官能化的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物的制作方法
本發(fā)明涉及新的官能化的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物、其制備方法、含有其的藥物組合物及其在治療細(xì)胞增殖異常疾病中的用途。作為一個(gè)實(shí)例，本發(fā)明的化合物可用于治療腫瘤。本發(fā)明還涉及其在制備綴合物中的用途。
蒽環(huán)類是顯示出細(xì)胞毒活性的抗生素化合物。一些研究表明蒽環(huán)類可以通過大量不同的機(jī)制作用以殺死細(xì)胞，所述機(jī)制包括：1)插入細(xì)胞的dna，從而抑制dna-依賴性核酸合成；2)產(chǎn)生自由基，然后其與細(xì)胞大分子反應(yīng)，造成細(xì)胞被破壞，或3)與細(xì)胞膜相互作用[參見，例如c.peterson等人,”transportandstorageofanthracyclineinexperimentalsystemsandhumanleukemia”inanthracyclineantibioticsincancertherapy(1982),pp.132-146；andn.r.bachur,“freeradicaldamage”id.pp.97-102]。因?yàn)樗鼈兊募?xì)胞毒活性，蒽環(huán)類已經(jīng)用于治療許多癌癥，比如白血病、乳腺癌、肺癌、卵巢腺癌和肉瘤[參見，例如p.h-wiernik,inanthracycline:currentstatusandnewdevelopments(1980),p.11]。通常使用的蒽環(huán)類包括多柔比星、表柔比星、伊達(dá)比星和道諾霉素。
近年來，已經(jīng)合成了許多新的高細(xì)胞毒性蒽環(huán)類衍生物。
載有在糖部分的c-3’位上連接的取代的嗎琳子基環(huán)的蒽環(huán)類衍生物已經(jīng)顯示出對試驗(yàn)鼠腫瘤[參見∶j.w.lown,bioactivemolecules,vol6,(1988),pp.55-101]和治療肝細(xì)胞癌的臨床試驗(yàn)[參見∶c.sessa,o.valota,c.geroni,cardiovasculartoxicology,vol.7(2),(2007),pp.75-79]中的有希望的抗腫瘤活性。
在申請人為pharmacia&upjohnspa的國際專利申請wo9802446中已經(jīng)公開了作為抗腫瘤劑的新的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物，其中嗎琳子基環(huán)與氧原子橋接在糖殘基的c-4’位上。
在申請人為farmitaliacarloerbasrl的專利申請ep288268和ep381989中也公開了作為抗腫瘤劑的4-氨基和4-氟蒽環(huán)類衍生物。盡管在抗癌研究中做了努力，但是癌癥仍然是隱隱可見且難以捉摸的靶標(biāo)，因此，仍然需要新的抗癌劑。
盡管這些化合物可以用于治療贅生物和其中尋求消除所選擇的細(xì)胞群的其它疾病狀態(tài)，它們的治療效果通常受限于與其給藥相關(guān)的劑量依賴性毒性。
在臨床上使用蒽環(huán)類衍生物的限制包括在腫瘤中的蓄積不足、心臟毒性、輸注時(shí)間延長、抵抗癌細(xì)胞過表達(dá)膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和劑量限制性副作用比如腹瀉和骨髓抑制(int.j.nanomedicine,2007；2(4):567-83；med.sci.monit.2000；6(2)；adriamycinreview,pp123-131,mediokon,belgium:europeanpress,1975；anninternmed.1982；96(2):133-139)。
細(xì)胞毒性藥物與能夠運(yùn)載藥物從而提高腫瘤靶向性或能夠修飾其藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的分子的藥物綴合是已經(jīng)采用來解決上述問題的策略之一。
蒽環(huán)類衍生物綴合物已經(jīng)公開在例如國際專利申請wo2009/099741和wo2010/009124中。
已經(jīng)報(bào)道了細(xì)胞毒性藥物與蛋白質(zhì)、肽、適體、聚合物或納米顆粒綴合的不同實(shí)例具有更好的靶向遞送、改善溶解性，和在某些情況下改善其它藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，比如增加藥物的半衰期或局部濃度，以及改善藥物性能。事實(shí)上，根據(jù)與細(xì)胞毒性劑綴合的特定分子的性質(zhì)等，得到的綴合物在溶解性、進(jìn)入細(xì)胞的滲透性、體內(nèi)治療窗、控制釋放、達(dá)到靶點(diǎn)的能力方面都具有改善的特性。
為此，持續(xù)需要開發(fā)適于與不同類型的分子綴合的官能化的細(xì)胞毒性劑。
本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供官能化的蒽環(huán)類衍生物，其進(jìn)一步顯示細(xì)胞毒活性、具有高溶解度，從而改善了制劑和/或藥代動(dòng)力/藥效學(xué)性質(zhì)。此外，這些官能化的蒽環(huán)類衍生物也適于進(jìn)行綴合。
本發(fā)明涉及式(i)的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物
ant-l-w-z-rm(i)
其中
rm為不存在或活性部分，
z為不存在或肽(peptidic)、非肽或雜化的-肽和非肽-連接基；
w為不存在或自切除(self-immolative)系統(tǒng)，包含一個(gè)或多個(gè)自切除基團(tuán)；
l為不存在或條件可裂解的部分；
ant為選自式(ii)、(iii)、(iv)和(v)的蒽環(huán)類部分∶
其中所述波浪線表示連接
至條件可裂解的部分l，或
至所述自切除系統(tǒng)w，或
至所述連接基z，或
至所述活性部分rm；
條件是l、w、z和rm中至少一個(gè)不能不存在；
r1為鹵素或nr4r5；
r2為or6、nr7r8或任選取代的選自下述的基團(tuán)：
直鏈或支鏈的c1-c4烷基-、nr7r8-c1-c4烷基-和r6o-c1-c4烷基-；
r4和r5獨(dú)立地為氫、單取代的-芐基、二取代的-芐基或任選取代的選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基、nr7r8-c1-c6烷基-、r6o-c1-c6烷基-、r7r8n-c1-c6烷基羰基-、r6o-c1-c6烷基羰基-、r7r8n-c1-c6烷氧基羰基-和r6o-c1-c6烷氧基羰基-；或
r4和r5與它們結(jié)合的氮原子一起形成被r4’取代的雜環(huán)基，其中r4’為氫或選自直鏈或支鏈的c1-c6烷基和nr7r8-c1-c6烷基-的基團(tuán)；
r15為不存在或任選取代的選自下述的二價(jià)基團(tuán)：-nr7-c1-c6烷基*、-o-c1-c6烷基*、-nr7-c1-c6烷基羰基*、-o-c1-c6烷基羰基*、-nr7-c1-c6烷氧基羰基*和-o-c1-c6烷氧基羰基*，其中*表示與-nh-ant的連接點(diǎn)；
r6、r7和r8獨(dú)立地為氫或任選取代的直鏈或支鏈的c1-c6烷基；
或其可藥用鹽。
根據(jù)本發(fā)明且除非另有規(guī)定，上述r2、r4、r5、r6、r7、r8和r15基團(tuán)可以是在任一個(gè)其自由位置任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自下述的基團(tuán)，例如1至3個(gè)基團(tuán)取代：鹵素、直鏈或支鏈的c1-c4烷基、多氟化的c1-c4烷基、直鏈或支鏈的c1-c4烷氧基、多氟化的c1-c4烷氧基、羥基、氨基、直鏈或支鏈的c1-c4烷基氨基、二-c1-c4烷基氨基、c1-c4烷基羰基、c3-c7環(huán)烷基、c3-c7環(huán)烷基-c1-c4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基-c1-c4烷基、芳基、芳基-c1-c4烷基、雜芳基和雜芳基-c1-c4烷基。
本發(fā)明還提供合成經(jīng)由包括標(biāo)準(zhǔn)合成轉(zhuǎn)化的方法制備的式(i)的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物、及其異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、水合物、溶劑合物、復(fù)合物、代謝物、前藥、載體、n-氧化物的方法。
而且，本發(fā)明提供一種藥物組合物，包括治療有效量的如上定義的式(i)的衍生物或其可藥用鹽和至少一種可藥用賦形劑、載體或稀釋劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種藥物組合物，其包括治療有效量的式(i)的衍生物和一種或多種化療劑。
本發(fā)明還提供一種藥物組合物，包括治療有效量的式(i)的衍生物與已知抗癌治療比如放療或化療方案的組合、與下述藥劑的組合：細(xì)胞抑制劑或細(xì)胞毒性劑、抗生素類型試劑、烷化劑、抗代謝劑、激素試劑、免疫試劑、干擾素類型試劑、環(huán)氧合酶抑制劑(例如cox-2抑制劑)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、端粒酶抑制劑、酪氨酸激酶抑制劑、抗-生長因子受體試劑、抗-her2試劑、抗-egfr試劑、抗-血管生成劑(例如，血管生成抑制劑)、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、ras-raf信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑、細(xì)胞周期抑制劑、其他cdks抑制劑、微管蛋白粘合劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶ii抑制劑等。
另外，本發(fā)明提供一種產(chǎn)品，包括如上定義的式(i)的衍生物或其可藥用鹽和一種或多種化療劑，作為用于抗癌療法中同時(shí)、分開或連續(xù)使用的組合制備物。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供如上定義的式(i)的衍生物或其可藥用鹽，用作藥物。
本發(fā)明還提供如上定義的式(i)的衍生物，用于治療癌癥、細(xì)胞增殖障礙和病毒感染的方法中。
優(yōu)選地，如上定義的式(i)的衍生物，用于治療特定類型的癌癥的方法中，所述癌癥比如但不限于∶癌，包括膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、肝癌、肺癌，包括小細(xì)胞肺癌、食道癌、膽囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌和皮膚癌，包括鱗狀細(xì)胞癌；淋巴樣譜系的造血系統(tǒng)腫瘤，包括白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、b細(xì)胞淋巴瘤、t-細(xì)胞-淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、毛細(xì)胞淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤；髓系的造血系統(tǒng)腫瘤，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生異常綜合征和前髓細(xì)胞性白血??；間質(zhì)來源的腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤；以及其它腫瘤，包括黑素瘤、精原細(xì)胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、著色性干皮病、角化棘皮瘤、甲狀腺濾泡癌、卡波濟(jì)氏肉瘤和間皮瘤。
而且，如上定義的式(i)的衍生物用于治療下述疾病的方法中：特異性細(xì)胞增殖障礙，比如例如良性前列腺增生、家族性腺瘤性息肉病(fap)、神經(jīng)纖維瘤、銀屑病、與動(dòng)脈粥樣硬化、肺纖維化、關(guān)節(jié)炎、血管球性腎炎和手術(shù)后狹窄和再狹窄相關(guān)的血管平滑肌細(xì)胞增殖。
另外，如上定義的式(i)的衍生物用于抑制腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移的方法中，用于治療器官移植排斥反應(yīng)和宿主抗移植物病的方法中。
本發(fā)明還提供一種用于治療癌癥的方法，其包括向需要其的哺乳動(dòng)物給藥有效量的如上定義的式(i)的衍生物。所述需要其的哺乳動(dòng)物可以是例如人類。
而且，本發(fā)明提供如上定義的式(i)的衍生物或其可藥用鹽在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。
最后，本發(fā)明提供如上定義的式(i)的衍生物或其可藥用鹽在制備綴合物中的用途。
除非另有說明，否則如本文使用的下述術(shù)語和短語意味著具有下述含義。
術(shù)語“直鏈或支鏈的c1-c6烷基”指任一個(gè)下述基團(tuán)，比如例如甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基。
術(shù)語“直鏈或支鏈的c1-c4羥烷基”指任一個(gè)下述基團(tuán)，比如例如2-羥乙基、3-羥丙基、2-羥丙基、4-羥丁基、3-羥丁基、2-羥丁基。
術(shù)語“直鏈或支鏈的c1-c4烷氧基”指任一個(gè)下述基團(tuán)，比如例如甲氧基、乙氧基、丙氧基等。
術(shù)語“多氟化的烷基”或“多氟化的烷氧基”指任一個(gè)被多于一個(gè)氟原子取代的上述直鏈或支鏈的c1-c4烷基或c1-c4烷氧基，比如例如三氟甲基、三氟乙基、1,1,1,3,3,3-六氟丙基、三氟甲氧基等。
對于術(shù)語“鹵素”，我們意指氟、氯、溴或碘。
對于術(shù)語“單取代的-芐基”，我們意指任一個(gè)下述基團(tuán)，比如4-甲氧基芐基、4-甲苯甲基、4-氟芐基、3-甲氧基芐基、3-甲苯甲基、3-氟芐基、2-甲氧基芐基、2-甲苯甲基、2-氟芐基等。
對于術(shù)語“二取代的-芐基”，我們意指任一個(gè)下述基團(tuán)，比如2,4-二甲氧基芐基、2,4-二甲基芐基、2,4-二氟芐基、2,3-二甲氧基芐基、2,3-二甲基芐基、2,3-二氟芐基、2,5-二甲氧基芐基、2,5-二甲基芐基、2,5-二氟芐基、2-氟-4-甲氧基芐基、2-氟-4-甲基芐基等。
對于術(shù)語“直鏈或支鏈的c1-c6烷基羰基”，我們意指任一個(gè)下述基團(tuán)，比如例如甲基羰基、乙基羰基、正丁基羰基、異丙基羰基等。
對于術(shù)語“直鏈或支鏈的c1-c6烷基氨基羰基”，我們意指任一個(gè)下述基團(tuán)，比如例如甲氨基羰基、乙氨基羰基、正丁基氨基羰基、異丙基氨基羰基等。
如本文使用的術(shù)語“直鏈或支鏈的c1-c4巰基烷基”指連接至如之前定義的直鏈或支鏈的c1-c4烷基的-sh基團(tuán)。
如本文使用的術(shù)語“直鏈或支鏈的c1-c4鹵代烷基”指被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的如之前定義的直鏈或支鏈的c1-c4烷基。
對于術(shù)語“直鏈或支鏈的c1-c6烷基磺酰基”，我們意指任一個(gè)下述基團(tuán)，比如例如甲基磺?；?、乙基磺酰基、正丁基磺酰基、異丙基磺酰基等。
對于術(shù)語“直鏈或支鏈的c1-c6烷氧基羰基”，我們意指任一個(gè)下述基團(tuán)，比如例如乙氧基羰基、正丁氧基羰基、異丙氧基羰基、正丙氧基羰基等。
除非另有規(guī)定，對于術(shù)語“c3-c7環(huán)烷基”，我們意指3-至7-元全碳單環(huán)，其可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，但是不具有完全共軛的π-電子體系。環(huán)烷基基團(tuán)的實(shí)例為，但不限于環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)戊烯、環(huán)己烷、環(huán)己烯、環(huán)己二烯、環(huán)庚烷、環(huán)庚烯、環(huán)庚二烯。
如本文使用的術(shù)語“雜環(huán)基”指飽和的或不飽和的非芳香族5-至7-元碳環(huán)，其中1至3個(gè)碳原子被選自氮、氧和硫的雜原子替代，其中所述雜原子可以直接彼此連接，氮和硫可以任選地被氧化，氮可以任選地被季銨化或連接r4取代基。雜環(huán)基基團(tuán)的非限制性實(shí)例為例如哌啶基、哌嗪基、噁唑烷基、4-甲基哌嗪基、4-乙基哌嗪基等。
如本文使用的術(shù)語“芳基”指具有1至2個(gè)(稠合或由單鍵彼此連接)環(huán)部分的碳環(huán)烴，其中至少一個(gè)環(huán)是芳香族的。根據(jù)本發(fā)明的芳基基團(tuán)的實(shí)例為例如苯基、聯(lián)苯基、α-或β-萘基、二氫萘基等。
如本文使用的術(shù)語“雜芳基”指含有1至4個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子的芳香族雜環(huán)環(huán)，通常是4-至7-元雜環(huán)，其中氮和硫可以任選地被氧化，氮可以任選地被季銨化；所述雜芳基環(huán)可以任選地進(jìn)一步稠合或連接至一個(gè)或兩個(gè)或多個(gè)稠合在一起的環(huán)、芳香族和非芳香族碳環(huán)和雜環(huán)環(huán)。雜原子可以直接彼此連接。雜芳基基團(tuán)的實(shí)例包括，但不限于吡啶基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、三唑基、吡唑基、吡嗪基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、咪唑基、噻吩基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、吲唑基、苯并三唑基、苯并異噁唑基、喹喔啉基、異喹啉基和喹啉基。在一個(gè)實(shí)施方案中，雜芳基基團(tuán)包括1至4個(gè)雜原子。應(yīng)當(dāng)注意“c1雜芳基基團(tuán)”指在雜芳香族基團(tuán)的環(huán)體系中僅存在一個(gè)碳(從而未計(jì)算任選取代基中的碳原子)。這樣的雜芳香族基團(tuán)的一個(gè)實(shí)例為四唑基基團(tuán)。
術(shù)語“離去基團(tuán)”指可以在取代反應(yīng)中被另一個(gè)基團(tuán)取代的基團(tuán)。這樣的離去基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的，實(shí)例包括但不限于鹵化物(氟酸根、氯酸根、溴酸根和碘酸根)、疊氮基、磺酸酯基(例如，任選取代的c1-c6烷烴磺酸酯基，比如甲磺酸酯基和三氟甲烷磺酸酯基，或任選取代的c7-c12烷基苯磺酸酯基，比如對-甲苯磺酸酯基)、琥珀酰亞胺-n-氧化物、對-硝基苯氧基、五氟苯氧基、四氟苯氧基、羧酸基、氨基羧酸酯基(氨基甲酸酯基)和烷氧基羧酸酯基(碳酸酯基)。對于在飽和碳上的取代，鹵化物根和磺酸酯基是優(yōu)選的離去基團(tuán)。對于在羰基碳的取代，鹵化物根、琥珀酰亞胺-n-氧化物、對-硝基苯氧基、全氟苯氧基、四氟苯氧基、羧酸酯(根)基或烷氧基羧酸酯(根)基(碳酸酯(根)基)可以例如被用作離去基團(tuán)。術(shù)語“離去基團(tuán)”也指由于消去反應(yīng)(例如，電子級聯(lián)反應(yīng)或螺環(huán)反應(yīng))消除的基團(tuán)。在這一情況下，鹵化物根、磺酸酯基、疊氮化物、氨基羧酸酯基(氨基甲酸酯基)或烷氧基羧酸酯(根)基(碳酸酯(根)基)可以例如被用作離去基團(tuán)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，化學(xué)官能團(tuán)向一個(gè)化學(xué)官能團(tuán)的轉(zhuǎn)化可能要求必須保護(hù)在含有這種官能團(tuán)的化合物中的一個(gè)或多個(gè)反應(yīng)中心，以避免不期望的副反應(yīng)。保護(hù)這種反應(yīng)中心，接著在合成轉(zhuǎn)化結(jié)束時(shí)脫保護(hù)，可以按照文獻(xiàn)中描述的下述標(biāo)準(zhǔn)方法實(shí)現(xiàn)(參見，例如green,theodoraw.andwuts,peterg.m.–protectivegroupsinorganicsynthesis,thirdedition,johnwiley&sonsinc.,newyork(ny),1999)。
因此，術(shù)語“保護(hù)基”指用于在化學(xué)合成中保護(hù)這種反應(yīng)中心的基團(tuán)，例如羥基(-oh)、氨基(-nh)、硫醇基(-sh)、羰基(-c＝o)、羧基(-cooh)。保護(hù)基的實(shí)施例為文獻(xiàn)中報(bào)道的那些(參見，例如，出處同上)。
術(shù)語“氮保護(hù)基”指與氮原子形成氨基甲酸酯、酰胺、環(huán)狀亞胺、n-烷基和n-芳基胺的基團(tuán)。這樣的保護(hù)基是本領(lǐng)域熟知的(參見，例如，出處同上)。氨基甲酸酯保護(hù)基的非限制性實(shí)例是例如甲基和氨基甲酸乙酯、9-芴基氨基甲酸甲酯(fmoc)、2,2,2-三氯氨基甲酸乙酯(troc)、氨基甲酸叔丁酯(boc)、乙烯基氨基甲酸酯(voc)、烯丙基氨基甲酸酯(alloc)、氨基甲酸芐酯(cbz)，對-硝基芐基等。酰胺的非限制性實(shí)例為例如n-三氯乙酰胺、n-三氟乙酰胺(tfa)等。環(huán)狀亞胺保護(hù)基的非限制性實(shí)例為例如n-鄰苯二甲酰亞胺、n-二硫雜琥珀酰亞胺(dithiasuccinoylimide)(dts)等。n-烷基和n-芳基保護(hù)基的非限制性實(shí)例為例如n-烯丙胺、n-苯甲基胺等。
術(shù)語“羥基保護(hù)基”指與氧原子形成醚、酯、環(huán)狀縮醛或縮酮的基團(tuán)。這樣的保護(hù)基是本領(lǐng)域熟知的(參見，例如，出處同上)。醚保護(hù)基的非限制性實(shí)例為例如烷基醚和苯甲醚，比如甲氧基甲基醚(mom-or)、四氫吡喃基醚(thp-or)、烯丙醚(allyl-or)、苯甲醚(bn-or)、三苯甲基醚(tr-or)等，或甲硅烷基醚，比如三甲基甲硅烷醚(tms-or)、叔丁基二甲基甲硅烷基醚(tbs-or或tbdms-or)、叔丁基二苯基甲硅烷基醚(tbdps-or)、二苯基甲基甲硅烷基醚(dpms-or)等。酯保護(hù)基的非限制性實(shí)例為例如三氟醋酸酯、苯甲酸酯(bz-or)和碳酸酯，比如乙基碳酸酯等。環(huán)狀縮醛或縮酮保護(hù)基的非限制性實(shí)例為例如亞甲基縮醛、亞乙基縮醛、甲氧基亞甲基縮醛等。
術(shù)語“活性部分”指改善活性部分連接的化學(xué)功能的化學(xué)反應(yīng)性的官能團(tuán)。以這種方式可以活化的化學(xué)功能基為例如胺和羰基?；钚园返膶?shí)例為烷基磺酰氧基胺、烷基磺酰氧基氨基甲酸酯、苯基磺酰氧基胺、苯基磺酰氧基氨基甲酸酯?；钚贼驶膶?shí)例為例如活性酯。
術(shù)語“活性酯”指其中酯部分的烷氧基為良好離去基團(tuán)的官能團(tuán)。這樣的烷氧基的實(shí)例包括，但不限于琥珀酰亞胺-n-氧化物(nhs酯)、對-硝基苯氧化物、全氟苯氧化物、四氟苯氧化物、1-羥基苯并三唑和1-羥基-7-氮雜苯并三唑，和具有可比較的離去能力的基團(tuán)。未取代的基于烷基的烷氧基比如甲氧基、乙氧基、異丙氧基和叔丁氧基不是合格的良好離去基團(tuán)，因此，甲基、乙基、異丙基和叔丁基酯不被認(rèn)為是活性酯。
術(shù)語“吸電子基團(tuán)”指吸引電子密度從相鄰原子朝向本身的原子團(tuán)，通常通過共振或誘導(dǎo)效應(yīng)。非限制性實(shí)例為鹵素、三氟甲基基團(tuán)、硝基(no2)基團(tuán)和腈(cn)。
術(shù)語“親核物”指載有親核基團(tuán)的分子。術(shù)語“親核基團(tuán)”指在化學(xué)反應(yīng)中向親電子基團(tuán)供給電子對以形成化學(xué)鍵的種類。這樣的親核基團(tuán)的實(shí)例包括，但不限于鹵素、胺、亞硝酸酯、疊氮化物、羥基、烷氧基(alkoxyde)陰離子、羧酸根陰離子、硫醇、硫醇酯基等。
術(shù)語“親電子基團(tuán)”指在化學(xué)反應(yīng)中從親核基團(tuán)接受電子對形成化學(xué)鍵的種類。這樣的親電子基團(tuán)的實(shí)例包括，但不限于酯、醛、酰胺、酮等。
術(shù)語“非天然氨基酸”指天然存在的氨基酸(l-立體異構(gòu)體)的d-立體異構(gòu)體。優(yōu)選的蒽環(huán)類部分(ant)為如下描述的式(iia)、(iiia)、(iva)和(va)的化合物:
其中r1、r2和r15為如上定義的。
式(i)的化合物的可藥用鹽還包括與無機(jī)堿或有機(jī)堿形成的鹽，所述無機(jī)堿或有機(jī)堿為例如堿金屬或堿土金屬，特別是鈉、鉀、鈣、銨或鎂的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽、非環(huán)胺或環(huán)胺。
式(i)的化合物的可藥用鹽包括與無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的鹽，所述無機(jī)酸或有機(jī)酸例如硝酸、鹽酸、氫溴酸、硫酸、高氯酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、富馬酸、乳酸、草酸、丙二酸、蘋果酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、羥乙磺酸和水楊酸。
如果在本發(fā)明的化合物中存在手性(stereogenic)中心或另一種形式的異構(gòu)中心，則所有形式的這樣的異構(gòu)體，包括對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體，都意味著被本文所涵蓋。含有手性中心的化合物可以作為外消旋混合物、對映異構(gòu)體富集的混合物使用，或者可以使用熟知的技術(shù)分離外消旋混合物，并且可以單獨(dú)使用獨(dú)立的對映異構(gòu)體。在其中化合物具有不飽和的碳-碳雙鍵的情況下，順式(z)和反式(e)異構(gòu)體都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
在當(dāng)化合物可以以互變異構(gòu)形式存在的情形中，每種形式預(yù)期都包括在本發(fā)明之內(nèi)，無論是否以平衡存在還是主要以一種形式存在。
條件可裂解的部分l
l部分，如果存在，是條件可裂解的基團(tuán)，當(dāng)使接觸一定條件或在一定條件下時(shí)，其可以通過化學(xué)、光化學(xué)、物理、生物或酶方法裂解。這些條件之一可以是例如，使本發(fā)明的化合物處于引起l水解的水性環(huán)境中，或使本發(fā)明的化合物處于含有識別并裂解l的酶的環(huán)境中，或使本發(fā)明的化合物處于導(dǎo)致l還原和/或切除的還原條件下，或使本發(fā)明的化合物處于導(dǎo)致l氧化且切除的氧化條件下，或使本發(fā)明的化合物接觸導(dǎo)致l裂解的射線例如紫外線，或使本發(fā)明的化合物接觸導(dǎo)致l裂解的熱度。由于循環(huán)系統(tǒng)中存在遍在酶(ubiquitousenzymes)，因此直接在向動(dòng)物例如哺乳動(dòng)物(例如人類)給藥本發(fā)明的化合物之后，可以滿足該條件?？蛇x地，例如由于存在內(nèi)部因素(例如，靶特異性酶或缺氧)或應(yīng)用外部因素(例如，射線、磁場)，當(dāng)所述化合物位于特定器官、組織、細(xì)胞、亞細(xì)胞靶標(biāo)、或細(xì)菌、病毒或微生物靶標(biāo)時(shí)，可以滿足該條件。
在一個(gè)實(shí)施方案中，l可以為被與身體的其它部分相比在靶細(xì)胞附近或在靶細(xì)胞內(nèi)部存在的酶或水解條件裂解的部分，或者被僅在靶細(xì)胞附近或內(nèi)部存在的酶或水解條件裂解的部分。重要的是，認(rèn)識到如果僅僅基于靶位點(diǎn)的所述l的選擇性轉(zhuǎn)化和/或裂解獲得靶位點(diǎn)特異性，則導(dǎo)致裂解的該條件將優(yōu)選地、至少在某種程度上是靶位點(diǎn)特異性的。
在一個(gè)實(shí)施方案中，l的裂解發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，l的裂解發(fā)生在細(xì)胞外。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，l的裂解是由于遍在胞內(nèi)酶而發(fā)生的。
ant-l鍵的裂解導(dǎo)致釋放式(ii)'、(iii)'、(iv)'或(v)'的蒽環(huán)類，如下報(bào)道的：
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，l可以是可以被遍在酶或胞內(nèi)酶裂解或被ph-控制水解的部分，所述遍在酶為例如存在于循環(huán)系統(tǒng)中的酯酶，所述胞內(nèi)酶為比如例如蛋白酶類和磷酸酶。因此，l可以任選地與所連接的原子一起形成可以在體內(nèi)裂解的酰胺、胺、酯、醚或腙鍵。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)ant具有式(iia)時(shí)，l獨(dú)立地為不存在或選自式(via)、(vib)和(vic)的基團(tuán)∶
其中：
c1-c6烷基為直鏈或支鏈；r3為不存在或氫，并且所述波浪線表示與ant的連接點(diǎn)。
在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)ant為式(iiia)的化合物時(shí)，l獨(dú)立地為不存在或選自式(viia)和(viib)的基團(tuán)：
其中：
r9獨(dú)立地為不存在、直鏈或支鏈的c1-c4烷基或羥基；
n為0至2的整數(shù)，和
所述波浪線表示與ant的連接點(diǎn)。
在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)ant具有式(iva)時(shí)，l獨(dú)立地為不存在或式(viiia)的基團(tuán)：
其中
r3為如上定義的，和所述波浪線表示與ant的連接點(diǎn)。
在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)ant具有式(va)，l獨(dú)立地為不存在或選自式(ixa)-(ixd)的基團(tuán)：
其中：
c1-c6烷基為直鏈或支鏈，r3為不存在或氫，和所述波浪線表示與ant的連接點(diǎn)。
自切除系統(tǒng)w
w基團(tuán)，如果存在，為自切除系統(tǒng)，其在式(i)的化合物中以穩(wěn)定的方式將部分l系鏈至式(i)的衍生物的其它部分(z-rm)。當(dāng)使接觸一定條件或在一定條件(如上所述)下時(shí)，l和w之間的鍵，或w和ant之間(當(dāng)l不存在時(shí))的鍵可以當(dāng)通過化學(xué)、光化學(xué)、物理、生物或酶的方法活化時(shí)變得不穩(wěn)定:
自切除系統(tǒng)可以結(jié)合到(i)的化合物中，例如以改善溶解度或改善蒽環(huán)類部分和活性部分rm之間的距離；另外，所述自切除基團(tuán)可以調(diào)節(jié)rm相對于親核物的反應(yīng)性。
自切除系統(tǒng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的(參見，例如wo2002/083180和wo2004/043493中描述的那些)；或tranoy-opalinsi,a.等人,anticanceragentsinmedicinalchemistry,2008,8,618-637,ahmedalouane等人angew.chem.int.ed.2015,54,7492-7509中描述的那些。自切除基團(tuán)的其它實(shí)例包括，但不限于任選取代的4-氨基丁酸酰胺，合適取代的二環(huán)[2.2.1]和二環(huán)[2.2.2]環(huán)系統(tǒng)或2-氨基苯基丙酸酰胺[參見wo2005/079398,wo2005/105154andwo2006/012527；greenwald,r.b.,等人,adv.drugdeliveryrev.2003,55,217-250；kingsbury,w.d.,等人,j.med.chem.1984,27,1447-1451]。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，w可以與連接原子一起形成碳酸酯、氨基甲酸酯、脲、酯、酰胺或醚鍵，其可以在活化時(shí)任選地被裂解。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，w獨(dú)立地為不存在或選自式(xa)-(xf)的基團(tuán)：
其中
兩個(gè)r3取代基中一個(gè)為至l的系鏈，或至ant的系鏈(當(dāng)l不存在時(shí))，且另一個(gè)為不存在或氫；
r10和r11各自獨(dú)立地為鹵素、甲基、乙基或直鏈或支鏈的c1-c4羥烷基；
m為0至3的整數(shù)；
a為直鏈或支鏈的c1-c3烷基鏈，-ch2nh-、-nh-或n-r10，其中r10為如上定義的；和
r12和r13各自獨(dú)立地為氫、鹵素、甲基、乙基、直鏈或支鏈的c1-c4羥烷基、直鏈或支鏈的c1-c4鹵代烷基，或者r12和r13結(jié)合在一起形成3-至6-元碳環(huán)。
連接基z
連接基z，如果存在，可以為肽的(z1)、非肽的(z2)或雜化的(z3)，其中所述雜化連接基為肽的和非肽的；當(dāng)使接觸一定條件或在一定條件(如上所述)下時(shí)，式(i)的化合物中的所述連接基z可以通過化學(xué)、光化學(xué)、物理、生物學(xué)或酶方法裂解，導(dǎo)致任選地釋放相應(yīng)部分(參見，例如dubowchikg.m.等人,bioorg.med.chem.lett.8,1998,3347-3352；burkep.j.等人,bioorg.med.chem.lett.19,2009,2650-2653)：
當(dāng)使接觸一定條件或在一定條件(如上所述)下時(shí)，z和部分ant-l-w、ant-l(當(dāng)w為不存在時(shí))或ant之間(當(dāng)l和w都為不存在時(shí))的鍵當(dāng)通過化學(xué)、光化學(xué)、物理、生物或酶的方法活化時(shí)可以變得不穩(wěn)定，導(dǎo)致任選地釋放相應(yīng)部分。
z和連接原子之間的鍵可以形成碳酸酯、氨基甲酸酯、脲、酯、酰胺、硫代酰胺或二硫基。
所述連接基z可以是直鏈或支鏈的。
在一個(gè)實(shí)施方案中，z為不存在。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，z為肽連接基z1，其可以被蛋白水解酶、纖溶酶、組織蛋白酶、β-葡糖苷酸酶、半乳糖苷酶、前列腺特異性抗原(psa)、尿激酶型纖溶酶激活物(u-pa)或基質(zhì)金屬蛋白酶家族的成員裂解。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，z為非肽連接基z2，其可以含有一個(gè)或多個(gè)非肽水溶性的部分。在該情況下，所述連接基有助于式(i)的化合物的水溶性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，z2為非肽連接基，其可以含有一個(gè)或多個(gè)減少式(i)的化合物聚集的非肽部分，該部分可以是或不是還增加式(i)的化合物的水溶性的部分。
例如，非肽水溶性的z2連接基可以含有寡聚乙二醇或聚乙二醇部分或其衍生物。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，z為雜化連接基z3，其可以同時(shí)含有通式z1-z2的肽和非肽殘基，其中z1和z2獨(dú)立地為肽連接基或非肽連接基。雜化連接基可以有助于式(i)的化合物的溶解性，和/或可以是其可以被蛋白水解酶，例如被基質(zhì)金屬蛋白酶家族的成員裂解的底物。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，z1為單個(gè)氨基酸、二肽、三肽、四肽和低聚肽部分，包括天然l-氨基酸、非天然d-氨基酸、合成氨基酸或其任意組合，其中c-末端或n-末端氨基酸殘基之一連接至ant、至w或至l，其它末端氨基酸殘基任選地連接至rm。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，z1為二肽或三肽，經(jīng)由其c-末端連接至w、或l(當(dāng)w為不存在時(shí))、或ant(當(dāng)w和l都為不存在時(shí))。
在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述二肽或三肽的c-末端氨基酸殘基選自甘氨酸、亮氨酸、丙氨酸、精氨酸和瓜氨酸；且所述n-末端氨基酸殘基選自任何天然或非天然氨基酸；優(yōu)選地，在三肽的情況下，中間氨基酸殘基選自丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸和脯氨酸。
在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，z1包括五肽，其中所述c-末端氨基酸選自任何天然或非天然氨基酸，且所述n-末端氨基酸殘基為6-氨基己酸。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，z2可以含有寡聚乙二醇或聚乙二醇部分或其衍生物。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，z2為選自式(xia)-(xif)的基團(tuán)∶
其中
兩個(gè)r3取代基中一個(gè)為至ant、至w或至l的系鏈，且另一個(gè)為不存在或氫，和
p為1至20的整數(shù)。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，z3為雜化部分，其包括肽部分z1，其中z1為單個(gè)氨基酸、二肽、三肽或四肽，包括天然l-氨基酸和非天然d-氨基酸；和非肽部分z2，其中z2為寡聚乙二醇或聚乙二醇部分或其衍生物。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，z選自式(xiia)-(xiin)∶
其中
兩個(gè)r3取代基中一個(gè)為至ant、至w或至l的系鏈，且另一個(gè)為不存在或氫。
活性部分rm_
rm部分，如果存在，為在相對溫和條件下可以與親核物(即載有親核基團(tuán)的分子)反應(yīng)而不需要在之前官能化活性部分的親電子基團(tuán)，所述活性部分和所述親核物之間的所述反應(yīng)僅需要應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)選自加熱、壓力、催化劑、酸和堿的試劑。
當(dāng)使接觸一定條件或在一定條件(如上所述)下時(shí)，rm和z之間、或rm和w之間(當(dāng)z為不存在時(shí))、或rm和l之間(當(dāng)w和z兩個(gè)都不存在時(shí))、或rm和ant之間(當(dāng)l、w和z都不存在時(shí))的鍵可以通過化學(xué)、光化學(xué)、物理、生物或酶的方法裂解，導(dǎo)致任選地釋放相應(yīng)部分。
因此，當(dāng)rm部分存在時(shí)，式(i)的化合物與不同類型的親核物共軛。當(dāng)rm不存在時(shí)，式(i)的化合物與不同類型的親電物經(jīng)由l、w和/或z部分上存在的一種或多種親核基團(tuán)例如胺、硫醇和醇基共軛，所述親電物即帶有親電子基團(tuán)的分子。
活性部分的實(shí)例包括，但不限于氨基甲?；u化物、酰鹵、活性酯、酸酐、α-鹵代乙?；?、α-鹵代乙酰胺基、馬來酰亞胺、異氰酸酯、異硫氰酸酯、二硫化物、硫醇、肼、酰肼、磺酰氯、醛、甲基酮、乙烯砜、鹵代甲基和磺酸甲酯。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)rm可以與其反應(yīng)的親核物的親核基團(tuán)為nh、nh2、sh或oh時(shí)，rm獨(dú)立地為不存在或選自式(xiiia)-(xiiim)：:
其中r14為c1-c3烷基或吸電子基團(tuán)，包括no2和cn基團(tuán)；
r為0至7的整數(shù)；r10、r12和r13為如上定義的，和
波浪線表示式(i)的衍生物中的連接點(diǎn)；
在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)rm可以與其反應(yīng)的親核物的親核基團(tuán)為cooh時(shí)，rm獨(dú)立地為不存在或選自式(xiiij)-(xiiik)的基團(tuán)：
根據(jù)所有上述，注意到式(i)的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物可以在連接部分l、w、z和rm的所有鍵裂解，釋放所述式(ii)’、(iii)’、(iv)’或(v)’的蒽環(huán)類。
特別地，非限制性地，本發(fā)明的優(yōu)選的式(i)的化合物，任選地可藥用鹽的形式，選自下述化合物(1)-(20)、(23)-(27)、(75)-(78)：
關(guān)于任何特定的本發(fā)明的式(i)的化合物，任選地可藥用鹽的形式，參見實(shí)驗(yàn)部分和權(quán)利要求書。
本發(fā)明還提供一種用于制備如上定義的式(i)的化合物的方法，其使用如下所述的反應(yīng)途徑和合成方案，采用本領(lǐng)域可利用的技術(shù)和容易可獲得的起始原料。本發(fā)明的某些實(shí)施方案的制備描述在下述實(shí)施例中，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到，所描述的制備可以容易地被調(diào)整以制備本發(fā)明的其它實(shí)施方案。例如，根據(jù)本發(fā)明的非示例性化合物的合成可以通過對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的修飾來進(jìn)行，例如通過合適地保護(hù)干擾基團(tuán)，通過改變成本領(lǐng)域已知的其它合適的試劑，或通過進(jìn)行反應(yīng)條件的常規(guī)修飾。可選地，本文提及的或本領(lǐng)域已知的其它反應(yīng)會被認(rèn)為能夠適于制備本發(fā)明的其它化合物。
合成方法
式(i)的衍生物可以通過幾種途徑采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的有機(jī)化學(xué)反應(yīng)、條件和試劑制備。式(i)的衍生物可以通過如下方式偶聯(lián)各個(gè)部分來制備：以連續(xù)方式，即逐個(gè)加入各個(gè)部分，或以并行方式，即形成高級中間體，最后將其偶聯(lián)形成期望的衍生物。
偶聯(lián)反應(yīng)包括非限制性的實(shí)施例，比如：
(1)式(ii)'、(iii)'、(iv)'和(v)'的蒽環(huán)類的親核基團(tuán)或親電子基團(tuán)與二價(jià)試劑l反應(yīng)，形成經(jīng)由共價(jià)鍵連接的中間體ant-l，任選地接著與二價(jià)試劑w反應(yīng)，形成經(jīng)由共價(jià)鍵連接的中間體ant-l-w，任選地接著與二價(jià)試劑z反應(yīng)，形成經(jīng)由共價(jià)鍵連接的中間體ant-l-w-z，最后任選地與活性部分rm反應(yīng)，形成最后官能化的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物(i)；
(2)式(ii)'、(iii)'、(iv)'和(v)'的蒽環(huán)類的親核基團(tuán)或親電子基團(tuán)與二價(jià)試劑l-w-z-反應(yīng)，形成經(jīng)由共價(jià)鍵連接的ant-l-w-z，接著與活性部分rm反應(yīng)，形成最后官能化的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物(i)；
(3)式(ii)'、(iii)'、(iv)'和(v)'的蒽環(huán)類的親核基團(tuán)或親電子基團(tuán)與試劑l-w-z-rm反應(yīng)，形成最后官能化的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物(i)。
然后，官能化的衍生物(i)可以與多種蛋白質(zhì)、藥物部分、肽、適體、聚合物或納米顆粒綴合，以制備藥物-綴合物復(fù)合物。中間體上的親核基團(tuán)包括，但不限于∶(i)n-末端胺基，(ii)側(cè)鏈胺基，例如賴氨酸，(iii)側(cè)鏈硫醇基，例如半胱氨酸，(iv)羥基。這些基團(tuán)能夠與連接基部分上的親電子基團(tuán)和連接基試劑反應(yīng)，所述連接基部分和連接基試劑包括∶(i)活性酯，比如nhs(n-琥珀酰亞胺)酯、hobt酯、鹵代甲酸酯和?；u；(ii)烷基和芐基鹵，比如鹵代乙酰胺；(iii)醛、酮、羧基和馬來酰亞胺基。
式(ii)’、(iii)’、(iv)’和(v)’的蒽環(huán)類的制備
式(ii)'、(iii)'、(iv)'和(v)'的蒽環(huán)類，其在制備式(i)的衍生物中反應(yīng)，可以根據(jù)下述方案x中概括的任一個(gè)可選途徑制備；方案x中還概括了根據(jù)途徑f制備式(xxiv)中間體化合物和根據(jù)途徑g制備式(xx)的起始原料化合物。
方案x
途徑a
如上定義的式(ii)'或(v)'的化合物，其中r1為如上定義的，r2為or6或nr7r8，其中r6、r7和r8為如上定義的，按照如下方案a中所概括的制備。
方案a
因此，本發(fā)明的方法包括下述步驟∶
a1)使式(xx)的化合物
其中r1為鹵素或nr4r5，其中r4和r5獨(dú)立地為氫、單取代的-芐基、二取代的-芐基或任選取代的選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基、nr7r8-c1-c6烷基-、r6o-c1-c6烷基-、r7r8n-c1-c6烷基羰基-、r6o-c1-c6烷基羰基-、r7r8n-c1-c6烷氧基羰基-和r6o-c1-c6烷氧基羰基-；或r4和r5與它們結(jié)合的氮原子一起形成被r4’取代的雜環(huán)基，其中r4’為氫或選自直鏈或支鏈的c1-c6烷基和nr7r8-c1-c6烷基-的基團(tuán)，和r6、r7和r8獨(dú)立地為氫或任選取代的直鏈或支鏈的c1-c6烷基；
與式(xxi)的化合物反應(yīng)
其中x和y相同或不同，為離去基團(tuán)，優(yōu)選鹵素；
a2)使得到的式(xxii)的化合物
其中r1為如上定義的，
與原甲酸乙酯和溴反應(yīng)，然后加入hbr；
a3)使得到的式(xxiii)的化合物
其中r1為如上定義的，
與甲?；瘎┓磻?yīng)；
a4)氧化得到的式(xxiv)的化合物
其中r1為如上定義的；
a5)使得到的式(xxv)的化合物
其中r1為如上定義的，
與式(xxva)或(xxvb)的化合物反應(yīng)
r6-oh(xxva)；r7r8nh(xxvb)其中r6、r7和r8為如上定義的；
a6a)使得到的式(xxvi)的化合物
其中r1為如上定義的，且r2為or6或nr7r8，首先與dmdo反應(yīng)；
a6b)然后，用氰尿酰氯或用鐵(ii)鹽處理得到的式(xxvii)的化合物
其中r1和r2為如上定義的，最后如果期望，除去氮和/或羥基保護(hù)基，得到式(ii)’的化合物
其中r1和r2為如上定義的；
任選地，通過已知化學(xué)反應(yīng)，將如上定義的第一種式(ii)’的化合物轉(zhuǎn)化第二種式(ii)’的化合物；和/或，如果期望，將式(ii)'的化合物轉(zhuǎn)化成其可藥用鹽或?qū)Ⅺ}轉(zhuǎn)化成游離的式(ii)’的化合物。
注意到，當(dāng)r1為nh-r4時(shí)，其中r4為氫、nr7r8-c1-c6烷基-、r6o-c1-c6烷基-、r7r8n-c1-c6烷基羰基-、r6o-c1-c6烷基羰基-、r7r8n-c1-c6烷氧基羰基-和r6o-c1-c6烷氧基羰基，其中r8為h和r7為如上定義的，式(ii)’的衍生物對應(yīng)于式(v)’的衍生物，因此上述制備也意在指式(v)’的衍生物的制備。
根據(jù)步驟a1)，式(xx)的化合物與式(xxi)的化合物的反應(yīng)是按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法，在室溫下，在有機(jī)溶劑，優(yōu)選dmf中進(jìn)行的(參見例如wo91/09046)。
根據(jù)步驟a2)，式(xxii)的化合物與原甲酸乙酯和溴、然后與hbr的反應(yīng)是按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法分2步進(jìn)行(參見，例如doxorubicinanticancerantibioticsvol.17,1981,p.168；f.arcamone等人.j.med.chem.1974,17,p.335)。
根據(jù)步驟a3)，得到式(xxiv)的化合物的反應(yīng)是按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法進(jìn)行(參見，例如doxorubicinanticancerantibioticsvol.17,1981,p.168；us3803124)。不意圖限制該方法的實(shí)例是式(xxiii)的化合物與甲酸鈉的反應(yīng)。該反應(yīng)在ch3cn或丙酮或它們的混合物中，在約20℃至回流溫度下進(jìn)行約30分鐘至約24小時(shí)的時(shí)間。
根據(jù)步驟a4)，式(xxiv)的化合物的氧化使用氧化劑，優(yōu)選naio4進(jìn)行。該反應(yīng)在meoh或水或它們的混合物中,在約20℃至回流溫度下進(jìn)行約30分鐘至約24小時(shí)的時(shí)間。
根據(jù)步驟a5)，式(xxv)的化合物與式(xxva)或(xxvb)的化合物之間的偶聯(lián)反應(yīng)是按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法進(jìn)行(對于通用偶聯(lián)試劑，參見，例如aminoacids,peptidesandproteinsinorganicchemistry:buildingblocks,catalysisandcouplingchemistry,volume3；andrewb.hughes,aymanel-faham,fernandoalbericio,2010)。不意圖限制該方法的實(shí)例是式(xxv)的化合物與式(xxva)的化合物在縮合劑比如例如dcc或edc的存在下的反應(yīng)。該反應(yīng)在有機(jī)溶劑，優(yōu)選dmf中，在約20℃至回流溫度下進(jìn)行約30分鐘至約24小時(shí)的時(shí)間。
根據(jù)步驟a6a)和a6b)，按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法使式(xxvi)的化合物首先與dmdo反應(yīng)，然后使得到的式(xxvii)的化合物與氰尿酰氯或與鐵(ii)鹽反應(yīng)(參見，例如gb2296495a；wo2012073217；wo9802446)。
如果必要，按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法進(jìn)行氮和/或羥基保護(hù)基的去除(參見，例如protectivegroupsinorganicsynthesis；theodoraw.greeen,peterg.m.wuts第4版)。
途徑b
按照如下方案b中概括的制備如上定義的式(ii)’的化合物，其中r1為鹵素或nr4r5，其中r4和r5獨(dú)立地為氫、單取代的-芐基、二取代的-芐基或任選取代的選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基、nr7r8-c1-c6烷基-、r6o-c1-c6烷基-、r7r8n-c1-c6烷基羰基-、r6o-c1-c6烷基羰基-、r7r8n-c1-c6烷氧基羰基-和r6o-c1-c6烷氧基羰基-；或
r4和r5與它們結(jié)合的氮原子一起形成被r4’取代的雜環(huán)基，其中r4’為氫或選自直鏈或支鏈的c1-c6烷基和nr7r8-c1-c6烷基-的基團(tuán)；
r6、r7和r8獨(dú)立地為氫或任選取代的直鏈或支鏈的c1-c6烷基；
和r2為甲基。
方案b
因此，本發(fā)明的方法包括下述步驟∶
b1)使如途徑a中定義的式(xxii)的化合物在與途徑a的步驟a6a)和a6b)下所報(bào)道的相同條件下反應(yīng)，
得到式(ii)’的化合物
其中r1和r2為如上定義的；
任選地，通過已知化學(xué)反應(yīng)，將如上定義的第一種式(ii)’的化合物轉(zhuǎn)化成第二種式(ii)’的化合物；和/或，如果期望，將式(ii)'的化合物轉(zhuǎn)化成其可藥用鹽或?qū)Ⅺ}轉(zhuǎn)化成游離的式(ii)’的化合物。
注意到，當(dāng)r1為nh-r4時(shí)，其中r4為氫、nr7r8-c1-c6烷基-、r6o-c1-c6烷基-、r7r8n-c1-c6烷基羰基-、r6o-c1-c6烷基羰基-、r7r8n-c1-c6烷氧基羰基-和r6o-c1-c6烷氧基羰基，其中r8為h和r7為如上定義的，式(ii)’的衍生物對應(yīng)于式(v)’的衍生物，因此上述制備也意在指式(v)’的衍生物的制備。
根據(jù)步驟b1)，反應(yīng)分別在如上所述步驟a6a)和a6b)下進(jìn)行。
途徑c
如下方案c中概括的制備式(iii)’的化合物，其中r1為鹵素或nr4r5，其中r4和r5獨(dú)立地為氫、單取代的-芐基、二取代的-芐基或任選取代的選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基、nr7r8-c1-c6烷基-、r6o-c1-c6烷基-、r7r8n-c1-c6烷基羰基-、r6o-c1-c6烷基羰基-、r7r8n-c1-c6烷氧基羰基-和r6o-c1-c6烷氧基羰基-；或
r4和r5與它們結(jié)合的氮原子一起形成被r4’取代的雜環(huán)基，其中r4’為氫或選自直鏈或支鏈的c1-c6烷基和nr7r8-c1-c6烷基-的基團(tuán)；
r6、r7和r8獨(dú)立地為氫或任選取代的直鏈或支鏈的c1-c6烷基。
方案c
因此，本發(fā)明的方法包括下述步驟∶
c)使如途徑a中定義的式(xxiv)的化合物在與上述步驟a6a)和a6b)下所報(bào)道的相同條件下反應(yīng)，
得到式(iii)’的化合物
其中r1為如上定義的。
途徑d
如下方案d中概括的制備式(iv)’的化合物，其中r1為鹵素或nr4r5，其中r4和r5獨(dú)立地為氫、單取代的-芐基、二取代的-芐基或任選取代的選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基、nr7r8-c1-c6烷基-、r6o-c1-c6烷基-、r7r8n-c1-c6烷基羰基-、r6o-c1-c6烷基羰基-、r7r8n-c1-c6烷氧基羰基-和r6o-c1-c6烷氧基羰基-；或
r4和r5與它們結(jié)合的氮原子一起形成被r4’取代的雜環(huán)基，其中r4’為氫或選自直鏈或支鏈的c1-c6烷基和nr7r8-c1-c6烷基-的基團(tuán)；
r6、r7和r8獨(dú)立地為氫或任選取代的直鏈或支鏈的c1-c6烷基；
和r2為羥基。
方案d
因此，本發(fā)明的方法包括下述步驟∶
d)使如途徑a中定義的式(xxv)的化合物在與上述步驟a6a)和a6b)下所報(bào)道的相同條件下反應(yīng)，
得到式(iv)’的化合物
其中r1為如上定義的，且r2為羥基。
途徑f
如途徑a中定義的式(xxiv)的衍生物可選地根據(jù)下述方案f制備。
方案f
因此，本發(fā)明的方法包括下述步驟∶
f1)使式(xxviii)的化合物
其中r1為鹵素或nr4r5，其中r4和r5為如上定義的，與溴和乙酸鉀反應(yīng)；
f2)使得到的式(xxix)的化合物
其中r1為如上定義的，與式(xxixa)的糖反應(yīng)，
其中r23和r24獨(dú)立地為氫或合適的氮或羥基保護(hù)基，如例如三氟乙?；蚱S基；
f3)使得到的式(xxx)的化合物
其中r1、r23和r24為如上定義的，與原甲酸乙酯和對-甲苯磺酸吡啶鎓(ppts)反應(yīng)；
f4)使得到的式(xxxi)的化合物
其中r1和r24為如上定義的，與如上定義的式(xxi)的化合物反應(yīng)；
f5)使得到的式(xxxii)的化合物脫保護(hù)
其中r1和r24為如上定義的，得到如上定義的式(xxiv)的化合物。
根據(jù)步驟f1)，該反應(yīng)在有機(jī)溶劑，優(yōu)選丙酮或二噁烷中，在20℃至回流溫度下進(jìn)行約30分鐘至約24小時(shí)的時(shí)間。
根據(jù)步驟f2)，式(xxix)的化合物的苷化反應(yīng)(glicosidationreaction)是在三氟甲磺酸銀的存在下，按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法進(jìn)行(參見，例如gb2225781；gb2215332a)。
根據(jù)步驟f3)，進(jìn)行得到式(xxxi)的化合物的反應(yīng)，使式(xxx)的化合物與原甲酸乙酯和ppts反應(yīng)。該反應(yīng)在有機(jī)溶劑(優(yōu)選dcm)中，在0℃至回流溫度下進(jìn)行約30分鐘至約24小時(shí)的時(shí)間。
根據(jù)步驟f4)，該反應(yīng)如上步驟a1下所述進(jìn)行。
根據(jù)步驟f5)，按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法進(jìn)行羥基保護(hù)基的去除(參見，例如protectivegroupsinorganicsynthesis；theodoraw.greeen,peterg.m.wuts4thedition).
途徑g
根據(jù)下述方案g制備如途徑a中定義的式(xx)的化合物，其中r1為如其中定義的，除了nh2和鹵素。
方案g
因此，本發(fā)明的方法包括下述步驟∶
g1)使式(xxxiii)的化合物
其中r25和r26獨(dú)立地為氫或合適的羥基保護(hù)基，比如例如三氟乙?；?、9-芴基甲基、二叔丁基甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或二苯甲基甲硅烷基，q為氧或合適的羰基保護(hù)基，比如縮醛或縮酮，優(yōu)選1-3-二噁烷或1-3-二氧戊環(huán)，并且如果期望，所述氨基可以用合適的氮保護(hù)基保護(hù)，
i)與式(xxxiiia)-(xxxiiid)的化合物反應(yīng)，
其中x為離去基團(tuán)，優(yōu)選鹵素；r27和r28相同或不同，獨(dú)立地為氫、鹵素、直鏈或支鏈的c1-c3烷基或c1-c3烷氧基；a為直鏈或支鏈的c1-c6烷基；且r6、r7和r8獨(dú)立地為氫或任選取代的直鏈或支鏈的c1-c6烷基，在去除保護(hù)基(如果存在)之后，得到式(xxviii)的相應(yīng)化合物，
其中r1為式nr4r5的基團(tuán)，其中r4和r5獨(dú)立地為氫、單取代的-芐基、二取代的-芐基或任選取代的選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基、nr7r8-c1-c6烷基和r6o-c1-c6烷基，但兩者不能都為氫；
或
ii)與式(xxxiiie)或(xxxiiif)的化合物反應(yīng)，
其中y’為oh或離去基團(tuán)，優(yōu)選氯，且a、r6、r7和r8為如上定義的，在去除保護(hù)基(如果存在)之后，得到如上定義的式(xxviii)的相應(yīng)化合物，其中r1為式nr4r5的基團(tuán)，其中r4或r5中一個(gè)為氫，且另一個(gè)為基團(tuán)r7r8n-c1-c6烷基羰基或r6o-c1-c6烷基羰基，其中r6、r7和r8為如上定義的；
或
iii)與式(xxxiiig)或(xxxiiih)的化合物反應(yīng)，
其中y’、a、r6、r7和r8為如上定義的，在去除保護(hù)基(如果存在)之后，得到如上定義的式(xxviii)的相應(yīng)化合物，其中r1為式nr4r5的基團(tuán)，其中r4或r5中一個(gè)為氫，且另一個(gè)為基團(tuán)r7r8n-c1-c6烷氧基羰基或r6o-c1-c6烷氧基羰基，其中r6、r7和r8為如上定義的；
或
iv)與式(xxxiiii)的化合物反應(yīng)
其中w為ch或n，r4’為氫或選自直鏈或支鏈的c1-c6烷基和nr7r8-c1-c6烷基-的基團(tuán)，和x為離去基團(tuán)，優(yōu)選鹵素，在去除保護(hù)基(如果存在)之后，得到如上定義的式(xxviii)的化合物，其中r1為式nr4r5的基團(tuán)，其中r4和r5與它們結(jié)合的氮原子一起形成被r4’取代的6-元雜環(huán)基，其中r4’為如上定義的；
或
g2)使式(xxxiii)’的化合物
其中r25、r26和q為如上定義的，且r21為合適的離去基團(tuán)，如例如甲磺酰基、甲苯磺?；?-氟苯磺酰基，與式(xxxiiim)的化合物反應(yīng)，
其中r4和r5獨(dú)立地為氫、單取代的-芐基、二取代的-芐基或任選取代的選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基、nr7r8-c1-c6烷基和r6o-c1-c6烷基，但兩者都不是氫；或r4和r5與它們結(jié)合的氮原子一起形成被r4’取代的雜環(huán)基，其中r4’為如上定義的；
在去除保護(hù)基(如果存在)之后，得到如上定義的式(xxviii)的相應(yīng)化合物，其中r1為式nr4r5的基團(tuán)，其中r4或r5獨(dú)立地為氫、單取代的-芐基、二取代的-芐基或任選取代的選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基、nr7r8-c1-c6烷基和r6o-c1-c6烷基，但兩者不能都為氫；或r4和r5與它們結(jié)合的氮原子一起形成被r4’取代的雜環(huán)基，其中r4’為如上定義的；
g3)使得到的式(xxviii)的化合物
其中r1為式nr4r5的基團(tuán)，其中r4和r5獨(dú)立地為氫、單取代的-芐基、二取代的-芐基或任選取代的選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基、nr7r8-c1-c6烷基-、r6o-c1-c6烷基-、r7r8n-c1-c6烷基羰基-、r6o-c1-c6烷基羰基-、r7r8n-c1-c6烷氧基羰基-和r6o-c1-c6烷氧基羰基-；或
r4和r5與它們結(jié)合的氮原子一起形成被r4’取代的雜環(huán)基，其中r4’為氫或選自直鏈或支鏈的c1-c6烷基和nr7r8-c1-c6烷基-的基團(tuán)；
r6、r7和r8獨(dú)立地為氫或任選取代的直鏈或支鏈的c1-c6烷基，是從步驟g1i)-g1iv)得到的或在步驟g2)下得到的，
與如在步驟f2)下定義的式(xxixa)的化合物在其中報(bào)道的相同條件下反應(yīng)，得到式(xx)的化合物
其中r1為式nr4r5的基團(tuán)，其中r4和r5獨(dú)立地為氫、單取代的-芐基、二取代的-芐基或任選取代的選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基、nr7r8-c1-c6烷基-、r6o-c1-c6烷基-、r7r8n-c1-c6烷基羰基-、r6o-c1-c6烷基羰基-、r7r8n-c1-c6烷氧基羰基-和r6o-c1-c6烷氧基羰基-；或
r4和r5與它們結(jié)合的氮原子一起形成被r4’取代的雜環(huán)基，其中r4’為氫或選自下述的基團(tuán)：直鏈或支鏈的c1-c6烷基，和nr7r8-c1-c6烷基-，除了nh2和鹵素；
r6、r7和r8獨(dú)立地為氫或任選取代的直鏈或支鏈的c1-c6烷基。
注意到，根據(jù)上述途徑a或途徑b，當(dāng)r8為氫時(shí)，式(xx)的中間體化合物用于得到式(v)’的化合物，而當(dāng)r8不為氫時(shí)，式(xx)的化合物用于得到式(ii)’的化合物。
根據(jù)步驟g1i)，式(xxxiii)的化合物與式(xxxiiia)或(xxxiiib)或(xxxiiic)或(xxxiiid)的化合物之間的偶聯(lián)反應(yīng)是按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法進(jìn)行(參見，例如ngu,k.；patel,d.v.tetrahedronlett1997,38(6),pp.973-976)。作為實(shí)例，不意圖限制該方法，該反應(yīng)在dcm中，在20℃至回流溫度下進(jìn)行30分鐘至約24小時(shí)的時(shí)間。
根據(jù)步驟g1ii)，式(xxxiii)的化合物與式(xxxiiie)或(xxxiiif)的化合物之間的偶聯(lián)反應(yīng)是按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法進(jìn)行(對于通用偶聯(lián)試劑，參見，例如aminoacids,peptidesandproteinsinorganicchemistry:buildingblocks,catalysisandcouplingchemistry,volume3；andrewb.hughes,aymanel-faham,fernandoalbericio,2010)。作為一個(gè)實(shí)例，不意圖限制該方法，其在縮合劑比如例如dcc、edc、甲酸鈉的存在下反應(yīng)。該反應(yīng)在有機(jī)溶劑，優(yōu)選dmf中，在20℃至回流溫度下，進(jìn)行30分鐘到約24小時(shí)的時(shí)間。
根據(jù)步驟g1iii)，式(xxxiii)的化合物與式(xxxiiig)或(xxxiiih)的化合物之間的偶聯(lián)反應(yīng)是按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法進(jìn)行(參見，例如fukuokas.等人j.chem.soc.chem.commun.1984,6,p.399)。
根據(jù)步驟g1iv)，式(xxxiii)的化合物與式(xxxiiii)的化合物之間的偶聯(lián)反應(yīng)是按照本領(lǐng)域報(bào)道的熟知的方法進(jìn)行(參見，例如ismailov,v.等人；russjorgchem,2004,40(2),pp.284-285；mewshawr.e.；等人；bioorgmedchemlett1998,8(19),pp.2675-2680；mishanie.等人；tetrahedronlett1996,37(3),pp.319-322)。作為一個(gè)實(shí)例，不意圖限制該方法，該反應(yīng)是在dmso、dcm、meoh或其混合物中，任選地在堿或路易斯酸(例如al2cl3)的存在下，在20℃至回流溫度下，進(jìn)行30分鐘至約24小時(shí)的時(shí)間。
根據(jù)步驟g2)，該反應(yīng)是如專利申請gb2215322中所描述的進(jìn)行。作為實(shí)例，不意圖限制該方法，該反應(yīng)在ch3cn、thf或dmf中，任選地在堿的存在下，在20℃至回流溫度下，進(jìn)行1至72小時(shí)的時(shí)間。
根據(jù)步驟g3)，該反應(yīng)在如上所述步驟f2)下進(jìn)行。
然后，式(ii)'、(iii)'、(iv)'和(v)'的蒽環(huán)類與合適的試劑反應(yīng)，以制備最后官能化的式(i)的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物。這樣的試劑可以為例如l、l-w、l-w-z、l-w-z-rm等，取決于為了獲得最終的式(i)的衍生物，是否采用連續(xù)或同時(shí)的合成方法來連接所述部分。
其中r1為nh2的式(xxxiii)的化合物可以如專利申請ep288268中所述制備。
其中r1為鹵素的式(xx)的化合物可以如專利申請wo9802446；和garyw等人j.o.c1987,52,p.713中所述制備。
式(xxxiii)’的化合物可以如專利申請ep288268中所述制備。
式(xxi)、(xxixa)、(xxxiiia)至(xxxiiim)的化合物是市售可獲得的，或者可以用已知的方法制備。
根據(jù)所有上述，本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚，當(dāng)根據(jù)任何前述方法的任何一種變型來制備式(i)的化合物時(shí)，在起始原料或其中間體之中可引起不期望的副反應(yīng)的任選的官能團(tuán)需要根據(jù)常規(guī)技術(shù)被適當(dāng)?shù)乇Ｗo(hù)。同樣，可以根據(jù)己知方法，將這些后者轉(zhuǎn)化為游離的脫保護(hù)的化合物。
如會容易地理解的，如果根據(jù)上述的方法制備的式(i)化合物是以異構(gòu)體的混合物得到的，使用常規(guī)技術(shù)將它們分離成式(i)的單個(gè)異構(gòu)體也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
藥理學(xué)
本發(fā)明的新的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物是用作抗腫瘤劑且用于與蛋白質(zhì)、肽、適體、聚合物或納米顆粒綴合的官能化的化合物。
因此，可以通過包括向其施用可藥用有效量的式(i)的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物的方法來治療向哺乳動(dòng)物例如人類或動(dòng)物。按照這種方式可以改善或改進(jìn)人類或動(dòng)物的病癥。
如下所述評估對式(i)的化合物的細(xì)胞毒性的評價(jià)。
體外細(xì)胞增殖測定
將人癌細(xì)胞系接種在白色384孔板(1250個(gè)細(xì)胞/孔)的完全培養(yǎng)基(rpmi1640或emem加10％胎牛血清)中，并且在接種之后24小時(shí)，用溶于0.1％dmso中的化合物處理。在37℃和5％co2培養(yǎng)所述細(xì)胞，并且在72小時(shí)之后，按照生產(chǎn)商的說明，使用celltiter-glo測定(promega)處理所述板。
celltiter-glo是基于定量存在的atp的同源方法，atp是一種代謝活性細(xì)胞的指示物。使用如下系統(tǒng)定量atp，所述系統(tǒng)是基于螢光素酶和d-螢光素，其導(dǎo)致光產(chǎn)生。簡而言之，向每個(gè)孔中加入25μl/孔的試劑溶液，在振搖5分鐘之后，用發(fā)光計(jì)讀取微量培養(yǎng)板。發(fā)光信號與存在于培養(yǎng)物中的活細(xì)胞數(shù)量成比例。
通過8個(gè)濃度點(diǎn)的s型函數(shù)內(nèi)插法生成劑量反應(yīng)曲線，將化合物的抗增殖活性報(bào)道為半數(shù)最大抑制濃度(ic50)。
特別地，已經(jīng)評價(jià)了如下描述可以從式(i)的化合物釋放的化合物(21)、(22)和(26)的細(xì)胞毒性(表1)∶
表1
細(xì)胞系ic50nm
這些衍生物分別被式(ii)’(化合物(21)，當(dāng)r1為氟且r2為甲基時(shí)；化合物(22)，當(dāng)r1為氨基且r2為甲基時(shí))，和式(v)’(化合物(22)，當(dāng)r2為甲基且r15為不存在時(shí)；化合物(26)，當(dāng)r2為甲基且r15為-nr7-c1-c6烷基羰基*，r7為氫且c1-c6烷基為–(s)ch(ch3)-時(shí))所涵蓋。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)上述藥理學(xué)數(shù)據(jù)可以理解的，這些代表性的化合物，即(21)、(22)和(26)，在抗腫瘤療法中都特別有利。這些化合物是其可以在體內(nèi)由式(i)的衍生物釋放的蒽環(huán)類的非限制性實(shí)例。
作為一個(gè)實(shí)例，在化合物(21)的情況下，預(yù)期其是被式(i)的衍生物釋放的，其中ant具有式(iia)，r1為氟且r2為甲基，如下方案1所描述的：
方案1
作為一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)例，在化合物(22)的情況下，預(yù)期其是被式(i)的衍生物釋放的，其中ant具有式(iia)，r1為氨基且r2為甲基，或被式(i)的衍生物釋放的，其中ant具有式(va)，r2為甲基且r15為不存在，如方案2中所述∶
本發(fā)明的式(i)的化合物可以作為單一試劑給藥，或者，可選地，與己知的抗癌治療比如放療或化療方案組合給藥，與細(xì)胞生長抑制劑或細(xì)胞毒性藥物、抗生素類藥物、烷基化劑、抗代謝劑、激素試劑、免疫試劑、干擾素類試劑、環(huán)氧酶抑制劑(例如cox-2抑制劑)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、端粒末端轉(zhuǎn)移酶抑制劑、酪氨酸激酶抑制劑、抗生長因子受體劑、抗her劑、抗egfr劑、抗血管生成劑(例如血管生成抑制劑)、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、ras-raf信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑、細(xì)胞周期抑制劑、其它c(diǎn)dks抑制劑、微管蛋白結(jié)合劑，拓?fù)洚悩?gòu)酶i抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶ii抑制劑等組合給藥。
如果配制為固定劑量，則這樣的組合產(chǎn)品應(yīng)用在如下所述劑量范圍之內(nèi)的本發(fā)明化合物和在批準(zhǔn)的劑量范圍之內(nèi)的所述其它可藥用活性劑。
當(dāng)組合制備物是不相稱的時(shí)，式(i)的化合物可以與己知的抗癌劑依次使用。
適于給藥至哺乳動(dòng)物例如至人類的本發(fā)明的式(i)化合物，可以是通過常規(guī)途徑給藥，劑量水平取決于患者的年齡、重量、病癥和給藥途經(jīng)。
例如，采用口服給藥的式(i)的化合物的合適的劑量可以是每劑量約1至約300mg，每日1至5次。本發(fā)明的化合物可以是以多種劑型給藥，例如，口服施用，以片劑、膠囊、糖或薄膜衣片、液體溶液或混懸劑的形式；經(jīng)直腸給藥，以栓劑的形式；胃腸外給藥，例如，皮下、肌內(nèi)或經(jīng)由靜脈內(nèi)和/或鞘內(nèi)和/或脊柱內(nèi)注射或輸注。
本發(fā)明還包括藥物組合物，所述藥物組合物包含式(i)的化合物或其可藥用鹽與可藥用賦形劑的組合，所述賦形劑可以是載體或稀釋劑。
含有本發(fā)明的化合物的藥物組合物通常是按照常規(guī)方法制備且是以合適的藥物形式給藥。例如，固體口服形式可以含有與所述活性化合物一起的稀釋劑、例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；潤滑劑，例如硅土、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣、和/或聚乙二醇；粘合劑，例如淀粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧甲纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑，例如淀粉、海藻酸、海藻酸鹽或羥乙酸淀粉鈉；泡騰混合物；染料；甜味劑；潤濕劑，比如卵磷脂、聚山梨酯、十二烷基硫酸酯；和通常用于藥物制劑中的非毒性和藥理學(xué)惰性物質(zhì)。這些藥物制劑可以以己知的方式制備，例如，通過混合、制粒、壓片、糖包衣或薄膜包衣工藝。
用于口服給藥的液體分散體可以是例如糖漿劑、乳液和混懸劑。作為一個(gè)實(shí)例，糖漿劑可以含有蔗糖或含有甘油和/或甘露醇和山梨醇的蔗糖作為載體。
混懸劑和乳液可以含有天然樹膠、瓊脂、海藻酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧甲纖維素或聚乙烯醇作為載體的實(shí)例。用于肌內(nèi)注射的懸浮液或溶液可以含有與活性化合物一起的可藥用載體，例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二醇例如丙二醇、和根據(jù)需要的適量的鹽酸利多卡因。用于靜脈內(nèi)注射或輸注的溶液可以含有無菌水作為載體，或優(yōu)選地它們可以是以無菌、水性、等滲鹽水溶液的形式，或它們可以含有丙二醇作為載體。栓劑可以含有與所述活性化合物一起的可藥用載體，例如可可脂、聚乙二醇、聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯表面活性劑或卵磷脂。
為了目的在于更好地示例說明本發(fā)明，現(xiàn)給出下列實(shí)施例，但其不對本發(fā)明構(gòu)成任何限制。
實(shí)驗(yàn)部分
在下列實(shí)施例中描述本發(fā)明的某些式(i)的嗎啉基蒽環(huán)類衍生物的合成制備。本發(fā)明的化合物，如根據(jù)下列實(shí)施例制備的，也由1h-nmr和/或通過準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)據(jù)esi(+)表征。
1h-nmr光譜是在28℃的恒溫在varianinova400色譜儀上被記錄的，所述色譜儀在400.50mhz下操作，且裝備有5mm的z軸pfg間接檢測探針(1h{15n-31p})。
化學(xué)位移參考?xì)埩羧軇┬盘?dmso-d6:2.50ppm是1h，當(dāng)沒有另外說明時(shí))。數(shù)據(jù)報(bào)告如下：化學(xué)位移(δ)，多重態(tài)(s＝單峰，d＝雙峰，t＝三重峰，q＝四重峰，br.s＝寬單峰，td＝雙重峰的三重峰，dd＝雙重峰的雙重峰，ddd＝雙重峰的雙重峰的雙重峰，m＝多重峰，spt＝七重峰)，偶合常數(shù)(j，hz)和質(zhì)子數(shù)。
在watersq-tofultima質(zhì)譜儀得到準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)據(jù)esi(+)，所述質(zhì)譜儀與如前所述agilent1100micro-hplc直接連接(m.colombo,f.riccardi-sirtori,v.rizzo,rapidcommun.massspectrom.2004,18,511-517)。
在下述實(shí)施例以及整個(gè)申請中，下述縮寫具有下述含義。如果沒有定義，則該術(shù)語具有它們通常接受的含義。
實(shí)施例(a)
含有mcm2蛋白質(zhì)的綴合物的制備
將1.5mg(0.045μmol)的mcm2蛋白質(zhì)(相應(yīng)于全長序列的殘基10-294，參見ishimi等人,2001journalbiologicalchemistry,vol.276,pages42744-42752)溶于0.5ml的磷酸鹽緩沖鹽水溶液(ph7.2)中，通過加入55μl的1mnahco3(ph8.5)調(diào)節(jié)ph值，并經(jīng)由10mg/ml的dmso溶液加入0.040-0.080μmol的式(i)的衍生物。在室溫下，培養(yǎng)反應(yīng)物1小時(shí)，然后在磷酸鹽緩沖鹽水溶液中調(diào)理的nap-10柱上使反應(yīng)混合物脫鹽，收集含有蛋白質(zhì)的級分并匯集。
按照下述方法，通過hplc/esi或q-tof2/nanoesi質(zhì)譜分析表征如此得到的mcm2綴合物。
方法a
在酸性條件(ph3)下培養(yǎng)如上所述得到的綴合的mcm2-化合物(3)(加合物1)，以便快速水解腙鍵，從而得到蒽環(huán)類衍生物(22)和mcm2-連接基殘基的釋放。
通過hplc/ms分析，使用5-100％的b的線性梯度(溶劑a∶在水中的0.05％tfa；溶劑b∶在乙腈中的0.05％tfa)作為洗脫液，分析樣品并表征產(chǎn)物。通過經(jīng)由二極管陣列系統(tǒng)記錄在220nm的uv信號和經(jīng)由四極msd在600-2000捕獲范圍記錄m/z信號，進(jìn)行檢測。使用agilentchemstation算法對在蛋白質(zhì)峰下來自m/z信號積分的質(zhì)譜進(jìn)行去卷積(deconvoluted)，得到在～100ppm精確度下相應(yīng)蛋白質(zhì)的mw(圖1-4)。
圖1顯示加合物1的hplc曲線，將時(shí)間(min)報(bào)告在x軸上，并將在220nm的uv吸光度(mau)報(bào)告在y軸上。
圖2顯示加合物1的總離子流色譜圖，將時(shí)間(min)報(bào)告在x軸上，并將表示為每秒計(jì)數(shù)(cps)的強(qiáng)度報(bào)告在y軸上。
圖3顯示圖2所示加合物1在15.2分鐘的總離子流色譜圖的去卷積ms光譜的色譜峰，對應(yīng)于mcm2-連接基殘基(預(yù)期的mw33282da；觀察的mw33283da)；將分子量報(bào)告在x軸上，同時(shí)將表示為每秒計(jì)數(shù)(cps)的強(qiáng)度報(bào)告在y軸上。
圖4顯示圖2所示化合物22在13分鐘的ms譜的色譜峰(預(yù)期m/z611da；觀察的m/z611.2da)；將分子量(m/z)報(bào)告在x軸上，同時(shí)將表示為每秒計(jì)數(shù)(cps)的強(qiáng)度報(bào)告在y軸上。
方法b
通過在中性ph條件下，使用乙酸銨100mm緩沖液ph7的ms分析還進(jìn)行加合物1的表征。將樣品直接注入裝有nanoesi源的q-tof2質(zhì)譜儀(micromass，uk)，使用流速0.5μl/min；毛細(xì)管電壓設(shè)定為2kv，收集在500-3000m/z范圍的ms信號(圖6a-6b)。
使用mcm2作為標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定合適的儀器參數(shù)。將樣品注入質(zhì)譜儀中(圖5a-5b)。使用masslynx4.0軟件的maxent1算法對質(zhì)譜去卷積，得到在～100ppm精確度下相應(yīng)蛋白質(zhì)種類的mw。
圖5a顯示mcm2標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的ms光譜；將分子量(m/z)報(bào)告在x軸上，同時(shí)將表示為每秒計(jì)數(shù)(cps)的強(qiáng)度報(bào)告在y軸上。
圖5b顯示mcm2標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的去卷積的ms光譜(預(yù)期的mw33057da；觀察的mw33056da)；將分子量報(bào)告在x軸上，同時(shí)將表示為每秒計(jì)數(shù)(cps)的強(qiáng)度報(bào)告在y軸上。
圖6a顯示樣品的ms光譜；將分子量(m/z)報(bào)告在x軸上，同時(shí)將表示為每秒計(jì)數(shù)(cps)的強(qiáng)度報(bào)告在y軸上。
圖6b顯示樣品的去卷積ms光譜(預(yù)期的mw33874da；觀察的mw33873da)；也檢測了mcm2-連接基種類的跡線(預(yù)期的mw33282da；觀察的mw33282da)；將分子量報(bào)告在x軸上，同時(shí)將表示為每秒計(jì)數(shù)(cps)的強(qiáng)度報(bào)告在y軸上。
實(shí)施例(b)
含有半胱氨酸的綴合物的制備
使2nmol的半胱氨酸(cys,mw121da)與2nmol的式(i)的官能化衍生物反應(yīng)，在硼酸鹽緩沖液50mmph8、dtpa(二乙撐三胺五乙酸)2mm、nacl50mm的存在下，在21℃下，培養(yǎng)反應(yīng)物1小時(shí)，得到最終綴合物。然后，在偶聯(lián)具有直角esi源的agilent1946單一四極質(zhì)譜檢測器的1100agilenthplc儀器上，通過使用反相hplc方法(plrp-s柱1000a8μm150×2.1mm)的hplc/esi-ms分析綴合物。
實(shí)施例1
化合物(4)的合成
步驟1
將3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酰肼hcl(41.5mg,)在無水甲醇(5ml)中的溶液加入到化合物(ii)’(化合物22，參見實(shí)施例6)(50mg)中。在室溫下，黑暗中攪拌該溶液20小時(shí)。反應(yīng)過程之后，進(jìn)行反相ηplc-ms。在該期間之后，蒸發(fā)溶劑，并通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(meoη:cη2cl2)純化殘余物，得到化合物(4)。
ms(esi):822[m+h]+。
通過類似的方法并使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
ms(esi):838[m+η]+
1hnmr(500mhz,ch3cn-d3,溫度60℃)δppm1.25–1.40(m,2h),1.32(d,j＝6.7hz,3h),1.49–1.66(m,4h),1.60–1.71(m,1h),1.85–1.93(m,1h),2.22–2.33(m,1h),2.40–2.56(m,3h),2.70-2.82(m,2h),3.05-3.15(m,2h),3.40(s,3h),3.40-3.45(m,3h),3.53-3.60(m,1h),3.75-3.83(m,1h),4.02(dd,j＝1.5,6.8hz,1h),4.07-4.23(m,3h),4.21(br.s.,1h),4.32(d,j＝2.4hz,1h),4.51(d,j＝2.4hz,1h),5.15-5.24(m,1h),5.39-5.41(m,1h),6.69(s,2h),7.16(d,j＝8.4hz,1h),7.22(br.s.,2h),7.54(dd,j＝6.7,8.4hz,1h),7.64(d,j＝6.7hz,1h),8.45(br.s.,1h),13.45(s,1h),13.82(s,1h)。
ms(esi):834[m+η]+
ms(esi):818[m+η]+
1hnmr(500mhz,acetonitrile-d3,溫度60℃)δppm1.25–1.35(m,2h),1.31(d,j＝6.7hz,3h),1.49–1.66(m,4h),1.70–1.77(m,1h),1.85–1.93(m,1h),1.98(s,3h),2.22–2.33(m,1h),2.35–2.56(m,3h),2.70-2.82(m,2h),3.05-3.20(m,2h),3.40(s,3h),3.40-3.48(m,3h),3.53-3.60(m,1h),3.74-3.80(m,1h),4.03(dd,j＝1.5,6.8hz,1h),4.07-4.13(m,1h),4.21(br.s.,1h),4.30(d,j＝2.4hz,1h),4.56(d,j＝2.4hz,1h),5.15-5.24(m,1h),5.36-5.40(m,1h),6.69(s,2h),7.16(d,j＝8.4hz,1h),7.21(br.s.,2h),7.54(dd,j＝6.7,8.4hz,1h),7.64(d,j＝6.7hz,1h),8.41(br.s.,1h),13.46(s,1h),13.81(s,1h)。
實(shí)施例2a
化合物(5)的合成
步驟1
中間體：(3,4-二氫-2h-吡喃-2-基甲氧基)乙酸乙酯的合成
在氬氣氛下的無水圓底燒瓶中，用無水w-戊烷洗滌60％氫化鈉(240mg，6.0mmol)三次。在0℃下，冷卻2-羥甲基-3,4-二氫-2η-吡喃(570.8mg，5mmol)在四氫呋喃(10ml)中的溶液，然后加入到nah中。在0℃下，攪拌該反應(yīng)混合物直到氫逸出結(jié)束。將溴乙酸乙酯(1253mg,7.5mmol)在四氫呋喃(6ml)中的溶液加入到反應(yīng)混合物中，并在室溫下繼續(xù)攪拌，直到起始乙醇消失(tlc分析)。在冷卻之后，加入h2o，并在減壓下蒸發(fā)溶劑。通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(acoet/己烷＝1∶12)純化殘余物，得到626mg(產(chǎn)率57％)呈無色油狀物的(3,4-二氫-2h-吡喃-2-基甲氧基)乙酸乙酯。
1hnmr(401mhz,dmso-d6)δppm1.18-1.23(m,3h)3.55-3.59(m,2h)3.93(m,j＝10.08,5.11,5.11,2.38hz,1h)4.13(q,j＝7.07hz,2h)4.14(s,2h)4.67(dddd,j＝6.14,4.83,2.56,1.34hz,1h)6.36(dt,j＝6.13,1.75hz,1h)。
步驟2
中間體(35)的合成
在氬氣氛下，向式(iii)’的化合物(化合物29，參見實(shí)施例6)(50mg)在4ml的無水二氯甲烷中的溶液中加入來自步驟1的(3,4-二氫-2h-吡喃-2-基甲氧基)乙酸乙酯(118.5mg)和無水對甲苯磺酸(22.3mg，0.12mmol)。在室溫下，攪拌反應(yīng)混合物4小時(shí)，直到檢測不到起始原料(tlc分析，meoη：cη2cl2)。然后，向所述反應(yīng)混合物中加入碳酸氫鈉10％水溶液，并用二氯甲烷(4×20ml)萃取水相。將合并的有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并在真空下過濾。通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(meoh：cη2cl2)純化殘余物，得到呈四種非對映異構(gòu)體的混合物的中間體(35)。
ms(esi):827[m+h]+。
步驟3
酸中間體(36)的合成
在氬氣下，將在0℃下冷卻的從步驟2得到的乙酯中間體(35)(40mg)用0.1n氫氧化鈉水溶液(1.5ml)處理。在0℃下，攪拌該反應(yīng)混合物2小時(shí)。反應(yīng)過程之后，進(jìn)行反相hplc-ms。此后，用10％乙酸水溶液使反應(yīng)混合物達(dá)到ph≥8，并用水飽和的正丁醇(8×10ml)萃取。將合并的有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，并在真空下除去溶劑。通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(meoh：cη2cl2)純化殘余物，得到呈非對映異構(gòu)體混合物的(36)。
ms(esi):799[m+h]+.
步驟4
中間體(37)的合成
向在0℃下冷卻的從該方法的步驟3得到的酸中間體(36)(2mg)在無水二氯甲烷(1ml)中的溶液中加入n-羥基琥珀酰亞胺(1mg)和n,n'-二環(huán)己基碳二亞胺(1mg)。在0℃下，攪拌該反應(yīng)混合物2.5小時(shí)，直到起始原料消失(hplc-ms分析)。在真空下蒸發(fā)溶劑，并用乙醚(2×4ml)處理殘余物。攪拌該懸浮液10分鐘，通過過濾除去固體，并在真空中濃縮有機(jī)溶液，得到2mg呈非對映異構(gòu)體的混合物的中間體(37)。
ms(esi):896[m+h]+.
步驟5
標(biāo)題化合物(5)
向從該方法的步驟4得到(37)(1mg)在無水二氯甲烷(100μl)的溶液中加入n-(2-氨基乙基)馬來酰亞胺三氟乙酸鹽(2eq)。在室溫下，攪拌溶液4小時(shí)，直到檢測不到起始原料(hplc-ms分析)，并在真空中蒸發(fā)溶劑。通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(meoh：cη2cl2)純化殘余物，得到呈非對映異構(gòu)體的混合物的化合物(5)。
ms(esi):921[m+h]+
實(shí)施例2b
化合物(9)的合成
在氮?dú)夥障?，攪?iii)'(化合物.29，參見實(shí)施例6)(10mg)、雙(4-硝基苯基)碳酸酯(22mg)和三乙胺(0.021ml)在1ml的無水dcm和1ml的無水thf中的溶液6小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并用乙醚處理殘余物。過濾得到的沉淀物(38)，用乙醚洗滌，并在真空下干燥。將該化合物溶于無水dcm(2ml，含有10％的無水dmf)中，并加入n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己?；鵠-l-纈氨酰-n5-氨基甲酰基-n-{4-[({甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲?；鶀氧基)甲基]苯基}-l-鳥氨酰胺鹽酸鹽(39)(如實(shí)施例8中報(bào)道的制備)(30mg,0.04mmol)和三乙胺(0.016ml,0.11mmol)。在氮?dú)夥障?，攪拌該反?yīng)混合物過夜，蒸發(fā)溶劑，并在柱色譜純化(dcm/meoh)之后得到標(biāo)題化合物(9)。
ms(esi):1339[m+h]+
通過類似的方法并使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
ms(esi):1339[m+h]+
ms(esi):1400[m+h]+
實(shí)施例3
化合物(18)的制備
步驟1
中間體(40)的制備
向化合物(iii)’(化合物29，參見實(shí)施例6)在3ml的甲醇和2ml的h2o中的溶液中，加入naio4(5.1mg,0.0238mmol)在1ml的h2o中的溶液。在室溫下，攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)，直到檢測不到起始原料(tlc和hplc分析)。在減壓下除去溶劑，并在下一步中使用粗酸(40)而無需進(jìn)一步純化。
ms(esi):613[m+η]+
步驟2
標(biāo)題化合物(18)
在氬氣氛下，向粗中間體(40)(4.4mg)在無水二氯甲烷(1.5ml)中的溶液中加入無水三乙胺(2.2mg)、tbtu(4.4mg)和市售可獲得的n-(2-氨基乙基)馬來酰亞胺三氟乙酸鹽(3.6mg)。在室溫下，攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，直到起始原料消失(hplc-ms分析)。在真空下蒸發(fā)溶劑，然后通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(etoh：cη2cl2)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(18)。
ms(esi):735[m+h]+.
通過類似的方法并使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
ms(esi):1279[m+h]+
ms(esi):1340[m+h]+.
ms(esi):809[m+h]+.
實(shí)施例4a
化合物(12)的合成
在氬氣氛下，向粗中間體(iii)'(化合物29，參見實(shí)施例6,，4.4mg)在無水二氯甲烷(1.5ml)中的溶液中加入無水三乙胺(1.5mg)、tbtu(2.7mg)和市售可獲得的1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1h-吡咯-2,5-二酮(1.8mg)。在室溫下，攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，直到起始原料消失(hplc-ms分析)。在真空下蒸發(fā)溶劑，然后通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(etoh：cη2cl2)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(12)。
ms(esi):820[m+h]+.
通過類似的方法并使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
ms(esi):804[m+h]+.
ms(esi):824[m+h]+.
ms(esi):808[m+h]+.
ms(esi):1121[m+h]+.
實(shí)施例4b
化合物(16)的合成
化合物(v)'(化合物29，參見實(shí)施例6,10mg)溶于無水dcm(2ml)，含有10％的無水dmf)的溶液中，加入n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰基]-l-纈氨酰-n5-氨基甲?；?n-[2-({[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}甲基)苯基]-l-鳥氨酰胺(41)(如ep0624377a2和ep2357006a2中報(bào)道的制備，15mg)和三乙胺(0.0033ml)。在氮?dú)夥障拢瑪嚢柙摲磻?yīng)混合物過夜，蒸發(fā)溶劑，并在柱色譜純化(dcm/meoh)之后得到標(biāo)題化合物(16)。
ms(esi):1225[m+h]+.
通過類似的方法并使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
ms(esi):1270[m+h]+.
ms(esi):1225[m+h]+.
ms(esi):1123[m+h]+
ms(esi):1139[m+h]+
實(shí)施例4b
化合物(23)的合成
步驟1
中間體∶9h-芴-9-基甲基[(2s)-1-{[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]氨基}-1-氧代丙-2-基]氨基甲酸酯(化合物42)的合成
在無水圓底燒瓶中，用socl2(190mgg,1.61mmol)處理fmoc-l-丙氨酸(50mg,1.6mmol)在9ml的無水二氯甲烷中的溶液，并在氬氣氛下回流該混合物2小時(shí)。在真空下除去溶劑和過量的socl2，得到粗中間體9h-芴-9-基甲基[(2s)-1-氯-1-氧代丙烷-2-基]氨基甲酸酯。
在氬氣氛下，向化合物(ii)'(化合物22，參見實(shí)施例6)(10mg,0.0164mmol)在5ml的無水二氯甲烷中的溶液，加入9h-芴-9-基甲基[(2s)-1-氯-1-氧代丙烷-2-基]氨基甲酸酯(30mg,0.091mmol)和5ml的飽和的nahco3水溶液。在室溫下，攪拌反應(yīng)混合物4小時(shí)，直到檢測不到起始原料(tlc分析，acoet/甲苯)。分離有機(jī)相，用水洗滌，并經(jīng)無水na2so4干燥。在真空下蒸發(fā)溶劑，并通過在硅膠(230-400目)上快速色譜(洗脫液∶acoet/甲苯＝4/6)純化殘余物，得到化合物(42)(7.2mg，紅色蠟狀物)。
ms(esi):904[m+h]+.
步驟2
化合物(26)的合成
將從步驟1得到的中間體9h-芴-9-基甲基[(2s)-1-{[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]氨基}-1-氧代丙烷-2-基]氨基甲酸酯(42)(7.2mg,0.008)溶于無水二氯甲烷(1.5ml)中，并用哌啶(20.4mg，0.24mmol)處理。在室溫下，攪拌反應(yīng)混合物4小時(shí)，直到起始原料消失(hplc-ms分析)。將反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋，并用水洗滌。經(jīng)無水硫酸鈉干燥有機(jī)相，并在真空下蒸發(fā)溶劑。通過在硅膠(230-400目)上快速柱色譜(洗脫液∶acoet/甲苯＝4/6；然后etoh/ch2cl2＝1/1)純化殘余物，得到化合物(26)(2.5mg，紅色蠟狀物)。
ms(esi):682[m+h]+.
1hnmr(401mhz,ch3cn-d3)δppm1.29(d,j＝6.7hz,3h),1.38(d,j＝6.8hz,3h),1.64–1.74(m,1h),1.86–1.91(m,1h),2.02–2.07(m,1h),2.35(s,3h),2.38–2.48(m,1h),2.68–2.81(m,2h),2.93-3.14(m,2h),3.38(s,3h),3.44–3.48(m,1h),3.54–3.60(m,1h),3.64(q,j＝6.8hz,1h),3.71–3.79(m,1h),4.01-4.06(m,1h),4.07-4.13(m,1h),4.27(d,j＝2.7hz,1h),4.55(d,j＝2.7hz,1h),5.19-5.24(m,1h),5.35–5.40(m,1h),7.86(dd,j＝7.8,8.5hz,1h),8.10(d,j＝7.8hz,1h),9.23(d,j＝8.5hz,1h).
通過類似的方法并使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
n-[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]甘氨酰胺(化合物75)
ms(esi):668[m+h]+.
步驟3
標(biāo)題化合物(23)
向從步驟3得到的化合物(26)(1.8mg,0.00264mmol)在無水二氯甲烷(3ml)中的溶液中加入n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰基]-l-纈氨酸(4.9mg,0.016mmol)和o-(benzotriazol-1-基)-n,n,n′,n′-四甲基四氟硼酸脲鎓(5.1mg,0.016mmol)。在室溫下，攪拌反應(yīng)混合物4小時(shí)，直到起始原料消失(hplc-ms分析)。在室溫下，攪拌改反應(yīng)混合物20小時(shí)直到起始原料消失(hplc-ms分析)。
將反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋，并用水洗滌。經(jīng)無水硫酸鈉干燥有機(jī)相，并在真空下蒸發(fā)溶劑。通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(洗脫液∶acoet/甲苯＝4/6)純化殘余物，得到化合物(23)(1.9mg，紅色蠟狀物)。
ms(esi):974[m+η]+.
通過類似的方法并使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰基]-l-纈氨酰-n5-氨基甲?；?l-鳥氨?；?n-[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-l-丙氨酰胺(化合物27)
ms(esi):1131[m+η]+.
n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己?；鵠-l-纈氨酰-n5-氨基甲?；?l-鳥氨?；?n-[(8s,10s)-8-乙酰基-6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]甘氨酰胺(化合物76)
ms(esi):1117[m+η]+.
n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己?；鵠-l-纈氨酰-n-[4-({[(2-{[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-10-{[(3s,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]氨基}-2-氧代乙基)氨基甲?；鵠氧基}甲基)苯基]-n5-氨基甲酰基-l-鳥氨酰胺(化合物77)
ms(esi):1266[m+η]+.
n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰基]-l-纈氨酰-n-{4-[({[(2s)-1-{[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]氨基}-1-氧代丙烷-2-基]氨基甲酰基}氧基)甲基]苯基}-n5-氨基甲?；?l-鳥氨酰胺(化合物78)
ms(esi):1280[m+η]+.
實(shí)施例5
步驟a1，步驟b1(根據(jù)a6a和a6b)
(8s,10s)-8-乙?；?1-氟-6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物21)
步驟a1
(1s,3s)-3-乙?；?10-氟-3,5,12-三羥基-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲基嗎啉-4-基]-α-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷[(xxii)](化合物44)
將(1s,3s)-3-乙?；?10-氟-3,5,12-三羥基-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基3-氨基-2,3,6-三脫氧-α-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷(70.0mg,0.136mmol)[如wo90/09392中報(bào)道的制備]溶于無水dmf(3ml)中；加入二異丙基乙胺(106mg,0.82mmol)在無水dmf(2ml)中的溶液和(1s)-2-碘-1-(2-碘乙氧基)-1-甲氧基乙烷(xxi)(965mg,2.71mmol)在無水dmf(10ml)中的溶液。在室溫下，黑暗中攪拌反應(yīng)混合物48小時(shí)，直到檢測不到起始原料(hplc分析)。然后，將該反應(yīng)混合物用dcm稀釋，并用水洗滌。將有機(jī)相經(jīng)無水na2so4干燥，在真空下蒸發(fā)溶劑，并通過在硅膠(230-400目)上的快速色譜法(洗脫液∶etoh/dc；0.2/9.8)純化殘余物，得到期望的產(chǎn)物(44)(35mg，紅色蠟狀物)。
ms(esi):616[m+η]+.
1hnmr(500mhz,chcl3-d)δppm1.39(d,j＝6.71hz,3h)1.78-1.85(m,2h)2.09-2.14(m,1h)2.46-2.56(m,3h)2.61(dd,j＝11.41,3.97hz,1h)3.03(d,j＝19.04hz,1h)3.27(dd,j＝19.10,1.77hz,1h)3.40(s,3h)3.57(ddd,j＝11.57,5.34,3.11hz,1h)3.70(s,1h)3.92-3.99(m,1h)4.04(q,j＝6.47hz,1h)4.48-4.52(m,1h)4.67(s,1h)5.28-5.30(m,1h)5.56(br.s.,1h)7.54(dd,j＝10.44,8.48hz,1h)7.83(td,j＝7.97,4.58hz,1h)8.25(d,j＝7.69hz,1h)13.31(s,1h)13.72(s,1h)
通過類似的方法，制備下述化合物∶
(1s,3s)-10-氟-3,5,12-三羥基-3-(羥基乙酰基)-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基嗎啉-4-基]-α-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷[(xxii)](化合物45)
ms(esi):632[m+η]+.
步驟b1(a6a)
(1s,3s)-3-乙?；?10-氟-3,5,12-三羥基-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基(3ξ)-2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基-4-氧化嗎啉-4-基]-α-l-蘇(threo)-吡喃己糖苷[(xxii)](化合物46)
將(1s,3s)-3-乙酰基-10-氟-3,5,12-三羥基-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基嗎啉-4-基]-α-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷(28mg,0.045mmol)[如步驟a1中報(bào)道的制備]溶于dcm(3.0ml)中。在室溫下，用dmdo在丙酮中的0.1m溶液(0.8ml)處理溶液30分鐘，直到檢測不到起始原料(hplc分析)。然后，在真空下，將反應(yīng)混合物濃縮至干，得到期望的中間體(46)(紅色蠟狀物，24.1mg)。
ms(esi):632[m+η]+.
1hnmr(500mhz,ch3cn-d3)δppm1.23(d,j＝6.7hz,3h)1.96-2.00(m,1h)2.10(m,1h)2.35(s,3h)2.33-2.38(m,1h)2.56-2.64(m,2h)2.94-3.00(m,1h)3.07-3.12(m,1h)3.13-3.16(m,1h)3.23–3.29(m,1h)3.37(s,3h)3.38-3.46(m,2h)3.86-3.95(m,1h)3.99(q,j＝6.7hz,1h)4.14(s,1h)4.22-4.29(m,1h)4.32(br.s.,1h)4.91(dd,j＝8.1,2.3hz,1h)5.20(dd,j＝4.6,1.9hz,1h)5.60(d,j＝3.9hz,1h)7.62(dd,jhh＝8.3,jhf＝10.8hz,1h)7.91(m,1h)8.20(d,jhh＝7.7hz,1h)13.26(br.s.,1h)13.69(br.s.,1h)。
通過類似的方法，制備下述化合物∶
(1s,3s)-10-氟-3,5,12-三羥基-3-(羥基乙?；?-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基(3ξ)-2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基-4-氧化嗎啉-4-基]-α-l-蘇(threo)-吡喃己糖苷[(xxii)](化合物47)
ms(esi):648[m+η]+.
步驟b1(a6b)
標(biāo)題化合物(21)
向化合物(1s,3s)-3-乙酰基-10-氟-3,5,12-三羥基-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基(3ξ)-2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基-4-氧化嗎啉-4-基]-α-l-蘇(threo)-吡喃己糖苷[(xxii)](20mg,0.032mmol)在5.0ml的無水ch3cn的溶液中加入k2co3(13.2mg,0.096mmol)和氰尿酰氯(11.8mg,0.064mmol)。在室溫下，黑暗中強(qiáng)力攪拌反應(yīng)混合物20分鐘，直到檢測不到起始原料。然后，將3-氨基-1,2-丙二醇(17.5mg,0.192mmol)在水(0.84ml)中的溶液加入到該反應(yīng)混合物中，并用dcm(4×10ml)萃取水相。將合并的有機(jī)相經(jīng)無水na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(acoet/甲苯；4/6)純化粗物質(zhì)，得到7.0mg呈紅色固體的標(biāo)題化合物(21)。
ms(esi):m/z614[m+η]+.
1hnmr(500mhz,ch3cn-d3)δppm1.29(d,j＝6.6hz,3h)1.68-1.73(m,1h)1.86-1.91(m,1h)2.05(dd,j＝14.8,4.3hz,1h)2.34(s,3h)2.42-2.47(m,1h)2.67-2.81(m,2h)2.93-2.98(m,1h)3.05-3.11(m,1h)3.37(s,3h)3.42-3.47(m,1h)3.52-3.58(m,1h)3.71–3.76(m,1h)4.03(dd,j＝7.1,1.8hz,1h)4.06-4.12(m,1h)4.26(d,j＝2.8hz,1h)4.53(d,j＝2.8hz,1h)4.54(s,1h)5.20(dd,j＝4.3,2.1hz,1h)5.35(t,j＝5.5hz,1h)7.60(dd,jhh＝8.3,jhf＝11.6hz,1h)7.89(m,1h)8.19(dd,jhh＝7.7,jhf＝0.8hz,1h)13.25(br.s.,1h)13.61(br.s.,1h)
類似地，通過使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
(8s,10s)-1-氟-6,8,11-三羥基-8-(羥基乙?；?-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物28)
ms(esi):630[m+η]+.
(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-1-[(2-羥基乙基)氨基]-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物30)
ms(esi):655[m+η]+.
(8s,10s)-6,8,11-三羥基-8-(羥基乙酰基)-1-[(2-羥基乙基)氨基]-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物31)
ms(esi):671[m+η]+.
(8s,10s)-8-乙?；?1-[(2-氨基乙基)氨基]-6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物32)
ms(esi):654[m+η]+.
(8s,10s)-1-[(2-氨基乙基)氨基]-6,8,11-三羥基-8-(羥基乙?；?-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物33)
ms(esi):670[m+η]+.
實(shí)施例6
步驟a1，步驟b1(根據(jù)a6a和a6b)
(8s,10s)-8-乙?；?1-氨基-6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-7,8,9,10-四氫并四苯-5，12-二酮[(ii)’](化合物22)
步驟a1
(1s,3s)-3-乙?；?10-氨基-3,5,12-三羥基-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基嗎啉-4-基]-α-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷[(xxii)](化合物49)
將(1s,3s)-3-乙?；?10-氨基-3,5,12-三羥基-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基3-氨基-2,3,6-三脫氧-α-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷(165.0mg,0.322mmol)(化合物48，如實(shí)施例7中報(bào)道的制備)溶于無水dmf(3.0ml)中；加入二異丙基乙胺(221mg,1.71mmol)在無水dmf(3ml)中的溶液和(1s)-2-碘-1-(2-碘乙氧基)-1-甲氧基乙烷(xxi)(2.0g,5.64mmol)在無水dmf(10ml)中的溶液。在室溫下，黑暗中攪拌反應(yīng)混合物48小時(shí)，直到檢測不到起始原料(hplc分析)。然后，將反應(yīng)混合物用dcm稀釋，并用水洗滌。經(jīng)無水na2so4干燥有機(jī)相，在真空下蒸發(fā)溶劑，并通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(洗脫液∶etoh/dcm；0.2/9.8)純化殘余物，得到期望的產(chǎn)物(49)(105mg，紅色固體)。
ms(esi):613[m+η]+.
1hnmr(500mhz,ch3cn-d3)δppm1.22-1.28(m,3h)1.65-1.83(m,2h)2.30-2.36(m,4h)2.40(dd,j＝11.22,4.94hz,3h)2.46-2.54(m,2h)2.87-2.96(m,1h)3.04-3.11(m,1h)3.32(s,3h)3.50(ddd,j＝11.34,6.51,2.83hz,1h)3.65(br.s.,1h)3.77-3.89(m,1h)4.04(d,j＝6.51hz,1h)4.44(dd,j＝4.63,2.41hz,1h)5.16(d,j＝1.99hz,1h)5.43-5.47(m,1h)7.12-7.16(m,1h)7.24(br.s.,1h)7.50-7.55(m,1h)7.58-7.61(m,1h)
通過類似的方法，制備下述化合物∶
(1s,3s)-10-氨基-3,5,12-三羥基-3-(羥基乙酰基)-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基嗎啉-4-基]-α-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷(化合物50)
ms(esi):629[m+η]+.
保護(hù)
n-[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-5,12-二氧代-10-({2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基嗎啉-4-基]-α-l-來蘇(lyxo)-己吡喃糖基(hexopyranosyl)}氧基)-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(化合物51)
將(1s,3s)-3-乙?；?10-氨基-3,5,12-三羥基-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基嗎啉-4-基]-α-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷(49)(80.0mg,0.130mmol)溶于無水dcm(11ml)中，并加入三氟乙酸酐(273.0mg,1.3mmol)。在室溫下，黑暗中攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，直到檢測不到起始原料(hplc分析)。然后，將反應(yīng)混合物用dcm稀釋，并用飽和的nahco3水溶液(3×10ml)洗滌，然后用水(1×10ml)洗滌。將有機(jī)相經(jīng)無水na2so4干燥，在真空下蒸發(fā)溶劑，并在室溫下用meoh(10ml)處理如此得到的殘余物15分鐘，然后在真空下蒸發(fā)，得到期望的產(chǎn)物(51)(77.0mg，紅色蠟狀物)。
ms(esi):709[m+η]+.
1hnmr(500mhz,ch3cn-d3)δppm1.25(d,j＝6.59hz,3h)1.76(dd,j＝8.68,2.61hz,2h)2.27-2.45(m,8h)2.52(t,j＝10.99hz,2h)2.96-3.03(m,1h)3.08-3.15(m,1h)3.30-3.33(m,3h)3.50(ddd,j＝11.27,6.57,2.61hz,1h)3.66(br.s.,1h)3.79-3.87(m,1h)4.05(q,j＝6.62hz,1h)4.44(dd,j＝4.70,2.35hz,1h)5.17(d,j＝2.27hz,1h)5.45(s,1h)7.97(t,j＝8.15hz,1h)8.24(d,j＝7.50hz,1h)8.99(d,j＝8.18hz,1h)
步驟b1(a6a)
n-[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-5,12-二氧代-10-({(3ξ)-2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基-4-氧化嗎啉-4-基]-α-l-蘇(threo)-己吡喃糖基(hexopyranosyl)}氧基)-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺[(xxii)](化合物52)
將n-[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-5,12-二氧代-10-({2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基嗎啉-4-基]-α-l-來蘇(lyxo)-己吡喃糖基(hexopyranosyl)}氧基)-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(51)(72.0mg,0.102mmol)溶于dcm(6.4ml)中。在室溫下，該溶液用dmdo在丙酮中的0.1m溶液(1.7ml)處理30分鐘，直到檢測不到起始原料(hplc分析)。然后，在真空下，將反應(yīng)混合物濃縮至干，得到期望的中間體(52)(紅色蠟狀物，73.0mg)。ms(esi):725[m+η]+.
1hnmr(500mhz,ch3cn-d3)δppm1.23(d,j＝6.51hz,3h)2.32-2.39(m,4h)2.57(d,j＝4.54hz,1h)2.74(d,j＝11.65hz,1h)2.96-3.02(m,1h)3.08-3.15(m,1h)3.25-3.45(m,7h)3.57(br.s.,1h)3.92(d,j＝12.79hz,1h)4.04(d,j＝6.88hz,1h)4.18(s,1h)4.21-4.28(m,1h)4.92(dd,j＝8.21,2.08hz,1h)5.19(d,j＝2.19hz,1h)5.61(d,j＝3.71hz,1h)7.97(t,j＝8.10hz,1h)8.23(d,j＝7.64hz,1h)8.98(d,j＝8.32hz,1h)
通過類似的方法，可以制備下述化合物∶
n-[(8s,10s)-6,8,11-三羥基-8-羥基乙?；?5,12-二氧代-10-({(3ξ)-2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基-4-氧化嗎啉-4-基]-α-l-蘇(threo)-己吡喃糖基(hexopyranosyl)}氧基)-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(化合物53)
ms(esi):645[m+η]+.
步驟b1(a6b)
n-[(8s,10s)-8-乙酰基-6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(化合物34)
向化合物n-[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-5,12-二氧代-10-({(3ξ)-2,3,6-三脫氧-3-[(2s)-2-甲氧基-4-氧化嗎啉-4-基]-α-l-蘇(threo)-己吡喃糖基(hexopyranosyl)}氧基)-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(52)(60.0mg,0.083mmol)在13ml的無水ch3cn中的溶液中加入k2co3(34.4mg,0.249mmol)和氰尿酰氯(30.6mg,0.166mmol)。在室溫下，黑暗中強(qiáng)力攪拌反應(yīng)混合物15分鐘，直到檢測不到起始原料。然后，將3-氨基-1,2-丙二醇(45.3mg,0.5mmol)在水(0.22ml)中的溶液加入到該反應(yīng)混合物中，并用dcm(4×10ml)萃取水相。將合并的有機(jī)相經(jīng)無水na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。通過在硅膠(230-400目)上的快速柱色譜(acoet/甲苯；4/6)純化粗物質(zhì)，得到12.0mg呈紅色固體的標(biāo)題化合物(34)。ms(esi):707[m+η]+.
1hnmr(500mhz,ch3cn-d3)δppm1.29(d,j＝6.58hz,4h)1.70(d,j＝15.21hz,1h)1.90(d,j＝15.59hz,2h)2.04-2.08(m,2h)2.45(d,j＝14.98hz,1h)2.69-2.76(m,1h)2.77-2.83(m,1h)2.97(s,1h)3.08-3.14(m,2h)3.38(s,4h)3.45(d,j＝6.88hz,2h)3.56(d,j＝5.22hz,2h)3.74(s,1h)4.04(d,j＝1.89hz,2h)4.09(d,j＝6.88hz,1h)4.26(d,j＝2.72hz,1h)4.52-4.54(m,2h)5.22(br.s.,1h)5.36(t,j＝5.60hz,1h)7.98(t,j＝8.06hz,1h)8.26(d,j＝7.87hz,1h)9.00(d,j＝8.10hz,1h)
脫保護(hù)
標(biāo)題化合物(22)
在0℃下，冷卻n-[(8s,10s)-8-乙酰基-6,8,11-三羥基-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺中間體(34)(4.8mg,0,00679mmol)并加入0.1nnaoh水溶液(0.5ml)。在0℃下，黑暗中攪拌反應(yīng)混合物15分鐘，直到檢測不到起始原料。然后，將反應(yīng)混合物用h2o稀釋，并用dcm(4×5ml)萃取。將合并的有機(jī)相用飽和的nacl水溶液(1×10ml)洗滌，經(jīng)無水na2so4干燥，過濾并在真空下蒸發(fā)，得到4.0mg呈紅色固體的標(biāo)題化合物。
ms(esi):611[m+η]+.
1hnmr(500mhz,ch3cn-d3)δppm1.70(dt,j＝15.06,5.82hz,2h)1.87(dt,j＝15.17,5.54hz,1h)2.34(s,3h)2.43(d,j＝14.41hz,1h)2.68-2.81(m,2h)2.91-2.96(m,1h)3.07(d,j＝18.66hz,1h)3.37(s,3h)3.44(q,j＝5.87hz,1h)3.51-3.61(m,2h)3.74(ddd,j＝11.63,8.25,2.96hz,1h)4.01-4.04(m,1h)4.06-4.13(m,1h)4.26(d,j＝2.66hz,1h)4.54(d,j＝2.58hz,1h)5.21(br.s.,1h)5.37(t,j＝5.61hz,1h)7.16(d,j＝8.57hz,1h)7.54(t,j＝7.89hz,1h)7.62(d,j＝7.06hz,1h)
類似地，通過使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
(8s,10s)-1-氨基-6,8,11-三羥基-8-(羥基乙?；?-10-{[(1s,3r,4as,9s,9ar,10as)-9-甲氧基-1-甲基八氫-1h-吡喃并[4',3':4,5][1,3]噁唑并[2,3-c][1,4]噁嗪-3-基]氧基}-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物29)
ms(esi):627[m+η]+.
實(shí)施例7
步驟g2，脫保護(hù)，保護(hù)，步驟g3，脫保護(hù)
(1s,3s)-3-乙?；?10-氨基-3,5,12-三羥基-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基3-氨基-2,3,6-三脫氧-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷(xx)(化合物48)
步驟g2
中間體(8s,10s)-1-[(3,4-二甲氧基芐基)氨基]-6,8,10,11-四羥基-8-(2-甲基-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(xxviii)(化合物55)的合成
向(8s,10s)-6,8,10,11-四羥基-8-(2-甲基-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基4-氟苯磺酸酯(54)(400mg,0.682mmol)[[如gb2215332中報(bào)道的制備]在thf(10ml)中的溶液中加入3-4二甲氧基芐胺(0.532mg,3.1mmol)。在60℃下，加熱該溶液，并黑暗中攪拌24小時(shí)。然后，在真空下部分除去溶劑，過濾收集深紫色沉淀物，先用thf(3ml)洗滌，然后用et2o(10ml)洗滌。最后，在真空下，在烘箱中于30℃干燥固體，得到標(biāo)題中間體(55)(188mg，產(chǎn)率48％)。
類似地，通過使用合適的胺，制備下述化合物∶
(8s,10s)-6,8,10,11-四羥基-1-[(2-羥基乙基)氨基]-8-(2-甲基-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物57)
ms(esi):472[m+η]+.
1hnmr(499.75mhz,dmso-d6)δppm1.33(s,3h),1.82(dd,j＝14.3,4.3hz,1h),2.20(d,j＝14.3hz,1h),2.67(d,j＝18.7hz,1h),3.10(d,j＝18.7hz,1h),3.45-3.49(m,2h),3.68-3.72(m,2h),3.92-4.01(m,4h),5.00(t,j＝5.1hz,1h),5.05-5.11(m,1h),5.35(d,j＝7.6hz,1h),5.44(s,1h),7.35(d，j＝8.7hz，1h)，7.56(d，j＝6.8hz，1h)，7.70(dd，j＝8.7,6.8hz,1h),9.61(t,j＝5.1hz,1h),13.52(br.s.,1h),13.74(br.s.,1h)
(8s,10s)-1-[(2-氨基乙基)氨基]-6,8,10,11-四羥基-8-(2-甲基-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物58)
ms(esi):471[m+η]+.
脫保護(hù)
中間體(8s,10s)-8-乙?；?1-氨基-6,8,10,11-四羥基-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(xxviii)(化合物56)的合成
向冷的三氟乙酸(2ml)中加入(8s,10s)-1-[(3,4-二甲氧基芐基)氨基]-6,8,10,11-四羥基-8-(2-甲基-1,3-二氧戊環(huán)-2-基)-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(55)(133mg,0.230mmol)和加入2滴苯甲醚。在5℃下，攪拌該溶液20分鐘，然后在室溫下攪拌2小時(shí)，直到檢測不到起始原料。將反應(yīng)物用水(5ml)稀釋，用nahco3溶液中和，然后，用dcm(3×50ml)萃取水相。將合并的有機(jī)相經(jīng)無水na2so4干燥，過濾，在真空下濃縮溶劑，并用et2o(10ml)處理粗物質(zhì)。過濾收集深紫色沉淀物，并在真空下，在烘箱中于30℃干燥，得到期望的中間體(82mg，產(chǎn)率93％)。
ms(esi):384[m+η]+.
1hnmr(400.5mhz,dmso-d6)δppm1.99(dd,j＝14.4,4.6hz,1h),2.13-2.19(m,1h),2.30(s,3h),2.88-2.95(m,1h),2.98-3.05(m,1h),5.07(m,1h),5.29(br.s.,1h),6.07(s,1h),7.24(dd,j＝8.3,1.1hz,1h),7.51(dd,j＝7.3,1.1hz,,1h),7.55-7.60(m,1h),8.05(br.s.,2h),13.49(br.s.,1h),13.85(br.s.,1h)
類似地，通過使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
(8s,10s)-8-乙酰基-6,8,10,11-四羥基-1-[(2-羥基乙基)氨基]-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物59)
ms(esi):428[m+η]+.
1hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.98(dd,j＝14.2,4.6hz,1h),2.16(d,j＝14.2hz,1h),2.31(s,3h),2.88-2.94(m,1h),2.98-3.04(m,1h),3.46-3.49(m,2h),3.68-3.72(m,2h),5.01(t,j＝5.1hz,1h),5.05-5.10(m,1h),5.30(d,j＝6.7hz,1h),6.10(s,1h),7.35(d,j＝8.7hz,1h),7.56(d,j＝7.1hz,1h),7.70(dd,j＝8.7,7.1hz,1h),9.62(t,j＝5.1hz,1h),13.47(br.s.,1h),13.76(br.s.,1h)
(8s,10s)-8-乙?；?1-[(2-氨基乙基)氨基]-6,8,10,11-四羥基-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(化合物60)
ms(esi):427[m+η]+.
1hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.97(dd,j＝14.2,4.6hz,1h),2.14(d,j＝14.2hz,1h),2.31(s,3h),2.88-2.94(m,1h),2.98-3.04(m,1h),3.05-3.22(m,4h),5.05-5.10(m,1h),5.30(d,j＝6.7hz,1h),6.10(s,1h),7.35(d,j＝8.7hz,1h),7.54(d,j＝7.1hz,1h),7.70(dd,j＝8.7,7.1hz,1h),9.60(t,j＝5.1hz,1h),13.46(br.s.,1h),13.76(br.s.,1h)
保護(hù)
中間體n-[(8s,10s)-8-乙酰基-6,8,10,11-四羥基-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(化合物61)的合成
將中間體(8s,10s)-8-乙?；?1-氨基-6,8,10,11-四羥基-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮(56)(600.0mg,1.56mmol)溶于無水dcm(120ml)中，并加入三氟乙酸酐(1.2ml)。在室溫下，黑暗中攪拌反應(yīng)混合物5分鐘，直到檢測不到起始原料(hplc分析)。然后，將該反應(yīng)混合物用dcm(100ml)稀釋，并用飽和的nahco3水溶液(3×100ml)洗滌，然后用水(1×100ml)洗滌。經(jīng)無水na2so4干燥有機(jī)相，并在真空下除去溶劑。通過在硅膠(230-400目)上的快速色譜(洗脫液∶ch3coch3/dcm；0.3/9.7)純化如此得到的殘余物，得到期望的產(chǎn)物(494.1mg，紅色固體)。
ms(esi):480[m+η]+.
1hnmr(500mhz,chcl3-d)δppm2.22(dd,j＝14.5,4.9hz,1h),2.36-2.41(m,1h),2.45(s,3h),3.01(d,j＝18.7hz,1h),3.23(dd,j＝18.7,2.2hz,1h),3.81(d,j＝5.2hz,1h),4.54(s,1h),5.35(m,1h),7.93(dd,j＝8.4,7.7hz,1h),8.29(dd,j＝7.7,1.1hz,1h),9.12(dd,j＝8.4,1.1hz,1h),13.29(br.s.,1h),13.29(s,1h),13.46(s,1h)。
類似地，通過使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
n-(2-{[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,10,11-四羥基-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]氨基}乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(化合物62)
ms(esi):523[m+η]+.
步驟g3
n-[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-5,12-二氧代-10-({2,3,6-三脫氧-3-[(三氟乙?；?氨基]-l-來蘇(lyxo)-己吡喃糖基(hexopyranosyl)}氧基)-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(化合物63)的合成
在氬氣氛下，在無水三頸圓底燒瓶中，將中間體n-[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,10,11-四羥基-5,12-二氧代-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(61)(480.0mg,1.0mmol)溶于無水dcm(110ml)中，并加入粉狀的分子篩(
ms(esi):705[m+η]+.
1hnmr(500mhz,ch3cn-d3)δppm1.22(d,j＝6.47hz,3h)1.77(dd,j＝13.18,4.64hz,1h)2.00(td,j＝13.15,3.97hz,1h)2.10(d,j＝10.13hz,1h)2.33-2.35(m,1h)2.87-3.00(m,1h)3.01-3.13(m,1h)3.22(br.s.,1h)3.61(br.s.,1h)4.09-4.16(m,1h)4.22(q,j＝6.47hz,1h)4.29(s,1h)5.10(br.s.,1h)5.40(d,j＝3.54hz,1h)7.32(d,j＝7.81hz,1h)7.89(t,j＝7.63hz,1h)8.11(d,j＝7.08hz,1h)8.89(d,j＝8.30hz,1h)13.08(br.s.,2h)
類似地，通過使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
n-(2-{[(8s,10s)-8-乙酰基-6,8,11-三羥基-5,12-二氧代-10-({2,3,6-三脫氧-3-[(三氟乙?；?氨基]-l-來蘇(lyxo)-己吡喃糖基(hexopyranosyl)}氧基)-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]氨基}乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(化合物64)
ms(esi):748[m+η]+.
(1s,3s)-3-乙酰基-3,5,12-三羥基-10-[(2-羥基乙基)氨基]-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基2,3,6-三脫氧-3-[(三氟乙?；?氨基]-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷(化合物65)
ms(esi):653[m+η]+.
脫保護(hù)
標(biāo)題化合物(48)
在氬氣下，在0℃下，冷卻中間體n-[(8s,10s)-8-乙?；?6,8,11-三羥基-5,12-二氧代-10-({2,3,6-三脫氧-3-[(三氟乙?；?氨基]-α-l-來蘇(lyxo)-己吡喃糖基(hexopyranosyl)}氧基)-5,7,8,9,10,12-六氫并四苯-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(63)(340.2mg,0.432mmol)，并用0.1nnaoh水溶液(12ml)處理。在0℃下，黑暗中攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)，直到檢測不到起始原料(hplc分析)。然后，將該反應(yīng)混合物用dcm(50ml)稀釋，用飽和的nahco3水溶液(3×30ml)洗滌，然后用水(1x30ml)洗滌，最后用飽和的nacl溶液(1x30ml)洗滌。經(jīng)無水na2so4干燥有機(jī)相，在真空下除去溶劑，得到期望的產(chǎn)物(180.0mg，紅色固體)。
ms(esi):513[m+η]+.
1hnmr(500mhz,dmso-d6)δpm1.14(d,j＝6.52hz,2h)1.47(dd,j＝12.61,4.33hz,1h)1.60(d,j＝3.30hz,1h)2.06-2.21(m,2h)2.24-2.27(m,3h)2.86(d,j＝12.58hz,1h)2.88-3.01(m,2h)3.28(br.s.,1h)4.09(d,j＝6.29hz,1h)4.45(br.s.,1h)4.94(t,j＝4.22hz,1h)5.19(d,j＝3.53hz,1h)5.44(s,1h)7.24(d,j＝8.28hz,1h)7.50(d,j＝7.13hz,1h)7.51-7.52(m,0h)7.55-7.59(m,1h)8.06(br.s.,2h)
類似地，通過使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
(1s,3s)-3-乙?；?10-[(2-氨基乙基)氨基]-3,5,12-三羥基-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基3-氨基-2,3,6-三脫氧-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷(化合物66)
ms(esi):556[m+η]+.
(1s,3s)-3-乙?；?3,5,12-三羥基-10-[(2-羥基乙基)氨基]-6,11-二氧代-1,2,3,4,6,11-六氫并四苯-1-基3-氨基-2,3,6-三脫氧-l-來蘇(lyxo)-吡喃己糖苷(化合物67)
ms(esi):557[m+η]+.
實(shí)施例8
中間體n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰基]-l-纈氨酰-n5-氨基甲?；?n-{4-[({甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲?；鶀氧基)甲基]苯基}-l-鳥氨酰胺鹽酸鹽(化合物39)的制備
步驟a
在氮?dú)夥障?，將n-[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-l-纈氨酰-n5-氨基甲?；?n-[4-(羥基甲基)苯基]-l-鳥氨酰胺(1.3g,2.16mmol)(如ep0624377a2中報(bào)道的制備)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1.32g,4.34mmol)溶于6ml的無水dmf中，加入dipea(0.75ml,4.35mmol)，并在室溫下攪拌得到的溶液一小時(shí)。加入乙醚(120ml)，過濾出得到的沉淀物，用乙醚洗滌，并在真空下干燥，得到n-[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-l-纈氨酰-n5-氨基甲?；?n-[4-({[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}甲基)苯基]-l-鳥氨酰胺(68)(1.47g,產(chǎn)率89％)。
ms(esi):767[m+η]+.
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ0.86(d,j＝6.7hz,3h),0.88(d,j＝6.7hz,3h),1.30-1.52(m,2h),1.60(m,1h),1.69(m,1h),1.99(m,1h),2.90-3.10(m,2h),3.93(dd,j＝8.9,7.0hz,1h),4.14-4.34(m,3h),4.42(m,1h),5.24(s,2h),5.39(s,2h),5.97(t,j＝5.5hz,1h),7.32(m,2h),7.42(m,5h),7.55(m,2h),7.65(d,j＝8.4hz,2h),7.74(t,j＝7.9hz,2h),7.88(d,j＝7.6hz,2h),8.12(d,j＝7.4hz,1h),8.31(m,2h),10.12(s,1h)
步驟b
n-[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-l-纈氨酰-n5-氨基甲酰基-n-[4-({[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}甲基)苯基]-l-鳥氨酰胺(310mg,0.404mmol)和2-(二苯基-4-基)丙烷-2-基甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基甲酸酯(68)(132mg,0.404mmol)溶于無水dmf(6ml)中，并在室溫下，在氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，并通過柱色譜(dcm/etoh＝9/1)純化得到的粗產(chǎn)物，得到n-[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-l-纈氨酰-n-{4-[10-(二苯基-4-基)-4,7,10-三甲基-3,8-二氧代-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-1-基]苯基}-n5-氨基甲酰基-l-鳥氨酰胺(69)(200mg,產(chǎn)率52％)。
ms(esi):954[m+η]+.
1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ0.86(m,6h),1.21-1.64(m,4h),1.69(s.,6h),2.00(m,1h),2.62–3.08(m,10h),3.44(m,2h),3.93(t,j＝7.6hz,1h),4.22(m,1h),4.30(m,1h),4.42(m,1h),4.94-5.03(m,2h),5.39(s,2h),5.96(m,1h),7.25-7.46(m,11h),7.45-7.66(m,6h),7.74(m,2h),7.89(m,2h),8.11(br.s.,1h),10.06(br.s.,1h)
步驟c
向n-[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-l-纈氨酰-n-{4-[10-(二苯基-4-基)-4,7,10-三甲基-3,8-二氧代-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-1-基]苯基}-n5-氨基甲?；?l-鳥氨酰胺(69)(200mg,0.21mmol)在無水dmf(6ml)中的溶液中加入哌啶(0.105ml,1mmol)。在室溫下，攪拌得到的溶液2小時(shí)，濃縮至干，得到粗l-纈氨酰-n-{4-[10-(二苯基-4-基)-4,7,10-三甲基-3,8-二氧代-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-1-基]苯基}-n5-氨基甲?；?l-鳥氨酰胺，使用其而無需進(jìn)一步純化。將粗中間體溶于無水dcm(6ml)中，并加入1-{6-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-1h-吡咯-2,5-二酮(130mg,0.42mmol)和三乙胺(0.088ml,0.63mmol)。在室溫下，攪拌得到的溶液過夜，蒸發(fā)溶劑，并通過柱色譜(dcm/etoh＝10/1)純化殘余物，得到n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己?；鵠-l-纈氨酰-n-{4-[10-(二苯基-4-基)-4,7,10-三甲基-3,8-二氧代-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-1-基]苯基}-n5-氨基甲酰基-l-鳥氨酰胺(70)(150mg,產(chǎn)率77％)。
ms(esi):925[m+η]+.
1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ0.81(d,j＝6.7hz,3h),0.84(d,j＝6.7hz,3h),1.18(m,2h),1.36(m,1h),1.40-1.528m,6h),1.60(m,1h),1.69(s,6h),1.97(m,1h),2.08-2.23(m,2h),2.63-2.96(m,8h),2.90(m,1h),3.01(m,1h),3.23-3.34(m,2h),3.36(m,2h),3.45(m,2h),4.19(t,j＝7.4hz,1h),4.38(m,1h),4.95-5.05(m,2h),5.40(s,2h),5.97(d,j＝5.6hz,1h),6.99(s,2h),7.25-7.41(m,5h),7.45(m,2h),7.53-7.66(m,6h),7.80(d,j＝9hz,1h),8.08(d,j＝7.0hz,1h),9.99(m,1h),10.76(br.s.,1h)。
步驟e
標(biāo)題中間體(39)
將n-[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]-l-纈氨酰-n-{4-[10-(二苯基-4-基)-4,7,10-三甲基-3,8-二氧代-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-1-基]苯基}-n5-氨基甲?；?l-鳥氨酰胺(50mg,0.054mmol)溶于5ml的無水thf中，并加入鹽酸(在二噁烷中4m，0.3ml)。攪拌溶液3分鐘。將得到的沉淀物過濾出，用thf洗滌，并在真空中干燥，得到標(biāo)題化合物(xx)'(36mg，產(chǎn)率92％)。
ms(esi):687[m+η]+.
1hnmr(500mhz,甲醇-d4)δ0.97(d,j＝6.8,hz,3h),0.98(d,j＝6.8,hz,3h),1.31(m,2h),1.54-1.67(m,6h),1.76(m,1h),1.89(m,1h),2.08(m,1h),2.28(t,j＝7.5hz,2h),2.64-2.75(m,3h),2.98(s,3h),3.11(m,1h),3.20(m,3h),3.48(t,j＝7.1hz,2h),3.61(t,j＝5.7hz,2h),4.14(d,j＝7.5,hz1h),4.50(dd,j＝9.1,4.9hz,1h),5.11(s,2h),6.79(s,2h),7.35(d,j＝8.3hz,2h),7.60(d,j＝8.3hz,2h)
通過類似的方法并使用合適的起始原料，制備下述化合物∶
ms(esi):687[m+η]+.
實(shí)施例9
n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己?；鵠-l-纈氨酰-n5-氨基甲?；?n-(4-{[(哌嗪-1-基羰基)氧基]甲基}苯基)-l-鳥氨酰胺(化合物72)的制備
步驟1
n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己?；鵠-l-纈氨酰-n-{4-[({[4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基]羰基}氧基)甲基]苯基}-n5-氨基甲?；?l-鳥氨酰胺
在室溫下，在氬氣氛下，使n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己?；鵠-l-纈氨酰-n5-氨基甲酰基-n-[4-({[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}甲基)苯基]-l-鳥氨酰胺(如ep0624377a2和ep2357006a2中報(bào)道的制備，30mg，0.041mmol)與哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.3mg，0.0287mmol)在無水二甲亞砜中反應(yīng)。攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)，直到起始原料消失(hplc-ms分析)。然后，將乙醚(80ml)加入到反應(yīng)混合物中，并過濾收集如此得到的沉淀物，得到呈黃色固體的n-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰基]-l-纈氨酰-n-{4-[({[4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基]羰基}氧基)甲基]苯基}-n5-氨基甲?；?l-鳥氨酰胺，22.0mg)，分離，并用于下一步中而無需進(jìn)一步純化。
ms(esi):785[m+η]+.
步驟2
標(biāo)題化合物(72)
將步驟1的中間體(22.0mg)用在無水二氯甲烷(0.12ml)中的三氟乙酸(327mg，2.87mmol)處理。在室溫下，攪拌該反應(yīng)混合物15分鐘，直到起始原料消失(hplc-ms分析)。然后，用乙醚(20ml)處理反應(yīng)混合物，并用乙醚(2×10ml)洗滌如此得到的殘余物：從而分離化合物(72)，并按照實(shí)施例3中報(bào)道的方法用于制備化合物(6)，而無需進(jìn)一步純化。
ms(esi):685[m+h]+。
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