專利名稱：黃芪多糖的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物多糖的提取方法，尤其是一種從中藥黃芪中 提取黃芪多糖的方法。
背景技術(shù)：
隨著畜禽的規(guī)?；曫B(yǎng)，其飼養(yǎng)密度不斷提高。為了降低畜禽的 疾病發(fā)生率、預(yù)防及控制疾病的發(fā)生，大量抗生素和抗病毒藥物在養(yǎng) 殖業(yè)中的使用造成了畜禽產(chǎn)品中藥物的殘留量超標(biāo)。具有耐藥性的病 原微生物不斷滋長，導(dǎo)致了動物自身免疫力的不斷下降，這給畜牧業(yè) 造成了巨大損失。
當(dāng)前，免疫療法這一安全、綠色的治療方法已成為了世界范圍的 業(yè)內(nèi)人士共同尋求的目標(biāo)。因許多中草藥具有提高自身免疫力的功 效，因此，安全、高效、低毒的中草藥提取物正日益被人們所關(guān)注。
免疫療法是一種利用免疫系統(tǒng)來治療疾病的概念。免疫療法通過 增強機體的免疫能力，利用免疫系統(tǒng)的識別、攻擊細菌、外來物及異 常細胞的功能來抵御和治療疾病，其中多糖免疫療法已引起了各國的 高度重視。
自20世紀(jì)70年代以來，科學(xué)家們不斷發(fā)現(xiàn)多糖以及糖復(fù)合物在 生物體中不但作為能源及構(gòu)成生物體的材料存在，而且它還存在于一切細胞膜結(jié)構(gòu)中，參與各類細胞的生命運動，具有多樣化的生物學(xué)功 能。
多糖是一種結(jié)構(gòu)相當(dāng)復(fù)雜的高分子化合物。它所具有的復(fù)雜的、 多途徑、多環(huán)境、多靶點的生物活性與功能，在國際學(xué)術(shù)界被稱為生 物應(yīng)答效應(yīng)物。多糖的成分中以葡聚糖為主，是由P—l， 3葡萄糖
苷鍵結(jié)合的直鏈和e—1， 6葡萄糖苷鍵結(jié)合的支鏈形成一個特殊的 空間結(jié)構(gòu)，使其具有了很好的生理活性。
被制藥界稱為"十藥八芪"的黃芪具有補氣升陽、固表止汗、利 尿消腫、排膿、斂瘡生肌的功效，具有抗氧化、抗病毒、減輕免疫損 傷和免疫雙向調(diào)節(jié)的作用。傳統(tǒng)用于提高人體免疫力等功效。黃芪多 糖是黃芪中最有效的成分之一，具有良好的水溶性。
現(xiàn)有的黃芪多糖的提取方法主要有水提發(fā)和微波法。水提法提取
率低，且步驟復(fù)雜，耗時長，有效成分損失較多；微波法對設(shè)備要求 較高，實施有難度，難以大規(guī)模應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本專利的目的是提供一種黃芪多糖的提取方法，以植物源性中藥 黃芪為主要原料，經(jīng)過解吸一內(nèi)部沸騰兩步提取工藝處理，得到高效 率、高含量的黃芪多糖，可用于增強禽畜自身免疫力。 本發(fā)明的上述目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn) 一種黃芪多糖的提取方法，其特征在于包括以下步驟-1)往黃芪根粉中加入乙醇，靜置30min 60min;2) 以黃芪根粉重量3 5倍的量，加入溫度為60 10(TC的水， 保溫、回流15min 30min，冷卻，過濾，用水反復(fù)清洗，濾液與清 洗液合并，濾餅備用；
3) 往上述濾餅加入1 10倍重量的水，加入酶制劑，控制溫度 為40 6(TC，調(diào)節(jié)pH為中性，酶解1 8h后加熱升溫滅酶，冷卻至 室溫，過濾，清洗，濾餅棄去，合并濾液與清洗液；
4) 合并2、3步驟所得濾液與清洗液，減壓濃縮至原體積的10% 50%，加入95%乙醇進行醇沉，過濾固體，干燥，得黃芪多糖產(chǎn)品。
進一步地，所述的酶為中性纖維素酶、中性蛋白酶或木瓜酶中的 一種或幾種，優(yōu)選為中性纖維素酶。酶的加入量為黃芪根粉的2%。
5%。
更進一步地，步驟1中乙醇的加入量為黃芪根粉重量的1.5 3 倍；步驟2中的保溫時間優(yōu)選為25 min;步驟3中的酶解時間優(yōu)選為 2h。
本發(fā)明針對黃芪這一植物中藥材，采用解吸一內(nèi)部沸騰法(簡稱 兩步法)的提取方法。
本發(fā)明方法選用乙醇溶液為解吸劑，水為提取溶劑，巧妙的利用 第一步解吸過程中所加入的少量解吸劑作為物料黃芪粉末內(nèi)部的低 沸點汽化介質(zhì)，使其在第二步快速加入熱提取溶劑后、在物料內(nèi)部來 不及擴散的情況下瞬間汽化，從而使物料內(nèi)部傳質(zhì)方式發(fā)生了改變。 有效成分由原來的普通分子擴散轉(zhuǎn)變?yōu)閷α鲾U散，從而使得提取速度 明顯加快，且多糖更易溶出。酶解過程一方面可以提取濾餅中殘留存在的纖維中的多糖的提 取，另一方面還能去除蛋白質(zhì)、氨基酸等雜質(zhì)，提高黃芪多糖的純度。
本發(fā)明采用兩步法，相較于傳統(tǒng)的水提法和微波法，其提取速度 及提取率都有了明顯的提高，且保持了黃芪多糖的活性，整個提取過 程耗時短，得率高、雜質(zhì)少、耗能低、是一種綠色、安全、高效的黃 芪多糖的提取方法。本發(fā)明方法也適用于其他植物源性藥物多糖的提 取和制備。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的內(nèi)容作進一步的說明。 實施例1
稱取70g黃芪根粉末置于500ml三口燒瓶中，滴加140ml濃度為 70%乙醇，使物料均勻潤濕，靜置30min。
往上述物料中加入245ml溫度為IO(TC的蒸餾水，用恒溫套保 溫、回流20min，冷卻、過濾；濾餅用40'C熱水反復(fù)沖洗，混合濾液 與清洗液，濾餅備用。
往上述濾餅加入5倍重量的水，加入0.35g中性纖維素酶，控制 溫度為48。C，調(diào)節(jié)pH為中性，酶解2h。酶解結(jié)束后加熱物料升溫 至8(TC，滅酶，冷卻、過濾、清洗，合并濾液與清洗液，濾餅棄去。
合并以上步驟步中所得的濾液與清洗液，減壓濃縮至原體積的 20%，冷卻后用95%乙醇進行醇沉，所得沉淀物過濾，用丙酮清洗沉 淀中殘留的蛋白質(zhì)、纖維素及部分水份，最后干燥，得到黃芪多糖U.15g，計算其得率為15.9%。 實施例2
稱取50g黃芪根粉末置于500ml三口燒瓶中，滴加75ml濃度為 95%乙醇，使物料均勻潤濕，靜置30min。
往上述物料中加入250ml溫度為100°C的蒸餾水，用恒溫套保溫、 回流20min，冷卻、過濾；濾餅用4(TC熱水反復(fù)沖洗，混合濾液與清 洗液，濾餅備用。
往上述濾餅加入10倍重量的水，加入0.5g中性纖維素酶，控制 溫度為5(TC，調(diào)節(jié)pH為中性，酶解5h。酶解結(jié)束后加熱物料升溫 至8(TC，滅酶，冷卻、過濾、清洗，合并濾液與清洗液，濾餅棄去。 合并以上步驟步中所得的濾液與清洗液，減壓濃縮至原體積的20%， 冷卻后用95%乙醇進行醇沉，所得沉淀物過濾，用丙酮清洗沉淀中殘 留的蛋白質(zhì)、纖維素及部分水份，最后干燥，得到黃芪多糖8.84g， 計算其得率為17.7%。 實施例3
稱取65g黃芪根粉末置于500ml三口燒瓶中，滴加140ml濃度為 70%乙醇，使物料均勻潤濕，靜置30miri。
往上述物料中加入200ml溫度為90。C的蒸餾水，用恒溫套保溫、 回流20min，冷卻、過濾；濾餅用4(TC熱水反復(fù)沖洗，混合濾液與清 洗液，濾餅備用。
往上述濾餅加入5倍重量的水，加入0.46g中性纖維素酶，控制溫度為48'C，調(diào)節(jié)pH為中性，酶解2h。酶解結(jié)束后加熱物料升溫 至8(TC，滅酶，冷卻、過濾、清洗，合并濾液與清洗液，濾餅棄去。 合并以上步驟步中所得的濾液與清洗液，減壓濃縮至原體積的20%， 冷卻后用95%乙醇進行醇沉，所得沉淀物過濾，用丙酮清洗沉淀中殘 留的蛋白質(zhì)、纖維素及部分水份，最后干燥，得到黃芪多糖9.34g， 計算其得率為14.4%。
實施例4
稱取65g黃芪根粉末置于500ml三口燒瓶中，滴加140ml濃度為 70%乙醇，使物料均勻潤濕，靜置30min。
往上述物料中加入280ml溫度為7(TC的蒸餾水，用恒溫套保溫、 回流20min，冷卻、過濾；濾餅用40。C熱水反復(fù)沖洗，混合濾液與清 洗液，濾餅備用。
往上述濾餅加入5倍重量的水，加入0.33g中性纖維素酶，控制 溫度為48"C，調(diào)節(jié)pH為中性，酶解2h。酶解結(jié)束后加熱物料升溫 至8(TC，滅酶，冷卻、過濾、清洗，合并濾液與清洗液，濾餅棄去。 合并以上步驟步中所得的濾液與清洗液，減壓濃縮至原體積的20%, 冷卻后用95%乙醇進行醇沉，所得沉淀物過濾，用丙酮清洗沉淀中殘 留的蛋白質(zhì)、纖維素及部分水份，最后干燥，得到黃芪多糖7.66g， 計算其得率為11.8%。實施例5
稱取60g黃芪根粉末置于500ml三口燒瓶中，滴加140ml濃度為 70%乙醇，使物料均勻潤濕，靜置40min。
往上述物料中加入200ml溫度為IO(TC的蒸餾水，用恒溫套保 溫、回流30min，冷卻、過濾；濾餅用4(TC熱水反復(fù)沖洗，混合濾液 與清洗液，濾餅備用。
往上述濾餅加入3倍重量的水，加入1.8g中性蛋白酶，控制溫 度為55°C，調(diào)節(jié)pH為中性，酶解2h。酶解結(jié)束后加熱物料升溫至 80°C,滅酶，冷卻、過濾、清洗，合并濾液與清洗液，濾餅棄去。 合并以上步驟步中所得的濾液與清洗液，減壓濃縮至原體積的30%， 冷卻后用95%乙醇進行醇沉，所得沉淀物過濾，用丙酮清洗沉淀中殘 留的蛋白質(zhì)、纖維素及部分水份，最后干燥，得到黃芪多糖9.69gg， 計算其得率為16.2%。
實施例6
稱取50g黃芪根粉末置于500ml三口燒瓶中，滴加100ml濃度為 95%乙醇，使物料均勻潤濕，靜置30min。
往上述物料中加入250ml溫度為100 °C的蒸餾水，用恒溫套保溫、 回流25min，冷卻、過濾；濾餅用4(TC熱水反復(fù)沖洗，混合濾液與清 洗液，濾餅備用。
往上述濾餅加入7倍重量的水，加入lg木瓜酶，控制溫度為60 °C，調(diào)節(jié)pH為中性，酶解3h。酶解結(jié)束后加熱物料升溫至80°C，滅酶，冷卻、過濾、清洗，合并濾液與清洗液，濾餅棄去。
合并以上步驟步中所得的濾液與清洗液，減壓濃縮至原體積的
20%，冷卻后用95%乙醇進行醇沉，所得沉淀物過濾，用丙酮清洗沉
淀中殘留的蛋白質(zhì)、纖維素及部分水份，最后干燥，得到黃芪多糖
8.42g，計算其得率為16.9%。
權(quán)利要求
1、一種黃芪多糖的提取方法，其特征在于包括以下步驟1)往黃芪根粉中加入乙醇，靜置30min～60min；2)以黃芪根粉重量3～5倍的量，加入溫度為60～100℃的水，保溫、回流15min～30min，冷卻，過濾，用水反復(fù)清洗，濾液與清洗液合并，濾餅備用；3)往上述濾餅加入1～10倍重量的水，加入酶制劑，控制溫度為40～60℃，調(diào)節(jié)pH為中性，酶解1～8h后加熱升溫滅酶，冷卻至室溫，過濾，清洗，濾餅棄去，合并濾液與清洗液；4)合并2、3步驟所得濾液與清洗液，減壓濃縮至原體積的10％～50％，加入95％乙醇進行醇沉，過濾固體，干燥，得黃芪多糖產(chǎn)品。
2、 如權(quán)利要求1所述的黃芪多糖的提取方法，其特征在于所述的酶 為中性纖維素酶、中性蛋白酶或木瓜酶中的一種或幾種，酶的加入量 為黃芪根粉的2%。 5%。
3、 如權(quán)利要求2所述的黃芪多糖的提取方法，其特征在于所述的酶 為中性纖維素酶。
4、 如權(quán)利要求2所述的黃芪多糖的提取方法，其特征在于步驟1中 乙醇的加入量為黃賞根粉重量的L5 3倍。
5、 如權(quán)利要求4所述的黃芪多糖的提取方法，其特征在于步驟2中 的保溫時間為25 min。
6、 如權(quán)利要求5所述的黃芪多糖的提取方法，其特征在于步驟3中 的酶解時間為2h。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種黃芪多糖的提取方法，包括往黃芪根粉中加入乙醇浸潤；加水熱提??；濾餅酶解、滅酶；提取液濃縮、醇沉、干燥等步驟。本發(fā)明方法選用乙醇溶液為解吸劑，水為提取溶劑，采用解吸-內(nèi)部沸騰兩步法，相較于傳統(tǒng)的水提法和微波法，其提取速度及提取率都有了明顯的提高，且保持了黃芪多糖的活性，整個提取過程耗時短，得率高、雜質(zhì)少、耗能低、是一種綠色、安全、高效的黃芪多糖的提取方法。本發(fā)明方法也適用于其他植物源性藥物多糖的提取和制備。
文檔編號C08B37/00GK101619107SQ20091010177
公開日2010年1月6日 申請日期2009年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月17日
發(fā)明者傅錦浩, 陳劍英 申請人:杭州科皇飼料有限公司