專利名稱：一種制備丹酚酸a的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備丹酚酸A的方法，特別涉及一種制備高純度丹酚酸A的方法。
背景技術(shù)：
丹參(salvia miltiorrhiza Bunge)是一種多年生草本植物,為唇形科鼠尾草屬，其干燥根是中醫(yī)常用的一味歷史悠久的活血化瘀藥，具有“行氣止痛，寧心安神，清熱涼血，活血化瘀，養(yǎng)血益氣，祛痹健腳，調(diào)經(jīng)止崩，解毒排膿”八大功效。丹參藥材常用于治療心絞痛、高血壓、冠心病及中風(fēng)等心腦血管疾病。以丹參飲片或者丹參粗提取物入藥的中藥制劑有很多，如復(fù)方丹參片、復(fù)方丹參滴丸、丹參注射液、香丹注射液等，另外也有利用從丹參中分離得到純化合物或其鹽類制成的制劑，如丹參素鈉注射液、丹酚酸B針劑等。近年來，隨著藥理研究的深入，丹酚酸A的多種藥理活性被發(fā)現(xiàn)。如甄永蘇等發(fā)現(xiàn)丹酚酸A具有抗腫瘤活性；杜冠華等發(fā)現(xiàn)丹酚酸A對大鼠離體心肌缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用，對小鼠腦缺血再灌注引起的腦損傷有保護(hù)作用，對樟柳堿或冬莨菪堿引起的小鼠記憶獲得障礙有明顯的改善作用等；陶文(Tao Wen)等發(fā)現(xiàn)丹酚酸A對四氯化碳引起的大鼠肝損傷具有保護(hù)作用。李志剛等還開發(fā)了治療心血管疾病的丹酚酸A片劑及注射劑。丹參的水溶性成分多具有酚酸性結(jié)構(gòu)，如丹酚酸A、B、C、D、E等，其中以丹酚酸B含量最高，具有廣泛的藥理作用，如保護(hù)心肌缺血缺氧、改善微循環(huán)、中樞鎮(zhèn)靜、抑制血小板聚集和血栓形成等,臨床上已將其用于冠心病、心絞痛、心肌梗塞、缺血性中風(fēng)等疾病的治療，藥效顯著。其中以丹酚酸A的藥理活性最高(杜冠華[基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2000，20 (5):10 14]、胡義揚(yáng)[中藥藥理學(xué)報(bào)，1997，18 (5):478-4801])。目前，丹參水溶性成分的獲取多采用水提醇沉、乙酸乙酯萃取等方法，文獻(xiàn)(中成藥，2007，29 (I):143-144 ;中草藥，2007,38(6):843-846 ;中草藥，2007，38 (4):542-545;時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007，18(5):1186-1187)均有詳細(xì)闡述，但所得產(chǎn)品或?yàn)槎喾铀峄旌衔?構(gòu)效關(guān)系并不明晰)，或再經(jīng)過多步純化`得到某一單一藥效物質(zhì)，如，(1)CN1342638A采用水提一雙柱吸附洗脫.溶劑萃取等步驟純化丹參素；(2)CN1303052C采用水或醇提、前體轉(zhuǎn)化、超濾除雜、溶劑萃取和正相色譜等多步純化丹參素；(3)CN1751706A采用堿提、酸化、醇沉、雙柱(樹脂+聚酰胺)吸附洗脫和結(jié)晶等多步純化丹參素；(4)CN101012163A采用樹脂吸附洗脫.重結(jié)晶或二次層析純化丹參素；(5) CN1425659采用水提、酸化、柱層析和干燥等數(shù)步分離純化丹酚酸B。上述方法均以單一組分為提取純化目標(biāo)，其它功效成分并未涉及。雖然CN1305866C采用兩次沸水提取，高速離心，膜濾除雜或溶劑萃取，以及反相色譜分離等多步得到丹酚酸A、B和原兒茶醛三種組分，但純度和收率等參數(shù)未報(bào)道，且為分批處理，每次上樣5ml，處理量小，操作復(fù)雜，生產(chǎn)效率低。因此，目前尚無一種操作簡便，提取效率和產(chǎn)品純度與處理量均較高，并可同時(shí)分離純化多種丹酚酸尤其是丹酚酸A的方法?，F(xiàn)有文獻(xiàn)中公開了丹酚酸A提取純化的工藝方法，雖然能夠得到丹酚酸A，但研究重心都是落在如何將丹酚酸A與雜質(zhì)的分離上，存在著提取率很低，無法在工業(yè)化生產(chǎn)中實(shí)現(xiàn)，也無法得到“成藥”級的丹酚酸A的缺陷，這成為了擺在很多科研工作者面前的一道難關(guān)。中國專利CN1397276A，2002年公開了水或醇提、樹脂層析，再經(jīng)硅膠柱層析的純化制備丹酚酸A的方法；中國專利CN15138481A，2003年公開了采用水溫浸、離心、超濾、調(diào)酸、有機(jī)溶劑萃取再經(jīng)反相柱層析制備丹酚酸A的方法；中國專利CN1887849A，2006年公開了水或醇提、柱層析后調(diào)PH值、有機(jī)溶劑萃取的方法。這些方法都是從丹參中直接將丹酚酸A提取出來再設(shè)計(jì)一系列的純化方法得到丹酚酸A。由于丹參中丹酚酸A含量低，使得這些方法的提取率很低，無法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，也無法開發(fā)出應(yīng)用于臨床的藥物制劑。中國專利CN1830947A，2006年公開了丹參水提或醇提、高溫高壓反應(yīng)、柱層析等純化方法，該方法采用高溫高壓條件是101-140°C，壓力是0.01-0.25MPa，很顯然這在實(shí)際操作中無法實(shí)現(xiàn)，因?yàn)闇囟扰c壓力具有一定的關(guān)系，而該申請顯然不符合這種關(guān)系，因此無法實(shí)現(xiàn)操作。中國專利CN101311160A，CN1012300030A，2008年公開了以丹酚酸B為原料，高溫 高壓反應(yīng)或微波提取、柱層析等純化方法，該方法采用高溫反應(yīng)條件是110-130°C，在水溶液中進(jìn)行轉(zhuǎn)化為丹酚酸A，由于丹酚酸A是易氧化物質(zhì)，高溫條件下在水溶液中容易被氧化，使轉(zhuǎn)化率降低，同時(shí)為分離純化增加了難度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中所存在的丹酚酸A提取率低、純度低的不足，提供一種純度和提取率高的制備丹酚酸A的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案:一種制備丹酚酸A的方法，包括以下步驟:(I)取含丹酚酸B的物質(zhì)為原料，加入0.1-10倍原料重量且濃度為0.01-100%(v/v)的酸性物質(zhì)，加入0.01-10倍酸性物質(zhì)重量且沸點(diǎn)大于100°C的有機(jī)溶劑，在110-130°C溫度下加熱3-5小時(shí)，得丹酚酸A富集液；所述含丹酚酸B的物質(zhì)中丹酚酸B的重量百分含量為2% -100% ；(2)冷卻丹酚酸A富集液，加入2-6倍水稀釋，純化，得丹酚酸A。上述含丹酚酸B的物質(zhì)是丹酚酸B提取物、有效部位、組分有效部分、有效成分或純品；也可以是含量低于10%的粗提物或丹參藥材。上述含丹酚酸B的物質(zhì)，其丹酚酸B含量越高，使得物料成本越高，因此，考慮到本發(fā)明方法的制備成本，上述含丹酚酸B的物質(zhì)中丹酚酸B的重量百分含量優(yōu)選2% -98%。為了提高提取效率和提取純度，并考慮到實(shí)施成本，上述有機(jī)溶劑優(yōu)選乙二醇、N-二甲基甲酰胺或二甲亞砜。上述酸性物質(zhì)為有機(jī)酸或無機(jī)酸。上述酸性物質(zhì)優(yōu)選甲酸、醋酸、硫酸或鹽酸，以醋酸為最佳，但上述酸性物質(zhì)并不局限于所羅列的酸。上述步驟(2)中所述純化的操作，可以通過吸附樹脂柱層析分離、硅膠柱層析分離、聚酰胺柱層析分離、葡聚糖凝膠柱層析分離或有機(jī)溶劑萃取方法中一種或幾種方法聯(lián)合進(jìn)行純化，純化使用的吸附樹脂優(yōu)選HP-20、XAD-8、HZ801、HZ803、HZ841、HB16、D1450、HP-20ss或XAD-16樹脂，但不局限于這些吸附樹脂。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明方法經(jīng)過發(fā)明人多年的理論研究和實(shí)驗(yàn)，了解到丹酚酸A是一分子丹參素與兩分子咖啡酸縮合而成，而丹酚酸B是三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，丹酚酸A與丹酚酸B的化學(xué)結(jié)構(gòu)有類似的地方；分析丹酚酸類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)，了解到丹酚酸類是一類不太穩(wěn)定的成分，可以發(fā)生氧化、降解等反應(yīng)，丹酚酸類物質(zhì)之間也可以互相轉(zhuǎn)化，因此，根據(jù)這些特點(diǎn)，本發(fā)明制備丹酚酸A的方法根據(jù)丹酚酸類物質(zhì)的理化性質(zhì)設(shè)計(jì)制備路線，依據(jù)以下反應(yīng)機(jī)理，將部分丹酚酸鹽轉(zhuǎn)化為丹酚酸A:
權(quán)利要求
1.一種制備丹酚酸A的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取含丹酚酸B的物質(zhì)為原料，加入0.1-10倍原料重量且濃度為0.01-100% (v/v)的酸性物質(zhì)，加入0.01-10倍酸性物質(zhì)重量且沸點(diǎn)大于100°C的有機(jī)溶劑，在110-130°C溫度下加熱3-5小時(shí)，得丹酚酸A富集液；所述含丹酚酸B的物質(zhì)中丹酚酸B的重量百分含量為 2% -100% ； (2)冷卻丹酚酸A富集液，加入2-6倍水稀釋，純化，得丹酚酸A。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備丹酚酸A的方法，其特征在于，所述含丹酚酸B的物質(zhì)是丹酚酸B提取物、有效部位、組分有效部分、有效成分或純品，或丹酚酸B含量低于10 %的粗提物或丹參藥材。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備丹酚酸A的方法，其特征在于，所述含丹酚酸B的物質(zhì)中丹酚酸B的重量百分含量為2 % -98 %。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備丹酚酸A的方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為乙二醇、N-二甲基甲酰胺或二甲亞砜。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的制備丹酚酸A的方法，其特征在于，所述酸性物質(zhì)為有機(jī)酸或無機(jī)酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備丹酚酸A的方法，其特征在于，所述酸性物質(zhì)為甲酸、醋酸、硫酸或鹽酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求 1-4任一所述的制備丹酚酸A的方法，其特征在于，步驟(2)中所述純化的操作，具體采用吸附樹脂柱層析分離、硅膠柱層析分離、聚酰胺柱層析分離、葡聚糖凝膠柱層析分離或有機(jī)溶劑萃取方法中的一種或幾種方法聯(lián)合進(jìn)行純化。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備丹酚酸A的方法，其特征在于，所述純化使用的吸附樹脂為 HP-20、XAD-8、HZ801、HZ803、HZ841、HB16、D1450、HP-20ss 或 XAD-16 樹脂。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備丹酚酸A的方法，包括以下步驟(1)取含丹酚酸B的物質(zhì)為原料，加入0.1-10倍原料重量且濃度為0.01-100％(v/v)的酸性物質(zhì)，加入0.01-10倍酸性物質(zhì)重量且沸點(diǎn)大于100℃的有機(jī)溶劑，在110-130℃溫度下加熱3-5小時(shí)，得丹酚酸A富集液；所述含丹酚酸B的物質(zhì)中丹酚酸B的重量百分含量為2％-100％；(2)冷卻丹酚酸A富集液，加入2-6倍水稀釋，純化，得丹酚酸A。本發(fā)明避免了丹酚酸A在高溫水溶液中發(fā)生氧化，提高了丹酚酸B物質(zhì)的轉(zhuǎn)化率，原料提取率達(dá)到20％-60％，同時(shí)也降低了終產(chǎn)品丹酚酸A的雜質(zhì)含量和純化難度，制備得到的丹酚酸A純度達(dá)到90％以上，可以很好地進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07C67/32GK103242161SQ201310192210
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月17日
發(fā)明者湯世江 申請人:成都科源生物技術(shù)有限公司