專利名稱：用淋巴毒素(lt)途徑抑制物治療濾泡性淋巴瘤的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療腫瘤，尤其治療生發(fā)中心衍生淋巴瘤(濾泡性淋巴瘤)的淋巴毒素途徑抑制物的組合物和治療性應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腫瘤壞死因子(TNF)相關(guān)細(xì)胞因子均可介導(dǎo)宿主防御和免疫調(diào)節(jié)。該家族的成員以膜錨著形式存在，通過細(xì)胞與細(xì)胞間的直接接觸而局部發(fā)揮作用，或作為可擴(kuò)散至更遠(yuǎn)目標(biāo)的分泌蛋白。與之對(duì)應(yīng)的受體家族對(duì)這些分子的存在進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致啟動(dòng)靶組織中細(xì)胞的死亡或增殖和分化。到目前為止，TNF配體和受體家族已經(jīng)認(rèn)識(shí)的受體-配體對(duì)至少11對(duì)，包括TNFTNF-R；LT-αTNF-R；LT-α／βLT-β-R；FasLFas；CD40LCD40；CD30LCD30CD27LCD27；OX40LOX40和4-1BBL4-1BB。
對(duì)TNF家族成員的最佳描述是它是免疫系統(tǒng)中控制細(xì)胞存活和分化的主要開關(guān)。只有TNF和LTα是目前公認(rèn)的分泌型細(xì)胞因子，而TNF家族中的其它成員主要是膜錨著成員。膜形式的TNF已得到很好地鑒別并可能具有獨(dú)特的生物學(xué)意義，而分泌型TNF則可向離觸發(fā)事件更遠(yuǎn)處的細(xì)胞發(fā)出一般性警告信號(hào)。因此，TNF的分泌可使事件放大，導(dǎo)致血管內(nèi)層(vasculature lining)已詳盡描述的變化和細(xì)胞的炎性狀態(tài)。與之對(duì)照，家族中的膜結(jié)合成員只對(duì)直接接觸的細(xì)胞通過TNF型受體傳送信號(hào)。例如，T細(xì)胞只對(duì)通過同源TCR相互作用而直接接觸的那些B細(xì)胞提供CD40介導(dǎo)的“輔助作用”。類似的細(xì)胞與細(xì)胞直接接觸對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞死亡之能力的限制適用于已得到深入研究的Fas系統(tǒng)。
大多數(shù)膜相關(guān)LTα／β復(fù)合物(“表面LT”)具有LTα1／β2的化學(xué)配比。(Browning等，細(xì)胞，72，第847-56頁(1993)；Browning等，免疫學(xué)雜志，154，第33-46頁(1995))。表面LT配體與TNF-R不以高親和力結(jié)合，而且不能活化TNF-R的信號(hào)傳遞。但LTβ受體(LTβ-R)能與這些表面淋巴毒素復(fù)合物以高親和力結(jié)合(Crowe等，科學(xué)264，第707-10頁(1994))。
LTβ-R的信號(hào)傳遞象TNF-R的信號(hào)傳遞一樣，具有抗增殖效應(yīng)并對(duì)腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒性。在申請(qǐng)人的共同未決的美國(guó)專利申請(qǐng)流水號(hào)08／378，968中，公開了用LTβ-R活化劑選擇性刺激LTβ-R的組合物和方法。LTβ-R活化劑對(duì)抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)很有效，但不會(huì)協(xié)同刺激TNF-R誘導(dǎo)的促炎途徑或免疫調(diào)節(jié)途徑。
近期的基因打靶研究提示LTα／β在次級(jí)淋巴器官發(fā)育中有作用。(Banks等，免疫學(xué)雜志，155，第1685-1693頁(1995)；De Togni等，科學(xué)，264，第703-706頁(1994))。事實(shí)上，LTα缺陷型小鼠缺乏淋巴結(jié)(LN)和淋巴集結(jié)(PP)。此外，它們的脾臟體系結(jié)構(gòu)被瓦解，脾邊緣區(qū)細(xì)胞上的功能性標(biāo)志物的表達(dá)被改變。(Banks等，1995；De Togni等，科學(xué)，264，第703-706頁(1994)，Matsumoto等，科學(xué)，271，第1289-1291頁(1996))。這些特征無一出現(xiàn)在對(duì)任一種TNF受體基因敲除小鼠的描述中。(Erickson等，自然，372，第560-563頁(1994)；Pfeffer等，細(xì)胞73，第457-467頁(1993)；Rothe等，自然，364，第798-802頁(1993))。申請(qǐng)人最近的研究顯示，在懷孕期接受了可溶形式的、與人類IgG1 Fc部分融合的小鼠LTβ-R(LTβ-R-Ig)注射的小鼠，其后代缺乏大部分淋巴結(jié)并顯示脾臟結(jié)構(gòu)瓦解，從而確定了膜LTα／β復(fù)合物在次級(jí)淋巴器官發(fā)育中的作用。(Rennert等，1996，“表面淋巴毒素α／β復(fù)合物是外周淋巴器官發(fā)育所必需的”，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，1841999-2006)。在另一項(xiàng)研究中，在出生3天后開始表達(dá)的類似LTβ-R-Ig構(gòu)建體的轉(zhuǎn)基因小鼠顯示有LN。但它們的脾臟結(jié)構(gòu)被瓦解，而且脾邊緣區(qū)細(xì)胞的數(shù)種標(biāo)志物沒有表達(dá)(Ettinger等，“表達(dá)可溶性LTβ-R／IgG1融合蛋白的小鼠體內(nèi)脾臟結(jié)構(gòu)被瓦解，但有正常的淋巴結(jié)發(fā)育”，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)，9313102-7)。所有這些數(shù)據(jù)說明，對(duì)膜LT功能有一個(gè)時(shí)間性要求，以達(dá)到對(duì)次級(jí)淋巴器官發(fā)育的影響，但對(duì)脾臟結(jié)構(gòu)的作用沒這樣的要求。
TNF系統(tǒng)還可能在脾臟的發(fā)育中起作用。TNF缺陷型小鼠的脾邊緣區(qū)細(xì)胞不表達(dá)巨噬細(xì)胞標(biāo)志物或MAdCAM-1(Alexopoulou等，第60屆國(guó)際TNF大會(huì)，歐洲細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，第228頁(1996)；Pasparakis等，第60屆國(guó)際TNF大會(huì)，歐洲細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，第239頁(1996))。TNF-R55缺陷型小鼠脾邊緣區(qū)也缺乏MAdCAM-1染色(但不缺乏MOMA-1)。(Neumann等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，184，第259-264頁(1996)，Matsumoto等，科學(xué)，271，第1289-1291頁(1996))。如在TNF-R75缺陷型小鼠脾臟中所見，這些標(biāo)志物的表達(dá)表現(xiàn)正常。(Matsumoto等，科學(xué)，271，第1289-1291頁(1996))。
淋巴樣組織不只作為發(fā)育過程的一部分而產(chǎn)生，還在某些病理情況如慢性炎癥，一種最近稱為新淋巴器官發(fā)生(neolymphoorganogenesis)的過程中出現(xiàn)。(Picker＆Butcher，免疫學(xué)年鑒，10，第561-591頁(1992)，Kratz等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，183，第1461-1471頁(1996))。TNF家族成員明顯對(duì)這類過程有影響。由大鼠胰島素啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的LTα基因(RIP-LT)的轉(zhuǎn)基因小鼠出現(xiàn)LT誘導(dǎo)的慢性炎性損傷，其特征為出現(xiàn)有組織的淋巴組織。(Kratz等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，1183，第1461-1471頁(1996)；Picarella等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)，89，第10036-10040頁(1992))。
用LTα缺陷型小鼠對(duì)依賴T細(xì)胞的免疫應(yīng)答期間LT功能的評(píng)估顯示，LT對(duì)于GC形成、可能維持有組織的濾泡樹突細(xì)胞(FDC)結(jié)構(gòu)和體液免疫應(yīng)答是必需的。(Banks等，免疫學(xué)雜志，155，第1685-1693頁(1995)；Matsumoto等，科學(xué)，271，第1289-1291頁(1996)；Matsumoto等，自然，382，第462-466頁(1996))。TNF-R55缺陷型小鼠也缺乏FDC，不能形成GC，也不能對(duì)綿羊紅細(xì)胞(SRBC)產(chǎn)生最佳抗體應(yīng)答。這說明，在大多數(shù)這類應(yīng)答中，TNF-R55可能通過可溶性LT或TNF信號(hào)而被觸發(fā)(Le Hir等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，183，第2367-2372頁(1996)，Alexopoulou等，第60屆國(guó)際TNF大會(huì)，歐洲細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，第228頁(1996)；Pasparakis等，第60屆國(guó)際TNF大會(huì)，歐洲細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，第239頁(1996))。
LTβ受體，作為TNF家族的受體成員，可特異性結(jié)合表面LT配體。LTβ-R可結(jié)合LT異聚體復(fù)合物(主要是LTα1／β2和LTα2／β1)但不結(jié)合TNF或LTα(Crowe等，科學(xué)，264，第707-10頁(1994))。LTβ-R mRNA在人類脾臟、胸腺和與免疫系統(tǒng)有關(guān)的普通器官中出現(xiàn)。盡管對(duì)LTβ-R表達(dá)的研究還處于早期，LTβ-R表達(dá)模式似乎與TNF-R55的有關(guān)報(bào)道相似，只是LTβ-R很少在外周血T和B細(xì)胞以及T和B細(xì)胞系中出現(xiàn)。
細(xì)胞表面淋巴毒素(LT)復(fù)合物已在表達(dá)高水平LT的CD4+T細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞(II-23．D7)中得到鑒別(Browning等，免疫學(xué)雜志，147，第1230-37頁(1991)；Androlewicz等，生物化學(xué)雜志，267，第2542-47(1992)，兩篇文獻(xiàn)均全文引入本文作為參考)。LTβ-R、LT亞單位和表面LT復(fù)合物的表達(dá)和生物學(xué)功能已由C．F．Ware等，“淋巴毒素系統(tǒng)的配體和受體”，在細(xì)胞裂解途徑，微生物學(xué)及免疫學(xué)最新課題一書中，Springer-Verlag，第175-218頁(1995)綜述，特別引入本文作為參考。
LTα的表達(dá)受誘導(dǎo)，LTα主要由活化T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞以及自然殺傷(NK)細(xì)胞分泌。在T輔助細(xì)胞群中，LTα似乎由Th1而非Th2細(xì)胞產(chǎn)生。LTα也可在黑色素細(xì)胞中測(cè)出。多發(fā)性硬化癥病人損傷處的小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和T細(xì)胞也可用抗LTα抗血清染色(Selmaj等，臨床調(diào)研雜志，87，第949-954頁(1991))。
淋巴毒素β(亦稱p33)表達(dá)在人類和小鼠T淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞系、B細(xì)胞系和淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞(LAK)的細(xì)胞表面。LTβ是申請(qǐng)人的共同未決的、于1992年1月9日作為WO92／00329公開的國(guó)際專利申請(qǐng)PCT／US91／04588和于1994年6月23日作為WO94／13808公開的國(guó)際專利申請(qǐng)PCT／US93／11669(均引入本文作為參考)的主題。
表面LT復(fù)合物主要由活化的T淋巴細(xì)胞(T輔助細(xì)胞、Th1和殺傷細(xì)胞)和B淋巴細(xì)胞以及自然殺傷細(xì)胞(NK)表達(dá)，如FACS分析或用抗LT抗體或可溶性LTβ-R-Ig融合蛋白進(jìn)行的免疫組化分析所確定的那樣。在申請(qǐng)人共同未決的于1995年7月21日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)流水號(hào)08／505，606中，公開了用可溶性LTβ受體和抗LTβ受體和配體特異性抗體作為治療劑用于治療由Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性疾病的組合物和方法。表面LT還出現(xiàn)在人類細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)克隆上、活化的外周血單核淋巴細(xì)胞(PML)上、IL-2活化的外周血淋巴細(xì)胞(LAK細(xì)胞)上、美洲商陸有絲分裂原活化的或抗CD40活化的外周血B淋巴細(xì)胞(PBL)上和T、B細(xì)胞譜系的各種淋巴樣腫瘤上。帶同種抗原的靶細(xì)胞的參與通過CD8+和CD4+CTL克隆而特異性誘導(dǎo)表面LT表達(dá)。
申請(qǐng)人已在本文中描述了表面LT的數(shù)種免疫學(xué)功能，并顯示了LTα／β結(jié)合劑對(duì)免疫球蛋白應(yīng)答的產(chǎn)生和特征、次級(jí)淋巴組織細(xì)胞組構(gòu)的維持(包括對(duì)濾泡樹突細(xì)胞分化狀態(tài)的影響以及對(duì)生發(fā)中心形成的影響)、及影響細(xì)胞交流的地址素(addressin)表達(dá)水平的效應(yīng)。申請(qǐng)人說明了表面LTα／β以及LTα受體結(jié)合劑的治療性應(yīng)用。
研究表明，B細(xì)胞遇到各種抗原后在淋巴結(jié)(LN)和脾臟中活化。在稱為生發(fā)中心、形成于LN和脾臟的B細(xì)胞富集區(qū)的特殊結(jié)構(gòu)中，B細(xì)胞變得成熟并形成記憶性B細(xì)胞1。B細(xì)胞在其發(fā)育階段的大多數(shù)時(shí)候可轉(zhuǎn)化成腫瘤2。B細(xì)胞的轉(zhuǎn)化導(dǎo)致淋巴瘤，那些由生發(fā)中心的B細(xì)胞衍生的淋巴瘤常稱為濾泡性淋巴瘤。對(duì)各種淋巴瘤亞型的準(zhǔn)確描述仍在變化，因?yàn)樵絹碓蕉嗟谋砻鏄?biāo)志物被發(fā)現(xiàn)，使得可對(duì)細(xì)胞起源作更精確的命名。濾泡性淋巴瘤可根據(jù)B細(xì)胞增殖的階段或類型分為數(shù)個(gè)亞群，其預(yù)后因細(xì)胞類型的不同而各異。常規(guī)化療方案能使大多數(shù)有低級(jí)類型細(xì)胞的病人治愈。然而，這些病人中一部分對(duì)化療不敏感，預(yù)后很差。
因此，盡管對(duì)腫瘤的治療已取得一定進(jìn)展，仍需要針對(duì)通?？够煹哪切┠[瘤，尤其濾泡性淋巴瘤的治療方法，還需要相對(duì)于現(xiàn)有治療具有較小副作用的治療方案。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明提供用于治療腫瘤如濾泡性淋巴瘤的方法和組合物，它們克服了現(xiàn)有治療的某些問題，并為抗傳統(tǒng)化療的腫瘤病人提供了替代療法。
在特定實(shí)施方案中，要求保護(hù)的本發(fā)明涉及對(duì)患有濾泡性淋巴瘤的受試者進(jìn)行治療的方法，該方法包括給予受試者有效量的、可阻斷LT-α／β異聚體與其受體相互作用的組合物。各種實(shí)施方案中優(yōu)選的組合物包括，但不限于，可溶性淋巴毒素-β受體、針對(duì)LT-β受體的抗體、以及針對(duì)表面LT配體的抗體。更優(yōu)選為帶有可選擇性結(jié)合表面LT配體的配體結(jié)合區(qū)的可溶性淋巴毒素-β受體，如與人類免疫球蛋白Fc區(qū)融合的可溶性LTβ-R形式。另外，優(yōu)選的組合物包括針對(duì)LT-β受體的單克隆抗體，包括人源化抗體、嵌合抗體或其它已改變形式的抗體。
在本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，所要求專利保護(hù)的權(quán)利包括對(duì)患有濾泡性腫瘤的受試者進(jìn)行治療的方法，其中持續(xù)給予阻斷劑直至發(fā)現(xiàn)腫瘤退化或腫瘤生長(zhǎng)受抑制為止。在某些實(shí)施方案中，LT途徑的阻斷劑與其它已知可用于處理腫瘤的試劑，如化療劑聯(lián)合應(yīng)用。此外，本發(fā)明的方法可能在某些實(shí)施方案中進(jìn)一步包含對(duì)受試者進(jìn)行放療或骨髓移植。
在其它實(shí)施方案中，所要求專利保護(hù)的方法包括聯(lián)合給與LTβ-R阻斷劑與TNF家族其它成員的途徑阻斷劑。例如，TNF阻斷劑可與已要求權(quán)利的本發(fā)明的阻斷劑同時(shí)或相繼聯(lián)合給藥。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供用于治療腫瘤，如濾泡性腫瘤，尤其濾泡性淋巴瘤的方法和組合物。
術(shù)語“免疫球蛋白應(yīng)答”或“體液應(yīng)答”在本文中指動(dòng)物針對(duì)外來抗原產(chǎn)生相應(yīng)抗體的免疫應(yīng)答。T輔助細(xì)胞中Th2亞類對(duì)高親和力抗體的有效產(chǎn)生十分重要。
術(shù)語“生發(fā)中心”在本文中指抗原免疫后形成的次級(jí)B細(xì)胞濾泡。這一組織學(xué)部位的出現(xiàn)與最佳記憶的產(chǎn)生、同種型轉(zhuǎn)換、體細(xì)胞超變和因此而致的抗體應(yīng)答的親和力成熟有關(guān)。
術(shù)語“邊緣區(qū)”或“邊緣區(qū)類型區(qū)域”指組織學(xué)描述的次級(jí)淋巴組織區(qū)間，主要包括邊緣區(qū)巨噬細(xì)胞(MZM)、嗜金屬巨噬細(xì)胞(MM)、邊緣區(qū)B細(xì)胞和網(wǎng)狀細(xì)胞，以及T細(xì)胞和樹突細(xì)胞。動(dòng)脈血流經(jīng)邊緣竇，從而使抗原直接接觸這些細(xì)胞并在此部位刺激針對(duì)抗原的細(xì)胞反應(yīng)。
術(shù)語“T輔助(Th)細(xì)胞”在本文中指T細(xì)胞中輔助產(chǎn)生細(xì)胞毒T細(xì)胞并與B細(xì)胞合作刺激抗體產(chǎn)生的功能性亞類。輔助T細(xì)胞識(shí)別II類MHC分子相關(guān)性抗原并向效應(yīng)細(xì)胞提供接觸依賴性和接觸非依賴性信號(hào)(細(xì)胞因子)。
術(shù)語抗體的“Fc區(qū)”指該分子中包含鉸鏈區(qū)、CH2區(qū)和CH3區(qū)，但缺乏抗原結(jié)合位點(diǎn)的部分。該術(shù)語還包括IgM或其它同種型抗體等價(jià)區(qū)。
術(shù)語“抗LTβ受體抗體”指特異性結(jié)合LTβ受體至少一個(gè)表位的任何抗體。
術(shù)語“抗LT抗體”指特異性結(jié)合LTα、LTβ或LTα／β復(fù)合物的至少一個(gè)表位的任何抗體。
術(shù)語“LTβ-R信號(hào)傳遞”指與LTβ-R途徑有關(guān)的分子反應(yīng)和由此引起的后續(xù)分子反應(yīng)。
術(shù)語“LTβR阻斷劑”指能減少配體結(jié)合LTβ-R、細(xì)胞表面LTβ-R聚集或LTβ-R信號(hào)傳遞，或可影響LTβ-R信號(hào)在細(xì)胞內(nèi)的編輯過程的試劑。
在配體-受體結(jié)合時(shí)發(fā)揮作用的LTβ-R阻斷劑可使LT配體與LTβ-R的結(jié)合抑制至少20％。LTβ-R阻斷劑的實(shí)例包括可溶性LTβ-R-Fc分子、抗LTα、抗LTβ、抗LTα／β和抗LTβ-R的抗體。優(yōu)選地，這些抗體不與分泌型LTα交叉反應(yīng)。
術(shù)語“LTβ-R生物活性”指1)LTβ-R分子或衍生物與可溶性或表面LTβ-R分子競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合可溶性或表面LT配體的能力；或2)天然LT活性如刺激免疫調(diào)節(jié)應(yīng)答或細(xì)胞毒活性的能力。
術(shù)語“LT配體”指可特異性結(jié)合LTβ受體的LTα／β異聚體復(fù)合物或其衍生物。
術(shù)語“LTβ-R配體結(jié)合區(qū)”指LTβ-R上涉及特異性識(shí)別LT配體以及與LT配體相互作用的一個(gè)或多個(gè)部分。
術(shù)語“表面LT”和“表面LT復(fù)合物”指展示于細(xì)胞表面上的包含LTα和膜結(jié)合LTβ亞單位…包括一或多種亞單位的突變體、修飾形式或嵌合形式…的復(fù)合物?！氨砻鍸T配體”指可特異性結(jié)合LTβ受體的表面LT復(fù)合物或其衍生物。
術(shù)語“受試者”指動(dòng)物，或來自動(dòng)物的一或多個(gè)細(xì)胞。優(yōu)選該動(dòng)物是哺乳動(dòng)物。細(xì)胞可以是任何形式，包括但不限于保留在組織中的細(xì)胞、細(xì)胞簇、無限增殖細(xì)胞、轉(zhuǎn)染細(xì)胞或轉(zhuǎn)化細(xì)胞、來自已被生理性或表型性改變之動(dòng)物的細(xì)胞。
如上述，B細(xì)胞的轉(zhuǎn)化導(dǎo)致淋巴瘤，生發(fā)中心(淋巴結(jié)和脾臟的B細(xì)胞富集區(qū)中發(fā)現(xiàn)的特殊結(jié)構(gòu))衍生的B細(xì)胞的轉(zhuǎn)化均稱為濾泡性淋巴瘤。生發(fā)中心B細(xì)胞的成熟和增殖需要特定環(huán)境，而濾泡樹突細(xì)胞為生發(fā)中心的B細(xì)胞提供抗原并很可能還有可觸發(fā)成熟、存活和增殖的特定信號(hào)。對(duì)可自發(fā)形成網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤(RCS，這類腫瘤的早期命名)的SJL小鼠的研究得到可移植也可體外生長(zhǎng)的RCS細(xì)胞系(CRCS)，它們可作為宿主與腫瘤相互作用的模型3，4。這些RCS常在SJL小鼠的LN中發(fā)生并常為異質(zhì)性，其中包含各種造血干細(xì)胞。很多跡象表明，這些淋巴瘤均源自生發(fā)中心，并需要由宿主提供各種信號(hào)或因子才能存活和增殖5，6。對(duì)這些存活信號(hào)進(jìn)行處理的能力為控制這些腫瘤的生長(zhǎng)提供了一種方法。
據(jù)信一種稱之為濾泡樹突細(xì)胞(FDC)的細(xì)胞類型在生發(fā)中心的形成和功能中起最重要作用。已知很多不同因素涉及生發(fā)中心B細(xì)胞的存活和維持。值得注意的是，細(xì)胞因子中TNF家族成員均為信號(hào)傳遞的表面配體，均相關(guān)于B細(xì)胞側(cè)如CD40和FDC側(cè)如TNF以及淋巴毒素(LT)受體。有LT或TNF軸缺陷的小鼠，其FDC也有缺陷并因此缺乏生發(fā)中心7。據(jù)信TNF軸是FDC發(fā)育的關(guān)鍵，但可能還有下游作用。LT軸似乎對(duì)維持FDC的功能狀態(tài)更為關(guān)鍵。LT系統(tǒng)涉及將信號(hào)從各種配體陽性淋巴細(xì)胞傳遞至很可能是非骨髓來源，即可能是FDC衍生的受體陽性細(xì)胞，從而使FDC保持具有完全功能的成熟狀態(tài)。申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，用如LT配體的抗體或可溶性受體-免疫球蛋白融合蛋白阻斷這一途徑，可導(dǎo)致成熟FDC的喪失(Mackay＆Browning，1998自然，第395卷，第26-27頁，“關(guān)閉濾泡樹突細(xì)胞”)。此外，對(duì)LT途徑的抑制將導(dǎo)致生發(fā)中心不能形成以及脾臟的某種程度的瓦解8。
申請(qǐng)人首次在本文中稱，LT途徑抑制物可阻斷濾泡性B細(xì)胞淋巴瘤與其環(huán)境，即FDC間的相互作用，并使腫瘤生長(zhǎng)減慢或受阻。因此，這類抑制物可用于處理難治的淋巴瘤或作為主要療法，或作為傳統(tǒng)化療方案的補(bǔ)充療法。特別地，盡管本領(lǐng)域有人提出，腫瘤治療中可以涉及LT途徑的活化，但申請(qǐng)人很驚訝地發(fā)現(xiàn)，對(duì)LT途徑的暫時(shí)性阻斷可使腫瘤，包括如濾泡性淋巴瘤的生長(zhǎng)減慢或受阻。
本發(fā)明的范圍較廣的實(shí)施方案中包含有對(duì)患腫瘤或淋巴瘤，特別是濾泡性淋巴瘤的受試者，通過給予有效量的、可抑制LT途徑的組合物而進(jìn)行治療的方法。具有的抑制組合物可包括可溶性LT-β受體、含LTβ-R的融合蛋白、LTβ-R的抗體和LT配體的抗體。這類抑制組合物優(yōu)選包括藥學(xué)可接受的載體。優(yōu)選應(yīng)用中的受試者為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選為人類。
本發(fā)明的方法包括，對(duì)受試者給予本發(fā)明的組合物直至腫瘤出現(xiàn)一定程度的退化或抑制。治療時(shí)間差異很大，整個(gè)療程可能持續(xù)數(shù)周至數(shù)月，或?qū)δ承┎±赡軙r(shí)間更長(zhǎng)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能確定何時(shí)腫瘤出現(xiàn)退化或受阻，并且任何已知方法均可使用。用FACS標(biāo)志物對(duì)B淋巴瘤的進(jìn)一步亞型分類已大大改進(jìn)，可以預(yù)計(jì)某些亞型的淋巴瘤對(duì)這類治療可能很敏感。
其它免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)分子如TNF家族其它成員也可能與免疫器官結(jié)構(gòu)的維持有關(guān)，并因此可為淋巴瘤增生提供適宜環(huán)境。因此，對(duì)LT和其它途徑的聯(lián)合抑制可能對(duì)某些受試者是有效治療。例如，有的人可以結(jié)合使用LT途徑抑制物及例如，CD40／CD40配體途徑的阻斷劑?？勺钄嗄繕?biāo)途徑的任何組合物均可應(yīng)用，如，抗體、可溶性配體或受體。優(yōu)選將LT途徑抑制物與抗CD40配體之抗體聯(lián)合給藥。若給予TNF成員途徑的不止一種阻斷劑，則這些組合物可基本同時(shí)給予，或者，一種阻斷劑可緊隨另一種阻斷劑給予。本領(lǐng)域技術(shù)人員可很容易根據(jù)待治療的具體腫瘤以及受試者的情況確定針對(duì)具體受試者的最有效治療。
常規(guī)化療方案可用來消除本發(fā)明組合物治療后殘余的腫瘤實(shí)體，或在某些病例中二者可同時(shí)使用，或在本發(fā)明組合物之前使用。LT途徑抑制物可在開始常規(guī)化療方案之前用于阻止淋巴瘤生長(zhǎng)。似乎生長(zhǎng)／存活刺激信號(hào)的喪失可使淋巴瘤對(duì)化療劑更敏感，因此優(yōu)選在給予傳統(tǒng)化療劑之前先給予LT途徑抑制物。
實(shí)施例1用LT途徑抑制物治療SJL RCS腫瘤，使總LN／腫瘤體積減小用0．3-0．4mg小鼠LTBR-hIgG1融合蛋白經(jīng)腹膜內(nèi)給藥途徑處理SJL小鼠，給藥在腫瘤移植的3天前(D-3)，移植當(dāng)天(D0)，或移植的3天后(D3)進(jìn)行。腫瘤移植基本按文獻(xiàn)進(jìn)行9。5×106個(gè)已耗盡T細(xì)胞的RCS細(xì)胞經(jīng)靜脈注射，使之接種于器官內(nèi)并生長(zhǎng)。5-7天后，解剖腸系膜LN、臂LN和腋下LN并計(jì)算它們的重量相對(duì)于總體重的百分率。表I顯示，所有實(shí)驗(yàn)中LN大小均減小。3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中有1項(xiàng)脾臟的大小也減小，但脾臟重量的減少不明顯。LN重量的減小從單劑治療的約50％至多劑治療的80-90％不等。
表ILTBR-Ig對(duì)正常SJL小鼠體內(nèi)RCS生長(zhǎng)的抑制效應(yīng)用以下藥物注射的小鼠(天劑量mg) LNWta(n) p 脾臟重量a(n) p實(shí)驗(yàn)1huIgG對(duì)照(5天后處死) 2．70+／-0．37(7) 3．18+／-0．37(7)mLTβR-Igc(D 0，+30．4，0．3) 1．42+／-0．15(4)＜0001 3．29+／-0．18(4) NSb實(shí)驗(yàn)2huIgG對(duì)照(7天后殺死) 3．35+／-0．21(3) 4．04+／-0．34(3)mLTβR-Ig(D 0，+3；0．3，0．2) 2．37+／-0．24(4)0．00243．04+／-0．19(4) 0．004↓實(shí)驗(yàn)3huIgG對(duì)照(6天后殺死) 2．34+／-0．11(5) 2．93+／-0．57(5)mLTβR-Ig(D-30．4) 1．10+／-0．38(3) 0．0024 2．27+／-1．39(3) NSmLTBR-Ig(D-3，00．4，0．3) 0．78+／-0．02(3)＜0．0001 3．95+／-0．53(3) 0．046↑mLTβR-Ig(D00．3) 0．92+／-0．10(3)＜0．0001 3．25+／-0．15(3)NSa以總體重百分率表示的器官重量。未處理的LN重量通常為總體重的0．5％。
bNS=不顯著。
cmLTBR-Ig為mLTBR胞外區(qū)與hIgG1的CH2和CH3區(qū)的融合蛋白。
在其它實(shí)施方案中，可同時(shí)、或先于或后于放療而給予LT途徑的抑制物。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，根據(jù)個(gè)體差異如病人的情況和待治療的腫瘤，何為優(yōu)選療法是很明顯的。
抑制性抗LTβ-R抗體和其它LT-β-R阻斷劑可用本領(lǐng)域前述方法鑒定。(共同未決的美國(guó)專利申請(qǐng)流水號(hào)08／378，968)。
本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中的LTβ-R阻斷劑包含可溶性LT-β受體分子。已知人類LTβ-R胞外部分的序列編碼配體結(jié)合區(qū)(見

圖1)。應(yīng)用圖1所示序列資料及本領(lǐng)域已知的重組DNA技術(shù)，可將編碼LTβ-R配體結(jié)合區(qū)的功能性片段克隆至載體中并在適當(dāng)宿主中表達(dá)，從而產(chǎn)生可溶性LTβ-R分子。
包含選自圖1所示氨基酸序列的可溶性LT-β受體可連接一或多個(gè)異源蛋白區(qū)(“融合區(qū)”)以提高受體融合蛋白的體內(nèi)穩(wěn)定性，或調(diào)節(jié)其生物活性或定位。
優(yōu)選地，可用穩(wěn)定的血漿蛋白(通常血循環(huán)半衰期超過20個(gè)小時(shí))構(gòu)建受體融合蛋白。這類血漿蛋白包括但不限于免疫球蛋白、血清白蛋白、脂蛋白、載脂蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白。還可將能夠引導(dǎo)可溶性LTβ-R分子靶向特定類型細(xì)胞或組織的序列與LTβ-R配體結(jié)合區(qū)連接以產(chǎn)生特異性定位的可溶性LTβ-R融合蛋白。
包含LTβ-R配體結(jié)合區(qū)的LTβ-R整個(gè)胞外區(qū)或其功能性部分(圖1)可與免疫球蛋白恒定區(qū)如人類IgG1重鏈Fc區(qū)融合(Browning等，免疫學(xué)雜志，154，第33-46頁(1995))。優(yōu)選可溶性受體-IgG融合蛋白，它們是常用的免疫學(xué)試劑，它們的構(gòu)建方法為本領(lǐng)域已知(參見如，已全文引入作為參考的美國(guó)專利第5，225，538號(hào))。
功能性LTβ-R配體結(jié)合區(qū)可與衍生自除IgG1以外的其它免疫球蛋白類或亞類的免疫球蛋白(Ig)Fc區(qū)融合。抗體中屬于不同Ig類或亞類的Fc區(qū)可活化多種次級(jí)效應(yīng)物的功能?；罨饔冒l(fā)生在Fc區(qū)被相應(yīng)Fc受體結(jié)合時(shí)。次級(jí)效應(yīng)物功能包括活化補(bǔ)體系統(tǒng)的能力、通過胎盤的能力及與各種微生物蛋白質(zhì)結(jié)合的能力。
損傷或殺死帶LT配體的靶細(xì)胞如果是有利的，則可選擇活性很強(qiáng)的Fc區(qū)(IgG1)制備LTβ-R-Fc融合蛋白?；蛘撸粝Ｍ麑Tβ-R-Fc融合體靶向細(xì)胞而不激活補(bǔ)體系統(tǒng)，則可選擇失活的IgG4 Fc區(qū)。
使結(jié)合Fc受體和活化補(bǔ)體的能力減小或消除的Fc區(qū)突變已有報(bào)道(S．Morrison，免疫學(xué)年鑒，10，第239-65頁(1992))。這些或其它突變可單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用，以使用于構(gòu)建LTβ-R-Fc融合蛋白的Fc區(qū)具有最佳活性。
構(gòu)成受體-Ig融合蛋白連接點(diǎn)的不同氨基酸殘基可改變可溶性LT-β受體融合蛋白的結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性及最終生物活性。可在所選LTβ-R片段的C末端添加一或多個(gè)氨基酸以修飾與所選融合區(qū)的連接點(diǎn)。
LTβ-融合蛋白的N末端的變化也可通過改變所選LTβ-R DNA片段5’端將被切割以插入重組表達(dá)載體的位點(diǎn)而實(shí)現(xiàn)。每種LTβ-R融合蛋白的穩(wěn)定性和活性可進(jìn)行檢驗(yàn)，并用常規(guī)實(shí)驗(yàn)和用于篩選本文所述LTβ-R阻斷劑的試驗(yàn)優(yōu)化。
應(yīng)用圖1所示LTβ-R胞外區(qū)內(nèi)部的配體結(jié)合區(qū)序列，還可構(gòu)建氨基酸序列變體以改變可溶性LT-β受體或融合蛋白對(duì)LT配體的親和力。本發(fā)明可溶性LTβ-R分子可與內(nèi)源性細(xì)胞表面L1-β受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合表面LT配體?？梢岳斫猓膳c細(xì)胞表面LT-β受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合LT配體的LTβ-R配體結(jié)合區(qū)的任何可溶性分子即是包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的LTβ-R阻斷劑。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，針對(duì)人類LT-β受體的抗體(抗LT-β-R抗體)可作為L(zhǎng)Tβ-R阻斷劑發(fā)揮作用。本發(fā)明的抗LTβ-R抗體可以是多克隆或單克隆形式(mAb)，并可經(jīng)修飾使它們的阻斷LTβ-R信號(hào)傳遞之能力、體內(nèi)生物可用性、穩(wěn)定性或其它所需特性最優(yōu)化。
針對(duì)人類LT-β受體的多克隆抗體血清可用常規(guī)技術(shù)制備，即對(duì)諸如山羊、兔、大鼠、倉(cāng)鼠或小鼠之類的動(dòng)物皮下注射人類LT-β受體-Fc融合蛋白(實(shí)施例1)的完全弗氏佐劑制劑，接著用不完全弗氏佐劑制劑經(jīng)腹膜內(nèi)或皮下加強(qiáng)注射。含所需針對(duì)LT-β受體之抗體的多克隆抗血清通過常規(guī)免疫學(xué)方法篩選。
針對(duì)人類LT-β受體-Fc融合蛋白的小鼠單克隆抗體(mAb)如實(shí)施例5所述制備。產(chǎn)生小鼠抗人LT-β-R mAb BDA8的雜交瘤細(xì)胞系(BD．A8．AB9)已根據(jù)布達(dá)佩斯條約的規(guī)定，于1995年1月12日保藏于美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)(Rockville，MD)，保藏號(hào)為ATCC錄入號(hào)HB11798。對(duì)公眾使用上述ATCC保藏物的所有限制在本專利申請(qǐng)得到授權(quán)后都將不復(fù)存在。
應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA技術(shù)還可制備抗LTβ-R抗體的各種形式(Winter＆Milstein，自然，349，第293-99頁(1991))。例如，可構(gòu)建“嵌合抗體”，其中將動(dòng)物抗體的抗原結(jié)合區(qū)與人類恒定區(qū)相連(如Cabilly等，美國(guó)專利第4，816，567號(hào)；Morrison等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)，81，第6851-55頁(1984))。嵌合抗體可減少動(dòng)物抗體用于人類臨床治療時(shí)出現(xiàn)的免疫應(yīng)答。
此外，可合成識(shí)別LT-β-R的重組“人源化抗體”。人源化抗體是主要包含人類IgG序列、但其中已插入了負(fù)責(zé)特異性抗原結(jié)合的區(qū)域的嵌合體(如WO94／04679)。用所選抗原免疫動(dòng)物、分離相應(yīng)抗體、取出可變區(qū)序列中負(fù)責(zé)特異性抗原結(jié)合的部分。然后將動(dòng)物源性抗原結(jié)合區(qū)克隆至已刪除抗原結(jié)合區(qū)的人類抗體基因中的相應(yīng)部位。人源化抗體使人類抗體中異源(種間)序列的應(yīng)用減至最小，更不太可能在接受處理的受試者體內(nèi)激發(fā)免疫應(yīng)答。
不同類重組抗LT-β-R抗體的構(gòu)建還可通過制備包含抗LT-β-R可變區(qū)和分離自不同類免疫球蛋白的人類恒定區(qū)(CHl、CH2、CH3)的嵌合抗體或人源化抗體而完成。例如，可將抗原結(jié)合位點(diǎn)克隆至攜帶人類T鏈恒定區(qū)的載體中而重組產(chǎn)生抗原結(jié)合位點(diǎn)價(jià)數(shù)增加了的抗LT-β-R IgM抗體(Arulanandam等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，177，第1439-50(1993)；Lane等，歐洲免疫學(xué)雜志，22，第2573-78頁(1993)；Traunecker等，自然，339，第68-70頁(1989))。
此外，可用標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA技術(shù)改變抗原結(jié)合位點(diǎn)鄰近的氨基酸殘基，從而改變重組抗體與它們的抗原相結(jié)合的親和力。人源化抗體的抗原結(jié)合親和力可通過基于分子模擬的誘變技術(shù)而提高(Queen等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)，86，第10029-33頁(1989)；WO94／04679)。
可能需要根據(jù)所靶向組織類型或所預(yù)計(jì)的具體治療方案而增大或減小抗LTβ-R抗體對(duì)LTβ-R的親和力。例如，用恒定水平的經(jīng)由LT-β途徑傳遞信號(hào)的能力降低的抗LTβ-R抗體治療病人將有利于半預(yù)防性治療。相似地，對(duì)LTβ-R親和力增加的抑制性抗LTβ-R抗體將有利于短期治療。
抗LT-β-R抗體作為L(zhǎng)T-β-R阻斷劑可通過測(cè)試對(duì)腫瘤細(xì)胞中LTβ-R所誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性進(jìn)行抑制的能力篩選可作為L(zhǎng)Tβ-R阻斷劑的抗LT-β-R抗體。應(yīng)用常規(guī)實(shí)驗(yàn)和本文所述試驗(yàn)測(cè)試針對(duì)人類LTβ受體的其它抗體，有可能鑒別人類中具有LTβ-R阻斷劑功能的其它抗LT-β-R抗體。
本發(fā)明另一優(yōu)選實(shí)施方案涉及包含針對(duì)LT配體、可作為L(zhǎng)T-β-R阻斷劑的抗體的組合物和方法。如上有關(guān)抗LTβ-R抗體之述，可作為L(zhǎng)Tβ-R阻斷劑的抗LT配體抗體可以是多克隆或單克隆形式，并可按常規(guī)方法修飾它們，以調(diào)整其抗原結(jié)合特性和免疫原性。
本發(fā)明的抗LT抗體可只針對(duì)兩種LT亞單位中的任一種產(chǎn)生，包括可溶性、突變型、修飾的和嵌合形式的LT亞單位。若LT亞單位作為抗原使用，優(yōu)選它們是LT-β亞單位。若應(yīng)用LT-α亞單位，優(yōu)選所得抗LT-α抗體可結(jié)合表面LT配體且不與分泌型LT-α有交叉反應(yīng)，并不能調(diào)節(jié)TNF-R活性。
或者，可產(chǎn)生針對(duì)包含一或多個(gè)LT亞單位的同聚體(LT-β)或異聚體(LT-α／β)復(fù)合物的抗體，并篩選它們作為L(zhǎng)T-β-R阻斷劑的活性。優(yōu)選地，用LT-α1／β2復(fù)合物作為抗原。如上述，優(yōu)選所得抗LT-α1／β2抗體可與表面LT配體結(jié)合、不與分泌型LT-α結(jié)合、不影響TNF-R活性。
多克隆抗人類LT-α抗體的產(chǎn)生如申請(qǐng)人的共同未決的專利申請(qǐng)(WO94／13808)所述。單克隆抗LT-α抗體和單克隆抗LT-β抗體已有文獻(xiàn)描述(Browning等，免疫學(xué)雜志，154，第33-46頁(1995))。
化合物可用于本發(fā)明方法的治療性化合物包括可阻斷LT-β與LT-β受體相互作用并因此抑制LT途徑的任何化合物。具體涉及的抗LT化合物包括多克隆抗體和單克隆抗體(mAb)，以及抗體衍生物如嵌合分子、人源化分子、效應(yīng)物功能減弱的分子、雙特異性分子以及抗體的偶聯(lián)物。
本發(fā)明還包括抗LT-β和抗LT-β受體的其它類型，如能阻斷LT途徑的完整Fab片段、F(ab’)2化合物、VH區(qū)、Fv區(qū)、單鏈抗體(參見如WO96／23071)、多肽、多肽的融合構(gòu)建體、LT-β受體的融合體、以及小分子化合物如小分子半肽化合物或非肽化合物。
用標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA技術(shù)還可產(chǎn)生抗體的各種形式(Winter＆Milstein，自然，349，第293-99頁，1991)。例如，可構(gòu)建“嵌合抗體”，其中動(dòng)物抗體來源的抗原結(jié)合區(qū)與人類恒定區(qū)相連(最初來自非人類哺乳動(dòng)物的抗體，其中應(yīng)用重組DNA技術(shù)使鉸鏈區(qū)和重鏈恒定區(qū)和／或輕鏈恒定區(qū)的全部或部分由人類免疫球蛋白輕鏈或重鏈的相應(yīng)區(qū)取代)(參見如，Cabilly等，美國(guó)專利第4，816，567號(hào)；Morrison等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)，81，第6851-55頁，1984)。嵌合抗體可減少動(dòng)物抗體用于人類臨床治療時(shí)激發(fā)的免疫應(yīng)答。
此外，可合成重組“人源化”抗體。人源化抗體是最初衍生自非人類哺乳動(dòng)物的抗體，但其中應(yīng)用重組DNA技術(shù)使與抗原結(jié)合無關(guān)的部分或所有氨基酸被人類免疫球蛋白輕或重鏈相應(yīng)區(qū)的氨基酸取代(主要包含人類IgG序列、而其中已插入負(fù)責(zé)特異性抗原結(jié)合的區(qū)域的嵌合體)(參見如PCT專利申請(qǐng)WO94／04679)。用所選抗原免疫動(dòng)物、分離相應(yīng)抗體、去除可變區(qū)序列中負(fù)責(zé)特異性抗原結(jié)合的部分。然后將動(dòng)物源性抗原結(jié)合區(qū)克隆至已刪除抗原結(jié)合區(qū)的人類抗體基因的適當(dāng)部位。人源化抗體使人類抗體中異源(種間)序列的應(yīng)用減至最小，更不太可能在接受處理的受試者體內(nèi)激發(fā)免疫應(yīng)答。
本發(fā)明的方法和組合物中還可應(yīng)用靈長(zhǎng)類抗體或靈長(zhǎng)類化抗體。
本發(fā)明的方法和組合物中還可應(yīng)用抗體片段和單價(jià)抗體。單價(jià)抗體包含與第二重鏈Fc(或主干)區(qū)結(jié)合的重鏈／輕鏈二聚體。Fab區(qū)指與包含重鏈Y分支部分的序列和完整輕鏈序列大體相當(dāng)或類似，且相連(聚集)后可表現(xiàn)抗體活性的鏈部分。Fab蛋白包括一條重鏈與一條輕鏈的聚集體(通常稱為Fab’)，還包括相應(yīng)于Y型抗體兩個(gè)分支區(qū)段的四聚體(通常稱為F(ab)2)，上述各種類型可以是共價(jià)或非共價(jià)聚集，只要聚集體可與特定抗原或抗原家族選擇性反應(yīng)即可。
此外，可用標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA技術(shù)改變抗原結(jié)合位點(diǎn)鄰近區(qū)的氨基酸殘基，從而改變重組抗體與它們的抗原結(jié)合的親和力。
受試者本發(fā)明方法針對(duì)的受試者患有濾泡性淋巴瘤。
給藥途徑本發(fā)明的化合物可用醫(yī)學(xué)上能接受的任何方式給藥。這包括經(jīng)非胃腸道途徑如靜脈內(nèi)、血管內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、腫瘤內(nèi)、腹膜內(nèi)、心室內(nèi)、硬膜外表皮內(nèi)(intraepidural)注射、或其它方式如口服、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、直腸、或局部給藥。本發(fā)明還特別包括緩釋給藥，如緩釋型注射。LT阻斷化合物的某些形式適于口服給藥，可制成懸液或藥丸劑型。
治療劑量及頻率對(duì)一種具體的免疫復(fù)合物疾病，給病人施用任何特定化合物的量和用藥頻率應(yīng)由病人的醫(yī)生根據(jù)很多因素作出判斷。一般性劑量由臨床前和臨床期試驗(yàn)(包括用以確定化合物不同劑量對(duì)病人的有利和有害影響的大量試驗(yàn))確立。甚至在有了這類建議后，醫(yī)生還根據(jù)不同病人情況的變化，如病人年齡、病情、體重、性別、及同時(shí)用于治療的其它藥物而改變這些劑量。對(duì)用于治療濾泡性淋巴瘤的每種LT阻斷化合物最佳劑量進(jìn)行確定是醫(yī)藥領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)工作。
一般，用藥頻率由主治醫(yī)師確定，可以只用一劑、或每日重復(fù)給藥、間隔2-6天、每周一次、兩周一次或每月一次給藥。
根據(jù)本發(fā)明的治療濾泡性淋巴瘤的聯(lián)合療法中，可聯(lián)合使用靶向這類淋巴瘤的其它方法，包括如放療、化療或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它療法。
本發(fā)明的LT阻斷化合物可以藥學(xué)可接受之組合物的形式施用于病人，其中該組合物包括藥學(xué)可接受的載體。這類載體在阻斷化合物或其它活性組分保持有效活性的相應(yīng)濃度下對(duì)病人相對(duì)無毒性并且無害，從而使載體可能帶來的任何副作用不會(huì)損及組合物中活性組分的有利效應(yīng)。組合物中可包括其它相容性物質(zhì)；相容，在本文中指藥物組合物的組分能與LT阻斷化合物混合，并相互混合，其混合方式不會(huì)對(duì)藥物的治療效力造成實(shí)質(zhì)性的不利影響。本發(fā)明適于口服的制劑可以是離散單位的形式，如膠囊、扁形蝕囊劑、片劑、丸劑或錠劑，它們各包含預(yù)定量的強(qiáng)效化合物粉末或顆粒；或者是脂質(zhì)體形式；或含水或非水性液體中的懸液，如糖漿、酏劑、乳劑或飲劑。
本發(fā)明的組合物可包裝在容器中以適于維持無菌，在經(jīng)銷和貯存期間保護(hù)有效組分的活性，并使組合物便于對(duì)病人施用并達(dá)到有效部位。如果LT阻斷化合物是可注射劑型，則供應(yīng)時(shí)可裝在適于用針或注射器抽出內(nèi)容物的塞緊小瓶中。小瓶既可單獨(dú)使用，也可多次使用。組合物也可以預(yù)裝填的注射器形式提供。在某些例子中，內(nèi)容物可為液體劑型，其它例子中可提供為干燥或凍干形式，此時(shí)需用標(biāo)準(zhǔn)的或配備的稀釋劑恢復(fù)成液體狀態(tài)。如果化合物以用于靜脈注射的液體形式提供，則它可提供在適于與靜脈用藥線或?qū)Ч苓B接的無菌袋或容器中。如果阻斷化合物是口服的片劑或丸劑形式，則可提供在帶有可取下之蓋子的小瓶中。容器上應(yīng)標(biāo)明相關(guān)信息，如化合物類型、廠家或經(jīng)銷商名稱、說明書、建議劑量、正確保存的建議、或用藥建議。
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序列表SEQ ID NO1的資料(i)序列特征(A)長(zhǎng)度197個(gè)氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型(D)拓?fù)錁?gòu)型線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO1Ser Gln Pro Gln Ala Val Pro Pro Tyr Ala Ser Glu Asn Gln Thr Cys1 5 10 15Arg Asp Gln Glu Lys Glu Tyr Tyr Glu Pro Gln His Arg Ile Cys Cys20 25 30Ser Arg Cys Pro Pro Gly Thr Tyr Val Ser Ala Lys Cys Ser Arg Ile35 40 45Arg Asp Thr Val Cys Ala Thr Cys Ala Glu Asn Ser Tyr Asn Glu His50 55 60Trp Asn Tyr Leu Thr Ile Cys Gln Leu Cys Arg Pro Cys Asp Pro Val65 70 75 80Met Gly Leu Glu Glu Ile Ala Pro Cys Thr Ser Lys Arg Lys Thr Gln85 90 95Cys Arg Cys Gln Pro Gly Met Phe Cys Ala Ala Trp Ala Leu Glu Cys100 105 110Thr His Cys Glu Leu Leu Ser Asp Cys Pro Pro Gly Thr Glu Ala Glu115 120 125Leu Lys Asp Glu Val Gly Lys Gly Asn Asn His Cys Val Pro Cys Lys130 135 140Ala Gly His Phe Gln Asn Thr Ser Ser Pro Ser Ala Arg Cys Gln Pro145 150 155160His Thr Arg Cys Glu Asn Gln Gly Leu Val Glu Ala Ala Pro Gly Thr165 170 175Ala Gln Ser Asp Thr Thr Cys Lys Asn Pro Leu Glu Pro Leu Pro Pro180 185 190Glu Met Ser Gly Thr19權(quán)利要求
1．一種抑制或減緩腫瘤的進(jìn)展、嚴(yán)重性或影響的方法，該方法包括給予受試者有效量的可抑制LT-β與其受體間相互作用的組合物。
2．權(quán)利要求1的方法，其中所述腫瘤是濾泡性淋巴瘤。
3．權(quán)利要求2的方法，其中所述組合物選自下組可溶性LT-β受體、抗LT-α抗體、抗LT-β抗體和抗LT-β-R抗體。
4．權(quán)利要求3的方法，其中所述組合物是可溶性LT-β受體。
5．權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者是哺乳動(dòng)物。
6．權(quán)利要求5的方法，其中所述受試者是人類。
7．權(quán)利要求4的方法，其中可溶性淋巴毒素-β受體包含可選擇性結(jié)合表面LT配體的配體結(jié)合區(qū)。
8．權(quán)利要求7的方法，其中LT-β受體包含人類免疫球蛋白Fc區(qū)。
9．權(quán)利要求3的方法，其中所述組合物包含針對(duì)LT-β受體的單克隆抗體。
10．權(quán)利要求9的方法，其中所述單克隆抗體為人源化或嵌合型抗體。
11．可阻斷LT-β與其受體的相互作用、可用于治療患有濾泡性淋巴瘤的受試者的一種組合物。
12．權(quán)利要求1的方法，其中包括給予所述受試者至少一種化療劑。
13．權(quán)利要求1的方法，其中包括給予所述受試者另一TNF途徑的抑制物。
14．權(quán)利要求13的方法，其中包括施用可抑制CD40／CD40配體途徑的組合物。
15．權(quán)利要求14的方法，其中包括施用抗CD40配體的抗體。
16．權(quán)利要求1的方法，其中包括對(duì)所述受試者進(jìn)行放射治療。
17．權(quán)利要求1的方法，其中進(jìn)一步包括對(duì)所述受試者進(jìn)行放射治療或骨髓移植。
18．一種改變受試者體內(nèi)濾泡樹突細(xì)胞的存活力或維持力的方法，包括施用LT-β與其受體間相互作用的抑制物。
19．一種改變免疫系統(tǒng)器官的結(jié)構(gòu)的方法，包括施用(a)LT-β與其受體間相互作用的抑制物；和(b)TNF配體和受體家庭另一成員的信號(hào)傳遞途徑的抑制物。
全文摘要
淋巴毒素途徑抑制物在腫瘤治療,尤其是濾泡性淋巴瘤治療中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07K14/525GK1289252SQ99802490
公開日2001年3月28日 申請(qǐng)日期1999年1月29日 優(yōu)先權(quán)日1998年1月30日
發(fā)明者J·布朗寧, J·索貝克, V·茨阿格比 申請(qǐng)人:拜奧根有限公司, 紐約大學(xué)