專(zhuān)利名稱(chēng)：葉酸鹽、其組合物和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及葉酸鹽、其組合物和用途；特別地，本發(fā)明描述了晶體和無(wú)定形化合 物，以及其組合物和用途，所述化合物是至少一種有機(jī)堿的葉酸鹽或還原葉酸鹽，或者其天 然或非天然的異構(gòu)體。
背景技術(shù)：
葉酸，即N-[4-[[(2-氨基-1，4-二氫-4-氧代-6-蝶啶基)甲基]氨基]苯甲酰 基]-L-谷氨酸，和葉酸鹽以及其陰離子，是水溶性維生素B9以及二氫葉酸和四氫葉酸的前 體形式，和其各自陰離子的形式。它們大多以其綴合物的形式天然存在于食物中，特別是在 肝臟、腎臟、酵母、水果和綠葉蔬菜中，也可以作為補(bǔ)充劑服用?？缮藤?gòu)的葉酸，如上文所述 的其衍生物，仍是合成制備的。葉酸以黃色或淡桔黃色晶體粉末的形式存在，微溶于水且不溶于乙醇；易溶于堿 性氫氧化物和碳酸鹽的稀溶液。葉酸的水溶液對(duì)熱敏感，在光和/或核黃素存在的情況下 迅速分解；因此應(yīng)將溶液低溫、避光儲(chǔ)存。眾所周知，復(fù)合B維生素幫助機(jī)體將碳水化合物轉(zhuǎn)化為葡萄糖，其代謝以產(chǎn)生能 量。這些維生素對(duì)脂肪和蛋白質(zhì)的降解是必需的，在維持消化道內(nèi)壁肌源性緊張和促進(jìn)神 經(jīng)系統(tǒng)、皮膚、頭發(fā)、眼、口腔和肝臟的健康中發(fā)揮重要作用。也為人所知的是，葉酸對(duì)于新細(xì)胞的產(chǎn)生和維持是必需的。這在例如嬰兒期和懷 孕階段的快速細(xì)胞分裂期和生長(zhǎng)期特別重要。DNA復(fù)制需要葉酸。因此葉酸缺乏阻礙DNA 合成和細(xì)胞分裂，特別是在臨床上影響骨髓，快速細(xì)胞更新的部位。由于RNA和蛋白質(zhì)合成 不受阻礙，產(chǎn)生大血紅細(xì)胞，即巨成紅細(xì)胞，導(dǎo)致巨紅細(xì)胞性貧血，例如巨成紅細(xì)胞性貧血 (在乳糜瀉中可見(jiàn))，以及營(yíng)養(yǎng)源性貧血或懷孕期、嬰兒期或兒童時(shí)期的貧血。因此，成人和 兒童均需要葉酸以形成正常的紅細(xì)胞和預(yù)防貧血。葉酸也幫助預(yù)防可導(dǎo)致癌癥的DNA的變 化。也為人所知的是，例如不同四氫葉酸衍生物的葉酸衍生物可以用作藥物或用于制 備其它衍生物的基礎(chǔ)物質(zhì)。然而，也已知四氫葉酸和其衍生物具有極不穩(wěn)定性，特別是由于 它們對(duì)氧化的敏感性。特別地，5-甲基四氫葉酸作為主要用于腫瘤的藥物成分、作為與甲氨蝶呤和5-氟 尿嘧啶治療的伴隨治療和在與懷孕、抗生素治療等相關(guān)的葉酸缺乏性貧血治療中具有重要 性。在葉酸鹽和還原葉酸鹽中，鈣鹽可以作為相對(duì)最穩(wěn)定的衍生物被提及US 5，817，659 和 US 6，441，168 公開(kāi)了晶體鹽，優(yōu)選 5-甲基-(6R，S) -、- (6S)-或-(6R)-四氫 葉酸的鈣鹽，所述鹽每當(dāng)量所述酸具有至少一個(gè)當(dāng)量結(jié)晶水。5-甲基四氫葉酸鈣鹽是市面上唯一沒(méi)有進(jìn)一步代謝就能直接穿透血/腦屏障的 葉酸衍生物。天然存在的5-甲基四氫葉酸單獨(dú)以S形式存在；R形式是生化上無(wú)活性的， 通過(guò)腎臟排泄。
4
已報(bào)道了這些鹽在水中的不可溶性。此外，供人和動(dòng)物消耗的包括葉酸鹽和/或還原葉酸鹽的諸多組合物，以多種形 式與維生素、精氨酸、賴氨酸、硫胺和/或其它活性成分一同公開(kāi)于例如US 5817659、US 5，997，915、US 6，093，703、US6, 241，996、US 6，254，904、US 6，261，600、US 6271374、US 6，440，450、US 6441168、US 6，444，218、US 6，451，360、US 6，514，973、US6, 544，944、US 6596721、US 6，605，646、US 6，673，381、US 6，808，725、US 6，914，073、US 6，921，754、US 6，995，158、US 2002/0094970, US 2004/0219262、US 2005/0113332 和 US 2006/0063768 中，其可作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑或用于多種疾病的治療和預(yù)防，所述疾病例如神經(jīng)學(xué)、病理生理學(xué) 和心血管的疾病，關(guān)節(jié)炎和炎癥病況。因此依然需要更高的化學(xué)穩(wěn)定性以及所期望的水溶性使葉酸鹽和/或還原葉酸 鹽和/或包含這類(lèi)化合物的組合物在沒(méi)有任何具體的預(yù)防下的醫(yī)藥應(yīng)用成為可能。

發(fā)明內(nèi)容
已出乎意料地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)本發(fā)明可得到長(zhǎng)期持續(xù)穩(wěn)定性以及特有的高水溶性。實(shí)際上，根據(jù)第一方面，本發(fā)明涉及選自D-葡萄糖胺和D-半乳糖胺的至少一種有 機(jī)堿的，取代的或未取代的葉酸鹽或還原葉酸鹽，或其天然或非天然異構(gòu)體的晶體或無(wú)定 形化合物。優(yōu)選地，本發(fā)明的還原葉酸鹽具有(6R，S)、(6S)或(6R)構(gòu)型，并且特別為二氫葉 酸鹽或四氫葉酸鹽。本發(fā)明的葉酸鹽和還原葉酸鹽優(yōu)選自D-葡萄糖胺葉酸鹽、D-葡萄糖胺二氫葉酸 鹽、D-葡萄糖胺四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺葉酸鹽、D-半乳糖胺二氫葉酸鹽、D-半乳糖胺四 氫葉酸鹽，所述鹽是未取代的或用5-甲基、5-甲酰基、10-甲?；?、5，10-亞甲基、5，10-亞 甲基結(jié)構(gòu)部分取代，無(wú)論何時(shí)考慮，所述化合物為(6R，S)、(6S)或(6R)構(gòu)型。更優(yōu)選地，本發(fā)明的葉酸鹽和還原葉酸鹽選自D-葡萄糖胺葉酸鹽、D-半乳糖胺 葉酸鹽、D-葡萄糖胺(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺(6S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺 (6R)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺(6S)-四氫葉酸鹽、D-半 乳糖胺(6R)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺5-甲基_(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺5-甲 基_ (6S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺5-甲基-(6R)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基-(6R， S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基-(6R)-四 氫葉酸鹽。根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明的還原葉酸鹽為(6S)構(gòu)型。仍更優(yōu)選地，葉酸鹽和還原葉酸鹽選自D-葡萄糖胺5-甲基_(6R，S)-四氫葉酸 鹽、D-葡萄糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基-(6R， S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺葉酸鹽。D-葡萄糖胺5-甲基-(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺5_甲基-(6S)-四氫葉酸 鹽和D-葡萄糖胺葉酸鹽是本發(fā)明最優(yōu)選的化合物。也優(yōu)選地，本發(fā)明化合物是無(wú)定形狀態(tài)。盡管本領(lǐng)域一般使用術(shù)語(yǔ)“葉酸鹽”，以共同意指與葉酸結(jié)構(gòu)相關(guān)且具有類(lèi)似生物 學(xué)活性的諸多化學(xué)形式，但是在本申請(qǐng)文件中，它將一般意指取代或未取代的葉酸的鹽和其任何天然或非天然異構(gòu)體和/或其混合物，然而術(shù)語(yǔ)“還原葉酸鹽”將一般意指取代或未 取代的二氫葉酸或四氫葉酸的鹽和其任何天然或非天然異構(gòu)體。本發(fā)明化合物顯示特別長(zhǎng)期持續(xù)性的化學(xué)穩(wěn)定性，這實(shí)際上保證純度甚至在幾個(gè) 月之后完全不變，以及相關(guān)葉酸鹽或還原葉酸鹽結(jié)構(gòu)部分的效價(jià)(titre)結(jié)果基本上不變。本發(fā)明化合物的另一特性仍可在本發(fā)明化合物的葉酸鹽和還原葉酸鹽的平衡離 子分子中見(jiàn)到，所述分子已存在動(dòng)物體內(nèi)，不言而喻地顯示無(wú)毒性。除了它們的罕見(jiàn)高化學(xué)穩(wěn)定性，也可以注意到，本發(fā)明的D-葡萄糖胺和D-半乳糖 胺化合物顯示令人意想不到的完全水溶性(甚至比lg/ml更高)，其不言而喻地意味著極好 的生物利用度，這與迄今為止已知的其它葉酸鹽和還原葉酸鹽，例如，堿金屬鹽和例如鈣鹽 的堿土金屬鹽相反。根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及包含至少一種本發(fā)明化合物的組合物。由于技術(shù)人員以本領(lǐng)域的常識(shí)為基礎(chǔ)將理解，可以將本發(fā)明組合物配制成多種形 式，固體(f. i.片劑)或液體(f. i.溶液)，優(yōu)選腸胃外和/或口服藥物制劑的形式，并且所 述組合物還可以包含其它無(wú)活性的和/或活性成分。在這類(lèi)其它成分之中，本發(fā)明組合物 也可以并且優(yōu)選含有至少一種下列物質(zhì)乳糖單水合物、微晶體纖維素、淀粉乙醇酸鈉、硬 脂酸、維生素(特別是，維生素A、維生素B (Bi, B2, B6, B12)、維生素C、抗壞血酸、抗壞血酸 鹽、維生素D (D3)、維生素E、維生素K、維生素PP)、精氨酸、賴氨酸、硫胺、必需的飽和或不飽 和的ω-3和/或ω-6脂肪酸(優(yōu)選DHA、ARA、EPA)、SAMe、維生素B12、泛醌、益生菌劑(乳 酸桿菌(lactobacilli)、孢子、酵母)、磷脂、絲氨酸、膽堿、肌醇、乙二胺、植物提取物(越桔 (blueberry)、白矢車(chē)菊苷元(leucocyanidins)、銀杏、人參、綠茶、纈草、西番蓮、春黃菊)、 褪黑激素、礦物質(zhì)、少量元素(oligoelement)等，根據(jù)需要和病例可表現(xiàn)出的情況，本發(fā)明 化合物可以以有效量給予需要其的受試者。僅為舉例，本發(fā)明化合物和/或組合物可以以受試者每日需要的葉酸的5%至 3000%，更優(yōu)選5%至200%的量給予。特別地，每劑量單位，劑量可以達(dá)到1至2，OOOyg/ 天，更優(yōu)選1 μ g至500 μ g，最優(yōu)選20至200 μ g/天，特別是5 μ g至150 μ g。根據(jù)另一方面，本發(fā)明公開(kāi)了，上文定義的本發(fā)明的至少一種化合物和/或一種 組合物在制備藥物、食品添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑中的用途，所述藥物、食品添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充 劑用于預(yù)防和/或治療受給予葉酸鹽和還原葉酸鹽的積極影響的缺陷或疾病。僅為舉例，上文定義的本發(fā)明化合物和/或組合物可以用于藥物、食品添加劑或 營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的制備，所述藥物、食品添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑用于預(yù)防和/或治療神經(jīng)學(xué)上的 疾病，例如，與癡呆和空泡性脊髓病相關(guān)的亞急性腦炎；病理生理學(xué)的血管和心血管疾病， 例如過(guò)早(premature)閉塞性動(dòng)脈疾病、在嬰兒期和兒童時(shí)期中嚴(yán)重的血管疾病、進(jìn)行性 動(dòng)脈狹窄、間歇性跛行、腎血管高血壓、缺血性腦血管疾病、過(guò)早視網(wǎng)膜動(dòng)脈和視網(wǎng)膜靜脈 閉塞、腦閉塞性動(dòng)脈疾病、閉塞性外周動(dòng)脈疾病、由于血栓栓塞疾病和/或缺血性心臟病導(dǎo) 致的過(guò)早死亡；自身免疫疾病，例如，牛皮癬、乳糜瀉、關(guān)節(jié)炎和炎癥病況；由于葉酸鹽缺乏 導(dǎo)致的巨成紅細(xì)胞性貧血、腸吸收障礙，用于降低女性流產(chǎn)和/或生產(chǎn)具有神經(jīng)管缺陷、唇 裂缺陷和/或顎裂缺陷的胎兒的風(fēng)險(xiǎn)，用于保持和/或正?；甙腚装彼崴胶?或代謝； DNA和RNA的合成和/或功能和/或變化的改變和細(xì)胞合成的改變；抑郁癥。
6
由于技術(shù)人員將易于理解，可以通過(guò)簡(jiǎn)單應(yīng)用本領(lǐng)域公知常識(shí)制備本發(fā)明化合 物；但是，作為非限制性實(shí)施例，可以如下制備本發(fā)明化合物將期望的取代或未取代的葉 酸或還原葉酸加入到含有D-葡萄糖胺或D-半乳糖胺的水溶液中，優(yōu)選保持在氮?dú)鈿夥障?并攪拌，堿的摩爾量大約是酸的200至300%。結(jié)果，期望的酸完全溶解，并由此得到均勻和澄清的溶液，所述溶液pH為約6. 3至 8. 0且包含期望的葉酸鹽或還原葉酸鹽。采用摩爾量為200%的期望的取代或未取代的葉酸或還原葉酸從D-葡萄糖胺或 D-半乳糖胺所得的鹽是完全水溶的，通過(guò)簡(jiǎn)單應(yīng)用本領(lǐng)域公知常識(shí)，例如且可代替地通過(guò) 直接冷凍干燥得到的期望的葉酸鹽或還原葉酸鹽溶液，或者通過(guò)噴霧干燥得到的期望的葉 酸鹽或還原葉酸鹽溶液，可不言而喻地非常容易地收集所述鹽，這是技術(shù)人員將迅速實(shí)現(xiàn) 的?？梢杂袃?yōu)勢(shì)地注意到，無(wú)論所采取的回收方式如何，以近似定量的量得到了本發(fā) 明的期望的葉酸鹽或還原葉酸鹽。
具體實(shí)施例方式下列實(shí)施例在沒(méi)有限制本發(fā)明的情況下闡述本發(fā)明。實(shí)施例1D-葡萄糖胺5-甲基-(6R，S)-四氫葉酸鹽的制備將4. 60g (IOmmol) 5_甲基-(6R，S)-四氫葉酸分批加入并完全溶解到在氮?dú)庀聰?拌的30ml D-葡萄糖胺(3. 58g，20mmol)的水溶液中。將產(chǎn)生的溶液(pH 6.53)冷凍干燥， 得到8. 72g標(biāo)題產(chǎn)物。分析數(shù)據(jù)5-甲基_(6R，S)-四氫葉酸的HPLC效價(jià)測(cè)定計(jì)算值為56. 18% (干燥產(chǎn)物)；實(shí) 測(cè)值為55. 22% (理論值的98.3% )；比旋光度[a ]2°D =+54.2°化=1，在水中)NMR (D2O) :7. 45(d，2H) ；6.55(d，2H) ；5. 20 (b s，2H) ；4. 05 (m, H) ；3· 70-3. 40 (m， 7H) ； 3. 38-3. 00(m，6H) ；2. 99-2. 70 (m，4H) ；2. 40(s，3H) ；2. 15-2. 05 (m，2H) ； 2. 05-1. 90 (m， 1H) ；1. 90-1. 75 (m, 1H)。實(shí)施例2D-葡萄糖胺5-甲基-(6R，S)-四氫葉酸鹽的制備將9. 19g (20mmol) 5_甲基-(6R，S)-四氫葉酸分批加入并完全溶解到在氮?dú)庀聰?拌的60ml D-葡萄糖胺(7. 12g,40mmol)水溶液中。將產(chǎn)生的溶液(pH 6.53)噴霧干燥，得 到16. 9g標(biāo)題產(chǎn)物。分析數(shù)據(jù)5-甲基_(6R，S)-四氫葉酸的HPLC效價(jià)測(cè)定計(jì)算值56. 18% (干燥產(chǎn)物)；實(shí)測(cè) 值55. 13 (理論值的98. 2% )；比旋光度[a]2°D = +54. 0 (C = 1，水中)NMR (D2O) :7. 45 d，2H) ；6.55(d，2H) ；5. 20 (b s，2H) ；4. 05 (m, H) ；3· 70-3. 40 (m， 7H) ；3. 38-3. 00(m，6H) ；2. 99-2. 70 (m,4H) ；2.40(s，3H) ；2. 15-2. 05 (m，2H) ；2. 05-1. 90 (m，1H) ；1. 90-1. 75 (m, 1H)。實(shí)施例3D-葡萄糖胺5-甲基_(6S)_四氫葉酸鹽的制備將通過(guò)拆分相應(yīng)的(6R，S) -5-甲基四氫葉酸得到的4. 60g (IOmmol) 5_甲 基-(6S)-四氫葉酸分批加入并完全溶解到在氮?dú)庀聰嚢璧?0ml D-葡萄糖胺(3. 58g， 20mmol)的水溶液中。將產(chǎn)生的溶液(pH6. 53)冷凍干燥，得到8. 72g標(biāo)題產(chǎn)物。分析數(shù)據(jù)5-甲基-(6S)-四氫葉酸的HPLC效價(jià)測(cè)定計(jì)算值56. 18% (干燥產(chǎn)物)；實(shí)測(cè)值 55. 7% (理論值的 99. 1% )；比旋光度[α]2°D = +42. 6° (C = 1，在水中)NMR (D2O) :7. 45(d，2H) ；6.55(d，2H) ；5. 20 (b s，2H) ；4. 05 (m, H) ；3. 70-3. 40 (m， 7H) ； 3. 38-3. 00(m，6H) ；2. 99-2. 70 (m，4H) ；2.40(s，3H) ；2. 15-2. 05 (m，2H) ； 2. 05-1. 90 (m， 1H) ；1. 90-1. 75 (m, 1H)。實(shí)施例4D-葡萄糖胺L-葉酸鹽的制備將4. 41g (IOmmol) L-葉酸分批加入并完全溶解到在氮?dú)庀聰嚢璧?0ml D-葡萄糖 胺(3.58g，20mmol)水溶液中。將產(chǎn)生的溶液(pH 6.53)冷凍干燥，得到7. 95g標(biāo)題產(chǎn)物。分析數(shù)據(jù)L-葉酸的HPLC效價(jià)測(cè)定計(jì)算值55. 2% (干燥產(chǎn)物)；實(shí)測(cè)值54. 6 (理論值的 99. 0% )；比旋光度[α]2°D = +44. 5° (C = 1，水中)NMR(D2O) :8.42(s，lH) ；7.45(d，2H) ；6.42(d，2H) ；5.20(bs，2H) ；4.25(s，2H)； 4. 05 (m, 1H) ； 3. 75-3. 45(m，6H) ；3. 35-3. 20 (m，2H) ；3. 15-3. 00 (m，2H) ； 2. 15-2. 05 (m，2H)； 2. 05-1. 90 (m, 1H) ；1. 90-1. 75 (m, 1H)。實(shí)施例5D-半乳糖胺5-甲基_(6R，S)-四氫葉酸鹽的制備將4. 60g (IOmmol) 5_甲基-(6R，S)-四氫葉酸分批加入并完全溶解到在氮?dú)庀聰?拌的30ml D-半乳糖胺(3.58g，20mmol)水溶液中。將產(chǎn)生的溶液(pH 6.53)冷凍干燥，得 到8. 72g標(biāo)題產(chǎn)物。分析數(shù)據(jù)5-甲基_(6R，S)-四氫葉酸的HPLC效價(jià)測(cè)定計(jì)算值56. 18% (干燥產(chǎn)物)；實(shí)測(cè) 值55.5% (理論值的98.8% )；比旋光度[a]2°D =+51.43° (C=l，水中)NMR (D2O) :7. 45(d，2H) ；6.55(d，2H) ；5. 20 (b s，2H) ；4.15 (m，H) ；3. 70-3. 35 (m, 7H) ；3. 30-2. 85 (m, 10H) ；2. 40(s，3H) ；2. 15-2. 05 (m，2H) ；2. 05-1. 90 (m，1H) ； 1. 90-1. 75 (m， 1H)。實(shí)施例6D-半乳糖胺5-甲基_(6S)_四氫葉酸鹽的制備將通過(guò)拆分相應(yīng)的(6R，S) -5-甲基四氫葉酸得到的4. 60g (IOmmol) 5_甲基_(6S)_四氫葉酸分批加入并完全溶解到在氮?dú)庀聰嚢璧?0ml D-半乳糖胺(3. 58g， 20mmol)水溶液中。將產(chǎn)生的溶液(pH 6.53)冷凍干燥，得到8. 72g標(biāo)題產(chǎn)物。分析數(shù)據(jù)5-甲基_(6R，S)-四氫葉酸的HPLC效價(jià)測(cè)定計(jì)算值56. 18% (干燥產(chǎn)物)；實(shí)測(cè) 值55.5% (理論值的98.8% )；比旋光度[a]2°D =+66.5° (C=l，水中)NMR (D2O) :7. 45(d，2H) ；6.55(d，2H) ；5. 20 (b s，2H) ；4.15 (m，H) ；3. 70-3. 35 (m, 7H) ；3. 30-2. 85 (m, 10H) ；2. 40(s，3H) ；2. 15-2. 05 (m，2H) ；2. 05-1. 90 (m，1H) ； 1. 90-1. 75 (m， 1H)。實(shí)施例7D-半乳糖胺L-葉酸鹽的制備將4. 41g (IOmmol) L-葉酸分批加入并完全溶解到在氮?dú)庀聰嚢璧?0ml D-半乳糖 胺(3.58g，20mmol)水溶液中。將產(chǎn)生的溶液(pH 6.53)冷凍干燥，得到7. 95g標(biāo)題產(chǎn)物。分析數(shù)據(jù)L-葉酸的HPLC效價(jià)測(cè)定計(jì)算值55. 2 % (干燥產(chǎn)物)；實(shí)測(cè)值54. 7 (理論值的 99. 1% )；比旋光度[a]2°D = +49. 77 (C = 1，在水中)NMR(D2O) :8.42(s，lH) ；7.45(d，2H) ；6.42(d，2H) ；5.20(bs，2H) ；4.25(s，2H)； 4. 05 (m, 1H) ；3. 75-3. 45(m，6H) ；3. 35-3. 20 (m，2H) ；3. 15-3. 00 (m，2H) ； 2. 15-2. 05 (m，2H)； 2. 05-1. 90 (m, 1H) ；1. 90-1. 75 (m, 1H)。穩(wěn)定性將樣品避光保存于密閉容器中，在6和12個(gè)月之后測(cè)量其純度和效價(jià)，從而測(cè)試 了呈粉末形式的且在密封鋁箔袋中的列于下表的化合物的穩(wěn)定性。
化合物起始值6個(gè)月后12個(gè)月后純度效價(jià)純度效價(jià)純度效價(jià)D-GLU 葉酸鹽99. 154. 698. 854. 398. 754. 0D-GAL 葉酸鹽99. 254. 899, 154. 598. 754. 2D-GLU 5-MTHF99. 155. 298. 955. 099. 054. 8D-GLU (6S)-5-MTHF99. 355. 799. 055. 498. 555. 1D-GAL (6R, S)-5-MTHF99. 155. 598. 955. 298. 755. 3D-GLU = D-葡萄糖胺；D-GAL = D-半乳糖胺通過(guò)比較，可以注意到，在9個(gè)月后，公開(kāi)于US 5，817，659(實(shí)施例1)中的晶體
9(6R，S)-, (6S)-和(6R)-四氫葉酸鈣鹽顯示大約2%的效價(jià)降低，然而在12個(gè)月之后，在 US 6，271，374(實(shí)施例1)中報(bào)道的晶體(6S)-和(6R)-四氫葉酸鈣鹽的效價(jià)降低約7%。 至于在US6，441，168 (實(shí)施例1)中報(bào)道的晶體5-甲基_(6S)_四氫葉酸鈣鹽，在12個(gè)月之 后效價(jià)降低約為1%。根據(jù)上表顯示的數(shù)據(jù)，進(jìn)一步注意到在12個(gè)月之后效價(jià)降低小于1%，對(duì)本發(fā)明 化合物可以安全確定12個(gè)月的有效期。由于它們的純度和效價(jià)甚至在12個(gè)月之后恰恰落 入必需的規(guī)范內(nèi)，列于上表的任何化合物顯示高穩(wěn)定性。特別地，通過(guò)HPLC測(cè)定其純度和 效價(jià)，觀察了酸結(jié)構(gòu)部分的穩(wěn)定性。生物利用度采用12只體重為200_300g的小鼠進(jìn)行生物學(xué)試驗(yàn)，對(duì)每只小鼠給予一個(gè)3mg的 膠囊，所述膠囊含有如下文報(bào)道的分散于乳糖中的所選化合物的劑量。在常規(guī)時(shí)間間隔(0，30，60，95，120分鐘)之后依次評(píng)價(jià)所選化合物的血液值。對(duì)下列化合物D_葡萄糖胺葉酸鹽(60 μ g)、D-葡萄糖胺[6R，S] 5-甲基四氫葉 酸鹽(61yg)、D-葡萄糖胺[6S]5-甲基四氫葉酸鹽(61 μ g)、D-半乳糖胺葉酸鹽(60 μ g)、 D-半乳糖胺[6R，S]5-甲基四氫葉酸鹽(61 μ g)和D-半乳糖胺[6S]5_甲基四氫葉酸 鹽(61yg)進(jìn)行測(cè)試并與下列化合物進(jìn)行比較無(wú)定形葉酸鈣鹽(38yg)、無(wú)定形[6R， S] 5-甲基四氫葉酸鈣鹽(39 μ g)、無(wú)定形[6S]-5-甲基四氫葉酸鈣鹽(39 μ g)、晶體葉酸鈣 鹽(39μ g)、晶體[6R，S]-5-甲基四氫葉酸鈣鹽(39 μ g)和晶體[6S]_5_甲基四氫葉酸鈣 鹽(39 μ g)。生物學(xué)試驗(yàn)顯示，與給予動(dòng)物類(lèi)似劑量的相應(yīng)葉酸和還原葉酸鈣鹽所發(fā)現(xiàn)的值相 比，通過(guò)給予本發(fā)明化合物導(dǎo)致的血液水平高約20%。已進(jìn)一步注意到，如下表所顯示，與給予晶體鈣鹽相比，通過(guò)給予無(wú)定形鈣鹽，生 物利用度有輕微而顯著的增加(大約10% )。
時(shí)間 (h)D-Glu F (無(wú) 定形) (nmol/1)D-Glu 5-MTHF (無(wú)定形) (nmol/1)D-Glu (6S)-5-MTHF (無(wú)定形) (nmol/1)Ca 5-MTHF (晶 體)(nmol/1) (比較的)Ca 5-MTHF (無(wú) 定形) (nmol/1)(比 較的)0’ 575’ 3 + 4. 383，2 + 4. 983’ 7 + 5. 263, 2 + 4. 568, 2 + 5. 1179，8 + 5. 286. ,5 + 4. 986，1 + 5. 069. 0 + 6. 173, 2 + 5. 91,578，4 + 4.383, 8 + 4. 383，7 + 4. 370, 5 + 4. 375，2 + 4. 3276，8 + 4. 382’ 8 + 4. 383 + 4. 370’1 + 4. 374, 1 + 4. 3D-Glu = D-葡萄糖胺；D-Gal = D-半乳糖胺；F =葉酸鹽因此明顯的是，本發(fā)明的D-葡萄糖胺和D-半乳糖胺化合物的高水溶性如何積極 和顯著影響其吸收，因此增強(qiáng)所有分子活性結(jié)構(gòu)部分的生物利用度。
10
權(quán)利要求
晶體或無(wú)定形化合物，所述化合物是至少一種有機(jī)堿的取代或未取代的葉酸鹽或還原葉酸鹽，或其天然或非天然異構(gòu)體，所述有機(jī)堿選自D 葡萄糖胺和D 半乳糖胺。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述還原葉酸鹽具有(6R，S)、(6S)或(6R)構(gòu)型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中所述還原葉酸鹽是二氫葉酸鹽或四氫葉酸鹽。
4.根據(jù)先前權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物，其中所述葉酸鹽和還原葉酸鹽選自D-葡萄糖 胺葉酸鹽、D-葡萄糖胺二氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺葉酸鹽、D-半 乳糖胺二氫葉酸鹽、D-半乳糖胺四氫葉酸鹽，所述鹽是未取代的或用5-甲基、5-甲?；?、 10-甲?；?，10_亞甲基、5，10_亞甲基結(jié)構(gòu)部分取代，無(wú)論何時(shí)考慮，所述化合物為(6R， S)、(6S)或(6R)構(gòu)型。
5.根據(jù)先前權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物，其中所述葉酸鹽和還原葉酸鹽選自D-葡萄糖 胺葉酸鹽、D-半乳糖胺葉酸鹽、D-葡萄糖胺(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺(6S)-四 氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺(6R)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺 (6S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺(6R)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺5-甲基-(6R，S)-四氫葉 酸鹽、D-葡萄糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺5-甲基-(6R)-四氫葉酸鹽、 D-半乳糖胺5-甲基-(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽、D-半 乳糖胺5-甲基-(6R)-四氫葉酸鹽。
6.根據(jù)先前權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物，其中所述葉酸鹽和還原葉酸鹽選自D-葡萄糖 胺5-甲基-(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺葉 酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基-(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽、 D-半乳糖胺葉酸鹽。
7.根據(jù)先前權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物，其是D-葡萄糖胺5-甲基_(6R，S)-四氫葉酸 鹽或D-葡萄糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的化合物，其是D-葡萄糖胺葉酸鹽。
9.根據(jù)先前權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物，其中所述還原葉酸鹽是(6S)構(gòu)型。
10.根據(jù)先前權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物，其是無(wú)定形狀態(tài)。
11.根據(jù)先前權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物，其中所述還原葉酸鹽是D-葡萄糖胺5-甲 基_ (6S)-四氫葉酸鹽或D-半乳糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽。
12.根據(jù)先前權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物，其是D-葡萄糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽。
13.包含至少一種根據(jù)先前權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物的組合物。
14.根據(jù)先前權(quán)利要求的組合物，其中化合物是晶體或無(wú)定形化合物，所述化合物是至 少一種有機(jī)堿的取代或未取代的葉酸鹽或還原葉酸鹽，或其天然或非天然異構(gòu)體，所述有 機(jī)堿選自D-葡萄糖胺和D-半乳糖胺，其中所述組合物還包含至少一種下列物質(zhì)乳糖單水 合物、微晶體纖維素、淀粉乙醇酸鈉、硬脂酸、維生素、抗壞血酸、抗壞血酸鹽、精氨酸、賴氨 酸、硫胺、必需的飽和或不飽和的ω-3和/或ω-6脂肪酸、SAMe、維生素B12、泛醌、益生菌 劑、磷脂、絲氨酸、膽堿、肌醇、乙二胺、植物提取物、褪黑激素、礦物質(zhì)、少量元素。
15.根據(jù)權(quán)利要求11或14的組合物，其中所述葉酸鹽和還原葉酸鹽選自D-葡萄糖胺 葉酸鹽、D-半乳糖胺葉酸鹽、D-葡萄糖胺(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺(6S)-四氫葉酸 鹽、D-葡萄糖胺(6R)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺(6S)-四 氫葉酸鹽、D-半乳糖胺(6R)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺5-甲基-(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-葡2萄糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺5-甲基-(6R)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺 5-甲基-(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲 基-(6R)-四氫葉酸鹽。
16.根據(jù)權(quán)利要求11-15任一項(xiàng)的組合物，其中所述葉酸鹽和還原葉酸鹽選自D-葡萄 糖胺5-甲基-(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽、D-葡萄糖胺 葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基_(6R，S)-四氫葉酸鹽、D-半乳糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸 鹽、D-半乳糖胺葉酸鹽。
17.根據(jù)權(quán)利要求11-16任一項(xiàng)的組合物，其中所述化合物是D-葡萄糖胺5-甲 基-(6R，S)-四氫葉酸鹽或D-葡萄糖胺5-甲基-(6S)-四氫葉酸鹽。
18.根據(jù)權(quán)利要求11-17任一項(xiàng)的組合物，其中所述化合物是D-葡萄糖胺葉酸鹽。
19.根據(jù)權(quán)利要求11-18任一項(xiàng)的組合物，其中維生素、脂肪酸、益生菌劑和植物提取 物分別選自維生素A、維生素B、維生素C、維生素D、維生素E、維生素K、維生素PP ；DHA、ARA、 EPA ；乳酸桿菌、孢子、酵母；越桔、白矢車(chē)菊苷元、銀杏、人參、綠茶、纈草、西番蓮、春黃菊。
20.根據(jù)權(quán)利要求11-19任一項(xiàng)的組合物，其中維生素B是維生素B1、B2、B6或B12，并 且維生素D是維生素D3。
21.根據(jù)先前權(quán)利要求任一項(xiàng)的至少一種化合物和/或一種組合物在制備藥物、食品 添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑中的用途，所述藥物、食品添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑用于預(yù)防和/或治療 受給予葉酸鹽和還原葉酸鹽積極影響的缺陷或疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及葉酸鹽、其組合物和用途；特別地，本發(fā)明描述了晶體或無(wú)定形化合物，以及其組合物和用途，所述化合物是含有至少一種有機(jī)堿的取代或未取代的葉酸鹽或還原葉酸鹽，或其天然或非天然異構(gòu)體。本發(fā)明化合物顯示長(zhǎng)期持續(xù)穩(wěn)定性以及特有高水溶性。
文檔編號(hào)C07D475/04GK101970439SQ200880127258
公開(kāi)日2011年2月9日 申請(qǐng)日期2008年2月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月20日
發(fā)明者D·比安奇, E·瓦洛提, M·瓦勒提 申請(qǐng)人:靈知股份公司