/058184的圖1b)中所示可變輕鏈區(qū)的至少10個(gè)連續(xù)氨基酸和/或seqidno.1(wo2004/058184的圖1a)的可變重鏈區(qū)的至少10個(gè)氨基酸。在另一實(shí)施方式中，融合多肽包含e3輕鏈可變區(qū)和/或重鏈可變區(qū)，如seqidnos.1和2(wo2004/058184的圖1a和1b)中所示。在另一實(shí)施方式中，融合多肽包含一個(gè)或多個(gè)e3的cdr。還在其它一些實(shí)施方式中，融合多肽包含抗體e3的cdrh3和/或cdrl3。在另一實(shí)施方式中，融合多肽包含cdrh1的氨基酸殘基l29、cdrh2的i50、cdrh3的w101和/或cdrh3的a103；和/或cdrl1的氨基酸殘基s28、cdrl1的n32、cdrl2的t51、cdrl3的91e和/或cdrl3的h92。就本發(fā)明的目的而言，e3融合蛋白含有一個(gè)或多個(gè)e3抗體，和天然分子中不與之結(jié)合的另一氨基酸序列，例如異源序列或來自另一區(qū)域的同源序列。示范性異源序列包括但不限于“標(biāo)簽”，例如flag標(biāo)簽或6his標(biāo)簽。標(biāo)簽是本領(lǐng)域公知的?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的方法，例如合成或重組地創(chuàng)建e3融合多肽。典型地，使用本文所述的重組方法通過制備表達(dá)編碼e3融合蛋白的多核苷酸來制造所述e3融合蛋白，盡管也可以通過本領(lǐng)域已知的其他手段(包括例如化學(xué)合成)來制備?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的方法來測試本發(fā)明抗體和多肽的下述能力，例如結(jié)合ngf；降低或抑制ngf生物活性；降低和/或阻斷e13.5小鼠三叉神經(jīng)神經(jīng)元的ngf-誘導(dǎo)的存活，所述方法中的一些描述于wo2004/058184的實(shí)施例中，尤其是wo2004/058184的實(shí)施例2和3中。本發(fā)明還利用下述組合物(包括藥物組合物)和試劑盒，其包含抗體e3，并且如本公開所明確的，包含本文所述任何或所有抗體和/或多肽。這類組合物和試劑盒可用于在個(gè)體中治療和/或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的一種或多種疼痛和/或下泌尿道癥狀。多核苷酸、載體和宿主細(xì)胞本發(fā)明還提供了經(jīng)分離的、編碼本發(fā)明抗體和多肽(包括包含wo2004058184的圖1a和1b中所示輕鏈和重鏈可變區(qū)的多肽序列的抗體)的多核苷酸，和用于本發(fā)明方法中的、包含所述多核苷酸的載體和宿主細(xì)胞。因此，多核苷酸(或組合物，包括藥物組合物)可包括編碼以下任何的多核苷酸：(a)抗體e3；(b)抗體e3的片段或區(qū)域；(c)seqidno.17(wo2004/058184的圖1b)中所示抗體e3的輕鏈；(d)seqidno.16(wo2004/058184的圖1a)中所示抗體e3的重鏈；(e)來自抗體e3輕鏈和/或重鏈的一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)；(f)seqidnos.3-8(wo2004/058184的圖1a和1b)中所示抗體e3的一個(gè)或多個(gè)cdr(1、2、3、4、5或6個(gè)cdr)；(g)來自seqidno.5(wo2004/058184的圖1a)中所示抗體e3重鏈的cdrh3；(h)來自seqidno.8(wo2004/058184的圖1b)中所示抗體e3輕鏈的cdrl3；(i)來自seqidnos.6-8(wo2004/058184的圖1b)中所示抗體e3輕鏈的三個(gè)cdr；(j)來自seqidno.3-5(wo2004/058184的圖1a)中所示抗體e3重鏈的三個(gè)cdr；(k)來自seqidnos3-8(wo2004/058184的圖1a和1b)中所示抗體e3輕鏈的三個(gè)cdr和重鏈的三個(gè)cdr；或(l)包含(b)到(k)中任一項(xiàng)的抗體。在一些實(shí)施方式中，多核苷酸包含seqidnos.76和77(wo2004/058184的圖2和3)中所示多核苷酸之一或二者。在另一方面中，本發(fā)明利用了保藏號(hào)為atccno.pta-4893或atccno.pta-4894的、編碼e3輕鏈的經(jīng)分離的多核苷酸。在另一方面中，本發(fā)明利用了保藏號(hào)為atccno.pta-4895的、編碼e3重鏈的莖分離的多核苷酸。還在另一方面中，本發(fā)明利用了包含以下的經(jīng)分離的多核苷酸：(a)由保藏號(hào)為atccno.pta-4894的多核苷酸編碼的可變區(qū)和(b)由保藏號(hào)為atccno.pta-4895的多核苷酸編碼的可變區(qū)。在另一方面中，本發(fā)明利用了包含以下的經(jīng)分離的多核苷酸：(a)一個(gè)或多個(gè)由保藏號(hào)為atccno.pta-4894的多核苷酸編碼的cdr；和/或(b)一個(gè)或多個(gè)由保藏號(hào)為atccno.pta-4895的多核苷酸編碼的cdr。atcc登錄號(hào)nos.pta-4893、pta-4894和pta-4895下的保藏描述于wo2004/058184中，所述wo2004/058184的內(nèi)容整體并入本文?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的步驟制造編碼本文所述任何抗體(包括抗體片段)和多肽的多核苷酸。在另一方面中，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的、包含任何本發(fā)明多核苷酸的組合物(例如藥物組合物)。在一些實(shí)施方式中，組合物包含含有編碼本文所述e3抗體的多核苷酸的表達(dá)載體。在其它一些實(shí)施方式中，組合物包含含有編碼本文所述任何抗體或多肽的多核苷酸的表達(dá)載體。還在其它一些實(shí)施方式中，組合物包含wo2004/058184的圖2和3中所示多核苷酸任一或二者。表達(dá)載體和多核苷酸組合物的施用在本文中進(jìn)一步描述。在另一方面中，本發(fā)明提供了制造用于下述方法中的任何本文所述多核苷酸的方法，所述方法用于治療或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀。與任何這類序列互補(bǔ)的多核苷酸也包括在本發(fā)明內(nèi)。多核苷酸可以是單鏈(編碼鏈或反義鏈)或雙鏈的，并且可以是dna(基因組、cdna或合成的)或rna分子。rna分子包括含有內(nèi)含子并以一對(duì)一的方式對(duì)應(yīng)于dna分子的hnrna分子，和不含內(nèi)含子的mrna分子。本發(fā)明多核苷酸中可存在，但不必須存在其它編碼或非編碼的序列，并且多核苷酸可以但不必須與其它分子和/或支持材料連接。多核苷酸可包含天然序列(即編碼抗體或其部分的內(nèi)源序列)，或可包含這樣的序列的變體。多核苷酸變體含有一個(gè)或多個(gè)取代、添加、缺失和/或插入，使得所編碼的多肽的免疫反應(yīng)性相對(duì)于天然免疫反應(yīng)性分子而言不減小。通?？梢匀绫疚乃鲈u(píng)價(jià)對(duì)編碼的多肽的免疫反應(yīng)性的影響。變體優(yōu)選地與編碼天然抗體或其部分的多核苷酸序列展示至少約70％的同一性、更優(yōu)選地至少約80％的同一性，最優(yōu)選地至少約90％的同一性。如果如下文所述針對(duì)最大對(duì)應(yīng)性比對(duì)時(shí)兩條序列中的核苷酸或氨基酸序列相同，則稱兩條多核苷酸或多肽序列是“相同的”。兩條序列之間的比較典型地如下進(jìn)行：通過在比較窗口上比較序列來鑒定和比較局部區(qū)域的序列相似性。在本文中使用時(shí)，“比較窗口”是指至少約20個(gè)、通常30到約75個(gè)、40到約50個(gè)連續(xù)位置的區(qū)段，在其中可以在兩條序列最佳排列后將一條序列與具有相同連續(xù)位置數(shù)的參照序列比較?？梢允褂胠asergene生物信息學(xué)軟件套裝(dnastar,inc.,madison,wi)中的megalign程序，使用默認(rèn)參數(shù)進(jìn)行用于比較的最佳序列比對(duì)。該程序植入以下參考文獻(xiàn)中所述的若干比對(duì)方案：dayhoff,m.o.(1978)amodelofevolutionarychangeinproteins-matricesfordetectingdistantrelationships.indayhoff,m.o.(ed.)atlasofproteinsequenceandstructure,nationalbiomedicalresearchfoundation,washingtondc第5卷,suppl.3,第345-358頁；heinj.,1990,unifiedapproachtoalignmentandphylogenes第626-645頁methodsinenzymologyvol.183,academicpress,inc.,sandiego,ca；higgins,d.g.andsharp,p.m.,1989,cabios5:151-153；myers,e.w.andmullerw.,1988,cabios4:11-17；robinson,e.d.,1971,comb.theor.11:105；santou,n.,nes,m.,1987,mol.biol.evol.4:406-425；sneath,p.h.a.andsokal,r.r.,1973,numericaltaxonomytheprinciplesandpracticeofnumericaltaxonomy,freemanpress,sanfrancisco,ca；wilbur,w.j.和lipman,d.j.,1983,proc.natl.acad.sci.usa80:726-730。優(yōu)選地，“序列同一性百分比”通過在至少20個(gè)位置的比較窗口上比較兩條最佳比對(duì)的序列來測定，其中比較窗口中的多核苷酸或多肽序列部分與用于兩條序列最佳比對(duì)的參照序列(其不包含添加或缺失)相比，可包含20％或更少、通常5％到15％、或10％到12％的添加或缺失(即缺口)。所述百分比如下計(jì)算：測定兩條序列中存在相同核酸堿基或氨基酸殘基的位置數(shù)量得到匹配位置數(shù)，用匹配位置數(shù)除以參照序列中位置總數(shù)(即窗口大小)，并將結(jié)果乘以100，得到序列同一性百分比。變體也可以，或替代性地，與天然基因或其部分或互補(bǔ)體基本同源。這類多核苷酸變體能夠在中度嚴(yán)格條件下與天然存在的編碼天然抗體的dna序列(或其互補(bǔ)序列)雜交。合適的“中度嚴(yán)格條件”包括在5xssc、0.5％sds、1.0mmedta(ph8.0)溶液中預(yù)洗滌；在50℃-65℃、5xssc中雜交過夜；然后在65℃下20分鐘洗滌兩次，每次使用含0.1％sds的2x、0.5x和0.2xssc。在本文中使用時(shí)，“高度嚴(yán)格條件”或“高嚴(yán)格度條件”是：(1)使用低離子強(qiáng)度和高溫用于洗滌，例如50℃下0.015m氯化鈉/0.0015m檸檬酸鈉/0.1％十二烷基硫酸鈉；(2)在雜交期間使用變性劑例如甲酰胺，例如在42℃下使用含0.1％牛血清白蛋白的50％(v/v)甲酰胺/0.1％ficoll/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/含750mm氯化鈉、75mm檸檬酸鈉的50mmph6.5的磷酸鈉緩沖液；或(3)在42℃下使用50％甲酰胺、5xssc(0.75mnacl、0.075m檸檬酸鈉)、50mm磷酸鈉(ph6.8)、0.1％焦磷酸鈉、5xdenhardt’s溶液、經(jīng)超聲處理的鮭魚精子dna(50μg/ml)、0.1％sds和10％硫酸葡聚糖，在42℃下于0.2xssc(氯化鈉/檸檬酸鈉)和55℃下于50％甲酰胺中洗滌，之后在55℃下進(jìn)行由含edta的0.1xssc組成的高嚴(yán)格度洗滌。需要調(diào)節(jié)因素如離子強(qiáng)度等等時(shí)，技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道如何調(diào)節(jié)溫度、離子強(qiáng)度等等。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道，由于遺傳密碼子的結(jié)果，存在編碼本文所述多肽的許多核苷酸序列。這些多核苷酸中的一些具有與任何天然基因的核苷酸序列最小的同源性。然而，由于密碼子使用差異而變化的多核苷酸是本發(fā)明特別考慮的。另外，包含本文提供的多核苷酸序列的基因的等位基因在本發(fā)明的范圍內(nèi)。等位基因是由于一個(gè)或多個(gè)突變(例如核苷酸的缺失、添加和/或取代)而被改變的內(nèi)源基因。得到的mrna和蛋白質(zhì)可能，但不必須具有改變的結(jié)構(gòu)或功能。等位基因可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(例如雜交、擴(kuò)增和/或數(shù)據(jù)庫序列比較)鑒定。可以使用化學(xué)合成、重組方法或pcr獲得用于本發(fā)明中的多核苷酸?；瘜W(xué)多核苷酸合成方法是本領(lǐng)域公知的，并且不需要在本文中詳細(xì)描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠使用本文提供的序列和商業(yè)dna合成儀生產(chǎn)期望的dna序列。為了使用重組方法制備多核苷酸，可以將包含期望序列的多核苷酸插入合適的載體中，并接著將所述載體引入合適的宿主細(xì)胞中用于復(fù)制和擴(kuò)增，如本文所進(jìn)一步討論的?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的任何手段將多核苷酸插入宿主細(xì)胞中。通過直接攝取、胞吞作用、轉(zhuǎn)染、f-交配或電穿孔引入外源多核苷酸來轉(zhuǎn)化細(xì)胞。一旦被引入，外源多核苷酸可以作為不整合的載體(例如質(zhì)體)維持在細(xì)胞中，或者被整合進(jìn)宿主細(xì)胞基因組中?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域公知的方法從宿主細(xì)胞中分離藉此擴(kuò)增的多核苷酸。見例如sambrook等，(1989)。或者，pcr允許復(fù)制dna序列。pcr技術(shù)是本領(lǐng)域公知的，并描述于美國專利nos.4,683,195、4,800,159、4,754,065和4,683,202以及pcr:thepolymerasechainreaction,mullis等編,birkauswerpress,boston(1994)中?？梢酝ㄟ^使用合適載體中經(jīng)分離的dna并將其插入合適的宿主細(xì)胞中來獲得rna。當(dāng)細(xì)胞復(fù)制并將dna轉(zhuǎn)錄成為rna時(shí)，可隨后使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法，例如sambrook等，(1989)中公開的方法分離rna。合適的克隆載體可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)構(gòu)建，或者可選自本領(lǐng)域中可獲得的大量克隆載體。盡管選擇的克隆載體可根據(jù)要使用的宿主細(xì)胞而變化，但是有用的克隆載體通常應(yīng)當(dāng)具有自我復(fù)制的能力，可具有具體限制性內(nèi)切核酸酶的單個(gè)靶標(biāo)，和/或可帶有下述標(biāo)記物的基因，所述標(biāo)記物可用于選擇含有所述載體的克隆。合適的例子包括質(zhì)粒和細(xì)菌病毒，例如puc18、puc19、bluescript(例如pbssk+)及其衍生物、mp18、mp19、pbr322、pmb9、cole1、pcr1、rp4、噬菌體dna和穿梭載體例如psa3和pat28。這些和許多其它克隆載體可得自商業(yè)供應(yīng)者例如biorad、strategene和invitrogen。表達(dá)載體通常是可復(fù)制的多核苷酸構(gòu)建體，其含有根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸。這暗示了表達(dá)載體必須在宿主細(xì)胞中可復(fù)制，或者作為附加體，或者作為染色體dna的整體部分。合適的表達(dá)載體包括但不限于質(zhì)粒、病毒載體(包括腺病毒、腺伴隨病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒)、粘粒和pct公開no.wo87/04462中公開的表達(dá)載體。載體組成可通常包括但不限于以下一個(gè)或多個(gè)：信號(hào)序列；復(fù)制起點(diǎn)；一個(gè)或多個(gè)標(biāo)記物基因；合適的轉(zhuǎn)錄控制元件(例如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和終止子)。為了表達(dá)(即翻譯)，通常也需要一個(gè)或多個(gè)翻譯控制元件，例如核糖體結(jié)合位點(diǎn)、翻譯起點(diǎn)和終止密碼子。含有感興趣的多核苷酸的載體可以通過大量合適手段中任何引入宿主細(xì)胞中，所述手段包括電穿孔，使用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、deae-葡聚糖或其它物質(zhì)的轉(zhuǎn)染；微粒轟擊；脂質(zhì)轉(zhuǎn)染；和注射(例如當(dāng)載體是感染性物質(zhì)如牛痘病毒時(shí))。引入載體或多核苷酸的選擇通常取決于宿主細(xì)胞的特性。本發(fā)明還利用包含本文所述任何多核苷酸的宿主細(xì)胞。為了分離編碼感興趣的抗體、多肽或蛋白質(zhì)的基因的目的，可以使用能夠過表達(dá)異源dna的任何宿主細(xì)胞。哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞的非限制性例子包括但不限于cos、hela和cho細(xì)胞。還見pct公開no.wo87/04462。合適的非哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞包括原核生物(例如e.coli或b.subtillis)和酵母(例如s.cerevisae、s.pombe；或k.lactis)。優(yōu)選地，宿主細(xì)胞以5倍于、更優(yōu)選地10倍于、進(jìn)一步更優(yōu)選地20倍于宿主細(xì)胞中(如果存在的話)相應(yīng)感興趣的內(nèi)源抗體或蛋白質(zhì)的水平表達(dá)cdna。通過免疫測定法或facs，針對(duì)對(duì)ngf的特異性結(jié)合篩選宿主細(xì)胞。能夠鑒定過表達(dá)感興趣的抗體或蛋白質(zhì)的細(xì)胞。用于本發(fā)明方法中的組合物用于本發(fā)明方法中的組合物(與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀有關(guān))包括有效量的抗-ngf拮抗劑抗體，在一些實(shí)施方式中還包括可藥用的賦形劑。這類組合物的例子以及如何配制也描述于本文中。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體結(jié)合ngf并且不與相關(guān)的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(例如nt3、nt4/5和/或bdnf)顯著地交叉反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體不與不利的免疫應(yīng)答相關(guān)。在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體識(shí)別人ngf。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體是人的。還在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體被人源化(例如本文所述抗體e3)。還在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體包含不引發(fā)不想要或不期望的免疫應(yīng)答的恒定區(qū)，所述免疫應(yīng)答例如為抗體介導(dǎo)的裂解或adcc。在其它一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體包含抗體e3的一個(gè)或多個(gè)cdr(例如1、2、3、4、5或者在一些實(shí)施方式中所有6個(gè)來自e3的cdr)。應(yīng)當(dāng)理解組合物可包含多于一種ngf拮抗劑。例如，組合物可包含一種ngf拮抗劑的多于一個(gè)成員(例如識(shí)別ngf不同表位的抗-ngf抗體的混合物)，以及不同種類ngf拮抗劑的多個(gè)成員(例如抗-ngf抗體和ngf抑制性化合物)。其它示范性組合物包括識(shí)別相同表位的多于一種抗-ngf抗體，結(jié)合不同ngf表位的不同種類的抗-ngf抗體，或不同的ngf抑制性化合物。本發(fā)明中使用的組合物可包含多于一種可藥用載劑、賦形劑或穩(wěn)定劑(remington:thescienceandpracticeofpharmacy，第20版，(2000)lippincottwilliams和wilkins編k.e.hoover.)，其為凍干配制物或水性溶液的形式?？伤幱觅x形劑在下文進(jìn)一步描述?？?ngf拮抗劑抗體及其組合物也可以與發(fā)揮增強(qiáng)和/或補(bǔ)充藥劑有效性作用的其它藥劑組合使用，例如與疼痛和/或下泌尿道癥狀的治療或預(yù)防中使用的藥劑組合物使用?？?ngf拮抗劑抗體可以與一種或多種這類藥劑同時(shí)、先后或獨(dú)立地組合使用。抗-ngf抗體可以與一種或多種其它藥物組合(或作為其任何組合)施用。抗-ngf抗體可與另一藥理學(xué)活性化合物，或與兩種或更多其它藥理學(xué)活性組合物有用地組合，用于治療與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀(luts)。例如，如上文定義的抗-ngf抗體可以與選自以下的一種或多種藥劑同時(shí)、先后或獨(dú)立地組合施用：·阿片類鎮(zhèn)靜劑，如嗎啡、海洛因、氫嗎啡酮、羥嗎啡酮、左啡諾、左洛啡烷、美沙酮、哌替啶、芬太尼、可卡因、可待因、雙氫可待因、羥考酮、氫可酮、右丙氧芬、納美芬、納洛芬、納洛酮、納曲酮、丁丙諾啡、布托啡諾、納布啡或噴他佐辛；·非類固醇抗炎藥(nsaid)，如阿司匹林、雙氯芬酸、二氟尼柳(diflusinal)、依托度酸、芬布芬、非諾洛芬、氟苯柳、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、萘丁美酮、萘普生、尼美舒利、硝基氟吡洛芬、奧沙拉秦、奧沙普秦、奧沙普秦、吡羅昔康、柳氮磺吡啶、舒林酸、托美丁或佐美酸；·巴比妥酸鹽鎮(zhèn)靜藥，如異戊巴比妥、阿普比妥、仲丁巴比妥、布他比妥(butabital)、甲苯比妥、美沙比妥、美索比妥、戊巴比妥、碘芬布酸、司可巴比妥、他布比妥、theamylal或硫噴妥鈉；·具有鎮(zhèn)靜作用的苯并二氮卓類，如氯氮卓、氯卓酸鉀、地西泮、氟西泮、勞拉西泮、奧沙西泮、替馬西泮或三唑侖；·具有鎮(zhèn)靜作用的h1拮抗劑，如苯海拉明、美吡拉敏、異丙嗪、氯苯那敏或氯環(huán)力嗪；·鎮(zhèn)靜劑，如格魯米特、甲丙氨酯、甲喹酮或氯醛比林；·骨骼肌松弛劑，如巴氯芬、卡立普多、氯唑沙宗、環(huán)苯扎林、美索巴莫或orphrenadine；·nmda受體拮抗劑，如右美沙芬((+)-3-羥基-n-甲基嗎啉)或其代謝物右啡烷((+)-3-羥基-n-甲基嗎啉)、氯胺酮、美金剛、吡咯喹啉醌(pyrroloquinolinequinine)、順式-4-(膦?；谆?-2-哌啶甲酸、布地品、en-3231(一種嗎啡與右美沙芬的組合制劑)、托吡酯、neramexane或perzinfotel，包括nr2b拮抗劑如艾芬地爾、traxoprodil或(–)-(r)-6-{2-[4-(3-氟苯基)-4-羥基-1-哌啶基]-1-羥乙基-3,4-二氫-2(1h)-喹啉酮；·α-腎上腺能藥，如多沙唑嗪、坦洛新、可樂定、胍法辛、dexmetatomidine、莫達(dá)非尼、特拉唑嗪、吲哚拉明、阿夫唑嗪、silodosin或4-氨基-6,7-二甲氧基-2-(5-甲烷-磺酰胺-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基)-5-(2-吡啶基)喹唑啉；哌唑嗪·三環(huán)抗抑郁劑，如地昔帕明、丙米嗪、阿米替林或去甲替林；·抗驚厥劑，如卡馬西平、拉莫三嗪、托吡酯(topiratmate)或丙戊酸鹽；·速激肽(nk)拮抗劑，特別是nk-3、nk-2或nk-1拮抗劑，如(αr,9r)-7-[3,5-雙(三氟甲基)芐基]-8,9,10,11-四氫-9-甲基-5-(4-甲苯基)-7h-[1,4]diazocino[2,1-g][1,7]-萘啶-6-13-二酮(tak-637)、5-[[(2r,3s)-2-[(1r)-1-[3,5-雙(三氟甲基)苯基]乙氧基-3-(4-氟苯基)-4-嗎啉基]-甲基]-1,2-二氫-3h-1,2,4-三唑-3-酮(mk-869)、阿瑞吡坦(aprepitant)、拉奈匹坦、達(dá)匹坦或3-[[2-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-甲氨基]-2-苯基哌啶(2s,3s)；·毒蕈堿拮抗劑，如奧昔布寧、托特羅定、fesoterodine、5-羥甲基托特羅定、丙哌維林、曲司氯銨、達(dá)非那新、solifenacin、替米維林和異丙托銨；·cox-2選擇性抑制劑，如塞來考昔、羅非考昔、帕瑞考昔、伐地考昔、地拉考昔、艾托考昔或羅美昔布(lumiracoxib)；·煤焦油鎮(zhèn)痛藥，特別是撲熱息痛/對(duì)乙酰氨基酚；·精神安定藥，如氟哌利多、氯丙嗪、氟哌啶醇、奮乃靜、硫利達(dá)嗪、美索達(dá)嗪、三氟拉嗪、氟奮乃靜、氯氮平、奧氮平、利培酮、齊拉西酮、喹硫平、舍吲哚、阿立哌唑、索奈哌唑、布南色林、伊潘立酮、哌羅匹隆、雷氯必利、佐替平、bifeprunox、阿莫沙平、lurasidone、氨磺必利、balaperidone、palindore、依利色林、奧沙奈坦、利莫那班、meclinertant、或沙立佐坦；·香草酸受體激動(dòng)劑(如resinferatoxin)或拮抗劑(如capsazepine)；·β-腎上腺素能藥如普萘洛爾；·局部麻醉劑如美西律；·皮質(zhì)類固醇如地塞米松；·5-ht受體激動(dòng)劑或拮抗劑(如苯噻啶)，特別是5-ht1b/1d激動(dòng)劑如依來曲坦、舒馬曲坦、那拉曲坦、佐米曲坦或利扎曲坦；·5-ht2a受體拮抗劑，如r(+)-α-(2,3-二甲氧基-苯基)-1-[2-(4-氟苯基乙基)]-4-哌啶甲醇(mdl-100907)；·膽堿能(煙堿)鎮(zhèn)痛藥，如ispronicline(tc-1734)、(e)-n-甲基-4-(3-吡啶基)-3-丁烯-1-胺(rjr-2403)、(r)-5-(2-氮雜環(huán)丁烷基甲氧基)-2-氯吡啶(abt-594)或尼古丁；·曲馬多(商標(biāo))；·pde-5抑制劑，如5-[2-乙氧基-5-(4-甲基-1-哌嗪基-磺?；?苯基]-1-甲基-3-正丙基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(西地那非)、(6r,12ar)-2,3,6,7,12,12a-六氫-2-甲基-6-(3,4-亞甲二氧苯基)-哌嗪基[2',1':6,1]-吡啶并[3,4-b]吲哚-1,4-二酮(ic-351或tadalafil)、2-[2-yyj-5-(4-乙基-哌嗪-1-基-1-磺酰基)-苯基]-5-甲基-7-丙基-3h-咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-酮(伐地那非)、5-(5-乙?；?2-丁氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-乙基-3-氮雜環(huán)丁烷基)-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、5-(5-乙?；?2-丙氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-異丙基-3-氮雜環(huán)丁烷基)-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺?；?嘧啶-3-基]-3-乙基-2-[2-甲氧基乙基]-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、4-[(3-氯-4-甲氧基芐基)氨基]-2-[(2s)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-基]-n-(嘧啶-2-基甲基)嘧啶-5-羧酰胺、3-(1-甲基-7-氧代-3-丙基-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-n-[2-(1-甲基吡咯啉-2-基)乙基]-4-丙氧基苯磺酰胺；·α-2-δ配體，如加巴噴丁、普加巴林、3-甲基加巴噴丁、(1α,3α,5α)(3-氨甲基-二環(huán)[3.2.0]七-3-基)-乙酸、(3s,5r)-3-氨甲基-5-甲基庚酸、(3s,5r)-3-氨基-5-甲基庚酸、(3s,5r)-3-氨基-5-甲基辛酸、(2s,4s)-4-(3-氯苯氧基)脯氨酸、(2s,4s)-4-(3-氟芐基)-脯氨酸、[(1r,5r,6s)-6-(氨甲基)二環(huán)[3.2.0]七-6-基]乙酸、3-(1-氨甲基-環(huán)己基甲基)-4h-[1,2,4]噁二唑-5-酮、c-[1-(1h-四唑-5-基甲基)-環(huán)庚基]-甲胺、(3s,4s)-(1-氨甲基-3,4-二甲基-環(huán)戊基)-乙酸、(3s,5r)-3-氨基-5-甲基-壬酸、(3r,4r,5r)-3-氨基-4,5-二甲基庚酸和(3r,4r,5r)-3-氨基-4,5-二甲基庚酸；(3s,5r)-3-氨甲基-5-甲基辛酸；·大麻素；·代謝型谷氨酸亞型1受體(mglur1)拮抗劑；·血清素重?cái)z取抑制劑，如舍曲林、舍曲林代謝物去甲舍曲林、氟西汀、諾氟西汀(氟西汀去甲基代謝物)、氟伏沙明、帕羅西汀、西酞普蘭、西酞普蘭代謝物去甲西酞普蘭、依他普侖、d,l-芬氟拉明、非莫西汀、伊福西汀、cyanodothiepin、利托西汀、達(dá)泊西汀、奈法唑酮、西文氯胺和曲唑酮；·去甲腎上腺素(降腎上腺素；)重?cái)z取抑制劑，如馬普替林、洛非帕明、mirtazepine、羥丙替林、非唑拉明、托莫西汀、米安色林、安非他酮(buproprion)、安非他酮代謝物羥基安非他酮(hydroxybuproprion)、諾米芬辛和維洛沙秦特別是選擇性去甲腎上腺素重?cái)z取抑制劑，如瑞波西汀，特別是(s,s)-瑞波西汀；·血清素-去甲腎上腺素重?cái)z取雙重抑制劑，如文拉法辛、文拉法辛代謝物o-去甲文拉法辛、氯米帕明、氯米帕明代謝物去甲氯米帕明、度洛西汀、米那普侖和丙米嗪；·誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inos)抑制劑，例如s-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-l-高半胱氨酸、s-[2-[(1-亞氨基乙基)-氨基]乙基]-4,4-二氧代-l-半胱氨酸、s-[2-[(1-亞氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-l-半胱氨酸、(2s,5z)-2-氨基-2-甲基-7-[(1-亞氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸、2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羥基-1-(5-噻唑基)-丁基]硫代]-5-氯-3-吡啶腈；2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羥基-1-(5-噻唑基)丁基]硫代]-4-氯芐腈、(2s,4r)-2-氨基-4-[[2-氯-5-(三氟甲基)苯基]硫代]-5-噻唑丁醇、2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羥基-1-(5-噻唑基)丁基]硫代]-6-(三氟甲基)-3吡啶腈、2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羥基-1-(5-噻唑基)丁基]硫代]-5-氯芐腈、n-[4-[2-(3-氯芐基氨基)乙基]苯基]噻吩-2-羧酸脒(carboxamidine)、或胍基乙基二硫化物；·乙酰膽堿酯酶抑制劑，例如多奈哌齊；·前列腺素e2亞型4(ep4)拮抗劑如n-[({2-[4-(2-乙基-4,6-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]吡啶-1-基)苯基]乙基}氨基)-羰基]-4-甲基苯磺酰胺或4-[(1s)-1-({[5-氯-2-(3-氟苯氧基)吡啶-3-基]羰基}氨基)乙基]苯甲酸；·白細(xì)胞三烯b4拮抗劑；例如1-(3-聯(lián)苯-4-基甲基-4-羥基-色滿-7-基)-環(huán)戊烷羧酸(cp-105696)、5-[2-(2-羧乙基)-3-[6-(4-甲氧基苯基)-5e-己烯基]氧苯氧基]-戊酸(ono-4057)或dpc-11870，·5-脂氧合酶抑制劑，如齊留通、6-[(3-氟-5-[4-甲氧基-3,4,5,6-四氫-2h-吡喃-4-基])苯氧基-甲基]-1-甲基-2-喹諾酮(zd-2138)、或2,3,5-三甲基-6-(3-吡啶基甲基),1,4-苯醌(cv-6504)；·鈉通道阻斷劑，如利多卡因；或布比卡因(bupivicaine)·5-ht3拮抗劑，如昂丹司瓊；·糖胺聚糖層替代物和消炎藥，例如戊聚糖多硫酸鹽(elmiron–trademark)；·β-3拮抗劑，如ym-178(米拉貝隆(mirabegron)或2-氨基-n-[4-[2-[[(2r)-2-羥基-2-苯乙基]氨基]乙基]苯基]-4-噻唑乙酰胺)、索拉貝隆(solabegron)、kuc-7483(利托貝隆(ritobegron)或2-[4-[2-[[(1s,2r)-2-羥基-2-(4-羥苯基)-1-甲基乙基]氨基]乙基]-2,5-二甲基苯氧基]-乙酸)或ak-134；·抗-組胺，如羥嗪；·h2-拮抗劑，如西米替?。换蚶啄崽娑　は跛徙y；·類固醇；·多柔比星；·硫酸軟骨素；·色甘酸二鈉(disodiumchromoglycate)；·奧昔氯生(clorpactin–商標(biāo))；和·免疫抑制藥，如環(huán)孢霉素及其可藥用鹽和溶劑合物。施用抗-ngf拮抗劑抗體可以通過任何合適的途徑對(duì)個(gè)體(例如與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀)施用抗-ngf拮抗劑抗體。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)明白，本文所述例子不旨在限制，而是闡述可獲得的技術(shù)。因此，在一些實(shí)施方式中，根據(jù)已知方法將抗-ngf拮抗劑抗體施用給個(gè)體，所述方法例如為靜脈內(nèi)施用，例如作為巨丸劑或通過在一段時(shí)間中連續(xù)輸注，通過肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、舌下、滑膜內(nèi)，通過吹入、椎管內(nèi)、口、吸入、經(jīng)皮或局部途徑施用。施用可以是全身性的，例如靜脈內(nèi)施用，或者是局部的?？缮虡I(yè)獲得的針對(duì)液體配制物的霧化器，包括噴射霧化器(jetnebulizer)和超聲霧化器(ultrasonicnebulizer)可用于施用。液體配制物可以被直接霧化，并且可以在重建后將凍干粉末霧化。或者，抗-ngf拮抗劑抗體可以使用碳氟化合物(fluorocarbon)配制物和測定劑量(metereddose)的吸入器霧化，或者作為凍干和經(jīng)研磨的粉末被吸入。在一個(gè)實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體通過位點(diǎn)特異性或定向局部遞送技術(shù)被施用。位點(diǎn)特異性或定向局部遞送技術(shù)的例子包括抗-ngf拮抗劑抗體的多種可植入的補(bǔ)給來源，或者局部遞送導(dǎo)管如輸注導(dǎo)管、留置導(dǎo)管(indwellingcatheter)或針狀導(dǎo)管、合成移植物、外膜封皮(adventitialwrap)、分流器和支架，或其它可植入的設(shè)備、位點(diǎn)特異性載劑、直接注射或直接應(yīng)用。見例如pct公開no.wo00/53211和美國專利no.5,981,568。可以使用以下用于施用：抗體例如e3或其片段(例如fab、fab’、f(ab’)2、fv、fc等等)，例如單鏈(scfv)，其突變體，包含抗體部分的融合蛋白，和包含具有所需特異性的抗原ngf識(shí)別位點(diǎn)的任何其它經(jīng)修飾的構(gòu)型。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體可以單獨(dú)施用。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體和可藥用賦形劑可以處于多種配制物中。可藥用賦形劑是本領(lǐng)域已知的，并且是有助于藥理學(xué)有效物質(zhì)施用的相對(duì)惰性的物質(zhì)。例如，賦形劑可以賦予形狀或稠度，或發(fā)揮稀釋劑的作用。合適的賦形劑包括但不限于穩(wěn)定劑、潤濕劑和乳化劑、用于改變滲量(osmolarity)的鹽、封裝劑、緩沖液和皮膚穿透增強(qiáng)劑。用于腸胃外和非注射藥物遞送的賦形劑公開于remington,thescienceandpracticeofpharmacy20thed.mackpublishing(2000)中。在一些實(shí)施方式中，這些藥劑被配制用于注射施用(例如腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)等等)。因此，這些藥劑可與可藥用運(yùn)載體例如鹽水、ringer’s溶液、右旋糖溶液等等組合。具體的給藥方案(即劑量、時(shí)間和重復(fù))應(yīng)取決于具體的個(gè)體和個(gè)體的醫(yī)療史?？?ngf抗體可以使用任何合適的方法施用，包括通過注射(例如腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)等等)施用?？?ngf抗體也可以通過吸入施用，或通過其它施用形式(例如口、粘膜、舌下)施用，如本文所述。通常，為了施用抗-ngf抗體，初始候選劑量可以為約2mg/kg。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，要施用的抗體濃度的范圍可從約0.1到約200mg/ml。優(yōu)選地，抗體的濃度為約0.5mg/ml、約1mg/ml、約2mg/ml、約3mg/ml、約4mg/ml、約5mg/ml、約6mg/ml、約7mg/ml、約8mg/ml、約9mg/ml、約10mg/ml、約11mg/ml、約12mg/ml、約13mg/ml、約14mg/ml、約15mg/ml、約16mg/ml、約17mg/ml、約18mg/ml、約19mg/ml、約20mg/ml、約21mg/ml、約22mg/ml、約23mg/ml、約24mg/ml、約25mg/ml、約26mg/ml、約27mg/ml、約28mg/ml、約29mg/ml、約30mg/ml、約31mg/ml、約32mg/ml、約33mg/ml、約34mg/ml、約35mg/ml、約36mg/ml、約37mg/ml、約38mg/ml、約39mg/ml、約40mg/ml、約41mg/ml、約42mg/ml、約43mg/ml、約44mg/ml、約45mg/ml、約46mg/ml、約47mg/ml、約48mg/ml、約49mg/ml、約50mg/ml、約51mg/ml、約52mg/ml、約53mg/ml、約54mg/ml、約55mg/ml、約56mg/ml、約57mg/ml、約58mg/ml、約59mg/ml、約60mg/ml、約70mg/ml、約80mg/ml、約90mg/ml、約100mg/ml或約110mg/ml。最優(yōu)選地，抗體的濃度選自由以下組成的組：約2mg/ml、約2.5mg/ml、約5mg/ml、約10mg/ml、約20mg/ml、約22mg/ml和約50mg/ml。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf抗體的施用模式包括每周一次、每2周一次、每3周一次、每4周一次，每5周一次、每6周一次、每7周一次、每8周一次、每9周一次、每10周一次、每15周一次、每20周一次、每25周一次或更久地施用一劑。在一些實(shí)施方式中，抗體每1個(gè)月、每2個(gè)月、每3個(gè)月、每4個(gè)月、每5個(gè)月、每6個(gè)月或更久施用一次。最優(yōu)選地，抗-ngf抗體每8周施用一次。可以通過常規(guī)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)監(jiān)測該療法的進(jìn)展。給藥方案(包括使用的ngf拮抗劑)可隨時(shí)間變化。在一些實(shí)施方式中，劑量的體積小于或等于約20ml、約15ml、約10ml、約5ml、約2.5ml、約1.5ml、約1.0ml、約0.75ml、約0.5ml、約0.25ml或約0.01ml。在一些實(shí)施方式中，劑量的體積為約20ml、約19ml、約18ml、約17ml、約16ml、約15ml、約14ml、約13ml、約12ml、約11ml、約10ml、約9ml、約8ml、約7ml、約6ml、約5ml、約4ml、約3ml、約2ml或約1ml?；蛘呒s20.5ml、約19.5ml、約18.5ml、約17.5ml、約16.5ml、約15.5ml、約14.5ml、約13.5ml、約12.5ml、約11.5ml、約10.5ml、約9.5ml、約8.5ml、約7.5ml、約6.5ml、約5.5ml、約4.5ml、約3.5ml、約2.5ml、約1.5ml或約0.5。或者約900μl、約800μl、約700μl、約600μl、約500μl、約400μl、約300μl、約200μl或約100μl，或者約950μl、約850μl、約750μl、約650μl、約550μl、約450μl、約350μl、約250μl、約150μl或約50μl。最優(yōu)選地，劑量體積小于或等于約2.5ml。根據(jù)一種優(yōu)選的實(shí)施方式，劑量含有少于或等于約0.5mg、約1mg、約2mg、約3mg、約4mg、約5mg、約6mg、約7mg、約8mg、約9mg、約10mg、約11mg、約12mg、約13mg、約14mg、約15mg、約16mg、約17mg、約18mg、約19mg、約20mg、約21mg、約22mg、約23mg、約24mg、約25mg、約26mg、約27mg、約28mg、約29mg、約30mg、約31mg、約32mg、約33mg、約34mg、約35mg、約36mg、約37mg、約38mg、約39mg、約40mg、約41mg、約42mg、約43mg、約44mg、約45mg、約46mg、約47mg、約48mg、約49mg、約50mg、約51mg、約52mg、約53mg、約54mg、約55mg、約56mg、約57mg、約58mg、約59mg、約60mg、約70mg、約80mg、約90mg、約100mg或約110mg抗體。最優(yōu)選地，劑量含有少于或等于約50mg抗體。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，劑量含有的抗體量為約1μg/kg、約10μg/kg、約20μg/kg、約50μg/kg、約100μg/kg、約200μg/kg、約500μg/kg、約1mg/kg、約2mg/kg、約3mg/kg、約4mg/kg、約5mg/kg、約6mg/kg、約7mg/kg、約8mg/kg、約9mg/kg、約10mg/kg或約11mg/kg(要施用所述劑量的哺乳動(dòng)物的質(zhì)量)。對(duì)在若干天或更長時(shí)間中重復(fù)施用而言，根據(jù)條件維持治療，直至期望的癥狀阻抑發(fā)生，或直至達(dá)到了降低疼痛的足夠治療水平。在一個(gè)實(shí)施方式中，給藥方案可包括施用約2mg/kg的初始劑量，然后是每周維持約1mg/kg抗-ngf抗體的每周維持劑量，或然后是每隔一周約1mg/kg的維持劑量。然而，其它給藥方案可以是有用的，取決于醫(yī)生希望實(shí)現(xiàn)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)衰變模式。例如在一些實(shí)施方式中，考慮一周一次到四次的給藥。甚至可以使用更不頻繁的給藥。就本發(fā)明的目的而言，抗-ngf拮抗劑抗體的合適劑量應(yīng)取決于使用的抗體(或其組合物)，要治療的疼痛或下泌尿道癥狀的類型和嚴(yán)重性，藥劑被施用是為了預(yù)防還是治療的目的，先前的治療，患者的臨床病史和對(duì)藥劑的應(yīng)答，和護(hù)理大夫(attendingphysician)的判斷力。典型地，臨床醫(yī)師(clinician)會(huì)施用抗-ngf拮抗劑抗體，直至達(dá)到實(shí)現(xiàn)期望結(jié)果的劑量。劑量和/或頻率可隨著治療過程而變化。經(jīng)驗(yàn)的考慮(例如半衰期)通常會(huì)有助于確定劑量。例如，與人免疫系統(tǒng)相容的抗體(例如人源化抗體或完全人抗體)可用于延長抗體的半衰期并防止抗體被宿主免疫系統(tǒng)攻擊。施用頻率可以隨治療過程測定和調(diào)整，并且通常(但不必須)以疼痛的治療和/或阻抑和/或改善和/或延遲為基礎(chǔ)?；蛘撸?ngf拮抗劑抗體的持久連續(xù)釋放配制物可以是適當(dāng)?shù)?。用于?shí)現(xiàn)持久釋放的多種配制物和設(shè)備是本領(lǐng)域已知的。在一些個(gè)體中，可能需要多于一次給藥。施用頻率可以隨治療過程確定和調(diào)整。例如，可以基于要治療的疼痛和/或下泌尿道癥狀的類型和嚴(yán)重性、藥劑被施用是為了預(yù)防還是治療的目的、先前的治療、患者的臨床病史和對(duì)藥劑的應(yīng)答、和護(hù)理大夫的判斷力來確定或調(diào)整施用頻率。典型地，臨床醫(yī)師會(huì)施用抗-ngf拮抗劑抗體(例如e3)，直至達(dá)到實(shí)現(xiàn)期望結(jié)果的劑量。在一些情況下，e3抗體的持久連續(xù)釋放配制物可以是適當(dāng)?shù)?。用于?shí)現(xiàn)持久釋放的多種配制物和設(shè)備是本領(lǐng)域已知的。在一個(gè)實(shí)施方式中，可在給予一次或多次ngf拮抗劑施用的個(gè)體中憑經(jīng)驗(yàn)確定抗-ngf拮抗劑抗體的劑量。給予個(gè)體遞增劑量的抗-ngf拮抗劑抗體。為了評(píng)價(jià)抗-ngf拮抗劑抗體的效力，可以監(jiān)測疼痛或下泌尿道癥狀的指示劑，例如疼痛數(shù)字評(píng)價(jià)量表(nrs)的改變、o’leary-sant間質(zhì)性膀胱炎癥狀指數(shù)(icsi)的改變、o’leary-sant間質(zhì)性膀胱炎問題指數(shù)(icpi)的改變、pelvicpainandurgency/frequency(puf)癥狀評(píng)分的改變和/或排尿變量(包括排尿頻率、夜尿頻率、失禁發(fā)作頻率、每次排尿排泄的平均體積、平均間質(zhì)性膀胱炎疼痛嚴(yán)重性、泌尿急性發(fā)作、平均睡眠擾動(dòng)評(píng)分、與性行為疼痛評(píng)分相關(guān)的平均疼痛評(píng)分、全局應(yīng)答評(píng)價(jià)、報(bào)告治療影響評(píng)價(jià)的專利、治療失敗、生物標(biāo)記物、安全性端點(diǎn)和/或藥物代謝動(dòng)力學(xué)度量)的改變。生物標(biāo)記物可包括ngf、糖蛋白-51(gp-51)、抗增殖因子(apf)和hb-表皮生長因子(hb-egf)等等。根據(jù)本發(fā)明方法的抗-ngf拮抗劑抗體的施用可以是連續(xù)或間斷的，取決于例如受體的生理學(xué)狀況、施用的目的是治療還是預(yù)防，和熟練醫(yī)師已知的其它因素?？?ngf拮抗劑抗體的施用可以在預(yù)選擇的時(shí)間段中是基本連續(xù)的，或者可以是一系列間隔的劑量，例如在發(fā)生與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀之前、期間或之后；在發(fā)生與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀之前；期間；之前和之后；期間和之后；之前和期間；或之前、期間和之后。通過將具有期望純度的抗體與任選的可藥用載劑、賦形劑或穩(wěn)定劑(remington,thescienceandpracticeofpharmacy20thed.mackpublishing(2000))以凍干配制物或水性溶液的形式混合，來制備用于儲(chǔ)存的根據(jù)本發(fā)明使用的抗-ngf拮抗劑抗體的治療性配制物。在一些實(shí)施方式中，可存在多于一種抗-ngf拮抗劑抗體?？纱嬖谥辽僖环N、至少兩種、至少三種、至少四種、至少物種不同的或更多的抗-ngf拮抗劑抗體。通常，這些抗-ngf拮抗劑抗體具有不會(huì)不利影響彼此的互補(bǔ)活性。ngf拮抗劑也可以與其它藥劑組合使用，所述其它藥劑發(fā)揮增強(qiáng)和/或補(bǔ)充藥劑有效性的作用。可藥用載劑包括任何和所有生理學(xué)相容的溶劑、分散介質(zhì)、涂層、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等等。典型地，載劑適用于靜脈、肌內(nèi)、皮下、腸胃外、脊柱或表皮施用(例如通過注射或輸注)。取決于施用的途徑，活性化合物(即抗體、其抗原結(jié)合片段、免疫綴合物或雙特異性分子)可以包覆在材料中，保護(hù)化合物免受酸和可能使化合物失活的其它天然條件的作用?？山邮艿妮d劑、賦形劑或穩(wěn)定劑在使用的劑量和濃度下對(duì)受體是無毒的，并且可包含緩沖液，例如磷酸、檸檬酸、乙酸和其它有機(jī)酸(包括氨基酸)緩沖液；鹽例如氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(例如十八烷基二甲基芐基氯化銨；氯化六羥己銨；苯扎氯銨(benzalkoniumchloride)；苯乙銨氯化物；苯酚、丁醇或苯甲醇；對(duì)羥基苯甲酸烷基酯，例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；和間甲酚)；低分子量(小于約10個(gè)殘基)多肽；蛋白質(zhì)，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑例如edta；糖例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；形成鹽的反荷離子(counter-ion)例如鈉；金屬絡(luò)合物(例如zn-蛋白質(zhì)絡(luò)合物)；和/或非離子表面活性劑，例如聚山梨酯、tweentm、pluronicstm或聚乙二醇(peg)。在某些實(shí)施方式中，本公開的抗體可以中性形式(包括兩性離子形式)存在，或作為帶正電或帶負(fù)電的物類存在。在一些情況下，抗體可與反荷離子絡(luò)合，形成可藥用的鹽。因此，本公開的藥物化合物可包括一種或多種可藥用鹽?！翱伤幱名}”是指保持親本化合物(例如抗體)期望的生物活性并且不引起不期望的毒理學(xué)作用的鹽(見例如berge,s.m.,等，(1977)j.pharm.sci.66:1-19)。例如，術(shù)語“可藥用鹽”包括包含一個(gè)或多個(gè)抗體和一個(gè)或多個(gè)反荷離子的絡(luò)合物，其中所述反荷離子衍生自可藥用的無機(jī)和有機(jī)酸和堿。這類鹽的例子包括酸加成鹽和堿加成鹽。酸加成鹽包括衍生自無毒無機(jī)酸(例如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、亞磷酸等等)以及來自于無毒有機(jī)酸(例如脂肪族單羧酸和二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸、芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸等等)的酸加成鹽。堿加成鹽包括衍生自堿土金屬(例如鈉、鉀、鎂、鈣等等)以及衍生自無毒有機(jī)胺(n,n'-二芐乙烯二胺、n-甲基葡糖胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、普魯卡因等等)的堿加成鹽。另外，可藥用的無機(jī)堿包括金屬離子。金屬離子包括但不限于，適當(dāng)?shù)膲A金屬鹽、堿土金屬鹽和其它生理學(xué)可接受的金屬離子。衍生自無機(jī)堿的鹽包括鋁、銨、鈣、鈷、鎳、鉬、釩、錳、鉻、硒、錫、銅、三價(jià)鐵、二價(jià)鐵、鋰、鎂、三價(jià)錳鹽、二價(jià)錳、鉀、銣、鈉和鋅，并且為它們通常的原子價(jià)。本公開的抗體的可藥用的酸加成鹽可以從以下酸制備，所述酸包括但不限于甲酸、乙酸、乙酰氨基苯甲酸、脂肪酸、抗壞血酸、硼酸、丙酸、苯甲酸、樟腦酸、碳酸、環(huán)己基氨基酸(cyclamicacid)、去氫膽酸、丙二酸(malonicacid)、依地酸(edeticacid)、乙基硫酸(ethylsulfuricacid)、芬地柞酸(fendizoicacid)、偏磷酸、琥珀酸、乙醇酸(glycolicacid)、葡萄糖酸(gluconicacid)、乳酸、酒石酸、鞣酸、檸檬酸、硝酸、抗壞血酸、葡糖醛酸、馬來酸(maleicacid)、葉酸、反丁烯二酸、丙酸、丙酮酸(pyruvicacid)、天冬氨酸(asparticacid)、谷氨酸、苯甲酸、鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、賴氨酸、異檸檬酸(isocitricacid)、三氟乙酸、撲酸(pamoicacid)、丙酸、鄰氨基苯甲酸、甲磺酸(mesylicacid)、乳清酸、草酸、草酰乙酸、油酸、硬脂酸、水楊酸、氨基水楊酸、硅酸、對(duì)羥基苯甲酸、煙酸、苯乙酸、苦杏仁酸、雙羥萘酸(embonicacid)、磺酸、甲磺酸、磷酸、膦酸、乙磺酸(ethanesulfonicacid)、乙二磺酸、銨酸、苯磺酸、泛酸、萘磺酸、甲苯磺酸、2-羥基乙磺酸、對(duì)氨基苯磺酸、硫酸、硝酸、亞硝酸、硫酸單價(jià)基酯酸、環(huán)己基氨基磺酸、β-羥基丁酸、甘氨酸、雙甘氨肽酸(glycylglycineacid)、谷氨酸、二甲胂酸(cacodylateacid)、二氨基己酸、樟腦磺酸、葡萄糖酸、硫氰酸、酮戊二酸、吡哆醛5-磷酸、氯苯氧乙酸、十一烷酸、n-乙酰基-l-天冬氨酸、粘酸和半乳糖醛酸?？伤幱玫挠袡C(jī)堿包括三甲胺、二乙胺、n,n'-二芐乙烯二胺、氯普魯卡因、膽堿、二芐胺、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(n-甲基葡糖胺)、普魯卡因、環(huán)狀胺、季銨陽離子、精氨酸、甜菜堿、咖啡因、氯咪唑、2-乙氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙二胺、丁胺、乙醇胺、乙二胺、n-乙基嗎啉、n-乙基哌啶、乙基葡萄糖胺、葡糖胺、葡萄糖胺、組氨酸、海巴明(hydrabamine)、咪唑、異丙胺、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、吡啶、吡哆醇、釹、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三丙胺、三乙醇胺、氨丁三醇、甲胺、?；撬?、膽酸鹽、6-氨基-2-甲基-2-庚醇、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、脂肪族單羧酸和二羧酸酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸、芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸、鍶、tricine、肼、苯基環(huán)己胺、2-(n-嗎啉)乙磺酸、雙(2-羥乙基)氨基-三(羥甲基)甲烷、n-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸、1,4-哌嗪二乙磺酸、3-嗎啉代-2-羥基丙磺酸、1,3雙[三(羥甲基)甲基氨基]丙烷、4-嗎啉丙磺酸、4-(2-羥乙基)哌嗪-1-乙磺酸、2-[(2-羥基-1,1-雙(羥甲基)乙基)氨基]乙磺酸、n,n-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸、4-(n-嗎啉代)丁磺酸、3-(n,n-雙[2-羥乙基]氨基)-2-羥基丙磺酸、2-羥基-3-[三(羥甲基)甲氨基]-1-丙磺酸、4-(2-羥乙基)哌嗪-1-(2-羥基丙磺酸)、哌嗪-1,4-雙(2-羥基丙磺酸)二水合物、4-(2-羥乙基)-1-哌嗪丙磺酸、n,n-雙(2-羥乙基)甘氨酸、n-(2-羥乙基)哌嗪-n′-(4-丁磺酸)、n-[三(羥甲基)甲基]-3-氨基丙磺酸、n-三(羥甲基)甲基-4-氨基丁磺酸、n-(1,1-二甲基-2-羥乙基)-3-氨基-2-羥基丙磺酸、2-(環(huán)己氨基)乙磺酸、3-(環(huán)己氨基)-2-羥基-1-丙磺酸、3-(環(huán)己氨基)-1-丙磺酸、n-(2-乙酰氨基)亞氨二乙酸、4-(環(huán)己氨基)-1-丁磺酸、n-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸、2-氨基-2-(羥甲基)-1,3-丙二醇和氨丁三醇。其它配制物包括本領(lǐng)域已知的遞送形式，包括但不限于載劑例如脂質(zhì)體。見例如mahato等，(1997)pharm.res.14:853-859。脂質(zhì)體制備物包括但不限于細(xì)胞轉(zhuǎn)染劑(cytofectin)、多層囊泡和單層囊泡。含有抗體-ngf拮抗劑抗體的脂質(zhì)體通過本領(lǐng)域已知的、例如epstein,等，proc.natl.acad.sci.usa82:3688(1985)；hwang,等，proc.natlacad.sci.usa77:4030(1980)；和美國專利nos.4,485,045和4,544,545中描述的方法制備。具有增強(qiáng)的循環(huán)時(shí)間的脂質(zhì)體公開于美國專利no.5,013,556中。尤其有用的脂質(zhì)體可以通過反相蒸發(fā)方法，使用包含磷脂酰膽堿、膽固醇和peg-衍生的磷脂酰乙醇胺(peg-pe)產(chǎn)生。脂質(zhì)體通過具有確定孔徑的濾器排除，得到具有期望直徑的脂質(zhì)體?；钚猿煞忠部梢园裨谀z體藥物遞送系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳液、超微顆粒和超微囊)中，或巨乳液(macroemulsion)中，或例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微囊劑中，例如分別為羥甲基纖維素或明膠-微囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊。這類技術(shù)公開于remington,thescienceandpracticeofpharmacy20thed.mackpublishing(2000)中?？梢灾苽涑志冕尫胖苽湮?。持久釋放制備物的合適例子包括含有拮抗劑(例如抗體)的固體疏水聚合物的半滲透性基質(zhì)，所述基質(zhì)是有形狀的物品例如膜或微囊的形式。持久釋放基質(zhì)的例子包括聚酯、水膠體(例如聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸(美國專利no.3,773,919)、l-谷氨酸和7乙基-l-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯(ethylene-vinylacetate)、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如luprondepottm(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球)、蔗糖乙酸異丁酸酯(sucroseacetateisobutyrate)和聚-d-(-)-3-羥基丁酸。要用于體內(nèi)施用的配制物應(yīng)當(dāng)是無菌的。這可通過例如濾過無菌濾膜來容易地實(shí)現(xiàn)。治療性抗-ngf拮抗劑抗體組合物通常被置于具有無菌入口的容器中，所述容器例如為具有可被皮下注射針穿透的塞子的靜脈內(nèi)溶液袋或管。治療性組合物可以用本領(lǐng)域已知的醫(yī)療裝置施用。例如，本公開的治療性組合物可以用無針皮下注射裝置，例如美國專利nos.5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；或4,596,556中公開的裝置來施用。在本公開中有用的公知植入物和模塊的例子包括：美國專利no.4,487,603，其公開了用于以控制的速率分散藥物的可植入的微型輸注泵；美國專利no.4,486,194，其公開了用于通過皮膚施用藥物的治療裝置；美國專利no.4,447,233，其公開了用于以精確的輸注速率遞送藥物的藥物輸注泵；美國專利no.4,447,224，其公開了用于連續(xù)藥物遞送的變流可植入輸注設(shè)備；美國專利no.4,439,196，其公開了具有多腔室的滲透藥物遞送系統(tǒng)；和美國專利no.4,475,196，其公開了滲透藥物遞送系統(tǒng)。許多其它這類植入物、遞送系統(tǒng)和模塊是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以是用于口、腸胃外或直腸施用，或通過吸入或吹入施用的單位劑型，例如片劑、烷基、膠囊劑、粉末、顆粒、溶液或懸浮液、或栓劑。為了制備固體組合物例如片劑，將主要的活性成分與藥物載劑(例如為常規(guī)制片成分，例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸氫鈣或膠)和其它藥物稀釋劑(例如水)混合，形成含有本發(fā)明化合物或其無毒可藥用鹽的均勻混合物的固體預(yù)配制組合物。稱這些預(yù)配制組合物是均勻的時(shí)，表示活性成分均一地分散于組合物各處，使得組合物可以被容易地細(xì)分為等同的有效單位劑型，例如片劑、烷基和膠囊。然后將固體預(yù)配制物組合物細(xì)分為含從0.1到約500mg本發(fā)明活性成分的上述類型的單位劑型。新穎組合物的片劑或烷基可以被涂覆或以其它方式復(fù)合，提供給予延長作用的優(yōu)點(diǎn)的劑量。例如，片劑或烷基可包含內(nèi)部劑量成分和外部劑量成分，后者是在前者之上的包封形式。兩種成分可以通過腸溶層(entericlayer)隔開，所述腸溶層在胃中發(fā)揮抗崩解的作用，并允許內(nèi)部組分完整進(jìn)入十二指腸或被延遲釋放。這類腸溶層或涂層可以使用多種材料，這類材料包括大量聚合酸和聚合酸與這類材料例如紫膠、鯨蠟醇和醋酸纖維素的混合物。合適的表面活性劑尤其包括非離子試劑，例如聚氧乙烯山梨聚糖(例如tweentm20、40、60、80或85)和其它山梨聚糖(例如spantm20、40、60、80或85)。具有表面活性劑的組合物應(yīng)便利地包含0.05％和5％的表面活性劑，并且可以在0.1％和2.5％之間。應(yīng)當(dāng)明白，需要時(shí)可以添加其它成分，例如甘露醇或其它可藥用的運(yùn)載體。合適的乳液可以使用可商業(yè)獲得的脂肪乳液例如intralipidtm、liposyntm、infonutroltm、lipofundintm和lipiphysantm制備?；钚猿煞挚扇苡陬A(yù)混合的乳液組合物中，或者其可溶于油(例如大豆油、紅花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)和將磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)與水混合后形成的乳液中。應(yīng)當(dāng)明白，可以添加其它成分如甘油或葡萄糖來調(diào)節(jié)乳液的張度(tonicity)。合適的乳液典型地會(huì)含有至多20％的油，例如5％和20％之間的油。脂肪乳液可包含0.1和1.0.1m、尤其是0.1和0.5.1m之間的脂肪微滴，并具有5.5到8.0范圍中的ph。乳液組合物可以是通過將抗ngf抗體與intralipidtm或其成分(大豆油、卵磷脂、甘油和水)混合來制備的乳液組合物。用于吸入或吹入的組合物包括可藥用的水性或有機(jī)溶劑或其混合物中的溶液和懸浮液，和粉末。液體或固體組合物可含有如上文公開的合適的可藥用賦形劑。在一些實(shí)施方式中，組合物通過口或鼻呼吸途徑施用來達(dá)到局部或全身性作用?？梢酝ㄟ^使用氣體來霧化優(yōu)選地?zé)o菌的可藥用溶劑中的組合物。霧化的溶液可以從霧化裝置中直接呼吸，或者可以將霧化裝置與面具、帳幕(tent)或間斷性負(fù)壓呼吸機(jī)結(jié)合?？梢杂梢赃m當(dāng)方式遞送配制物的裝置施用(優(yōu)選口或鼻施用)溶液、懸浮液或粉末組合物?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域公知的方法評(píng)價(jià)治療效力。編碼本發(fā)明任何抗體或多肽(例如抗體e3)的多核苷酸也可以用于在期望的細(xì)胞中遞送和表達(dá)本發(fā)明的任何抗體或多肽(例如抗體e3)。顯然，可以使用表達(dá)載體指導(dǎo)e3抗體或多肽的表達(dá)。表達(dá)載體可以通過本領(lǐng)域已知的任何手段施用，例如腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、椎管內(nèi)、心室內(nèi)、口、腸內(nèi)、腸胃外、鼻內(nèi)、皮、舌下或通過吸入施用。例如，表達(dá)載體的施用包括局部或全身性施用，包括注射、口施用、粒子槍或?qū)Ч苁┯?，和局部施用。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉表達(dá)載體的施用，以獲得外源蛋白質(zhì)的體內(nèi)表達(dá)。見例如美國專利nos.6,436,908；6,413,942；和6,376,471。也可以使用包含編碼本發(fā)明任何抗體或多肽(例如抗體e3)的多核苷酸的治療性組合物的定向遞送。受體介導(dǎo)的dna遞送技術(shù)描述于例如findeis等，trendsbiotechnol.(1993)11:202；chiou等，genetherapeutics:methodsandapplicationsofdirectgenetransfer(j.a.wolff編)(1994)；wu等，j.biol.chem.(1988)263:621；wu等，j.biol.chem.(1994)269:542；zenke等，proc.natl.acad.sci.(usa)(1990)87:3655；wu等，j.biol.chem.(1991)266:338中。對(duì)基因治療方案中的局部施用而言，包含多核苷酸的治療性組合物在約100ng到約200ngdna的范圍內(nèi)施用。在基因治療方案中也可以使用約500ng到約50mg、約1μg到約2mg、約5μg到約500μg和約20μg到約100μgdna的濃度范圍?？梢允褂没蜻f送運(yùn)載體遞送本發(fā)明的治療性多核苷酸和多肽?；蜻f送運(yùn)載體可以是病毒或非病毒的起源(通常見jolly,cancergenetherapy(1994)1:51；kimura,humangenetherapy(1994)5:845；connelly,humangenetherapy(1995)1:185；和kaplitt,naturegenetics(1994)6:148)。這類編碼序列的表達(dá)可以使用內(nèi)源哺乳動(dòng)物啟動(dòng)子或異源啟動(dòng)子誘導(dǎo)。編碼序列的表達(dá)可以是組成型或調(diào)節(jié)型的。用于遞送期望的多核苷酸并在期望的細(xì)胞中表達(dá)的基于病毒的載體是本領(lǐng)域公知的。示范性的基于病毒的運(yùn)載體包括但不限于重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒(見例如pct公開nos.wo90/07936；wo94/03622；wo93/25698；wo93/25234；wo93/11230；wo93/10218；wo91/02805；美國專利nos.5,219,740；4,777,127；gb專利no.2,200,651；和ep專利no.0345242)，基于α病毒的載體(例如sindbis病毒載體、semliki森林病毒(atccvr-67；atccvr-1247)、rossriver病毒(atccvr-373；atccvr-1246)和venezuelan馬腦炎病毒(atccvr-923；atccvr-1250；atccvr1249；atccvr-532))，和腺伴隨病毒(aav)載體(見例如pct公開nos.wo94/12649,wo93/03769；wo93/19191；wo94/28938；wo95/11984和wo95/00655)。也可以使用如curiel,hum.genether.(1992)3:147中所述與殺傷的腺病毒連接的dna的施用。也可以使用非病毒遞送運(yùn)載體和方法，包括但不限于，單獨(dú)的與殺傷的腺病毒連接或不連接的聚陽離子聚結(jié)的dna(見例如curiel,hum.genether.(1992)3:147)；與配體連接的dna(見例如wu,j.biol.chem.(1989)264:16985)；真核細(xì)胞遞送運(yùn)載體細(xì)胞(見例如美國專利no.5,814,482；pct公開nos.wo95/07994；wo96/17072；wo95/30763；和wo97/42338)，和核電荷中和或與細(xì)胞膜融合。也可以使用裸dna。示范性的裸dna引入方法描述于pct公開no.wo90/11092和美國專利no.5,580,859中?？砂l(fā)揮基因遞送運(yùn)載體作用的脂質(zhì)體描述于美國專利no.5,422,120；pct公開nos.wo95/13796；wo94/23697；wo91/14445；和ep專利no.0524968中。額外的途徑描述于philip,mol.cellbiol.(1994)14:2411和woffendin,proc.natl.acad.sci.(1994)91:1581中。診斷方法和用途本文所述抗體也可以被用于檢測、診斷和監(jiān)測與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀，其伴隨著改變或異常的ngf表達(dá)，在一些實(shí)施方式中，(相對(duì)于正常樣品)提高或降低的ngf表達(dá)，和/或不適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)，例如在通常缺乏ngf表達(dá)的組織和/或細(xì)胞中存在表達(dá)，或在通常具有ngf表達(dá)的組織或細(xì)胞中不存在ngf表達(dá)。在一些實(shí)施方式中，在下述樣品中檢測ngf表達(dá)，所述樣品來自懷疑患有與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的個(gè)體。因此，在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了下述方法，所述方法包括將懷疑具有改變或異常ngf表達(dá)的個(gè)體的標(biāo)本(樣品)與本發(fā)明的抗體或多肽接觸，并確定ngf水平是否與對(duì)照或比較標(biāo)本的ngf水平不同。在其它一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了下述方法，所述方法包括接觸個(gè)體的標(biāo)本(樣品)并測定ngf表達(dá)水平。在一些實(shí)施方式中，懷疑個(gè)體具有與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀。對(duì)診斷應(yīng)用而言，抗體典型地應(yīng)用可檢測部件標(biāo)記，所述可檢測部件包括但不限于放射性同位素、熒光標(biāo)簽和多種酶-底物標(biāo)簽。將標(biāo)簽與抗體綴合的方法是本領(lǐng)域已知的。在本發(fā)明的其它一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體不需要被標(biāo)記，并且可以使用與本發(fā)明抗體結(jié)合的經(jīng)標(biāo)記的抗體對(duì)其進(jìn)行檢測。本發(fā)明的抗體可在任何已知的實(shí)驗(yàn)方法例如競爭性結(jié)合實(shí)驗(yàn)、直接和間接三明治實(shí)驗(yàn)和免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中使用。zola,monoclonalantibodies:amanualoftechniques,pp.147-158(crcpress,inc.1987)?？贵w也可以用于體內(nèi)診斷實(shí)驗(yàn)，例如用于體內(nèi)成像。通常用放射性核素(例如111in、99tc、14c、131i、125i或3h)標(biāo)記抗體，使得可以使用免疫閃爍成像術(shù)(immunoscintiography)定位感興趣的細(xì)胞或組織。也可以按照本領(lǐng)域公知的技術(shù)，在病理學(xué)中使用抗體作為染色試劑。對(duì)本文所述的所有方法而言，抗-ngf拮抗劑抗體也包括包含一種或多種這些試劑的組合物。這些組合物可還包含本領(lǐng)域公知的合適的賦形劑，例如可藥用賦形劑，包括緩沖液。本發(fā)明可單獨(dú)使用，或與其它常規(guī)治療方法組合使用。用于檢測和/或治療的包含抗-ngf拮抗劑抗體的試劑盒本發(fā)明還提供了包含用于檢測和/或治療的抗體的試劑盒。因此，在一些實(shí)施方式中，試劑盒包含抗體e3。在一些實(shí)施方式中，試劑盒包含本文所述任何抗體或多肽。在其它一些實(shí)施方式中，試劑盒可被用于本文所述的任何方法，包括例如治療患有與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的個(gè)體。本發(fā)明的試劑盒有合適的包裝，并可任選地提供額外的組分，例如緩沖液和在本文所述任何方法中使用抗體的說明書。在一些實(shí)施方式中，試劑盒包含用于治療疼痛或下泌尿道癥狀的說明書。在一些實(shí)施方式中，試劑盒包含本文所述的抗-ngf拮抗劑抗體，和用于在個(gè)體中治療和/或預(yù)防與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和/或下泌尿道癥狀的說明書。在一些實(shí)施方式中，抗-ngf拮抗劑抗體是抗體e3。在另一方面中，本發(fā)明提供了下述試劑盒，其包含如本文所述編碼e3多肽的多核苷酸。在一些實(shí)施方式中，所述試劑盒還包含在本文所述任何方法中使用所述多核苷酸的說明書。提供以下的實(shí)施例來闡述而非限制本發(fā)明。引用wo2004/058184中的實(shí)施例來闡述用于本發(fā)明中的抗體。wo2004/058184的完整內(nèi)容通過引用并入本文。實(shí)施例實(shí)施例1：小鼠拮抗劑抗-ngf抗體911的人源化和親和性成熟(affinitymaturation)a.一般方法該實(shí)施例中使用以下一般方法。文庫的產(chǎn)生如kay等(1996),phagedisplayofpeptidesandproteins:alaboratorymanual,sandiego,academicpress(見第277-291頁)中所述，用簡并寡核苷酸通過pcr盒誘變(pcrcassettemutagenesis)產(chǎn)生文庫。使用摻雜密碼子(dopingcodon)nnk將一個(gè)氨基酸位置隨機(jī)化為包含20種可能的氨基酸。為了將一個(gè)氨基酸位置隨機(jī)化為僅包含具有特定性質(zhì)的一亞類氨基酸，如balint等，(1993)gene137(1):109-18)中所述使用摻雜密碼子。如innis等，(1990)pcrprotocols:aguidetomethodsandapplications(見第177-183頁)中所述，使用重組pcr進(jìn)行定點(diǎn)誘變。小規(guī)模fab制備為了篩選fab文庫，優(yōu)化96孔板中的小規(guī)模表達(dá)。從用fab文庫轉(zhuǎn)化的e.coli開始，挑取菌落來接種母板(masterplate)(瓊脂lb+氨芐西林(50μg/ml)+2％葡萄糖)和工作板(2ml/孔，96孔/板，含1.5mllb+氨芐西林(50μg/ml)+2％葡萄糖)。將兩種平板在30℃下培養(yǎng)8-12小時(shí)。將母板儲(chǔ)存于4℃，將來自工作板的細(xì)胞在5000rpm下離心并重懸于1mllb+氨芐西林(50μg/ml)+1mmiptg中，誘導(dǎo)fab表達(dá)。30℃下5小時(shí)的表達(dá)時(shí)間后通過離心收獲細(xì)胞，然后重懸于500μl緩沖液hbs-ep(100mmhepes緩沖液ph7.4，150mmnacl，0.005％p20，3mmedta)中。通過冷凍(-80℃)然后在37℃下融化的一個(gè)循環(huán)，來獲得hbs-ep重懸細(xì)胞的裂解。將細(xì)胞裂解物在5000rpm下離心30分鐘，使細(xì)胞碎片與含有fab的上清液隔離。然后將上清液注射進(jìn)biacore等離子體共振設(shè)施中，獲得每種fab的親和性信息。從母板上復(fù)蘇表達(dá)fab的克隆來測序dna，并用于如下文所述的大規(guī)模fab生產(chǎn)與詳細(xì)表征。大規(guī)模fab制備為了獲得詳細(xì)的動(dòng)力學(xué)參數(shù)，從大培養(yǎng)物中表達(dá)和純化fab。用5ml過夜培養(yǎng)物接種含有200mloflb+ampicillin(50μg/ml)+2％葡萄糖的三角瓶，所述過夜培養(yǎng)物來自選擇的表達(dá)fab的e.coli克隆。將克隆在30℃孵育直至獲得1.0的od550nm，然后通過將培養(yǎng)基替換為200mllb+氨芐西林(50μg/ml)+1mmiptg來誘導(dǎo)。在30℃下5小時(shí)的表達(dá)時(shí)間后，通過離心使細(xì)胞沉淀，然后重懸于10mlpbs(ph8)中。通過兩個(gè)冷凍/融化(分別在-80℃和37℃下)循環(huán)獲得細(xì)胞的裂解。將細(xì)胞裂解物的上清液上樣在用pbs,ph8平衡的ni-ntasuperflowsepharose(qiagen,valencia.ca)柱上，然后用5倍柱體積的pbs,ph8洗滌。用pbs(ph8)+300mm咪唑?qū)€(gè)體fab洗脫在不同的級(jí)分中。將含有fab的級(jí)分合并并在pbs中透析，然后在親和性表征之前通過elisa定量。全長抗體制備為了表達(dá)全長抗體，將重鏈和輕鏈可變區(qū)克隆進(jìn)兩種表達(dá)載體(輕鏈?zhǔn)褂胑b.911.e3或eb.pur.911.3e，重鏈?zhǔn)褂胐b.911.3e；在本文描述)中，并使用lipofectamine轉(zhuǎn)染進(jìn)hek293細(xì)胞中用于瞬時(shí)表達(dá)。使用標(biāo)準(zhǔn)方法使用a蛋白純化抗體。biacore實(shí)驗(yàn)使用blacore3000tm表面等離子體共振(spr)系統(tǒng)(biacore,inc,piscawaynj)測定抗-ngffab和單克隆抗體的親和性。根據(jù)供應(yīng)商的說明，用n-乙基-n'-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(edc)和n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)活化cm5芯片。將人ngf稀釋進(jìn)10mm乙酸鈉ph4.0中，并以0.005mg/ml的濃度注射在活化的芯片上。使用跨越個(gè)體芯片通道的可變的流動(dòng)時(shí)間，實(shí)現(xiàn)兩種抗原密度范圍：對(duì)詳細(xì)的動(dòng)力學(xué)研究而言100-200個(gè)應(yīng)答單位(ru)，對(duì)篩選實(shí)驗(yàn)而言500-600ru。用乙醇胺封閉芯片。再生研究顯示pierce洗脫緩沖液(產(chǎn)品編號(hào)21004,piercebiotechnology,rockford,il)和4mnacl(2:1)的混合物有效地去除了結(jié)合的fab，同時(shí)將芯片上hngf的活性保持超過200次注射。所有的biacore實(shí)驗(yàn)使用hbs-ep緩沖液(0.01mhepes,ph7.4,0.15nacl,3mmedta,0.005％surfactantp29)作為運(yùn)行緩沖液。篩選實(shí)驗(yàn)優(yōu)化篩選biacore實(shí)驗(yàn)來測定來自文庫的fab克隆的親和性。以50μl/min將小培養(yǎng)物裂解物的上清液注射2分鐘。使用10到15分鐘的解離時(shí)間，使用biaevaluation軟件測定單一指數(shù)解離速率(koff)。注射與用于創(chuàng)建文庫的模板(克隆8l2-6d5,koff1x10-3s-1)顯示相同范圍內(nèi)koff速率的樣品，并允許至多45分鐘的解離時(shí)間來獲得更好的koff值。顯示改進(jìn)(更慢)的koff值的克隆被大規(guī)模表達(dá)，并對(duì)經(jīng)純化的蛋白質(zhì)測定完全動(dòng)力學(xué)參數(shù)kon和koff。實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驒z測約2倍或更大的親和性的差異。親和性測定實(shí)驗(yàn)將經(jīng)純化的fab樣品的系列稀釋液(0.1-10x評(píng)價(jià)的kd)以100μl/分鐘注射1分鐘，并允許至多2小時(shí)的解離時(shí)間。使用已知濃度(通過氨基酸分析測定)的fab作為標(biāo)準(zhǔn)，通過elisa和/或sds-page電泳測定fab蛋白質(zhì)的濃度。通過使用biaevaluation程序?qū)?shù)據(jù)與1:1langmuir結(jié)合模型(karlsson,r.roos,h.fagerstam,l.petersson,b.(1994).methodsenzymology6.99-110)擬合，同時(shí)獲得動(dòng)力學(xué)結(jié)合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(kd)值被計(jì)算為koff/kon。b.小鼠拮抗劑抗-ngf抗體911的人源化和親和性成熟選擇小鼠拮抗劑抗-ngf抗體911(見hongo等，(2000)hybridoma19(3):215-227)用于人源化和親和性成熟。mab911以高親和性與人和大鼠ngf結(jié)合，并顯示與神經(jīng)營養(yǎng)蛋白nt3、nt4/5或bdnf無顯著的交叉反應(yīng)性。見hongo，同前。如上文所述使用biacore分析測定經(jīng)木瓜蛋白酶切割的小鼠mab911的fab片段的親和性。經(jīng)木瓜蛋白酶切割的小鼠mab911的fab片段以約10nm的kd結(jié)合人ngf。如下在若干步驟中進(jìn)行人源化和親和性成熟：(1)制備cdr-移植的模板。將抗體911的輕鏈擴(kuò)大的cdr(即包含kabat和chothiacdr區(qū)二者)移植進(jìn)帶有jk2的人種系受體序列o8中，并將抗體911的重鏈擴(kuò)大的cdr移植進(jìn)帶有jh4的人種系受體序列vh4-59中。人種系受體序列的氨基酸序列展示于wo2004/058184的圖1a和1b中。氨基酸編號(hào)是連續(xù)的。使用上文標(biāo)注的蛋白質(zhì)框架，針對(duì)下述合成的基因設(shè)計(jì)dna序列，所述合成的基因編碼具有鼠cdr的人框架。這些人源化的重鏈和輕鏈可變區(qū)分別被稱作hvh和hvl。針對(duì)e.coli和倉鼠的使用優(yōu)化密碼子。使用帶有針對(duì)每條鏈的兩個(gè)短側(cè)翼引物、蔓延hvl和hvh全長的若干重疊寡核苷酸(長度69-90個(gè)堿基)，基本如prodromou等，(1992)proteineng5(8):827-9中所述通過遞歸pcr(recursivepcr)獨(dú)立地合成這兩個(gè)基因。凝膠純化得到的長度正確的dna片段，然后克隆進(jìn)e.coli雙順反子表達(dá)質(zhì)粒(氨芐西林抗性)中。與barbas(2001)phagedisplay:alaboratorymanual,coldspringharbor,ny,coldspringharborlaboratorypress(seevectorpcomb3x,atpg2.10)中所述相似，抗體的表達(dá)處于iptg誘導(dǎo)型lacz啟動(dòng)子的控制下，然而，修飾包括以下的額外結(jié)構(gòu)域的添加和表達(dá)：人κ清涼恒定結(jié)構(gòu)域(見genbank登錄號(hào)caa09181)和igg2a人免疫球蛋白的chi恒定結(jié)構(gòu)域(genbank登錄號(hào)p01859)。wo2004/058184的圖1a和1b中還展示了名為8l2-4d5的cdr-移植的抗體(也稱作“模板”)可變區(qū)的氨基酸序列。如上文所述使用biacore分析測定8l2-4d5的親和性。8l2-4d5以約38nm的kd結(jié)合人ngf。(2)向框架序列中引入點(diǎn)突變。使用如innis等，(1995)pcrstrategies,sandiego,academicpress中所述的重組pcr定點(diǎn)誘變，向cdr-移植的重鏈中引入v71k取代。該取代用相應(yīng)的小鼠框架殘基替換人框架殘基。得到的抗體被稱作8l2-6d5，并且8l2-6d5的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列展示于wo2004/058184的圖1a中。如上文所述使用biacore分析測定8l2-6d5的親和性。8l2-6d5的fab片段以約15nm的kd結(jié)合人ngf。選擇8l2-6d5作為親和性成熟的模板。(3)cdrsl1、l2、h1和h2的人源化和親和性成熟。對(duì)cdrsl1、l2、h1和h2進(jìn)行人源化和親和性成熟。以chothia結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)，鑒定cdrsl1、l2、h1和h2中對(duì)cdr的結(jié)構(gòu)并非關(guān)鍵性的氨基酸位置(見al-lazikani等(1997)j.mol.biol.273(4):927-48)；并如下對(duì)它們進(jìn)行隨機(jī)化。用簡并寡核苷酸如kay等，(1996),phagedisplayofpeptidesandproteins:alaboratorymanual,sandiego,academicpress中所述，使用如balint等，(1993)gene137(1):109-18)中所述的摻雜密碼子，制備含有表2中所示輕鏈突變或重鏈突變的兩個(gè)文庫，分別為經(jīng)移植的(小鼠)cdrl3或cdrh3。通常，以抗體911輕鏈和重鏈氨基酸序列與人種系抗體序列的比對(duì)為基礎(chǔ)，將氨基酸殘基改變?yōu)樵谌丝贵w中更常見的殘基。野生型(未經(jīng)取代的)氨基酸殘基也存在于文庫中，例外是cdrh2殘基50的甲硫氨酸，其中野生型甲硫氨酸不存在于文庫中。對(duì)甲硫氨酸殘基進(jìn)行氧化；因此期望該殘基的替換改善得到的抗體的穩(wěn)定性。如上文所述將fabs的文庫與人ch1和cκ區(qū)一起克隆進(jìn)載體pcomb3x中。表2：1.重鏈h1/h2文庫：cdr-h1將i34改變?yōu)閒、l、v、s、p、t、a或i將n35改變?yōu)閚、t、s或ycdr-h2將m50改變?yōu)樗?0種天然氨基酸將a62改變?yōu)閍或s將l63改變?yōu)閘或v2.輕鏈l1/l2文庫cdr-l1將s26改變?yōu)閟、a、v或f將d28改變?yōu)閐、a、s或y將h32改變?yōu)閔、n、k、d、e、q或ycdr-l2將y50改變?yōu)閥、d、a或s將i51改變?yōu)閕、t、a或v將f54改變?yōu)閒或l將s56改變?yōu)閟和t對(duì)親和篩選實(shí)驗(yàn)而言，使每個(gè)文庫與相應(yīng)的cdr-移植的輕鏈或重鏈進(jìn)一步配對(duì)(例如使h1/h2文庫與cdr-移植的輕鏈配對(duì))，表達(dá)抗體，并根據(jù)制造商的說明和如上文所述使用biacore表面等離子體共振(spr)系統(tǒng)(biacore,inc.piscataway,nj)篩選個(gè)體克隆對(duì)人ngf的親和性。測定koff、kon和kd。以koff速率為基礎(chǔ)對(duì)抗體克隆分級(jí)，因?yàn)橥ǔ４蟛糠钟H和性變化在koff速率中展現(xiàn)，還因?yàn)閗off速率與抗體濃度無關(guān)。測定結(jié)合的克隆的序列，并將結(jié)合的克隆的序列展示于表3中。表3：在h1/h2或l1/l2文庫克隆的親和性篩選后結(jié)合的克隆的l1和l2氨基酸序列、h1和h2氨基酸序列和動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)。粗體的aa如上文所示被隨機(jī)化*使用kon4e4m-1s-1計(jì)算的kd**為了便利，本文中使用的“e”表示“x10”。因此，4e4可互換地表示4x104。含有以下取代的cdr保持結(jié)合：cdr-h1i34：s、l、v、i和a結(jié)合。n35：n、t和s結(jié)合。cdr-h2m50：m、i、g、q、s、l結(jié)合。a62：a和s結(jié)合。l63：l和v結(jié)合。cdr-l1s26：s和f結(jié)合。d28：d、s、a、y結(jié)合。h32：h、n、q結(jié)合。cdr-l2y50：y結(jié)合。i51：i、t、v、a，結(jié)合。f54：f結(jié)合s56：s和t結(jié)合通常以親合力為基礎(chǔ)選擇含有以下取代的cdr，并合并成稱作h19-l129的單個(gè)克隆：cdr-h1：i34l；n35n(無改變)cdr-h2：m50i；a62a(無改變)；l63vcdr-l1：s26s(無改變)；d28s；h32ncdr-l2：y50y(無改變)；i51t；f54f(無改變)；s56s(無改變)將這些突變合并(通過pcr擴(kuò)增h和l鏈，用限制性酶切割pcr產(chǎn)物和載體prn8，并進(jìn)行3片段連接)成一個(gè)稱作h19-l129的克隆，所述克隆也包含經(jīng)移植的h3和l3cdr。wo2004/058184的圖1a和1b中展示了h19-l129的重鏈和輕鏈可變區(qū)的序列，表4展示了cdrsl1、l2、h1和h2的氨基酸序列。如本文所述使用biacore分析測定時(shí)，h19-l129以約1nm的kd結(jié)合ngf。表4：cdrsh1、h2、l1和l2的氨基酸序列，和合并的克隆h19-l129的動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)。*使用kon4e4m-1s-1計(jì)算的kd(4)h3和l3cdr的親和性成熟。分兩步進(jìn)行h3和l3cdr的親和性成熟。首先，在稱作“文庫掃描誘變”的過程中，將h3和l3中的每個(gè)氨基酸殘基個(gè)別地進(jìn)行預(yù)篩選，從而鑒定下述氨基酸位置，所述位置上的突變導(dǎo)致提高的對(duì)人ngf的親合力。以文庫篩選誘變(也稱作“小文庫隨機(jī)化分析”)的結(jié)果為基礎(chǔ)，選擇h3和l3中氨基酸位置的亞組用于制備親和性成熟文庫，并如本文所述使用biacore分析篩選親和性成熟文庫對(duì)人ngf的親和性。應(yīng)當(dāng)理解這些技術(shù)可普遍適用。(a)文庫篩選誘變針對(duì)導(dǎo)致對(duì)人ngf的親合力提高的取代，對(duì)h3和l3cdr中的每個(gè)氨基酸位置個(gè)別地進(jìn)行預(yù)篩選。在任何給定位置上導(dǎo)致改進(jìn)的結(jié)合、相同的結(jié)合、更差的結(jié)合或不結(jié)合的氨基酸取代的頻率提供了與下述位置相關(guān)的信息，所述位置是cdr中可以被改變?yōu)樵S多不同氨基酸(包括所有20種氨基酸)的位置和cdr中不能被改變或者僅能被改變?yōu)樯贁?shù)氨基酸的位置。還鑒定了導(dǎo)致提高的親合力的氨基酸取代。以該篩選的結(jié)果為基礎(chǔ)，選擇cdrh3和l3中氨基酸位置的亞組來制備親和性成熟文庫。制備個(gè)體fab文庫，其中l(wèi)3和h3cdr的每個(gè)氨基酸被隨機(jī)化為所有20種氨基酸，一次一種，得到若干(輕鏈5個(gè)文庫，重鏈13個(gè)文庫)小文庫，每個(gè)文庫在每個(gè)氨基酸位置上具有約20種氨基酸可能性的復(fù)雜度。在所有的情況下，文庫中存在固有(即未改變)的氨基酸。用如kay等，(1996),phagedisplayofpeptidesandproteins：alaboratorymanual,sandiego,academicpress中所述的簡并寡核苷酸，通過pcr盒誘變制備文庫，使用摻雜密碼子nnk將一個(gè)氨基酸位置隨機(jī)化為包含20種可能的氨基酸。8l2-6d5(cdr移植的抗體，具有框架突變v71k)發(fā)揮文庫構(gòu)建的模板作用，因?yàn)閏dr移植的抗體的低親和性允許在篩選期間更容易檢測h3和l3突變體中的親和性差異。因此，每個(gè)文庫成員含有具有一個(gè)氨基酸取代cdr3(h3或者l3)和5個(gè)嫁接的cdr。如本文所述使用biacore分析篩選來自每個(gè)小文庫的20-80個(gè)克隆。在biacore芯片的一個(gè)通道中通過biacore分析樣品對(duì)ngf的親合力，同時(shí)在感受器芯片的另一個(gè)通道中通過與五-his標(biāo)簽抗體的結(jié)合分析fab的存在，檢測重鏈c端的his標(biāo)簽。使用koff來分類，將表達(dá)蛋白質(zhì)的克隆歸類為具有相同的親和性、更差的親和性、更好的親和性或不結(jié)合。該分析的結(jié)果展示于表5中。表5.基于koff將表達(dá)蛋白質(zhì)的克隆歸類為具有相同的親和性、更差的親和性、更好的親和性或不結(jié)合。測定了具有改進(jìn)的親和性的所有克隆的序列，揭示了導(dǎo)致提高的親和性的氨基酸取代的頻率和身份。另外，從每個(gè)文庫中選擇少數(shù)保持與8l2-6d5克隆相似親和性的克隆，從而確定給定位置上允許的氨基酸序列取代，盡管所述取代不必須提高親合力。該分析的結(jié)果概括于表6中。表6.*使用kon4e4m-1s-1計(jì)算的kd若干突變導(dǎo)致提高的親合力。至少以下突變導(dǎo)致與8l2-6d5模板相比顯著提高的親合力：(h_y101w(cdr序列g(shù)gywygtsyyfdy(seqidno:46))；h_s105a(cdr序列g(shù)gyyygtayyfdy(seqidno:47))；h_s105t(cdr序列g(shù)gyyygttyyfdy(seqidno:48))；h_g103a(cdr序列g(shù)gyyyatsyyfdy(seqidno:49)；和l_s91e(cdr序列qqektlpyt(seqidno:50))。使用該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果指導(dǎo)用于產(chǎn)生親和性成熟文庫的氨基酸位置的選擇。所述實(shí)驗(yàn)也提供了與任何給定位置上導(dǎo)致改進(jìn)的結(jié)合、相同結(jié)合、更差結(jié)合或不結(jié)合的氨基酸取代頻率有關(guān)的信息，如表5中所示。所述信息允許鑒定cdr中不能被改變?yōu)樵S多不同氨基酸(包括所有20種氨基酸)的位置，和cdr中能夠被改變?yōu)樯贁?shù)氨基酸或非常少數(shù)氨基酸(在一些實(shí)施方式中不能被改變)的位置。這些結(jié)果還闡述了提高了親合力的氨基酸取代。(b)親和性成熟接著，使用小文庫隨機(jī)化分析(上文)的結(jié)果選擇殘基，來生產(chǎn)用于h3和l3cdr親和性成熟的h3和l3文庫。選擇cdrh3的殘基y101和g103和cdrl3的殘基s91和k92，來生產(chǎn)用于h3和l3cdr親和性成熟的h3和l3文庫。所述文庫在cdr-移植的克隆8l2-6d5中同時(shí)合并了h3和l3中的突變，在h19-l129的背景中單獨(dú)合并了h3和l3中的突變，并且具有80個(gè)不同克隆的多樣性。表7展示了被選擇用于取代的氨基酸殘基，和在每個(gè)位置上被取代的氨基酸。表7.選擇用于取代的h3和l3中的氨基酸殘基和在每個(gè)位置上被取代的氨基酸cdr-h3:y101被改變?yōu)閥和w、c。(注意包括c是因?yàn)樵谝粋€(gè)簡并的寡核苷酸中使用密碼子trs也產(chǎn)生密碼子c)。g103被改變?yōu)閍、p、scdr-l3:s91被改變?yōu)閑。k92被改變?yōu)樗卸N氨基酸。a、r、k和h結(jié)合。每種多肽被表達(dá)為fab，并根據(jù)制造商說明和上文所述使用biacore分析針對(duì)每個(gè)文庫篩選96個(gè)個(gè)體克隆對(duì)人ngf的親和性。所述分析的結(jié)果展示于表8中。表8.*使用kon4e4m-1s-1計(jì)算的kd以親合力為基礎(chǔ)，選擇最好的克隆——e3(可互換地稱作"3e")和3c進(jìn)行進(jìn)一步表征。e3包含以下cdr取代：cdr-h3：y101w、g103a；和cdr-l3：s91e、k92h，其合并成為單個(gè)克隆，所述克隆還包括以下的l1、l2、h1和h2突變：cdr-h1：i34l；cdr-h2：m50i；l63v；cdr-l1：d28s；h32n；cdr-l2：i51t。seqidnos.1和2中展示了e3重鏈和輕鏈可變區(qū)的序列(也見wo2004/058184的圖1a和1b)。3c包含以下的cdr取代：cdr-l3：s91e；k92r；cdrh3：y101w；g103a，其合并成為單個(gè)克隆，所述克隆還含有針對(duì)克隆3e描述的l1、l2、h1和h2突變。將3e和3c序列克隆進(jìn)用于生產(chǎn)fab和全長抗體的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體中，在hek293細(xì)胞中表達(dá)，并使用ni-nta或a蛋白色譜法純化。通過氨基酸分析精密地定量純的蛋白質(zhì)。根據(jù)制造商說明和上文所述，使用biacore分析測量fabse3和3c對(duì)人ngf的親合力，例外之處是在芯片上使用100rungf以防止再結(jié)合作用。簡言之，將若干濃度的抗體(fab)耗時(shí)2分鐘注射在上面固定了100ru人ngf的cm5芯片上，并允許其解離1800秒。分析小鼠抗體911(fab)作為對(duì)照。根據(jù)制造商的說明，使用biaevaluation軟件分析數(shù)據(jù)?？贵we3和911的分析結(jié)果展示于wo2004/058184的圖9和10中。e3以約0.07nm的kd(和約6.0e5m-1s-1的kon和約4.2e-5s-1的koff)結(jié)合人ngf。3c以約0.35nm的kd(約1.4e-5的koff)結(jié)合人ngf。相反，小鼠抗體911以3.7nm的kd，8.4x10-5s-1的koff和2.2x104ms-1的kon結(jié)合ngf?；诟哂H合力選擇抗體e3(可互換地稱作3e)進(jìn)行進(jìn)一步分析。為了測試e3預(yù)防ngf與ngf受體trka和p75相互作用的能力，將2.5nm人ngf與0到50nm抗體e3(fab)預(yù)混合并孵育一小時(shí)。孵育后以10ul/分鐘的速度將樣品注射在含260rup75(通道2)和600rutrka(通道3)的biacorecm5芯片上，并測定結(jié)合百分比。所述分析的結(jié)果展示于wo2004/058184的圖11中。提高的fabe3濃度阻斷ngf與p75和trka二者的相互作用，如降低的信號(hào)(以ru為單位測量)所示，表明fabe3阻斷了人ngf與trka和p75二者的相互作用。當(dāng)抗體e3(fab)濃度等于ngf濃度(約2.5nmngf濃度)時(shí)，未觀察到ngf結(jié)合(如零信號(hào)所示)。ngf濃度等于抗體3e濃度時(shí)發(fā)生零百分比的ngf-受體結(jié)合的事實(shí)表明，2.5nmngf至少是e3對(duì)ngf且處于平衡下的kd的十倍。實(shí)施例2：使用小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元存活實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)抗-ngf抗體的ngf-阻斷能力通過測量抗體抑制體外小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的ngf-依賴型存活的能力，來評(píng)價(jià)fabe3或全長抗體e3阻斷ngf活性的能力。三叉神經(jīng)神經(jīng)節(jié)由支配顏面區(qū)的表皮感覺神經(jīng)元組成。小鼠e13.5三叉神經(jīng)神經(jīng)元的存活是評(píng)價(jià)抗-ngf拮抗劑抗體的ngf-阻斷活性的靈敏實(shí)驗(yàn)，因?yàn)閚gf是支持這些神經(jīng)元存活所需要的。例如，在飽和濃度的ngf下，培養(yǎng)48小時(shí)后存活接近100％。相反，在沒有ngf時(shí)48小時(shí)后神經(jīng)元存活少于5％。如下進(jìn)行存活實(shí)驗(yàn)：通過co2吸入使時(shí)間匹配的(time-mated)懷孕的swisswebster雌性小鼠安樂死。取出子宮角(uterinehorn)，將胚胎階段e13.5的胚胎取出并斷頭。使用電解質(zhì)銳化的鎢針(electrolyticallysharpenedtungstenneedle)切開三叉神經(jīng)神經(jīng)節(jié)。然后對(duì)所述神經(jīng)節(jié)進(jìn)行胰蛋白酶消化、機(jī)械分離并以每孔200-300個(gè)細(xì)胞的密度涂布于用多聚-l-鳥氨酸和層粘連蛋白覆蓋的96孔板中確定的、無血清的培養(yǎng)基中。通過向三叉神經(jīng)神經(jīng)元中添加多種劑量的抗-ngf抗體mab911(fab)、8l2-6d5；h19-l129；e3和3c；和以下濃度的人或大鼠ngf：0.4ng/ml(～15pm；該濃度代表對(duì)存活而言ngf的飽和濃度)和0.04ng/ml(～1.5pm；該濃度在ic50左右)，評(píng)價(jià)抗-ngffab或抗體的阻斷活性。培養(yǎng)48小時(shí)后，如下對(duì)細(xì)胞施加在biomekfx液體操作工作站(beckmancoulter)上進(jìn)行的自動(dòng)化免疫細(xì)胞化學(xué)方案：使用4％甲醛、5％蔗糖和pbs固定；使用pbs中0.3％tritonx-100透化；使用pbs中5％正常山羊血清、0.11％bsa阻斷非特異性結(jié)合位點(diǎn)；并用一級(jí)和二級(jí)抗體先后孵育，來檢測神經(jīng)元。一級(jí)抗體是針對(duì)一種確定的神經(jīng)元表型標(biāo)記物——蛋白質(zhì)基因產(chǎn)物89.5(pgp9.5,chemicon)的兔多克隆抗體。二級(jí)抗體是alexafluor488山羊抗-兔(molecularprobes)，其與核染料hoechst33342(molecularprobes)一起標(biāo)記培養(yǎng)物中存在的所有細(xì)胞的核。在discovery-i/genii圖像儀(universalimagingcorporation)上進(jìn)行圖像獲取和圖像分析。在針對(duì)alexafluor488和hoechst33342的兩個(gè)波長上自動(dòng)獲得圖像，使用核染色作為圖像儀的基于圖像的自動(dòng)對(duì)焦系統(tǒng)的參照點(diǎn)，因?yàn)楹巳旧嬖谟谒锌字?。選擇適當(dāng)?shù)奈镧R和每孔中成像位點(diǎn)數(shù)來覆蓋每個(gè)孔的整個(gè)表面。設(shè)置自動(dòng)化成像分析，在48小時(shí)后基于用抗-pgp9.5抗體的特異性染色來計(jì)數(shù)每個(gè)孔中存在的神經(jīng)元數(shù)。對(duì)圖像小心地取閾值并應(yīng)用基于形態(tài)學(xué)和熒光強(qiáng)度的選擇性濾鏡，得到精確的每孔神經(jīng)元計(jì)數(shù)。該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證明fabe3以高親合力阻斷ngf活性。結(jié)果展示于wo2004/058184的圖4-6中，和表9中。wo2004/058184的圖4是展示存在不同濃度人和大鼠ngf時(shí)e13.5神經(jīng)元的ngf-依賴型存活的圖片。wo2004/058184的圖5是比較存在0.04ng/ml人ngf(約1.5pm；展示于下圖中)或0.4ng/ml人ngf(約15pm；展示于上圖中)時(shí)多種fab的ngf阻斷效應(yīng)的圖片。1.5pmngf在促進(jìn)存活的ngf的ec50左右，而15pm代表ngf的飽和濃度。如上文所述評(píng)價(jià)多種fabe3；鼠911fab；和fabh19-l129與fab8l2-6d5濃度下e13.5小鼠三叉神經(jīng)神經(jīng)元的存活。在每個(gè)ngf濃度下針對(duì)每種fab計(jì)算ic50(以pm計(jì))，并展示于表9中。fabe3在存在15pm人ngf時(shí)以約21pm的ic50、在存在1.5pm人ngf時(shí)以約1.2pm的ic50有力地阻斷人ngf-依賴型三叉神經(jīng)神經(jīng)元存活。fabs3c和h19-l129也有力地阻斷人ngf-依賴型三叉神經(jīng)神經(jīng)元存活。圖6是比較存在0.04ng/ml大鼠ngf(約1.5pm；展示于下圖中)或0.4ng/ml大鼠ngf(約15pm；展示于上圖中)時(shí)多種fab的ngf阻斷效應(yīng)的圖片。1.5pmngf在ec50左右，而15pm代表ngf的飽和濃度。如上文所述評(píng)價(jià)多種fabe3；鼠911fab；和fabh19-l129與fab8l2-6d5濃度下e13.5小鼠三叉神經(jīng)神經(jīng)元的存活。在每個(gè)ngf濃度下針對(duì)每種fab計(jì)算ec50(以pm計(jì))，并展示于表9中。fabe3在存在15pm大鼠ngf時(shí)以約31.6pm的ic50、在存在1.5pm大鼠ngf時(shí)以約1.3pm的ic50有力地阻斷人ngf-依賴型三叉神經(jīng)神經(jīng)元存活。fabs3c和h19-l129也有力地阻斷大鼠ngf-依賴型三叉神經(jīng)神經(jīng)元存活。表9:在不同的實(shí)驗(yàn)中，我們比較了全長抗體e3和fab3e在存在0.4ng/ml(飽和濃度)人ngf時(shí)抑制e13.5神經(jīng)元的ngf-依賴型存活的能力。分析結(jié)果展示于wo2004/058184的圖10中。將全長抗體和fac的濃度標(biāo)準(zhǔn)化為ngf結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)量(fab具有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，全長抗體具有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn))時(shí)，全長抗體e3和fab3e展示了相似水平的ngf-依賴型存活抑制。這些結(jié)果證明不存在歸因于全長抗體與ngf二聚體結(jié)合的親合力效應(yīng)。在另一實(shí)驗(yàn)中，我們比較了多種濃度(20、4、0.8、0.16、0.032、0.0064、0.00128和0.0nm)的抗體e3、抗體911和trka受體免疫粘合素(由與免疫球蛋白fc結(jié)構(gòu)域ch2-ch3融合的ngf受體trka的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域組成)在存在0.4ng/ml(飽和條件)時(shí)抑制e13.5神經(jīng)元的ngf-依賴型存活的能力。這些結(jié)果展示于wo2004/058184的圖11中。這些結(jié)果證明抗體e3比抗體911或trka免疫粘合素任一更好地阻斷ngf。實(shí)施例3：使用小鼠三叉神經(jīng)和結(jié)節(jié)神經(jīng)元存活實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)抗-ngf抗體e3的特異性通過測量在存在飽和濃度的ngf、ngf-相關(guān)神經(jīng)營養(yǎng)蛋白nt3或ngf-無關(guān)的神經(jīng)營養(yǎng)因子——巨噬細(xì)胞刺激蛋白(msp)時(shí)，抗體抑制小鼠e17/18三叉神經(jīng)神經(jīng)元體外存活的能力，來評(píng)價(jià)抗體e3特異性阻斷ngf活性的能力。小鼠e17/18三叉神經(jīng)神經(jīng)元的存活是評(píng)價(jià)抗-ngf拮抗劑抗體的ngf-阻斷活性的一種靈敏實(shí)驗(yàn)，因?yàn)樵诒戎С謊13.5tg神經(jīng)元存活所需ngf水平更高的濃度下支持這些神經(jīng)元的存活需要ngf。這些神經(jīng)元的存活還由nt3或msp支持；因此，這些神經(jīng)元的存活還是評(píng)價(jià)抗-ngf拮抗劑抗體是否也阻斷了nt3或msp的一種靈敏實(shí)驗(yàn)。還通過測量在存在飽和濃度的bdnf或nt4/5時(shí)抗體抑制小鼠結(jié)節(jié)e17神經(jīng)元存活的能力，來評(píng)價(jià)抗體e3特異性阻斷ngf活性的能力。結(jié)節(jié)神經(jīng)元的存活由bdnf或nt4/5支持；因此，這些神經(jīng)元的存活是評(píng)價(jià)抗-ngf拮抗劑抗體的bdnf或nt4/5-阻斷能力的一種靈敏實(shí)驗(yàn)。如下進(jìn)行存活實(shí)驗(yàn)：通過co2吸入使時(shí)間匹配的懷孕的swisswebster雌性小鼠安樂死。取出子宮角，將胚胎(胚胎第17或18天)取出并斷頭。切下并清潔三叉神經(jīng)和結(jié)節(jié)神經(jīng)節(jié)。然后對(duì)所述神經(jīng)節(jié)進(jìn)行胰蛋白酶消化、機(jī)械分離并以每孔200-300個(gè)細(xì)胞的密度涂布于用多聚-l-鳥氨酸和層粘連蛋白覆蓋的96孔板(greiner)中確定的、無血清的培養(yǎng)基中。e17/18三叉神經(jīng)神經(jīng)元在不添加神經(jīng)營養(yǎng)因子(陰性對(duì)照)或存在飽和濃度人ngf(400pm和15pm)(陽性對(duì)照)；nt3(400pm)；或msp(600pm)時(shí)培養(yǎng)。建立包含多種濃度e3和911fab和全長抗體的一式兩份的培養(yǎng)物。指出每個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的fab和全長抗體的濃度(例如全長抗體含有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，而fab含有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn))。在不存在添加的神經(jīng)營養(yǎng)因子(陰性對(duì)照)或存在飽和濃度bdnf(400pm)(陽性對(duì)照)或nt4/5(400pm)或ngf無關(guān)的生長因子ilf(白細(xì)胞介素抑制因子)時(shí)培養(yǎng)e17結(jié)節(jié)。使用高濃度的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白，因?yàn)樵搶?shí)驗(yàn)的目的是測試抗體的特異性。建立包含多種濃度，添加和不添加抗體e3和911的一式兩份的培養(yǎng)物。培養(yǎng)48小時(shí)后，使用相差顯微鏡，通過手動(dòng)計(jì)數(shù)查明每種條件下每孔中存活的神經(jīng)元總數(shù)。這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證明e3和911抗體完全阻斷ngf對(duì)e18三叉神經(jīng)神經(jīng)元的存活促進(jìn)作用。相反，e3和911抗體對(duì)nt3或msp促進(jìn)的三叉神經(jīng)神經(jīng)元存活或bdnf或nt4/5或lif促進(jìn)的結(jié)節(jié)神經(jīng)元的存活沒有影響。這些結(jié)果證明，抗體e3對(duì)ngf具有選擇性特異性，并且在1000-到10,000-倍于ngf阻斷有效濃度的濃度下，這些抗體和其它ngf相關(guān)的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(nt3、nt4/5、bdnf)之間未檢測到相互作用。另外，這些結(jié)果證明，添加抗體或fabe3后，在ngf-依賴型神經(jīng)元的補(bǔ)充ngf的培養(yǎng)物中觀察到的神經(jīng)元死亡歸因于這些抗體和ngf之間的特異性相互作用，而不是歸因于普遍的毒效應(yīng)。還測試了小鼠抗-ngf拮抗劑抗體911，并觀察到類似的結(jié)果。注意由于使用了高濃度的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白，所以抗體e3和911均非常接近它們的滴定條件(titrationconditions)并預(yù)期以相似的水平結(jié)合ngf，因?yàn)樵谶@些條件下這些抗體對(duì)ngf的親合力的差異較不明顯。這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果展示于wo2004/058184的圖12、13、14和15中。數(shù)據(jù)顯示對(duì)每個(gè)實(shí)驗(yàn)而言，48小時(shí)后培養(yǎng)物中相對(duì)于陽性對(duì)照中觀察的存活(例如分別為存在飽和ngf濃度時(shí)培養(yǎng)的三叉神經(jīng)元的100％存活，和存在飽和bdnf濃度時(shí)培養(yǎng)的結(jié)節(jié)神經(jīng)元的100％存活)的平均存活百分比(均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，對(duì)每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)而言n＝3)。wo2004/058184的圖12-13是下述圖片，其展示即便在高達(dá)200nm的抗體濃度下，抗-ngf拮抗劑抗體e3或fabe3也不抑制nt3和msp促進(jìn)的存活。相反，20nm的抗體e3或fab3e和fab911完全阻斷ngf-介導(dǎo)的存活。還檢測了小鼠抗-ngf拮抗劑抗體911，并觀察到相似的結(jié)果。特別地，wo2004/058184的圖12是下述圖片，其展示在不添加神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(稱作“對(duì)照”)、添加400pmngf(稱作“ngf-400pm”)、10nmnt3(稱作“nt3-10nm”)或600pmmsp(稱作“msp-600pm”)時(shí)，多種濃度(20nm、2nm或0.2nm)的e3fab(在圖中稱作“3e”)和小鼠抗體911fab對(duì)e18三叉神經(jīng)神經(jīng)元存活的影響的比較。wo2004/058184的圖13是下述圖片，其展示不添加神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(稱作“無因子”)、添加400pmngf(稱作“ngf-400pm”)、10nmnt3(稱作“nt3-10nm”)或600pmmsp(稱作“msp-600pm”)時(shí)，多種濃度(200nm和80nm)的e3fab和全長抗體和小鼠抗體911全長抗體和fab對(duì)e17三叉神經(jīng)神經(jīng)元存活的影響的比較。wo2004/058184的圖14-15展示了抗-ngf拮抗劑抗體e3或fabe3不抑制bdnf、nt4/5或lif促進(jìn)的e17結(jié)節(jié)神經(jīng)元的存活。還測試了小鼠抗-ngf拮抗劑抗體911，并觀察到相似的結(jié)果。特別地，wo2004/058184的圖14是下述圖片，其展示了不添加神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(稱作“無因子”)、添加400pmbdnf(稱作“bdnf-400pm”)、400pmnt4/5(稱作“nt4/5-400pm”)或2.5nmlif(稱作“l(fā)ip-2.5nm”)時(shí)，多種濃度(200nm或80nm)的全長抗體e3(在圖中稱作“3e”)、fabe3、全長抗體911或fab911對(duì)e17結(jié)節(jié)神經(jīng)元存活的影響的比較。wo2004/058184的圖15是下述圖片，其展示了不添加神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(稱作“對(duì)照”)、添加400pmbdnf(稱作“bdnf-400pm”)、400pmnt4/5(稱作“nt4/5-400pm”)或2.5nmlif(稱作“l(fā)ip-2.5nm”)時(shí)，多種濃度(200nm、20nm、2nm)的fabe3(在圖中稱作“3e”)或fab911對(duì)e17結(jié)節(jié)神經(jīng)元存活的影響的比較。實(shí)施例4：制備哺乳動(dòng)物表達(dá)載體并在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)抗體e3設(shè)計(jì)并構(gòu)建用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)抗體e3的三種哺乳動(dòng)物表達(dá)載體。載體db.911.3e是包含e3抗體重鏈可變區(qū)和人igg2a恒定區(qū)的表達(dá)載體，并且適用于重鏈的瞬時(shí)表達(dá)或穩(wěn)定表達(dá)。db.911.3e由對(duì)應(yīng)于以下區(qū)域的核苷酸序列組成：鼠巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子區(qū)(核苷酸1-612)；合成內(nèi)含子(核苷酸619-1507)；dhfr編碼區(qū)(核苷酸707-1267)；人生長激素信號(hào)肽(核苷酸1525-1602)；抗體3e重鏈可變區(qū)(核苷酸1603-1965)；人重鏈igg2a恒定區(qū)，其含有a330p331到s330s331的突變(氨基酸編號(hào)參照野生型igg2a序列；見eur.j.immunol.(1999)29:2613-2624)；sv40晚多聚腺苷酸化信號(hào)(核苷酸2974-3217)；sv40增強(qiáng)子區(qū)(核苷酸3218-3463)；噬菌體f1區(qū)(核苷酸3551-4006)和β內(nèi)酰胺酶(ampr)編碼區(qū)(核苷酸4443-5300)。db.911.3e在2003年1月8日保藏于atcc，并被指定了atcc登錄號(hào)no.pta-4895。載體eb.911.3e是包含e3抗體輕鏈可變區(qū)和人κ鏈恒定區(qū)的表達(dá)載體，并且適用于輕鏈的瞬時(shí)表達(dá)。eb.911.3e由對(duì)應(yīng)于以下區(qū)域的核苷酸序列組成：鼠巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子區(qū)(核苷酸1-612)；人ef-1內(nèi)含子(核苷酸619-1142)；人生長激素信號(hào)肽(核苷酸1173-1150)；抗體e3輕鏈可變區(qū)(核苷酸1251-1571)；人κ鏈恒定區(qū)(核苷酸1572-1892)；sv40晚多聚腺苷酸化信號(hào)(核苷酸1910-2153)；sv40增強(qiáng)子區(qū)(核苷酸2154-2399)；噬菌體f1區(qū)(核苷酸2487-2942)和β內(nèi)酰胺酶(ampr)編碼區(qū)(核苷酸3379-4236)。eb.911.3e在2003年1月8日保藏于atcc，并被指定了atcc登錄號(hào)no.pta-4893。載體eb.pur.911.3e是包含e3抗體輕鏈可變區(qū)和人κ鏈恒定區(qū)的表達(dá)載體，并且適用于輕鏈的穩(wěn)定表達(dá)。eb.pur.911.3e由對(duì)應(yīng)于以下區(qū)域的核苷酸序列組成：鼠巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子區(qū)(核苷酸1-612)；人ef-1內(nèi)含子(核苷酸619-1758)；pac基因(嘌呤霉素r)編碼區(qū)(核苷酸739-1235)；人hsp705'utr區(qū)(核苷酸1771-1973)；人生長激素信號(hào)肽(核苷酸1985-2062)；抗體e3輕鏈可變區(qū)(核苷酸2063-2383)；人κ鏈恒定區(qū)(核苷酸2384-2704)；sv40晚多聚腺苷酸化信號(hào)(核苷酸2722-2965)；sv40增強(qiáng)子區(qū)(核苷酸2966-3211)；噬菌體f1區(qū)(核苷酸3299-3654)和β內(nèi)酰胺酶(ampr)編碼區(qū)(核苷酸4191-5048)。eb.pur.911.e3在2003年1月8日保藏于atcc，并被指定了atcc登錄號(hào)no.pta-4894。如下進(jìn)行瞬時(shí)細(xì)胞表達(dá)：用25ug每種質(zhì)粒(即一種含有重鏈的質(zhì)粒和一種含有輕鏈的質(zhì)粒)瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染150mm盤中的cho和hek293t細(xì)胞。根據(jù)制造商說明將dna與100ullipofectamine2000(invitrogen)混合。允許dna-脂質(zhì)復(fù)合物與細(xì)胞在不含血清或抗生素的dmem/f12培養(yǎng)基中接觸5小時(shí)。該孵育后，為了表達(dá)將培養(yǎng)基改變?yōu)椴缓魏翁砑觿┑膐pti-mem(invitrogen)，孵育兩天。用隨后的培養(yǎng)基取代將含有抗體的細(xì)胞上清液連續(xù)收獲至多四次。使用mapselecta蛋白樹脂(amershambiosciences17-5199-02)，通過親和性色譜純化上清液?？贵w與0.3m甘氨酸、ph8下0.6mnacl緩沖液中的蛋白a樹脂結(jié)合，然后用ph3的0.1m檸檬酸緩沖液洗脫。立即用ph8.0的1mtris緩沖液中和含有抗體的級(jí)分。然后在pbs中透析和濃縮抗體級(jí)分。實(shí)施例5–臨床研究用抗-ngf拮抗劑抗體e3治療臨床診斷為間質(zhì)性膀胱炎的患者，以正是抗-ngf抗體抗體e3在治療一種或多種與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱炎和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和下泌尿道癥狀中的安全性和效力。要治療的患者可患有中度到嚴(yán)重的間質(zhì)性膀胱炎，如治療前篩選中通過至少18的骨盆疼痛和尿急/尿頻(puf–parsons等，urology2002；60:573-578))評(píng)分和至少8的o’leary-sant間質(zhì)性膀胱炎癥狀指數(shù)(icsi–o’leary等，urology1997；49(suppl5a):58-63)評(píng)分所定義。要滿足其它的包括標(biāo)準(zhǔn)(inclusioncriteria)。不滿足所有包括標(biāo)準(zhǔn)或滿足一個(gè)或多個(gè)排除標(biāo)準(zhǔn)(exclusioncriteria)的患者應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為篩選失敗，并且不會(huì)被隨機(jī)化進(jìn)該研究中。評(píng)價(jià)治療與間質(zhì)性膀胱炎和/或痛性膀胱綜合征和/或膀胱疼痛綜合征相關(guān)的疼痛和下泌尿道癥狀中，與安慰劑相比通過輸注的單一劑量抗體的效力。以200μg/kg的劑量對(duì)患者靜脈內(nèi)施用e3抗體。除了效力以外，還評(píng)價(jià)了與安慰劑相比治療效果的登記；間質(zhì)性膀胱炎的生物標(biāo)記物對(duì)抗體治療的應(yīng)答；和治療應(yīng)答速率，以及其它測量結(jié)果。生物標(biāo)記物包括ngf、糖蛋白-51(gp-51)、抗增殖因子(apf)和hb-表皮生長因子(hb-egf)等等。在靜脈內(nèi)輸注單劑量e3抗體后6周分析一級(jí)端點(diǎn)(primaryendpoint)。給藥后2、10和16周的評(píng)價(jià)被包括在內(nèi)作為二級(jí)端點(diǎn)(secondaryendpont)。一級(jí)端點(diǎn)應(yīng)當(dāng)是11-點(diǎn)疼痛數(shù)字評(píng)價(jià)量表(ncs)中的改變。使用o’leary-sant間質(zhì)性膀胱炎癥狀指數(shù)(icsi)評(píng)分作為二級(jí)端點(diǎn)。其它二級(jí)端點(diǎn)包括o’leary-sant間質(zhì)性膀胱炎問題指數(shù)(icpi-o’leary等，urology1997；49(suppl5a):58-63)，icsi加icpi，骨盆疼痛和尿急/尿頻(puf)，平均日常疼痛，由患者在研究期間記錄的排尿日記變量，包括排尿頻率、夜尿頻率、失禁發(fā)作頻率、每次排尿排泄的平均體積、平均間質(zhì)性膀胱炎疼痛嚴(yán)重性、泌尿急性發(fā)作、平均睡眠擾動(dòng)評(píng)分、與性行為疼痛評(píng)分相關(guān)的平均疼痛評(píng)分、全局應(yīng)答評(píng)價(jià)、報(bào)告治療影響評(píng)價(jià)的專利(patentreportingtreatmentimpactassessment)、治療失敗、生物標(biāo)記物、安全性端點(diǎn)(safetyendpoint)和/或藥物代謝動(dòng)力學(xué)度量。生物標(biāo)記物可包括ngf、糖蛋白-51(gp-51)、抗增殖因子(apf)和hb-表皮生長因子(hb-egf)以及其它。以下數(shù)據(jù)來自于下述進(jìn)行中的臨床試驗(yàn)的中期分析，所述試驗(yàn)利用上述方案評(píng)價(jià)患有間質(zhì)性膀胱炎/痛性膀胱綜合征/膀胱疼痛綜合征(ic/pbs/bps)的患者中e3抗體的安全性和效力。在中期分析中使用來自24個(gè)患者的數(shù)據(jù)。在疼痛nrs和icsi評(píng)分中均觀察到清楚的改善(降低)。在接受e3抗體的患者中觀察到的改善比在接受安慰劑的患者中觀察到的更大。這些數(shù)據(jù)對(duì)下述事實(shí)提供了支持：e3抗體可有效治療與ic/pbs/bps相關(guān)的疼痛和其它下泌尿道綜合征(luts)。然而，最終的研究結(jié)果需要評(píng)價(jià)。使用11點(diǎn)(0–10)數(shù)字評(píng)價(jià)量表(nrs)。該量表是經(jīng)確認(rèn)的，并且廣泛用于評(píng)價(jià)目的在于緩解疼痛的治療。間質(zhì)性膀胱炎癥狀指數(shù)(icsi)用范圍從0到20的評(píng)分評(píng)價(jià)全局ic癥狀嚴(yán)重性。其以涉及與ic/pbs/bps相關(guān)的疼痛和luts的4個(gè)問題為基礎(chǔ)。這些問題包括在之前4周中對(duì)白天和夜晚尿頻、尿急和膀胱疼痛嚴(yán)重性的測量。生物材料的保藏以下材料已保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection(atcc),10801universityboulevard,manassas,virginia,美國)：涉及這些保藏的細(xì)節(jié)可見wo2004058184，其內(nèi)容通過引用整體并入本文。抗體序列重鏈可變區(qū)(kabatcdr帶有下劃線；chothiacdr為粗體和斜體)qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgfsliwirqppgkglewigrvtiskdtsknqfslklssvtaadtavyycarwgqgtlvtvs(seqidno:1)輕鏈可變區(qū)(kabatcdr帶有下劃線；chothiacdr為粗體和斜體)diqmtqspsslsasvgdrvtitcwyqqkpgkapklliygvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyycfgqgtkleikrt(seqidno:2)e3重鏈擴(kuò)大的cdrscdrh1:gfsligydln(seqidno:3)cdrh2:iiwgdgttdynsavks(seqidno:4)cdrh3:ggywyatsyyfdy(seqidno:5)e3輕鏈擴(kuò)大的cdrscdrl1:rasqsisnnln(seqidno:6)cdrl2:ytsrfhs(seqidno:7)cdrl3:qqehtlpyt(seqidno:8)小鼠單克隆抗體911擴(kuò)大的cdrs911重鏈擴(kuò)大的cdrscdrh1:gfsligydin(seqidno:9)cdrh2:miwgdgttdynsalks(seqidno:10)cdrh3:ggyyygtsyyfdy(seqidno:11)911重鏈擴(kuò)大的cdrscdrl1:rasqdisnhln(seqidno:12)cdrl2:yisrfhs(seqidno:13)cdrl3:qqsktlpyt(seqidno:14)e3重鏈氨基酸序列(全長)qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgfsligydlnwirqppgkglewigiiwgdgttdynsavksrvtiskdtsknqfslklssvtaadtavyycarggywyatsyyfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpssiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:16)3e輕鏈氨基酸序列(全長抗體)diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqsisnnlnwyqqkpgkapklliyytsrfhsgvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyycqqehtlpytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:17)3e重鏈核苷酸序列(全長抗體)caggtgcagctgcaggagtctggcccaggactggtgaagccttccgagaccctgtccctcacctgcactgtctctgggttctcacttatcggctatgatcttaactggatccgacagcctccagggaagggactggagtggattgggattatctggggtgatggaaccacagactataattcagctgtcaaatcccgcgtcaccatctcaaaagacacctccaagaaccagttctccctgaagctgagctctgtgaccgccgcggacacggccgtgtattactgtgcgagaggaggttattggtacgccactagctactactttgactactggggccagggcaccctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatctgtcttcccactggccccatgctcccgcagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttcccagaacctgtgaccgtgtcctggaactctggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtcctcaggtctctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccatccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagccaagcaacaccaaggtcgacaagaccgtggagagaaagtgttgtgtggagtgtccaccttgtccagcccctccagtggccggaccatccgtgttcctgttccctccaaagccaaaggacaccctgatgatctccagaaccccagaggtgacctgtgtggtggtggacgtgtcccacgaggacccagaggtgcagttcaactggtatgtggacggagtggaggtgcacaacgccaagaccaagccaagagaggagcagttcaactccaccttcagagtggtgagcgtgctgaccgtggtgcaccaggactggctgaacggaaaggagtataagtgtaaggtgtccaacaagggactgccatccagcatcgagaagaccatctccaagaccaagggacagccaagagagccacaggtgtataccctgccaccatccagagaggagatgaccaagaaccaggtgtccctgacctgtctggtgaagggattctatccatccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggacagccagagaacaactataagaccacccctccaatgctggactccgacggatccttcttcctgtattccaagctgaccgtggacaagtccagatggcagcagggaaacgtgttctcttgttccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactatacccagaagagcctgtccctgtctccaggaaagtaa(seqidno:65)3e中鏈可變區(qū)核苷酸序列caggtgcagctgcaggagtctggcccaggactggtgaagccttccgagaccctgtccctcacctgcactgtctctgggttctcacttatcggctatgatcttaactggatccgacagcctccagggaagggactggagtggattgggattatctggggtgatggaaccacagactataattcagctgtcaaatcccgcgtcaccatctcaaaagacacctccaagaaccagttctccctgaagctgagctctgtgaccgccgcggacacggccgtgtattactgtgcgagaggaggttattggtacgccactagctactactttgactactggggccagggcaccctggtcaccgtctcctca(seqidno:66)3e輕鏈核苷酸序列(全長抗體)gatatccagatgacacagtccccatcctccctgtctgcctctgtgggtgaccgcgtcaccatcacctgccgcgcatctcagtccattagcaataatctgaactggtatcagcagaagccaggcaaagccccaaaactcctgatctactacacctcacgcttccactcaggtgtcccatcacgcttcagtggcagtggctctggtacagatttcaccttcaccattagcagcctgcaaccagaagatattgccacttattactgccaacaggagcatacccttccatataccttcggtcaaggcaccaagctggagatcaaacgcactgtggctgcaccatctgtcttcatctttcctccatctgatgagcagttgaaatccggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatccacgcgaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatccggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgaccctgagcaaagcagactacgagaaacacmaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagttctccagtcacaaagagcttcaaccgcggtgagtgctaa(seqidno:67)3e輕鏈可變區(qū)核苷酸序列g(shù)atatccagatgacacagtccccatcctccctgtctgcctctgtgggtgaccgcgtcaccatcacctgccgcgcatctcagtccattagcaataatctgaactggtatcagcagaagccaggcaaagccccaaaactcctgatctactacacctcacgcttccactcaggtgtcccatcacgcttcagtggcagtggctctggtacagatttcaccttcaccattagcagcctgcaaccagaagatattgccacttattactgccaacaggagcatacccttccatataccttcggtcaaggcaccaagctggagatcaaacgc(seqidno:68)上述序列和本文所述其它序列在附帶的序列表中提供。序列表自由文本(freetext)附帶的序列表中名為seqidnos.1-8、15-68、70-72、74-77的序列具有自由文本“合成構(gòu)建體”。應(yīng)當(dāng)理解本文所述的實(shí)施例和實(shí)施方式僅用于闡述的目的，多種修飾或改變以它們?yōu)榛A(chǔ)被提示給本領(lǐng)域的技術(shù)人員，并且應(yīng)包括在本申請(qǐng)的精神和范圍內(nèi)。序列表<120>間質(zhì)性膀胱炎的治療<130>pc33649<160>77<170>fastseqforwindowsversion4.0<210>1<211>120<212>prt<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建體<400>1glnvalglnleuglngluserglyproglyleuvallysproserglu151015thrleuserleuthrcysthrvalserglypheserleuileglytyr202530aspleuasntrpileargglnproproglylysglyleuglutrpile354045glyileiletrpglyaspglythrthrasptyrasnseralavallys505560serargvalthrileserlysaspthrserlysasnglnpheserleu65707580lysleuserservalthralaalaaspthralavaltyrtyrcysala859095argglyglytyrtrptyralathrsertyrtyrpheasptyrtrpgly100105110glnglythrleuvalthrvalser115120<210>2<211>109<212>prt<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建體<400>2aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnserileserasnasn202530leuasntrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrtyrthrserargphehisserglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrphethrileserserleuglnpro65707580gluaspilealathrtyrtyrcysglnglngluhisthrleuprotyr859095thrpheglyglnglythrlysleugluilelysargthr100105<210>3<211>10<212>prt<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建體<400>3glypheserleuileglytyraspleuasn1510<210>4<211>16<212>prt<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建體<400>4ileiletrpglyaspglythrthrasptyrasnseralavallysser151015<210>5<211>13<212>prt<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建體<400>5glyglytyrtrptyralathrsertyrtyrpheasptyr1510<210>6<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建體<400>6argalaserglnserileserasnasnleuasn1510<210>7<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建體<400>7tyrthrserargphehisser15<210>8<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建體<400>8glnglngluhisthrleuprotyrthr15<210>9<211>10<212>prt<213>musmusculus<400>9glypheserleuileglytyraspileasn1510<210>10<211>16<212>prt<213>musmusculus<400>10metiletrpglyaspglythrthrasptyrasnseralaleulysser151015<210>11<211>13<212>prt<213>musmusculus<400>11glyglytyrtyrtyrglythrsertyrtyrpheasptyr1510<210>12<211>11<212>prt<213>musmusculus<400>12argalaserglnaspileserasnhisleuasn1510<210>13<211>7<212>prt<213>musmusculus<400>13tyrileserargphehisser15<210>14<211>9<212>prt<213>musmusculus<400>14glnglnserlysthrleuprotyrthr15<210>15<211>15<212>prt<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建體<400>15glyglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglyser151015<210>16<211>447<212>prt<213>人工序列<220><223>合成構(gòu)建體<400>16glnvalglnleuglngluserglyproglyleuvallysproserglu151015thrleuserleuthrcysthrvalserglypheserleuileglytyr202530aspleuasntrpileargglnproproglylysglyleuglutrpi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