專利名稱：從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法。
背景技術(shù)：
豬牙皂為豆科植物皂莢Gledisia Sinensis Lam.的干燥不育果實，主要含五環(huán)三萜型皂莢皂苷類成分，齊墩果酸和刺囊酸是皂莢皂苷的主要苷元(化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1和圖
2)。齊墩果酸和刺囊酸不僅對人體具有重要的生理活性，而且是中醫(yī)藥研究和分析測試中最常用的化學(xué)對照品，因此，制備齊墩果酸和刺囊酸具有重要的應(yīng)用價值。目前對齊墩果酸和刺囊酸對照品的制備多采用制備型高效液相色譜法，該方法制備的對照品雖純度較高，但需要大型貴重儀器和專用層析柱，具有成本高、制備周期長等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，本方法以豬牙皂為原料，經(jīng)醇提取、水解和制備型薄層分離可同時制備齊墩果酸和刺囊酸。對制備的兩種成分，經(jīng)與中國藥品生物制品檢定所提供的齊墩果酸和刺囊酸對照品對比分析，表明采用本法制備的齊墩果酸和刺囊酸，其純度與兩種對照品基本相當(dāng)，達(dá)到了中藥化學(xué)對照品的質(zhì)量要求。本方法無需貴重儀器，簡便易行，成本低，且能達(dá)到中藥化學(xué)對照品的質(zhì)量要求。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:一種從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，步驟如下:(I)豬牙皂總皂苷提取物的提取:稱取豬牙皂100g，用600mL75% (體積百分?jǐn)?shù))的乙醇回流提取2h，濾過，殘渣再用600mL75%乙醇提取2次，每次lh，濾過，合并3次醇提液，回收乙醇，濃縮成浸膏，60 65°C減壓干燥，粉碎，得豬牙皂總皂苷提取物，備用；(2)豬牙皂總皂苷的水解:取豬牙皂總皂苷提取物10g，加硅藻土 3 5g，拌勻，置索氏提取器中，加甲醇200mL，回流3小時，放冷，蒸干，殘渣加10%鹽酸(質(zhì)量百分?jǐn)?shù))200mL使溶解，轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，水浴加熱水解2h，放冷，置分液漏斗中，用氯仿提取3次(3次的氯仿用量依次為lOOmL，lOOmL，60mL)，合并氯仿提取液，用水洗滌2次，每次150mL，棄去水液，回收氯仿，蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至25mL量瓶中，搖勻，O 4°C放置，有白色結(jié)晶析出，濾出結(jié)晶，母液濃縮至約10ml，同上放置，又有結(jié)晶析出，再濾出結(jié)晶，將兩次結(jié)晶合并，用少量甲醇洗滌結(jié)晶，55 60°C干燥，得干燥結(jié)晶，備用，該結(jié)晶主要含齊墩果酸和刺囊酸；(3)齊墩果酸及刺囊酸的薄層制備:①薄層供試品溶液的制備:取上述干燥結(jié)晶，用甲醇制成濃度為26mg/ml的溶液，作為薄層供試品溶液；②薄層條件:層析板 層析板為厚度為0.6mm的娃膠G薄層板(20cmX 20cm), 105°C活化30分鐘，備用；展開劑:環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(體積比為15:4:2)上層；顯色劑:10%硫酸乙醇(質(zhì)量百分?jǐn)?shù))，電吹風(fēng)加熱至顯色清晰；展距:15cm;③點樣及制備:用微型點樣器吸取樣品液800 μ 1，以條狀或點狀形式連續(xù)點于薄層板上，置于盛有展開劑的層析缸中，展程15cm，取出，晾干，薄層板兩側(cè)顯色，將層析板齊墩果酸(上部顯色斑點)和刺囊酸(下部顯色斑點)顯色斑點對應(yīng)的中間未顯色區(qū)域分別仔細(xì)刮下，將刮下的齊墩果酸和刺囊酸硅膠粉各置一個250mL錐形瓶中，加甲醇150mL，超聲處理30min，離心，濾出上清液，沉淀再加入甲醇150ml，同上超聲、離心重復(fù)操作2次，分別合并含齊墩果酸和刺囊酸的三次超聲濾液，回收甲醇，蒸干，即分別得到制備的齊墩果酸和刺囊酸(本制備方法可根據(jù)制備量的要求，采用上述方法可同時點于多塊薄層層析板上進(jìn)行分離制備)。本發(fā)明的從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，以豬牙皂為原料，經(jīng)醇提取、水解和制備型薄層分離制備齊墩果酸和刺囊酸，并進(jìn)行了三批兩種成分的制備試驗，通過對制備的兩種成分的分析表明，采用本法制備的齊墩果酸和刺囊酸，其純度與兩種對照品基本相當(dāng)，達(dá)到了中藥化學(xué)對照品的要求。本制備方法與目前齊墩果酸和刺囊酸的制備方法相比，具有無需貴重儀器，簡便易行，成本低，且能達(dá)到化學(xué)對照品的質(zhì)量要求等優(yōu)點，是同時制備兩種中藥化學(xué)對照品的較理想的方法。經(jīng)查新有關(guān)本制備方法的研究未見文獻(xiàn)報道。


圖1:齊墩果酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。圖2:刺囊酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。圖3:水解得結(jié)晶的TLC圖。圖4:薄層制備示意全部顯色圖。圖5:薄層制備僅兩側(cè)顯色示意圖。圖6:薄層制備的齊墩果酸和刺囊酸的TLC圖，其中，條帶1:刺囊酸對照；條帶2:TLC制備的刺囊酸；條帶3:齊墩果酸對照；條帶4 =TLC制備的齊墩果酸。圖7-1:刺囊酸對照品HPLC圖。圖7-2:齊墩果酸對照品HPLC圖。圖7-3:薄層制備的刺囊酸HPLC圖。圖7-4:薄層制備的齊墩果酸HPLC圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實施例1從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸步驟如下:(I)豬牙皂總皂苷提取 物的提取:稱取豬牙皂100g，用600mL75%的乙醇回流提取2h,濾過，殘渣再用600mL75%乙醇提取2次，每次lh，濾過，合并3次醇提液，回收乙醇，濃縮成浸膏，60 65°C減壓干燥，粉碎，得豬牙皂總皂苷提取物，備用，三批總皂苷提取物制備結(jié)果見表I。表I三批總皂苷提取物制備結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:步驟如下: (1)豬牙皂總皂苷提取物的提取:稱取豬牙皂100g，用75%的乙醇回流提取2h，濾過，殘渣再用75%乙醇提取2次，每次lh，濾過，合并3次醇提液，回收乙醇,濃縮成浸膏,60 65°C減壓干燥，粉碎，得豬牙皂總皂苷提取物，備用； (2)豬牙皂總皂苷的水解:取豬牙皂總皂苷提取物10g，加硅藻土3 5g，拌勻，置索氏提取器中，加甲醇，回流3小時，放冷，蒸干，殘渣加稀鹽酸使溶解，轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，水浴加熱水解2h，放冷，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，合并氯仿提取液，用水洗滌2次，棄去水液，回收氯仿，蒸干，殘渣用甲醇溶解，O 4°C放置，有白色結(jié)晶析出，濾出結(jié)晶，母液濃縮至10ml，同上放置，又有結(jié)晶析出，再濾出結(jié)晶，將兩次結(jié)晶合并，用甲醇洗滌結(jié)晶，55 60 °C干燥,得干燥結(jié)晶； (3)齊墩果酸及刺囊酸的薄層制備: ①薄層供試品溶液的制備:取上述干燥結(jié)晶，用甲醇制成濃度為26mg/ml的溶液，作為薄層供試品溶液； ②點樣及制備:用微型點樣器吸取樣品液，以條狀或點狀形式連續(xù)點于多塊薄層板上，置于盛有展開劑的層析缸中，取出，晾干，薄層板兩側(cè)顯色，將層析板齊墩果酸和刺囊酸顯色斑點對應(yīng)的中間未顯色區(qū)域分別刮下，將刮下的齊墩果酸和刺囊酸硅膠粉分別置于錐形瓶中，加甲醇，超聲處理30min，離心，濾出上清液，沉淀再加入甲醇，同上超聲、離心重復(fù)操作2次，合并三次超聲濾液，回收甲醇，蒸干，即分別得到制備的齊墩果酸和刺囊酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步驟(2)中，稀鹽酸是指質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為10%的鹽酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步驟(2) 中，3次的氯仿用量依次為lOOmL，100mL，60mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步驟(3)中，薄層層析用的薄層板為厚度為0.6mm的硅膠G薄層板。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步驟(3)中，展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述展開劑環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸中，環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸三者的體積比為15:4:2。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步驟(3)中，顯色劑為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為10%的硫酸乙醇，顯色方式為:電吹風(fēng)加熱至顯色清晰。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，其特征在于:所述步驟(3)中，薄層層析的展距為15cm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從豬牙皂中同時制備齊墩果酸和刺囊酸的方法，步驟如下(1)豬牙皂總皂苷提取物的提取；(2)豬牙皂總皂苷的水解；(3)齊墩果酸及刺囊酸的薄層制備。本方法以豬牙皂為原料，經(jīng)醇提取、水解和制備型薄層分離可同時制備齊墩果酸和刺囊酸。對制備的兩種成分，經(jīng)與中國藥品生物制品檢定所提供的齊墩果酸和刺囊酸對照品對比分析和含量測定，表明采用本法制備齊墩果酸的含量為97.8%，刺囊酸的含量為98.2%，其純度與兩種對照品基本相當(dāng)，達(dá)到了中藥化學(xué)對照品的質(zhì)量要求。本方法無需貴重儀器，簡便易行，成本低，且能達(dá)到中藥化學(xué)對照品的質(zhì)量要求。
文檔編號C07J63/00GK103145790SQ201310087260
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月18日
發(fā)明者趙渤年, 張新軍, 劉青, 梁瑞雪, 賈元印 申請人:山東省中醫(yī)藥研究院