專利名稱：一種多足蕨甙a的提取分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，尤其涉及一種多足蕨甙A的提取分離方法。
背景技術(shù)：
多足蕨甙A (Polypodoside A)屬甾體皂苷類，分子式為C45H72O17，分子量885.05。多足蕨甙A可以作為甜味劑，其甜度為6%(w/v)蔗糖溶液的600倍。多足蕨甙A主要來源于水龍骨科(Polypodiaceae)甜根多足蕨DC.Eaton 的根莖。目前，大規(guī)模開發(fā)無毒、使用安全、低熱量、天威素質(zhì)優(yōu)良又具有保健作用的天然甜味劑代替蔗糖和人工合成甜味劑，是國內(nèi)外科技工作者迫切需要解決的大課題。目前，國內(nèi)尚未見采用高速逆流色譜法提取純化多足蕨甙A的相關(guān)文獻和專利的報道。高速逆流色譜法(High-speedCountercurrent Chromatography,簡稱HSCCC),是一種新型的、連續(xù)高效的液液分配色譜技術(shù)，與其它色譜技術(shù)不同的是它不需任何固態(tài)載體，因此能避免固相載體表面與樣品發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致樣品的污染、失活、變性和不可逆吸附等不良影響。同時它也具有適用范圍廣、快速、進樣量大、費用低、回收率高等優(yōu)點。因此，在生物、醫(yī)藥、食品、材料、化妝品和環(huán)保等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用，尤其是在天然產(chǎn)物活性成分的分離純化領(lǐng)域。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種多足蕨甙A的提取分離方法，該方法操作簡
單，廣品含量聞。
·
本發(fā)明是采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:
(1)取甜根多足蕨的根莖原料粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；
(2)酶解原料加5-10倍量70-95%的乙醇溶液混合后，進行負壓空化混懸固液萃取，得到提取液；
(3)提取液濃縮至浸膏，加適量水分散后，加入1-3倍量的水飽和正丁醇萃取2-4次，合并萃取液加0.6-1.1倍量丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；
(4)以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(5-8:2-3:3-5:2-4)作為兩相溶劑系統(tǒng)，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，注入高速逆流色譜儀，收集高含量多足蕨甙A流分，濃縮干燥即得多足蕨甙A產(chǎn)品。所述步驟(I)中生物酶可選果膠酶、纖維素酶和淀粉酶中的任一種，用量為原料重量的多足蕨式A 0.8_1%。所述步驟(4)中高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速750-950r/min,流動相流速2.8-3.5ml/min。本發(fā)明的積極效果是:
I)采用生物酶解分解物質(zhì)組織結(jié)構(gòu)，提高了提取率，縮短了提取時間，而且采用負壓空化混懸固液萃取的方法對植物原料中的多足蕨甙A進行提取，時間短，效率高；2)高速逆流色譜法分離:無需使用載體，減少了操作過程中樣品的損失，分離效果好，制備量大。下面將結(jié)合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施例。
具體實施方式
:
實施例1:
甜根多足蕨的根莖原料粉碎，過40目篩，稱取3kg，加30g的果膠酶混合均勻，酶解3天，酶解原料加24L70%的乙醇溶液空化混懸50min，進行負壓空化混懸固液萃取I次，得到萃取液，濃縮至浸膏，加800ml水分散，再加800ml水飽和正丁醇萃取2次，合并萃取液，力口1600ml丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(5:2:3:3)作為兩相溶劑系統(tǒng)，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以2.8ml/min的流速泵入流動相，平衡后設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為850r/min，通過進樣閥進樣，每次進樣量為150mg，收集高含量多足蕨甙A流分，濃縮干燥即得多足蕨甙A產(chǎn)品6.1g,含量98.3%。實施例2:
甜根多足蕨的根莖原料粉碎，過60目篩，稱取3kg，加30g的淀粉酶混合均勻，酶解2天，酶解原料加30L75%的乙醇溶液空化混懸40min，進行負壓空化混懸固液萃取2次，得到萃取液，濃縮至浸膏，加900ml水分散,再加IOOOml水飽和正丁醇萃取2次,合并萃取液,力口1200ml丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(6:3:5:4)作為兩相溶劑系統(tǒng)，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以2.8ml/min的流速泵入流動相，平衡后設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為750r/min，通過進樣閥進樣，每次進樣量為150mg，收集高含量多足蕨甙A流分，濃縮干燥即得多足蕨甙A產(chǎn)品7`.0g,含量98.5%。實施例3:
甜根多足蕨的根莖原料粉碎，過20目篩，稱取3kg，加30g的纖維素酶混合均勻，酶解2天，酶解原料加15L85%的乙醇溶液空化混懸50min，進行負壓空化混懸固液萃取2次，得到萃取液，濃縮至浸膏，加800ml水分散，再加500ml水飽和正丁醇萃取4次，合并萃取液，力口1200ml丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(8:3:3:2)作為兩相溶劑系統(tǒng)，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以3.0ml/min的流速泵入流動相，平衡后設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為800r/min，通過進樣閥進樣，每次進樣量為150mg，收集高含量多足蕨甙A流分，濃縮干燥即得多足蕨甙A產(chǎn)品8.3g，含量98.1%。實施例4:
甜根多足蕨的根莖原料粉碎，過40目篩，稱取10kg，加80g的淀粉酶混合均勻，酶解2天，酶解原料加80L75%的乙醇溶液空化混懸50min，進行負壓空化混懸固液萃取2次，得到萃取液，濃縮至浸膏，加IL水分散，再加400ml水飽和正丁醇萃取3次，合并萃取液，加1200ml丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(7:3:4:2)作為兩相溶劑系統(tǒng)，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以2.8ml/min的流速泵入流動相，平衡后設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為850r/min，通過進樣閥進樣，每次進樣量為250mg，收集高含量多足蕨甙A流分，濃縮干燥即得多足蕨甙A產(chǎn)品25.6g，含量98.5%。 實施例5:
甜根多足蕨的根莖原料粉碎，過40目篩，稱取20kg，加160g的果膠酶混合均勻，酶解I天，酶解原料加120L95%的乙醇溶液空化混懸50min，進行負壓空化混懸固液萃取2次，得到萃取液，濃縮至浸膏，加4L水分散，再加2L水飽和正丁醇萃取2次，合并萃取液，加4.4L丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(7:2:5:3)作為兩相溶劑系統(tǒng)，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以3.5ml/min的流速泵入流動相，平衡后設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為950r/min，通過進樣閥進樣，每次進樣量為200mg，收集高含量多足蕨甙A流分，濃縮干燥即得多足蕨 甙A產(chǎn)品46.9g，含量98.9%。
權(quán)利要求
1.一種多足蕨甙A的提取分離方法，其特征在于包含以下步驟: (1)取甜根多足蕨的根莖原料粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料； (2)酶解原料加5-10倍量70-95%的乙醇溶液混合后，進行負壓空化混懸固液萃取，得到提取液； (3)提取液濃縮至浸膏，加適量水分散后，加入1-3倍量的水飽和正丁醇萃取2-4次，合并萃取液加0.6-1.1倍量丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品； (4)以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(5-8:2-3:3-5:2-4)作為兩相溶劑系統(tǒng)，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，注入高速逆流色譜儀，收集高含量多足蕨甙A流分，濃縮干燥即得多足蕨甙A產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的多足蕨甙A的提取分離方法，其特征在于所述步驟(I)中生物酶可選果膠酶、纖維素酶和淀粉酶中的任一種，用量為原料重量的0.8-1%。
3.如權(quán)利要求2所述的多足蕨甙A的提取分離方法，其特征在于所述步驟(4)中高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速750_ 950r/min,流動相流速2.8-3.5ml/min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多足蕨甙A的提取分離方法，方法是將甜根多足蕨的根莖粉碎，加生物酶酶解1-3天，酶解原料加5-10倍量70-95%的乙醇溶液混合后，進行負壓空化混懸固液萃取，得到萃取液，濃縮至浸膏，加適量水分散后，加入水飽和正丁醇萃取2-4次，合并萃取液加丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品，再采用高速逆流色譜法對粗品進行分離純化，得到多足蕨甙A。本方法制備量大，樣品損失少，產(chǎn)品含量高。
文檔編號C07J17/00GK103242409SQ20131018882
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月21日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司