抗cxcr3抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供抗CXCR3抗體，以及使用這些抗體診斷和/或治療CXCR3相關(guān)的疾病，例如I型糖尿病(T1D)、尤其新發(fā)生T1D的方法。在某些實施例中，本文公開了CXCR3中和抗體。
【專利說明】抗CXCR3抗體
[0001] 本申請基于35U.S.C. § 119要求于2012年1月20日提交的美國臨時申請序列號 61/588,936的權(quán)益，該申請通過引用全部并入本文。
[0002] 本發(fā)明是關(guān)于抗體及使用抗體治療與CXCR3信號傳導(dǎo)相關(guān)疾病（例如I型糖尿病 (I型糖尿?。籘1D))的方法。
[0003] 糖尿病的特征在于因缺乏胰島素作用而導(dǎo)致的慢性高血糖癥以及伴發(fā)的各種特 征性的代謝異常。糖尿病從廣義上可以分為I型和II型。T1D的特征在于朗格罕氏島 (Langerhans'islets)胰腺0細(xì)胞的缺失，而II型糖尿病的特征是胰島素分泌和胰島素 敏感性二者降低（胰島素抵抗）。在美國，糖尿病的發(fā)病率為人群的約2%至4%，其中I型 糖尿?。ㄒ喾Q之為胰島素依賴性或IDDM)占所有病例的約7%至10%。
[0004] I型糖尿病的特點在于無法產(chǎn)生足量的胰島素以維持葡萄糖穩(wěn)態(tài)。人們認(rèn)為該 病癥是由自身免疫介導(dǎo)的對胰腺0細(xì)胞破壞而引起的。與I型糖尿病相關(guān)的自身免疫 性涉及B和T自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞二者的參與。實際上，高達(dá)98%的I型糖尿病患者具 有抗一種或多種自身0細(xì)胞抗原及異原性胰島細(xì)胞胞質(zhì)抗原（ICAs)，其中自身0細(xì)胞 抗原包括胰島素、谷氨酸脫羧酶（GAD)、胰島素瘤抗原-2以及胰島素瘤抗原-2b(IA-2及 IA-2P)。盡管可能并非總是起決定性作用，但是一種或多種自身抗體的含量通常與@細(xì) 胞破壞相關(guān)。Irvine等人，Diabetes, 26:138-47 (1997);Riley等人，N.EngLJ,Med, 323:1 187-72(1990)。因此，自身抗體可以用作自身免疫性糖尿病發(fā)展的標(biāo)志物，也可以與代謝變 化一起用于預(yù)測T1D患者的親屬中出現(xiàn)糖尿病的風(fēng)險。
[0005] I型糖尿病的發(fā)生可以由自身反應(yīng)性T細(xì)胞介導(dǎo)，正如通過借助于T1D 診斷時獲得的組織活檢證實經(jīng)活化的T細(xì)胞浸潤胰島。Bottazzo等人，N,EngL J.Med, ,313:353-80 (1985);Hanninen等人，J，Clin.Invest, 90:1901-10 (1992);Itoh等 人，J.Clin,invest, 92:2313-22 (1993);Imagawa等人，Diabetes, 50:1289-73 (2001)。
[0006]趨化因子（c-x-c基序）受體3 (CXCR3)，亦稱之為G蛋白偶聯(lián)受體9 (GPR9)、 ⑶183、IP-10受體和Mig受體，是在自身反應(yīng)性T細(xì)胞上表達(dá)的趨化因子受體，其 與一系列生理過程和相關(guān)疾?。ɡ鏣1D)相關(guān)。CXCR3幾乎不存在于初始T細(xì)胞 中，但在經(jīng)抗原活化后上調(diào)且因一級配體（CXCL9、CXCL10及CXCL11)將活化細(xì)胞募 集至組織發(fā)炎位點。已顯示，在T1D的小鼠模型（(Christen等人，TheJournalof Immunology, 2003,171:8838-6845;orimoto等人，JImmunol2004 ；173 ；7017-7024 ； Sarkar等人.Diabetes. 2012Feb;81 (2) : 436-46)中及在患有胰島炎的T1D患者的胰島 (Uno等人 2010;Roep等人ClinicalandExperimentalImmunology, 2003, 159:338-343 ; Sarkar等人.Diabetes. 2012Feb;61 (2) :438-46)中，P細(xì)胞主要表達(dá)CXCL10,并且CXCL9 含量較低。另外，已顯示，在T1D小鼠模型中和在I型糖尿病胰腺樣本中，已浸潤胰腺的T 細(xì)胞表達(dá)CXCR3(Christen等人，TheJournalofImmunology, 2003, 171:8838-6845;Van Haiteren等人，Diabetologia48:75-82(2005);Unoetal2010;Roep等人，Clinical andExperimentalimmunology, 2003, 159:338-343;Sarkar等人，Diabetes. 2012Feb; 81 (2) :436-46)。此外，CXCR3缺陷的基因敲除小鼠出現(xiàn)發(fā)作顯著性延遲及T1D發(fā)病率降低 (Frigerio等人，NatureMedicine8:1414-1420 (2002))，而CXCL10 在轉(zhuǎn)基因小鼠胰島中 過表達(dá)促進(jìn)T細(xì)胞浸潤并加速T1D發(fā)作（Rhode等人，J.Immunol. 175 (6) : 3516-24 (2005))。 通過抗體治療中和CXCL10是具有保護(hù)性（Christen等人，TheJournalofImmunolo gy，2003, 171:6838-6845)。
[0007] 在人類中已鑒定CXCR3有三種亞型，表示為A、B及Alt(Lasagni等人，1￡叉口. Med. 2003197:1537;EhlertetalJ.Immunol. 2004 ; 173 ;6234-6240) 〇CXCR3-A結(jié)合至CXC 趨化因子CXCL9(MIG)、CXCLIO(IP-IO)及CXCL11 (I-TAC) ;CXCR3-B亦結(jié)合至這些靶標(biāo)，也 結(jié)合CXCL4 ;CXCR3-Alt似乎與CXCL11互相作用。盡管選擇性剪接產(chǎn)生CXCR3的若干蛋白 亞型，但是CXCR3-A是活體內(nèi)主要形式，這是因為CXCR3-B和CXCR3-AU在蛋白水平上的表 達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)更低。Lasagni等人，J.Exp.Med. 2003197:1537;EhlertetaiJ,Immunol. 2004; 173 ；8234-624Q〇
[0008] 尚未證實使用CXCR3小分子抑制劑破壞CXCR3途徑的努力是完全有效的。 Christen等人，ClinExp.Immunol. 185:318-328(2011)。研究主要集中于在糖尿病發(fā)作前 破壞CXCL10 的抗體和其他方法。Morimoto等人，J.Immun. 173:7017-7024(2004) ;0ikawa etai.，Rev.DiabetStud. 7:209-224(2010)。
[0009] 鑒于與CXCR3相關(guān)的T1D及其他疾病的盛行，因此需要一些靶向性CXCR3信號傳 導(dǎo)的其他方法，例如，從而治療或減少諸如T1D等病癥或降低其進(jìn)展。
[0010] 本發(fā)明公開了能夠結(jié)合至CXCR3的抗體及其使用方法。在一些實施例中，該抗體 可通過靶向CXCR3途徑來預(yù)防、治療個體的T1D或降低其早期進(jìn)展。該抗體及方法至少部 分依賴于以下令人驚訝的結(jié)果：針對CXCR3的中和抗體在疾病發(fā)作前給予可預(yù)防N0D小鼠 的T1D發(fā)作，或在N0D小鼠的T1D新發(fā)生階段給予可逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)行。此外，中和CXCR3活性 并不與患者免疫系統(tǒng)的正常運行顯著受損相關(guān)，因此降低了抗體療法的不合意副作用。
[0011] 因此，一方面，本文公開了能夠中和CXCR3活性的抗體及抗原結(jié)合片段。在某些實 施例中，CXCR3中和抗體的特點在于能夠結(jié)合至選自SEQIDN0:1的1-58、1-16或1-37位 殘基的肽。在一些實施例中，抗體包含全部或部分命名為Cl12、C1 135、C1 82、C1 53及/ 或Cl4的抗體克隆（Cl)。在某些實施例中，提供抗體Cl12、C1 135、C1 82、C1 53及/或 Cl4的變體，包括所公開的抗體⑶R-移植、人源化、回復(fù)突變（backmutated)及完全人類 變體。在特定實施例中，抗體包含本文所公開的克隆Cl12、C1 135、C1 82、C1 53和/或C1 4或克隆4、12、53、82和135的任一變體的一個或多個互補決定區(qū)（⑶R)，例如，一個或多個 重鏈⑶R1、⑶R2及⑶R3及/或一個或多個輕鏈⑶R1、⑶R2、⑶R3。在一些實施例中，源自 克隆Cl12、C1 135、C1 82、C1 53和/或C1 4或其嵌合和人源化的抗體相對于抗hCXCR3 克隆5H7、7H5、V44D7、1C6及49801顯示出某些有益的特性。例如，本申請所公開的抗體與 抗hCXCR3克隆5H7、7H5、V44D7、1C6及49801相比可表現(xiàn)出增加的結(jié)合親和力。例如，該抗 體可相對于抗CXCR抗體（例如1C6)體現(xiàn)出1倍、2倍、3倍、4倍、5倍或更大的親和力（或 其間的任意值），例如，通過表面等離子共振（surfaceplasmonresonce)測定（例如，使 用BIAC0RE?分析）。在此也預(yù)測本申請中所公開的人源化抗體與小鼠抗hCXCR3克隆5H7、 V44D7,1C6,及49801相比在免疫原性方面有所降低。另外，本申請所公開的克隆4. 7-4. 11 重鏈通過去除58位和59位的一個脫酰胺位點而優(yōu)化（使用MGT編碼），且藉此相對于初 始小鼠抗hCXCR3重鏈可變區(qū)（VH)⑶R2序列穩(wěn)定性增強。
[0012] 另一方面，本申請公開了在T1D發(fā)作前，如同治療新發(fā)生T1D或減少其進(jìn)展中給予 個體有效量的CXCR3中和抗體的方法。在特定實施例中，個體是哺乳動物，例如，人類。
[0013] 在某些實施例中，新發(fā)生的T1D個體在臨床診斷6個月以內(nèi)按照本申請所公開的 方法進(jìn)行治療。在其他實施例中，在臨床診斷超過6個月的患者中進(jìn)行治療,其中該個體保 留至少約CL2nmol/L的殘余空腹積分血清C肽濃度（residualfastingintegratedserum C-peptidelevels)〇
[0014] 在一些實施例中，個體的特點在于在外源性胰島素不存在時升高的空腹血糖， 濃度高于120mg/dL;或在C肽刺激期間異常低的空腹積分血清C肽濃度，為約0. 033至 1.0nmol/Lxmin。在特定實施例中，CXCR3中和抗體以約0. 03-3. 7mg/kg/劑量給予。在 一些實施例中，給予個體至少一個劑量的抗體。在某些實施例中，給予個體重復(fù)劑量的抗體 (例如，至少每年一次，每季度一次，每兩月一次，每月一次，每兩周一次，每周一次或兩天一 次）。在其他實施例中，上述方法還進(jìn)一步包含在給予CXCR3中和抗體的同時或依序（之前 或之后）給予免疫抑制劑和/或3細(xì)胞刺激劑的步驟。
[0015] 在多數(shù)實施例中，本文中公開的抗CXCR3抗體是用于治療CXCR3表達(dá)異常為特征 的狀態(tài)。在一些實施例中，抗CXCR3抗體可以用于治療那些受益于CXCR3活性下調(diào)或中和 的任何情況。在一些實施例中，在本文中公開的抗CXCR3抗體是用于治療T1D。
[0016] 本發(fā)明的其他實施例及優(yōu)點將在下文說明書中部分地加以陳述，并且部分是根據(jù) 本說明書是顯而易見的，或者通過對本發(fā)明的實施而知曉。通過隨附的權(quán)利要求中特別指 出的要素和組合實現(xiàn)并達(dá)成本發(fā)明的實施及優(yōu)點。
[0017] 需要理解的是，上文的一般性說明以及下文的詳細(xì)說明書僅具有示例性和解釋 性，并非限制所主張的發(fā)明。
[0018] 并入說明書中并構(gòu)成說明書中一部分的附圖闡釋了本發(fā)明的一個（若干個）實施 例，且與說明書一起用于解釋本發(fā)明原理。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 圖1顯示了來自6周齡雌性N0D小鼠（第一行）、10周齡雌性N0D小鼠（第二行）、 及新發(fā)生糖尿病雌性N0D小鼠（第三行）的胰腺切片中胰島素（左面板）、CXCL10(中面 板）、CD3(右面板）的表達(dá)。
[0020] 圖2是對來自患有新發(fā)生糖尿病的雌性N0D小鼠胰腺中T細(xì)胞CXCR3表達(dá)的流式 細(xì)胞儀分析。鑒別⑶4+及⑶8+T細(xì)胞并針對CXCR3表達(dá)進(jìn)行染色，如通過由底部兩個圖中 的實線所顯示。同種型對照染色是在相同的兩個圖中由陰影曲線來顯示。
[0021] 圖3顯示了在糖尿病發(fā)作前，對于從10周齡開始用PBS、抗CXCR3及對照IgG治 療的動物而言，非糖尿病雌性N0D小鼠隨時間的百分比。兩次獨立研究結(jié)果顯示于圖3A和 3B中。
[0022] 圖4顯示的是對于10周齡開始即用抗CXCR3抗體預(yù)防性治療且針對胰島素（左 面板）或CD3/Foxp3 (中面板及右面板）染色的26周非糖尿病雌性N0D小鼠的胰腺切片。 右面板是中面板中所示切片放大后的圖片。
[0023] 圖5顯示的是在診斷為糖尿病后3-4天內(nèi)開始用PBS、抗CXCR3及對照IgG及鼠類 抗胸腺細(xì)胞球蛋白（murinethymoglobulin，mATG)抗體治療的雌性N0D小鼠每天早上的血 糖值。各條線代表各只小鼠。箭頭指不提供治療的時間。
[0024] 圖6A是用PBS、抗CXCR3及對照IgG及mATG抗體治療的雌性N0D小鼠的CD4+ (左 圖）及CD8+(右圖）T細(xì)胞百分比的條狀圖。在治療過程中的第五次注射待測物后從小鼠 收集胰腺，同時從年齡匹配的經(jīng)mATG治療的小鼠收集胰腺。圖6B是用PBS、對照抗體或抗 CXCR3治療小鼠后胰腺的⑶4+T細(xì)胞的⑶44+表達(dá)（縱軸）對⑶62L表達(dá)（橫軸）的繪圖。 G1和G2分別是指門控性高⑶44/低⑶62L和低⑶44/高⑶62LT細(xì)胞。圖6C顯示的是與 用同種型對照抗體染色且淋巴細(xì)胞門控的細(xì)胞中CXCR3表達(dá)相比較，G1和G2中⑶4+T細(xì) 胞的CXCR3表達(dá)。
[0025] 圖7顯示的是用對照IgG(左面板）、抗CXCR3抗體（中面板）和mATG(右面板） 治療且針對胰島素（頂行）或CD3/Foxp3(底行）染色的雌性N0D小鼠的胰島切片。
[0026] 圖8A-D是年齡匹配的非糖尿病雌性N0D小鼠（圖8A)、用PBS治療的糖尿病N0D 小鼠（圖8B)、抗CXCR3抗體治療后疾病緩解的NOD小鼠（圖8C)及用對照IgG抗體治療的 糖尿病N0D小鼠（圖8D)在進(jìn)行葡萄糖篩查后血糖含量的曲線圖。在初始糖尿病診斷及研 究注冊后100天對小鼠實施葡萄糖篩查。各條線代表各個獨立動物的數(shù)據(jù)。
[0027] 圖9A-B顯示對接受自PBS、抗CXCR3、對照IgG或mATG抗體治療的雌性N0D小鼠 分離采集供體CD4+及CD8+T細(xì)胞的NOD.Scid接受者而言，非糖尿病小鼠隨時間的百分比。 T細(xì)胞是在用PBS或?qū)φ誌gG治療后約80-90天從糖尿病雌性小鼠中分離，或在用抗CXCR3 或mATG抗體治療后約80-90天從疾病緩解的雌性N0D小鼠中分離。兩次獨立研究結(jié)果見 圖9A和9B。
[0028] 圖10A展示了如圖9中所示的用PBS、抗CXCR3、對照IgG或mATG抗體治療雌性 N0D小鼠中分離的⑶4+及⑶8+供體T細(xì)胞百分比（左板面）。各治療組中⑶4+和⑶8+T 細(xì)胞供體采集物中的效應(yīng)和中央記憶細(xì)胞的百分比見圖10A的右面板。圖10B顯示供體T 細(xì)胞采集物中通過⑶4和⑶25的表達(dá)或通過⑶4、⑶25及Foxp3的表達(dá)鑒別的調(diào)節(jié)性T細(xì) 胞百分比。圖10C顯示供體T細(xì)胞采集物中亦表達(dá)CXCR3的⑶8+(左面板）及⑶4+(右面 板）的百分比。
[0029] 圖11A-B顯示的是將來自于供體0VA特異性TCR轉(zhuǎn)基因小鼠的T細(xì)胞過繼性的轉(zhuǎn) 移至保持未經(jīng)治療或用抗CXCR3抗體或?qū)φ誌gG治療的RIP-0VA接受者小鼠中，非糖尿病 小鼠隨時間的百分比。兩次研究結(jié)果見圖11A和11B中。
[0030] 圖12A顯示在過繼性轉(zhuǎn)移至RIP-0VA接受者小鼠之前通過流式細(xì)胞儀分析供體T 細(xì)胞CXCR3的表達(dá)（實線曲線）。用同種型對照抗體染色見于陰影曲線中。圖12B顯示在 過繼性轉(zhuǎn)移后的第2天、第4天、第7天、第9天及第15天用抗CXCR3或?qū)φ誌gG抗體治療 的接受者小鼠血液、脾及胰腺淋巴結(jié)中供體細(xì)胞的百分比。圖12C顯示在過繼性轉(zhuǎn)移后用 CXCR3或?qū)φ誌gG抗體治療的接受者小鼠血液、脾、胰腺淋巴結(jié)增殖性供體細(xì)胞的百分比。 圖12D顯示在過繼性轉(zhuǎn)移后用CXCR3或?qū)φ誌gG抗體治療的接受者小鼠血液、脾、胰腺淋巴 結(jié)中CXCR3+供體細(xì)胞的百分比。
[0031] 圖13顯示來自保持未經(jīng)治療且針對胰島素（左上）或⑶3(右上）染色或用抗 CXCR3抗體治療且針對胰島素（左下）或CD3(右下）染色的RIP-0VA接受者小鼠的胰腺切 片。在過繼性轉(zhuǎn)移供體T細(xì)胞后60天收集胰腺。
[0032]圖14八-(：顯示由克隆(：14，12,53,82及135介導(dǎo)的由0乂〇?3介導(dǎo)的向0乂(^11的 趨化性的抑制程度。數(shù)據(jù)顯示為在趨化性分析中遷移細(xì)胞的平均相對熒光單位（RFU)。圖 14D顯示抗體克隆C1 4,12, 53和135將鈣動員抑制50%所需的抗體濃度。
[0033] 圖15A-C顯示由由克隆C1 4，12,53,82及135介導(dǎo)的由0乂〇?3介導(dǎo)的向0乂(^9(圖 15A)、CXCL10 (圖15B)及CXCL11 (圖15C)的趨化性的抑制程度。數(shù)據(jù)顯示為在趨化性分 析中遷移細(xì)胞的平均相對熒光單位（RFU)。
[0034] 圖16顯示抗體與表達(dá)各種不同趨化因子的受體細(xì)胞結(jié)合的直方圖。各直方圖中 結(jié)合抗體的濃度沿橫軸增加。
[0035] 圖17A顯示克隆4. 0 (標(biāo)記為"親本"）與某些人源化變體（標(biāo)記為VH1-3、7_11及 VK1-3)的重鏈（VH)和輕鏈（VK)可變區(qū)的比對。圖17B顯示克隆12. 0(標(biāo)記為"親本"） 與其他人源化變體（標(biāo)記為VH1-3、和VK1-3)的重鏈（VH)和輕鏈（VK)可變區(qū)的比對。圖 17C顯示克隆53. 0 (標(biāo)記為"親本"）與某些人源化變體（標(biāo)記為VH1-6及VK1-9)的重鏈 (VH)和輕鏈（VK)可變區(qū)的比對。圖17D顯示克隆82. 0(標(biāo)記為"親本"）與其他人源化 變體（標(biāo)記為VH1-3、和VK1-3)的重鏈（VH)和輕鏈（VK)可變區(qū)的比對。圖17E顯示克隆 135.0(標(biāo)記為"親本"）與其他人源化變體（標(biāo)記為VH1-3、和VK1-3)的重鏈（VH)和輕鏈 (VK)可變區(qū)的比對。圖17F顯示克隆4.0 (標(biāo)記為"親本"）與某些4D人源化變體（標(biāo)記 為VH4-6、和VK4-7)的重鏈（VH)和輕鏈（VK)可變區(qū)的比對。圖17G顯示克隆53. 0(標(biāo)記 為"親本"）與某些4D人源化變體（標(biāo)記為VH7-10、和VK10-13)的重鏈（VH)和輕鏈（VK) 可變區(qū)的比對。圖17A-G中各比對的底部序列代表最接近人類種系的序列。黑框指示⑶R 區(qū)，陰影殘基序列與對應(yīng)種系殘基（圖17A-E)或?qū)?yīng)親本殘基（圖17F-G)有所不同，使用 MGT編碼及CDR劃界。圖17H顯示克隆4. 0，12. 0,82. 0和135以及抗體克隆5H7和7H5的 重鏈（VH)及輕鏈（VL)可變區(qū)比對。黑框指示CDR區(qū)，陰影殘基序列與比對中的先前序列 有所不同，使用MGT編碼。
[0036] 圖18顯示抗體克隆4,12, 53,82和135的最小表位殘基的邊界。對于結(jié)合活性至 關(guān)重要的殘基表不為X。
[0037] 圖19是顯示嵌合克隆4，12,53,82和135以及人源化變體肋1，肋2，11113在人類 CXCR3轉(zhuǎn)染300. 19細(xì)胞中的抗體結(jié)合直方圖?？贵w是以5yg/ml(黑線），0. 5yg/ml(深灰 線），or0.li!g/ml(黑虛線）或5i!g/ml單獨的二級抗體（填滿灰色的直方圖）給予，并 且將數(shù)據(jù)繪制為細(xì)胞數(shù)（橫軸）對最大熒光百分比的曲線。
[0038] 圖20A-C顯示在10g/ml克隆4,12, 53,82和135或商業(yè)化克隆1C6的嵌合（chim) 或人源化（Hul，Hu2orHu3)抗體變體存在或不存在的情況下，對人類CXCR3轉(zhuǎn)染細(xì)胞向 CXCL9 (圖20A)，CXCL10 (圖20B)和CXCL1 1 (圖20C)遷移的抑制百分比（縱軸）。
[0039] 圖21是顯示克隆4,12, 53,82和135以及商業(yè)化克隆1C6的嵌合（chim)或人源 化（Hul，Hu2orHu3)抗體變體抑制人類CXCR3_Gqi4qi4轉(zhuǎn)染CH0細(xì)胞中鈣動員能力的曲線 圖。繪制抗體濃度（橫軸）對應(yīng)最大抑制百分比（縱軸）的曲線。
[0040] 圖 22A-D顯示抗CXCR3 抗體治療對N0D-scid/L2rynull(NSG)小鼠中CD3+/CD4+T cells(圖 22A)，CD3+/CD8+Tcells(圖 22B)，CXCR3+/CD3+/CD4+Tcells(圖 22C)，and CXCR3+/CD3+/CD8+Tcells(圖 22D)的百分比的效應(yīng)。HulgGI是指人類IgGl(Here印tin)， 克隆4, 12, 53, 82和135是指嵌合抗體克隆。
[0041] 圖23A顯示克隆12. 0的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖23B顯示克隆12. 1的重鏈 和輕鏈氨基酸序列。圖23C顯示了克隆12. 2的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖23D顯示克 隆12. 3的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。
[0042] 圖24A顯示克隆135. 0的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖24B顯示克隆135. 1的重 鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖24C顯示了克隆135. 2的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖24D顯 示克隆135. 3的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。
[0043] 圖25A顯示克隆4. 0的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖25B顯示克隆4. 1的重鏈和 輕鏈的氨基酸序列。圖25C顯示了克隆4. 2的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖2?顯示克隆 4. 3的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖25E顯示克隆4. 4的重鏈氨基酸序列。圖25F顯示克 隆4. 5的重鏈氨基酸序列。圖25G顯示克隆4. 6的重鏈氨基酸序列。圖25H顯示克隆4. 7 的重鏈氨基酸序列。圖251顯示克隆4. 8的重鏈氨基酸序列。圖25J顯示克隆4. 9的重鏈 氨基酸序列。圖25K顯示克隆4. 10的重鏈氨基酸序列。圖25L顯示克隆4. 11的重鏈氨基 酸序列。圖25M顯示克隆4. 4的輕鏈氨基酸序列。圖25N顯示克隆4. 5的輕鏈氨基酸序列。 圖250顯示克隆4. 6的輕鏈氨基酸序列。圖25P顯示克隆4. 7的輕鏈氨基酸序列。
[0044] 圖26A顯示克隆53. 0的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖26B顯示克隆53. 1的重鏈 和輕鏈的氨基酸序列。圖26C顯示了克隆53. 2的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖26D顯示 克隆53. 3的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖26E顯示克隆53. 4的重鏈氨基酸序列。圖26F 顯示克隆53. 5的重鏈氨基酸序列。圖26G顯示克隆53. 6的重鏈氨基酸序列。圖26H顯示 克隆53. 4的輕鏈氨基酸序列。圖261顯示克隆53. 5的輕鏈氨基酸序列。圖26J顯示克隆 53. 6的輕鏈氨基酸序列。圖26K顯示克隆53. 7的輕鏈氨基酸序列。圖26L顯示克隆53. 8 的輕鏈氨基酸序列。圖26M顯示克隆53. 9的輕鏈氨基酸序列。圖26N顯示克隆53. 7的重 鏈氨基酸序列。圖260顯示克隆53. 8的重鏈氨基酸序列。圖26P顯示克隆53. 9的重鏈氨 基酸序列。圖26Q顯示克隆53. 10的重鏈氨基酸序列。圖26R顯示克隆53. 10的輕鏈氨基 酸序列。圖26S顯示克隆53. 11的輕鏈氨基酸序列。圖26T顯示克隆53. 12的輕鏈氨基酸 序列。圖26U顯示克隆53. 13的輕鏈氨基酸序列。
[0045] 圖27A顯示克隆82. 0的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖27B顯示克隆82. 1的重鏈 和輕鏈的氨基酸序列。圖27C顯示了克隆82. 2的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。圖27D顯示 克隆82. 3的重鏈和輕鏈的氨基酸序列。
[0046] 圖28A-P顯示克隆12. 0-12. 3的重鏈和克隆12. 0-12. 3的輕鏈、克隆135. 0-135. 3 的重鏈和克隆135. 0-135. 3的輕鏈、克隆4. 0-4. 11的重鏈和克隆4. 0-4. 11的輕鏈、克隆 53. 0-53. 6的重鏈和克隆53. 0-53. 9的輕鏈、以及克隆82. 0-82. 3的重鏈和克隆82. 0-82. 3 的輕鏈的核酸序列。

【具體實施方式】
[0047] 現(xiàn)在將詳細(xì)的參考本發(fā)明的某些示例性實施例，本發(fā)明的某些實施例在附圖中予 以闡釋。
[0048] CXCR3
[0049] CXCR3(MIM:300574,人類GeneID:2833,趨化因子（C-X-C基序）受體 3 ;亦稱之 為CD182,CD183,CKR-L2,CKAR3,GPR9,IP10-R，Mig-R，MigR，G蛋白偶聯(lián)受體 9,IP-10 受 體，SP10受體，Mig受體，趨化因子（C-X-C)受體3,干擾素誘導(dǎo)型蛋白10受體）幾乎不 存于初始T細(xì)胞中，但在經(jīng)抗原活化后上調(diào)且因其一級配體（CXCL9(人類GeneID:4283)，CXCL10(人類GenelD;3827)，和CXCL11(人類GeneID:6373))將這些細(xì)胞募集至組 織炎癥部位的趨化因子受體。朗格罕氏（Langeriians)島中的0細(xì)胞表達(dá)CXCL9和 CXCL10(Frigerio等人，NatureMedicine8:1414-1420(2002))并且那些已經(jīng)浸潤了膜腺 的T細(xì)胞表達(dá)CXCR3(Christen等人，TheJournalofImmunology，2003，171:6838_8845; VanHalteren等人，Diabetologia48:75-82(2005);Uno等人 2010;Roep等人， ClinicalandExperimentalImmunology，2003,159:338-343;Tanaka等人，Diabetes 58:2285-2291 (2009);SarkaretaL，Diabetes. 2012Feb;61 (2):436-46)。
[0050] CXCR3在多種有機體中表達(dá)，包括例如，人類、小鼠、大鼠、奶牛、黑猩猩、短尾猴、 狗、蛙、鴨嘴獸、豬及斑馬魚。表1列出了多種CXCR3在美國國家生物技術(shù)信息中心（NCBI) 的GenelD及蛋白參考序列。SEQIDN0:1是人CXCR3的全長序列（剪接變體A)。剪接變 體B的肽序列通過參考序列NP_001136269. 1提供。人CXCR3剪接變體A的預(yù)測胞外結(jié)構(gòu) 域在文獻(xiàn)Colvin等人，Mol.Cell.Bio. ,26:5838-49(2006)中記載，并且包括SEQIDN0:1 的 1-58, 1-16, 111-126, 190-223, 278-301 位殘基，如下文所示：
[0051] SEQIDNO: 1NP-001495 人類CXCR3,A亞型
[0052] 1 mvlevsdhqvlndaevaallenfsssydygenesdscctsppcpqdfslnfdraflpaly
[0053] 61 sllfllgllgngavaavllsrrtalsstdtfllhlavadtIlvltlplwavdaavqwvfg
[0054] 121 sglckvagalfninfyagalIlacisfdrylnivhatqlyrrgpparvtltclavwglcl
[0055] 181 lfalpdfif1 sahhderinathcqynfpqvgrtalrylqlvagfflpllvmaycyahila
[0056] 241 vllvsrgqrrIramrlvvvyvvafalcwtpyhlvvivdilmdlgalarncgresrvdvak
[0057] 301 svtsglgymhcclnpllyafvgvkfrermwmlllrlgcpnqrglqrqpsssrrdsswset
[0058] 361seasysgl
[0059] 表 1
[0060]

【權(quán)利要求】
1. 一種能夠結(jié)合CXCR3的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體或片段包含重鏈可變區(qū) (VH)和輕鏈可變區(qū)（VL)，其中： a) 重鏈可變區(qū)包含三個互補決定區(qū)（⑶R)，其與來自SEQ ID NO:2、4、6和8中任一者 的三個⑶R至少約95%-致；和/或輕鏈可變區(qū)包含三個⑶R，其與來自SEQ ID N0:3、5、7 和9中任一者的三個⑶R至少約95%-致； b) 重鏈可變區(qū)包含三個CDR，其與來自SEQ ID N0:10、12、14、16中任一者的三個CDR 至少約95%-致；和/或輕鏈可變區(qū)包含三個⑶R，其與來自SEQ ID NO: 11、13、15、17中任 一者的三個⑶R至少約95 %-致； c) 重鏈可變區(qū)包含三個CDR，其與來自SEQ ID N0:18、20、22、24、和26-33中任一者的 三個⑶R至少約95%-致；和/或輕鏈可變區(qū)包含三個⑶R，其與來自SEQ ID N0:19、21、 23、25、34-37中任一者的三個CDR至少約95%-致； d) 重鏈可變區(qū)包含三個CDR，其與來自SEQ ID N0:38、40、42、44、46-48和63-66中任一 者的三個⑶R至少約95%-致；和/或輕鏈可變區(qū)包含三個⑶R，其與來自SEQ ID NO: 39、 41、43、45、49-54和67-70中任一者的三個CDR至少約95%-致； 或e)重鏈可變區(qū)包含三個CDR，其與來自SEQ ID勵:55、57、59、61中任一者的三個0? 至少約95%-致；和/或輕鏈可變區(qū)包含三個⑶R，其與來自SEQ ID N0:56、58、60、62中任 一者的三個⑶R至少約95 %-致。
2. 如權(quán)利要求1所述的抗體或片段，其中所述的抗體或片段是嵌合的抗體或片段、經(jīng) CDR移植的抗體或片段、突變的抗體或片段、突變?nèi)コ粋€或多個脫酰胺位點的抗體或片 段、人的抗體或片段、人源化的抗體或片段、經(jīng)人源化和回復(fù)突變的抗體或片段、合成的抗 體或片段或重組的抗體或片段。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的抗體或片段，其中該抗體或片段是Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv、 單鏈Fv(SCFv)、雙鏈抗體（Fd)、線性抗體、納米抗體（VHH)、雙特異性抗體或多特異性抗體。
4. 如權(quán)利要求1至3中任一項所述的抗體或片段，其中該抗體或片段能夠結(jié)合選自以 下的肽：a)包含SEQ ID NO: 1的殘基1至58的肽；b)包含SEQ ID NO: 1的殘基1至16的 肽；和/或c)包含SEQ ID NO: 1的殘基1至37的肽。
5. 如權(quán)利要求1至4中任一項的抗體或片段，其中抗體或片段能夠結(jié)合選自以下的 肽： a) 包含氨基酸序列SDHQVLNDAE的肽； b) 包含氨基酸序列SDHQVLND的肽； c) 包含氨基酸序列DHQVLND的肽； d) 包含氨基酸序列VLNDAE的肽； e) 包含氨基酸序列VLND的肽； f) 包含氨基酸序列XDXXVXNDXX的肽； g) 包含氨基酸序列XDXXVXND的肽； h) 包含氨基酸序列DXXVXND的肽； i) 包含氨基酸序列VXNDXX的肽； 和/或j)包含氨基酸序列VXND的肽， 其中X是指任意氨基酸。
6. 如權(quán)利要求1至5中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:2、4、6、8中任一者至少約85%、90%、95%或99% - 致的序列； b) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵：10、12、14、16中任一者至少約85%、90%、95%或 99 %-致的序列； c) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:18、20、22、24、26至33中任一者至少約85%、90%、 95 %或99 %-致的序列； d) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者至少約 85%、90%、95%或 99%-致的序列； 或e)重鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:55、57、59、61中任一者至少約85%、90%、95%或 99 %-致的序列。
7. 如權(quán)利要求1至6中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 輕鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:3、5、7、9中任一者至少約85%、90%、95%或99% - 致的序列； b) 輕鏈可變區(qū)包含與SED ID勵：11、13、15、17中任一者至少約85%、90%、95%或 99 %-致的序列； c) 輕鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:19、21、23、25、34至37中任一者至少約85%、90%、 95 %或99 %-致的序列； d) 輕鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:39、41、43、45、49至54、67至70中任一者至少約 85%、90%、95%或 99%-致的序列； 或e)輕鏈可變區(qū)包含與SED ID勵:56、58、60、62中任一者至少約85%、90%、95%或 99 %-致的序列。
8. 如權(quán)利要求1到7中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:2、4、6、8中任一者至少約85%、90%、95%或99% - 致的序列；和輕鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:3、5、7和9中任一者至少約85%、90%、95%或 99 %-致的序列； b) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵：10、12、14、16中任一者至少約85%、90%、95%或 99%-致的序列；和輕鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:ll、13、15、17中任一者至少約85%、 90%、95%或99%-致的序列； c) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:18、20、22、24、26至33中任一者至少約85%、90%、 95%或99%-致的序列；和輕鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:19、21、23、25、34至37中任一者 至少約85%、90%、95%或99%-致的序列； d) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者至少約 85%、90%、95%或99%-致的序列；和輕鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:39、41、43、45、49至 54、67至70中任一者至少約85%、90%、95%或99%-致的序列； 或e)重鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:55、57、59、61中任一者至少約85%、90%、95% 或99%-致的序列；和輕鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:56、58、60、62中任一者至少約85%、 90%、95%或99%-致的序列。
9. 如權(quán)利要求1到8中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:2、4、6、8中任一者中的三個⑶R-致或包含1個、2 個或3個氨基酸殘基突變的序列； b) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵:10、12、14、16中任一者中的三個^1?一致或包含相對 于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列； c) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵：18、20、22、24、26至33中任一者中的三個〇?-致或 包含相對于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列； d) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者中的三個 ⑶R -致或包含相對于上述三個⑶R具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列； 或e)重鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:55、57、59、61中任一者中的三個⑶R-致或包含 相對于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列。
10. 如權(quán)利要求1至9中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 輕鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:3、5、7、9中任一者中的三個⑶R-致或包含相對于上 述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列； b) 輕鏈可變區(qū)包含與SED ID勵:11、13、15、17中任一者中的三個^1?一致或包含相對 于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列； c) 輕鏈可變區(qū)包含與SED ID勵：19、21、23、25、34至37中任一者中的三個0?-致或 包含相對于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列； d) 輕鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:39、41、43、45、49至54、67至70中任一者中的三個 ⑶R -致或包含相對于上述三個⑶R具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列； 或e)輕鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:56、58、60、62中任一者中的三個⑶R-致或包含 相對于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列。
11. 如權(quán)利要求1到10中任一項所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:2、4、6、8中任一者中的三個⑶R-致或包含相對于 上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與SED ID NO: 3、5、7、9中任一者中的三個⑶R-致或包含相對于上述三個⑶R具有1個、2個或3 個氨基酸殘基突變的序列； b) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:10、12、14、16中任一者中的三個⑶R-致或包含相 對于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與 SED ID勵:11、13、15、17中任一者中的三個^1?一致或包含相對于上述三個^1?具有1個、 2個或3個氨基酸殘基突變的序列； c) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵：18、20、22、24、26至33中任一者中的三個〇?-致或 包含相對于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區(qū) 包含與SED ID勵：19、21、23、25、34至37中任一者中的三個0?-致或包含相對于上述三 個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列； d) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者中的三個 CDR -致或包含相對于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列；和/或 輕鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:39、41、43、45、49至54、67至70中任一者中的三個CDR-致 或包含相對于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列； 或e)重鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:55、57、59、61中任一者中的三個⑶R-致或包含 相對于上述三個CDR具有1個、2個或3個氨基酸殘基突變的序列；輕鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:56、58、60、62中任一者中的三個⑶R-致或包含相對于上述三個⑶R具有1個、2個 或3個氨基酸殘基突變的序列。
12. -種能夠結(jié)合CXCR3的抗體或抗原結(jié)合片段，其中抗體或片段包含重鏈可變區(qū) (VH)和輕鏈可變區(qū)（VL)，并且其中： a) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:2、4、6、8中任一者至少約85%、90%、95%或99% - 致的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:3、5、7和9中任一者至少約85%、90%、 95 %或99 %-致的序列； b) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵：10、12、14、16中任一者至少約85%、90%、95%或 99%-致的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與SED ID勵:11、13、15、17中任一者至少約85%、 90%、95%或99%-致的序列； c) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID N0:18、20、22、24、26至33中任一者至少約85%、90%、 95%或99%-致的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:19、21、23、25、34至37中任 一者至少約85 %、90 %、95 %或99 % -致的序列； d) 重鏈可變區(qū)包含與SED ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者至少約 85%、90%、95%或99%-致的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:39、41、43、45、49 至54、67至70中任一者至少約85%、90%、95%或99%-致的序列； 或e)重鏈可變區(qū)包含與SED ID NO:55、57、59、61中任一者至少約85%、90%、95%或 99%-致的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與SED ID勵:56、58、60、62中任一者至少約85%、 90%、95%或99%-致的序列。
13. 如權(quán)利要求12所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區(qū)包含與SEQ ID NO:2、4、6、8中任一者一致或包含相對于上述序列具有1 至10個氨基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與SEQ ID NO:3、5、7、9中任一者一 致或包含相對于上述序列具有1至10個氨基酸殘基突變的序列； b) 重鏈可變區(qū)包含與SEQ ID NO: 10、12、14、16中任一者一致或包含相對于上述序列具 有1至10個氨基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與SEQ ID NO: 11、13、15和17 中任一者一致或包含相對于上述序列具有1至10個氨基酸殘基突變的序列； c) 重鏈可變區(qū)包含相對于SEQ ID N0:18、20、22、24、26至33中任一者一致或包含相 對于上述序列具有1至10個氨基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與SEQ ID NO: 19、21、23、25、34至37中任一者一致或包含相對于上述序列具有1至10個氨基酸殘基 突變的序列； d) 重鏈可變區(qū)包含相對于SEQ ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任一者一致或 包含相對于上述序列具有1至10個氨基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含與SEQ 10勵:39、41、43、45、49至54、67至70中任一者一致或包含相對于上述序列具有1至10個 氨基酸殘基突變的序列； 或e)重鏈可變區(qū)包含與SEQ ID勵:55、57、59、61中任一者一致或包含相對于上述序 列具有1至10個氨基酸殘基突變的序列；和/或輕鏈可變區(qū)包含相對于SEQ ID N0:56、58、 60、62中任一者一致或包含相對于上述序列具有1至10個氨基酸殘基突變的序列。
14. 如權(quán)利要求12或13所述的抗體或片段，其中： a) 重鏈可變區(qū)包含三個⑶R，與來自SEQ ID N0:2、4、6、8中任一者的三個⑶R至少約 95%-致，和/或輕鏈可變區(qū)包含三個⑶R，與來自SEQ ID N0:3、5、7、9中任一者的三個⑶R 至少約95 %-致； b) 重鏈可變區(qū)包含三個⑶R，與來自SEQ ID NO: 10、12、14和16中任一者的三個⑶R 至少約95%-致，和/或輕鏈可變區(qū)包含三個⑶R，與來自SEQ ID NO: 11、13、15、17中任一 者的三個⑶R至少約95 %-致； c) 重鏈可變區(qū)包含三個CDR，與來自SEQ ID N0:18、20、22、24、26至33中任一者的三 個⑶R至少約95%-致，和/或輕鏈可變區(qū)包含三個⑶R，與來自SEQ ID N0:19、21、23、25、 34至37中任一者的三個⑶R至少約95%-致； d) 重鏈可變區(qū)包含三個CDR，與來自SEQ ID勵:38、40、42、44、46至48、63至66中任 一者的三個⑶R至少約95%-致，和/或輕鏈可變區(qū)包含三個⑶R，與來自SEQ ID NO: 39、 41、43、45、49至54、67至70中任一者的三個CDR至少約95%-致； 或e)重鏈可變區(qū)包含三個CDR，與來自SEQ ID N0:55、57、59、61中任一者的三個CDR 至少約95%-致，和/或輕鏈可變區(qū)包含三個⑶R，與來自SEQ ID N0:56、58、60、62中任一 者的三個⑶R至少約95 %-致。
15. 如權(quán)利要求1至14中任一項所述的抗體或片段，其抗體或片段包含表2中的重鏈 和輕鏈可變區(qū)的任一組合。
16. 如權(quán)利要求1至15中任一項所述的抗體或片段，其中該抗體能夠以至少約10 ^T1的親和力常數(shù)結(jié)合CXCR3。
17. 如權(quán)利要求1至16中任一項所述的抗體或片段，其中該抗體或片段能夠結(jié)合 CXCR3的A和B同種型。
18. 如權(quán)利要求1至17中任一項所述的抗體或片段，其中抗體或片段能夠優(yōu)先結(jié)合至 CXCR3的A同種型。
19. 如權(quán)利要求1至18中任一項所述的抗體或片段，其中抗體或片段能夠中和CXCR3 活性。
20. -種分離的核苷酸，其編碼如權(quán)利要求1至19中任一項抗體或片段的氨基酸序列。
21. -種載體，其包含權(quán)利要求20的分離的核苷酸。
22. -種經(jīng)分離的宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求21的載體。
23. -種產(chǎn)生如權(quán)利要求1至19中任一項的抗體或片段的方法，其包含在適于產(chǎn)生抗 體或片段的條件下在培養(yǎng)基中培養(yǎng)權(quán)利要求19的宿主細(xì)胞。
24. -種試劑盒，其包含權(quán)利要求1至19中任一項的抗體或片段或權(quán)利要求20的核酸 和關(guān)于使用該抗體或片段用于研究、診斷或治療目的的說明書。
25. -種預(yù)防、治療新發(fā)生I型糖尿?。═1D)或減少其進(jìn)展的方法，其包含： a) 鑒別有發(fā)生T1D風(fēng)險或患有新發(fā)生T1D的個體；及 b) 向該個體給予有效量的權(quán)利要求1至19中任一項的抗體或片段，藉此預(yù)防T1D發(fā) 生，或治療新發(fā)生T1D或減少其進(jìn)展。
26. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中的個體是哺乳動物。
27. 如權(quán)利要求25或26所述的方法，其中的個體是人體。
28. 如權(quán)利要求25至27中任一項所述的方法，其中該個體具有大于或等于約 0. 2nmol/L的基礎(chǔ)血清C肽濃度，和/或其中患者在C肽刺激期間具有介于約0. 033nmol/ LXmin和1. Onmol/LXmin之間的空腹積分血清C肽濃度。
29. 如權(quán)利要求25至28中任一項所述的方法，其中該患者在外源性胰島素不存在時具 有大于約120mg/dL的空腹血糖濃度。
30. 如權(quán)利要求25至29中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是人源化的。
31. 如權(quán)利要求25至30中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是以約0. 03mg/kg/ 劑量至3. 7mg/kg/劑量的劑量給予。
32. 如權(quán)利要求25至31中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是以至少每天一次、 每周一次、每兩周一次、每月一次、每兩月一次、每季度一次或每年一次給予。
33. 如權(quán)利要求25至32中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是以約0. 16mg/kg至 18mg/kg的全部給予總劑量給予。
34. 如權(quán)利要求25至33中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是經(jīng)靜脈內(nèi)、經(jīng)腹膜 內(nèi)、經(jīng)鼻、經(jīng)眼、經(jīng)口、腸道外、皮下或經(jīng)皮給予。
35. 如權(quán)利要求25至34中任一項所述的方法，其中該抗體或片段是直接給予到胰腺。
36. 如權(quán)利要求35所述的方法，其中該抗體或片段是給予到鄰近胰腺的胰島細(xì)胞。
37. 如權(quán)利要求25至36中任一項所述的方法，其中該方法進(jìn)一步包含給予3細(xì)胞刺 激劑、胰島素或產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞。
38. 如權(quán)利要求25至37中任一項所述的方法，其中該方法進(jìn)一步包含給予免疫抑制 劑。
39. -種治療新發(fā)生1型糖尿?。═1D)或減少其進(jìn)展的方法，其包含： a)鑒別患有新發(fā)生T1D并且具有大于或等于約0. 2nmol/L基礎(chǔ)血清C肽濃度和/或C 肽刺激期間具有約0. 〇33nmol/LXmin和1. Onmol/LXmin之間的空腹積分血清C肽濃度的 人類個體； 以及b)給予約0? 03mg/kg/劑量至3. 7mg/kg/劑量的權(quán)利要求1至19中任一項的抗 體或片段，藉此治療新發(fā)生T1D或減少其進(jìn)展。
40. -種CXCR3中和抗體或其片段，其用于個體預(yù)防、治療新發(fā)生1型糖尿?。═1D)或 減少其進(jìn)展，其中該抗體或其片段包含如權(quán)利要求1至19中任一項所述的抗體或片段。
41. 一種選自權(quán)利要求1至19中任一項的抗體或片段的CXCR3抗體或其片段的用途， 其用于制備治療疾病或病癥的藥劑。
42. 如權(quán)利要求41所述的用途，其中所述的疾病或病癥是CXCR3相關(guān)的疾病或病癥。
43. 如權(quán)利要求41或42的用途，其中所述疾病或病癥是新發(fā)生1型糖尿?。═1D)。
44. 一種偶聯(lián)物，其包含權(quán)利要求1至19中任一項的抗體或片段以及至少一種其他試 劑。
45. 如權(quán)利要求44所述的偶聯(lián)物，其中所述的其他試劑是治療劑、solubalizing、穩(wěn)定 齊U、免疫抑制劑、受體或抗原結(jié)合肽。
46. -種藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1至19中任一項的抗體或片段或權(quán)利要求20 中的核酸以及藥學(xué)上可接受的載體。
47. 如權(quán)利要求46所述的藥物組合物，其中該組合物進(jìn)一步包含至少一種其他治療 劑。
48. 如權(quán)利要求47所述的藥物組合物，其中至少一種其他治療劑包含用于治療與 CXCR3相關(guān)的疾病或病癥的藥劑。
49. 如權(quán)利要求47或48的藥物組合物，其中至少一種其他的治療劑包含0細(xì)胞刺激 齊U、胰島素或產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞。
50. -種檢測測試試樣中CXCR3存在或濃度的體外方法，其包含使該測試試樣與權(quán)利 要求1至19中任一項的抗體或片段以及可檢測標(biāo)記接觸，其中CXCR3的存在或濃度與該檢 測標(biāo)記產(chǎn)生的信號直接或間接相關(guān)。
51. 如權(quán)利要求50所述的方法，其中使用該方法診斷與CXCR3相關(guān)的病況。
52. 如權(quán)利要求50所述的方法，其中該病況是T1D。
【文檔編號】C07K16/28GK104507967SQ201380015401
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2013年1月18日 優(yōu)先權(quán)日:2012年1月20日
【發(fā)明者】M·尤德, J·特德斯通, T·洛迪, K·B·卡特, T·D·康納斯, J·R·平克尼, E·馬斯特約翰, R·丘 申請人:建新公司