從馬藺子種皮中分離馬藺子甲素和馬藺子乙素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從馬藺子種皮中分離馬藺子甲素和乙素的方法。該方法，包括如下步驟：1)將馬藺子種皮粉碎后與萃取劑混合進(jìn)行亞臨界流體萃取，得到萃取物；2)將步驟1)所得萃取物進(jìn)行減壓蒸發(fā)，收集萃取液；3)將步驟2)所得萃取液溶于石油醚后上樣于硅膠柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，得到馬藺子素粗品；4)將馬藺子素粗品經(jīng)高速逆流色譜分離，兩相溶劑系統(tǒng)由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水組成，收集相應(yīng)流分，濃縮，冷凍結(jié)晶，得馬藺子甲素和乙素。本發(fā)明使用亞臨界流體萃取技術(shù)和高速逆流色譜分離技術(shù)，具有萃取效率高、分離時間短、溶劑消耗少、化合物純度高、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點。
【專利說明】從馬藺子種皮中分離馬藺子甲素和馬藺子乙素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從馬藺子種皮中分離馬藺子甲素和馬藺子乙素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]馬藺(Irislactea Pall.var.chinensis (Fisch.) Koidz.),亦稱馬蓮、馬蘭、藍(lán)紫草、蘭花草等，是鳶尾科(Iridaceae)鳶尾屬(Iris L.)多年生草本宿根植物。馬藺自然分布于我國東北、華北、西北等地，以草原區(qū)分布較為普遍。馬藺子味甘，性平，涼血止血，清熱利濕。近代民間有用作口服避孕藥和治療功能性子宮出血、黃疸型肝炎及宮頸癌等疾病。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，馬藺子有明顯抑癌作用，主要活性成分為種皮中的馬藺子素，馬藺子素現(xiàn)已經(jīng)開發(fā)為腫瘤放射增敏劑(吳壽金，楊企錚.馬藺子化學(xué)成分的研究[J].化學(xué)學(xué)報，1980，38⑵:156-161.吳壽金，張麗，楊秀腎，等.馬藺子化學(xué)成分的研究I1.馬藺子乙素和馬藺子丙素的分離及其化學(xué)結(jié)構(gòu)的研究[J].化學(xué)學(xué)報，1981,39(8):767-770.張永生.馬藺子的生態(tài)生物性特征與生藥鑒定[J].中國藥事，1986，17(1):28-30.)。藥效學(xué)實驗證明，馬藺子素對人宮頸癌Hela細(xì)胞、CHO細(xì)胞、鼻咽癌和頭頸腫瘤原發(fā)灶等，在乏氧條件下均有顯著的放射增敏作用(李德華.一種新型腫瘤放射增敏藥“安卡”(馬藺子素)[J].中國腫瘤臨床，1996，26 (2):153-154.王燕，王樂，姚默，等.馬藺藥學(xué)研究概況[J].寧夏農(nóng)林科技，2012，53 (07):69-70.張力，毛達(dá)志，張恩羆，等.馬藺子素膠囊放射增敏的臨床研究[J].癌癥，1999，18 (I):52-55.李德華，郝小閣，張淑坤，等.馬藺子甲素的抗癌作用[J].中國藥理學(xué)報，1981,2(2):131-132.蔡藍(lán)，符立梧，潘啟超.馬藺子甲素誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞凋亡的研究[J].廣東藥學(xué)，2000，10(1):6-7.李德華，郝小閣，張淑坤，等.馬藺子甲素的抗癌作用和毒性[J].中國藥理學(xué)報，1981，2(2):131-133.)。
[0003]亞臨界萃取是利用亞臨界流體作為萃取劑，在密閉、無氧、低壓的容器內(nèi)，依據(jù)有機(jī)物相似相溶原理，通過萃取物料與萃取劑在浸泡過程中的分子擴(kuò)散過程，達(dá)到固體物料中的成分完全轉(zhuǎn)移到液態(tài)的萃取劑中，再通`過減壓蒸發(fā)的過程將萃取劑與目的產(chǎn)物分離，最終得到目的產(chǎn)物的一種新型萃取與分離技術(shù)。亞臨界流體萃取相比于其他分離方法，具有無毒、無害、環(huán)保等優(yōu)點，可以保留提取物的生物活性，而且產(chǎn)能大、可工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，節(jié)能、運行成本低。
[0004]高速逆流色譜是一種基于液-液多級逆流萃取建立的色譜體系，不使用固相載體作為固定相，而是使用液相載體作為固定相，利用螺旋柱在行星運動時產(chǎn)生的離心力，使互不相溶的兩相不斷混合，同時保留其中的一相為固定相，利用恒流泵連續(xù)泵入流動相，隨流動相進(jìn)入螺旋柱的溶質(zhì)在兩相之間反復(fù)分配，按分配系數(shù)的大小被依次洗脫。高速逆流色譜克服了使用固相載體帶來的樣品吸附、損失、污染和峰形拖尾等不足，適用于天然產(chǎn)物的分離。
[0005]目前馬藺子素的提取方法主要是有機(jī)溶劑提取，比如用石油醚、乙醚、乙酸乙酯等作為提取溶劑，加熱回流提取。馬藺子素的分離純化主要是通過柱色譜實現(xiàn)。但是通過亞臨界萃取結(jié)合高速逆流色譜快速分離制備馬藺子甲素和乙素的還未見報道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種從馬藺子種皮中分離馬藺子甲素和乙素的方法。
[0007]本發(fā)明提供的從馬藺子種皮中分離馬藺子甲素和馬藺子乙素的方法，包括如下步驟:
[0008]I)將馬藺子種皮粉碎后與萃取劑混合進(jìn)行亞臨界流體萃取，得到萃取物；
[0009]2)將步驟I)所得萃取物進(jìn)行減壓蒸發(fā)，收集萃取液；
[0010]3)將步驟2)所得萃取液溶于石油醚后上樣于硅膠柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，得到馬藺子素粗品；
[0011]4)用高速逆流色譜法對步驟3)所得馬藺子素粗品進(jìn)行分離，依次得到流分I和II;
[0012]其中，所述流分I中含有馬藺子甲素；所述流分II中含有馬藺子乙素；
[0013]所述高速逆流色譜法中的固定相和流動相按照如下方法制備:將正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別進(jìn)行超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動相；
[0014]所述正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的體積比為8~10: 4~6: 4~8: I~3;具體為 9: 5: 6: 2、9: 6: 6: 1、8: 6: 4: 1,8-9: 5-6: 4-6: 1-2 ；
[0015]所述上樣溶液為 將步驟3)所得馬藺子素粗品溶于所述流動相而得。
[0016]上述方法的步驟I)粉碎步驟中，粉碎后的目數(shù)為40-60目，具體為40目；
[0017]在粉碎步驟之前，可先將馬藺子用純水清洗、陰干再脫皮；
[0018]所述萃取劑選自正丙烷、正丁烷、異丁烷、二甲醚和1，1，1，2_四氟乙烷中的至少一種；
[0019]粉碎后的所述馬藺子種皮與萃取劑的用量比為Ig: 10_20mL，具體為Ig: 15mL ；
[0020]所述步驟I)萃取步驟中，萃取的次數(shù)為1-3次，具體為2次；每次萃取的時間均為30-90min，具體為 40_60min ；
[0021]溫度為15_35°C，具體為 20°C ；
[0022]壓力為1.0-1.5MPa ;
[0023]萃取劑的流量為100_200L/h，具體為150L/h。
[0024]所述步驟2)減壓蒸發(fā)步驟中，分離壓力為0.5~1.5MPa，具體為1.0MPa ；
[0025]分離溫度為20~45°C，具體為25_30°C。
[0026]所述步驟3)洗脫步驟中，洗脫劑為由石油醚和乙酸乙酯組成的混合液；
[0027]所用硅膠柱中，硅膠的目數(shù)為200-300目；
[0028]所述石油醚和乙酸乙酯的體積比為5: 1-3，具體為5: 1.5-2;
[0029]洗脫速度為20-30ml/min,具體為 25ml/min ；
[0030]洗脫溫度為20-25°C，具體為25°C ；
[0031]洗脫劑的用量為所用硅膠柱體積的2-4倍，具體為3倍；
[0032]所述硅膠柱的直徑為6-8cm，具體為6cm ;高為100_120cm，具體為120cm。
[0033]所述步驟4)分離步驟包括:向高速逆流色譜儀的分離管中泵入所述固定相，保持分離管溫度為25~35°C，以850~900rpm的轉(zhuǎn)速正轉(zhuǎn)30_50min后泵入所述流動相，待體系平衡后，泵入所述上樣溶液。
[0034]所述步驟4)中，上樣溶液的流速為1.5-3mL/min,具體為2mL/min ；
[0035]所述馬藺子素粗品與流動相的用量比為100_300mg: 1OmL,具體為150mg:1OmL ；
[0036]所述分離步驟中，檢測波長為270nm。
[0037]流分I和流分II的出峰時間依次為90-140min和160_200min。
[0038]上述馬藺子甲素和馬藺子乙素的結(jié)構(gòu)依次如下所示:
[0039]
【權(quán)利要求】
1.一種從馬藺子種皮中分離馬藺子甲素和馬藺子乙素的方法，包括如下步驟: 1)將馬藺子種皮粉碎后與萃取劑混合進(jìn)行亞臨界流體萃取，得到萃取物； 2)將步驟I)所得萃取物進(jìn)行減壓蒸發(fā)，收集萃取液； 3)將步驟2)所得萃取液溶于石油醚后上樣于硅膠柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，得到馬藺子素粗品； 4)用高速逆流色譜法對步驟3)所得馬藺子素粗品進(jìn)行分離，依次得到流分I和II; 其中，所述流分I中含有馬藺子甲素；所述流分II中含有馬藺子乙素； 所述高速逆流色譜法中的固定相和流動相按照如下方法制備:將正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水混勻后靜置分層，分別收集上層溶劑和下層溶劑，分別進(jìn)行超聲，以上層溶劑為固定相，下層溶劑為流動相； 所述正己燒、乙酸乙酯、甲醇和水的體積比為8~10: 4~6: 4~8:1~3; 所述上樣溶液為將步驟3)所得馬藺子素粗品溶于所述流動相而得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟I)粉碎步驟中，粉碎后的目數(shù)為40-60目，具體為40目； 所述萃取劑選自正丙烷、正丁烷、異丁烷、二甲醚和1，1，1，2_四氟乙烷中的至少一種； 粉碎后的所述馬藺子種皮與萃取劑的用量比為Ig: 10-20mL，具體為Ig: 15mL ； 所述步驟I)萃取步驟中，萃取的次數(shù)為1-3次，具體為2次；每次萃取的時間均為30-90min，具體為 40_60min ； 溫度為15-35°C，具體為20°C ；
壓力為 1.0-1.5MPa ； 萃取劑的流量為100-200L/h，具體為150L/h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述步驟2)減壓蒸發(fā)步驟中，分離壓力為0.5~1.5MPa,具體為1.0MPa ； 分離溫度為20~45°C，具體為25-30°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于:所述步驟3)洗脫步驟中，洗脫劑為由石油醚和乙酸乙酯組成的混合液； 所用硅膠柱中，硅膠的目數(shù)為200-300目； 所述石油醚和乙酸乙酯的體積比為5: 1-3，具體為5: 1.5-2; 洗脫速度為20-30ml/min，具體為25ml/min ； 洗脫溫度為20-25°C，具體為25°C ； 洗脫劑的用量為所用硅膠柱體積的2-4倍，具體為3倍； 所述硅膠柱的直徑為6_8cm,具體為6cm ;高為100_120cm,具體為120cm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的方法，其特征在于:所述步驟4)分離步驟包括:向高速逆流色譜儀的分離管中泵入所述固定相，保持分離管溫度為25~35°C，以850~900rpm的轉(zhuǎn)速正轉(zhuǎn)30-50分鐘后泵入所述流動相，待體系平衡后，泵入所述上樣溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的方法，其特征在于:所述步驟4)中，上樣溶液的流速為 1.5_3mL/min,具體為 2mL/min ； 所述馬藺子素粗品與流動相的用量比為100-300mg:10mL，具體為150mg:10mL ； 所述分離步驟中，檢測波長為270nm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的方法，其特征在于:所述步驟4)中，流分I和流分II的出峰時間依次為 90-140min和160_200min。
【文檔編號】C07C46/10GK103694098SQ201310645738
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月4日
【發(fā)明者】王洪倫, 呂歡歡, 丁晨旭, 索有瑞 申請人:中國科學(xué)院西北高原生物研究所