一種甘草活性物質(zhì)的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其步驟包括：原料的預(yù)處理、熱水浸提處理、甘草渣的超聲輔助浸提處理、醇沉處理、純化處理、酸沉處理、復(fù)溶處理、氨化處理、酸化處理、結(jié)晶、純化。本發(fā)明充分利用了甘草資源，在提取的過(guò)程中實(shí)現(xiàn)了不同有效組分的分離，避免單一提取時(shí)其它幾種活性物質(zhì)的損失。并且生產(chǎn)成本較低、操作簡(jiǎn)易、生產(chǎn)效率高、對(duì)環(huán)境無(wú)污染，能實(shí)現(xiàn)連續(xù)化生產(chǎn)，而且得的產(chǎn)品品質(zhì)佳，易于推廣和利用，為甘草的綜合利用提供了一條新途徑，提高了甘草的綜合利用價(jià)值。
【專利說(shuō)明】一種甘草活性物質(zhì)的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種中草藥綜合利用技術(shù)，具體說(shuō)，涉及一種甘草活性物質(zhì)的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]甘草(Glycyrrhizauralensis)別名甜草根、紅甘草、國(guó)老、甜草、甜根子等,是我國(guó)傳統(tǒng)常用中草藥之一，為豆科(Leguminosae)甘草屬(GlycyrrhizaLinn)多年生草本植物。甘草性平味甘，具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥的功效，具有極廣的臨床應(yīng)用價(jià)值。在我國(guó)，甘草是2000多種草藥中用量最大的一味草藥，素有“十方九草，無(wú)草不成方”之說(shuō)。同時(shí)，甘草還是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最好的一種天然甜味劑。甘草廣泛分布于北緯30-55°之間，北緯40°左右的干旱、半干旱區(qū)域被稱做“甘草分布帶”，主要產(chǎn)地在中亞、北美及東歐，尤以中亞及地中海沿岸為分布中心。甘草在我國(guó)集中分布于三北地區(qū)(東北、華北和西北各省區(qū))，以新疆、內(nèi)蒙古、寧夏和甘肅為中心產(chǎn)區(qū)。
[0003]藥用甘草質(zhì)量與其化學(xué)成分的組成、積累變化有直接的關(guān)系。先后從甘草屬植物中提取、分離、鑒定了 200多種化學(xué)成分，其中最重要并已證實(shí)具有生物活性的成分主要是甘草酸、三萜皂苷類、黃酮類、香豆素類、多糖、生物堿、氨基酸等。藥理研究表明，甘草酸及甘草次酸具有解毒、消炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤的作用。近年來(lái)，甘草還用于防治病毒性肝炎、癌癥以及艾滋病等。甘草甜素具有糖藥一體化的特點(diǎn)。除藥用價(jià)值外，甘草在食品、飲料、卷煙、化妝品等工業(yè)中有著重要的用途。
[0004]我國(guó)是甘草生產(chǎn)大國(guó)，出口三十多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，僅日本年需求量就達(dá)I萬(wàn)噸之多。但對(duì)甘草主要有效成分甘草酸的生物合成、作用機(jī)制、精制加工和綜合利用的深入研究還落后于日本等國(guó)。受技術(shù)條件和工藝限制，應(yīng)用傳統(tǒng)方法提取的甘草酸粗品的純度低，在國(guó)際市場(chǎng)上的價(jià)格 低，并且提取效率也低，對(duì)甘草資源的利用不充分，影響了我國(guó)甘草產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
[0005]目前，甘草制品多為甘草酸、甘草黃酮、多糖的初級(jí)提取物，而對(duì)于甘草的一步式加工卻很少，現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料中沒(méi)有關(guān)于一步式制備甘草酸單銨鹽、甘草黃酮和甘草多糖的方法。中國(guó)專利(CN102836202A)公開(kāi)了甘草地上部分綜合開(kāi)發(fā)利用的方法，利用有機(jī)試劑對(duì)甘草浸提液進(jìn)行萃取，在經(jīng)過(guò)濃縮得到粗黃酮。該專利文件并沒(méi)有涉及甘草酸單銨鹽的制備，此法有一定的溶劑殘留的可能，存在潛在的安全問(wèn)題。中國(guó)專利(CN101766680A)公布了甘草綜合提取方法，經(jīng)過(guò)3次用不同溶劑提取，得到粗甘草酸、甘草多糖和甘草黃酮，該步驟復(fù)雜耗時(shí)且產(chǎn)品純度低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)甘草的深加工和綜合利用，擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍，提高了其附加值。
[0007]技術(shù)方案如下:[0008]—種甘草活性物質(zhì)的制備方法，包括:
[0009]原料的預(yù)處理；將甘草予以篩選，去除各種雜質(zhì)、用水洗凈、干燥、粉碎過(guò)60目篩；
[0010]熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I，浸提溫度為75_95°C，料液比為1:5-1:15，浸提次數(shù)為1-3次，每次浸提時(shí)間為3h，浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾渣備用；
[0011]甘草渣的超聲輔助浸提處理；得到的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲功率300-500W，浸提溫度為60-80°C，料液比為1:10_1:20，浸提次數(shù)為1_2次，每次浸提時(shí)間為20-30min，浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去；
[0012]醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理，轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min，得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30-40Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入75-95%乙醇使之乙醇終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至25-35Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入75-95%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I;
[0013]純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用60-90%乙醇洗滌1-3次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為_(kāi)40°C~_80°C，干燥時(shí)間為36-48h，得到甘草多糖。
[0014]進(jìn)一步:還包括酸沉處理、復(fù)溶處理、氨化處理、酸化處理和結(jié)晶的步驟，其中，
`[0015]酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮以除乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為濃縮至30_35Brix，使乙醇濃度低于5%，得濃縮液II，將濃縮液II用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix，使用體積比1:1硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至1.5-2.5，得到酸沉液I ;
[0016]復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑I進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3攪拌溶解沉淀I 30-60min，使之完全溶解，得有機(jī)液I ;
[0017]氨化處理；將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至7.5-9.0，攪拌lh，靜止分層，得到上相
1、下相I ;
[0018]酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至4.0以下，70_90°C水浴保溫30min，低溫靜置6-12h，得酸化液I ;
[0019]結(jié)晶；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置4_8h，以4200r/min離心20min，離心后得到上清液II和沉淀，離心后的沉淀進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa，冷阱溫度為-40°C~_60°C，干燥時(shí)間為20_30h，沉淀干燥后即得甘草酸
單銨鹽。
[0020]進(jìn)一步:還包括純化步驟，上清液1、粗濾液I1、下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，樹(shù)脂選用XDA-8，LX20B, D101，AB-8其中一種，室溫下振蕩8-12h進(jìn)行靜態(tài)吸附，70-90%乙醇室溫下振蕩8-12h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30-35Brix,進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥進(jìn)口溫度160-200°C，出口溫度80_85°C，干燥后得甘
草黃酮。
[0021]進(jìn)一步:熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I。浸提溫度為75°C，料液比為1:5，浸提次數(shù)為I次，浸提時(shí)間為3h，浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用；
[0022]甘草渣的超聲輔助浸提處理；所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件:功率300W、浸提溫度為60°C、料液比為1:10、浸提次數(shù)為I次、浸提時(shí)間為20min ;浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去；
[0023]醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理，轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min，得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入75%乙醇使之乙醇終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至25Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入75%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I ;
[0024]純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用60%乙醇洗滌I次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為36h得到甘草多糖；
`[0025]酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，使乙醇濃度低于5%，得濃縮液II，將濃縮液II用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix，使用體積比1:1硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至1.5，得到酸沉液I ;
[0026]復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑乙酸乙酯進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3攪拌溶解沉淀I 30min，使之完全溶解，得有機(jī)液I ;
[0027]氨化處理；將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至7.5，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相I ;
[0028]酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至4.0，保證醋酸過(guò)量，70°C水浴保溫30min，低溫靜置6h，得酸化液I ;
[0029]結(jié)晶處理；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置4h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II ;沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa，冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為20h，沉淀物干燥后即得甘草酸單銨鹽；
[0030]純化處理；上清液1、粗濾液II，下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶。利用XDA-8大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩8h進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液70%乙醇室溫下振蕩8h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥進(jìn)口溫度160°C，出口溫度80°C ;干燥后得甘草黃酮。[0031]進(jìn)一步:熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I，浸提溫度為85°C，料液比為1:15，浸提次數(shù)為3次，每次浸提時(shí)間為3h，浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用；
[0032]甘草渣的超聲輔助浸提處理；將所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件:功率500W、浸提溫度為70°C、料液比為1:10、浸提次數(shù)為2次、浸提時(shí)間為30min ;浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去；
[0033]醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理，以轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min。得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為35Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入85%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1: 5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至30Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I ;
[0034]純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用70%乙醇洗滌I次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為36h得到甘草多糖；
[0035]酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，使乙醇濃度低于5% ;將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix ;使用體積比1:1硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至2.0，得到酸沉液I ;
[0036] 復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑乙酸乙酯進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3攪拌溶解沉淀I 40min，使之完全溶解，得有機(jī)液I ;
[0037]氨化處理；將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至8.0，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相I ;
[0038]酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至3.5，80°C水浴保溫30min，低溫靜置8h，得到酸化液I ;
[0039]結(jié)晶處理；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置6h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II ;沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa，冷阱溫度為-50°C，干燥時(shí)間為25h ;沉淀物干燥后即得甘草酸單銨鹽；
[0040]純化處理；上清液1、粗濾液II，下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩IOh進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液70%乙醇室溫下振蕩IOh進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥進(jìn)口溫度180°C，出口溫度80°C ;干燥后得甘草黃酮。
[0041]進(jìn)一步:熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I，浸提溫度為85°C，料液比為1:10，浸提次數(shù)為2次，每次浸提時(shí)間為3h，浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用；[0042]甘草渣的超聲輔助浸提處理；將所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件，功率400W，浸提溫度為70°C，料液比為1:20，浸提次數(shù)為I次，浸提時(shí)間為30min ;浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去；
[0043]醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min。得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為35Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入85%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至30Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入85%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I ;
[0044]純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用70%乙醇洗滌2次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為36h得到甘草多糖；
[0045]酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，使乙醇濃度低于5%，將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix ;使用體積比1:1硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至2.5，得到酸沉液I ;
[0046]復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑二氯甲烷進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3攪拌溶解沉淀I 40min，使之完全溶解，得有機(jī)液I ;
[0047]氨化處理；將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至9.0，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相I ;
[0048]酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至3.5，80°C水浴保溫30min，低溫靜置8h，得到酸化液I ;
[0049]結(jié)晶處理；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置6h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II ;沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa，冷阱溫度為-50°C，干燥時(shí)間為25h，沉淀干燥后即得甘草酸單銨鹽；
[0050]純化處理；上清液1、粗濾液I1、下相I和上清液II合并，真空濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩IOh進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液80%乙醇室溫下振蕩IOh進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥進(jìn)口溫度180°C，出口溫度80°C ;干燥后得甘草黃酮。
[0051]進(jìn)一步:熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I。浸提溫度為85°C，料液比為1:15，浸提次數(shù)為2次，每次浸提時(shí)間為3h ;浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用；
[0052]甘草渣的超聲輔助浸提處理；將所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件:功率400W、浸提溫度為80°C、料液比為1:15、浸提次數(shù)為2次、浸提時(shí)間為30min ;浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去；[0053]醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min ;得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為35Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至30Brix,進(jìn)行第二次醇沉，加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物
I ；
[0054]純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用80%乙醇洗滌I次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-60°C，干燥時(shí)間為48h得到甘草多糖；
[0055]酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物至35Brix，使乙醇濃度低于5%，將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix ;使用體積比1:1硫酸水溶液攪拌添加，調(diào)溶液PH值至2.0，得到酸沉液I ;
[0056]復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑水飽和正丁醇進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3攪拌溶解沉淀I 60min，使之完全溶解，得有機(jī)溶液I ;
[0057]氨化處理；將有機(jī)液I用濃氨水調(diào)pH至8.5，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相
I ;
[0058]酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至3.0，80°C水浴保溫30min，低溫靜置IOh，得到酸化液I ；
[0059]結(jié)晶處理；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置8h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II ;沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為
0.014MPa，冷阱溫度為_(kāi)60°C，干燥時(shí)間為30h ;沉淀干燥后即得甘草酸單銨鹽；
[0060]純化處理；上清液1、粗濾液II，下相I和的上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩IOh進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液80%乙醇室溫下振蕩IOh進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為35Brix，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥進(jìn)口溫度180°C，出口溫度80°C，干燥后得甘草黃酮。
[0061]進(jìn)一步:熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I ;浸提溫度為95°C，料液比為1:10，浸提次數(shù)為3次，每次浸提時(shí)間為3h ;浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用；
[0062]甘草渣的超聲輔助浸提處理；將所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件，功率500W，浸提溫度為80°C，料液比為1:15，浸提次數(shù)為2次，浸提時(shí)間為30min。浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去；
[0063]醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min。得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為40Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min,沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至35Brix,進(jìn)行第二次醇沉，加入75%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心1011^11，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I ；
[0064]純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用90%乙醇洗滌3次，收集沉淀，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-80°C，干燥時(shí)間為48h得到甘草多糖；
[0065]酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物30Brix，使乙醇濃度低于5% ;將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix。使用體積比1:1硫酸水溶液攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至1.5，得到酸沉液I ;
[0066]復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑水飽和正丁醇進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3，攪拌溶解沉淀I 50min，使之完全溶解，得有機(jī)液I ;
[0067]氨化處理；將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至8.5，磁力攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相I ;
[0068]酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至3.0，90°C水浴保溫30min，低溫靜置12h，得到酸化液I ;
[0069]結(jié)晶處理；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置8h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II ;沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa，冷阱溫度為_(kāi)60°C，干燥時(shí)間為30h ;沉淀物干燥后即得甘草酸單銨鹽；
[0070]純化處理；上清液1、粗濾液I1、下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩12h進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液90%乙醇室溫下振蕩12h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥進(jìn)口溫度200°C，出口溫度85°C ;干燥后得甘草黃酮。
[0071]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明技術(shù)效果包括:
[0072]1、本發(fā)明充分利用了甘草資源，在提取的過(guò)程中實(shí)現(xiàn)了不同有效組分的分離，避免單一提取時(shí)其它幾種活性物質(zhì)的損失。并且，生產(chǎn)成本較低、操作簡(jiǎn)易、生產(chǎn)效率高、對(duì)環(huán)境無(wú)污染，能實(shí)現(xiàn)連續(xù)化生產(chǎn)，而且得的產(chǎn)品品質(zhì)佳，易于推廣和利用，為甘草的綜合利用提供了一條新途徑，提高了甘草的綜合利用價(jià)值。甘草活性物質(zhì)可以作為功能因子，應(yīng)用于食品、藥品加工，實(shí)現(xiàn)了對(duì)甘草的深加工和綜合利用，擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍，提高了其附加值。
[0073]2、社會(huì)效益及經(jīng)濟(jì)效益:
[0074](I)本發(fā)明主要應(yīng)用范圍及市場(chǎng)定位:甘草活性物質(zhì)可以作為功能因子，應(yīng)用于食品、藥品加工，實(shí)現(xiàn)了對(duì)甘草的深加工和綜合利用，擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍，提高了其附加值。本發(fā)明生產(chǎn)的甘草黃酮、甘草多糖可以作為一些功能性食品開(kāi)發(fā)的優(yōu)質(zhì)原料或輔料，應(yīng)用于食品、藥品加工，添加在各種食品、保健品和醫(yī)藥制品中，主要目的是抗氧化、提高免疫等生理作用。甘草酸單銨鹽是天然甜味劑，高效安全，并且還是一種功能因子，保肝護(hù)肝，解毒。所以本發(fā)明一方面增加產(chǎn)品保健功能，另一方面提高產(chǎn)品品質(zhì)和附加值等。
[0075](2)本發(fā)明應(yīng)用效益:可觀的經(jīng)濟(jì)效益和良好的社會(huì)效益。本發(fā)明對(duì)于甘草初級(jí)加工等企業(yè)直接受益，開(kāi)展甘草的深加工，對(duì)甘草的綜合利用提供了可靠途徑。
[0076](3)推廣價(jià)值:甘草一直是我國(guó)乃至全球的緊缺植物藥材，目前甘草已經(jīng)實(shí)現(xiàn)人工栽培，本發(fā)明以人工栽培甘草為原料，生產(chǎn)活性物質(zhì)，最大限度對(duì)甘草進(jìn)行了綜合性開(kāi)發(fā)，提高了其利用價(jià)值。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0077]圖1為本發(fā)明中一種甘草活性物質(zhì)的制備方法的工藝流程圖；
[0078]圖2為本發(fā)明中甘草多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖(以葡萄糖計(jì))；
[0079]圖3a為本發(fā)明中甘草酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；
[0080]圖3b為本 發(fā)明中甘草酸單銨鹽標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相分析結(jié)果圖；
[0081]圖3c為本發(fā)明中甘草酸單銨鹽產(chǎn)品的高效液相分析結(jié)果圖；
[0082]圖4a是本發(fā)明中粗黃酮的紫外掃描圖；
[0083]圖4b為本發(fā)明中黃酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖(以蘆丁計(jì))。
【具體實(shí)施方式】
[0084]本發(fā)明以甘草為原料，通過(guò)分步浸提、分離純化、干燥等步驟得到甘草活性物質(zhì)(甘草黃酮、甘草酸單銨鹽、甘草多糖)。
[0085]下面參考附圖和優(yōu)選實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案作詳細(xì)說(shuō)明。
[0086]如圖1所示，為本發(fā)明中一種甘草活性物質(zhì)的制備方法的工藝流程圖。
[0087]一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，步驟包括:
[0088]步驟1:原料的預(yù)處理；
[0089]將甘草予以篩選，去除各種雜質(zhì)，然后用水洗凈、去除灰塵，干燥，粉碎過(guò)60目篩。
[0090]步驟2:熱水浸提處理；
[0091]甘草熱水浸提處理，得到浸提液I。浸提溫度為75_95°C，料液比為1:5-1:15(質(zhì)量體積比w/v)，浸提次數(shù)為1-3次，每次浸提時(shí)間為3h。浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾渣備用。
[0092]步驟3:甘草渣的超聲輔助浸提處理；
[0093]由步驟2得到的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II。超聲功率300-500W，浸提溫度為60-80°C，料液比為1:10-1:20(質(zhì)量體積比w/v)，浸提次數(shù)為1_2次，每次浸提時(shí)間為20-30min。浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去。
[0094]步驟4:醇沉處理；
[0095]粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理，轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min，得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30-40Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入75-95%乙醇使之乙醇終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h,以4200r/min離心10min,沉淀物按照固液比1:5 (質(zhì)量體積比w/v)用75%乙醇復(fù)溶，900C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至25-35Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入75-95%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5(質(zhì)量體積比/V)用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I。
[0096]步驟5:純化處理；
[0097]將最終醇沉沉淀物I于室溫下用60-90%乙醇洗滌1-3次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為_(kāi)40°C~_80°C，干燥時(shí)間為36-48h，得到甘草多糖。
[0098]步驟6:酸沉處理；
[0099]將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮以除乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為濃縮至30-35Brix，使乙醇濃度低于5%，得濃縮液II，將濃縮液II用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix，使用1:1 (體積比v/v)硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至1.5-2.5，得到酸沉液I。
[0100]步驟7:復(fù)溶處理；
[0101]將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑I (乙酸乙酯、水飽和正丁醇、二氯甲烷中的一種)進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3 (質(zhì)量體積比w/v)攪拌溶解沉淀I 30-60min，使之完全溶解，得有機(jī)液I。
[0102]步驟8:氨化處理；
[0103]將有機(jī)液I用濃氨水調(diào)pH至7.5-9.0，攪拌lh，靜止分層，得到上相1、下相I。
[0104]步驟9:酸化處理；
[0105]將上相I (水相)使用冰醋酸調(diào)pH值至4.0以下(保證醋酸過(guò)量)，70_90°C水浴保溫30min，低溫靜置6-12h，得酸化液I。
[0106]步驟10:結(jié)晶；
[0107]酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置4-8h，以4200r/min離心20min，離心后得到上清液II和沉淀II，離心后的沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa，冷阱溫度為-40°C~_60°C，干燥時(shí)間為20_30h，沉淀干燥后即得甘草酸單銨鹽。
[0108]步驟11:純化。
[0109]上清液1、粗濾液11、下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化(樹(shù)脂選用XDA-8，XDB-8, LX20B, D101, AB-8其中一種)，室溫下振蕩8-12h進(jìn)行靜態(tài)吸附，70-90%乙醇室溫下振蕩8-12h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30_35Brix，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥進(jìn)口溫度160-20(TC，出口溫度80-85°C，干燥后得甘草黃酮。
[0110]廣品驗(yàn)證:
[0111]1)甘草多糖的驗(yàn)證
[0112]甘草多糖的驗(yàn)證及含量測(cè)定方法采用苯酚-硫酸比色法(以葡萄糖計(jì))。
[0113]如圖2所示，為本發(fā)明中甘草多糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，其中，橫坐標(biāo)為葡萄糖質(zhì)量，縱坐標(biāo)為吸光值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，擬合得到標(biāo)準(zhǔn)方程:y=0.012x-0.006，R2=0.999，式中:Y代表吸光度，X代表葡萄糖質(zhì)量(μ g)，R代表相關(guān)系數(shù)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方程，根據(jù)實(shí)驗(yàn)中所測(cè)得的吸光值來(lái)計(jì)算葡萄糖的含量，從而得到多糖的含量(以葡萄糖計(jì))。[0114]2)甘草粗黃酮測(cè)定方法
[0115]將甘草粗黃酮用體積百分比50%乙醇-水溶液適當(dāng)稀釋，于紫外-分光光度計(jì)分析，紫外全波段掃描結(jié)果如圖4a。橫坐標(biāo)為掃描波長(zhǎng)，縱坐標(biāo)為吸光值，圖4a結(jié)果顯示，甘草粗黃酮在300~400nm之間和240~280nm之間各出現(xiàn)了一個(gè)吸收帶，說(shuō)明其為黃酮類化合物，此方法是黃酮的定性方法。紫外掃描能夠說(shuō)明該物質(zhì)具有黃酮類化合物的特征吸收峰，說(shuō)明此物質(zhì)為黃酮類化合物，是黃酮的定性方法。
[0116]甘草粗黃酮含量的測(cè)定方法使用亞硝酸鈉-氫氧化鈉比色法(以蘆丁計(jì))，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖4b。橫坐標(biāo)為蘆丁濃度，縱坐標(biāo)為吸光值。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，擬合得到其標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y=0.516x+0.025，R2=0.999，式中:Y代表吸光度，X代表蘆丁濃度(μ g/mL)，R代表相關(guān)系數(shù)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方程，根據(jù)實(shí)驗(yàn)中所測(cè)得的吸光值來(lái)計(jì)算蘆丁的含量，從而得到黃酮的含量(以蘆丁計(jì))。
[0117]3)甘草酸單銨鹽
[0118]圖3a所示，為本發(fā)明中甘草酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；本發(fā)明中，甘草酸測(cè)定方法采用高效液相法，其中橫坐標(biāo)為甘草酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，縱坐標(biāo)為峰面積，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，通過(guò)擬合得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y=5.926x+11.21, R2=0.999，式中:Y代表峰面積，X代表甘草酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度(μ g/mL)，R代表相關(guān)系數(shù)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方程，根據(jù)實(shí)驗(yàn)中所測(cè)得的峰面積來(lái)計(jì)算甘草酸的含量，從而得到甘草酸單銨鹽的含量(以甘草酸計(jì))。
[0119]圖3b所示，為本發(fā)明中甘草酸單銨鹽標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相分析結(jié)果圖；如圖3c所示，為本發(fā)明中甘草酸單銨鹽產(chǎn)品的高效液相分析結(jié)果圖，橫坐標(biāo)為時(shí)間，做坐標(biāo)為峰面積。圖上所標(biāo)為所測(cè)物質(zhì)的出峰時(shí)間，分別為6.04和5.95min，通過(guò)將甘草酸單銨鹽產(chǎn)品的高效液相分析結(jié)果同甘草酸標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相分析結(jié)果進(jìn)行比對(duì)因此認(rèn)為為同一種物質(zhì)，即:甘草酸單銨鹽。
[0120]實(shí)施例1
[0121]一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其生產(chǎn)步驟為:
[0122](I)原料的預(yù)處理:將甘草予以篩選，去除各種雜質(zhì)，然后用水洗凈、去除灰塵，干燥，粉粹過(guò)60目篩。
[0123](2)熱水浸提處理:甘草熱水浸提處理，得到浸提液I。浸提溫度為75°C，料液比為1:5 (w/v)，浸提次數(shù)為I次，浸提時(shí)間為3h。浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用。
[0124](3)甘草渣的超聲輔助浸提處理:步驟(2)所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件:功率300W，浸提溫度為60°C，料液比為1:10 (w/v)，浸提次數(shù)為I次，浸提時(shí)間為20min。浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去。
[0125](4)醇沉處理:粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理，轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min，得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入75%乙醇使之乙醇終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5 (w/v)用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min,離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至25Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入75%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5 (w/v)用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min,離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I。
[0126](5)純化處理:將最終醇沉沉淀物I于室溫下用60%乙醇洗滌I次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為36h得到甘草多糖。
[0127](6)酸沉處理:將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，使乙醇濃度低于5%，得濃縮液II，將濃縮液II用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix，使用1:1 (v/v)硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至1.5，得到酸沉液I。
[0128](7)復(fù)溶處理:將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑乙酸乙酯進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3 (w/v)，攪拌溶解沉淀I 30min，使之完全溶解，得有機(jī)液I。
[0129](8)氨化處理:將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至7.5，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相I。
[0130](9)酸化處理:將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至4.0 (保證醋酸過(guò)量)，70°C水浴保溫30min,低溫靜置6h,得酸化液I。
[0131](10)結(jié)晶處理:酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置4h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II。沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為
0.014MPa，冷阱溫度為_(kāi)40°C，干燥時(shí)間為20h，沉淀物干燥后即得甘草酸單銨鹽。
[0132](11)純化處理:上清液1、粗濾液II，下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶。利用XDA-8大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩8h進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液70%乙醇室溫下振蕩8h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥進(jìn)口溫度160°C，出口溫度80°C ;干燥后得甘草黃酮。
[0133]此條件制備的甘草酸單銨鹽得率1.23%，純度為58% ;甘草黃酮得率2.23%，純度為30% ;甘草多糖得率11.27%，純度為57.8%。
[0134]實(shí)施例2
[0135]一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其生產(chǎn)步驟為:
[0136](I)原料的預(yù)處理:將甘草予以篩選，去除各種雜質(zhì)，然后用水洗凈、去除灰塵，干燥，粉粹過(guò)60目篩。
[0137](2)熱水浸提處理:甘草熱水浸提處理，得到浸提液I。浸提溫度為85°C，料液比為l:15(w/v)，浸提次數(shù)為3次，每次浸提時(shí)間為3h。浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用。
[0138](3)甘草渣的超聲輔助浸提處理:將步驟(2)所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件:功率500W，浸提溫度為70°C，料液比為1:10 (w/v)，浸提次數(shù)為2次，浸提時(shí)間為30min。浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去。 [0139](4)醇沉處理:粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理，以轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min。得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°c，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為35Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入85%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min,沉淀物按照固液比1:5 (w/v)用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min,離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至30Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5 (w/v)用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min,離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I。
[0140](5)純化處理:將最終醇沉沉淀物I于室溫下用70%乙醇洗滌I次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為36h得到甘草多糖。
[0141](6)酸沉處理:將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，使乙醇濃度低于5%。將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix。使用1:1 (v/v)硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至2.0，得到酸沉液I。
[0142](7)復(fù)溶處理:將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑乙酸乙酯進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3 (w/v)，攪拌溶解沉淀I 40min，使之完全溶解，得有機(jī)液I。[0143](8)氨化處理:將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至8.0，攪拌lh，靜置分層，得到上相
1、下相I。
[0144](9)酸化處理:將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至3.5 (保證醋酸過(guò)量)，80°C水浴保溫30min,低溫靜置8h,得到酸化液I。
[0145](10)結(jié)晶處理:酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置6h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II。沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa，冷阱溫度為-50°C，干燥時(shí)間為25h ;沉淀物干燥后即得甘草酸單銨鹽。
[0146](11)純化處理:上清液1、粗濾液II，下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用LX20B大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩IOh進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液70%乙醇室溫下振蕩IOh進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥進(jìn)口溫度180°C，出口溫度80°C ;干燥后得甘草黃酮。
[0147]此條件制備的甘草酸單銨鹽得率1.61%，純度為60.2% ;甘草黃酮得率2.92%，純度為31.8% ;甘草多糖得率9.66%，純度為61.3%。
[0148]實(shí)施例3
[0149]一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其生產(chǎn)步驟為:
[0150](I)原料的預(yù)處理:將甘草予以篩選，去除各種雜質(zhì)，然后用水洗凈、去除灰塵，干燥，粉粹過(guò)60目篩。
[0151](2)熱水浸提處理:甘草熱水浸提處理，得到浸提液I。浸提溫度為85°C，料液比為l:10(w/v)，浸提次數(shù)為2次，每次浸提時(shí)間為3h。浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用。
[0152](3)甘草渣的超聲輔助浸提處理:將步驟(2)所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件，功率400W，浸提溫度為70°C，料液比為1:20 (w/v)，浸提次數(shù)為I次，浸提時(shí)間為30min。浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去。
[0153](4)醇沉處理:粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min。得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°c，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為35Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入85%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min,沉淀物按照固液比1:5(w/v)用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至30Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入85%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5 (w/v)用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I。
[0154](5)純化處理:將最終醇沉沉淀物I于室溫下用70%乙醇洗滌2次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為36h得到甘草多糖。
[0155](6)酸沉處理:將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，使乙醇濃度低于5%。將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix。使用1:1 (體積比v/v)硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至2.5，得到酸沉液I。
[0156](7)復(fù)溶處理:將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑二氯甲烷進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3 (w/v)，攪拌溶解沉淀I 40min，使之完全溶解，得有機(jī)液I。
[0157](8)氨化處理:將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至9.0，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相I。
[0158](9)酸化處理:將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至3.5 (保證醋酸過(guò)量)，80°C水浴保溫30min,低溫靜置8h,得到酸化液I。
[0159](10)結(jié)晶處理:酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置6h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II。沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa，冷阱溫度為_(kāi)50°C，干燥時(shí)間為25h，沉淀干燥后即得甘草酸單銨鹽。
[0160](11)純化處理:上清液1、粗濾液I1、下相I和上清液II合并，真空濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用DlOl大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩IOh進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液80%乙醇室溫下振蕩IOh進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥進(jìn)口溫度180°C，出口溫度80°C ;干燥后得甘草黃酮。
[0161]此條件制備的甘草酸單銨鹽得率1.45%，純度為59.7% ;甘草黃酮得率2.52%，純度為28.8% ;甘草多糖得率11.32%，純度為61.3%。
[0162]實(shí)施例4
[0163]一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其生產(chǎn)步驟為:
[0164](I)原料的預(yù)處理:將甘草予以篩選，去除各種雜質(zhì)，然后用水洗凈、去除灰塵，干燥，粉粹過(guò)60目篩。
[0165](2)熱水浸提處理:甘草熱水浸提處理，得到浸提液I。浸提溫度為85°C，料液比為l:15(w/v)，浸提次數(shù)為2次，每次浸提時(shí)間為3h。浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用。
[0166](3)甘草渣的超聲輔助浸提處理:將步驟(2)所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件，功率400W，浸提溫度為80°C，料液比為1:15 (w/v)，浸提次數(shù)為2次，浸提時(shí)間為30min。浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去。
[0167](4)醇沉處理:粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min。得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為35Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min,沉淀物按照固液比1:5 (w/v)用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min,離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至30Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min,沉淀按照固液比1:5 (w/v)用75%乙醇復(fù)溶,90°C回流30min,離心過(guò)濾,上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I。
[0168](5)純化處理:將最終醇沉沉淀物I于室溫下用80%乙醇洗滌I次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-60°C，干燥時(shí)間為48h得到甘草多糖。
[0169](6)酸沉處理:將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物至35Brix，使乙醇濃度低于5%。將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix。使用1:1 (v/v)硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)溶液PH值至2.0，得到酸沉液I。
[0170](7)復(fù)溶處理:將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑水飽和正丁醇進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3 (w/v)，攪拌溶解沉淀I 60min，使之完全溶解，得有機(jī)溶液I。
[0171](8)氨化處理:將有機(jī)液I用濃氨水調(diào)pH至8.5，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相I。
[0172](9)酸 化處理:將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至3.0 (保證醋酸過(guò)量)，80°C水浴保溫30min,低溫靜置IOh,得到酸化液I。
[0173](10)結(jié)晶處理:酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置8h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II。沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa，冷阱溫度為_(kāi)60°C，干燥時(shí)間為30h ;沉淀干燥后即得甘草酸單銨鹽。
[0174](11)純化處理:上清液1、粗濾液II，下相I和的上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用AB-8大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩IOh進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液80%乙醇室溫下振蕩IOh進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為35Brix，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥進(jìn)口溫度180°C，出口溫度80°C，干燥后得甘草黃酮。
[0175]此條件制備的甘草酸單銨鹽得率1.80%,純度為61.0% ;甘草黃酮得率2.72%，純度為29.4% ;甘草多糖得率9.89%，純度為59.3%。
[0176]實(shí)施例5
[0177]一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其生產(chǎn)步驟為:
[0178](I)原料的預(yù)處理:將甘草予以篩選，去除各種雜質(zhì)，然后用水洗凈、去除灰塵，干燥，粉粹過(guò)60目篩。
[0179](2)熱水浸提處理:甘草熱水浸提處理，得到浸提液I。浸提溫度為95°C，料液比為l:10(w/v)，浸提次數(shù)為3次，每次浸提時(shí)間為3h。浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用。
[0180](3)甘草渣的超聲輔助浸提處理:將步驟(2)所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件，功率500W，浸提溫度為80°C，料液比為1:15 (w/v)，浸提次數(shù)為2次，浸提時(shí)間為30min。浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去。
[0181](4)醇沉處理:粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min。得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為40Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min,沉淀物按照固液比1:5 (w/v)用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min,離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至35Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入75%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5 (w/v)用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I。
[0182](5)純化處理:將最終醇沉沉淀物I于室溫下用90%乙醇洗滌3次，收集沉淀，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-80°C，干燥時(shí)間為48h得到甘草多糖。
[0183](6)酸沉處理:將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物30Brix，使乙醇濃度低于5%。將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix。使用1:1 (v/v)硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至1.5，得到酸沉液I。
[0184](7)復(fù)溶處理:將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑水飽和正丁醇進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3 (w/v),攪拌溶解沉淀I 50min,使之完全溶解,得有機(jī)液I。
[0185](8)氨化處理:將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至8.5，磁力攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相I。
[0186](9)酸化處理:將上相I使用冰醋酸調(diào)pH值至3.0 (保證醋酸過(guò)量)，90°C水浴保溫30min,低溫靜置12h,得到酸化液I。
[0187](10)結(jié)晶處理:酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置8h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II。沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為
0.014MPa，冷阱溫度為_(kāi)60°C，干燥時(shí)間為30h ;沉淀物干燥后即得甘草酸單銨鹽。
[0188](11)純化處理:上清液1、粗濾液I1、下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用XDB-8大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩12h進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液90%乙醇室溫下振蕩12h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥進(jìn)口溫度200°C，出口溫度85°C ;干燥后得甘草黃酮。
[0189]此條件制備的甘草酸單銨鹽得率1.92%，純度為62.1% ;甘草黃酮得率3.30%,純度為31.2% ;甘草多糖得率10.61%，純度為60.4%。
【權(quán)利要求】
1.一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，包括: 原料的預(yù)處理；將甘草予以篩選，去除各種雜質(zhì)、用水洗凈、干燥、粉碎過(guò)60目篩； 熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I，浸提溫度為75-95°C，料液比為1:5-1:15，浸提次數(shù)為1-3次，每次浸提時(shí)間為3h，浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾洛備用； 甘草渣的超聲輔助浸提處理；得到的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲功率300-500W，浸提溫度為60-80°C，料液比為1:10_1:20，浸提次數(shù)為1_2次，每次浸提時(shí)間為20-30min，浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去； 醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理，轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min，得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30-40Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入75-95%乙醇使之乙醇終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至25-35Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入75-95%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物1; 純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用60-90%乙醇洗滌1-3次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為_(kāi)40°C~_80°C，干燥時(shí)間為36-48h，得到甘草多糖。
2.如權(quán)利要求1所述一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其特征在于:還包括酸沉處理、復(fù)溶處理、氨化處理、酸化處理和結(jié)晶的步驟,其中， 酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮以除乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為濃縮至30-35Brix，使乙醇濃度低于5%，得濃縮液II，將濃縮液II用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix，使用體積比1:1硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至1.5-2.5，得到酸沉液I ; 復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑I進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3攪拌溶解沉淀I 30-60min，使之完全溶解，得有機(jī)液I ; 氨化處理；將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至7.5-9.0，攪拌lh，靜止分層，得到上相1、下相I ; 酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)PH值至4.0以下，70-90°C水浴保溫30min，低溫靜置6-12h，得酸化液I ; 結(jié)晶；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置4-8h，以4200r/min離心20min，離心后得到上清液II和沉淀，離心后的沉淀進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為.0.014MPa，冷阱溫度為-40°C~_60°C，干燥時(shí)間為20_30h，沉淀干燥后即得甘草酸單銨鹽。
3.如權(quán)利要求2所述一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其特征在于:還包括純化步驟，上清液1、粗濾液I1、下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，樹(shù)脂選用XDA-8，LX20B, D101，AB-8其中一種，室溫下振蕩8_12h進(jìn)行靜態(tài)吸附，70-90%乙醇室溫下振蕩8-12h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa,濃縮至可溶性固形物為30_35Brix，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥進(jìn)口溫度160-200°C，出口溫度80-85°C，干燥后得甘草黃酮。
4.如權(quán)利要求1所述一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其特征在于: 熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I。浸提溫度為75°C，料液比為1:5，浸提次數(shù)為I次，浸提時(shí)間為3h，浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾渣備用；甘草渣的超聲輔助浸提處理；所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件:功率300W、浸提溫度為60°C、料液比為1:10、浸提次數(shù)為I次、浸提時(shí)間為20min;浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去； 醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理，轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min，得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入75%乙醇使之乙醇終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至25Brix,進(jìn)行第二次醇沉，加入75%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心lOmin，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物1 ； 純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用60%乙醇洗滌I次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為36h得到甘草多糖； 酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為.0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，使乙醇濃度低于5%，得濃縮液II，將濃縮液II用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix，使用體積比1:1硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至1.5，得到酸沉液I ; 復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑乙酸乙酯進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3攪拌溶解沉淀I 30min，使之完全溶解，得有機(jī)液I ; 氨化處理；將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至7.5，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相1； 酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)PH值至4.0，保證醋酸過(guò)量，70°C水浴保溫30min，低溫靜置6h，得酸化液I ; 結(jié)晶處理；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置4h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II ;沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa,冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為20h，沉淀物干燥后即得甘草酸單銨鹽； 純化處理；上清液1、粗濾液II，下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶。利用XDA-8大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩8h進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液70%乙醇室溫下振蕩8h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為·0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥進(jìn)口溫度160°C，出口溫度80°C ;干燥后得甘草黃酮。
5.如權(quán)利要求1所述一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其特征在于: 熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I，浸提溫度為85°C，料液比為1:15，浸提次數(shù)為3次，每次浸提時(shí)間為3h，浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾渣備用； 甘草渣的超聲輔助浸提處理；將所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件:功率500W、浸提溫度為70°C、料液比為1:10、浸提次數(shù)為2次、浸提時(shí)間為30min ;浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去； 醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理，以轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min。得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為35Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入85%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至30Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I ; 純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用70%乙醇洗滌I次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為36h得到甘草多糖； 酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為.0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，使乙醇濃度低于5% ;將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix ;使用體積比1:1硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至2.0，得到酸沉液I ; 復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備 用，沉淀I用有機(jī)溶劑乙酸乙酯進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3攪拌溶解沉淀I 40min，使之完全溶解，得有機(jī)液I ; 氨化處理；將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至8.0，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相1； 酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)PH值至3.5，80°C水浴保溫30min，低溫靜置8h，得到酸化液I; 結(jié)晶處理；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置6h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II ;沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa,冷阱溫度為_(kāi)50°C，干燥時(shí)間為25h ;沉淀物干燥后即得甘草酸單銨鹽； 純化處理；上清液1、粗濾液II，下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩IOh進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液70%乙醇室溫下振蕩IOh進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為.0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥進(jìn)口溫度180°C，出口溫度80°C ;干燥后得甘草黃酮。
6.如權(quán)利要求1所述一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其特征在于: 熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I，浸提溫度為85°C，料液比為1:10，浸提次數(shù)為2次，每次浸提時(shí)間為3h，浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾渣備用； 甘草渣的超聲輔助浸提處理；將所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件，功率400W，浸提溫度為70°C，料液比為1:20，浸提次數(shù)為I次，浸提時(shí)間為30min ;浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去； 醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min。得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為35Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入85%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀物備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至30Brix,進(jìn)行第二次醇沉，加入85%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心l0min，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物1； 純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用70%乙醇洗滌2次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-40°C，干燥時(shí)間為36h得到甘草多糖； 酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為·0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為30Brix，使乙醇濃度低于5%，將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix ;使用體積比1:1硫酸水溶液，攪拌添加，調(diào)稀釋液PH值至2.5，得到酸沉液I ; 復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑二氯甲烷進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3攪拌溶解沉淀I 40min，使之完全溶解，得有機(jī)液I ; 氨化處理；將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至9.0，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相1； 酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)PH值至3.5，80°C水浴保溫30min，低溫靜置8h，得到酸化液I; 結(jié)晶處理；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置6h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II ;沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa,冷阱溫度為-50°C，干燥時(shí)間為25h，沉淀干燥后即得甘草酸單銨鹽； 純化處理；上清液1、粗濾液I1、下相I和上清液II合并，真空濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩IOh進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液80%乙醇室溫下振蕩10h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為·0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥進(jìn)口溫度180°C，出口溫度80°C ;干燥后得甘草黃酮。
7.如權(quán)利要求1所述一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其特征在于: 熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I。浸提溫度為85°C，料液比為1:15，浸提次數(shù)為2次，每次浸提時(shí)間為3h;浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾渣備用；甘草渣的超聲輔助浸提處理；將所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件:功率400W、浸提溫度為80°C、料液比為1:15、浸提次數(shù)為2次、浸提時(shí)間為，30min ;浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去； 醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處理轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min ;得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為35Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min,沉淀物按照固液比1:5,用75%乙醇復(fù)溶,90°C回流30min,離心過(guò)濾,上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至30Brix，進(jìn)行第二次醇沉，加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心lOmin，沉淀按照固液比1:5用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物I ; 純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用80%乙醇洗滌I次，收集沉淀物，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-60°C，干燥時(shí)間為48h得到甘草多糖； 酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為，0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物至35Brix，使乙醇濃度低于5%，將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix ;使用體積比1:1硫酸水溶液攪拌添加，調(diào)溶液pH值至2.0，得到酸沉液I ; 復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑水飽和正丁醇進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3攪拌溶解沉淀I 60min，使之完全溶解，得有機(jī)溶液I ; 氨化處理；將有機(jī)液I用濃氨水調(diào)pH至8.5，攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相I ;酸化處理；將上相I使用冰醋 酸 調(diào)PH值至3.0，80°C水浴保溫30min，低溫靜置10h，得到酸化液I; 結(jié)晶處理；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置8h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II ;沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa,冷阱溫度為_(kāi)60°C，干燥時(shí)間為30h ;沉淀干燥后即得甘草酸單銨鹽； 純化處理；上清液1、粗濾液II，下相I和的上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩IOh進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液80%乙醇室溫下振蕩10h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為35Brix，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥進(jìn)口溫度180°C，出口溫度80°C，干燥后得甘草黃酮。
8.如權(quán)利要求1所述一種甘草活性物質(zhì)的制備方法，其特征在于: 熱水浸提處理；甘草熱水浸提處理，得到浸提液I ;浸提溫度為95°C，料液比為1:10，浸提次數(shù)為3次，每次浸提時(shí)間為3h;浸提液I通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液I，濾渣備用； 甘草渣的超聲輔助浸提處理；將所得的濾渣用于超聲輔助浸提，得到浸提液II，超聲輔助浸提條件，功率500W，浸提溫度為80°C，料液比為1:15，浸提次數(shù)為2次，浸提時(shí)間為30min。浸提液II通過(guò)200目濾布過(guò)濾得到粗濾液II，濾渣棄去； 醇沉處理；粗濾液I經(jīng)過(guò)離心處 理轉(zhuǎn)速4200r/min，離心10min。得到澄清液I，澄清液I經(jīng)過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°c，真空度為0.0SMPa ;濃縮至可溶性固形物為40Brix，得到濃縮液I，濃縮液I加入95%乙醇使之終濃度達(dá)到50%，常溫靜置4h，以4200r/min離心10min,沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第一次醇沉上清液，沉淀備用，將第一次醇沉上清液通過(guò)真空蒸發(fā)器濃縮至35Brix,進(jìn)行第二次醇沉，加入75%乙醇使之終濃度達(dá)到70%，常溫靜置4h，以4200r/min離心lOmin，沉淀物按照固液比1:5，用75%乙醇復(fù)溶，90°C回流30min，離心過(guò)濾，上清液并入第二次醇沉上清液得最終醇沉上清液I，兩次乙醇復(fù)溶的沉淀物合并，為最終醇沉沉淀物1； 純化處理；將最終醇沉沉淀物I于室溫下用90%乙醇洗滌3次，收集沉淀，采用真空冷凍干燥工藝進(jìn)行干燥處理，冷阱溫度為-80°C，干燥時(shí)間為48h得到甘草多糖； 酸沉處理；將最終醇沉上清液I采用真空蒸發(fā)器濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為.0.08MPa ;濃縮至可溶性固形物30Brix，使乙醇濃度低于5% ;將脫除乙醇的濃縮液用去離子水進(jìn)行稀釋使可溶性固形物達(dá)到15Brix。使用體積比1:1硫酸水溶液攪拌添加，調(diào)稀釋液pH值至1.5，得到酸沉液I ; 復(fù)溶處理；將酸沉液I于4°C靜置12h，以轉(zhuǎn)速4200r/min，進(jìn)行離心分離20min，得上清液I和沉淀I，上清液I備用，沉淀I用有機(jī)溶劑水飽和正丁醇進(jìn)行復(fù)溶，按照固液比1:3，攪拌溶解沉淀I 50min，使之完全溶解，得有機(jī)液I ; 氨化處理；將有機(jī)溶液I用濃氨水調(diào)pH至8.5，磁力攪拌lh，靜置分層，得到上相1、下相I ; 酸化處理；將上相I使用冰醋酸調(diào)PH值至3.0，90°C水浴保溫30min，低溫靜置12h，得到酸化液I; 結(jié)晶處理；酸化液I加入無(wú)水乙醇稀釋，使乙醇濃度達(dá)到90%，低溫靜置8h，以4200r/min離心20min，得到上清液II和沉淀II ;沉淀II進(jìn)行真空冷凍干燥，真空度為0.014MPa,冷阱溫度為_(kāi)60°C，干燥時(shí)間為30h ;沉淀物干燥`后即得甘草酸單銨鹽； 純化處理；上清液1、粗濾液I1、下相I和上清液II合并，濃縮至干并用50%乙醇復(fù)溶，利用大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，室溫下振蕩12h進(jìn)行靜態(tài)吸附吸，洗脫液90%乙醇室溫下振蕩12h進(jìn)行解吸，收集洗脫液進(jìn)行真空蒸發(fā)器濃縮以除去乙醇，濃縮溫度為45°C，真空度為.0.08MPa，濃縮至可溶性固形物為30Brix，進(jìn)行噴霧干燥；噴霧干燥進(jìn)口溫度200°C，出口溫度85°C ;干燥后得甘草黃酮。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK103860631SQ201410075183
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年3月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月4日
【發(fā)明者】高彥祥, 樊蕊, 李鐵軍 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古普凡生生物科技有限公司, 包頭市慧鑫實(shí)業(yè)有限公司