從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法，該方法是將杜仲原料采用有機(jī)溶劑提取、濃縮，濃縮物依次經(jīng)過(guò)熱水溶解、冷沉、離心分離得到離心液，離心液再通過(guò)富集、洗脫、濃縮，得到杜仲提取物，杜仲提取物經(jīng)過(guò)分離、純化，分別得到松脂醇二葡萄糖苷、綠原酸和桃葉珊瑚苷；提取渣經(jīng)過(guò)水解和有機(jī)溶劑提取得到杜仲膠；該方法從杜仲中同時(shí)較高收率提取分離出高純度綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠，且該方法操作簡(jiǎn)單，成本低，實(shí)現(xiàn)了自然資源的綜合利用，滿足工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從杜仲(Eucommia ulmodies Oliv.)中同時(shí)分離提純出綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法；屬于天然藥物提取領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]杜仲為杜仲科杜仲屬植物，我國(guó)特有的多年生落葉喬木，分布于陜西、甘肅、河南、湖北、四川、云南、貴州、湖南及浙江等省區(qū)，現(xiàn)各地廣泛栽種。在自然狀態(tài)下，生長(zhǎng)于海拔300-500米的低山，谷地或低坡的疏林里，對(duì)土壤的選擇并不嚴(yán)格，在瘠薄的紅土，或巖石峭壁均能生長(zhǎng)。樹(shù)皮藥用，作為強(qiáng)壯劑及降血壓，并能醫(yī)腰膝痛，風(fēng)濕及習(xí)慣性流產(chǎn)等。杜仲中化學(xué)成分十分復(fù)雜，皮和葉中的綠原酸具有抗菌、消炎、解毒、利膽、降壓和升高白細(xì)胞及顯著增加胃腸蠕動(dòng)和促進(jìn)胃液分泌等，對(duì)大腸桿菌、金色葡萄球菌、肺炎球菌和病毒有較強(qiáng)的抑制作用；對(duì)急性咽喉炎癥和皮膚病有明顯療效，臨床上用于治療急性細(xì)菌性感染疾病及放化療時(shí)所致的白細(xì)胞減少癥，對(duì)月經(jīng)過(guò)多，子宮功能性出血有良好的止血效果綠原酸的主要藥理作用有:桃葉珊瑚苷是一種重要的生物活性物質(zhì)，具有清濕熱、利小便、鎮(zhèn)痛、降壓、保肝護(hù)肝、抗腫瘤等作用。它能促進(jìn)干細(xì)胞再生，明顯抑制乙型肝炎病毒DNA的復(fù)制，其苷元及有效多聚體是一種抗菌素。松脂醇二葡萄糖苷是杜仲降壓的主要成分，作用于血管平滑肌，使外周血管擴(kuò)張。杜仲膠是硬橡膠，供工業(yè)原料及絕緣材料，抗酸、堿及化學(xué)試劑的腐蝕的性能高，可制造耐酸、堿容量及管道的襯里及牙科材料等。
[0003]杜仲的成分復(fù)雜，活性成分分離困難，目前僅有少數(shù)企業(yè)對(duì)杜仲的某個(gè)單一的成分進(jìn)行分離，且工藝復(fù)雜，操作繁瑣，收率低，成本高，其他成分作為廢棄物處理，并沒(méi)有得到很好的利用，造成資源的嚴(yán)重浪費(fèi)，雖有專利CN200810031122.1對(duì)杜仲環(huán)烯醚萜類的分離報(bào)道，但多類成分(咖啡奎寧酸類、環(huán)烯醚萜類、木質(zhì)素類、異戊二烯高分子)綜合分離的大規(guī)模生產(chǎn)的未見(jiàn)報(bào)道，對(duì)于從杜仲各種不同原料中同時(shí)對(duì)多類成分提取、分離、純化的生產(chǎn)方法，也未見(jiàn)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)對(duì)杜仲中的藥物活性成分的分離存在不能同時(shí)獲得多類藥物成分，造成有效成分浪費(fèi)，且工藝復(fù)雜，操作繁瑣，得到的藥物有效成分收率低，成本高等一系列的缺陷，本發(fā)明的目是在于提供一種從杜仲中同時(shí)較高收率提取分離高純度綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法，該方法操作簡(jiǎn)單，成本低，實(shí)現(xiàn)了自然資源的綜合利用，滿足工業(yè)化生產(chǎn)。
[0005]本發(fā)明提供了一種從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法，該方法包括以下步驟:
[0006]步驟一:提取
[0007]將杜仲原料干燥、粉碎后，采用有機(jī)溶劑提取，過(guò)濾，所得提取液濃縮至膏狀物，所得膏狀物用75?85°C熱水溶解，冷卻到O?30°C后，靜置0.5?24h，離心分離；
[0008]步驟二:富集
[0009]步驟一離心分離得到的離心液采用大孔吸附樹(shù)脂、氧化鋁或葡聚糖凝膠進(jìn)行吸附富集，吸附完成后，依次采用質(zhì)量百分比濃度為35?45%和65?75%的乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮、干燥，得到粉狀混合物；
[0010]步驟三:分離
[0011]將步驟二所得粉狀混合物與硅膠、氧化鋁、十八碳烷基鍵合硅膠、MC1-GELCHP20/P120或葡聚糖凝膠混合裝柱，以氯仿-甲醇-水系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，采用TLC薄層色譜跟蹤檢測(cè)，分別分離出含綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷餾分；將各餾分分別濃縮、干燥和結(jié)晶，得到綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷晶體；
[0012]步驟四:提取杜仲膠
[0013]步驟一中過(guò)濾所得提取渣通過(guò)水解后，過(guò)濾，濾渣采用低極性有機(jī)溶劑回流提取，提取液經(jīng)冷卻結(jié)晶，得到杜仲膠。
[0014]本發(fā)明的從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法還包括以下優(yōu)選方案:
[0015]優(yōu)選的方案中杜仲原料為杜仲皮、葉或籽柏中的一種或幾種。其中，杜仲皮可以為新鮮桿或枝皮，杜仲葉可以為新鮮葉。
[0016]優(yōu)選的方案中步驟一中所述的提取為冷浸靜態(tài)提取、冷浸動(dòng)態(tài)提取、熱回流提取、熱浸靜態(tài)提取、熱浸動(dòng)態(tài)提取或逆流連續(xù)提取方式中的任意一種。最優(yōu)選為熱回流提取。
[0017]優(yōu)選的方案中步驟一中的有機(jī)溶劑為甲酸、乙酸、甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、乙二醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、環(huán)己烷、石油醚中的一種或幾種；最優(yōu)選的有機(jī)溶劑為甲醇或乙醇。
[0018]優(yōu)選的方案中采用質(zhì)量百分比濃度為35?45%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫獲得的洗脫液先進(jìn)行濃縮得到稠狀物，所得稠狀物用無(wú)水乙醇溶解，同時(shí)加入甲酸調(diào)節(jié)溶液酸度，再通過(guò)酸性氧化鋁吸附后，以質(zhì)量百分比濃度為55?65%的乙醇溶液洗脫，洗脫液進(jìn)行濃縮、干燥，得到粉狀混合物。
[0019]優(yōu)選的方案中采用質(zhì)量百分比濃度為65?75%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫獲得的洗脫液直接進(jìn)行濃縮、干燥，得到粉狀混合物。
[0020]優(yōu)選的方案中稠狀物用無(wú)水乙醇溶解使無(wú)水乙醇的質(zhì)量百分比濃度達(dá)到55?65%。
[0021]優(yōu)選的方案中以氯仿-甲醇-水系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫的過(guò)程是以氯仿:甲醇:水按體積比從100:0:0到50:50:10進(jìn)行梯度洗脫O
[0022]優(yōu)選的方案中所述的低極性有機(jī)溶劑為正己烷、環(huán)己烷、石油醚、氯仿中一種或幾種。最優(yōu)選為石油醚。
[0023]優(yōu)選的方案中水解為無(wú)機(jī)酸水解、苛性堿水解或酶水解。最優(yōu)選為苛性堿水解。
[0024]優(yōu)選的方案中苛性堿水解是采用濃度為1.5?2.5mol/L的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液煮沸并保溫8?12h。
[0025]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明以杜仲天然植物為原料通過(guò)簡(jiǎn)單工藝同時(shí)高產(chǎn)率分離出高純度的綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠，其中，綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷純度(HPLC檢測(cè))分別達(dá)到90%以上，杜仲膠的純度達(dá)到98%以上，綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷提取率都大于90%。本發(fā)明的技術(shù)方案真正實(shí)現(xiàn)了天然藥物資源杜仲的綜合利用，且該方法操作簡(jiǎn)單，成本低，滿足工業(yè)大規(guī)模應(yīng)用。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0026]【圖1】為實(shí)施例1制得的綠原酸的HPLC圖譜；
[0027]【圖2】為實(shí)施例1制得的松脂醇二葡萄糖苷的HPLC圖譜；
[0028]【圖3】為實(shí)施例1制得的桃葉珊瑚苷的HPLC圖譜；
[0029]【圖4】為本發(fā)明的工藝流程圖。

【具體實(shí)施方式】
[0030]以下實(shí)施例旨在進(jìn)一步說(shuō)明本
【發(fā)明內(nèi)容】
，而不是限制本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍。
[0031]實(shí)施例1
[0032]提取:稱取新鮮的杜仲皮50kg，用切藥機(jī)切成5?1cm段，再通過(guò)錘片式粉碎機(jī)粉碎成粗粉，投入多功能提取罐中，加80%甲醇攪拌回流提取2次，第一次加200L，提取2h，第二次加150L，提取lh，提取液通過(guò)罐底篩網(wǎng)放出，通過(guò)管道過(guò)濾器過(guò)濾，收集兩次提取液，合并。提取渣回收甲醇后，備用。將提取液減壓濃縮至25L，轉(zhuǎn)入醇沉罐中，加25L水，加熱至80°C，攪拌30min，冷卻至8?10°C，靜置12h，再通過(guò)三足離心機(jī)布袋離心，得到離心液。
[0033]富集:將離心液通過(guò)DlOl大孔樹(shù)脂吸附完全，水洗至無(wú)顏色，以40%乙醇水洗脫，收集40 %乙醇水洗脫液，再加70 %乙醇水洗脫，收集70%乙醇水洗脫液，40 %乙醇水洗脫液濃縮至稠膏，加95%乙醇調(diào)節(jié)醇質(zhì)量百分比濃度至60%，加甲酸50mL，通過(guò)酸性氧化鋁除雜，再以60%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到干粉324g。70%乙醇水洗脫部位直接濃縮，干燥，得到干粉775g。分離:將干粉300g加入450g200?300目硅膠拌樣，加入已裝2kg500?800目硅膠的色譜柱中，加入氯仿-甲醇-水(100:0:0?50:50:10)系統(tǒng)梯度洗脫，TLC跟蹤綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分，合并單個(gè)相同成分餾分。
[0034]純化:分別濃縮綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分。綠原酸以水重結(jié)晶I次，過(guò)濾，干燥，得42g(純度93% ;色譜圖如圖1所示)；桃葉珊瑚苷以70%甲醇重結(jié)晶I次，過(guò)濾，干燥，得26g (純度96 %，色譜分析如圖3所示)；松脂醇二葡萄糖苷以70 %甲醇重結(jié)晶I次，過(guò)濾，干燥，得87g(純度90% ;色譜分析如圖2所示)；
[0035]提取杜仲膠:向提取罐中加入200L2mol/L氫氧化鈉水溶液，加熱煮沸，保溫1h,提取渣和提取液一起通過(guò)板框過(guò)濾器，濾餅加清水洗滌至基本無(wú)色，卸料，曬干，得渣
11.7kg，將水解干渣用濾袋裝好，投入提取罐中，加石油醚加熱回流提取2次，第一次90L提取3h，第二次75L提取2h，合并提取液，放入冷沉罐中，冷卻結(jié)晶12h，過(guò)濾，得濾餅，真空干燥，得白色杜仲膠1.51kg ;杜仲膠純度達(dá)到98%。
[0036]實(shí)施例2
[0037]提取:稱取市售杜仲皮藥材200kg，用切藥機(jī)切成5?1cm段，再通過(guò)錘片式粉碎機(jī)粉碎成粗粉，投入多功能提取罐中，加70%乙醇攪拌回流提取2次，第一次加1600L，提取2h，第二次加1200L，提取lh，提取液通過(guò)罐底篩網(wǎng)放出，通過(guò)管道過(guò)濾器過(guò)濾，收集兩次提取液，合并。提取渣回收乙醇，備用。將提取液減壓濃縮至200L，轉(zhuǎn)入醇沉罐中，加200L水，加熱至85°C，攪拌30min，冷卻至10?15°C，靜置24h，再通過(guò)三足離心機(jī)布袋離心，得到離心液。
[0038]富集:將離心液通過(guò)氧化鋁吸附完全，水洗至無(wú)顏色，以45%乙醇水洗脫，收集45 %乙醇水洗脫液，再加75 %乙醇水洗脫，收集75 %乙醇水洗脫液，45 %乙醇水洗脫液濃縮至稠膏，加95%乙醇調(diào)節(jié)醇質(zhì)量百分比濃度至55%，加甲酸500mL，通過(guò)酸性氧化鋁除雜，再以60 %乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到干粉2.8kg。70 %乙醇水部位直接濃縮，干燥，得到干粉6.5kg。
[0039]分離:將干粉3.0kg加入4.5kg200?300目硅膠拌樣，加入已裝20kg500?800目硅膠的色譜柱中，加入氯仿-甲醇-水(100:0:0?50:50:10)系統(tǒng)梯度洗脫，TLC跟蹤綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分，合并單個(gè)相同成分餾分。
[0040]純化:分別濃縮綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分。綠原酸以水重結(jié)晶I次，過(guò)濾，干燥，得79g (純度95% );桃葉珊瑚苷以70%甲醇重結(jié)晶I次，過(guò)濾，干燥，得43g(純度94% );松脂醇二葡萄糖苷以70%甲醇重結(jié)晶I次，過(guò)濾，干燥，得105g(純度93% )。
[0041]提取杜仲膠:向提取罐中加入2000L2mol/L氫氧化鈉水溶液，加熱煮沸，保溫1h,提取渣和提取液一起通過(guò)板框過(guò)濾器，濾餅加清水洗滌至基本無(wú)色，卸料，曬干，得渣102.6kg，將水解干渣用濾袋裝好，投入提取罐中，加石油醚加熱回流提取2次，第一次800L提取3h，第二次600L提取2h，合并提取液，放入冷沉罐中，冷卻結(jié)晶24h，過(guò)濾，得濾餅，真空干燥，得白色杜仲膠13.8kg ;杜仲膠純度達(dá)到98%。
[0042]實(shí)施例3
[0043]提取:稱取杜仲鮮干皮20kg，切片，于炒鍋中快速翻炒30min，再通過(guò)錘片式粉碎機(jī)粉碎成粗粉，投入多功能提取罐中，加丙酮攪拌回流提取2次，第一次加80L，提取2h，第二次加60L，提取lh，提取液通過(guò)罐底篩網(wǎng)放出，通過(guò)管道過(guò)濾器過(guò)濾，收集兩次提取液，合并。提取渣回收丙酮，備用。將提取液減壓濃縮至10L，轉(zhuǎn)入醇沉罐中，加1L水，加熱至80°C，攪拌30min，冷卻至8?10°C，靜置12h，再通過(guò)三足離心機(jī)布袋離心，得到離心液。
[0044]富集:將離心液通過(guò)DlOl大孔樹(shù)脂吸附完全，水洗至無(wú)顏色，以35%乙醇水洗脫，收集35 %乙醇水洗脫液，再加70 %乙醇水洗脫，收集70%乙醇水洗脫液，35 %乙醇水洗脫液濃縮至稠膏，加95%乙醇調(diào)節(jié)醇質(zhì)量百分比濃度至60%，加甲酸20mL，通過(guò)酸性氧化鋁除雜，再以60%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得到干粉141g。70%乙醇水部位直接濃縮，干燥，得到干粉290g。
[0045]分離:將干粉140g加入210g200?300目硅膠拌樣，加入已裝1.0kg500?800目硅膠的色譜柱中，加入氯仿-甲醇-水(100:0:0?50:50:10)系統(tǒng)梯度洗脫，TLC跟蹤綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分，合并單個(gè)相同成分餾分。
[0046]純化:分別濃縮綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷洗脫餾分。綠原酸以水重結(jié)晶I次，過(guò)濾，干燥，得33g(純度94% );桃葉珊瑚苷以70%甲醇重結(jié)晶I次，過(guò)濾，干燥，得6g(純度92% );松脂醇二葡萄糖苷以70%甲醇重結(jié)晶I次，過(guò)濾，干燥，得68g(純度 91% )。
[0047]提取杜仲膠:向提取罐中加入80L1.5mol/L氫氧化鉀水溶液，加熱煮沸，保溫1h,提取渣和提取液一起通過(guò)板框過(guò)濾器，濾餅加清水洗滌至基本無(wú)色，卸料，曬干，得渣5.1kg，將水解干渣用濾袋裝好，投入提取罐中，加石油醚加熱回流提取2次，第一次45L提取3h，第二次35L提取2h，合并提取液，放入冷沉罐中，冷卻結(jié)晶12h，過(guò)濾，得濾餅，真空干燥，得白色杜仲膠569g ;杜仲膠純度達(dá)到98%。
【權(quán)利要求】
1.從杜仲原料中提取分離綠原酸、松脂醇二葡萄糖苷、桃葉珊瑚苷和杜仲膠的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一:提取 將杜仲原料干燥、粉碎后，采用有機(jī)溶劑提取，過(guò)濾，所得提取液濃縮至膏狀物，所得膏狀物用75?85°C熱水溶解，冷卻到0?30°C后，靜置0.5?24h，離心分離； 步驟二:富集 步驟一離心分離得到的離心液采用大孔吸附樹(shù)脂、氧化鋁或葡聚糖凝膠進(jìn)行吸附富集，吸附完成后，依次采用質(zhì)量百分比濃度為35?45%和65?75%的乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮、干燥，得到粉狀混合物； 步驟三:分離 將步驟二所得粉狀混合物與硅膠、氧化鋁、十八碳烷基鍵合硅膠、MC1-GEL CHP20/P120或葡聚糖凝膠混合裝柱，以氯仿-甲醇-水系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，采用TLC薄層色譜跟蹤檢測(cè)，分別分離出含綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷餾分；將各餾分分別濃縮、干燥和結(jié)晶，得到綠原酸、桃葉珊瑚苷和松脂醇二葡萄糖苷晶體； 步驟四:提取杜仲膠 步驟一中過(guò)濾所得提取渣通過(guò)水解后，過(guò)濾，濾渣采用低極性有機(jī)溶劑回流提取，提取液經(jīng)冷卻結(jié)晶，得到杜仲膠。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的杜仲原料為杜仲皮、葉或籽柏中的一種或幾種。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟一中所述的提取為冷浸靜態(tài)提取、冷浸動(dòng)態(tài)提取、熱回流提取、熱浸靜態(tài)提取、熱浸動(dòng)態(tài)提取或逆流連續(xù)提取方式中的任意一種。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用質(zhì)量百分比濃度為35?45%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫獲得的洗脫液先進(jìn)行濃縮得到稠狀物，所得稠狀物用無(wú)水乙醇溶解，同時(shí)加入甲酸調(diào)節(jié)溶液酸度，再通過(guò)酸性氧化鋁吸附后，以質(zhì)量百分比濃度為55?65%的乙醇溶液洗脫，洗脫液進(jìn)行濃縮、干燥，得到粉狀混合物；采用質(zhì)量百分比濃度為65?75%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫獲得的洗脫液直接進(jìn)行濃縮、干燥，得到粉狀混合物。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所得稠狀物用無(wú)水乙醇溶解使無(wú)水乙醇的質(zhì)量百分比濃度達(dá)到55?65%。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，以氯仿-甲醇-水系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫的過(guò)程是以氯仿:甲醇:水按體積比從100:0:0到50:50:10進(jìn)行梯度洗脫。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的低極性有機(jī)溶劑為正己烷、環(huán)己烷、石油醚、氯仿中一種或幾種。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的水解為無(wú)機(jī)酸水解、苛性堿水解或酶水解。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述的苛性堿水解是采用濃度為1.5?2.5mol/L的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液煮沸并保溫8?12h。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟一中的有機(jī)溶劑為甲酸、乙酸、甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、乙二醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、環(huán)己烷、石油醚中的一種或幾種。
【文檔編號(hào)】C08J3/00GK104496816SQ201410697587
【公開(kāi)日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月26日
【發(fā)明者】歐陽(yáng)勇, 曾建國(guó) 申請(qǐng)人:湖南美可達(dá)生物資源有限公司