專(zhuān)利名稱(chēng)：治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及分子生物學(xué)和生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及治療病理的病癥如癌癥的組合療法。背景癌癥是對(duì)人類(lèi)健康而言最致命的威脅之一。僅在美國(guó)，癌癥的每年新發(fā)患者為近 1300000，并且是僅次于心血管病的第二號(hào)致死原因，在所有死亡中約占1/4。實(shí)體瘤導(dǎo)致那些死亡的大部分。盡管在某些癌癥的醫(yī)學(xué)治療中有明顯的進(jìn)展，所有癌癥的總體5年生存率在過(guò)去的20年中僅僅提高了約10%。癌癥，或惡性腫瘤，以不受控制的方式轉(zhuǎn)移并快速生長(zhǎng)，導(dǎo)致及時(shí)檢出和治療非常困難。HGF是間質(zhì)衍生的多效性因子，對(duì)許多不同細(xì)胞類(lèi)型具有促有絲分裂、促運(yùn)動(dòng)和促形態(tài)發(fā)生活性。HGF作用是通過(guò)特定的酪氨酸激酶c-met介導(dǎo)的，而且在多種腫瘤中經(jīng)常觀察到異常的HGF和c-met表達(dá)。參見(jiàn)例如Maulik等，Cytokine & Growth Factor Reviews (細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子綜述)(2002)，13 :41-59 ；DaniIkovitch-Miagkova 和 Zbar， J. Clin. Invest.(臨床研究雜志)(2002),109(7) :863_867。在腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中牽涉HGF/ c-Met信號(hào)傳導(dǎo)途徑的調(diào)控。參見(jiàn)例如Trusgolino和Comoglio，Nature Rev.(自然綜述) (2002) ,2 :289-300)。HGF結(jié)合Met受體酪氨酸激酶(RTK)的胞外域并調(diào)控多種多樣的生物學(xué)過(guò)程，諸如細(xì)胞分散、增殖和存活。HGF-Met信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于正常胚胎發(fā)育而言是至關(guān)重要的，尤其是在肌肉祖細(xì)胞遷移及肝和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中(Bladt等，Nature (自然)(1995)，376，768-771.； Hamanoue 等，F(xiàn)aseb J (2000), 14,399-406 ；Maina 等，Cell(細(xì)胞)(1996)，87，531-542 ； Schmidt 等，Nature (自然)(1995)，373，699-702 ；Uehara 等，Nature (自然)(1995)，373， 702-705)。敲除Met和HGF的小鼠的發(fā)育表型非常相似，這說(shuō)明HGF是Met受體的關(guān)聯(lián)配體(Schmidt等，1995，同上Uehara等，1995，同上)。HGF-Met還在肝再生、血管發(fā)生和傷口愈合中發(fā)揮作用(Bussolino 等，J Cell Biol (1992)，119，6四_641 ;Matsumoto 和 Nakamura, Exs (1993)，65，225-249 ；Nusrat 等，J Clin Invest (臨床研究雜志)(1994)93， 2056-206 。Met受體前體經(jīng)蛋白酶剪切切割成由二硫鍵連接的胞外α亞基和跨膜β 亞基(Tempest等，Br J Cancer (英國(guó)癌癥雜志)(1988)，58，3-7)。β亞基包含胞質(zhì)激酶結(jié)構(gòu)域，而且在C末端包含多底物?？课稽c(diǎn)，在此處銜接物(adapter)蛋白結(jié)合并起動(dòng)信號(hào)傳導(dǎo)(Bardelli 等，Oncogene (癌基因)(1997)，15，3103-3111 ；Nguyen 等，J Biol Chem(生物化學(xué)雜志)(1997)，272，20811-20819 ；Pelicci 等，Oncogene (癌基因)(1995)， 10,1631-1638 ；Ponzetto 等，Cell (細(xì)胞)(1994)，77，261-271 ；Weidner 等，Nature (自然)(1996)，384，173-176)。HGF結(jié)合后，Met激活，分別經(jīng)由Gabl和Grb2/Sos介導(dǎo)的PI3激酶和Ras/MAPK激活而導(dǎo)致了酪氨酸磷酸化和下游信號(hào)傳導(dǎo)，它驅(qū)動(dòng)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和增殖(Furge 等，Oncogene (癌基因 M2000)，19,5582-5589 ;Hartmann 等，J Biol Chem(生物化學(xué)雜志)(1994)，269，21936-21939 ;Ponzetto 等，J Biol Chem(生物化學(xué)雜志)(1996)，271， 14119-14123 ；Royal 和 Park，J Biol Chem (生物化學(xué)雜志)(1995)，270，27780-27787)。據(jù)顯示，Met可在經(jīng)致癌原處理的骨肉瘤細(xì)胞系中轉(zhuǎn)化(Cooper等，Nature (自然) (1984)，311,29-33 ；Park 等，Cell (細(xì)胞)(1986)，45，895-904)。已在多種人癌癥中觀察到了 Met的過(guò)表達(dá)或基因擴(kuò)增。例如，Met蛋白在結(jié)腸直腸癌中過(guò)表達(dá)至少5倍，且據(jù)報(bào)道在肝轉(zhuǎn)移中有基因擴(kuò)增(Di Renzo等，Clin Cancer Res (臨床癌癥研究)(1995)，1，147-154 ； Liu等，Oncogene (癌基因)(1992)，7，181-185)。據(jù)報(bào)道，Met蛋白還在口腔鱗狀細(xì)胞癌、 肝細(xì)胞癌、腎細(xì)胞癌、乳腺癌和肺癌中過(guò)表達(dá)(Jin等，Cancer (癌癥)(1997)，79，749-760 ； Morello 等，J Cell Physiol (細(xì)胞生理學(xué)雜志 M2001)，189，285-290 ;Natali 等，Int J CanceH 國(guó)際癌癥雜志)(1996)，69，212-217 ;01ivero 等，Br J Cancer (英國(guó)癌癥雜志) (1996)，74，1862-1868 ；Suzuki 等，Br J Cancer (英國(guó)癌癥雜志)(1996)，74，1862-1868)。 此外，在肝細(xì)胞癌、胃癌和結(jié)腸直腸癌中觀察到mRNA的過(guò)表(Boix等，!fepat0l0gy(肝臟病學(xué))(1994)，19，88-91 ；Kuniyasu 等，Int J Cancer (國(guó)際癌癥雜志)(1993)，55，72-75 ；Liu 等，Oncogene (癌基因)(1"2)，7,181-185)。在腎乳頭狀癌中發(fā)現(xiàn)了 Met激酶結(jié)構(gòu)域中的許多突變，它們導(dǎo)致組成性受體激活(Olivero 等，Int J Cancer (國(guó)際癌癥雜志)(1999)，82，640-643 ；Schmidt 等， Nat Genet (自然遺傳)(1997)，16，68-73 ；Schmidt 等，Oncogene (癌基因)(1999)，18， 2343-2350)。這些激活突變?cè)斐山M成性Met酪氨酸磷酸化，并導(dǎo)致MAPK激活、病灶形成和腫瘤發(fā)生(Jeffers等，Natl Acad Sci U S A(美國(guó)科學(xué)院院刊)(1997)，94， 11445-11450)。此外，這些突變?cè)鰪?qiáng)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和侵入(Giordano等，F(xiàn)aseb J(2000), 14, 399-406 ；Lorenzato 等，Cancer Res (癌癥研究)Q002)，62，7025-7030)。轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的 HGF 依賴(lài)性Met激活介導(dǎo)運(yùn)動(dòng)、分散和遷移的增加，最終導(dǎo)致侵入性腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移(Jeffers 等，Mol Cell Biol (分子細(xì)胞生物學(xué))(1996)，16，1115-1125 ；Meiners 等，Oncogene (癌基因)(1998)，16,9-20)。Met已顯示出與驅(qū)動(dòng)受體激活、轉(zhuǎn)化和侵入的其它蛋白質(zhì)相互作用。在腫瘤細(xì)胞中，據(jù)報(bào)道，Met與α6β4整聯(lián)蛋白(諸如層粘連蛋白的胞外基質(zhì)(ECM)組分的受體)相互作用，以促進(jìn)HGF依賴(lài)性的侵入生長(zhǎng)(Trusolino等，Cell (細(xì)胞)(2001)，107，643-654)。 此外，Met胞外域已顯示出與腦信號(hào)蛋白(semaphorin)家族的成員叢蛋白Bl相互作用，以增強(qiáng)侵入生長(zhǎng)(Giordano等，Nat Cell Biol (自然細(xì)胞生物學(xué))(2002)，4，720-724)。而且，已知牽涉腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的⑶44v6據(jù)報(bào)道也與Met和HGF形成復(fù)合物并導(dǎo)致Met受體激活(Orian-Rousseau 等，Genes Dev (基因和發(fā)育)Q002)，16，3074-3086)。Met是受體酪氨酸激酶(RTK)亞家族的成員，該家族包括Ron和ka(Maulik等， Cytokine Growth Factor Rev (細(xì)胞因子生長(zhǎng)因子綜述)(2002)，13，41-59)。Met 胞外域的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)表明它與腦信號(hào)蛋白和叢蛋白同源。Met的N末端包含約500個(gè)氨基酸的義脆結(jié)構(gòu)域，其在所有腦信號(hào)蛋白和叢蛋白中是保守的。腦信號(hào)蛋白和叢蛋白屬于一個(gè)分泌的和膜結(jié)合的蛋白質(zhì)大家族，首先因其在神經(jīng)發(fā)育中的作用而被記載(Van Vactor和Lorenz，Curr Bio (現(xiàn)代生物學(xué))(1999)，19，R201-204)。不過(guò)，近來(lái)將腦信號(hào)蛋白的過(guò)表達(dá)與腫瘤的侵入和轉(zhuǎn)移聯(lián)系起來(lái)了。在叢蛋白、腦信號(hào)蛋白和整聯(lián)蛋白中發(fā)現(xiàn)的富含半胱氨酸PSI 結(jié)構(gòu)域(也稱(chēng)為Met相關(guān)序列結(jié)構(gòu)域)鄰近kma結(jié)構(gòu)域，隨后是4個(gè)IPT重復(fù)片段，其是在叢蛋白和轉(zhuǎn)錄因子中發(fā)現(xiàn)的免疫球蛋白樣區(qū)域。近來(lái)的研究表明Met kma結(jié)構(gòu)域足以使HGF和肝素結(jié)合(Gherardi等，Proc Natl Acad Sci U S A (美國(guó)科學(xué)院院刊)(2003)， 100(21) :12039-44)。如上所述，Met受體酪氨酸激酶由其關(guān)聯(lián)配體HGF激活，而且受體磷酸化激活下游 MAPK、PI-3 激酶和 PLC-γ 途徑(L. Trusolino 和 P. M. Comoglio，Nat Rev Cancer (自然綜述癌癥)2，289Q002) ；C. Birchmeier 等，Nat Rev Mol Cell Biol (自然綜述分子細(xì)胞生物學(xué))4,915 000 )。激酶結(jié)構(gòu)域內(nèi)的Y1234/Y1235磷酸化對(duì)于Met激酶激活來(lái)說(shuō)是關(guān)鍵的，而多底物?？课稽c(diǎn)中的Y1349和Y1356對(duì)于結(jié)合src同源體-2 (SH2)、磷酸酪氨酸結(jié)合(PTB) JPMet結(jié)合結(jié)構(gòu)域(MBD)蛋白來(lái)說(shuō)是重要的(C. Ponzetto等，Cell (細(xì)胞)77， 261(1994) ；K. M. Weidner 等，Nature (自然)384，173 (1996) ；G. Pelicci 等，Oncogene (癌基因)10，1631 (1995))，用以介導(dǎo)下游信號(hào)傳導(dǎo)途徑的激活。另一個(gè)近膜磷酸化位點(diǎn)Y1003 已經(jīng)很好地表征了其與Cbl E3連接酶的酪氨酸激酶結(jié)合(TKB)結(jié)構(gòu)域的結(jié)合(P. Peschard 等，Mol Cell (分子細(xì)胞)8，995(2001) ；P. Peschard, N. Ishiyama, T.Lin，S. Lipkowitz, Μ. Park, J Biol Chem (生物化學(xué)雜志)279，四565 (2004))。據(jù)報(bào)道，Cbl的結(jié)合驅(qū)動(dòng)吞蛋白(endophilin)介導(dǎo)的受體內(nèi)吞、泛素化及隨后的受體降解(A. Petrelli等，Nature (自然)416,187 0002))。該受體下調(diào)的機(jī)制以前在也具有相似Cbl結(jié)合位點(diǎn)的EGFR家族中有記載(K. Shtiegman，Y. Yarden，Semin Cancer Biol (癌癥生物學(xué)講座)13，四 Q003)； M. D. Marmot, Y. Yarden, Oncogene (癌基因)23，2057 (2004) ；P. Peschard, M. Park, Cancer Cell (癌細(xì)胞)3，519 000；3))。多種腫瘤中據(jù)報(bào)道有Met和HGF失調(diào)。在數(shù)種癌中觀察到配體驅(qū)動(dòng)的Met激活。在肺、乳腺癌、和多發(fā)性骨髓瘤中觀察到升高的血清和腫瘤內(nèi)HGF(J. M. Siegfried 等，Ann Thorac Surg 66,1915(1998) ；P. C. Ma 等，Anticancer Res (抗癌研究)23,49(2003) ；B. E.Elliott 等 Can J Physiol Pharmacol 80,91(2002) ；C. Seidel, 等，Med Oncol 15,145(1998))。在多種癌中，諸如在結(jié)腸直腸、肺、胃、和腎癌中，據(jù)報(bào)道有Met和/或HGF的過(guò)表達(dá)、Met擴(kuò)增或突變，而且認(rèn)為這驅(qū)動(dòng)配體依賴(lài)性受體激活 (C. Birchmeier 等，Nat Rev Mol Cell Biol (自然綜述分子細(xì)胞生物學(xué))4，915 (2003)； G. Maulik 等，Cytokine Growth Factor Rev (細(xì)胞因子生長(zhǎng)因子綜述)13，41 Q002))。另外，肝小鼠模型中誘導(dǎo)性Met過(guò)表達(dá)引起了肝細(xì)胞癌，這證明了受體過(guò)表達(dá)驅(qū)動(dòng)配體非依賴(lài)性腫瘤發(fā)生(R. Wang，等，J Cell Biol 153，1023 (2001))。Met參與癌的最引人注目的證據(jù)據(jù)報(bào)道是在家族性和散發(fā)性腎乳頭狀癌(RPC)患者中，Met激酶結(jié)構(gòu)域中造成受體組成性激活的突變?cè)赗PC中被鑒定為種系和體細(xì)胞突變(LJchmidt等，Nat Genet (自然遺傳)16,68(1997))。將這些突變導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因小鼠模型造成腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移(M. Jeffers等， Proc Natl Acad Sci U S A (美國(guó)科學(xué)院院刊)94，11445 (1997))。表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)家族包括參與細(xì)胞應(yīng)答如分化和增殖的四種密切相關(guān)的受體(HER1/EGFR，HER2，HER3和HER4)。過(guò)表達(dá)EGFR激酶或其配體TGF-α常常與許多癌癥相關(guān)，包括乳腺癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、腎細(xì)胞癌、膀胱癌、頭和頸癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和星形細(xì)胞瘤，并且認(rèn)為促進(jìn)這些腫瘤的惡性生長(zhǎng)。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)EGFR基因(EGFRvIII)中的特異性缺失突變?cè)黾蛹?xì)胞致腫瘤性。激活EGFR刺激的信號(hào)傳導(dǎo)途徑促進(jìn)多個(gè)可能促癌的過(guò)程，例如增殖、血管發(fā)生、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性和侵襲、降低細(xì)胞凋亡和誘導(dǎo)藥物抗性。增加的 HER1/EGFR表達(dá)經(jīng)常與重病、轉(zhuǎn)移和差的預(yù)后相關(guān)聯(lián)。例如，在NSCLC和胃癌中，已經(jīng)顯示增加的HER1/EGFR表達(dá)與高轉(zhuǎn)移率、差的腫瘤分化和增加的腫瘤增殖相關(guān)。在NSCLC和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中已經(jīng)觀察到激活受體的內(nèi)在性蛋白酪氨酸激酶活性和/或增加下游信號(hào)傳導(dǎo)的突變。然而，突變作為賦予對(duì)EGF受體抑制劑(例如厄洛替尼 (erlotinib) (TARCEVA )或吉非替尼(gefitinib))的敏感性的主要機(jī)制的作用存在爭(zhēng)議。已經(jīng)報(bào)道全長(zhǎng)EGF受體的突變形式預(yù)測(cè)了對(duì)EGF受體酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼的反應(yīng)性(Paez，J.G.等(2004) Science (科學(xué))304 1497-1500 ;Lynch，T. J.等(2004) N. Engl. J. Med.(新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志)350 =2129-2139)。細(xì)胞培養(yǎng)研究已經(jīng)顯示表達(dá)EGF受體的此類(lèi)突變形式的細(xì)胞系(即H325Q對(duì)EGF受體酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼的生長(zhǎng)抑制更敏感，需要高得多的濃度的吉非替尼來(lái)抑制表達(dá)野生型EGF受體的腫瘤細(xì)胞系。這些觀察表明特定突變形式的EGF受體可能反應(yīng)對(duì)EGF受體抑制劑的更大的敏感性，但沒(méi)有鑒定完全無(wú)反應(yīng)的表型。直接抑制EGFR的激酶活性的化合物以及通過(guò)阻斷EGFR激活降低EGFR激酶活性的抗體開(kāi)發(fā)用作抗腫瘤試劑是強(qiáng)烈努力研究的領(lǐng)域(de Bono J. S.和Rowinsky， Ε. K. (2002) Trends in Mol. Medicine (分子醫(yī)學(xué)發(fā)展趨勢(shì))8 :S19_S26 ；Dancey，J.和 Sausville, Ε. Α. (2003)Nature Rev. Drug Discovery (自然綜述.藥物發(fā)現(xiàn))2 :92-313)。 數(shù)個(gè)研究已經(jīng)證明、公開(kāi)或表明一些EGFR激酶抑制劑當(dāng)與某些其它抗癌或化療試劑或治療組合使用時(shí)可能改善對(duì)腫瘤細(xì)胞或瘤形成的殺傷(例如Herbst，R.S.等Q001) Expert Opin. Biol. Ther.(生物學(xué)理論專(zhuān)家觀點(diǎn))1 :719-732 ；Solomon，B.等(2003) Iht.J.Radiat. Oncol. Biol. Phys. 55 :713-723 ；Krishnan, S.等(2003)Frontiers in Bioscience (生命科學(xué)前沿)8，el-13 ；Grunwald, V.和 Hidalgo，Μ. (2003) J. Nat. Cancer Inst. 95 :851-867 ；Seymour L. (2003) Current Opin. Investig. Drugs ( ^fF ^Sfi 點(diǎn))4(6) :658-666 ；Khali 1,Μ. Y.等(2003)Expert Rev. Anticancer Ther.(抗癌理論專(zhuān)家綜述)3 :367-380 ；Bulgaru,A. Μ.等(2003)Expert Rev. Anticancer Ther.(抗癌理論專(zhuān)家綜述)3 :269-279 ；Dancey, J.禾口 Sausville, Ε. Α. (2003)Nature Rev. Drug Discovery (自然綜述.藥物發(fā)現(xiàn))2 :92-313 ;Ciardiello，F(xiàn).等(2000) Cl in. Cancer Res.(臨床癌癥研究)6 :2053-2063 ；和專(zhuān)利公開(kāi) No :US 2003/0157104)。厄洛替尼(例如鹽酸厄洛替尼，也稱(chēng)為T(mén)ARCEVA 或0SI-774)是可口服的EGFR 激酶抑制劑。在體外，厄洛替尼已經(jīng)證明在很多人腫瘤細(xì)胞系(包括結(jié)腸直腸癌和乳腺癌) 中對(duì)EGFR激酶有重要抑制活性(Moyer J. D.等(1997)Cancer Res(癌癥研究).57 :4838)， 并且臨床前評(píng)價(jià)已經(jīng)證明有抵抗很多表達(dá)EGFR的人腫瘤異種移植物的活性(Pollack， V. Α.等(1999) J. Pharmacol. Exp. Ther. 291 :739)。厄洛替尼在很多適應(yīng)癥的臨床試驗(yàn)中已經(jīng)證明有活性，包括頭和頸癌(Soulieres，D.，等Q004) J. Clin. Oncol.(臨床腫瘤學(xué))22 77), NSCLC(Perez-Soler R,等(2001)Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 20 :310a,文摘 1235)， CRC (0za,M.，等 Q003)Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 22 :196a，文摘 785)和 MBC (Winer，Ε·，等 (2002) Breast Cancer Res. Treat.(乳腺癌研究治療)76 :5115a，文摘 445 Jones, R. J.， 等 Q003)Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 22 :45a，文摘 180)。在 III 期試驗(yàn)中，在患有晚期、治療-頑抗的NSCLC患者中，厄洛替尼單一療法顯著延長(zhǎng)存活、延遲疾病進(jìn)展并且延遲肺癌相關(guān)癥狀的惡化(Sh印herd，F(xiàn).等(2004) J.Clin· Oncology (臨床腫瘤學(xué))，22 :14S (7 月15日增刊)，文摘7022)。在2004年11月美國(guó)食品藥品管理局(U. S. Food and Drug Administration(FDA))批準(zhǔn)TARCEVA 用于在至少一次在先化學(xué)治療方案失敗后治療患有局部進(jìn)展的或轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的患者。盡管在癌癥治療中有重大進(jìn)展，仍然在尋求改進(jìn)的療法。本文引用的所有參考文獻(xiàn)，包括專(zhuān)利申請(qǐng)和公開(kāi)，其全文通過(guò)引用并入本文。發(fā)明概述本發(fā)明提供用于治療病理的病癥如癌癥的療法，其中抗c-met抗體提供顯著的抗腫瘤活性。本發(fā)明還提供用于治療病理的病癥如癌癥的組合療法，其中抗c-met抗體與 EGFR拮抗劑組合，由此提供顯著的抗腫瘤活性。一方面，本發(fā)明提供治療受試者中癌癥的方法，包括向該受試者以每三周大約 15mg/kg的劑量施用抗c-met抗體。另一方面，本發(fā)明提供治療受試者中癌癥的方法，包括向該受試者施用(a)每三周大約15mg/kg的劑量的抗c-met抗體；和(b) EGFR拮抗劑。一方面，本發(fā)明提供用于在患有非小細(xì)胞肺癌的受試者中延長(zhǎng)疾病進(jìn)展時(shí)間 (time to disease progression, TTP)或存活的方法，該方法包括向該受試者施用(a)每三周大約15mg/kg的劑量的抗c-met抗體；和(b) EGFR拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，抗-c-met抗體以足以獲得15微克/ml或高于15微克/ml的血清谷濃度(serum trough concentration)的量施用。在一些實(shí)施方案中，抗-c-met抗體以總劑量大約15mg/kg在三周的期間中施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，EGFR拮抗劑是厄洛替尼。在某些實(shí)施方案中，厄洛替尼在三周的周期中每天以150mg的劑量施用。在某些實(shí)施方案中，厄洛替尼在三周的周期中每天以IOOmg的劑量施用。在某些實(shí)施方案中，厄洛替尼在三周的周期中每天以50mg的劑量施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于在患有非小細(xì)胞肺癌的受試者中延長(zhǎng)疾病進(jìn)展時(shí)間(TTP)、無(wú)進(jìn)展存活、或存活的方法，該方法包括向該受試者施用(a)每三周大約 15mg/kg的劑量的抗-c-met抗體(如MetMAb)；和(b)在三周的周期中每天150mg劑量的厄洛替尼(N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二 O-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉胺)。本申請(qǐng)第一次公開(kāi)了在人中施用包含F(xiàn)c區(qū)的單價(jià)單臂抗體，與包含所述抗原結(jié)合臂的Fab分子相比，該Fc區(qū)增加了所述抗體片段的穩(wěn)定性。參見(jiàn)，例如W02005/063816。 在一些情況下全長(zhǎng)抗體在結(jié)合目標(biāo)抗原時(shí)顯示出激動(dòng)效應(yīng)(其可能是不想要的)，即使作為Fab片段其是拮抗性抗體。參見(jiàn)，例如美國(guó)專(zhuān)利No. 6，468，5四。當(dāng)拮抗性效應(yīng)是想要的治療功能時(shí)這種現(xiàn)象是不利的。單臂抗體的單價(jià)特性(即抗體包含單抗原結(jié)合臂)在該抗體結(jié)合目標(biāo)分子時(shí)產(chǎn)生和/或保證拮抗功能，適合用于治療需要拮抗功能且抗體的雙價(jià)產(chǎn)生不利激動(dòng)效應(yīng)的病理的病癥。另外，本文描述的包含F(xiàn)c區(qū)的單臂抗體的特征在于，與具有相似/基本相同抗原結(jié)合特性的Fab形式相比具有優(yōu)異的藥物代謝動(dòng)力學(xué)屬性(如體內(nèi)增強(qiáng)的半衰期和/或降低的清除率)，因此克服了使用常規(guī)單價(jià)Fab抗體中的主要缺點(diǎn)。因此，在一些實(shí)施方案中，抗-c-met抗體是包含F(xiàn)c區(qū)的單臂抗體(即重鏈可變結(jié)
11構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域形成單抗原結(jié)合臂)，其中該Fc區(qū)包含第一和第二 Fc多肽，其中第一和第二 Fc多肽存在于復(fù)合物中并形成Fc區(qū)，與包含所述抗原結(jié)合臂的Fab分子相比較而言，該Fc區(qū)增加了所述抗體片段的穩(wěn)定性。在一些實(shí)施方案中，該抗-c-met抗體包含(a)第一多肽，其包含具有下述序列的重鏈可變結(jié)構(gòu)域EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFT ISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO 10)，CHl 序列，和第一 Fc多肽；(b)第二多肽，其包含具有下述序列的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFS GSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :11)，和 CLl序列；和(c) 第三多肽，其包含第二 Fc多肽，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域以復(fù)合物存在并形成單抗原結(jié)合臂，其中第一和第二 Fc多肽存在于復(fù)合物中并形成Fc區(qū)，與包含所述抗原結(jié)合臂的Fab分子相比較而言，該Fc區(qū)增加了所述抗體片段的穩(wěn)定性。在一些實(shí)施方案中， 第一多肽包含

圖1中所描述的Fc序列(SEQ ID NO 12)并且第二多肽包含圖2中所述的Fc 序列(SEQ ID N0:13)。在一些實(shí)施方案中，第一多肽包含圖2中所述的Fc序列(SEQ ID NO 13)并且第二多肽包含圖1中所描述的Fc序列(SEQ ID NO 12)。在一些實(shí)施方案中，該抗-c-met抗體包含(a)包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域的第一多肽， 所述多肽包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFT ISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGC LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO 14) ； (b)包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的第二多肽，該多肽包含序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFS GSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SE Q ID NO 15)；和包含F(xiàn)c序列的第三多肽，該多肽包含序列CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK( SEQ ID NO :13)，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域以復(fù)合物存在并形成單抗原結(jié)合臂，其中第一和第二 Fc多肽存在于復(fù)合物中并形成Fc區(qū)，與包含所述抗原結(jié)合臂的Fab分子相比較而言，該Fc區(qū)增加了所述抗體片段的穩(wěn)定性。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗-c-met抗體包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域，該重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含圖1中所描述的CDR1-HC，CDR2-HC和CDR3-HC序列(SEQ ID NO :4，5，和/或9)中的一條或多條。在一些實(shí)施方案中，該抗體包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含圖1 中所描述的CDR1-LC，CDR2-LC和CDR3-LC序列(SEQID而1，2，和/或3)中的一條或多條。在一些實(shí)施方案中，該重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含圖1中所描述的FR1-HC，F(xiàn)R2-HC，F(xiàn)R3-HC和 FR4-HC序列(SEQ ID NO 21-24) 0在一些實(shí)施方案中，該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含圖1中所描述的 FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC 和 FR4-LC 序列(SEQ ID NO :16-19)。適用于本發(fā)明的方法的其它抗-c-met抗體在本文中描述并且是本領(lǐng)域中已知的。一方面，抗-c-met抗體包括至少一個(gè)特性，其促進(jìn)抗體片段內(nèi)的Fc序列的異二聚化而使同二聚化最小。這樣的一種或多種特性改善了免疫球蛋白群體的產(chǎn)量和/或純度和 /或同質(zhì)性。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體包含F(xiàn)c突變，其構(gòu)成“凸起(“knobs")”和“孔洞”(〃 holes")，如W02005/063816中描述。例如孔洞突變可以是Fc多肽中T366A，L368A 和/或料07￥中的一種或多種，并且空腔(cavity)突變可以是T366W。本發(fā)明的方法可用于影響任何適當(dāng)?shù)牟±頎顟B(tài)。例如，本發(fā)明的方法可用于治療不同癌癥，實(shí)體瘤和軟組織腫瘤等均可。本發(fā)明的治療可改善的癌癥的非限制性實(shí)例包括乳腺癌(breast cancer)、結(jié)腸直腸癌(colorectal cancer)、直腸癌(rectal cancer)、 # 小細(xì) Ifi月市· (non-small cell lung cancer) > # - M ^ ik E ^ (non-Hodgkins Iymphoma(NHL))、腎細(xì)胞癌(renal cell cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、肝癌 (liver cancer)、姨腺癌(pancreatic cancer)、軟組織肉瘤(soft-tissue sarcoma)、卡波濟(jì)肉瘤(kaposi' s sarcoma)、類(lèi)癌瘤的癌瘤(carcinoid carcinoma)、頭禾口頸癌(head and neck cancer)、黑素瘤(melanoma)、卵巢癌(ovarian cancer)、胃癌(gastric cancer)、間皮瘤(mesothelioma)、和多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma) 0在某些方面，癌癥是轉(zhuǎn)移的。 在其它方面，癌癥是非轉(zhuǎn)移的。在一些實(shí)施方案中，該癌癥是非小細(xì)胞肺癌、腎細(xì)胞癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌 (bladder cancer)、食管癌(esophageal cancer)、間皮瘤、黑素瘤、乳腺癌、甲狀腺癌 (thyroid cancer)、結(jié)腸直腸癌、頭和頸癌、骨肉瘤(osteosarcoma)、前列腺癌、或成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(glioblastoma) ο在一些實(shí)施方案中，受試者的癌表達(dá)c-met。在一些實(shí)施方案中，受試者的癌表達(dá) EGFR0在一些實(shí)施方案中，受試者的癌顯示c-met和/或EGFR表達(dá)、擴(kuò)增、或激活。在一些實(shí)施方案中，來(lái)自于受試者的血清表達(dá)高水平的IL8(顯示高水平的IL8表達(dá)，如IL8蛋白表達(dá))。在一些實(shí)施方案中，來(lái)自于受試者的血清表達(dá)高于大約150pg/ml的 IL8，或在一些實(shí)施方案中，高于大約50pg/ml的IL8。在一些實(shí)施方案中，來(lái)自于受試者的血清表達(dá)高于大約10pg/ml，20pg/ml，30pg/ml或更高的IL8。測(cè)量IL8血清濃度的方法是本領(lǐng)域已知的并且一種方法在本實(shí)施例中描述。在一些實(shí)施方案中，來(lái)自于受試者的血清表達(dá)高水平的HGF(顯示高水平的HGF 表達(dá)，如HGF蛋白表達(dá))。在一些實(shí)施方案中，來(lái)自于受試者的血清表達(dá)高于大約5，000, 10，000，或 50，000pg/ml 的 HGF。抗-c-met抗體可連續(xù)施用或與EGFR拮抗劑組合在相同組合物中或作為單獨(dú)的組合物施用?？?c-met抗體和EGFR拮抗劑的施用可同時(shí)進(jìn)行，例如作為單一組合物或作為兩種或多種不同組合物，使用相同或不同的施用途徑。備選地或另外地，可以任何順序連續(xù)進(jìn)行施用。備選地或另外地，該步驟可作為以任何順序的連續(xù)和同時(shí)的組合實(shí)施。在某些實(shí)施方案中，兩種或多種組合物的施用之間可存在的間隔范圍在數(shù)分鐘至數(shù)天-數(shù)周至數(shù)月。例如，可以首先施用EGFR拮抗劑，隨后是抗-c-met抗體。然而，也涵蓋了同時(shí)施用或首先施用抗-c-met抗體。取決于待治療的具體癌癥適應(yīng)癥，本發(fā)明的組合治療可與另外的治療劑進(jìn)行組合，如化療劑、VEGF拮抗劑，或與另外的療法如放射性療法或手術(shù)進(jìn)行組合。許多已知的化療劑可在本發(fā)明的組合治療中使用。優(yōu)選地將使用治療具體適應(yīng)癥的標(biāo)準(zhǔn)的那些化療劑。 在組合中將使用的每種治療劑的劑量或頻率優(yōu)選地與當(dāng)該相應(yīng)藥劑不與其它一種或多種藥劑一起使用時(shí)的劑量或頻率相同或更低。本發(fā)明也提供預(yù)后的方法。因此，公開(kāi)的方法可提供用于方便、有效并可能經(jīng)濟(jì)的方式獲得對(duì)評(píng)估病癥將來(lái)的進(jìn)程(包括對(duì)正在治療的患者選擇適當(dāng)?shù)寞煼?有用的數(shù)據(jù)和 fn息ο另一方面，本發(fā)明提供評(píng)價(jià)患有或懷疑患有癌癥的患者的方法，該方法包括基于來(lái)自于該患者生物學(xué)樣品中的IL8的表達(dá)與對(duì)照樣品中IL8的表達(dá)的比較預(yù)測(cè)該患者癌癥的預(yù)后；其中患者生物學(xué)樣品中相對(duì)于對(duì)照樣品中的IL8的表達(dá)對(duì)該患者的癌癥是預(yù)后性的。在一些實(shí)施方案中，該方法還包括(a)從患者獲得生物學(xué)樣品(例如在治療前和/或治療過(guò)程中)；和(b)檢測(cè)在該生物學(xué)樣品(一個(gè)或多個(gè))中的IL8的表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，患者生物學(xué)樣品中相對(duì)于對(duì)照樣品中IL8表達(dá)的增加對(duì)該患者的癌癥是預(yù)后性的。在一些實(shí)施方案中，患者生物學(xué)樣品中相對(duì)于對(duì)照樣品中IL8表達(dá)的降低對(duì)該患者的癌癥是預(yù)后性的。另一方面，本發(fā)明提供用于評(píng)價(jià)正在進(jìn)行癌癥治療的患者的方法，該方法包括基于來(lái)自于該患者的生物學(xué)樣品(例如血清)中的IL8的表達(dá)與在治療前采集的該患者生物學(xué)樣品中IL8的表達(dá)的比較預(yù)測(cè)該患者的癌癥預(yù)后，其中正在進(jìn)行治療的患者血清中IL8 的表達(dá)相對(duì)于治療前樣品中表達(dá)而言降低對(duì)該患者的癌癥是預(yù)后性的。在一些實(shí)施方案中，癌癥的預(yù)后包括對(duì)下述任何一個(gè)或多個(gè)提供預(yù)言或預(yù)測(cè)(預(yù)后)對(duì)治療(例如，用c-met拮抗劑(如抗c-met抗體)或用c-met拮抗劑和EGFR拮抗劑)的反應(yīng)，c-met拮抗劑(如抗-c-met抗體)或c-met拮抗劑和EGFR拮抗劑的活性，對(duì)治療(例如，用c-met拮抗劑或用c-met拮抗劑和EGFR拮抗劑)的反應(yīng)，治療(例如，用 c-met拮抗劑或用c-met拮抗劑和EGFR拮抗劑)的活性，易患癌癥或診斷為癌癥的患者的存活時(shí)間，無(wú)復(fù)發(fā)存活時(shí)間，易患癌癥或診斷為癌癥的患者的無(wú)進(jìn)展存活時(shí)間，易患癌癥或診斷為癌癥的一組患者的反應(yīng)率，易患癌癥或診斷為癌癥的一組患者的反應(yīng)時(shí)間，和/或易患癌癥或診斷為癌癥的患者中轉(zhuǎn)移的可能性。在一些實(shí)施方案中，存活時(shí)間預(yù)言或預(yù)測(cè)為增加。在一些實(shí)施方案中，存活時(shí)間預(yù)言或預(yù)測(cè)為降低。在一些實(shí)施方案中，無(wú)復(fù)發(fā)存活時(shí)間預(yù)言或預(yù)測(cè)為增加。在一些實(shí)施方案中，無(wú)復(fù)發(fā)存活時(shí)間預(yù)言或預(yù)測(cè)為減少。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)率預(yù)言或預(yù)測(cè)為增加。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)率預(yù)言或預(yù)測(cè)為減少。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)時(shí)間預(yù)言或預(yù)測(cè)為增加。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)時(shí)間預(yù)言或預(yù)測(cè)為降低。在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)移可能性預(yù)言或預(yù)測(cè)為增加。在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)移可能性預(yù)言或預(yù)測(cè)為降低。另一方面，本發(fā)明提供選擇對(duì)于患有或懷疑患有癌癥的患者的治療的方法，該方法包括(a)基于來(lái)自于該患者生物學(xué)樣品中的IL8的表達(dá)與對(duì)照樣品中IL8的表達(dá)的比較預(yù)測(cè)該患者癌癥的預(yù)后，其中患者生物學(xué)樣品中相對(duì)于對(duì)照樣品中的IL8的表達(dá)對(duì)該患
14者的癌癥是預(yù)后性的，和(b)步驟(a)之后，選擇對(duì)于該患者的癌癥治療，其中該治療的選擇基于在步驟(a)中確定的患者的預(yù)后。在一些實(shí)施方案中，該方法還包括(C)獲得患者的生物學(xué)樣品；(d)檢測(cè)在該生物學(xué)樣品中的IL8的表達(dá)，其中在該患者生物學(xué)樣品中IL8 的表達(dá)對(duì)癌癥是預(yù)后性的。在一些實(shí)施方案中，患者生物學(xué)樣品中相對(duì)于對(duì)照樣品中IL8 表達(dá)的增加對(duì)該患者的癌癥是預(yù)后性的。在一些實(shí)施方案中，患者生物學(xué)樣品中相對(duì)于對(duì)照樣品中IL8表達(dá)的降低對(duì)該患者的癌癥是預(yù)后性的。另一方面，本發(fā)明提供選擇對(duì)于正在進(jìn)行癌癥治療的患者的治療的方法，該方法包括(a)基于來(lái)自于該患者生物學(xué)樣品(例如血清)中的IL8的表達(dá)與治療前采集的該患者生物學(xué)樣品中IL8的表達(dá)的比較預(yù)測(cè)該患者癌癥的預(yù)后，其中正在進(jìn)行治療的患者血清中IL8的表達(dá)相對(duì)于治療前樣品中表達(dá)而言對(duì)該患者的癌癥是預(yù)后性的，和(b)步驟(a) 之后，選擇對(duì)于該患者的癌癥治療，其中該治療的選擇基于在步驟(a)中確定的患者的預(yù)后。在一些實(shí)施方案中，該方法還包括(c)獲得患者的生物學(xué)樣品；(d)檢測(cè)在該生物學(xué)樣品中的IL8的表達(dá)，其中在該患者生物學(xué)樣品中IL8的表達(dá)對(duì)癌癥是預(yù)后性的。在一些實(shí)施方案中，患者生物學(xué)樣品中相對(duì)于對(duì)照樣品中IL8表達(dá)的增加對(duì)該患者的癌癥是預(yù)后性的。在一些實(shí)施方案中，患者生物學(xué)樣品中相對(duì)于對(duì)照樣品中IL8表達(dá)的降低對(duì)該患者的癌癥是預(yù)后性的。附圖簡(jiǎn)述圖1 描述了 MetMAb (0A5D5v2)的構(gòu)架(FR)、CDR、第一恒定結(jié)構(gòu)域(CL或CHl)和 Fc區(qū)(Fe)的氨基酸序列。所描述的Fc序列包含“孔洞”(空腔)突變T366S，L368A和 Y407V，如 WO 2005/063816 中所描述。圖2 描述了包含“凸起”("knob")(隆凸)突變T366W的Fc多肽的序列，如WO 2005/063816中所描述。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含這種序列的Fc多肽與包含圖1的Fc序列的Fc多肽形成復(fù)合物從而產(chǎn)生Fc區(qū)。圖3 在小鼠、大鼠和食蟹猴(cynomolgus monkey)中進(jìn)行單次IV或IP推注劑量的MetMAb后平均血清MetMAb濃度-時(shí)間曲線圖。如圖所示MetMAb在第0天給藥。圖4 在KP4胰腺癌異種移植物模型中在多種劑量水平的單次IV推注劑量的 MetMAb后平均腫瘤體積-時(shí)間曲線圖。如圖所示MetMAb在第0天給藥。圖5:平均腫瘤體積-劑量曲線圖。在第21天的組平均腫瘤體積=Σ (第21天腫瘤體積-相同動(dòng)物在第0天的腫瘤體積)/η。圖6 在ΚΡ4異種移植物模型中不同給藥方案的IV推注劑量的MetMAb之后平均腫瘤體積-時(shí)間曲線圖。箭頭表示劑量組的給藥時(shí)間如下(從頂排到底排)頂部箭頭 MetMAb 0. 825mg/kg 每周一次(QlW)；中間箭頭MetMAb 1. 25mg/kg 每?jī)芍芤淮?Q2W)；底部箭頭=MetMAb 2. 5mg/kg每三周一次(Q3W)。在該圖中〃 0A5D5"是指MetMAb。菱形表示 PBS對(duì)照。圖7 在KP4異種移植物模型中單次IV推注劑量或IV輸注MetMAb后平均腫瘤體積-時(shí)間曲線圖。MetMAb如圖所示進(jìn)行給藥。圖8 在攜帶H596非小細(xì)胞肺癌腫瘤huHGF_SCID轉(zhuǎn)基因小鼠中在IV推注劑量之后平均腫瘤體積-時(shí)間曲線圖。MetMAb如圖所示進(jìn)行給藥。圖9 說(shuō)明對(duì)于MetMAb的理論人群Η /PD腫瘤進(jìn)展模型，由直接KP4腫瘤生長(zhǎng)
15抑制的兩區(qū)室(two-compartment)非線性1 模型構(gòu)成。CL =總清除率的非飽和清除部分；CLd =區(qū)室間清除率；Kmltl =在50 % Vmaxlo的MetMAb血清濃度；Vmaxltl =總清除的飽和清除部分的最大藥物去除；Vl =表觀中心分布體積；V2 =表觀外周分布體積；IC5tl = Michaelis-Menten常數(shù)，代表導(dǎo)致50%細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的MetMAb血清濃度；IMax =最大 MetMAb腫瘤生長(zhǎng)抑制效應(yīng)常數(shù)；KGN = KP4腫瘤細(xì)胞系體內(nèi)凈生長(zhǎng)率；C = MetMAb血清濃度。圖10 來(lái)自于15mg/kg Q3麗etMAb模擬實(shí)驗(yàn)的代表性I3K曲線圖和MTC值。PK = 藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征曲線(pharmacokinetic profile) ；MTC =最小腫瘤穩(wěn)定MetMAb濃度。圖11 對(duì)應(yīng)于圖10中所示1 曲線圖和MTC值的腫瘤質(zhì)量模擬實(shí)驗(yàn)。AUC =曲線下MetMAb血清面積；MTC =最小腫瘤穩(wěn)定MetMAb濃度。圖12 :1期劑量漸增(dose escalation)研究設(shè)計(jì)。圖13 1期劑量漸增研究中患者診斷、治療組和施用周期。在劑量-漸增階段中每個(gè)患者的MetMAb暴露周期。除非另有注明，所有患者由于進(jìn)展性疾病脫離研究。圖14 每個(gè)劑量組中每個(gè)藥物代謝動(dòng)力學(xué)時(shí)間點(diǎn)的MetMAb血清濃度在所有患者中進(jìn)行平均。對(duì)每個(gè)組用均值(士SD)MetMAb濃度相對(duì)于時(shí)間進(jìn)行作圖。圖15 使用PK/PD建模來(lái)確定人中MTC中值(median)，其是基于臨床前腫瘤異種移植物研究和種間比例確定來(lái)進(jìn)行。人中血清中MetMAb的MTC確定為15ug/mL。使用基于來(lái)自這種1期研究觀察到的1 數(shù)據(jù)的模擬實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒定15mg/kg Q3W劑量(箭頭)，其在 90%的患者中獲得大于或等于MTC的穩(wěn)態(tài)谷濃度。MTC =最小腫瘤穩(wěn)定濃度，PK =藥物代謝動(dòng)力學(xué)，PD =藥效學(xué)；SS =穩(wěn)態(tài)，Q3W =每三周一次。圖16 =Met的抑制可能影響循環(huán)配體HGF的水平。通過(guò)基于ELISA的方法測(cè)量血清HGF水平。數(shù)據(jù)以基線HGF表達(dá)降序呈現(xiàn)?？傮w而言，用MetMAb處理時(shí)似乎有很小或沒(méi)有HGF表達(dá)的增加。然而顯示最高水平的基線HGF表達(dá)的兩個(gè)患者表現(xiàn)出顯著的HGF表達(dá)降低。對(duì)于患者11009，藥物治療后HGF水平降低70%并且保持低水平。C=周期，D=天， HGF =肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，M =男性，F(xiàn) =女性，ClDl，C2D1，C3D1 給藥前；C1D2 給藥后24h。圖17 血清IL8水平的評(píng)價(jià)。數(shù)據(jù)以基線IL8表達(dá)的降序呈現(xiàn)?？傮w而言，具有高于正常對(duì)照的基線血清IL8水平的大部分患者在MetMAb輸注后有血清IL8的降低。在 4周期間健康志愿者IL8的受試者內(nèi)變異是 3-10pg/ml。IL8 =白細(xì)胞介素8，MSD =中間測(cè)量發(fā)現(xiàn)(meso scale discovery)，C =周期，D =天，M =男性，F(xiàn) =女性，C1D1，C2D1， C3D1 給藥前；C1D2 給藥后24h。圖18 參與劑量漸增階段的所有患者的最佳腫瘤反應(yīng)。一位患者未進(jìn)行評(píng)價(jià)，因?yàn)樵摶颊咴诘谝辉u(píng)價(jià)時(shí)間點(diǎn)之前有進(jìn)展；另一位患者的CT評(píng)價(jià)在這些數(shù)據(jù)收集的時(shí)間不能獲得。標(biāo)明了患者數(shù)目和腫瘤類(lèi)型。SLD=最長(zhǎng)直徑的總和。圖19 患者11009的CT和MRI掃描。左上組患者11009在2007年8月的CT掃描。右上組患者11009的CT掃描，這使得她有資格登記進(jìn)入MetMAbI期試驗(yàn)。左下組CT 掃描顯示完全反應(yīng)。右下組:MRI掃描確認(rèn)了完全反應(yīng)。圓圈標(biāo)明了腫瘤的位點(diǎn)。圖20 患者11009的標(biāo)本組織的免疫組織化學(xué)染色?；颊?1009的標(biāo)本胃腺癌樣本的免疫組織化學(xué)染色揭示腫瘤細(xì)胞中有中度的膜和胞質(zhì)c-met表達(dá)和胞質(zhì)和膜周邊HGF 表達(dá)。
詳細(xì)描述I.定義術(shù)語(yǔ)"肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子"或"HGF"，用于本文時(shí)，除非另有說(shuō)明，是指任何天然或變體(天然的或合成的)HGF多肽，其能夠在允許此類(lèi)過(guò)程發(fā)生的條件下激活HGF/c-met 信號(hào)傳導(dǎo)途徑。術(shù)語(yǔ)"野生型HGF" —般是指包含天然存在HGF蛋白的氨基酸序列的多肽。 術(shù)語(yǔ)"野生型HGF序列"一般是指在天然存在的HGF中發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列。c-met是HGF 的已知受體，通過(guò)c-met在生物學(xué)上完成HGF的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)。術(shù)語(yǔ)"HGF變體"用于本文時(shí)是指這樣的HGF多肽，其包括天然HGF序列中一個(gè)或多個(gè)氨基酸突變。任選地，一個(gè)或多個(gè)氨基酸突變包括氨基酸置換(一個(gè)或多個(gè))?！疤烊恍蛄小倍嚯陌c來(lái)自自然的多肽具有相同的氨基酸序列的多肽。因此，天然序列多肽可以具有來(lái)自任何哺乳動(dòng)物的天然存在的多肽的氨基酸序列。所述天然序列多肽可以從自然分離或可以通過(guò)重組或合成方式產(chǎn)生。術(shù)語(yǔ)“天然序列”多肽具體地包括多肽的天然存在的截短或分泌形式(例如，細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域序列)，天然存在的變體形式(例如， 可變剪接形式)和多肽的天然存在的等位基因變體。多肽“變體”指與天然序列多肽具有至少約80%氨基酸序列同一性的生物學(xué)活性多肽。此類(lèi)變體包括例如其中在多肽的N末端或C末端添加或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的多肽。通常，變體將會(huì)與天然序列多肽具有至少約80%氨基酸序列同一性，更優(yōu)選地至少約90%氨基酸序列同一性，以及甚至更優(yōu)選地至少約95%氨基酸序列同一性?！?EGFR “是指受體酪氨酸激酶多肽表皮生長(zhǎng)因子受體，其在Ullrich等， Nature (自然)(1984)309 :418425中描述，另外也稱(chēng)為Her-I和c-erbB基因產(chǎn)物，以及其變體如EGFRvIII。EGFR的變體也包括缺失、置換和插入變體，例如在Lynch等(New England Journal of Medicine (新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志)2004，350 :2129)，Paez 等(Science (科學(xué))2004，304 :1497)，Pao 等(PNAS 2004，101 13306)中描述的那些?！吧飳W(xué)樣品"(可相互替換地稱(chēng)為“樣品”或“組織或細(xì)胞樣品”)涵蓋從個(gè)體獲得的多種樣品類(lèi)型并可用于診斷或檢測(cè)測(cè)定中。該定義涵蓋生物學(xué)來(lái)源的血和其它液體樣品，實(shí)體組織樣品如活組織檢查樣品或組織培養(yǎng)物或由其衍生的細(xì)胞，以及其后代。該定義也包括在它們獲得后以任何方式操作的樣品，如用試劑處理，增溶，或富集某些成分如蛋白或多核苷酸，或包埋在半固體或固體基質(zhì)中用于切片的目的。術(shù)語(yǔ)"生物學(xué)樣品"涵蓋臨床樣品，并也包括培養(yǎng)物中的細(xì)胞、細(xì)胞上清液、細(xì)胞裂解物、血清、血漿、生物學(xué)液體和組織樣品。生物學(xué)樣品的來(lái)源可以是實(shí)體組織，來(lái)自于新鮮、冷凍和/或儲(chǔ)存的器官或組織樣品或活組織檢查或抽吸；血液或任何血液成分；體液如腦脊液、羊水、腹水或間質(zhì)液；來(lái)自于受試者懷孕或發(fā)育的任何時(shí)間的細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，生物學(xué)樣品從原發(fā)或轉(zhuǎn)移腫瘤中獲得。生物學(xué)樣品可含有本身與組織不天然混合的化合物如防腐劑、抗凝劑、緩沖劑、 固定劑、營(yíng)養(yǎng)素、抗生素、或諸如此類(lèi)的。“抗-c-met抗體"是以足夠親和力和特異性結(jié)合c-met的抗體。所選擇的抗體通常具有針對(duì)c-met的足夠強(qiáng)的結(jié)合親和力，例如所述抗體可以以介于IOOnM-IpM之間的Kd值結(jié)合人c-met。抗體親和力可以通過(guò)例如基于表面等離子共振(surface plasmon resonance)的測(cè)定法(諸如BIAcore測(cè)定法，如PCT申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)W02005/012359所記載的)；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)；和競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法(例如RIA)來(lái)測(cè)定。在某些實(shí)施方案中，該抗-c-met抗體可在靶向和介入其中涉及c-met活性的疾病或病癥中用作治療劑。另外，所述抗體可以進(jìn)行其它生物學(xué)活性測(cè)定法，例如為了評(píng)估其作為治療劑的效力。此類(lèi)測(cè)定法是本領(lǐng)域已知的，而且依賴(lài)于所述抗體的靶抗原和預(yù)期用途?！?c-met激活〃是指c-met受體的激活或磷酸化。通常，c-met激活導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(例如由c-met受體的細(xì)胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域磷酸化c-met或底物多肽中的酪氨酸殘基所導(dǎo)致)。c-met激活可由c-met配體(HGF)結(jié)合感興趣的c_met受體來(lái)介導(dǎo)。HGF結(jié)合c_met 可激活c-met的激酶結(jié)構(gòu)域并由此導(dǎo)致c-met中酪氨酸殘基的磷酸化和/或另外的底物多肽(一個(gè)或多個(gè))中的酪氨酸殘基的磷酸化?！癊GFR拮抗劑”(互換地稱(chēng)為“EGFR抑制劑”)是干擾EGFR激活或功能的藥劑。EGFR 抑制劑的實(shí)例包括EGFR抗體；EGFR配體的抗體；小分子EGFR拮抗劑；EGFR酪氨酸激酶抑制劑；反義和抑制性RNA(例如，shRNA)分子(見(jiàn)例如，W02004/87207)。優(yōu)選地，EGFR抑制劑是結(jié)合EGFR的抗體或小分子。在一些實(shí)施方案中，EGFR抑制劑是靶向EGFR的藥物。在特定實(shí)施方案中，EGFR抑制劑與EGFR的結(jié)合親和力(解離常數(shù))約為1，OOOnM以下。在另一個(gè)實(shí)施方案中，EGFR抑制劑與EGFR的結(jié)合親和力約為IOOnM以下。在另一個(gè)實(shí)施方案中，EGFR抑制劑與EGFR的結(jié)合親和力約為50nM以下。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，EGFR抑制劑與EGFR共價(jià)結(jié)合。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，EGFR抑制劑以1，OOOnM以下的IC50抑制EGFR細(xì)胞傳導(dǎo)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，EGFR抑制劑以500nM以下的IC50抑制EGFR信號(hào)傳導(dǎo)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，EGFR抑制劑以50nM以下的IC50抑制EGFR信號(hào)傳導(dǎo)。在某些實(shí)施方案中，EGFR拮抗劑降低或抑制，至少10%, 20%, 30%,40%, 50%,60%, 70%,80%, 90%或更高的EGFR的表達(dá)水平或生物學(xué)活性。"EGFR激活”指EGFR的激活或磷酸化。一般情況下，EGFR激活導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(例如，其由EGFR受體的細(xì)胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域磷酸化EGFR或底物多肽中的酪氨酸殘基所導(dǎo)致)。 EGFR激活可以由結(jié)合包含EGFR的EGFR 二聚體的EGFR配體所介導(dǎo)。EGFR配體與EGFR 二聚體的結(jié)合可以激活二聚體中的一個(gè)或多個(gè)EGFR的激酶結(jié)構(gòu)域并且由此導(dǎo)致在一個(gè)或多個(gè)EGFR中的酪氨酸殘基的磷酸化和/或在另外的底物多肽(一個(gè)或多個(gè))中的酪氨酸殘基的磷酸化。用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)"EGFR-靶向藥物"是指結(jié)合EGFR并抑制EGFR激活的治療齊U。此類(lèi)藥劑的實(shí)例包括結(jié)合EGFR的抗體和小分子。結(jié)合EGFR的抗體的實(shí)例包括MAb 579 (ATCC CRL HB 8506)，MAb 455 (ATCC CRL HB8507)，MAb 225 (ATCC CRL 8508)，MAb 528 (ATCC CRL 8509)(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利No. 4，943，533，Mendelsohn等)及其變體，如嵌合的225(C225或西妥昔單抗(Cetuximab) ；ERBUTIX )和改型的人225 (Η225)(參見(jiàn)，WO 96/40210，Imclone Systems Inc.) ；IMC-11F8，其是全人的、EGFR-靴向抗體(Liiclone)； 結(jié)合II型突變的EGFR的抗體(美國(guó)專(zhuān)利No. 5，212，290)；結(jié)合EGFR的人源化和嵌合抗體，如美國(guó)專(zhuān)利No. 5，891，996中所描述；和結(jié)合EGFR的人抗體，如ABX-EGF (參見(jiàn) W098/50433, Abgenix) ；EMD 55900 (Stragliotto 等 Eur. J. Cancer 32A :636-640 (1996))； EMD7200 (matuzumab)，其是針對(duì)EGFR的人源化EGFR抗體，與EGF和TGF- α兩者競(jìng)爭(zhēng)EGFR 的結(jié)合；和mAb 806或人源化mAb 806 (Johns等，J.Biol. Chem.(生物化學(xué)雜志)279 ( ) 30375-30384 (2004))?？?EGFR抗體可與細(xì)胞毒性劑綴合，從而產(chǎn)生免疫綴合物(參見(jiàn)，例如EP659，439A2，Merck Patent GmbH)。結(jié)合EGFR的小分子的實(shí)例包括ZD1839或吉非替尼
18(IRESSA ；Astra Zeneca) ；CP-358774 或厄洛替尼(TARCEVA ;Genentech/0SI)；和 AG1478， AG1571(SU 5271 ； Sugen) ；EMD-7200。短語(yǔ)"基因擴(kuò)增"是指這樣的過(guò)程，通過(guò)該過(guò)程多拷貝的基因或基因片段在特定細(xì)胞或細(xì)胞系中形成。被復(fù)制的區(qū)(一段擴(kuò)增的DNA)常常被稱(chēng)為“擴(kuò)增子”。通常，所產(chǎn)生的信使RNA(mRNA)的量，即基因表達(dá)的水平，也與該特定基因表達(dá)產(chǎn)生的拷貝數(shù)成比例的增加?！袄野彼峒っ敢种苿?是這樣的分子，其在一些程度上抑制酪氨酸激酶如c-met 受體的酪氨酸激酶活性?！帮@示c-met和/或EGFR表達(dá)、擴(kuò)增或激活”的癌癥或生物學(xué)樣品是在診斷測(cè)試中，表達(dá)(包括過(guò)表達(dá))c-met和/或EGFR，具有擴(kuò)增的c-met和/或EGFR基因，和/或其它證明c-met和/或EGFR激活或磷酸化的癌癥或生物學(xué)樣品?！安伙@示c-met和/或EGFR表達(dá)、擴(kuò)增或激活”的癌癥或生物學(xué)樣品是在診斷測(cè)試中，不表達(dá)(包括過(guò)表達(dá))c-met和/或EGFR，不具有擴(kuò)增的c-met和/或EGFR基因，和/ 或其它未證明c-met和/或EGFR激活或磷酸化的癌癥或生物學(xué)樣品。“顯示c-met和/或EGFR激活〃的癌癥或生物學(xué)樣品是在診斷測(cè)試中，證明 c-met和/或EGFR的激活或磷酸化的癌癥或生物學(xué)樣品。此類(lèi)激活可直接確定(例如通過(guò) ELISA測(cè)量c-met和/或EGFR磷酸化)或間接確定?！安伙@示c-met和/或EGFR激活〃的癌癥或生物學(xué)樣品是在診斷測(cè)試中，未證明 c-met和/或EGFR的激活或磷酸化的癌癥或生物學(xué)樣品。此類(lèi)激活可直接確定(例如通過(guò) ELISA測(cè)量c-met和/或EGFR磷酸化)或間接確定?！帮@示c-met和/或EGFR擴(kuò)增“的癌癥或生物學(xué)樣品是在診斷測(cè)試中具有擴(kuò)增的c-met和/或EGFR基因的癌癥或生物學(xué)樣品?！安伙@示c-met和/或EGFR擴(kuò)增“的癌癥或生物學(xué)樣品是在診斷測(cè)試中不具有擴(kuò)增的c-met和/或EGFR基因的癌癥或生物學(xué)樣品?！傲姿?ELISA測(cè)定(phospho-ELISA assay)，，在本文中指在酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法 (ELISA)中評(píng)估一種或多種c-met和/或EGFR的磷酸化的測(cè)定，其中使用檢測(cè)磷酸化的 c-met和/或EGFR的試劑(通常是抗體)、底物或下游信號(hào)傳導(dǎo)分子。優(yōu)選的是，使用檢測(cè)磷酸化c-met和/或EGFR的抗體。該測(cè)定可對(duì)細(xì)胞裂解物、優(yōu)選來(lái)自新鮮的或冷凍的生物學(xué)樣品的細(xì)胞裂解物進(jìn)行。"c-met和/或EGFR過(guò)表達(dá)或擴(kuò)增”的癌細(xì)胞指與同一組織類(lèi)型的非癌細(xì)胞相比， 具有顯著更高水平的c-met和/或EGFR蛋白質(zhì)或基因的癌細(xì)胞。此類(lèi)過(guò)表達(dá)可以是由基因擴(kuò)增或者轉(zhuǎn)錄或翻譯增加引起的?？稍谠\斷或預(yù)后測(cè)定中通過(guò)評(píng)估細(xì)胞表面上存在的 c-met和/或EGFR蛋白質(zhì)水平的升高(例如通過(guò)免疫組化測(cè)定，IHC)來(lái)測(cè)定c-met和/或 EGFR的過(guò)表達(dá)或擴(kuò)增。備選地/另外地，可測(cè)量細(xì)胞中編碼c-met和/或EGFR的核酸的水平，例如通過(guò)熒光原位雜交(FISH ；參見(jiàn)1998年10月公布的W098/4M79)、Southern印跡或聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)，諸如定量實(shí)時(shí)PCR(qRT-PCR)。在上述測(cè)定法之外，熟練從業(yè)人員還可利用多種體內(nèi)測(cè)定法。例如，可將患者體內(nèi)細(xì)胞暴露于任選用可檢測(cè)標(biāo)記物例如放射性同位素標(biāo)記的抗體，并且可評(píng)估該抗體與患者體內(nèi)細(xì)胞的結(jié)合，例如通過(guò)外部掃描放射性或通過(guò)分析取自事先已暴露于所述抗體的患者的活組織檢查。
19
“不過(guò)表達(dá)或擴(kuò)增c-met和/或EGFR"的癌癥細(xì)胞是指與同一組織類(lèi)型的非癌細(xì)胞相比，不具有高于正常水平的c-met和/或EGFR蛋白質(zhì)或基因的癌癥細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)“突變”在用于本文時(shí)指特定蛋白質(zhì)或核酸(基因，RNA)分別相對(duì)于野生型蛋白質(zhì)或核酸的氨基酸或核酸序列的差異。突變的蛋白質(zhì)或核酸可以由基因的一個(gè)等位基因(雜合的)或兩個(gè)等位基因(純合的)表達(dá)或者在其中找到，而且它可以是體細(xì)胞的或種系的。在本發(fā)明中，突變一般是體細(xì)胞的。突變包括序列重排，諸如插入、缺失、和點(diǎn)突變 (包括單核苷酸/氨基酸多態(tài)性)。蛋白質(zhì)“表達(dá)”指基因中所編碼的信息轉(zhuǎn)換成信使RNA(mRNA)，然后轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)。在本文中，“表達(dá)”目的蛋白質(zhì)(諸如HER受體或HER配體)的樣品或細(xì)胞指其中測(cè)定出存在編碼該蛋白質(zhì)的mRNA，或蛋白質(zhì)(包括其片段)的樣品或細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)〃白細(xì)胞介素8〃或〃 IL8"或〃 IL-8"，用于本文時(shí)，除非另外指明，是指任何天然或變體(天然的或合成的)IL8多肽，其能夠在允許此類(lèi)過(guò)程發(fā)生的條件下激活 IL8信號(hào)傳導(dǎo)途徑。術(shù)語(yǔ)"野生型IL8" —般是指包含天然存在IL8蛋白的氨基酸序列的多肽。術(shù)語(yǔ)"野生型IL8序列"一般是指在天然存在的IL8中發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列。術(shù)語(yǔ)“VEGF”或“VEGF-A”用于指165個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及相關(guān)的121個(gè)、189個(gè)和206個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，如Leung等科學(xué)(kience)， 246 :1306(1989)；和 Houck 等分子內(nèi)分泌學(xué)(Mol. Endocrin.)，5 1806 (1991)，所記載的， 及其天然存在等位基因形式和加工形式。VEGF-A是包括VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、 VEGF-F和PlGF的基因家族的一部分。VEGF-A主要結(jié)合兩種高親和力受體酪氨酸激酶， 即VEGFR-I (Flt-I)和VEGFR-2 (Flk-1/KDR)，后者是VEGF-A血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂信號(hào)的主要遞質(zhì)。另外，已經(jīng)鑒定出neuropilin-Ι作為肝素-結(jié)合VEGF-A同種型受體，并可能在血管發(fā)育中發(fā)揮作用。術(shù)語(yǔ)“VEGF”或“VEGF-A”還指來(lái)自非人物種(諸如小鼠、大鼠或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物)的VEGF。有時(shí)，來(lái)自特定物種的VEGF用如下術(shù)語(yǔ)表示，諸如hVEGF表示人 VEGF或mVEGF表示鼠VEGF。術(shù)語(yǔ)“VEGF”還用于指包含165個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的氨基酸第8-109位或第1-109位的多肽截短形式或片段。在本申請(qǐng)中可通過(guò)例如〃 VEGF(8-109), “ “ VEGF(1-109) 〃或〃 VEGF165〃表示對(duì)任何此類(lèi)形式的VEGF的引述。“截短的”天然VEGF的氨基酸位置如天然VEGF序列中所示的編號(hào)。例如，截短的天然 VEGF中的第17位氨基酸(甲硫氨酸)也是天然VEGF中的第17位(甲硫氨酸)。截短的天然VEGF具有與天然VEGF相當(dāng)?shù)膶?duì)KDR和Flt-I受體的結(jié)合親和力。術(shù)語(yǔ)"VEGF變體"用于本文時(shí)是指在天然VEGF序列中包括一個(gè)或多個(gè)氨基酸突變的VEGF多肽。任選地，該一個(gè)或多個(gè)氨基酸突變包括氨基酸置換(一個(gè)或多個(gè))。為了對(duì)本文描述的VEGF變體速記命名的目的，請(qǐng)注意數(shù)字是指根據(jù)推定的天然VEGF的氨基酸序列(在Leimg等，見(jiàn)上文和Houck等，見(jiàn)上文中提供)的氨基酸殘基位置。"VEGF生物學(xué)活性”包括與任何VEGF受體的結(jié)合或任何VEGF信號(hào)傳導(dǎo)活性如調(diào)節(jié)正常和異常血管發(fā)生和血管生成二者Perrara和Davis-Smyth(1997)內(nèi)分泌綜述 (Endocrine Rev.) 18 4-25 ；Ferrara (1999)分子醫(yī)學(xué)雜志(J. Mol. Med.) 77 :527-543)；促進(jìn)胚胎血管發(fā)生和血管生成(Carmeliet等.(1996)自然(Nature) 380 :4；35_439 ;Ferrara 等.(1996)自然(Nature) 380 :439-442)；和調(diào)節(jié)雌性生殖道的周期性血管增殖，以及骨生長(zhǎng)和軟骨形成(Ferrara等.(1998)自然醫(yī)學(xué)(Nature Med.) 4 :336-340 ；Gerber 等.(1999)自然醫(yī)學(xué)(Nature Med.) 5 =623-628) 0除了作為血管發(fā)生和血管生成中的生血管因子之外，VEGF還作為多效生長(zhǎng)因子在其它生理過(guò)程中顯示了多種生物學(xué)效應(yīng)，如內(nèi)皮細(xì)胞存活， 血管滲透性和血管舒張，單核細(xì)胞趨化作用和鈣流入Perrara和Davis-Smyth (1997)，見(jiàn)上文，和 Cebe-Suarez 等，細(xì)胞分子生命科學(xué)(Cell. Mol. Life. Sci). 63 :601-615(2006)。 而且，最近的研究已經(jīng)報(bào)道了 VEGF對(duì)于數(shù)種非內(nèi)皮細(xì)胞類(lèi)型，如視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、胰管細(xì)胞和許旺細(xì)胞的促有絲分裂作用。Guerrin等.(19%)細(xì)胞生理學(xué)雜志 (J. Cell Physiol.) 164 :385-394 ；Oberg-Welsh 等(1997).分子細(xì)胞內(nèi)分泌學(xué)(Mol. Cell. Endocrinol). 126 :125-132(1997) ；Sondell 等.神經(jīng)科學(xué)雜志(J. Neurosci.) 19 5731-5740(1999)?！把馨l(fā)生抑制劑”或“抗血管發(fā)生劑”指直接或是間接抑制血管發(fā)生、血管生成、 或不想要的血管通透性的小分子量物質(zhì)、多核苷酸、多肽、分離的蛋白質(zhì)、重組蛋白、抗體、 或其綴合物或融合蛋白。應(yīng)當(dāng)理解抗血管發(fā)生劑包括結(jié)合和阻斷血管發(fā)生因子或其受體的血管發(fā)生活性的那些藥劑。例如，抗血管發(fā)生劑是上文定義的血管發(fā)生劑的抗體或其它拮抗劑，例如VEGF-A、或VEGF-A受體(例如KDR受體或Flt-I受體)的抗體，抗-PDGFR抑制劑如GLEEVEC (甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate) )0抗血管發(fā)生劑還包括天然血管發(fā)生抑制劑，例如制管張素、內(nèi)皮生長(zhǎng)抑素等。參見(jiàn)例如Klagsbrun和D’ Amore生理學(xué)年評(píng)(Annu. Rev. Physiol.) 53 :217-39 (1991) ；Streit 和 Detmar 癌基因(Oncogene) 22 3172-3179(2003)(例如列舉惡性黑素瘤中抗血管發(fā)生療法的表3) ；Ferrara和Alitalo 自然藥物(Nature Medicine) 5 :1359-1364(1999) ；Tonini 等癌基因(Oncogene) 22 6549-6556(2003)(例如列舉已知抗血管發(fā)生因子的表2)；及Sato, Int. J. Clin. Oncol. 8 200-206(2003)(例如列舉臨床試驗(yàn)中所使用的抗血管發(fā)生藥劑的表1)。"VEGF拮抗劑”指能夠中和、阻斷、抑制、消除、降低或干擾VEGF活性(包括其與一種或多種VEGF受體的結(jié)合)的分子(肽基或非肽基)。在某些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑將VEGF的表達(dá)水平或生物學(xué)活性降低或抑制至少10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、 70%,80%,90%或更多。在一個(gè)實(shí)施方案中，受到VEGF拮抗劑抑制的VEGF是VEGF(8-109)、 VEGF (1-109)或VEGF165?？捎糜诒景l(fā)明方法的VEGF拮抗劑包括特異性結(jié)合VEGF的肽基或非肽基化合物，諸如抗VEGF抗體及其抗原結(jié)合片段、特異性結(jié)合VEGF的多肽或其片段；和特異性結(jié)合VEGF由此使其隔絕與一種或多種受體(例如可溶性VEGF受體蛋白質(zhì)或其VEGF 結(jié)合片段、或嵌合VEGF受體蛋白質(zhì))結(jié)合的受體分子及衍生物；至少與編碼VEGF多肽的核酸分子的片段互補(bǔ)的反義核堿基(nucleobase)寡聚物；至少與編碼VEGF多肽的核酸分子的片段互補(bǔ)的小RNA ；靶向VEGF的核酶；針對(duì)VEGF的肽體(ρ印tibody) ’及VEGF適配體。術(shù)語(yǔ)“抗VEGF抗體”指以足夠親和力和特異性結(jié)合VEGF的抗體。所選擇的抗體通常具有針對(duì)VEGF的足夠強(qiáng)的結(jié)合親和力，例如所述抗體可以以介于IOOnM-IpM之間的Kd 值結(jié)合hVEGF?？贵w親和力可以通過(guò)例如基于表面等離子共振的測(cè)定法(諸如BIAcore測(cè)定法，如PCT申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)W02005/012359所記載的)；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)；和競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法(例如RIA)來(lái)測(cè)定。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗-VEGF抗體可在靶向或干擾其中涉及VEGF活性的疾病或病癥中用作治療劑。另外，該抗體可以進(jìn)行其它生物學(xué)活性測(cè)定法，例如為了評(píng)估其作為治療劑的效力。此類(lèi)測(cè)定法是本領(lǐng)域已知的，而且依賴(lài)于所述抗體的靶抗原和預(yù)期用途。實(shí)例包括HUVEC抑制測(cè)定法(如在下文實(shí)施例中描述的)；腫瘤細(xì)胞
21生長(zhǎng)抑制測(cè)定法(如例如W089/06692所描述的)；抗體依賴(lài)性細(xì)胞的細(xì)胞毒性(ADCC)和補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(CDC)測(cè)定法(美國(guó)專(zhuān)利5，500，36 ；及激動(dòng)性活性或造血測(cè)定法(參見(jiàn)TO95/27062)?？筕EGF抗體通常不會(huì)結(jié)合其它VEGF同源物，諸如VEGF-B、或VEGF-C，也不結(jié)合其它生長(zhǎng)因子，諸如P1GF、PDGF或bFGF。在某些實(shí)施方案中，抗VEGF抗體包括與雜交瘤ATCC HB 10709所生成的單克隆抗VEGF抗體A4. 6. 1結(jié)合相同表位的單克隆抗體；重組人源化抗-VEGF單克隆抗體(根據(jù)I^resta等癌癥研究(CancerRes.) 57 :4593-4599(1997)產(chǎn)生)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗-VEGF 抗體是“貝伐珠單抗(Bevacizumab，BV) ”、也稱(chēng)為“rhuMAb VEGF”或“AVASTIN ”。 其包含突變的人IgGl構(gòu)架區(qū)和來(lái)自鼠抗hVEGF單克隆抗體A. 4. 6. 1 (其阻斷人VEGF結(jié)合其受體)的抗原結(jié)合互補(bǔ)性決定區(qū)。貝伐珠單抗大約93%的氨基酸序列(包括大部分構(gòu)架區(qū))衍生自人IgGl，而大約7%的序列衍生自鼠抗體A4. 6.1。貝伐珠單抗具有約149,000 道爾頓的分子量，而且是糖基化的。貝伐珠單抗已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)用于聯(lián)合其它化學(xué)治療方案來(lái)治療轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌(metastatic colorectal cancer(CRC))和非小細(xì)胞肺癌 (NSCLC)。Hurwitz 等，N. Engl. J. Med.(新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志)350 :2335-42(2004) ；Sandler 等，N. Engl. J.Med.(新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志)355 :2M2_5(K2006)。目前，貝伐珠單抗在許多正在進(jìn)行的臨床試驗(yàn)中進(jìn)行研究以用于治療多種癌癥適應(yīng)癥。Kerbel，J. Clin. Oncol.(臨床腫瘤學(xué))19 :45S-51SQ001) ；De Vore 等，Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 19 :485a. (2000)； Hurwitz 等，Clin. Colorectal Cancer 6 :66-69 (2006) ； Johnson 等，Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 20 :315a(2001) ；Kabbinavar 等 J. Clin. Oncol.(臨床腫瘤學(xué))21 :60-65(2003)； Miller 等，Breast Can. Res. Treat. 94 =Suppl 1 :S6 (2005)。貝伐珠單抗和其它人源化抗VEGF抗體進(jìn)一步記載于2005年2月沈日授權(quán)的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6，884，879。另外的抗體包括G6或B20系列抗體(例如G6-3UB20-4. 1)，如PCT
發(fā)明者亞瑟·E·雷耶斯二世, 史蒂夫·艾普勒, 埃米·C·彼得森, 尼爾森·L·瓊布, 布蘭登·C·本德, 普里蒂·赫格德, 項(xiàng)洪, 馬克·麥錢(qián)特 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司