一種芹菜素的提取方法、用于治療糖尿病的藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及制藥【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明的芹菜素的提取方法，包括以下步驟：1）以芹菜為底物，用質(zhì)量百分比濃度分別為33%-37%的果膠酶和43%-47%的葡萄糖苷酶的混合溶液在30-35℃下酶解10小時；2）將步驟1）所得酶解產(chǎn)物采用70%的乙醇溶液超聲提取，將提取液濃縮，然后石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分離提取。本發(fā)明的用于治療糖尿病的藥物組合物，包括芹菜素和拜唐蘋，其質(zhì)量比為1：（2-5）。本發(fā)明利用多酶法提取芹菜素，大大提高提取的產(chǎn)率。本發(fā)明的藥物組合物，即可以有效控制血糖，同時又能避免單純使用糖尿病藥物治療可能帶來的低血糖以及病人體重下降過快的情況。
【專利說明】一種芹菜素的提取方法、用于治療糖尿病的藥物組合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地，涉及一種芹菜素的提取方法、以及添加芹菜素的用于治療糖尿病的藥物組合物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著人民生活水平的提高，糖尿病已經(jīng)成為全球性公共衛(wèi)生問題，對我國人民的健康也產(chǎn)生了直接的問題。糖尿病不僅本身能導(dǎo)致人的死亡,它所產(chǎn)生的并發(fā)癥如:足部腐爛、糖尿病腎病、高血壓、心血管疾病使得糖尿病的危害已經(jīng)擴(kuò)大到人體部位的各個領(lǐng)域。目前，全球糖尿病的患病人數(shù)為2.46億，其中2型糖尿病占90%。而中國目前估測出來的20歲以上糖尿病人群有9240萬，居世界前列。因此，糖尿病的治療和預(yù)防已經(jīng)成為刻不容緩的問題。另外，中國還有大量的糖調(diào)節(jié)異?；蛘呤軗p的人群，我們又稱之為糖尿病前期患者
1.48億，每10個中國人中就有I位糖尿病前期患者，而糖尿病前期患者中有近80%為糖耐量減低(IGT)人群。眾多國內(nèi)外糖尿病協(xié)會指南(International Diabetes Federation,《2007 年 IDF2 型糖尿病預(yù)防共識》;American Diabetes Association, ((2012 年 ADA 糖尿病治療指南》;《2011年AACE糖尿病綜合治療方案指南》;《2007年中國2型糖尿病防治指南》)都推薦IGT患者應(yīng)積極采取藥物干預(yù)。[0003]由于全球90%以上的糖尿病患者為2型糖尿病，并且相對于I型糖尿病,2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制、臨床表現(xiàn)也更復(fù)雜，胰島素抵抗綜合癥是其突出的特征，高血壓、高胰島素血癥、高血脂和中心性肥胖是其典型的臨床表現(xiàn)，也是導(dǎo)致血管并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的重要原因。
[0004]胰島素一直是治療糖尿病的主要藥物。胰島素治療糖尿病雖然能有效控制糖尿病病人的血糖，但是這種治療存在以下幾個公認(rèn)的缺陷:(I)血糖波動太大；(2)體重增加；
(3)餐后血糖控制不佳；(4)出現(xiàn)嚴(yán)重的低血糖癥狀。因此，目前我國在治療糖尿病方面都采用胰島素和一些藥物聯(lián)合治療的方法。其中胰島素與拜唐蘋聯(lián)合用藥方案得到了廣泛的應(yīng)用。大量報道表明拜唐蘋不僅在治療糖尿病方面能顯著降低病人的體重，有數(shù)據(jù)表明，對163例2型糖尿病患者在早晚餐前注射預(yù)混胰島素25/75或30/70的基礎(chǔ)上，每天在接受拜唐蘋(由50mg bid增加至IOOmg tid)治療20周，病人的體重變化值(與基線相比平均變化值)能從10.79下降至-0.25 ;并且病人的低血糖的風(fēng)險也有所降低。但是，這種聯(lián)合用藥也存在一定的問題:(1)由于糖類在小腸內(nèi)吸收和分解緩慢，停留時間延長，病人常出現(xiàn)腹痛、腹瀉等副作用，并且由于病人體重下降太多，雖然病人的血糖濃度得到了一定的控制，但病人的腸道部分的免疫力有所下降；(2)雖然拜唐蘋能一定程度降低胰島素單獨(dú)用藥產(chǎn)生低血糖的風(fēng)險，但是聯(lián)合用藥并不能顯著降低這種風(fēng)險。
[0005]芹菜素屬于天然黃酮類物質(zhì)，廣泛存在于我們?nèi)粘Ｉ钏秤玫氖卟酥?，其中以芹菜中的含量最多。近年來，關(guān)于芹菜素在糖尿病的防治中的療效經(jīng)常被報道，相對于藥物治療糖尿病所產(chǎn)生的毒副作用，芹菜素對糖尿病以及糖尿病前期的預(yù)防和治療越來越成為大家關(guān)注的焦點(diǎn)。雖然胰島素和拜唐蘋的聯(lián)合用藥能有效控制糖尿病患者的血糖水平，但是低血糖以及糖尿病患者出現(xiàn)的腹瀉以及急劇的體重下降也給治療帶來了隱憂。此外，關(guān)于芹菜素的提取，過去基本都用一種破解植物細(xì)胞壁的酶來進(jìn)行提取，但是酶都具有專一性，這樣只用一種酶只能使得植物組織細(xì)胞壁破解不完全，比如果膠酶，它只能使得植物細(xì)胞壁里的果膠水解為半乳糖醛酸，而植物細(xì)胞壁中還存在大量的纖維素等其他物質(zhì)，所以，要想高效提取芹菜素，就必須將芹菜這種植物的細(xì)胞壁破解完全。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是為解決上述問題，提供一種芹菜素的提取方法。
[0007]本發(fā)明的另一目的是為解決上述問題，提供一種用于治療糖尿病的藥物組合物。 [0008]本發(fā)明的再一目的是提供上述治療糖尿病的藥物組合物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明的芹菜素的提取方法，包括以下步驟:
[0010]I)以芹菜為底物，用質(zhì)量百分比濃度分別為33%-37%的果膠酶和43%-47%的葡萄糖苷酶的混合溶液在30-35°C下酶解10小時，酶混合溶液添加量為每5g芹菜15mL ；
[0011]2)將步驟I)所得酶解產(chǎn)物采用70%的乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，超聲波的功率為80W，溫度為52-57°C，將提取液濃縮，然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分離提取，獲得芹菜素。
[0012]根據(jù)本發(fā)明的提取方法，步驟I)所述酶解時間優(yōu)選為10小時。
[0013]根據(jù)本發(fā)明的提取方法，步驟2)所述超聲波功率優(yōu)選為80W。
[0014]本發(fā)明用果膠酶加P -葡萄糖苷酶的優(yōu)化組合方案，由于P -葡萄糖苷酶是纖維素酶的一種，這樣兩種酶一起使用，就大大提高了細(xì)胞壁的破解，提高了芹菜素的提取效率。
[0015]本發(fā)明的用于治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括芹菜素和拜唐蘋，所述芹菜素和拜唐蘋的質(zhì)量比為1:(2-5)。
[0016]本發(fā)明的上述藥物組合物的制備方法，包括以下步驟:
[0017]I)提取芹菜素:以芹菜為底物，用質(zhì)量百分比濃度分別為33%_37%的果膠酶和43%-47%的葡萄糖苷酶的混合溶液在30-35°C下酶解10小時，酶混合溶液添加量為每5g芹菜15mL，然后采用70%的乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，超聲波的功率為80W，溫度為52-57°C，將提取液濃縮，然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分離提取，制得芹菜素；
[0018]2)將步驟I)制得的芹菜素與拜唐蘋按配方量混合，制得藥物組合物。
[0019]本發(fā)明的藥物組合物可以使用現(xiàn)有的芹菜素產(chǎn)品，例如市售的芹菜素原料，優(yōu)選使用本發(fā)明所述的提取方法制得的芹菜素。
[0020]本發(fā)明制得的藥物產(chǎn)品，可以按本領(lǐng)域常規(guī)的藥物制備方法制成含組合物的固體藥片、膠囊或口服液，或者其他藥劑形式。
[0021]上述的制備方法，優(yōu)選地，步驟I)所述酶解時間為10小時；步驟2)所述超聲波功率為80W。[0022]本發(fā)明還提供了上述藥物組合物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
[0023]本發(fā)明首先給出用聯(lián)合酶制劑高效提取天然產(chǎn)物芹菜素的制備方法，并給出包括芹菜素與拜唐蘋的藥物組合物，這個藥物組合物有以下幾個優(yōu)點(diǎn):(I)由于芹菜素為天然產(chǎn)物，不會對糖尿病病人產(chǎn)生任何副作用；(2)拜唐蘋聯(lián)合胰島素治療糖尿病雖然能有效治療糖尿病，但是容易產(chǎn)生低血糖，而芹菜素作為我們?nèi)粘Ｉ钪刑烊坏狞S酮類產(chǎn)物，當(dāng)把芹菜素結(jié)合拜唐蘋作為復(fù)合制劑，它即能有效控制糖尿病病人的血糖功能，又不會使得病人的血糖濃度出現(xiàn)劇烈的下降；(3)由于芹菜素本身不是治療糖尿病專門藥物，雖然它在抑制糖尿病老鼠血糖濃度上有一定療效，但是和糖尿病專屬藥物組成復(fù)合制劑，即能避免藥物治療的毒副作用，又能彌補(bǔ)天然食品中天然成分治療糖尿病的弱治療性。因此本發(fā)明采用芹菜素和拜唐蘋組成復(fù)合制劑用于制備治療糖尿病的藥物，可以彌補(bǔ)拜唐蘋在跟胰島素聯(lián)合用藥的過程中所出現(xiàn)的病人體重急劇下降的情況，對于糖尿病并發(fā)癥病人來說，體重下降過快反而會引起病人的免疫力的下降，出現(xiàn)病人病情惡化的情況，而要良好平衡病人的血糖、體重以及其他指標(biāo)對于純粹的藥物治療來說非常困難，采用芹菜素這種我們?nèi)粘Ｉ钪惺卟说闹饕烊换衔?，即可以有效控制血糖，又能給病人一定的營養(yǎng)，可以一定程度上緩解藥物治療的危害。(4)我們的團(tuán)隊在以往的實驗對已經(jīng)研究出單個酶法(果膠酶、葡萄糖苷酶)分離提純芹菜素的優(yōu)化方案，這較其他提取方法:如有機(jī)溶劑提取方法相t匕，不僅能大大提高提取的產(chǎn)量，而且還能有效避免由于有機(jī)溶劑的毒性而造成產(chǎn)物的毒性，不利于芹菜素后續(xù)對小鼠的實驗，同時，本發(fā)明在我們以往實驗的基礎(chǔ)上將分離效果最好的兩種酶結(jié)合起來，這不僅能再次大大提高分離的產(chǎn)率，而且也為今后的分離純化提供了一個高效的雙酶法分離芹菜素的方案。另外，我們后續(xù)的超聲波分離也首次摒棄了以往分離芹菜素所使用有毒的甲醇試劑，而采用一定濃度的乙醇溶劑高效分離提取，這也為后續(xù)的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)提供了質(zhì)量保證。(5)關(guān)于芹菜素和拜唐蘋以及混合胰島素在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用，跟以 往報道不同的是，我們沒有在細(xì)胞水平上去驗證它的作用效果，而是直接采用糖尿病老鼠的動物活體實驗，所以在配方上有更強(qiáng)的可靠性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1為本發(fā)明的芹菜素提取的產(chǎn)率。
[0025]圖2為使用本發(fā)明藥物組合物對試驗組小鼠灌胃后小鼠體重變化示意圖。
[0026]圖3為使用本發(fā)明藥物組合物對試驗組小鼠灌胃后小鼠血糖變化示意圖。
【具體實施方式】
[0027]下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0028]實施例1芹菜素的提取以及本發(fā)明芹菜素的提取方法與現(xiàn)有提取方法比較
[0029](一)提取芹菜素:
[0030]I)以芹菜葉為底物，用質(zhì)量百分比濃度分別為37%的果膠酶和47%的葡萄糖苷酶的混合溶液在35°C下酶解10小時，酶混合溶液添加量為每5g芹菜葉15mL ；
[0031]2)將步驟I)所得酶解產(chǎn)物采用70%的乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，超聲波的功率為80W，溫度為57°C，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮至IOOmL,然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分尚提取，獲得療菜素。
[0032](二)提取芹菜素:
[0033]I)以芹菜葉為底物，用質(zhì)量百分比濃度分別為33%的果膠酶和43%的葡萄糖苷酶的混合溶液在30°C下酶解10小時，酶混合溶液添加量為每5g芹菜葉15mL ；
[0034]2)將步驟I)所得酶解產(chǎn)物采用70%的乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，超聲波的功率為80W，溫度為52°C，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮至IOOmL,然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分尚提取，獲得療菜素。
[0035](三)提取芹菜素:
[0036]I)以芹菜葉為底物，用質(zhì)量百分比濃度分別為35%的果膠酶和45%的葡萄糖苷酶的混合溶液在34°C下酶解10小時，酶混合溶液添加量為每5g芹菜葉15mL ；
[0037]2)將步驟I)所得酶解產(chǎn)物采用70%的乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，超聲波的功率為80W，溫度為55°C，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮至IOOmL,然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分尚提取，獲得療菜素。
[0038]我們把這種雙酶法在優(yōu)化條件下提取芹菜素與單個酶在優(yōu)化條件下芹菜素的產(chǎn)率進(jìn)行了比較。
[0039]水提法:
[0040]將市售的芹菜葉子洗凈，晾干，用水將芹菜葉研磨后(水添加量為每5g芹菜葉15mL)，分別放入一定溫度的水浴中(28，30，32，34，36，38，40°C )水解，記錄不同的水解時間(0，3，6，10，14，18，22h)，以便后續(xù)記錄最佳的酶解方案。酶解結(jié)束后，將酶液過濾后，用70%乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，超聲波的功率為80W，溫度為55°C，分別過濾殘渣，合并濾液后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將乙醇抽提液濃縮至IOOmL,然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別對濃縮液進(jìn)行萃取，萃取后的溶液蒸干后，即可看到黃色的芹菜素提取物，用70%乙醇溶液溶解后，用高效液相色譜對提取物進(jìn)行最后的純化。
[0041]單獨(dú)使用果膠酶提取芹菜素:
[0042]將市售的芹菜葉子洗凈，晾干，用配好的35%果膠酶溶液將芹菜葉研磨后(酶溶液添加量為每5g芹菜葉15mL),分別放入一定溫度的水浴中(28，30，32，34，36，38,40°C )水解，記錄不同的水解時間(0，3，6，10，14，18，22h)，以便后續(xù)記錄最佳的酶解方案。酶解結(jié)束后，將酶液過濾后，用70%乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，超聲波的功率為80W，溫度為55°C，分別過濾殘渣，合并濾液后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將乙醇抽提液濃縮至IOOmL,然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別對濃縮液進(jìn)行萃取，萃取后的溶液蒸干后，即可看到黃色的芹菜素提取物，用70%乙醇溶液溶解后，用高效液相色譜對提取物進(jìn)行最后的純化。
[0043]單獨(dú)使用葡萄糖苷酶提取芹菜素:
[0044]方法為:用45%葡萄糖苷酶溶液替換上述提取方法中的果膠酶溶液，其余同上述提取芹菜素方法。
[0045]將上述(三)所述的方法與單獨(dú)使用果膠酶和葡萄糖苷酶提取芹菜素進(jìn)行比較，如圖1所示，在本發(fā)明的提取方法中，芹菜素的產(chǎn)率分別比果膠酶組高出60%，比葡萄糖苷酶組高出30%。其中，35%果膠酶和45%葡萄糖苷酶優(yōu)化條件下所提取的芹菜素的產(chǎn)率比33%果膠酶和47%葡萄糖苷酶的所提取的芹菜素高出17%，而37%果膠酶和33%的葡萄糖苷酶所提取的芹菜素的產(chǎn)率比優(yōu)化條件下要低23%。
[0046]實施例2制備藥物組合物
[0047]藥物組合物一:配方:芹菜素10g，拜唐蘋20g。(芹菜素:拜唐蘋=1:2)。
[0048]制備上述藥物組合物，包括以下步驟:
[0049]I)提取芹菜素:以芹菜葉為底物，用35%的果膠酶和45%葡萄糖苷酶在34°C下酶解10小時，然后采用70%的乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，超聲波的功率為80W，溫度為52°C，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮至IOOmL,然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分離提取，制得芹菜素；
[0050]2)將步驟I)制得的芹菜素與拜唐蘋按配方量混合，制得藥物組合物。
[0051]將上述組合物按常規(guī)方法制得藥物組合物片劑(規(guī)格為50mg/片，其中含芹菜素16.7mg，含拜唐蘋 33.3mg)。
[0052]藥物組合物二:配方:芹菜素10g，拜唐蘋30g (芹菜素:拜唐蘋=1:3)。
[0053]制備上述藥物組合物，包括以下步驟:
[0054]I)提取芹菜素:以芹菜葉為底物，用35%的果膠酶和45%葡萄糖苷酶在34°C下酶解10小時，然后采用70%的 乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，超聲波的功率為80W，溫度為57°C，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮至IOOmL,然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分離提取，制得芹菜素；
[0055]2)將步驟I)制得的芹菜素與拜唐蘋按配方量混合，制得藥物組合物。
[0056]將上述組合物按常規(guī)方法制得藥物組合物片劑(規(guī)格為50mg/片，其中含芹菜素
12.5mg，含拜唐蘋 37.5mg)。
[0057]藥物組合物三:配方:芹菜素10g，拜唐蘋50g (芹菜素:拜唐蘋=1:5)。
[0058]I)提取芹菜素:以芹菜葉為底物，用35%的果膠酶和45%葡萄糖苷酶在34°C下酶解10小時，然后采用70%的乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，超聲波的功率為80W，溫度為55°C，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮至IOOmL,然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分離提取，制得芹菜素；
[0059]2)將步驟I)制得的芹菜素與拜唐蘋按配方量混合，制得藥物組合物。
[0060]按常規(guī)方法制得藥物組合物片劑(規(guī)格為50mg/片，其中含芹菜素8.3mg，含拜唐蘋 41.7mg)。
[0061 ] 實施例3本發(fā)明藥物組合物對糖尿病模型小鼠的降血糖試驗效果
[0062]選取8到12周齡以C57B1/6小鼠為背景具有雄性胰島素抗性的db/db小鼠(由上海實驗動物中心提供)作為實驗小鼠。
[0063]我們先用精蛋白鋅重組人胰島素混合注射液給藥2周后，
[0064]下面我們采用實施例2中的三組藥物組合物對糖尿病小鼠進(jìn)行實驗。
[0065]我們先用精蛋白鋅重組人胰島素混合注射液給藥2周后，將藥物組合物一~三分別對實驗組小鼠進(jìn)行給藥實驗(每組采用3只)，以考察本發(fā)明的藥物組合物對糖尿病模型小鼠體重及血糖變化的影響。將三組藥物分別粉碎按以下濃度稀釋成溶液:
[0066]藥物組合物一:芹菜素濃度為0.002g/100mL;拜唐蘋含量為0.004g/100mL ；
[0067]藥物組合物二:芹菜素濃度為0.0015g/100mL;拜唐蘋含量為0.0045g/100mL ；
[0068]藥物組合物三:芹菜素濃度為0.001/100mL;拜唐蘋含量為0.005g/100mL ；
[0069]將上述三組藥物組合物按小鼠體重X 3 ii L的體積灌胃。對小鼠的給藥實驗持續(xù)12周，期間分別對小鼠的實驗組每周進(jìn)行體重測量。小鼠血液則抽取小鼠尾部靜脈血，采用血糖儀進(jìn)行口服糖耐量(oral glucose tolerance test, 0GTT)實驗，以檢測小鼠給藥后的血糖濃度的變化 。
[0070]本試驗的對照為:在用精蛋白鋅重組人胰島素混合注射液給藥2周后僅使用拜唐蘋(稀釋拜唐蘋濃度為0.005g/100mL)按小鼠體重X3y L的體積對db/db小鼠給藥(每組米用3只)。
[0071]本試驗的試驗結(jié)果如圖2-3所示，我們可以從圖2中看出三個月時間內(nèi)由拜唐蘋灌胃后，小鼠體重發(fā)生了顯著的下降，這無疑增加了糖尿病小鼠免疫功能的下降從而增加了糖尿病的并發(fā)癥發(fā)生的概率。而用本發(fā)明的藥物組合物給小鼠灌胃后，我們從圖中可以看出，雖然在第八周小鼠體重有所升高，但整個治療過程中小鼠體重的波動幅度不大。從圖3可以看到，本發(fā)明的藥物組合物與一部分胰島素給糖尿病小鼠灌胃后，小鼠血糖先呈現(xiàn)上升的趨勢，然后隨著時間的延長，小鼠的糖耐量出現(xiàn)了上升的趨勢，血糖在逐漸下降，基本跟單獨(dú)使用拜唐蘋以及預(yù)混胰島素所控制的血糖下降的變化趨勢一致，但是下降的幅度趨于緩和，這成功避免了糖尿病小鼠在治療的過程中可能出現(xiàn)的低血糖的概率。本發(fā)明制備簡單，提取物對人體或動物無任何毒害影響，成本低，療效顯著，可連續(xù)化生產(chǎn)。
【權(quán)利要求】
1.一種芹菜素的提取方法，包括以下步驟： 1)以芹菜為底物，用質(zhì)量百分比濃度分別為33%-37%的果膠酶和43%-47%的葡萄糖苷酶的混合溶液在30-35°C下酶解10小時，酶混合溶液添加量為每5g芹菜15mL ； 2)將步驟I)所得酶解產(chǎn)物采用70%的乙醇溶液超聲提取3次，每次25-35分鐘，溫度為52-57°C，將提取液濃縮，然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分離提取，獲得芹菜素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟2)所述超聲波功率為80W。
3.一種用于治療糖尿病的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括芹菜素和拜唐蘋，所述芹菜素和拜唐蘋的質(zhì)量比為I :(2-5)。
4.一種權(quán)利要求3所述藥物組合物的制備方法，包括以下步驟： 1)提取芹菜素：以芹菜為底物，用質(zhì)量百分比濃度分別為33%-37%和43%-47%的葡萄糖苷酶的混合溶液在30-35°C下酶解10小時，酶混合溶液添加量為每5g芹菜15mL，然后采用70%的乙醇溶液超聲提取3次，每次30分鐘，溫度為52-57°C，將提取液濃縮，然后用等體積的石油醚和乙酸乙酯分別萃取，將萃取液蒸干后，用70%的乙醇溶解，最后用高效液相色譜儀器分離提取，制得芹菜素； 2)將步驟I)制得的芹菜素與拜唐蘋混合，制得藥物組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟2)所述超聲波功率為80W。
6.權(quán)利要求1所述藥物組合物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07D311/40GK103641807SQ201310726153
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年12月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月25日
【發(fā)明者】張謙 申請人:南通大學(xué)