專利名稱：一種水黃皮素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物體內(nèi)提取制備活性成分的方法，具體涉及一種水黃皮素的制備方法。
背景技術(shù)：
水黃皮素，又稱水黃皮次素。針狀結(jié)晶，溶于甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚，幾乎不溶于石油醚、稀無機(jī)酸。水黃皮素具有抗結(jié)核桿菌的作用，可用于白癜風(fēng)的治療。水羅傘為豆科植物干豆花的干燥根，具有散瘀消腫、止痛寧神、益智等功效，主要用于治療跌打腫痛、腎虛腰痛、智力低下、小兒疳積、骨折、病后及產(chǎn)后虛弱等癥。本品資源十分豐富，主產(chǎn)與廣西、廣東。其主要含有黃酮類化合物等活性成分，其中水黃皮素的含量高達(dá)0. 45%。水黃皮素提取方法公開較少，尤其高含量的水黃皮素制備方法。如中國專利(申請?zhí)枮?00710050173. 4) “水羅傘總黃酮的提取方法”，該專利采用超臨界二氧化碳流體萃取方法，乙醇作攜帶劑，從水羅傘藥材中提取含水羅傘黃酮化合物的萃取物，再用回流提取的方法從萃取物中提取水羅傘總黃酮。該法只是得到低含量的水黃皮素。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種水黃皮素的制備方法，工藝專屬性高，所得產(chǎn)品含量高。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的—種水黃皮素的制備方法，其特征在于包括以下步驟將水羅傘干燥藥材粉碎，加入適量蒸餾水和生物酶自然酶解，得酶解原料，將酶解原料放入提取設(shè)備中，以85%的乙醇溶液為溶媒，進(jìn)行連續(xù)逆流提取，提取溫度50-75°C，提取時間為l_2h，得到提取液，濃縮至無醇味，通過大孔樹脂柱吸附，先用蒸餾水洗脫至下柱液無色，再用70%的乙醇溶液洗脫， 收集洗脫液，濃縮蒸干得到水黃皮素粗品，采用制備高效液相色譜進(jìn)行分離，以40-45%乙腈水溶液(含0. 06%甲酸)為流動相，檢測波長為260nm，收集流分濃縮干燥得到水黃皮
ο所述生物酶的用量為0. 5-0. 8%。所述85%的乙醇溶液得用量與藥材重量比為12-18 1。所述大孔樹脂型號可選AB-8、LSA-21、D-101、HPD-400等。本發(fā)明的提取工藝采用酶解法和連續(xù)逆流提取法相結(jié)合，可以破壞植物纖維，提取率高，周期短，能耗低；通過大孔樹脂進(jìn)行純化，除雜效果好，且在制備高液相色譜前先用大孔樹脂除雜，可延長色譜柱的使用壽命；以制備型高液相為分離手段，可以獲得純度在 98%以上的水黃皮素，且單針分離時間短，非常適合大批量的制備，可實(shí)現(xiàn)批量制備。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 將水羅傘干燥藥材粉碎，取1kg，加入適量蒸餾水和5g生物酶自然酶解，得酶解原料，將酶解原料放入提取設(shè)備中，加入12kg85 %的乙醇溶液為溶媒，進(jìn)行連續(xù)逆流提取，提取溫度60°C，提取時間為2h，得到提取液，提取液濃縮至無醇味，通過AB-8大孔樹脂柱吸附，先用蒸餾水洗脫至下柱液無色，再用4L 70%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮蒸干得到水黃皮素粗品；用85%乙醇溶解，配成濃度為50mg/ml的溶液，經(jīng)0. 45 μ m微濾膜過濾， 制備型高液相色譜制備柱以C18鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長為15cm、直徑為7cm，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為25ml，以40%乙腈水溶液(含0. 06%甲酸)為流動相，控制流動相流速為50ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為260nm，收集含有水黃皮素的高純度流分，濃縮至干，得含量為98.的水黃皮素3. 2g。實(shí)施例2:將水羅傘干燥藥材粉碎，取1kg，加入適量蒸餾水和5g生物酶自然酶解，得酶解原料，將酶解原料放入提取設(shè)備中，加入18kg85 %的乙醇溶液為溶媒，進(jìn)行連續(xù)逆流提取，提取溫度65°C，提取時間為lh，得到提取液，提取液濃縮至無醇味，通過LSA-21大孔樹脂柱吸附，先用蒸餾水洗脫至下柱液無色，再用7L 70%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮蒸干得到水黃皮素粗品；用85%乙醇溶解，配成濃度為80mg/ml的溶液，經(jīng)0. 45 μ m微濾膜過濾， 制備型高液相色譜制備柱以C18鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長為15cm、直徑為7cm，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為25ml，以40%乙腈水溶液(含0. 06%甲酸)為流動相，控制流動相流速為lOOml/min，紫外在線檢測，檢測波長為260nm，收集含有水黃皮素的高純度流分，濃縮至干，得含量為98. 44%的水黃皮素3. Og。實(shí)施例3:將水羅傘干燥藥材粉碎，取1kg，加入適量蒸餾水和5g生物酶自然酶解，得酶解原料，將酶解原料放入提取設(shè)備中，加入15kg 85%的乙醇溶液為溶媒，進(jìn)行連續(xù)逆流提取，提取溫度55°C，提取時間為1. 5h,得到提取液，提取液濃縮至無醇味，通過D-IOl大孔樹脂柱吸附，先用蒸餾水洗脫至下柱液無色，再用5L 70%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮蒸干得到水黃皮素粗品；用85%乙醇溶解，配成濃度為100mg/ml的溶液，經(jīng)0. 45 μ m微濾膜過濾，制備型高液相色譜制備柱以C18鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長為45cm、直徑為 12cm，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為25ml，以45%乙腈水溶液(含0.06%甲酸)為流動相，控制流動相流速為150ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為260nm，收集含有水黃皮素的高純度流分，濃縮至干，得含量為98. 50%的水黃皮素2. 9g。實(shí)施例4:將水羅傘干燥藥材粉碎，取1kg，加入適量蒸餾水和5g生物酶自然酶解，得酶解原料，將酶解原料放入提取設(shè)備中，加入16kg85 %的乙醇溶液為溶媒，進(jìn)行連續(xù)逆流提取，提取溫度50°C，提取時間為lh，得到提取液，提取液濃縮至無醇味，通過HPD-400大孔樹脂柱吸附，先用蒸餾水洗脫至下柱液無色，再用6L 70%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮蒸干得到水黃皮素粗品；用85%乙醇溶解，配成濃度為50mg/ml的溶液，經(jīng)0. 45 μ m微濾膜過濾，制備型高液相色譜制備柱以C18鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長為25cm、直徑為 10cm，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為25ml，以40%乙腈水溶液(含0.06%甲酸)為流動相，控制流動相流速為50ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為260nm，收集含有水黃皮素的高純度流分，濃縮至干，得含量為98. 58%的水黃皮素3. 4g。實(shí)施例5:將水羅傘干燥藥材粉碎，取1kg，加入適量蒸餾水和5g生物酶自然酶解，得酶解原料，將酶解原料放入提取設(shè)備中，加入18kg85 %的乙醇溶液為溶媒，進(jìn)行連續(xù)逆流提取，提取溫度75°C，提取時間為池，得到提取液，提取液濃縮至無醇味，通過HPD-400大孔樹脂柱吸附，先用蒸餾水洗脫至下柱液無色，再用7L 70%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮蒸干得到水黃皮素粗品；用85%乙醇溶解，配成濃度為50mg/ml的溶液，經(jīng)0. 45 μ m微濾膜過濾，制備型高液相色譜制備柱以C18鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長為55cm、直徑為 12cm，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為25ml，以45%乙腈水溶液(含0.06%甲酸)為流動相，控制流動相流速為250ml/min，紫外在線檢測，檢測波長為260nm，收集含有水黃皮素的高純度流分，濃縮至干，得含量為98. 64%的水黃皮素3. 3g。
權(quán)利要求
1.一種水黃皮素的制備方法，其特征在于包括以下步驟將水羅傘干燥藥材粉碎，加入適量蒸餾水和生物酶自然酶解，得酶解原料，將酶解原料放入提取設(shè)備中，以85%的乙醇溶液為溶媒，進(jìn)行連續(xù)逆流提取，提取溫度50-75°C，提取時間為l_2h，得到提取液，濃縮至無醇味，通過大孔樹脂柱吸附，先用蒸餾水洗脫至下柱液無色，再用70%的乙醇溶液洗脫， 收集洗脫液，濃縮蒸干得到水黃皮素粗品，采用制備高效液相色譜分離得到水黃皮素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水黃皮素的制備方法，其特征在于所述生物酶的用量為 0. 5-0. 8%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種水黃皮素的制備方法，其特征在于所述85%的乙醇溶液得用量與藥材重量比為12-18 1。
4.利要求1所述的一種水黃皮素的制備方法，其特征在于所述大孔樹脂型號可選 AB-8, LSA-2 U D-10 U HPD-400 等。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種水黃皮素的制備方法，包括以下步驟將水羅傘干燥藥材粉碎，加入適量的蒸餾水和生物酶自然酶解，得到酶解原料，以85％乙醇溶液為溶媒，進(jìn)行連續(xù)逆流提取，提取液濃縮至無醇味，上大孔樹脂吸附，洗脫液濃縮干燥得到水黃皮素粗品，采用制備高效液相分離得到水黃皮素。本發(fā)明工藝穩(wěn)定、周期短、得率高、產(chǎn)品質(zhì)量好，純度可達(dá)98％以上。
文檔編號C07D493/04GK102241686SQ201110117959
公開日2011年11月16日 申請日期2011年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月6日
發(fā)明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司