專利名稱：一種制備柔毛山黧豆甙Ⅰ的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種制備柔毛山黧豆甙I的方法。
背景技術(shù)：
柔毛山黧豆甙I (Palustroside)為三萜苷類活性成分，白色粉末，分子式C42H68O15,分子量812.99,主要來源于豆科(Leguminosae)柔毛山黧豆 Lathyrus palustrisL.var.pilosus Ledeb.的地上部分?，F(xiàn)代研究表明，柔毛山黧豆的地上部分中含有大量黃酮類物質(zhì)，具有顯著的保肝作用。在體外免疫肝損害中，對(duì)培養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞有保護(hù)作用。劑量90 μ M時(shí)，保護(hù)率46% ;200 μ M時(shí)，保護(hù)率86%。通過檢索，國內(nèi)尚未見采用高速逆流色譜分離技術(shù)制備柔毛山黧豆甙I的方法的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供一種制備柔毛山黧豆甙I的方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:
一種制備柔毛山黧豆甙I的方法，其特征在于以下步驟:
(1)取柔毛山黧豆的地上部分粉碎，加生物酶拌勻，常溫酶解4-7天，酶解原料用溫水浸泡提取2-3次， 得到提取液；
(2)提取液過濾后用超濾膜超濾，透過液再用納濾膜濃縮，所得濃縮液用正丁醇萃取，萃取液濃縮得粗提物；
(3 )把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得柔毛山黧豆甙I。步驟(I)中所述的生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和果膠酶，用量為原料量的3-5 %0。步驟(2)中所述的超濾膜為截留分子量2000-10000的中空纖維素超濾膜，納濾膜為截留分子量200-400的中空纖維素納濾膜。步驟(3)中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)為乙酸乙酯-正丁醇-水組合，比例為3-5:2-4:5-7，下相為流動(dòng)相，上相為固定相。本發(fā)明采用生物酶發(fā)酵，可以縮短提取周期，提高提取率；采用膜過濾技術(shù)分離，物理方法除雜，操作簡單，不污染環(huán)境；采用高速逆流色譜分離，分離速度快，樣品無損失，溶劑可以循環(huán)使用，制備量大。
具體實(shí)施方式
:
下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例1:
取纖維酶15g溶于5L水，加入粉碎的5kg柔毛山黧豆的地上部分中拌勻，常溫酶解5天，酶解原料用70°C溫水浸泡提取2次，每次加40kg，提取液過濾后用截留分子量2000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再用截留分子量200的中空纖維素納濾膜濃縮，所得濃縮液用等體積正丁醇萃取3次，萃取液濃縮得粗提物12g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按3:2:5混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時(shí)開轉(zhuǎn)主機(jī)900rpm，泵入下相做流動(dòng)相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為2.5ml/min,同時(shí)用流動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色柔毛山黧豆甙I 702mg，經(jīng)HPLC檢測，純度98.2%。實(shí)施例2:
取淀粉酶5和果膠酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg柔毛山黧豆的地上部分中拌勻，常溫酶解4天，酶解原料用60°C溫水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液過濾后用截留分子量6000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再用截留分子量300的中空纖維素納濾膜濃縮，所得濃縮液用等體積正丁醇萃取3次，萃取液濃縮得粗提物13g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按5:4:7混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時(shí)開轉(zhuǎn)主機(jī)850rpm，泵入下相做流動(dòng)相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為2.5ml/min,同時(shí)用流動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色柔毛山黧豆甙I 598mg,經(jīng) HPLC 檢測，純度 97.7%。實(shí)施例3:
取淀粉酶5和果膠酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg柔毛山黧豆的地上部分中拌勻，常溫酶解7天，酶解原料用60°C溫水浸泡提取2次，每次加30kg，提取液過濾后用截留分子量10000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再用截留分子量300的中空纖維素納濾膜濃縮，所得濃縮液用等體積正丁醇萃取3次，萃取液濃縮得粗提物15g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按3:2:5混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時(shí)開轉(zhuǎn)主機(jī)800rpm，泵入下相做流動(dòng)相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為2ml/min，同時(shí)用流動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色柔毛山黧豆甙I 715mg，經(jīng)HPLC檢測，純度98.1%。·實(shí)施例4:
取纖維素酶15和果膠酶IOg溶于5L水,加入粉碎的5kg柔毛山黧豆的地上部分中拌勻，常溫酶解4天，酶解原料用60°C溫水浸泡提取3次，每次加35kg，提取液過濾后用截留分子量5000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再用截留分子量400的中空纖維素納濾膜濃縮，所得濃縮液用等體積正丁醇萃取3次，萃取液濃縮得粗提物22g。取乙酸乙酯、正丁醇、水按4:3:5混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時(shí)開轉(zhuǎn)主機(jī)IOOOrpm，泵入下相做流動(dòng)相，待系統(tǒng)平衡后，流速調(diào)節(jié)為3ml/min，同時(shí)用流動(dòng)相溶解粗提物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色柔毛山黧豆甙I 569mg,經(jīng) HPLC 檢測，純度 98.2%。
權(quán)利要求
1.一種制備柔毛山黧豆甙I的方法，其特征在于以下步驟: (1)取柔毛山黧豆的地上部分粉碎，加生物酶拌勻，常溫酶解4-7天，酶解原料用溫水浸泡提取2-3次，得到提取液； (2)提取液過濾后用超濾膜超濾，透過液再用納濾膜濃縮，所得濃縮液用正丁醇萃取，萃取液濃縮得粗提物； (3 )把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得柔毛山黧豆甙I。
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的制備柔毛山黧豆甙I的方法，其特征在于步驟(I)中所述的生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和果膠酶，用量為原料量的3-5%。。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備柔毛山黧豆甙I的方法，其特征在于步驟(2)中所述的超濾膜為截留分子量2000-10000的中空纖維素超濾膜，納濾膜為截留分子量200-400的中空纖維素納濾膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備柔毛山黧豆甙I的方法，其特征在于步驟(3)中所述的高速逆流色譜分離的溶劑系統(tǒng)為乙酸乙酯-正丁醇-水組合，比例為3-5:2-4:5-7，下相為流動(dòng)相，上相為固 定相。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備柔毛山黧豆甙Ⅰ的方法。方法步驟如下(1)取柔毛山黧豆的地上部分粉碎，加生物酶拌勻，常溫酶解4-7天，酶解原料用溫水浸泡提取2-3次，得到提取液；(2)提取液過濾后用超濾膜超濾，透過液再用納濾膜濃縮，所得濃縮液用正丁醇萃取，萃取液濃縮得粗提物；(3)把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標(biāo)成分，減壓干燥得柔毛山黧豆甙Ⅰ。采用本發(fā)明制備柔毛山黧豆甙Ⅰ，方法操作簡單、效率高、制備量大，所得產(chǎn)品純度高。
文檔編號(hào)C07H1/08GK103242394SQ201310188710
公開日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月21日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司