專利名稱：從瞿麥中提取多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從瞿麥中提取多糖的超聲提取方法。
背景技術(shù)：
瞿麥，又名野麥、石桂花、巨句麥等，為石竹科植物，分布于朝鮮、蒙古、俄羅斯、中國東北，華北，西北，華東，四川，貴州等地。瞿麥味苦，性寒、鈍、輕、稀，涼血，止痛，解毒。瞿麥治血熱，血熱刺痛，肝熱，“寶日”熱寒兼雜期，痧癥，產(chǎn)后發(fā)熱，具有利尿通淋、破血通經(jīng)的作用。臨床療效廣泛，復(fù)方或者單獨使用均可，系常用中藥。多糖廣泛分布于動物、植物和微生物中，是一類結(jié)構(gòu)復(fù)雜的天然高分子化合物，對動植物的生命至關(guān)重要。大量的藥理和臨床研究表明，多糖具有廣泛的藥理及生物活性，如免疫促進、抗腫瘤、抗病毒、降血糖、降血脂、抗衰老等，且作為藥物其毒副作用極小。所以中蒙藥中多糖的研究不僅成為熱門領(lǐng)域，亦成為當今中蒙藥的研發(fā)方向之一。為此，研究瞿麥中多糖的提取、分離、純化方法對后續(xù)研究其生物活性具有重要意義。要從瞿麥中充分地獲得多糖，應(yīng)當盡可能地破壞瞿麥細胞結(jié)構(gòu)。在提取階段用超聲波法提取多糖類物質(zhì)，是一種創(chuàng)新，其原理是超聲波可在液體中產(chǎn)生“空穴作用”，而“空穴作用”產(chǎn)生的沖擊波和射流可以破壞植物細胞和細胞膜結(jié)構(gòu)，從而增加細胞內(nèi)容物通過細胞膜的穿透能力，有助于多糖類化合物的釋放與溶出，超聲波使提取液不斷震蕩，有助于溶質(zhì)擴散，同時超聲波的熱效應(yīng)對原料有水浴作用。目前，在提取階段采用超聲波從瞿麥中提取多糖的研究尚未報道。`

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種從瞿麥中提取多糖的超聲提取方法，以瞿麥為原料，利用超聲波提取，可高得率地獲得較高純度的瞿麥多糖。本發(fā)明提供了一種從瞿麥中提取多糖的超聲提取方法，包括:稱取瞿麥粉末，加入95%乙醇超聲，靜置，離心15min，棄去上清液加入蒸餾水超聲提取，后將提取液離心15min，棄去沉淀，將提取液濃縮，加入95%乙醇靜置，離心15min，沉淀用蒸餾水溶解，即得。作為一種具體實施方式
，本發(fā)明提供一種從瞿麥中提取多糖的超聲提取方法，包括:稱取瞿麥粉末5.0g,加入100ml95%乙醇超聲60min，靜置，離心15min，棄去上清液加A IOOml蒸餾水超聲提取，后將提取液離心15min，棄去沉淀，將提取液濃縮至10ml，加入30ml95%乙醇靜置，離心15min，沉淀用蒸餾水溶解定容至100ml，精密吸取上述溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。優(yōu)選地,料液比為1:10 (g/mL)到1:30 (g/mL)之間，優(yōu)選1:20 (g/mL)。“料液比”，指固態(tài)的“料”的質(zhì)量與作為浸提液的“液”的體積的比?！傲稀钡膯挝挥胓、mg，“液”的單位用L、mL,于是“料液比”的單位有g(shù)/L、mg/L、g/mL、mg/mL等。本發(fā)明所采用的單位為g/mL0優(yōu)選地，超聲提取溫度為50-90°C，更優(yōu)選為60°C。優(yōu)選地，超聲提取時間為20-60分鐘，更優(yōu)選30分鐘。優(yōu)選地，超聲提取次數(shù)1-5次，更優(yōu)選為2次。超聲波作為一種物理能對瞿麥進行處理，更有利于瞿麥中多糖的提取，一方面，能通過空化作用產(chǎn)生極大的壓力，造成被破碎物的細胞壁甚至整個生物體破裂而使胞內(nèi)物質(zhì)釋放、擴散或溶解出來；另一方面，適宜強度的超聲波能夠使多糖分子的構(gòu)象發(fā)生正向轉(zhuǎn)化，從而提聞多糖的活性。本發(fā)明利用超聲對瞿麥中的多糖進行了提取，通過超聲波處理破碎的瞿麥細胞，對瞿麥細胞中多糖進行提取，同時在提取前加入乙醇以脫脂，即可高得率地獲得純度較高的瞿麥多糖。該法具有使用溶劑少、工藝簡便、條件溫和、易于控制、安全可靠等特點；該法提取效率更高，操作時間短，提 取得率和產(chǎn)物純度均較高。


圖1:對照品和供試品的吸收光波長掃描圖譜，上端曲線為對照品，下端曲線為供試品;圖2:繪制的葡萄糖標準曲線。
具體實施例方式下面對本發(fā)明的實施例進行描述:實施例11、供試品溶液的制備稱取瞿麥粉末5.0g,加入100ml95%乙醇超聲60min，靜置，離心15min，棄去上清液加入IOOml蒸餾水超聲提取，后將提取液離心15min，棄去沉淀，將提取液濃縮至10ml，加入30ml95%乙醇靜置，離心15min，沉淀用蒸餾水溶解定容至100ml，精密吸取上述溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。2、對照品溶液的制備稱取干燥至恒重的葡萄糖對照品5.0g,置250ml容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度，量取上述葡萄糖溶液2ml置250ml容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度搖勻，即得。3、測定波長的確定量取上述葡萄糖對照品溶液1.0ml，供試品溶液1.0ml，分別置于比色管中，用蒸餾水定容至2.0ml，加入5%苯酚溶液0.5ml，滴加濃硫酸至10ml，于40°C水浴中反應(yīng)30min后置于冷水中冷卻，在400nm 800nm進行波長掃描，結(jié)果如圖1所示，吸收光譜顯示對照品和供試品均在484nm處有最大吸收,故選擇484nm作為測定波長。4、標準曲線的繪制分別精密量取上述葡萄糖對照品溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml置具塞比色管中，用蒸懼水定容至2.0ml,加5%苯酹溶液0.5ml,滴加濃硫酸至IOml,于40°C水浴中反應(yīng)30min后置于冷水中冷卻。測定吸光度，結(jié)果如表I所示。以吸光度(A)和溶液濃度(C)進行回歸分析，結(jié)果如圖2所示，回歸方程為A=0.0435C+0.0101 (n=7，r=0.9996)，結(jié)果表明濃度在1.618 ug.mr1 19.44 ug.mF1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。實施例21、多糖提取單因素實驗按供試品溶液的制備方法進行不同料液比，提取溫度，提取時間，提取次數(shù)的單因素實驗，得出多糖提取效果與因素水平的關(guān)系。分別對料液比1:10，1:15，1:20，1:25，1:30的因素進行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)增大料液比會增加多糖溶出量，到達一定比例后明顯減少，結(jié)果如表2所示，因此選擇料液比1:15，1: 20，1:25進行正交試驗；分別對溫度50°C，60°C，70°C，80°C，90°C的因素進行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)溫度升高會增加多糖溶出量，達到一定溫度后繼續(xù)升溫反而減少，結(jié)果如表3所示，因此選擇60°C，7(TC，8(rC進行正交試驗；分別對提取時間20min，30min，40min，50min，60min的因素進行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取時間增長會增加多糖溶出量，到達一定時間后明顯下降，結(jié)果如表4所示，因此選擇提取時間30min，40min, 50min進行正交試驗；分別對提取次數(shù)I次、2次、3次、4次、5次的因素進行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著提取次數(shù)增加多糖溶出量逐漸上升，在達到一定次數(shù)后基本不變，結(jié)果如表5所示，因此選擇提取次數(shù)I次，2次，3次進行正交試驗。表1多糖標準曲線試驗數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.一種從瞿麥中提取多糖的超聲提取方法，包括: 稱取瞿麥粉末，加入95%乙醇超聲，靜置，離心15min，棄去上清液加入蒸餾水超聲提取，后將提取液離心15min，棄去沉淀，將提取液濃縮，加入95%乙醇靜置，離心15min，沉淀用蒸餾水溶解，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:料液比為1:10到1:30之間，優(yōu)選1:20。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:超聲提取溫度為50-90°C，優(yōu)選為60°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:兩次超聲提取時間分別為20-60分鐘，優(yōu)選30分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:超聲提取次數(shù)1-5次，優(yōu)選為2次。
6.一種從瞿麥中提取多糖的超聲提取方法，包括:稱取瞿麥粉末5.0g，加入100ml95%乙醇超聲60min，靜置，離心15min，棄去上清液加入IOOml蒸餾水超聲提取，后將提取液離心15min,棄去沉淀,將提取液濃縮至IOml,加入30ml95%乙醇靜置,離心15min,沉淀用蒸懼水溶 解定容至100ml，精密吸取上述溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從瞿麥中提取多糖的超聲提取方法，以瞿麥為原料，采用超聲波處理破碎的瞿麥細胞，可高得率地獲得純度較高的瞿麥多糖。本實驗運用超聲技術(shù)提取瞿麥中的多糖，結(jié)果獲得的最佳提取工藝條件為料液比1:20，提取溫度60℃，提取時間30min，提取2次，并且在最佳工藝條件下，采用紫外可見分光光度計，運用苯酚-硫酸顯色法測得蒙藥瞿麥中多糖含量為5.463%，實驗結(jié)果表明，該方法簡便靈敏，精密度高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定可靠，可作為瞿麥中多糖的含量測定方法。
文檔編號C08B37/00GK103172758SQ20131008183
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月14日
發(fā)明者陳建平, 朱曉偉, 郭曉宇, 宋麗華, 湯化琪 申請人:內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)