專利名稱：新的同配多肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的競爭性凝血酶抑制劑、其合成方法、含有這些化合物作為活性成分的藥物組合物、以及這些化合物作為抗凝血?jiǎng)┰陬A(yù)防和治療血栓栓塞病中的應(yīng)用。血栓栓塞病的例子有靜脈血栓形成、肺栓塞、動(dòng)脈血栓形成，特別是心肌梗塞和腦血栓形成、全身性凝固性過高癥和局部凝固性過高癥，例如血管成形術(shù)和冠狀動(dòng)脈分流術(shù)后凝固性過高癥。
血液凝固是止血過程(即防止由于血管損傷失血)和血栓形成過程(即血管被血塊病理性閉塞)都要涉及到的關(guān)鍵過程。凝血是下面的反應(yīng)式1所畫出的一系列復(fù)雜酶反應(yīng)的結(jié)果。反應(yīng)式1中的各種凝血因子用羅馬數(shù)字來標(biāo)識(shí)。
無論凝血過程是由內(nèi)在途徑還是外在途徑引發(fā)，凝血酶都在凝血過程中起核心作用它激活血小板;它將血纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為血纖維蛋白單體，而血纖維蛋白單體自發(fā)聚合成絲;它激活FⅩⅢ，而FⅩⅢ本身又使上述聚合物交聯(lián)成為不溶性的血纖維蛋白。凝血酶在一個(gè)正反饋反應(yīng)中進(jìn)一步激活FⅤ和FⅧ。
所以，預(yù)計(jì)凝血酶抑制劑是有效的抗凝血?jiǎng)?
如M.Szelke和D.M.Jones所述(EP-A1-0，118，280，英國優(yōu)先權(quán)日為1983年3月4日)，最早研制出的凝血酶抑制劑是以親電的酮類為基礎(chǔ)的。這些早期的化合物是由血纖維蛋白原Aα鏈的P3-P2′五肽順序衍生的，其中的P1-P1′肽鍵裂開而由-CO-CH2-部分代替，形成了相應(yīng)肽的酮同配物。
以親電性酮類為基礎(chǔ)的絲氨酸蛋白酶抑制劑的其他已知例子包括
(a)M.Kolb等(Merrel-Dow)的EP-A2-0，195，212(優(yōu)先權(quán)日為1986年2月4日)，描述了肽α-酮酯類和酰胺類;
(b)B.Imperiali和R.H.Abeles，Biochemistry 253760，1986(肽基氟烷基酮類);
(c)Ueda等，Biochem.J.265539，1990(肽基氟烷基酮類);
(d)D.Schirlin等(Merrel-Dow)的EP-A1-0，362，002(優(yōu)先權(quán)日為1988年9月1日)，描述了氟烷基酰胺酮類;
(e)P.Bey等(Merrel-Dow)的EP-A2-0，364，344(優(yōu)先權(quán)日為1988年10月7日)，描述了α，β，δ-三酮化合物;
(f)E.N.Shaw等(Research Corporation)的美國專利4，318，904(優(yōu)先權(quán)日為1980年4月25日)，描述了肽氯甲基酮類，如H-DPhe-Pro-Arg-CH2Cl。
S.Bajusz等人已報(bào)導(dǎo)了以肽醛類為基礎(chǔ)的凝血酶抑制劑(J.Med.Chem.331729，1990;Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar R T，EP-A2-0，185，390，優(yōu)先權(quán)日為1984年12月21日)。A.D.Kettner等人(杜邦公司)的EP-A2-0，293，881(優(yōu)先權(quán)日為1987年6月5日和1988年4月6日)報(bào)導(dǎo)了肽形式的凝血酶抑制劑，其中包含精氨酸的C末端硼酸衍生物及其異硫糖醛酸(isothiouronium)類似物。
具有凝血酶抑制作用且不含親電性酮的精氨酸衍生物或類似物的例子有
(a)S.Okamoto等(三菱化成工業(yè)株式會(huì)社)的EP-A1-0，008，746(優(yōu)先權(quán)日為1978年8月31日)，描述了芳基磺酰基精氨酸酰胺類，例如阿格特羅本(argatroban);
(b)J.Stürzebecher等，Pharmazie 36639，1981(芳基磺酰基對(duì)脒基苯丙氨酸酰胺類)。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供對(duì)其酶具有競爭性抑制活性(即引起可逆抑制)的新的強(qiáng)效凝血酶抑制劑。另一個(gè)目的是得到可口服生物利用且對(duì)凝血酶的抑制作用相對(duì)于其他絲氨酸蛋白酶具有選擇性的抑制劑。穩(wěn)定性、作用的持續(xù)性、以及治療劑量下的低毒性，是本發(fā)明的另一些目的。
化合物現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，通式1的化合物，不論是原有形式還是生理上可接受鹽的形式，包括立體異構(gòu)體，是凝血酶的強(qiáng)效抑制劑
除非另外指出，各取代基在式1中及在以后出現(xiàn)時(shí)的定義如下A代表-CH2-，-CH＝CH-，-CH2-CH2-或-CH2-CH2-CH2-;
R1和R2相同或不同，各自代表H或X-B-，其中B是含1-3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，X是H、甲基、乙基、含3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基或R′CO-，其中R′為OH、含1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基、NH2或NHR″，其中R″是含1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基;或者X是本身已知的羧酸類似物，選自-PO(OR′′′)2，-SO3H和5-(1H)-四唑基，其中R′′′是H、甲基或乙基;或者B為-SO2-而X為甲基或乙基;
m為0、1或2，R3代表環(huán)己基;R3A代表H;或者m為1，R3代表環(huán)己基或苯基，R3A與R1一起形成亞乙基橋;
Y代表O或S(O)p，其中p為0、1或2;
R4代表H;含有1-6個(gè)碳原子、未取代或被一個(gè)或更多個(gè)氟原子和/或苯基取代的直鏈或支鏈烷基或環(huán)烷基;取代或未取代的芳環(huán)，選自苯基、4-甲氧基苯基、4-叔丁基苯基、4-甲基苯基、2-三氟甲基苯基、3-三氟甲基苯基、4-三氟甲基苯基、被1-5個(gè)氟原子取代的苯基;或-CH(CF3)苯基。
式1化合物涉及到人血纖維蛋白原Aα鏈中代表經(jīng)過修飾的亞位點(diǎn)P3-P1′的肽順序H-Ala-Asp-Ser-Gly-Glu-Gly-Asp-Phe-Leu-Ala-1 5 10P3P2P1! P1′ P2′ P3′-Glu-Gly-Gly-Gly-Val-Arg—Gly-Pro-Arg-Val-14 15 16 17 20
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案涉及式1化合物，其中A代表-CH2-CH2-或-CH2-CH2-CH2-;
R1是H，R2代表HOCO(CH2)n-或CH3CH2OCO(CH2)n-，n為1或2;
Y為O;
m為1，R3代表環(huán)己基，R3A代表H;
本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案由以下化合物代表HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3HOOC-CH2-DCha-Pic-Arg-CH2-O-CH2-CF3HOOC-CH2-DCha-Pic-Arg-CH2-O-nBuHOOC-CH2-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-nBuHOOC-CH2-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-nBu醫(yī)學(xué)和藥學(xué)應(yīng)用本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及對(duì)人或動(dòng)物體需要抑制凝血酶的癥狀進(jìn)行治療。預(yù)計(jì)本發(fā)明的化合物特別可用于包括人在內(nèi)的動(dòng)物，治療或預(yù)防血液和組織中的血栓形成和凝固性過高。這些化合物具有潛在治療和/或預(yù)防用途的疾病包括靜脈血栓形成和肺栓塞、動(dòng)脈血栓形成，例如心肌梗塞、不穩(wěn)定心絞痛、血栓形成引起的中風(fēng)、外周動(dòng)脈血栓形成。另外，預(yù)計(jì)這些化合物可用于預(yù)防動(dòng)脈硬化病，例如冠狀動(dòng)脈疾病、腦動(dòng)脈疾病和外周動(dòng)脈疾病。另外，預(yù)計(jì)這些化合物可與血栓溶解劑一起用于心肌梗塞。另外，預(yù)計(jì)這些化合物可用于預(yù)防血栓溶解手術(shù)后、經(jīng)皮跨腔血管成形手術(shù)(PTCA)后、及冠狀動(dòng)脈分流手術(shù)后的再堵塞。另外，預(yù)計(jì)這些化合物可用于預(yù)防顯微手術(shù)后的血栓再形成。另外，預(yù)計(jì)這些化合物可用于與人造器官和心臟瓣膜有關(guān)的抗凝血治療。另外，預(yù)計(jì)這些化合物可用于血液透析和散布性血管內(nèi)凝血中的抗凝血治療。日劑量通常在0.1mg至10g活性成分范圍內(nèi)。靜脈注射液優(yōu)選含有0.1-100mg/ml，而一個(gè)劑量單位優(yōu)選含有1-1000mg，并優(yōu)選每日給藥1-4次。
另一個(gè)預(yù)期的用途是用于對(duì)患者體內(nèi)使用的導(dǎo)管和機(jī)械裝置進(jìn)行沖洗，并作為抗凝血?jiǎng)┯糜谘?、血漿和其他血液制品的體外保存。
制備本發(fā)明的另一個(gè)目的是本發(fā)明化合物的制備方法。于是，本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種制備式1化合物的方法，該方法包括(方法Ⅰ)用R4Y-(Y＝O，S)置換下式鹵甲基酮中的鹵素(如步驟(A)、(D)和(F)中所說明的)，
其中W1是氨基末端保護(hù)基如叔丁氧羰基，W2是保護(hù)基如芐氧羰基;將該酮還原為醇，脫除氨基末端保護(hù)基，進(jìn)行常規(guī)肽偶聯(lián)，然后將醇氧化，得到受護(hù)的三肽酮，脫除氨基末端保護(hù)基，然后進(jìn)行N-烷基化(如步驟(A)、(B)、(G)、(H)中所說明的)并脫保護(hù)，或者用氨基末端-N-烷基化的N-三氟?；Ｗo(hù)的二肽(步驟K)置換前面提到并說明過的偶聯(lián)反應(yīng)中的受護(hù)二肽(例如步驟(A)(ⅲ))，然后進(jìn)行氧化和脫保護(hù);或者(方法Ⅱ)用R4-鹵素使下式的α-酮醇烷基化(如步驟(E)中所說明的)，然后再如方法Ⅰ進(jìn)一步反應(yīng);
其中W1和W2如上所限定;或者(方法Ⅲ)將經(jīng)過修改的Dakin-West反應(yīng)(Angew.Chem.Int.Ed.Engl.8981，1969)應(yīng)用于三肽(J.Org.Chem.，501112，1985)使下式化合物(或直接使用氨基末端-N-烷基化的N-三氟酰基保護(hù)的三肽)與(T-CH2CO)2O和4-DMAP反應(yīng)，然后如方法Ⅰ進(jìn)一步反應(yīng)，其中T為鹵素、R4O或R4S;
其中W1和W2如上所限定。
在該反應(yīng)生成立體異構(gòu)體混合物的情況下，可以用常規(guī)色譜技術(shù)或重結(jié)晶技術(shù)分離這些立體異構(gòu)體，需要時(shí)分離出單個(gè)立體異構(gòu)體。
下列敘述說明了本發(fā)明的各個(gè)方面。
合成和藥學(xué)制備這里要求保護(hù)的抑制劑時(shí)所用的化學(xué)反應(yīng)概括于“合成方案”(步驟A至H)及步驟I和K中。必需的精氨酸烷氧甲基酮或精氨酸苯氧甲基酮的主要制備方法是(Ⅰ)使用預(yù)先制成的NaOR4(步驟A)或通過使用KF(步驟D和F)，用R4O-置換溴甲基酮中的Br;或者(Ⅱ)用Ag2O/R4I使精氨酸α-酮醇烷基化(見步驟E)。
利用常規(guī)的肽偶聯(lián)反應(yīng)引入DCha、Pro及其類似物。在N末端引入羧烷基的方法是用溴乙酸酯進(jìn)行烷基化或在丙烯酸叔丁酯上進(jìn)行邁克爾加成(步驟A、B)，或者預(yù)先在二肽部分中引入羧烷基(見步驟K)。然后脫除所有保護(hù)基(見下面的脫保護(hù)步驟a-c)。
一般實(shí)驗(yàn)步驟常規(guī)后處理是指乙酸乙酯萃取;通常用0.3M KHSO4、1M KHCO3、H2O和鹽水洗滌，然后用Whatman相分離濾紙過濾;以及用甲苯共沸法干燥。在涂有Merck硅膠60F254的商品玻璃板上進(jìn)行TLC。將紫外光照射、加熱后噴熒光素或加熱后氯化(Cl2池)、以及噴1%淀粉/KI溶液結(jié)合起來進(jìn)行顯色。閃式色譜在Merck硅膠60(40-63μm)上于N2壓力下進(jìn)行。用Beckman Gold System進(jìn)行氨基酸分析。將肽水解(6N HCl+苯酚，110℃，22小時(shí))，然后注入，并對(duì)脯氨酸峰進(jìn)行定量。在裝填Vydac C18 15-25μm硅膠的玻璃柱(Anachem)中進(jìn)行MPLC，用1%TFA-MeCN至1%TFA-H2O梯度進(jìn)行洗脫，在226nm處監(jiān)測(cè)。用HPLC分析各級(jí)分，并將純級(jí)分合并并冰凍干燥。用Spectra-Physics 8700系列色譜儀進(jìn)行HPLC。溶劑體系與MPLC所用的相同，在210nm處進(jìn)行檢測(cè)。流速為1.5ml/分。柱為Novapak C18，4μm(8×100mm柱體，Waters)。所有中間體都用NMR(Hitachi-Perkin Elmer R24 60MHz或Jeol 270MHz核磁共振儀)進(jìn)行定性。所有最終的肽都以其FAB質(zhì)譜(M-Scan Ascot，Berks.，U.K.)進(jìn)行定性。
原料的制備
(ⅰ)將Boc-Arg(Z2)-OH(10毫摩爾)的無水THF(50ml)溶液和NMM(10毫摩爾)冷卻到-10℃，滴加iBC(10毫摩爾)，同時(shí)保持溫度為-10℃。-10℃下10分鐘后，將混合酸酐倒入CH2N2-乙醚(25毫摩爾-150毫升)中。3小時(shí)后，用乙酸破壞掉過量的CH2N2，溶液用H2O(3次)和鹽水洗滌。干燥并蒸發(fā)后，得到黃色油狀的重氮酮。IR 2100cm-1(COCHN2)。
(ⅱ)將重氮酮(10毫摩爾)的無水乙酸乙酯(200ml)溶液冷卻到-15℃，滴加1M HBr/乙酸乙酯(約11ml)。黃色消失后，TLC(乙酸乙酯/己烷)表明重氮酮已完全轉(zhuǎn)化為溴甲基酮。將該溶液迅速轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用1M KHCO3和鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)后留下一種固體物。將其溶于熱乙醇中再冷卻，得到無定形白色粉末狀的溴甲基酮。
NMR(CDCl3)δ1.3(5，9H)，1.5-1.85(m，4H)，3.75-3.95(m+s，4H)，4.3(m，1H)，5.05(s，2H)，5.15(s，2H)，5.65(d，2H)，7.30(m，10H)，9.2(br，s，1H)，9.3(br，s，1H).在50℃時(shí)軟化，然后在＞70℃時(shí)緩慢分解。
Boc-DCha-X-ONSu(X＝Pro，Pic或Aze)(ⅰ)將Boc-DCha-OH(10毫摩爾)的CH2Cl2/DMF(1∶5 50ml)溶液用HONSu(11毫摩爾)處理，冷卻至0℃，加入WSCDI(13毫摩爾)。30分鐘后將其溫?zé)嶂潦覝亍?小時(shí)后，TLC表明已完全生成Boc-DCha-ONSu。加入乙醚(200ml)并用H2O(3次)和鹽水洗滌，干燥后得到無色泡沫狀的酯。
(ⅱ)將N-羥基琥珀酰亞胺基酯(10毫摩爾)的CH2Cl2(50ml)溶液用H-Pro-OBzl.HCl或H-Pic-OBzl.HCl或H-Aze-OBzl(11毫摩爾)和iPr2NEt(20毫摩爾)處理。攪拌3小時(shí)后進(jìn)行常規(guī)的乙酸乙酯/0.3M KHSO4后處理，得到二肽酯，其純度足以用于下一步。
(ⅲ)將Boc-DCha-X-OBzl的THF溶液在標(biāo)準(zhǔn)溫度壓力下用5%Pd/C氫化4小時(shí)。過濾并蒸發(fā)后得到固體或泡沫狀的酸。重結(jié)晶(異丙醚或乙醚/己烷)得到純產(chǎn)物。
Boc-DCha-Pro-OH(固體m.p.163-166℃)NMR(CDCl3)δ0.8-2.05(m，+s 1.4，26H)，3.4(m，1H)，3.85(m，1H)，4.5(m，2H)，5.2(m，1H).
Boc-DCha-Pic-OH(固體m.p.121-122℃)NMR(CDCl3)δ0.8-2.05(m，+s 1.45，28H)，3.35(m，1H)，3.95(m，1H)，4.6-4.9(m，1H)，5.4(m，1H)，5.6(m，1H)，8.8(br，s，1H).
Boc-(Me)DCha-Pro-ONSu將Boc-(Me)DPhe-OH在0.41兆帕下用5%Rh-C/90%乙酸-水氫化3天，得到定量產(chǎn)率的Boc-(Me)DCha-OH。將Boc-(Me)DCha-OH，(10毫摩爾)和NMM(10毫摩爾)的CH2Cl2(50ml)溶液冷卻至-15℃，加入Ph2PO-Cl(10毫摩爾)。20分鐘后，加入H-Pro-OBzl.HCl(11毫摩爾)和NMM(20毫摩爾)。1小時(shí)后使其溫?zé)嶂潦覝亍?小時(shí)后進(jìn)行常規(guī)后處理和閃式色譜(40%乙酸乙酯/己烷)，得到無色油狀的純Boc-(Me)DCha-Pro-OBzl(80)。
NMR(CDCl3)δ0.5-2.2(m，+s 1.4，26H)2.65(s，3H)，3.5(m，2H)，4.3-5.0(m，2H)，5.1(s，2H)，7.30(s，5H).
如下面對(duì)Boc-DCha-X-ONSu所述將上述化合物轉(zhuǎn)化為N-羥基琥珀酰亞胺基酯。
合成方案步驟(A)
步驟(C)
步驟(E)
步驟(G)Boc-DCha-X-Arg(Z2)-CH2OR4(1)HCl-二噁烷)/(2)MeSO2Cl) Me-SO2-DCha-X-Arg(Z2)-CH2OR4例如 R4＝CH2CF3步驟(H)Boc-DCha-X-Arg(Z2)-CH2OR4(1)HCl-二噁烷)/(2)ChCHO/NaCNBH3) ChCH2-DCha-X-Arg(Z2)-CH2OR4例如 R4＝CH2CF3
制備步驟下列制備步驟說明了上述方法Ⅰ-Ⅲ及合成最終化合物的后續(xù)步驟。
步驟(A)(ⅰ)在-20℃和N2下，在預(yù)先制成的醇鹽或酚鹽(醇或酚10毫摩爾，以及80%NaH-油，10毫摩爾)的DMF(40ml)溶液中，加入固體Boc-Arg(Z2)-CH2Br(10毫摩爾)。30分鐘后將溶液溫?zé)嶂潦覝亍?小時(shí)后加入0.3M KHSO4中和剩余的所有醇鹽，并真空除去DMF。使粗產(chǎn)物在乙酸乙酯和水之間分配，乙酸乙酯層用鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。閃式色譜或結(jié)晶后得到純的烷氧基酮。
Boc-Arg(Z2)-CH2OPh(固體)NMR(CDCl3)δ1.41(s，10H)，1.64-1.68(m，3H)，3.92(dd，2H)，4.5(m，1H)，4.62(q，2H)，5.1(s，2H)，5.2(s，2H)，5.5(d，1H)，6.8(d，2H)，6.95(t，1H)，7.2-7.45(m，12H)，9.2(br，s，1H)，9.3(br，s，1H). 熔點(diǎn)115-118℃.
Boc-Arg(Z2)-CH2OCH2CF3(固體)NMR(CDCl3)δ1.35(s，10H)，1.55-1.75(m，3H)，3.7(q，2H)，3.85(m，2H)，4.2(q+m，3H)，5.05(s，2H)，5.15(s，2H)，5.7(d，1H)，7.15-7.35(m，10H)，9.15(br，s，1H)，9.3(br，s，1H).熔點(diǎn)87-90℃.
(ⅱ)在0℃下，將烷氧甲基酮或苯氧甲基酮的MeOH/THF(1∶1)溶液用NaBH4(1當(dāng)量)處理。10分鐘后，加入0.3KHSO4使pH達(dá)到7，將該混合物蒸發(fā)除去MeOH/THF。加入乙酸乙酯，進(jìn)行常規(guī)后處理(乙酸乙酯/0.3M KHSO4)后，分離出對(duì)映體混合物形式的醇。
(ⅲ)將上述醇在室溫下用4M HCl的二噁烷溶液處理15分鐘，然后蒸發(fā)。將CH2Cl2(5ml)中的殘?jiān)?1毫摩爾)用Boc-DCha-X-ONSu(1當(dāng)量)和iPr2NEt處理(處理至用濕pH試紙測(cè)試時(shí)pH為9)。3小時(shí)后進(jìn)行常規(guī)后處理，得到經(jīng)過修飾的三肽，將其用閃式色譜法(含有1%乙酸的乙酸乙酯-己烷混合物)純化。收率50-85%。
(ⅳ)將三肽醇的CH2Cl2溶液用Dess-Martin高碘烷(periodinane，3當(dāng)量)處理(Dess，D.B.和Martin，J.C.，J.Org.Chem.484155-4156，1983)。室溫下攪拌2小時(shí)后，進(jìn)行常規(guī)后處理(乙醚/1M KHCO3/Na2S2O3)，得到粗制三肽酮，將其用閃式色譜法(乙酸乙酯-己烷)純化。
(ⅴ)將上述酮在室溫下用4M HCl-二噁烷處理15分鐘，然后蒸發(fā)。將無水MeCN(5ml)中的殘?jiān)?1毫摩爾)用溴乙酸芐酯或溴乙酸叔丁酯(1.2當(dāng)量)和iPr2NEt(3當(dāng)量)處理?；亓?小時(shí)后，將該溶液蒸發(fā)并進(jìn)行閃式柱色譜(乙酸乙酯-己烷)，得到油狀的芐氧羰甲基肽或叔丁氧羰甲基肽(40-50%)。
在實(shí)施例30和31中，用2.5當(dāng)量溴乙酸酯來實(shí)現(xiàn)雙烷基化。
步驟(B)在室溫下，用過量的4M HCl-二噁烷將肽烷氧甲基酮處理15分鐘。蒸發(fā)后得到鹽酸鹽，將其分配在乙酸乙酯和1M KHCO3之間。分出乙酸乙酯，干燥并蒸發(fā)后得到游離胺，將其吸收在甲醇中并加入新蒸的丙烯酸叔丁酯(1.5當(dāng)量)?；亓?小時(shí)后得到叔丁氧羰乙基肽，將其用閃式色譜法(乙酸乙酯/己烷)純化。
步驟(C)將溶解在醇R4OH(5ml)中的Boc-Arg(Z2)-CHN2(1毫摩爾)用Rh2(OAc)4(催化劑)處理。室溫下若干小時(shí)后，TLC分析表明已沒有剩余的重氮酮。真空除去醇，用乙酸乙酯/己烷混合物以閃式色譜法分離出產(chǎn)物。
步驟(D)(ⅰ)將Boc-Arg(Z2)-OH(10毫摩爾)的無水CH2Cl2(50ml)溶液用2，2，2-三氯乙醇(11毫摩爾)和4-DMAP(1毫摩爾)處理，冷卻至0℃，加入WSCDI(13毫摩爾)。30分鐘后將其溫?zé)嶂潦覝夭嚢?4小時(shí)。蒸發(fā)后在乙酸乙酯/0.3M KHSO4之間分配，然后用0.3M KHSO4洗3次，用H2O洗1次，用鹽水洗1次，干燥并蒸發(fā)后得到Tce酯，原樣使用。
(ⅱ)在室溫下，用4M HCl-二噁烷(50ml)將Tce酯(10毫摩爾)處理20分鐘，然后蒸發(fā)。干燥后，將CH2Cl2(50ml)中的殘余物依次用Boc-DCha-X-ONSu(10毫摩爾)(X＝Pro，Pic)和iPr2NEt處理(處理至用濕pH試紙測(cè)試時(shí)pH為9)。3小時(shí)后進(jìn)行常規(guī)后處理(乙酸乙酯/0.3M KHSO4)，得到油狀三肽酯。在1小時(shí)內(nèi)，將90%乙酸-水(50ml)中的Tce酯(10毫摩爾)每隔5分鐘用少量新活化的Zn處理一次。再過1小時(shí)后，將混合物過濾，溶液蒸發(fā)。進(jìn)行常規(guī)后處理(乙酸乙酯/0.3M KHSO4)，得到三肽酸，對(duì)其進(jìn)行硅膠閃式色譜純化(2%乙酸-乙酸乙酯)，得到無色泡沫狀的三肽酸(三步收率為80%)。
(ⅲ)用與對(duì)Boc-Arg(Z2)-CH2Br所述同樣的步驟，將三肽酸轉(zhuǎn)化為溴甲基酮。用乙酸乙酯/己烷混合物進(jìn)行閃式色譜，得到無色油狀的三肽溴甲基酮。
NMR(CDCl3)δ0.9(m)，1.15(m)，1.25(m)，1.35(s)，1.6(m)，1.85(m)，2.1(m)[共 30H]，3.3(m，1H)，3.7(m，1H)，3.95(m，2H)，4.15(s，2H)，4.25(m，1H)，4.4(m，1H)，4.5(m，1H)，5.0(d，1H)，5.1(dd，2H)，5.2(s，2H)，7.2-7.4(s，m，10H)，9.2-9.5(2 br，s，2H).
(ⅳ)將三肽溴甲基酮(1毫摩爾)的無水DMF(5ml)溶液用氟化醇、酚或硫醇(1.2毫摩爾)和無水氟化鉀(1.5毫摩爾)處理，室溫下攪拌24小時(shí)。蒸發(fā)后進(jìn)行常規(guī)后處理和閃式色譜，得到三肽酮。
Boc-DCha-Pro-Arg(Z2)-CH2O-Ph(4-Me)NMR(CDCl3)δ0.9(m)，1.15(m)，1.25(m)，1.35(s)，1.6(m)，1.85(m)，2.1(m)[共 30H]，2.38(s，3H)，3.4(m，1H)，3.9(m，1H)，4.1(br，s，2H)，4.4(m，1H)，4.6(m，1H)，4.7(m，1H)，4.9(q，2H)，6.9(d，1H)，7.15(d，1H)，7.4-7.5(m，2H)，7.45(s，10H)，9.4(br，s，1H)，9.6(br，s，1H).
實(shí)施例37的作法是，在室溫下，用間氯過苯甲酸的二氯甲烷溶液將受護(hù)硫化物氧化成砜。
步驟(E)
(ⅰ)將Boc-Arg(Z2)-CH2Br(10毫摩爾)和苯甲酰甲酸(12毫摩爾)的DMF(40ml)溶液用KF(14毫摩爾)處理。攪拌3小時(shí)后蒸掉DMF，將產(chǎn)物分配在乙酸乙酯和H2O之間。干燥并蒸發(fā)后，得到粗制的苯甲酰甲酸酯，用結(jié)晶法(CH2Cl2-己烷)純化后得到白色固體狀產(chǎn)物(86%)。
NMR(CDCl3)δ1.4(s，9H)，1.65-1.9(m，4H)，3.95(m，2H)，4.3(m，1H)，4.95(q，2H)，5.15(ABq，2H)，5.25(s，2H)，5.9(d，1H)，7.35(m，10H)，7.5(t，2H)，7.65(t，1H)，8.15(t，2H)，9.25(br，s，1H)，9.45(br，s，1H). 熔點(diǎn)130-132℃.
(ⅱ)將苯甲酰甲酸酯(5毫摩爾)在THF(200ml)和1M KHCO3(200ml)中的溶液于室溫下劇烈攪拌24小時(shí)。分出THF并蒸發(fā)，水相用乙酸乙酯萃取，萃取液與來自THF的物料合并。用CH2Cl2-己烷結(jié)晶后得到白色固體狀的α-酮醇(90%)。
NMR(CDCl3)δ1.4(s，9H)，1.7(m，4H)，2.95(t，1H)，3.95(m，2H)，4.25(m，2H)，5.15(s，2H)，5.25(s，2H)，5.6(d，1H)，7.35(m，10H)，9.25(br，s，1H)，9.4(br，s，1H). 熔點(diǎn)101-103℃.
(ⅲ)將α-酮醇(1毫摩爾)的無水CH2Cl2(5ml)溶液用烷基碘(5-10毫摩爾)和氧化銀(2毫摩爾)處理。將該混合物在暗處回流2-17小時(shí)(例如，MeI、EtI、nPrI2小時(shí);nBuI5小時(shí))。蒸發(fā)后進(jìn)行閃式色譜(乙酸乙酯-己烷)，得到無色油狀的烷氧甲基酮(50-85%)。
Boc-Arg(Z2)-CH2OEt(油)NMR(CDCl3)δ1.15(t，3H)，1.4(s，9H)，1.5-1.8(m，4H)，3.4(q，2H)，3.95(t，2H)，4.1(q，2H)，4.45(m，1H)，5.15(s，2H)，5.25(s，2H)，5.4(d，1H)，7.35(m，10H)，9.25(br，s，1H)，9.4(br，s，1H).
Boc-Arg(Z2)-CH2NBu(油)NMR(CDCl3)δ0.9(t，3H)，1.25-1.8(m)+1.4(s)[17H]，3.3(dd，2H)，3.95(t，2H)，4.05(q，2H)，4.45(m，1H)，5.1(s，2H)，5.2(s，2H)，5.35(d，1H)，7.35(m，10H)，9.25(br，s，1H)，9.4(br，s，1H).
步驟(F)用步驟(D)(ⅳ)中概述的方法，將Boc-Arg(Z2)-CH2Br用CF3CH2OH，CF3(CF2)2CH2OH或Ar-OH和KF的DMF溶液處理。
步驟(G)將Boc保護(hù)的肽用4M HCl-二噁烷在室溫下處理15分鐘，然后蒸發(fā)。將CH2Cl2中的殘余物用MeSO2Cl(1.1當(dāng)量)和iPr2NEt(2.5當(dāng)量)處理。1小時(shí)后進(jìn)行常規(guī)后處理和閃式色譜，得到甲磺?；?，按脫保護(hù)步驟(a)進(jìn)行脫保護(hù)。
步驟(H)如上所述脫除肽的Boc保護(hù)基，用乙酸乙酯/1M KHCO3分配法洗去HCl。將游離胺的甲醇溶液冷卻至0℃，用醛Ch-CHO(1.5當(dāng)量)和NaCNBH3(1當(dāng)量)處理。1小時(shí)后，在冷處進(jìn)行蒸發(fā)并進(jìn)行閃式色譜，得到N-烷基化的肽。用脫保護(hù)步驟(a)脫保護(hù)。
步驟(I)如Chung等人所述(J.Org.Chem.55270，1990)制備Boc-(3-反式苯基)-D，L-脯氨酸，并按前面對(duì)Boc-(Me)DCha-Pro-OBzl所述使其與H-Pro-OBzl偶聯(lián)。然后如下所述將該二肽轉(zhuǎn)化為其-ONSu酯。
由苯基類似物制備Boc-(3-反式環(huán)己基)-D，L-脯氨酸，方法是，在0.41兆帕下，在90% HOAc-H2O中用5% Rh-C氫化3天。
步驟(K)中間體N-(Bzlo2C-CH2-)，N-(CF3CO)-DCha-Pro-ONSu的合成
(ⅰ)在標(biāo)準(zhǔn)溫度和壓力下，用5% Pd-C使Z-DCha-Pro-OtBu(用常規(guī)肽偶聯(lián)反應(yīng)制得)在THF中氫化24小時(shí)。過濾并蒸發(fā)后得到H-DCha-Pro-OtBu(油狀，100%)。
(ⅱ)將上述產(chǎn)物(2毫摩爾)和乙醛酸芐酯(1當(dāng)量)的苯溶液蒸發(fā)三次(每次加入新鮮苯)，以除去水。殘留的亞胺(2毫摩爾)置于1%乙酸/甲醇(8ml)中用NaCNBH3(2毫摩爾)處理。1小時(shí)后進(jìn)行蒸發(fā)，然后進(jìn)行硅膠閃式色譜(60%乙酸乙酯-己烷)，得到385mg BzlO2C-CH2-DCha-Pro-OtBu(41%)。
(ⅲ)將上述產(chǎn)物(380mg)的無水CH2CL2(8ml)液用Et3N(2當(dāng)量)和(CF3CO)2O(1.2當(dāng)量)處理。40分鐘后，進(jìn)行蒸發(fā)和閃式色譜(硅膠，30%乙酸乙酯-己烷)，得到390mg油狀的N-(BzlO2C-CH2-)，N-(CF3CO)-DCha-Pro-OtBu(86%)。
1HNmr(COCl3)由于存在4種旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體而變得復(fù)雜，例如δ1.4-1.5處的叔丁基裂分四次，比例為1∶0.25∶0.8∶0.4.ù 0，9(m)，1.1(m)，1.65(m)，1.95(m)，2.2(m)[17H];1.4-1.5[4xs，9H];3.1(m)，3.5(m)，3.7(m)[2H];4.3-4.6[m，3H];5.05-5.4(m，3H);7.35[.s，5H].
(ⅳ)在室溫下，將上述產(chǎn)物(335mg)用CH2CL2-TFA(11，8ml)處理2.5小時(shí)。蒸發(fā)后再由甲苯中蒸發(fā)三次，得到游離酸(100%)。
(ⅴ)按前面對(duì)Boc-DCha-OH所述，用HONSu將上述酸轉(zhuǎn)為其-ONSu酯(100%)。
該中間體可以用已概述的一般方法與H-Arg(Z2)-CH2-Y-R4偶聯(lián)。脫保護(hù)步驟(a)生成用N-CF3-CO-保護(hù)的肽。N-CF3-CO用脫保護(hù)步驟(d)脫除。
脫保護(hù)步驟(a)在標(biāo)準(zhǔn)溫度壓力下，用5%Pd/C使含有1M HCl(2當(dāng)量)的受護(hù)肽在MeOH/H2O(3∶1)中的溶液氫化40分鐘。過濾(0.2μm)并蒸發(fā)，然后從水中冰凍干燥，得到蓬松白色固體狀的肽。需要的話用MPLC進(jìn)行純化(見一般步驟)。
(b)將受護(hù)肽先用TFA/CH2Cl2(1∶1)處理1小時(shí)并蒸發(fā)，然后如前面(a)所述進(jìn)行氫化。
(c)先按(E)(ⅱ)水解COCOPh基團(tuán)，然后按(a)用H2-Pd/C氫化。
(d)脫除N-CF3-CO(N-三氟乙?；?將N-三氟乙?；娜芙庠贛eCN-H2O-0.880氨(1∶1∶1)中，室溫下保持24小時(shí)。必要時(shí)在蒸發(fā)后進(jìn)行純化，得到肽。
實(shí)施例下列實(shí)施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明的原理。
表1列出了本發(fā)明化合物的實(shí)施例。表2指出了其制備所用的步驟，這些步驟已在題為“制備步驟”的部分作了描述。表3給出了所列化合物的定性數(shù)據(jù)。
實(shí)施例1-37
表1實(shí)施例號(hào) 化學(xué)式1 H-DCha-Pro-D,LArg-CH2-OH2 H-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Me3 H-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF34 H-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH(CF3)25 H-DCha-Pro-Arg-CH2-O-C*H(Ph)-CF36 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-CH2-CF37 Et-OOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-CH2-CF38 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-CH2-CF2-CF2-CF39 HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph10 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Ph(4-OMe)11 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Ph(4-tBu)12 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Ph(4-Me)13 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Ph(4-F)14 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Ph(3-F)15 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Ph(2-F)16 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Ph(3-CF3)17 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Ph(4-CF3)18 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Ph(2-CF3)19 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-C6F520 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-Et21 HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-nPr22 HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-nBu23 HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-iBu24 HOOC-CH2-DCha-Aze-D,LArg-CH2-O-CH2-CF325 HOOC-CH2-DCha-Pic-D,LArg-CH2-O-CH2-CF326 HOOC-CH2-DCha-Pic-Arg-CH2-O-nBu27 Me-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-CH2-CF328 Me-SO2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-CH2-CF329 Ch-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-CH2-CF330 (HOOC-CH2)2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-CH2-CF3
表1(續(xù))實(shí)施例號(hào) 化學(xué)式31 (HOOC-CH2)2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-iBu32 HOOC-CH2-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-O-nBu33 HOOC-CH2-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF334 H-(3-trans-Ph)-D,LPro-D,LArg-CH2-O-CH2-CF335 H-(3-trans-Ch)-D,LPro-D,LArg-CH2-O-CH2-CF336 HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-S-nBu37 HOOC-CH2-DCha-Pro-D,LArg-CH2-SO2-nBu＊絕對(duì)構(gòu)型R或S
表2實(shí)施例號(hào) 制備步驟 脫保護(hù)步驟1 D c2 E b3 A或C b4 A或C b5 A或C b6 A a7 A a8 F a9 A或D a10 F a11 D a12 D a13 D a14 D a15 D a16 D a17 D a18 D a19 D a20 E a21 E a22 E a23 E a24 A a25 A a26 E a27 A和F a28 A和G a29 A和H a30 A a
表2(續(xù))實(shí)施例號(hào) 制備步驟 脫保護(hù)步驟31 E a32 E和B b33 A和B b34 I和A b35 I和A b36 D a37 D a
表3實(shí)施例號(hào) 分子量 FAB MS 氨基酸分析: HPLC保留時(shí)間(M+1) 肽含量(%)*(分)/系統(tǒng)**1 438.57 439 56/Pro 10.3/E2 452.60 453 65/Pro 9.9/E3 520.6 521 59/Pro 8.6/A4 588.6 589 60/Pro 10.7/A5 596.7 597 61/Pro 12.2/A6 578.64 579 72/Pro 14.8/C7 606.69 607.7 65/Pro 22.0/B8 678.65 679.8 76/Pro 18.2/G9 572.71 573.3 73/Pro 19.9/B10 602.74 603.8 76/Pro 13.4/G11 628.82 629.5 77/Pro 22.0/G12 586.74 587.2 75/Pro 16.0/G13 590.70 591.4 76/Pro 15.2/G14 590.70 591.4 63/Pro 15.0/G15 590.70 591.4 54/Pro 14.0/G16 640.71 641.5 68/Pro 19.0/G17 640.71 641.6 70/Pro 20.0/G18 640.71 641.4 65/Pro 18.4/G19 662.66 663 49/Pro 21.0/G20 524.67 525.4 79/Pro 15.5/B21 538.69 539 67/Pro 9.2/F22 552.72 553 69/Pro 19.3/B23 552.72 553.4 56/Pro 9.2/F24 564.61 565 67/Aze 13.6/D25 592.66 593 90/Pic 8.4/D26 566.75 567.4 86/Pic 17.0/G27 534.63 535.6 70/Pro 18.8/B28 598.69 599 71/Pro 11.2/D
表3(續(xù))實(shí)施例號(hào) 分子量 FAB MS 氨基酸分析: HPLC保留時(shí)間(M+1) 肽含量(%)*(分)/系統(tǒng)**29 616.77 617 64/Pro 14.5/C30 636.67 637.6 70/Pro 12.0/A31 610.76 611.2 67/Pro 10.0/F32 566.75 567.5 65/Pro 19.7/B33 592.66 593 46/Pro 10.6/F34 540.59 541 56/Pro 14.3/C35 546.64 547 49/Pro 15.9/C36 568.78 569.4 45/Pro 17.4/G37 600.78 601.3 62/Pro 14.6/G＊按所示氨基酸計(jì)算。
＊＊參見“一般實(shí)驗(yàn)步驟”。所給時(shí)間是指L-Arg差向異構(gòu)體。D-差向異構(gòu)體(少量)通常早0.5分流出。
系統(tǒng)A1%TFA-MeCN在1%TFA-H2O中的濃度在25分鐘內(nèi)由20%增至80%(20-80%，25分)。
系統(tǒng)B10-60%，30分系統(tǒng)C10-90%，30分系統(tǒng)D30-100%，30分系統(tǒng)E10-90%，20分系統(tǒng)F20-100%，20分系統(tǒng)G20-70%，30分實(shí)施例38用于連續(xù)靜脈給藥的溶液由下列成分制備溶液凝血酶抑制劑 50mg注射用氯化鈉 4.5g注射用水加至500ml將活性成分和氯化鈉溶于水中，然后將溶液過濾，再用高壓滅菌法或無菌0.2μm濾器過濾法滅菌，并無菌裝入無菌輸液瓶中。
實(shí)施例39注射液由下列成分制備溶液凝血酶抑制劑 5g注射用氯化鈉 9g注射用水加至1000ml將活性成分和氯化鈉溶于水中，然后將溶液過濾，再用高壓滅菌法或無菌0.2μm濾器過濾法滅菌，并無菌裝入無菌安瓿瓶中(5ml)。
實(shí)施例40用于經(jīng)鼻給藥的溶液由下列成分制備溶液凝血酶抑制劑 10g甘油 200g對(duì)羥基苯甲酸甲酯 1g
對(duì)羥基苯甲酸丙酯 0.2g注射用水加至1000ml將活性成分和防腐劑溶解在甘油和大部分水中。然后把體積調(diào)至1000ml，將溶液裝入無菌聚乙烯容器中。
實(shí)施例41口服片劑由下列成分制備1000片片劑凝血酶抑制劑 100g乳糖 200g聚乙烯吡咯烷酮 30g微晶纖維素 30g硬脂酸鎂 6g將活性成分和乳糖與聚乙烯吡咯烷酮水溶液混合。將該混合物干燥并磨成顆粒。然后混入微晶纖維素，再混入硬脂酸鎂。然后將該混合物用壓片機(jī)壓制成1000片片劑，每片含100mg活性成分。
實(shí)施例42口服明膠膠囊用下列成分的混合物裝明膠膠囊凝血酶抑制劑 50mg硬脂酸鎂 3mg乳糖 100mg生物學(xué)凝血酶凝血時(shí)間和IC50TT的測(cè)定將100μl人凝血酶(T6769，Sigma化學(xué)公司)的緩沖溶液(pH7.4)和100μl抑制劑溶液保溫1分鐘。然后加入100μl加有檸檬酸鹽的合并正常人血漿，用自動(dòng)裝置(KC 10，Amelung)測(cè)定凝血時(shí)間。
將凝血時(shí)間(秒)對(duì)抑制劑濃度作圖，用內(nèi)推法確定IC50TT。
IC50TT是使凝血酶對(duì)人血漿的凝血時(shí)間加倍的抑制劑濃度。pIC50TT是IC50TT(摩爾/升)的負(fù)對(duì)數(shù)，結(jié)果列于表4。
表4實(shí)施例號(hào) pIC50TT1 7.712 7.813 7.924 7.385 7.776 8.047 7.708 7.649 8.4510 7.9011 7.8612 8.2513 8.2214 8.1515 8.1216 7.7717 8.6818 7.3019 8.2720 8.1721 8.1422 8.6923 7.6424 8.0125 8.0026 7.8927 7.5228 6.8529 6.4730 7.38
表4(續(xù))實(shí)施例號(hào) pIC50TT31 6.8832 7.6333 7.7834 7.0335 7.2536 7.5737 7.72
縮寫4-DMAP4-二甲氨基吡啶ArgL-精氨酸Arg(Z2)N，N-二芐氧羰基-L-精氨酸AzeL-氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸Boc叔丁氧羰基Bu丁基Bzl芐基Ch環(huán)己基ChaL-β-環(huán)己基丙氨酸DMF二甲基甲酰胺Et乙基EtOAc乙酸乙酯FAB快原子轟擊FⅠ至FⅩⅢ凝血因子Ⅰ至ⅩⅢFⅡa至FⅩⅢa凝血因子Ⅱ至ⅩⅢ的活化形式Gly甘氨酸HMW-K高分子量激肽原HOAc乙酸HONSuN-羥基琥珀酰亞胺HPLC高效液相色譜iBC氯甲酸異丁酯Kall激肽釋放酶Me甲基
MPLC中壓液相色譜NMMN-甲基嗎啉Nph萘基Ph苯基PicL-2-哌啶酸PL磷脂Pr丙基Prekall前激肽釋放酶ProL-脯氨酸Tce2，2，2-三氯乙基TFA三氟乙酸THF四氫呋喃ValL-纈氨酸WSCDI水溶性碳二亞胺Z芐氧羰基前綴n、i和t具有其通常含義正、異和叔。
權(quán)利要求
1.一種通式如下的化合物，它既可以是原有形式，也可以是生理上可接受的鹽的形式，包括其立體異構(gòu)體
其中A代表-CH2-，-CH=CH-，-CH2-CH2-或-CH2-CH2-CH2-；R1和R2相同或不同，各自代表H或X-B-，其中B是含1-3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，X是H、甲基、乙基、含3-6個(gè)碳原子的環(huán)烷基或R′CO-，其中R′為OH、含1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基、NH2或NHR″，其中R″是含1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；或者X是本身已知的羧酸類似物，選自-PO(OR″′)2，-SO3H和5-(1H)-四唑基，其中R″′是H、甲基或乙基；或者B為-SO2-而X為甲基或乙基；m為0、1或2，R3代表環(huán)已基；R3A代表H；或者m為1，R3代表環(huán)己基或苯基，R3A與R1一起形成亞乙基橋；Y代表O或S(O)p，其中p為0、1或2；R4代表H；含有1-6個(gè)碳原子、未取代或被一個(gè)或更多個(gè)氟原子和/或苯基取代的直鏈或支鏈烷基或環(huán)烷基；取代或未取代的芳環(huán)，選自苯基、4-甲氧基苯基、4-叔丁基苯基、4-甲基苯基、2-三氟甲基苯基、3-三氟甲基苯基、4-三氟甲基苯基、被1-5個(gè)氟原子取代的苯基；或-CH(CF3)苯基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中A代表-CH2-CH2-或-CH2-CH2-CH2-;R1是H，R2代表HOCO(CH2)n-或CH3CH2OCO(CH2)n-，n為1或2;Y為O;m為1，R3代表環(huán)己基，R3A代表H。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，該化合物選自以下化合物的原有形式或生理上可接受的鹽的形式，包括立體異構(gòu)體H-DCha-Pro-Arg-CH2-OH，H-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Me，H-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，H-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH(CF3)2，H-DCha-Pro-Arg-CH2-O-(R or S)CH(Ph)-CF3，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，Et-OOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF2-CF2-CF3，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph(4-OMe)，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph(4-tBu)，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph(4-Me)，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph(4-F)，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph(3-F)，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph(2-F)，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph(3-CF3)，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph(4-CF3)，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Ph(2-CF3)，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-C6F5，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-Et，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-nPr，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-nBu，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-iBu，HOOC-CH2-DCha-Aze-Arg-CH2-O-CH2-CF3，HOOC-CH2-DCha-Pic-Arg-CH2-O-CH2-CF3，HOOC-CH2-DCha-Pic-Arg-CH2-O-nBu，Me-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，Me-SO2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，Ch-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，(HOOC-CH2)2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，(HOOC-CH2)2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-iBu，HOOC-CH2-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-nBu，HOOC-CH2-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，H-(3-trans-Ph)-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，H-(3-trans-Ch)-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-S-nBu，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-SO2-nBu，
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，該化合物選自以下化合物的原有形式或生理上可接受的鹽的形式，包括立體異構(gòu)體HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，HOOC-CH2-DCha-Pic-Arg-CH2-O-CH2-CF3，HOOC-CH2-DCha-Pic-Arg-CH2-O-nBu，HOOC-CH2-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-nBu，HOOC-CH2-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-CH2-CF3，HOOC-CH2-DCha-Pro-Arg-CH2-O-nBu，
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的化合物在治療中的應(yīng)用。
6.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的化合物的方法，該方法包括(方法Ⅰ)用R4Y-(Y＝O，S)置換下式鹵甲基酮中的鹵素
其中W1是氨基末端保護(hù)基，W2是保護(hù)基將該酮還原為醇，脫除氨基末端保護(hù)基，進(jìn)行常規(guī)肽偶聯(lián)，然后將醇氧化，得到受護(hù)的三肽酮，脫除氨基末端保護(hù)基，然后進(jìn)行N-烷基化并脫保護(hù)，或者用氨基末端-N-烷基化的-N-三氟?；Ｗo(hù)的二肽置換上述偶聯(lián)反應(yīng)中的受護(hù)二肽，然后進(jìn)行氧化和脫保護(hù);或者(方法Ⅱ)用R4-鹵素使下式的α-酮醇烷基化，然后再如方法Ⅰ進(jìn)一步反應(yīng)
其中W1和W2如上所限定;或者(方法Ⅲ)使下式化合物(其中W1和W2如上所限定)與(T-CH2CO)2O(其中T為鹵素、R4O或R4S)和4-DMAP反應(yīng)，然后再如方法Ⅰ進(jìn)一步反應(yīng)
需要時(shí)制成生理上可接受的鹽;在該反應(yīng)生成立體異構(gòu)體混合物的情況下，可以用常規(guī)色譜技術(shù)或重結(jié)晶技術(shù)分離這些立體異構(gòu)體，需要時(shí)分離出單個(gè)異構(gòu)體。
7.一種藥物制劑，該制劑含有有效量的權(quán)利要求1-4中所述的任何化合物，還含有一種或更多種藥物載體。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的化合物作為活性成分在制備一種藥物制劑中的應(yīng)用，該藥物制劑用于抑制人或動(dòng)物體內(nèi)的凝血酶。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的化合物作為抗凝血?jiǎng)┑膽?yīng)用。
10.一種在需要抑制凝血酶的人或動(dòng)物體內(nèi)抑制凝血酶的方法，該方法包括，給予所述人或動(dòng)物有效抑制量的權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的化合物。
11.一種治療或預(yù)防人或動(dòng)物血液和組織中的血栓形成和凝固性過高的方法，該方法包括，對(duì)需要進(jìn)行所述治療或預(yù)防的宿主，給予有效量的權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的化合物。
12.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述并基本如上所述的化合物、方法、藥物制劑、應(yīng)用和方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的競爭性凝血酶抑制劑。其合成方法，含有這些化合物作為活性成分的藥物組合物、以及上式化合物或其生理上可接受的鹽(包括立體異構(gòu)體)作為抗凝血?jiǎng)┰陬A(yù)防和治療血栓栓塞疾病中的應(yīng)用，其中A、R
文檔編號(hào)C07K5/06GK1069736SQ92109600
公開日1993年3月10日 申請(qǐng)日期1992年8月28日 優(yōu)先權(quán)日1991年8月28日
發(fā)明者B·阿特拉什, D·M·瓊斯, M·謝爾克 申請(qǐng)人:阿斯特拉公司