專利名稱：阿薩太羅欣類抗癌化合物及其制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明關(guān)于一種新穎阿薩太羅(Azatyrosine)類抗癌化合物，以及阿薩太羅欣類抗癌化合物的制造方法和醫(yī)藥上的用途。
癌癥(cancer)是一種發(fā)生在人類及大部分動物身上的疾病，引起癌癥病征的腫瘤(tumor)生長速度超過正常組織且不協(xié)調(diào)，具備有生長較快及分化較不完全的特色。而腫瘤細(xì)胞為了要能較快速生長，其細(xì)胞內(nèi)的生化代謝途徑以及遺傳物質(zhì)在功能上的表現(xiàn)較一般正常細(xì)胞強，因此這些高度表現(xiàn)的代謝途徑以及遺傳物質(zhì)便成為藥物設(shè)計以及癌癥化學(xué)治療上的一個顯著目標(biāo)。但由于正常細(xì)胞也具備了上述的代謝途徑以及遺傳物質(zhì)，因此都具有對腫瘤細(xì)胞缺少專一性及選擇性以及毒性太大的缺點。而目前使用的抗癌藥大部分都是細(xì)胞毒化合物。為了避免這些毒性副作用的發(fā)生，設(shè)計具有選擇性的抗癌藥一直是癌癥化學(xué)治療藥物開發(fā)的一大挑戰(zhàn)。
近年來細(xì)胞生長循環(huán)和腫瘤生成間關(guān)聯(lián)的研究顯示，細(xì)胞生長循環(huán)的錯亂是形成癌細(xì)胞生長不受控制以及遺傳上的不穩(wěn)定性兩個主要特征的成因，如文獻1(Hunter，T.；Pines，J．Cell，1994，79，573-584)中描述的。細(xì)胞中的訊息傳遞在細(xì)胞生長循環(huán)中扮演了重要的角色，如文獻2(Prescott，D．M．Jonesand Bartlett Publishers，Boston，1988)所述，而在分子生物學(xué)的領(lǐng)域中訊息傳遞和致癌基因間的關(guān)系也越來越清楚如文獻3和4、5(Parker，P．J．，katna，M．，“Molecular Biology of Oncogenes and Cell Control Mechanism”，EllisHorwood Limited，New York，1990．Cooper，G．M．，“Oncogenes”，2nd ed．，Jones and Bartlett Publishers，London，1995，F(xiàn)ry，D．W．，Recent Advances inTyrosine Kinase Inhibitors，Annu．rep．med．chem．，1996，31，151-160)。
哺乳類動物細(xì)胞中的H-，K-及N-ras原致癌基因(protooncogene)經(jīng)解碼后會分別產(chǎn)生相對應(yīng)的p21ras蛋白質(zhì)，在與GAP(GTPase activating protein)結(jié)合后則會有GTPase的活性，在訊息傳遞以及細(xì)胞的增殖和分化上扮演重要且基本的角色，如文獻6、7(Bolton，G．L.；Sebolt-Leopold，J．S.；Hodges，J．C．，Annu．Rep．Med．Chem．，1994，29，165-174.；Grand，R．J．A．in“NewMolecular Targets in Cancer Chemtherapy”Kerr，J．D.；Workman，P．Eds．，CRCPress，Boca Raton，F(xiàn)1，1994．)所描述的。當(dāng)這些原致癌基因被某些RNA virus或致癌物質(zhì)激化而產(chǎn)生ras致癌基因(oncogene)后，其p21ras發(fā)生點突變(pointmutation)，失去GTPase的活性，導(dǎo)致細(xì)胞的不正常增殖和分化。在人類的所有癌癥疾病中，約有25％是由于ras致癌基因突變所造成的，就不同的癌癥而言，90％的胰臟癌，50％的結(jié)腸癌以及約50％的甲狀腺癌是和ras致癌基因的突變有關(guān)，如文獻8(Bos，J．L.，ras Oncogenes in Human CancerAReview，Cancer Res．，1989，49，4682-9．)所述。
阿薩太羅欣(azatyrosine)化學(xué)式結(jié)構(gòu)式如下
早期文獻中阿薩太羅欣的合成方法有七個反應(yīng)步驟的流程

圖1(Norton，S．J．等人J．Org．Chem．，1961，26，1495-8．)及八個反應(yīng)步驟的流程圖2(真壁野等人日本專利平2-273659 1990．)兩種。流程圖1 Norton等人的合成法起始物kojic acid價格較貴，不適于大量合成。流程圖2真壁野等人專利的合成法則步驟較多、部分中間體因水溶性太高造成產(chǎn)物回收率較低。
(L-b-(5-hydroxy-2-pyridyl)-alanine，Shindo-Okada，N．；Makabe，O．；Nagahara，H.；Nishimura，S．Mol.Carcinog．，1989，2，59-67．)是從Streptomyceschibanensis中所分離的類似酪胺酸的天然物，能夠抑制由活化的人類c-Ha-ras致癌基因所引發(fā)的轉(zhuǎn)形NIH 3T3細(xì)胞(transformed NIH 3T3 cells)的生長，而對正常NIH 3T3細(xì)胞生長則不具明顯的抑制作用。最令人振奮的是，經(jīng)阿薩太羅欣(azatyrosine)處理過的轉(zhuǎn)形NIH 3T3細(xì)胞具有正常細(xì)胞表征(normalphenotype)，而且這些具有正常表征的反突變種細(xì)胞(revertant cells)可以在阿薩太羅欣的存在下持續(xù)生長直到細(xì)胞匯合(confluency)為止。在長期的培養(yǎng)中，這些反突變種細(xì)胞在無阿薩提羅欣的存在下仍可保持正常細(xì)胞表征，在軟瓊脂培養(yǎng)基中無法生長，且在裸鼠中幾乎沒有增殖現(xiàn)象。這些結(jié)果代表了反突變種細(xì)胞的細(xì)胞生理就如同一般正常細(xì)胞一樣。另外，阿薩提羅欣對人類胰腺癌細(xì)胞(Shindo-Okada et a1 Mol．Carcinogen．，1989，2，59-67.)、由ras所引發(fā)的轉(zhuǎn)形人類乳房上皮細(xì)胞MTSI1-7(Kyprianou，N．et al Oncogene，1992，7，57-63．)、由ras或raf所引發(fā)的攝護腺癌細(xì)胞PC-12的軸突贅生(Fujita-Yoshigaki，J．et al Oncogene，1992，7，2019-24．)、TSU-Pr1，DU-145和PC-3細(xì)胞株(Benoit，R．M.，Urology，1995，46，370-7．)、老鼠胚胎細(xì)胞SFEM(serum-free mouse embryo cells，Nomura，T．Jap．J．Cancer Res．，1992，83，851-8．)等都具有使之轉(zhuǎn)變成反突變種細(xì)胞并且不傷害正常細(xì)胞的效果。有別于傳統(tǒng)細(xì)胞毒藥物，阿薩太羅欣呈現(xiàn)的是嶄新的癌化學(xué)療法觀念，將癌細(xì)胞的增殖及分化導(dǎo)入正軌，因此這類藥物應(yīng)具有對癌細(xì)胞選擇性高及對正常細(xì)胞毒性小的特色。
然而阿薩太羅欣的藥理活性不夠大，阿薩太羅欣對體外癌細(xì)胞株的有效治療濃度高達1-2mM(Shindo-Okada等人Mol．Carcinog．，1989，2，59-67．)，可能原因在于阿薩太羅欣屬于低脂溶性胺基酸類雙性離子，較難穿透細(xì)胞膜，因此需較高濃度的藥物才能使細(xì)胞內(nèi)達到所需的有效活性濃度。
本發(fā)明的目的是為了克服阿薩太羅欣無法進入細(xì)胞以致藥理活性不夠大的問題，本發(fā)明目的以增加脂溶性為前提，設(shè)計改變阿薩太羅欣雙性離子結(jié)構(gòu)，合成具有中性物理化學(xué)性質(zhì)的阿薩太羅欣類似物，增加被動運輸穿透細(xì)胞膜的速率，以增加細(xì)胞內(nèi)生體可用率而提高藥效。從而提供一種制備阿薩太羅欣類似物及合成方法和用途。
本發(fā)明的目的這樣完成的本發(fā)明設(shè)計并制備一系列具有下式(Ⅰ)的新穎阿薩太羅欣(azatyrosine)類化合物
其中，R1是C1-6烷基、苯甲基或C1-6羰基；R2為C1-6烷基或C1-6烷氧基；R3為CONR4R5、CONHNR4R5或COOR6，其中R4和R5獨立的，個別為H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基，或NR4R5結(jié)合為一飽和或不飽和五元含氮雜環(huán)或六元含氮雜環(huán)，該含氮雜環(huán)上的碳可為氮、氧或硫所取代；R6為C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基或苯甲基。
本發(fā)明提供的式(Ⅰ)化合物的制備方法如下參閱反應(yīng)流程3(附圖3)，是使用5-羥基-2-羥甲基吡啶(化合物1)為起始物，按下列反應(yīng)式進行反應(yīng)而制備出中間體式(Ⅴ)化合物，其中R1與R2定義如前所述；再由中間體式(Ⅴ)化合物與CONR4R5、CONHNR4R5、R6X或R6OH進行反應(yīng)，化合物式(Ⅰ)的一般制備法，是將式(Ⅴ)化合物、等當(dāng)量醇類、胺類或肼類反應(yīng)物及等當(dāng)量的二環(huán)己基碳二亞胺(dicyclohexylcarbodiimide)(DCC)或carboxydiimidazole(CDI)溶于非氫性(aprotic)有機溶劑如二甲醯胺或二氯甲烷中，在20-45℃反應(yīng)2-12小時后，將溶劑抽掉，再結(jié)晶即得所需產(chǎn)物式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物，其中R4、R5及R6定義如前所述，X為鹵素。本發(fā)明結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)化合物的抑制細(xì)胞生長的活性(a)式Ⅰ化合物對細(xì)胞生長抑制篩檢野生型(wild type)NIH 3T3細(xì)胞以及ras-轉(zhuǎn)形NIH 3T3細(xì)胞株的生長抑制篩檢測實驗中是利用含有10％fetal bovine serum的DMEM(Dulbecco’smodified Eagle’s medium)培養(yǎng)液、細(xì)胞密度為1，500-2，000 cells／well的96孔洞培養(yǎng)皿，37℃含7．5％CO2空氣中培養(yǎng)。首先建立細(xì)胞生長曲線。藥物活性篩檢中，以血球計(hemacytometer)和MTT比色分析法(Hansen，M．c以血球計(hemacytometer)和MTT比色分析法(Hansen，M．B．et al J．Immunol．Methods，1989，119，203-10．)所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線求得試驗中存活細(xì)胞的數(shù)目。再利用sigmoidal regression(Parellada，J.；Guinea，M．，F(xiàn)lavonoid Inhibitors ofTrypsin and Leucine Aminopeptidasea Proposed Mathematical Model for IC50Estimation．，J．Nat．Prod．，1995，58，823．)的方法求得IC50。每一種受測化合物都進行了至少三次實驗，結(jié)果列于表1。此系列化合物活性可比azatyrosine高于458倍(化合物12)。由結(jié)構(gòu)一活性間關(guān)系顯示，將azatyrosine的羥基衍生成醚基(ethers)、將鹼性的胺基衍生成偏中性的醯胺(amides)或胺基甲酸酯(carbamates)、以及將羧基衍生成中性的酯類(esters)或醯胺(amides)則大大增強其藥理活性。更重要的發(fā)現(xiàn)為，此系列化合物對轉(zhuǎn)形細(xì)胞的生長具有選擇性抑制活性(亦即選擇性毒性Seletivetoxicity，SI)。如化合物12對轉(zhuǎn)形細(xì)胞的生長抑制IC50為對正常細(xì)胞生長抑制IC50的138倍，亦即選擇性毒性(IC50野生型／IC50-轉(zhuǎn)形=138)。其活性以及對癌細(xì)胞的選擇性抑制具有治療癌癥價值。
表1阿薩太羅欣及如下式(Ⅰ)化合物對野生型(wild type)NIH 3T3以及ras-轉(zhuǎn)形NIH 3T3細(xì)胞株的生長抑制活性
IC50(mM)a相對 選擇性化合物 R4R5野生型細(xì)胞ras-轉(zhuǎn)形細(xì)胞活性 b 毒性cazatyrosine N 10793．0±471．8 7554. 8±417. 51 1. 47H H 1716．8±10．4 73. 1±41. 810323. 58n-propyl H 989．7±707. 3 34．8±0. 8 21728. 49allyl H 213．7±111．5 74. 2±15. 2102 2. 910 propagyl H 410. 8±247．3 45. 8±1. 65165 9. 011 cycloplopyl H 1926．1±898. 7104. 5±83. 8 7218. 412 cyclohexyl H 2284. 8±1763 16．5±2．2 458 138. 513 N(CH2)5N74. 8±18. 742. 0±3. 9 180 1. 814 N(CH2)4N148．1±12. 559. 3±17. 8127 2. 515-(CH2)2-S-(CH2)2- 154. 4±3. 9 50. 3±1. 04150 3. 1a3-5次實驗的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。b相對活性指azatyrosine與測試化合物的βIC50ras-轉(zhuǎn)形細(xì)胞的比值。C選擇性毒性指IC50野生型／IC50ras-轉(zhuǎn)形本發(fā)明醫(yī)藥組成物，其包括一醫(yī)療上有效劑量的結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)化合物，及一醫(yī)藥上可接受載體。
本發(fā)明的結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)阿薩太羅欣(Azatyrosine)類抗癌化合物的用途，供用以治療胰臟癌、結(jié)腸癌、甲狀腺癌，及黑色素癌等ras-相關(guān)癌癥。
本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明以阿薩太羅欣為先導(dǎo)(lead)藥物，針對其活性不佳的缺點設(shè)計一系列具有式(Ⅰ)的新穎阿薩太羅欣類化合物。此系列化合物以新穎的合成方法制備。此式(Ⅰ)系列化合物活性比阿薩太羅欣高了約450倍，而且對轉(zhuǎn)形細(xì)胞的抑制活性比對正常細(xì)胞的抑制活性可高約138倍。其活性以及對癌細(xì)胞的選擇性抑制具有治療癌癥的價值。
下面結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步詳細(xì)地說明附圖1是反應(yīng)流程圖。
附圖2是反應(yīng)流程圖。
附圖3是反應(yīng)流程圖。
實施例11．制備2-乙醯胺-2-((5- 氧-2-嘧啶)甲基)丙二酸二乙基酯Diethyl 2-Acetamido-2-((5-benzyloxypyridin-2-yl)methyl)malonate(化合物3a)的步驟。
將化合物A(53．81g，0．25mol)溶于二氯甲烷(500mL)后于三小時內(nèi)慢慢滴入三氯化磷醯(phosphoryl trichloride，38．33g，0．25mol)的二氯甲烷(1L)溶液中。經(jīng)一天后將反應(yīng)溶液慢慢傾入劇烈攪拌的飽和碳酸氫鈉水溶液中以完全中和掉酸性物質(zhì)。將二氯甲烷溶液分出后用無水硫酸鎂加以干燥，過濾后將濾液于減壓下蒸去二氯甲烷即得粗產(chǎn)物。將化合物4(56．48g，0．26 mol)溶于極性濾液后再加入第三丁醇鉀(30．30g，0．27 mol)，待其完全溶解后再將前述的粗產(chǎn)物加入。反應(yīng)八小時后將二甲甲醯胺于減壓下蒸去，殘余物用水(1L)和二氯甲烷(1L)萃取后分出二氯甲烷溶液，用無水硫酸鎂加以干燥并過濾后將濾液于減壓下蒸去二氯甲烷即得粗產(chǎn)物3a。利用異辛烷和乙酸乙酯的混合物劑(9∶1)重覆萃取粗產(chǎn)物3a后將萃取液合并抽干即得純化的化合物3a(97．40g，產(chǎn)率94％)，熔點91-92℃。1H NMR(200MHz，CDCl3)d 8．182(1H，d，J=2．8Hz，pyridine-a-H)， 7．357(5H，m，Ph-H)，7．116(1H，d，J-2．8，8．4 Hz，pyridine-g-H)，6．953(1H，d，J=2．8，8．4 Hz，pyridine-b-H)，6．771(1H，s，Ac-NH)，5．031(2H，S，Ph-CH2-)，4．22(2H，q，J=7．0 Hz，COO-CH2-)，3．731(2H，s，pyridine-CH2-)，1．918(3H，s，CH3CO-)，1．246(3H，t，J=7．0 Hz，COO-CH2-CH3)ppm；IR(KBr)3400。2975，1750，1725，1675，1575，1490，1475 cm-1；EI Mass414，341，323，295，253；Elem．Anal．Calc．C 63．76，H 6．32，N 6．76；Found C 63．72，H 6．33，N6．69。
2．制備3-(5-
氧-2-嘧啶)-2-胺丙酸3-(5-Benzyloxypyridin-2-yl)-2-aminopropionic acid(化合物4a)的步驟將化合物3a(41．45g，0．1 mol)溶于例如鹽酸的有機酸水溶液(500mL)中加熱回流24小時，溶液放冷后加水(500mL)稀釋并加入氫氧化鈉(120g，3mol)提高pH值，再度放冷后接著再用碳酸氫鈉或醋酸將溶液的pH值調(diào)節(jié)到約7．5-8．5。沉淀物濾出后先用水(100mL×2)洗，接著改用甲醇(100mL×2)洗過后于真空中干燥即得產(chǎn)物化合物4a(22．33g，產(chǎn)率82％)，熔點249-252℃(分解)。1H NMR(80 MHz，D2O+TFA)d 7．89(1H，s，pyridine-a-H)，7．54(2H，s，pyridine-a-H，pyridine-a-H)，7．54(5H，m，Ph-H)，4．69(2H，S，Ph-CH2-)，4．13(H，t，J=7．2 Hz，pyridine-CH2-CH-)，3．24(H，d，J=7．2 Hz，pyridine-CH2-)ppm；IR(KBr)3436，3035，2964，1620，1590，1573，1504，1500，1416 cm-1；Elem．Anal．Calc．C 66．16，H 5．92，N 10．24；Found C 66．09，H 5．87， N 9．92。
3．制備3-(5-羥基-2-嘧啶)-2-胺丙酸3-(5-Hydroxypyridin-2-yl)-2-aminopropionic acid(Azatyrosine)的步驟將化合物4a(13．62g，50 mmol)懸浮在水(500 mL)中，加入10％Pd／C(0．5g)后于常壓下進行氫化。經(jīng)24小時后先將Pd／C及其它不溶物濾掉，濾液于減壓下將水及甲苯蒸去，殘余物加入甲醇(100 mL)后濾出沉淀物并于真空中干燥即得產(chǎn)物Azatyrosine(8．65g，產(chǎn)率95％)，熔點248-250℃(分解)，文獻值245-247℃(分解)。Elem．Anal．Calc．C 52．74 H 5．53 N 15．38 Found C52．63 H 5．59 N 15．26。
4．制備3-(5-卡氧-2-嘧啶)-2-((異丁氧醯胺)丙酸3-(5-Benzyloxypyridin-2-yl)-2-(t-Butoxycarbonylamino)propinic acid(化合物5a)的步驟化合物4a(8．17g，30 mmol)及(Boc)2O(7．46g，35 mmol)的四氫呋喃(200mL)溶液攪拌3小時后將四氫呋喃蒸去，用硫酸氫鉀將溶液的pH值調(diào)到3-4，用二氯甲烷(200 mL×2)萃取。將二氯甲烷溶液分出后用無水硫酸鎂加以干燥，過濾后將濾液于減壓下蒸去二氯甲烷即得化合物Ⅴ(10．63g，產(chǎn)率95％)。熔點156-157．5℃。1H NMR(80MHz，CDCl3)d 9．16(1H，b，-COOH)，8．25(1H，d，pyridine-a-H)，7．65-7．03(7H，m，pyridine-a-H，pyridine-a-H，Ph-H)，5．70(1H，d，J=3．8 Hz，-NH) 5．08(2H，S，Ph-CH2-)，4．42(1H，dt，J = 5．06，6．53 Hz，pyridine-CH2-CH-)，3．29(2H，m，pyridine-CH2-CH-)，1．43(9H，s，t-Bu)ppm；IR (KBr)33995，2975，1719，1695，1573，1504 cm-1；EI Mass372，316，277，166，91，57；Elem． Anal．Calc．C 64．50，H 6．50，N 7．52；Found實施例2N-丙烷基3-(5- 氧-2-嘧啶)-2-(異丁氧醯胺)丙醯胺N-Propyl3-(5-Benzyloxypyridin-2-yl)-2-(t-Butoxycarbonyl)aminopropionamide(化合物8a)的制備取化合物5a、等當(dāng)量propylamine及等當(dāng)量carboxydiimidazole溶于二氯甲烷中在室溫反應(yīng)12小時后，將二氯甲烷抽掉，除去咪唑，再用乙醚再結(jié)晶即得所需產(chǎn)物mp117-117．5℃；1H NMR (200 MHz，CDCl3)d 8．234(1H，d，J=2．6 Hz，pyridine-a-H)，7．37(5H，m，Ph-H)，7．169(1H，dd，J=2．6，8．6Hz，pyridine-a-H)，7．097(1H，d，J =8．6 Hz， pyridine-g-H)，6．734(1H，broad，BocNH)，6．194(1H，d J=6．8 Hz，-CONH)，5．058(2H，s，Ph-CH2-)，4．460(1H，broad，pyridine-CH2-CH-)，3．113(4H，m，J=6．14 Hz，pyridine-CH2-CHCONH-CH2-)，1．407(9H，s，t-Bu)，1．357(2H，hexalet，J=7．2 Hz，CONH-CH2-CH2-)，0．768 (2H，t，J=7．2 Hz，CONH-CH2-CH2-CH3)ppm；IR (KBr)3323，3258，2972，1697，1646 cm-1； EIMass339，248，225，91；Elem．Anal Calc．C 66．81，H 7．56，N 10．16 ； Found C 66．43， H 7．26， N 10．20。
實施例3N-環(huán)己烷3-(5- 氧-2-嘧啶)-2-(異丁氧醯胺)丙醯胺N-Cyclohexyl 3-(5-Benzyloxypyridin-2-yl)-2-(t-Butoxycarbonylamino)propionamide(化合物12a)的制備取化合物5a、等當(dāng)量Cyclohexylamine及等當(dāng)量carboxycarbodiimide溶于二氯甲烷中在室溫下反應(yīng)12小時后，將二氯甲烷抽掉，除去咪唑，再用乙醚再結(jié)晶即得所需產(chǎn)物mp 136-136. 5℃；1H NMR (200 MHz，CDCl3): d 8．239(1H，d，J=2．4 Hz，pyridine-a-H)，7．372(5H，m，Ph-H)，7．158(1H，dd，J=2．4，8．4Hz，pyridine-a-H)，7．088(1H，d，J = 8．4 Hz，pyridine-g-H)，6．585(1H，broad，BocNH)，6．164(1H，d J=6．0 Hz，-CONH)，5．063(2H，s，Ph-CH2-)，4．418(1H，broad，pyridine-CH2-CH-)，3．653(1H，m，CONH-CH-)，3．175(1H，dd，J=6．0，14．4 Hz，pyridine-CH2-)，3．047(1H，dd，J=6．0，14．4 Hz，pyridine-CH2-)，1．405(9H，s，t-Bu)，1．720-0．750(10H，m，c-Hexyl)ppm；IR (KBr)；3348，3313，2931，2851，1651 cm-1；EI Mass379，288，225，91； Elem．Anal．Calc．C 68．58，H 7．78，N9．26 ；Found C 68．53，H 7．50，N 9．46。
實施例4N-卡基3-(5-
氧-2-嘧淀)-2-(異丁氧醯胺)丙醯胺Benzyl 3-(5-Benzyloxypyridin-2-yl)-2-aminopropionate(化合物16)的制備化合物4(7．35g，27 mmol)、氫氧化鈉(1．188g，30 mmol)及(Boc)2O(7．07g，32 mmol)的水／四氫呋喃溶液于室溫下攪拌3小時，于減壓下將四氫呋喃蒸去后再加入碳酸氫鈉(1．36g，16 mmol)溶有溴化(5．08g，30 mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液并攪拌過夜。首先分出二氯甲烷溶液，水層再用二氯甲烷(100mL×1)萃取后合并。在此溶液中加入三氟醋酸(15．39g，135 mmol)反應(yīng)一天后將溶液于減壓下蒸干。粗產(chǎn)物利用管柱層所(EtOAc∶TFA=100∶1)加以純化后得產(chǎn)物16(8．729g，產(chǎn)率46％)，熔點143-145℃。1H NMR (80 MHz，CDCl3)d 8．08(1H，d，J=2．24 Hz，pyridine-a-H)，8．08(1H，dd，J=2．24，8．96 Hz， pyridine-g-H)，7．78(1H，d，J=8．96 Hz，pyridine-a-H)，7．41(10H，m，Ph-H)，5．21(4H，m，Ph-CH2-)，4．76(1H，t，J=7．60 Hz，pyridine-CH2-CH-)，3．80(2H，d，J=7．60Hz，pyridine-CH2-CH-)ppm；IR (KBr)3408，3076，2947，1762，1672，1569，1455 cm-1；EI Mass227，199，136，108，91，65。
權(quán)利要求
1．一種如下式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物
其中R1為C1-6烷基、苯甲基或C1-6羰基；R2為C1-6烷基或C1-6烷氧基；R3為CONR4R5、CONHNR4R5或COOR6，其中R4和R5獨立的，個別為H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基，或NR4R5結(jié)合為一飽和或不飽和五元含氮雜環(huán)或六元含氮雜環(huán)，該含氮雜環(huán)上之碳可為氮、氧或硫所取代；R6為C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基或苯甲基。
2．如權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物，其特征在于R1為C1-6烷基或苯甲基；R2為C1-6烷氧、R3為COMR4R5，其中R4和R5獨立的，個別為H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、或NR4R5結(jié)合為一飽和或不飽和五元含氮雜環(huán)或六元含氮雜環(huán)，該含氮雜環(huán)上的碳可為氮、氧或硫所取代。
3．如權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物，其特征在于R1為C1-6烷基或苯甲基；R2為C1-6烷氧基；R3為COOR6，其中R6為C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基或苯甲基。
4．如權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)化合物，其特征在于R1為苯甲基；R2為丁烷氧基；R3為CONR4R5，其中R4和R5獨立的，個別為H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、或NR4R5結(jié)合為一飽和或不飽和五元含氮雜環(huán)或六元含氮雜環(huán)，該含氮雜環(huán)上的碳可以為氮、氧或硫所取代。
5．如權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物，其特征在于R1為苯甲基；R2為丁烷氧基；R3為COOR6，其中R6為C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基或苯甲基。
6．如權(quán)利要求4所述的(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物，其特征在于R4為H、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基；R5為H。
7．如權(quán)利要求4所述的式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物，其特征在于R4和R5結(jié)合為-(CH2)5-、-(CH2)4-或-(CH2)2-S-(CH2)2-。
8．一種醫(yī)藥組成物，其包括一醫(yī)療上有效劑量的如權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物，及一醫(yī)藥上可接受載體。
9．如權(quán)利要求8所述的式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合的用途，供用以治療胰臟癌、結(jié)腸癌、甲狀腺癌、及黑色素癌等ras-相關(guān)癌癥。
10．一種如式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物的制造方法。
其中R1為C1-6烷基、苯甲基或C1-6羰基；R2為C1-6烷基或C1-6烷氧基；R3為CONR4R5、CONHNR4R5或COOR6，其中R4和R5獨立的，個別為H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基，或NR4R5結(jié)合為一飽和或不飽和五元含氮雜環(huán)或六元含氮雜環(huán)，該含氮雜環(huán)上之碳可為氮、氧或硫所取代；R6為C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基或苯甲基；其包括以如下式(Ⅴ)化合物
其中R1與R2定義如前所述，與CONR4R5、CONHNR4R5、R6X或R6OH進行反應(yīng)，其中R4、R5及R6定義如前所述，X為鹵素；其具體工藝步驟(1)是使用5-羥基-2-羥甲基吡啶(化合物1)為起始物，按下列反應(yīng)式進行反應(yīng)
而制備出中間體式(Ⅴ)化合物，其中R1與R2定義如前所述；再由中間體式(Ⅴ)化合物與CONR4R5、CONHNR4R5、R6X或R6OH進行反應(yīng)，化合物式(Ⅰ)的一般制備法，是將式(Ⅴ)化合物、等當(dāng)量醇類、胺類或肼類反應(yīng)物及等當(dāng)量的二環(huán)己基碳二亞胺(dicyclohexylcarbodiimide)(DCC)或carboxydiimidazole(CDI)溶于非氫性(aprotic)有機溶劑如二甲醯胺或二氯甲烷中，在20-45℃反應(yīng)2-12小時后，將溶劑抽掉，再結(jié)晶即得所需產(chǎn)物式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物，其中R4、R5及R6定義如前所述，X為鹵素。
全文摘要
一種如右式(Ⅰ)的抗癌化合物，其中,R
文檔編號C07D213/63GK1206710SQ9711505
公開日1999年2月3日 申請日期1997年7月28日 優(yōu)先權(quán)日1997年7月28日
發(fā)明者王惠珀, 李昂, 許金玉, 李淑娟 申請人:王惠珀, 蔡橫松