硫酸軟骨素的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了硫酸軟骨素的制備方法，包括：（1）水煮；（2）蒸煮；（3）酶解；（4）樹脂吸附；（5）酒精沉淀；（6）脫色；（7）除雜；（8）酒精沉淀；（9）脫水烘干。本發(fā)明應(yīng)用在酸性亞硝酸鈉條件下，硫酸軟骨素中雜質(zhì)反應(yīng)成溶解性好的物質(zhì)通過醇沉除去，產(chǎn)品溶液澄清度及色澤滿足注射劑要求，條件溫和可控，生產(chǎn)過操作簡單，適合規(guī)?；a(chǎn)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，硫酸軟骨素回收率達到80%以上。
【專利說明】硫酸軟骨素的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種硫酸軟骨素的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]硫酸軟骨素,英文名chondroitin sulfate,是以動物(豬、牛、馬、羊、雞、藍魚等)的軟骨為原料的一種高分子酸性粘多糖，其分子結(jié)構(gòu)為β -D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通過βI — 3糖苷鍵形成的重復(fù)二糖單位所組成的多糖鏈。它是一種白色或微黃色粉末，吸水性強，易溶于水而成粘稠液體，不溶于酒精、丙酮、乙醚和氯仿等有機溶劑。其鹽類對熱較穩(wěn)定。大量研究表明，硫酸軟骨素具有降血脂、抗動脈粥樣硬化和抗病毒性肝炎等活性，臨床中已用于防治關(guān)節(jié)炎、腎炎、神經(jīng)痛、偏頭痛等。作為一類重要的生物高分子，硫酸軟骨素具有廣泛的生物活性，作為安全有效的保健食品和藥品在世界各國得到了廣泛應(yīng)用。由于不同生物或者相同生物的不同組織所含硫酸軟骨素的種類和量均不同，使其結(jié)構(gòu)與活性復(fù)雜多樣。作為成品的硫酸軟骨素應(yīng)盡可能的去除雜質(zhì)，特別是影響產(chǎn)品溶液澄清度的雜質(zhì)。
[0003]目前，硫酸軟骨素通常提取純化方法是采用酶解法、樹脂吸附法以及醇沉法，主要包括以下步驟:
1)堿提、酶解:原料(軟骨)加水浸沒，用氫氧化鈉調(diào)ΡΗ8.5，升溫至55-60°C，保溫4_6小時，然后加入2%的堿性蛋白酶，保持PH8.5，保溫55-60°C攪拌6_8小時，升溫至沸騰15分鐘左右，過濾，得濾液；
2)樹脂吸附:濾液經(jīng)201型陰離子樹脂吸附，洗脫，收集洗脫液；
3)酒精沉淀:洗脫液中按體積的2.5倍加入95%酒精，靜止8小時，取沉淀；
4)脫色:按沉淀:水的重量比為1:20的比例混合水，同時加入3%重量的氯化鈉，調(diào)PH9-12，加入2-4%重量雙氧水，6-12小時，過濾，取濾液；
5)酒精沉淀、干燥:濾液調(diào)PH6，加入體積的1-2.5倍量酒精第二次沉淀，沉淀再用95%酒精脫水兩次，干燥粉碎得到硫酸軟骨素成品。
[0004]硫酸軟骨素生產(chǎn)過程中主要應(yīng)用酶解、樹脂吸附、醇沉、氧化脫色方法將硫酸軟骨素純化，在此過程中仍然有部分原輔料帶入的有機雜質(zhì)不能夠完全去除，影響產(chǎn)品溶液澄清度以及色澤。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于:提供一種硫酸軟骨素的制備方法，有效提高產(chǎn)品溶液澄清度以及色澤，操作過程簡單，條件容易控制，適合連續(xù)規(guī)模化生產(chǎn)。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是該硫酸軟骨素的制備方法包括下列步驟:
(1)水煮:軟骨原料加水浸沒，升溫至80-100°C，煮12-24小時，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；
(2)蒸煮:將步驟(1)得到的水煮軟骨放入釜中，100°C蒸4小時以上，上層油脂收集；(3)酶解:將步驟(2)得到的軟化軟骨加水浸沒，按水體積的3%加氯化鈉，用堿調(diào)PH至8-9，升溫至55-60°C，再加入水重量0.4%(w/w)2079堿性蛋白酶，保持PH8-9，保溫55_60°C攪拌4-6小時，升溫至沸騰12-18分鐘，過濾；
(4)樹脂吸附:201陰離子樹脂吸附，洗脫，收集洗脫液；
(5)酒精沉淀:將步驟(4)得到的洗脫液調(diào)PH6-7，再加入酒精使溶液酒精質(zhì)量濃度達到60%，沉淀16小時以上；
(6)脫色:將步驟(5)得到的沉淀物用水溶解，升溫至40-60°C，調(diào)PH至8_9，加入水體積的1-3%雙氧水；
(7)除雜:將步驟(6)的脫色溶液降溫至0-30°C，用鹽酸調(diào)PH1-4，加入脫色溶液體積的
0.5-3%亞硝酸鈉，攪拌1-3小時；
(8)酒精沉淀:將步驟(7)得到的除雜溶液調(diào)PH6-7，加其體積5%的氯化鈉，過濾，再加入酒精使溶液酒精質(zhì)量濃度達到60%，沉淀16小時以上；
(9)脫水烘干:步驟(8)沉淀結(jié)束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品。
[0007]本發(fā)明的效果是:1、應(yīng)用酸性條件下亞硝酸鈉與硫酸軟骨素中雜質(zhì)反應(yīng)生成水溶性更好的物質(zhì)，而硫酸軟骨素基本結(jié)構(gòu)保持完整；2、硫酸軟骨素中雜質(zhì)容易去除，生產(chǎn)過操作簡單，適合規(guī)模化生產(chǎn)，效率高，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，產(chǎn)品完全符合注射劑澄清度要求。

【具體實施方式】
[0008]下面結(jié)合具體實施例進一步說明本發(fā)明的技術(shù)解決方案，這些實施例不能理解為是對技術(shù)方案的限制。
[0009]實施例1:依以下步驟生產(chǎn)精品硫酸軟骨素
(1)水煮:100公斤軟骨原料加水浸沒，升溫至80°C，煮24小時，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；
(2)蒸煮:將步驟(1)得到的水煮軟骨放入釜中，100°C蒸4小時以上，上層油脂收集；
(3)酶解:將步驟(2)得到的軟化軟骨加100升水浸沒，加3公斤氯化鈉，用堿調(diào)PH至8，升溫至55°C，再加入0.4公斤的2079堿性蛋白酶，保持PH8，保溫55°C攪拌6小時，升溫至沸騰12分鐘，過濾；
(4)樹脂吸附:80升201陰離子樹脂吸附，洗脫，收集洗脫液；
(5)酒精沉淀:將步驟(4)得到的洗脫液調(diào)PH6，再加入酒精使溶液酒精質(zhì)量濃度達到60%，沉淀16小時以上；
(6)脫色:將步驟(5)得到的沉淀物用20升水溶解，升溫至40°C，調(diào)PH至8，加入200毫升雙氧水；
(7)除雜:將步驟(6)的脫色溶液降溫至0°C，用鹽酸調(diào)PHlJPA100克？亞硝酸鈉，攪拌4小時；
(8)酒精沉淀:將步驟(7)得到的除雜溶液調(diào)PH6，加I公斤？的氯化鈉，過濾，再加入酒精使溶液酒精質(zhì)量濃度達到60%，沉淀16小時以上；
(9)脫水烘干:步驟(8)沉淀結(jié)束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品8.6公斤。
[0010]實施例2:依以下步驟生產(chǎn)精品硫酸軟骨素
(1)水煮:100公斤軟骨原料加水浸沒，升溫至90°C，煮18小時，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；
(2)蒸煮:將步驟(1)得到的水煮軟骨放入釜中，100°C蒸4小時以上，上層油脂收集；
(3)酶解:將步驟(2)得到的軟化軟骨加100升水浸沒，加3公斤氯化鈉，用堿調(diào)PH至
8.5，升溫至57.5°C，再加0.4公斤2079堿性蛋白酶，保持PH8.5，保溫57.5°C攪拌5小時，升溫至沸騰15分鐘，過濾；
(4)樹脂吸附:80升201陰離子樹脂吸附，洗脫，收集洗脫液；
(5)酒精沉淀:將步驟(4)得到的洗脫液調(diào)PH6.5，再加入酒精使溶液酒精質(zhì)量濃度達到60%，沉淀16小時以上；
(6)脫色:將步驟(5)得到的沉淀物用20升水溶解，升溫至50°C，調(diào)PH至8.5，加入400
毫升雙氧水；
(7)除雜:將步驟(6)的脫色溶液降溫至15°C，用鹽酸調(diào)PH2.5，加入250克亞硝酸鈉，攪拌2小時；
(8)酒精沉淀:將步驟 (7)得到的除雜溶液調(diào)PH6.5，加I公斤氯化鈉，過濾，再加入酒精使溶液酒精質(zhì)量濃度達到60%，沉淀16小時以上；
(9)脫水烘干:步驟(8)沉淀結(jié)束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品8.2公斤。
[0011]實施例3:依以下步驟生產(chǎn)精品硫酸軟骨素
(1)水煮:100公斤軟骨原料加水浸沒，升溫至100°C，煮12小時，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；
(2)蒸煮:將步驟(1)得到的水煮軟骨放入釜中，100°C蒸4小時以上，上層油脂收集；
(3)酶解:將步驟(2)得到的軟化軟骨加100升水浸沒，加3公斤氯化鈉，用堿調(diào)PH至9，升溫至60°C，再加入400克2079堿性蛋白酶，保持PH9，保溫60°C攪拌4小時，升溫至沸騰18分鐘，過濾；
(4)樹脂吸附:80升201陰離子樹脂吸附，洗脫，收集洗脫液；
(5)酒精沉淀:將步驟(4)得到的洗脫液調(diào)PH7，再加入酒精使溶液酒精質(zhì)量濃度達到60%，沉淀16小時以上；
(6)脫色:將步驟(5)得到的沉淀物用20升水溶解，升溫至60°C，調(diào)PH至9，加入600
毫升雙氧水；
(7)除雜:將步驟(6)的脫色溶液降溫至30°C，用鹽酸調(diào)PH4，加入600克亞硝酸鈉，攪拌I小時；
(8)酒精沉淀:將步驟(7)得到的除雜溶液調(diào)PH7，加I公斤氯化鈉，過濾，再加入酒精使溶液酒精質(zhì)量濃度達到60%，沉淀16小時以上；
(9)脫水烘干:步驟(8)沉淀結(jié)束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品8.5公斤。
【權(quán)利要求】
1.硫酸軟骨素的制備方法，其特征是該硫酸軟骨素的制備方法包括下列步驟: (1)水煮:軟骨原料加水浸沒，升溫至80-100°C，煮12-24小時，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨； (2)蒸煮:將步驟(1)得到的水煮軟骨放入釜中，100°C蒸4小時以上，上層油脂收集； (3)酶解:將步驟(2)得到的軟化軟骨加水浸沒，按水體積的3%加氯化鈉，用堿調(diào)PH至8-9，升溫至55-60°C，再加入水重量0.4%(w/w)2079堿性蛋白酶，保持PH8-9，保溫55_60°C攪拌4-6小時，升溫至沸騰12-18分鐘，過濾； (4)樹脂吸附:201陰離子樹脂吸附，洗脫，收集洗脫液； (5)酒精沉淀:將步驟(4)得到的洗脫液調(diào)PH6-7，再加入酒精使溶液酒精質(zhì)量濃度達到60%，沉淀16小時以上; (6)脫色:將步驟(5)得到的沉淀物 用水溶解，升溫至40-60°C，調(diào)PH至8_9，加入水體積的1-3%雙氧水； (7)除雜:將步驟(6)的脫色溶液降溫至0-30°C，用鹽酸調(diào)PH1-4，加脫色溶液體積.0.5-3%亞硝酸鈉，攪拌1-3小時； (8)酒精沉淀:將步驟(7)得到的除雜溶液調(diào)PH6-7，加其體積5%的氯化鈉，過濾，再加入酒精使溶液酒精質(zhì)量濃度達到60%，沉淀16小時以上； (9)脫水烘干:步驟(8)沉淀結(jié)束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品。
【文檔編號】C08B37/08GK104163877SQ201410423822
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年8月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月26日
【發(fā)明者】劉榜惠 申請人:淮安麥德森制藥有限公司