一種提取環(huán)磷酸腺苷的方法及應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種提取環(huán)磷酸腺苷的方法及應(yīng)用，屬于生物活性物質(zhì)提取【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明所提供的方法是利用堿液調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH后離心分離獲取上清液，濃縮上清液后進(jìn)行第一次脫色，利用有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀脫色液，再溶解所得沉淀后進(jìn)行第二次脫色，微孔過(guò)濾后濃縮第二脫色液，加入有機(jī)溶劑沉淀濃縮后的第二脫色液，離心分離并真空干燥沉淀后獲得成品。本發(fā)明所提供的方法可取代現(xiàn)有的離子交換和樹(shù)脂層析工藝，可降低廢水量82.5％，同時(shí)生產(chǎn)周期大大縮短，縮短36％的生產(chǎn)時(shí)間；所制備的環(huán)磷酸腺苷品質(zhì)穩(wěn)定，純度可達(dá)97％以上，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、飼料等領(lǐng)域。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種提取環(huán)磷酸腺苷的方法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種提取環(huán)磷酸腺苷的方法及應(yīng)用，屬于微生物發(fā)酵產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng) 域。

【背景技術(shù)】
[0002] 環(huán)磷腺苷為參與調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的第二信使物質(zhì)，其作用非常廣泛，能使心肌收縮 力增強(qiáng)，引起血壓升高，心輸出量增高。并能舒張平滑肌、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管、改善肝功能、 促進(jìn)神經(jīng)再生、抑制皮膚外層上皮細(xì)胞分裂及轉(zhuǎn)化異常細(xì)胞的功能、促進(jìn)呼吸鏈氧化酶的 活性及改善心肌缺氧等。
[0003] 目前環(huán)磷酸腺苷的主要生產(chǎn)方法是化學(xué)合成法，存在著收率低、成本高，毒副作用 大的缺點(diǎn)；為了克服這些缺點(diǎn)，開(kāi)發(fā)一種生物方法制備環(huán)磷酸腺苷成為研究趨勢(shì)，目前主要 有紅棗提取法和生物發(fā)酵法兩種研究方向。而這兩種方法相比，生物發(fā)酵法具有不受原材 料限制，原材料廉價(jià)和易采購(gòu)，規(guī)模容易放大，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，并且成本上有著極大優(yōu)勢(shì)，因 此該法是最替代化學(xué)合成法最具潛力的一種方法。
[0004] 目前對(duì)發(fā)酵法生產(chǎn)環(huán)磷酸腺苷產(chǎn)物提取方面的工藝主要是離子交換和吸附層析， 這種方法最大的缺點(diǎn)是廢水量大，這也是所有樹(shù)脂分離存在的共性問(wèn)題，隨著環(huán)保要求的 提高，廢水處理成本也開(kāi)始上升，因此從經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益角度看，開(kāi)發(fā)一種替代樹(shù)脂分離的 方法就顯得相當(dāng)必要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種從發(fā)酵液中提取環(huán)磷酸腺苷的方法，所采取 的技術(shù)方案如下：
[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種從發(fā)酵液中提取環(huán)磷酸腺苷的方法，該方法是調(diào)節(jié)發(fā) 酵液的pH后離心分離獲取上清液，濃縮上清液后進(jìn)行第一次脫色，利用有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀 脫色液，再溶解所得沉淀后進(jìn)行第二次脫色，微孔過(guò)濾后濃縮第二脫色液，加入有機(jī)溶劑沉 淀濃縮后的第二脫色液，離心分離并真空干燥沉淀后獲得成品。
[0007] 所述方法的步驟如下：
[0008] 1)利用堿液調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH至8. 0-8. 5,離心后獲取上清液；
[0009] 2)濃縮步驟1)所得上清液，并進(jìn)行脫色處理，獲得第一脫色液；
[0010] 3)利用有機(jī)溶劑對(duì)步驟2)所得的第一脫色液進(jìn)行分級(jí)沉淀，離心分離收集部分 沉淀；
[0011] 4)利用純化水溶解步驟3)所得的部分沉淀，溶解后進(jìn)行第二次脫色處理，微孔過(guò) 濾后獲取濾液；
[0012] 5)濃縮步驟4)所得濾液，再加入有機(jī)溶劑進(jìn)行沉淀處理，離心分獲取沉淀；
[0013] 6)真空干燥步驟5)所得沉淀獲得成品。
[0014] 步驟1)所述發(fā)酵液為節(jié)桿菌發(fā)酵液；所述堿液為鈉或鉀的氫氧化物或碳酸化合 物溶液；所述離心，是在4500_5000rpm下離心5_6min。
[0015] 步驟2)所述濃縮，是減壓濃縮，真空度為-0.065---0.075MPa，濃縮溫度為 45-50°C，濃縮終濃度20-25g/L ;所述脫色處理，使用糖用活性炭，在55-60°C條件下處理 15-20min，活性炭添加量為濃縮液體積的1 %。
[0016] 步驟3)所述分級(jí)沉淀，是使用無(wú)水乙醇或丙酮，通過(guò)流加的方式進(jìn)行；所述收集 部分沉淀，是收集有機(jī)溶劑濃度40% -50 %的沉淀。
[0017] 步驟4)所述純化水，是二級(jí)反滲透水，電導(dǎo)率< 2 μ S/cm，加水量為沉淀質(zhì)量的5 倍；所述第二次脫色處理，是用針劑活性炭在常溫條件下脫色15min，針劑活性炭的添加量 為沉淀質(zhì)量的6%。
[0018] 步驟5)所述濃縮，是在真空度-0. 0650. 075MPa，溫度45-50°C的條件下，將濾 液的體積濃縮至原體積的1/3 ;所述沉淀處理，是加入無(wú)水乙醇或丙酮至溶劑體積濃度為 70%。
[0019] 步驟6)所述真空干燥，干燥溫度為45°C，干燥時(shí)間10h。
[0020] 所述方法的具體步驟如下：
[0021] 1)利用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)節(jié)桿菌發(fā)酵液的pH至8. 0-8. 5,再將發(fā)酵液于5000rpm 下離心5min,獲得上清液；
[0022] 2)在真空度-0. 0650. 075MPa，濃縮溫度45_50°C的條件下將步驟1)所得上清 液濃縮至濃度為25g/L，向濃縮液中加入濃縮液體積1 %的糖用活性炭，在60°C下，脫色處 理15min，去除活性炭后，獲得第一脫色液；
[0023] 3)以流加的方式向步驟2)所得的第一脫色液中加入無(wú)水乙醇或丙酮進(jìn)行分級(jí)沉 淀處理，收集有機(jī)溶劑濃度40% -50 %的沉淀；
[0024] 4)向步驟3)所得的部分沉淀中加入5倍質(zhì)量的電導(dǎo)率彡2 μ S/cm的二級(jí)反滲透 水溶解沉淀，再加入沉淀質(zhì)量6 %的針劑活性炭，在室溫下脫色處理15min并有微孔過(guò)濾獲 得濾液；
[0025] 5)在真空度-0. 0650. 075MPa，溫度45_50°C的條件下，將步驟4)所得濾液的體 積濃縮至原體積的1/3,再加入無(wú)水乙醇或丙酮至溶劑體積濃度為70%，于SOOOrpm下離心 20min，獲得沉淀；
[0026] 6)在45 °C條件下，真空干燥步驟5)所得沉淀10h。
[0027] 所述方法用于從微生物發(fā)酵液中提取環(huán)磷酸腺苷。
[0028] 本發(fā)明對(duì)發(fā)酵液的分離優(yōu)選使用管式離心機(jī)；減壓濃縮設(shè)備優(yōu)選單效或多效減壓 蒸發(fā)器；有機(jī)溶劑沉淀分離優(yōu)選防爆型布袋上卸料離心機(jī)，脫碳優(yōu)選管式脫碳機(jī)。
[0029] 本發(fā)明有益效果：
[0030] 1、采取兩次結(jié)晶沉淀的方法，取代離子交換和樹(shù)脂層析工藝，降低廢水量70%以 上。
[0031] 2、采用管式離心機(jī)對(duì)中間產(chǎn)品進(jìn)行分離，相比于傳統(tǒng)的壓濾機(jī)和膜過(guò)濾設(shè)備，分 離效果好，生產(chǎn)連續(xù)性強(qiáng)，降低勞動(dòng)強(qiáng)度，節(jié)約用水。
[0032] 3、生產(chǎn)周期大大縮短，由原來(lái)的72小時(shí)，縮短至48小時(shí)。
[0033] 4、產(chǎn)品品質(zhì)穩(wěn)定，純度不低于95%，重金屬含量符合企業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。一次收率大于 72%。

【具體實(shí)施方式】
[0034] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明不受實(shí)施例的限制。
[0035] 本發(fā)明所用方法、試劑以及儀器，未經(jīng)特別說(shuō)明，均為本【技術(shù)領(lǐng)域】中常規(guī)方法、試 劑和儀器。
[0036] 實(shí)施例1發(fā)酵液的制備
[0037] 本發(fā)明所用發(fā)酵液為節(jié)桿菌發(fā)酵液，其中，優(yōu)選菌株Arthrobacter crystallopoietes, Arthrobacter oxidans， Arthrobacter CCTCC N0:M2013431， Arthrobacter sp. A302的發(fā)酵液。本實(shí)施例提供了一種上述菌株發(fā)酵液的制備方法。
[0038] 本實(shí)施例所用培養(yǎng)基具體組成如下：
[0039] 斜面培養(yǎng)基（g/L):葡萄糖10,蛋白胨10,酵母膏10,牛肉膏10, NaC13,瓊脂20。 pH 6. 8〇
[0040] 種子培養(yǎng)基（g/L):葡萄糖10,蛋白胨10,酵母膏10,牛肉膏10, NaC13。pH 6. 8。
[0041] 發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L):葡萄糖30，1(2即0415，腿2?0 45，1^040.1，尿素10，生物素0.005， C〇C120. 005, NaClO. 4,次黃嘌呤 5, pH 7. 0。
[0042] 發(fā)酵條件如下：
[0043] 將-80°C冰箱保存菌種接種于斜面培養(yǎng)基活化，30°C培養(yǎng)48h。斜面培養(yǎng)基上的 菌苔接種于種子培養(yǎng)基，3〇1：、28〇1'/1^11搖床培養(yǎng)2411 ;將培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)基以8%的接 種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基，30°C、280r/min搖床培養(yǎng)72h。以上種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基均用 500mL搖瓶，裝液量為30mL。
[0044] 實(shí)施例2
[0045] 本實(shí)施例提供了一種采用離子交換和樹(shù)脂層析法提取磷酸腺苷的方法，步驟如 下：
[0046] 1)取實(shí)施例1所制備的發(fā)酵液1L，發(fā)酵單位3g/L，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心5min, 收集上清液，用濃鹽酸調(diào)pH至2. 0。
[0047] 2)離子交換分離所用樹(shù)脂為001X7型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，樹(shù)脂裝柱體積200mL，用 4%鹽酸處理成氫型。上柱流速每小時(shí)0. 3柱體積每小時(shí)，上柱結(jié)束后再用2倍床體積的純 化水壓料，壓料結(jié)束后用0. 1N氫氧化鈉洗脫，洗脫流速同上，收集洗脫液450mL。
[0048] 3)樹(shù)脂層析層析樹(shù)脂為大孔吸附樹(shù)脂HP-20,樹(shù)脂裝柱體積300mL，將離交后收集 洗脫液加入樹(shù)脂中，上樣流速〇. 3柱體積每小時(shí)，上樣結(jié)束后采用3倍柱體積純化水和5倍 柱體積的20%甲醇溶液分步洗脫，收集甲醇溶液洗脫部分，洗脫流速同上。
[0049] 4)濃縮將洗脫液在減壓蒸發(fā)器中濃縮，真空度-0. 065-0. 075MPa，蒸發(fā)溫度 40-45 °C，濃縮至發(fā)酵液體積的1/5。
[0050] 5)結(jié)晶往濃縮液加入無(wú)水乙醇至終濃濃度70%，攪拌結(jié)晶12小時(shí)
[0051] 6)分離干燥結(jié)晶完成后利用離心機(jī)分離得到濕晶體，然后置于真空干燥箱中干 燥，干燥溫度40-45 °C。
[0052] 實(shí)施例3
[0053] 1)取實(shí)施例1所制備的發(fā)酵液1L，發(fā)酵單位4g/L，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心5min, 收集上清液，用濃鹽酸調(diào)pH至3. 0。
[0054] 2)離子交換分離所用樹(shù)脂為001X7型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，樹(shù)脂裝柱體積200mL，用 4%鹽酸處理成氫型。上柱流速每小時(shí)0. 3柱體積每小時(shí)，上柱結(jié)束后再用2倍床體積的純 化水壓料，壓料結(jié)束后用0. 1N氫氧化鈉洗脫，洗脫流速同上，收集洗脫液450mL。
[0055] 3)樹(shù)脂層析層析樹(shù)脂為大孔吸附樹(shù)脂HP-20,樹(shù)脂裝柱體積300mL，將離交后收集 洗脫液加入樹(shù)脂中，上樣流速〇. 3柱體積每小時(shí)，上樣結(jié)束后采用3倍柱體積純化水和5倍 柱體積的20%甲醇溶液分步洗脫，收集甲醇溶液洗脫部分，洗脫流速同上。
[0056] 4)濃縮將洗脫液在減壓蒸發(fā)器中濃縮，真空度-0. 065-0. 075MPa，蒸發(fā)溫度 40-45 °C，濃縮至發(fā)酵液體積的1/5。
[0057] 5)結(jié)晶往濃縮液加入無(wú)水乙醇至終濃濃度70%，攪拌結(jié)晶12小時(shí)
[0058] 6)分離干燥結(jié)晶完成后利用離心機(jī)分離得到濕晶體，然后置于真空干燥箱中干 燥，干燥溫度40-45 °C。
[0059] 實(shí)施例4
[0060] 本實(shí)施例提供了一種從發(fā)酵液中提取環(huán)磷酸腺苷的方法，步驟如下：
[0061] 1)取實(shí)施例1所制備的發(fā)酵液1L，發(fā)酵單位4g/L利用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液 的pH至8. 0-8. 5,再將發(fā)酵液于5000rpm下離心5min，獲得上清液；
[0062] 2)在真空度-0. 0650. 075MPa，濃縮溫度45_50°C的條件下將步驟1)所得上清 液濃縮至濃度為25g/L，向濃縮液中加入濃縮液體積1 %的糖用活性炭，在60°C下，脫色處 理15min，去除活性炭后，獲得第一脫色液；
[0063] 3)以流加的方式向步驟2)所得的第一脫色液中加入無(wú)水乙醇或丙酮進(jìn)行分級(jí)沉 淀處理，收集有機(jī)溶劑濃度40% -50 %的沉淀；
[0064] 4)向步驟3)所得的部分沉淀中加入5倍質(zhì)量的電導(dǎo)率彡2 μ S/cm的二級(jí)反滲透 水溶解沉淀，再加入沉淀質(zhì)量6 %的針劑活性炭，在室溫下脫色處理15min并有微孔過(guò)濾獲 得濾液；
[0065] 5)在真空度-0. 0650. 075MPa，溫度45_50°C的條件下，將步驟4)所得濾液的體 積濃縮至原體積的1/3,再加入無(wú)水乙醇或丙酮至溶劑體積濃度為70%，于SOOOrpm下離心 lOmin，獲得沉淀；
[0066] 6)在45 °C條件下，真空干燥步驟5)所得沉淀10h。
[0067] 實(shí)施例5
[0068] 本實(shí)施例提供了一種從發(fā)酵液中提取環(huán)磷酸腺苷的方法，步驟如下：
[0069] 1)取實(shí)施例1所制備的發(fā)酵液1L，發(fā)酵單位4g/L利用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液 的pH至8. 0-8. 5,再將發(fā)酵液于5000rpm下離心5min，獲得上清液；
[0070] 2)在真空度-0. 0650. 075MPa，濃縮溫度45-50°C的條件下將步驟1)所得上清 液濃縮至濃度為25g/L，向濃縮液中加入濃縮液體積1 %的糖用活性炭，在60°C下，脫色處 理10min，去除活性炭后，獲得第一脫色液；
[0071] 3)以流加的方式向步驟2)所得的第一脫色液中加入無(wú)水乙醇或丙酮進(jìn)行分級(jí)沉 淀處理，收集有機(jī)溶劑濃度40% -50 %的沉淀；
[0072] 4)向步驟3)所得的部分沉淀中加入5倍質(zhì)量的電導(dǎo)率彡2 μ S/cm的二級(jí)反滲透 水溶解沉淀，再加入沉淀質(zhì)量6%的針劑活性炭，在室溫下脫色處理15min并有微孔過(guò)濾獲 得濾液；
[0073] 5)在真空度-0. 0650. 075MPa，溫度45_50°C的條件下，將步驟4)所得濾液的體 積濃縮至原體積的1/3,再加入無(wú)水乙醇或丙酮至溶劑體積濃度為70%，與于8000rpm下離 心15min，獲得沉淀；
[0074] 6)在45 °C條件下，真空干燥步驟5)所得沉淀10h。
[0075] 實(shí)施例6
[0076] 本實(shí)施例提供了一種從發(fā)酵液中提取環(huán)磷酸腺苷的方法，步驟如下：
[0077] 1)取實(shí)施例1所制備的發(fā)酵液1L，發(fā)酵單位4g/L利用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)發(fā)酵液 的pH至8. 0-8. 5,再將發(fā)酵液于4000rpm下離心5min，獲得上清液；
[0078] 2)在真空度-0. 0650. 075MPa，濃縮溫度45_50°C的條件下將步驟1)所得上清 液濃縮至濃度為25g/L，向濃縮液中加入濃縮液體積1 %的糖用活性炭，在50°C下，脫色處 理15min，去除活性炭后，獲得第一脫色液；
[0079] 3)以流加的方式向步驟2)所得的第一脫色液中加入無(wú)水乙醇或丙酮進(jìn)行分級(jí)沉 淀處理，收集有機(jī)溶劑濃度40% -50 %的沉淀；
[0080] 4)向步驟3)所得的部分沉淀中加入5倍質(zhì)量的電導(dǎo)率彡2 μ S/cm的二級(jí)反滲透 水溶解沉淀，再加入沉淀質(zhì)量6%的針劑活性炭，在室溫下脫色處理15min并有微孔過(guò)濾獲 得濾液；
[0081] 5)在真空度-0. 0650. 075MPa，溫度45-50°C的條件下，將步驟4)所得濾液的體 積濃縮至原體積的1/3,再加入無(wú)水乙醇或丙酮至溶劑體積濃度為70%，與于8000rpm下離 心15min，獲得沉淀；
[0082] 6)在45 °C條件下，真空干燥步驟5)所得沉淀10h。
[0083] 實(shí)施例7
[0084] 本實(shí)施例利用高效液相色譜法測(cè)定了實(shí)施例2-6所得樣品的純度，結(jié)果如表1所 示；
[0085] 表1實(shí)施例2-6制備環(huán)磷酸腺苷的純度及提取率
[0086]

【權(quán)利要求】
1. 一種提取環(huán)磷酸腺苷的方法，其特征在于，調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH后離心分離獲取上清 液，濃縮上清液后進(jìn)行第一次脫色，利用有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀脫色液，再溶解所得沉淀后進(jìn)行 第二次脫色，微孔過(guò)濾后濃縮第二脫色液，加入有機(jī)溶劑沉淀濃縮后的第二脫色液，離心分 離并真空干燥沉淀后獲得成品。
2. 權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟如下： 1) 利用堿液調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH至8. 0-8. 5,離心分離后，收集上清液； 2) 濃縮步驟1)所得上清液，并進(jìn)行脫色處理，獲得第一脫色液； 3) 利用有機(jī)溶劑對(duì)步驟2)所得的第一脫色液進(jìn)行分級(jí)沉淀，離心分離收集部分沉淀； 4) 利用純化水溶解步驟3)所得的部分沉淀，溶解后進(jìn)行第二次脫色處理，微孔過(guò)濾后 獲取濾液； 5) 濃縮步驟4)所得濾液，再加入有機(jī)溶劑進(jìn)行沉淀處理，離心分獲取沉淀； 6) 真空干燥步驟5)所得沉淀獲得成品。
3. 權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，步驟1)所述發(fā)酵液為節(jié)桿菌發(fā)酵液；所述堿液 為鈉或鉀的氫氧化物或碳酸化合物溶液；所述離心，是在4500-5000rpm下離心5-6min。
4. 權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，步驟2)所述濃縮，是減壓濃縮，真空度 為-0. 0650. 075MPa，濃縮溫度為45-50°C，濃縮終濃度20-25g/L ;所述脫色處理，使用糖 用活性炭，在55-60°C條件下處理15-20min，活性炭添加量為濃縮液體積的1%。
5. 權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，步驟3)所述分級(jí)沉淀，是使用無(wú)水乙醇或丙酮， 通過(guò)流加的方式進(jìn)行；所述收集部分沉淀，是收集有機(jī)溶劑濃度40% -50%的沉淀。
6. 權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，步驟4)所述純化水，是二級(jí)反滲透水，電導(dǎo)率 < 2 μ S/cm，加水量為沉淀質(zhì)量的5倍；所述第二次脫色處理，是用針劑活性炭在常溫條件 下脫色15min，針劑活性炭的添加量為沉淀質(zhì)量的6%。
7. 權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，步驟5)所述濃縮，是在真空 度-0. 0650. 075MPa，溫度45-50°C的條件下，將濾液的體積濃縮至原體積的1/3 ;所述沉 淀處理，是加入無(wú)水乙醇或丙酮至溶劑體積濃度為70%。
8. 權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，步驟6)所述真空干燥，干燥溫度為45°C，干燥時(shí) 間 10h。
9. 權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，具體步驟如下： 1) 利用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)節(jié)桿菌發(fā)酵液的pH至8. 0-8. 5,再將發(fā)酵液于5000rpm下離 心5min,獲得上清液； 2) 在真空度-0. 0650. 075MPa，濃縮溫度45-50°C的條件下將步驟1)所得上清液濃 縮至濃度為20-25g/L，向濃縮液中加入濃縮液體積1%的糖用活性炭，在60°C下，脫色處理 15min，去除活性炭后，獲得第一脫色液； 3) 以流加的方式向步驟2)所得的第一脫色液中加入無(wú)水乙醇或丙酮進(jìn)行分級(jí)沉淀處 理，收集有機(jī)溶劑濃度40% -50 %的沉淀； 4) 向步驟3)所得的部分沉淀中加入5倍質(zhì)量的電導(dǎo)率< 2 μ S/cm的二級(jí)反滲透水溶 解沉淀，再加入沉淀質(zhì)量6 %的針劑活性炭，在室溫下脫色處理15min并有微孔過(guò)濾獲得濾 液； 5) 在真空度-0. 0650. 075MPa，溫度45-50°C的條件下，將步驟4)所得濾液的體積 濃縮至原體積的1/3,再加入無(wú)水乙醇或丙酮至溶劑體積濃度為70%，于8000rpm下離心 20min，獲得沉淀； 6)在45°C條件下，真空干燥步驟5)所得沉淀10h。
10.權(quán)利要求1所述方法，用于從微生物發(fā)酵液中提取環(huán)磷酸腺苷。
【文檔編號(hào)】C07H19/213GK104151385SQ201410401250
【公開(kāi)日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月15日
【發(fā)明者】劉琬一, 王智敏 申請(qǐng)人:劉琬一