專利名稱：一種從下垂長葉暗羅中提取考拉維酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及ー種從下垂長葉暗羅中提取考拉維酸的方法。
背景技術(shù)：
考拉維酸是ー種ニ萜類化合物，分子式為C2tlH32O2,分子量為304. 47，主要存在于番荔枝科(Annonaceae)下垂長葉暗羅的莖皮中，資源豐富。藥理研究表明，考拉維酸具有細(xì)胞毒活性，對(duì)Crown gall tumors有顯著抑制作用，對(duì)三種人型腫瘤細(xì)胞株(A-549肺癌、MCF-7乳癌、HT-29結(jié)腸腺癌)有明顯的細(xì)胞毒活性；具有抗菌活性，對(duì)革蘭陽性菌(枯草桿菌和金黃色葡萄球菌)有強(qiáng)的抑制作用；具有拒食活性。在1%濃度時(shí)，對(duì)地下白蟻有強(qiáng)的拒食活性。目前，對(duì)考拉維酸的研究較少，經(jīng)檢索，尚未發(fā)現(xiàn)大量制備考拉維酸的エ業(yè)化方法的公開報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述情況，本發(fā)明的目的是提供ー種從下垂長葉暗羅中提取考拉維酸的方法。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
ー種從下垂長葉暗羅中提取考拉維酸的方法，其特征在于包括以下步驟將下垂長葉暗羅莖皮粉碎，投入萃取釜，通入處于超臨界狀態(tài)的CO2進(jìn)行萃取，獲得油狀萃取物，將萃取物用こ醚萃取多次，所得萃取液濃縮后得こ醚浸膏，將こ醚浸膏加入氧化鎂柱層析，正己烷-こ醚梯度洗脫，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥即得考拉維酸粗品，用制備高效液相分離得到考拉維酸，純度達(dá)98%以上。所述超臨界0)2萃取溫度為35_60°C，萃取壓カ為20_35MPa，時(shí)間為l_3h，通入CO2流量為15-22L/h，以こ醇為夾帶劑，夾帶劑的用量為藥材重量的5-15%。所述氧化鎂柱徑高比為1:8_15，正己烷-こ醚混合溶劑體積比為1:1-7。所述高效液相色潛法流動(dòng)相為甲醇-O. 8%醋酸-四氫呋喃，體積比為480-510:100-120:1，流速 20_50ml/min，檢測波長 237nm。本發(fā)明的有益效果是采用超臨界CO2萃取，可實(shí)現(xiàn)連續(xù)提取，同時(shí)濃縮提取液，既節(jié)約溶劑，又提高了萃取率；采用反相高效液相色譜法精制純化，純度高達(dá)98%以上，所得產(chǎn)品可作為對(duì)照品使用，同時(shí)可進(jìn)行大量制備；本發(fā)明エ藝穩(wěn)定，可用于エ業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)ー步說明。實(shí)施例I :
將下垂長葉暗羅莖皮粉碎，稱取lOOOg，投入萃取釜中，通入處于超臨界狀態(tài)的CO2進(jìn)行萃取，設(shè)定萃取釜參數(shù)萃取溫度38°C，壓カ為20MPa，通入CO2流量為18L/h，待萃取罐內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定后，通入50mlこ醇作為夾帶劑參與萃取，萃取2h后從分離釜中收集油狀萃取物，將萃取物用こ醚反復(fù)萃取4次，合并こ醚萃取液，濃縮后得到こ醚浸膏。將こ醚浸膏與適量氧化鎂混合拌勻，用浸膏5倍量的氧化鎂裝柱(柱徑高比1:10)，將拌樣氧化鎂置于柱頂，用正己烷-こ醚按體積比I: I、1: 3、1:7進(jìn)行梯度洗脫，薄層跟蹤監(jiān)測，收集考拉維酸的流分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥得考拉維酸粗品。將考拉維酸粗品用甲醇溶解，O. 45 μ m微孔濾膜濾過，經(jīng)制備高效液相色譜分離，流動(dòng)相為甲醇-O. 8%醋酸-四氫呋喃，體積比為510:120:1，流速25ml/min,以紫外檢測器檢測指導(dǎo)產(chǎn)品收集，檢測波長237nm，連續(xù)進(jìn)樣，收集含有考拉維酸的高純度流分，濃縮干燥得產(chǎn)品3. lg，含量為98. 6%。實(shí)施例2:
將下垂長葉暗羅莖皮粉碎，稱取lOOOg，投入萃取釜中，通入處于超臨界狀態(tài)的CO2進(jìn)行萃取，設(shè)定萃取釜參數(shù)萃取溫度60°c，壓カ為28MPa，通入CO2流量為15L/h，待萃取罐內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定后，通入150mlこ醇作為夾帶劑參與萃取，萃取2h后從分離釜中收集油狀萃取物，將萃取物用こ醚反復(fù)萃取4次，合并こ醚萃取液，濃縮后得到こ醚浸膏。將こ醚浸膏與適量氧化鎂混合拌勻，用浸膏5倍量的氧化鎂裝柱(柱徑高比1:8)，將拌樣氧化鎂置于柱頂，用正己烷-こ醚按體積比I: I、1:3. 5、1:7進(jìn)行梯度洗脫，薄層跟蹤監(jiān)測，收集考拉維酸的流分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥得考拉維酸粗品。將考拉維酸粗品用甲醇溶解，O. 45 μ m微孔濾膜濾過，經(jīng)制備高效液相色譜分離，流動(dòng)相為甲醇-O. 8%醋酸-四氫呋喃，體積比為490:120:1，流速20ml/min,以紫外檢測器檢測指導(dǎo)產(chǎn)品收集，檢測波長237nm，連續(xù)進(jìn)樣，收集含有考拉維酸的高純度流分，濃縮干燥得產(chǎn)品2. 7g，含量為98. 7%。實(shí)施例3:
將下垂長葉暗羅莖皮粉碎，稱取lOOOg，投入萃取釜中，通入處于超臨界狀態(tài)的CO2進(jìn)行萃取，設(shè)定萃取釜參數(shù)萃取溫度40°c，壓カ為35MPa，通入CO2流量為20L/h，待萃取罐內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定后，通入IOOmlこ醇作為夾帶劑參與萃取，萃取Ih后從分離釜中收集油狀萃取物，將萃取物用こ醚反復(fù)萃取3次，合并こ醚萃取液，濃縮后得到こ醚浸膏。將こ醚浸膏與適量氧化鎂混合拌勻，用浸膏5倍量的氧化鎂裝柱(柱徑高比1:15)，將拌樣氧化鎂置于柱頂，用正己烷-こ醚按體積比I: I、1: 3、1:7進(jìn)行梯度洗脫，薄層跟蹤監(jiān)測，收集考拉維酸的流分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥得考拉維酸粗品。將考拉維酸粗品用甲醇溶解，0. 45 μ m微孔濾膜濾過，經(jīng)制備高效液相色譜分離，流動(dòng)相為甲醇-0. 8%醋酸-四氫呋喃，體積比為500:110:1，流速50ml/min,以紫外檢測器檢測指導(dǎo)產(chǎn)品收集，檢測波長237nm，連續(xù)進(jìn)樣，收集含有考拉維酸的高純度流分，濃縮干燥得產(chǎn)品2. 5g，含量為98. 4%。實(shí)施例4:
將下垂長葉暗羅莖皮粉碎，稱取lOOOg，投入萃取釜中，通入處于超臨界狀態(tài)的CO2進(jìn)行萃取，設(shè)定萃取釜參數(shù)萃取溫度50°c，壓カ為25MPa，通入CO2流量為18L/h，待萃取罐內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定后，通入120mlこ醇作為夾帶劑參與萃取，萃取3h后從分離釜中收集油狀萃取物，將萃取物用こ醚反復(fù)萃取4次，合并こ醚萃取液，濃縮后得到こ醚浸膏。將こ醚浸膏與適量氧化鎂混合拌勻，用浸膏5倍量的氧化鎂裝柱(柱徑高比1:12)，將拌樣氧化鎂置于柱頂，用正己烷-こ醚按體積比I: I、1: 3、1:7進(jìn)行梯度洗脫，薄層跟蹤監(jiān)測，收集考拉維酸的流分，旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥得考拉維酸粗品。將考拉維酸粗品用甲醇溶解，0. 45 μ m微孔濾膜濾過，經(jīng)制備高效液相色譜分離，流動(dòng)相為甲醇-0. 8%醋酸-四氫呋喃，體積比為510:120: 1，流速40ml/min,以紫外檢測器檢測指導(dǎo)產(chǎn)品收集，檢測波長237nm，連續(xù)進(jìn)樣，收集含有考拉維酸的高純度流分，濃縮干燥得產(chǎn)品3. Og，含量為98. 2%。 實(shí)施例5:
將下垂長葉暗羅莖皮粉碎，稱取lOOOg，投入萃取釜中，通入處于超臨界狀態(tài)的CO2進(jìn)行萃取，設(shè)定萃取釜參數(shù)萃取溫度35°C，壓カ為23MPa，通入CO2流量為22L/h，待萃取罐內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定后，通入120mlこ醇作為夾帶劑參與萃取，萃取2h后從分離釜中收集油狀萃取物，將萃取物用こ醚反復(fù)萃取5次，合并こ醚萃取液，濃縮后得到こ醚浸膏。將こ醚浸膏與適量氧化鎂混合拌勻，用浸膏5倍量的氧化鎂裝柱(柱徑高比1:10) ，將拌樣氧化鎂置于柱頂，用正己烷-こ醚按體積比I: I、1: 4、1:7進(jìn)行梯度洗脫，薄層跟蹤監(jiān)測，收集考拉維酸的流分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥得考拉維酸粗品。將考拉維酸粗品用甲醇溶解，O. 45 μ m微孔濾膜濾過，經(jīng)制備高效液相色譜分離，流動(dòng)相為甲醇-O. 8%醋酸-四氫呋喃，體積比為480:100:1，流速35ml/min,以紫外檢測器檢測指導(dǎo)產(chǎn)品收集，檢測波長237nm，連續(xù)進(jìn)樣，收集含有考拉維酸的高純度流分，濃縮干燥得產(chǎn)品2. 9g，含量為98. 8%。
權(quán)利要求
1.ー種從下垂長葉暗羅中提取考拉維酸的方法，其特征在于包括以下步驟將下垂長葉暗羅莖皮粉碎，投入萃取釜，通入處于超臨界狀態(tài)的CO2進(jìn)行萃取，獲得油狀萃取物，將萃取物用こ醚萃取多次，所得萃取液濃縮后得こ醚浸膏，將こ醚浸膏加入氧化鎂柱層析，正己烷-こ醚梯度洗脫，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥即得考拉維酸粗品，用制備高效液相分離得到考拉維酸，純度達(dá)98%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述超臨界CO2萃取溫度為35-60°C，萃取壓カ為20-35MPa，時(shí)間為l_3h，通入CO2流量為15_22L/h，以こ醇為夾帶劑，夾帶劑的用量為藥材重量的5-15%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述氧化鎂柱徑高比為1:8-15，正己烷-こ醚混合溶劑體積比為1:1-7。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述高效液相色譜法流動(dòng)相為甲醇-O.8%醋酸-四氫呋喃，體積比為480-510:100-120:1，流速20_50ml/min，檢測波長237nm。
全文摘要
本發(fā)明提供一種從下垂長葉暗羅中提取考拉維酸的方法，包括以下步驟將下垂長葉暗羅莖皮粉碎，投入萃取釜，通入處于超臨界狀態(tài)的CO2進(jìn)行萃取，獲得油狀萃取物，將萃取物用乙醚萃取多次，所得萃取液濃縮后得乙醚浸膏，將乙醚浸膏加入氧化鎂柱層析，正己烷-乙醚梯度洗脫，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥即得考拉維酸粗品，用制備高效液相分離得到考拉維酸。本發(fā)明工藝簡單，得率高，產(chǎn)品質(zhì)量好、純度高。
文檔編號(hào)C07C51/42GK102690190SQ20121018456
公開日2012年9月26日 申請(qǐng)日期2012年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月7日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司