專利名稱：：具有單個氨基酸的化學(xué)連接物及其偶聯(lián)物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供附接至藥物以及配體、并且可在活體內(nèi)切割的具有單個氨基酸的連接物。該連接物可用于形成本發(fā)明的細(xì)胞毒素的藥物前體以及偶聯(lián)物，連同其他診斷部分與治療部分。
背景技術(shù)：
：許多治療劑(特別是那些在癌癥化學(xué)治療中尤其有效的治療劑)在活體內(nèi)經(jīng)常表現(xiàn)出急性毒性，特別是骨髓毒性以及勦膜毒性連同慢性心臟毒性以及神經(jīng)毒性。這種高毒性可限制其應(yīng)用。令人希望的是發(fā)展出更多并且更安全的特異性治療劑(特別是抗腫瘤劑)以達(dá)到抗腫瘤細(xì)胞的更高的功效并且減小這些產(chǎn)品的副作用(毒性、破壞非腫瘤細(xì)胞等)的數(shù)目以及嚴(yán)重度。一些現(xiàn)存治療劑的另一個困難是它們在血漿中的穩(wěn)定性小于最佳。添加官能團(tuán)來穩(wěn)定這些化合物導(dǎo)致活性的顯著降低。因此，識別一些方式來穩(wěn)定化合物同時維持可接受的治療活性水平，這是令人希望的。數(shù)十年來，對于更加具有選擇性的細(xì)胞毒劑的研究一直是極為活躍的，限制劑量的毒性(即細(xì)胞毒素對正常組織產(chǎn)生的非希望的活性)是癌癥治療失敗的主要原因之一。例如，CC-1065以及多卡霉素類(d畫armycins)已知是極為強(qiáng)力的細(xì)胞毒素。Upjohn公司首次在1981年從澤耳鏈霉菌(Streptomyceszelensis)中分離了CC-1065(Hankaetal.,J.Antibiot.31:1211(1978);Martinetal.，J.Antibiot.33:902(1980);Martinetal.，J.Antibiot.34:1119(1981))并且發(fā)現(xiàn)CC-1065在體外和在實(shí)驗(yàn)動物中都具有有效的抗腫瘤與殺菌活性(Lietal.，CancerRes.42:999(1982))。CC-1065在小溝內(nèi)與雙鏈B-DNA相結(jié)合(Swensonetal.，CancerRes.42:2821(1982))，其中序列優(yōu)先為5'-d(A/GNTTA)-3'以及5'-d(AAAAA)-3',并利用其在分子中呈現(xiàn)的CPI左旋(left-hand)單位對3，腺噤呤的N3位置進(jìn)行烷基化(Hurleyetal.，Science226:843(1984))。盡管CC-1065具有有效的廣泛的抗癌活性，但因?yàn)镃C-1065在實(shí)驗(yàn)動物引起了遲發(fā)性死亡，所以它不能被用于人類。CC-1065以及多卡霉素的許多同系物以及衍生物在本領(lǐng)域是已知的。已對許多化合物的結(jié)構(gòu)、合成以及特性的研究進(jìn)行綜述。參見，例如，Bogeretal.，Angew.Chera.Int.Ed.Engl.35:1438(1996);以及Bogeretal.,Chem.Rev.97:787(1997)。KyowaHakkoKogyaCo.，Ltd.的一個團(tuán)隊(duì)已經(jīng)制備了許多CC-1065衍生物。參見，例如，美國專利號5，101，038;5,641,780;5，187，186;5，070，092;5,703,080;5,070,092;5,641,780;5，101，038;以及5，084，468;以及已公開的PCT申請WO96/10405以及已公開的歐洲申請0537575Al。UpjohnCompany(PharmaciaUpjohn)已經(jīng)在積極制備CC-1065的衍生物。參見，例如，美國專利號5，739，350;4，978，757、5，332，837、以及4，912，227。研究也已集中于處在藥物前體形式的新治療劑的開發(fā)，藥物前體形式是能夠在體內(nèi)通過其結(jié)構(gòu)的某種化學(xué)的或酶的修飾而被轉(zhuǎn)變成藥物(活性治療化合物)的化合物。用于降低毒性的目的，這種轉(zhuǎn)變優(yōu)選地局限于作用部位或靼標(biāo)組織結(jié)構(gòu)域，而非循環(huán)系統(tǒng)或非靶標(biāo)組織。然而，即使藥物前體也有問題，如由于在藥物前體到達(dá)病人體內(nèi)所希望的部位之前存在著分解藥物前體或激活藥物前體的酶，導(dǎo)致許多藥物前體特征為在血液中以及血清中的低穩(wěn)定性。必治妥梅爾施貴寶公司(Bristol-MyersSquibb)已經(jīng)"i兌明了特定溶酶體酶可切割的抗腫瘤藥物偶聯(lián)物。參見，例如美國專利號6,214,345。這個專利提供了一個氨基節(jié)基氧羰基。西雅圖基因公司(SeattleGenetics)已公布了多項(xiàng)申請，美國專利申請2003/0096743以及美國專利申請2003/0130189，它們說明了在藥物遞送劑中的對氨基卡醚類。在這些申請中說明的連接物限于氨基千醚組合物。其他團(tuán)體也說明了連接物。例如參見deGrootefa/.,/.42，5277(1999);deGrootWa人/.ftr《.C力e瓜43，3093(2000);deGrootWa人，/.C力e瓜66，8815，(2001);WO02/083180;Carl"a人，/.艦Ze".24，479，(1981);歸owchike"/.，》艦C力e邁.Ze".8，3347(1998)。這些連接物包括氨基節(jié)醚間隔物、延長的電子級聯(lián)以及環(huán)化間隔物系統(tǒng)、環(huán)化消除間隔物，例如w-氨基氨基羰基以及對氨基卡基氧羰基連接物。細(xì)胞毒素藥物的穩(wěn)定性，包括活體內(nèi)穩(wěn)定性仍是一個有待著手解決的重大議題。此外，多種化合物的毒性使其較為無用，所以需要可降低藥物毒性的組合物，如形成可切割的藥物前體。因此，盡管有本領(lǐng)域的進(jìn)展，仍然需要開發(fā)用于哺乳動物以及特別為人類的治療的改良的治療劑，更確切地為細(xì)胞毒素，該細(xì)胞毒素相對于具有相似結(jié)構(gòu)的已知化合物表現(xiàn)出作用的高特異性、降低的毒性、以及改善的血液中的穩(wěn)定性。本發(fā)明應(yīng)對了這些需要。發(fā)明概要本發(fā)明涉及藥物-配體偶聯(lián)物，其中該藥物與配體通過一個連接物相連接。這些偶聯(lián)物是強(qiáng)力的細(xì)胞毒素，能夠以活性形式被選擇性遞送至有關(guān)的作用部位，然后被切割來釋放活性藥物。一個實(shí)施方案是具有以下化學(xué)式的一種化合物其中L'為取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜烷基；m是一個整數(shù)0、1、2、3、4、5、或6;A^是獨(dú)立地選自下組的一個氨基酸，該組的構(gòu)成為天然氨基酸類和非天然ct氨基酸類；1/為取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、未取代的雜環(huán)烷基、取代的雜環(huán)烷基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的雜芳基；L3為取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜環(huán)烷基；o是0或l;1/是一個連接物成員；P是0或1;^是選自下組的一個成員，該組的構(gòu)成為受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、不受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的標(biāo)記、以及靶向劑；并且D包括一種結(jié)構(gòu)其中環(huán)狀體系A(chǔ)是取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜環(huán)烷基；E以及G是獨(dú)立地選自H、取代和未取代的烷基、取代和未取代的雜烷基、雜原子、以及單鍵中的一員，或E與G相接合來形成一個環(huán)狀體系，該環(huán)狀體系選自取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜芳基、以及取代和未取代的雜環(huán)烷基；X是選自0、S以及NR"中的一員；R"是H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、或?；?；R3為0R11，其中r是H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、二磷酸酯、三磷酸酯、?；(0)R"R13、C(0)0R12、C(0)NR"R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHRT、SR12、或SiR"R"R"，其中R12、R"以及R"是獨(dú)立地選自H、取代和未取代的烷基、取代和未取代的雜烷基、以及取代和未取代的芳基中的一員，其中R"以及R"與它們所附聯(lián)的氮原子或碳原子一起可任選地相接合以形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；R4、R4'、R5、以及W是獨(dú)立地選自下組的成員，該組的構(gòu)成為H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的雜芳基、未取代的雜芳基、取代的雜環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)烷基、鹵素、N02、S03、S02R15、NR15R16、NR"C(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0RI5、CR"-NR"、以及O(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4，、R5以及R5，的任何相鄰的一對與它們所附聯(lián)的碳原子一起相接合以形成一個具有4至6元的、取代或未取代的環(huán)烷基或雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；其中n是l至20的整數(shù)；R"以及R"獨(dú)立地選自H、取代和未取代的烷基、取代和未取代的雜烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜芳基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、以及取代和未取代的肽基，其中R"以及R"與它們所附聯(lián)的氮原子一起可任選地相接合以形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；^是一個單鍵，該單鍵存在或不存在，并且當(dāng)其存在時，r與R7相接合以形成一個環(huán)丙基的環(huán)；并且R'是所迷環(huán)丙基的環(huán)中與W相接合的CH廣t或CH廣，其中Xi為離去基團(tuán)，其中R4、R"、R5、R5'、R11、R12、R13、R15、或R"中的至少一個連接D至化合物的其余部分；或其藥學(xué)上可接受的鹽。任何這些化合物可用作、或用來形成藥物-配體偶聯(lián)物。在又另一個方面，本發(fā)明是關(guān)于藥學(xué)配制品。這種配制品典型包含本發(fā)明的偶聯(lián)化合物以及藥學(xué)上可接受的栽體。在又另一個方面，本發(fā)明涉及使用本發(fā)明的偶聯(lián)化合物的方法。例如，本發(fā)明提供一種殺細(xì)胞的方法，其中本發(fā)明的偶聯(lián)化合物以足夠殺死該細(xì)胞的量給予該細(xì)胞。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種在哺乳動物受試者體內(nèi)使腫瘤的生長延遲或停止的方法，其中本發(fā)明的偶聯(lián)化合物是以足夠使腫瘤生長延遲或停止的量給予該受試者。從以下詳細(xì)說明部分的綜述本發(fā)明的其他方面、優(yōu)點(diǎn)以及目的將是清楚的。附圖簡要說明參照以下各圖來說明本發(fā)明的非限制性且非排他性實(shí)施方案。在附圖中，(除非另外指明)類似的參考號是指各圖中類似的部分。為了更好理解本發(fā)明，將參照以下詳細(xì)說明部分結(jié)合附圖研讀作說明，附圖中圖1至圖9是活體內(nèi)研究中平均腫瘤體積、腫瘤體積中位數(shù)、以及%體重變化中位數(shù)分別相對于給藥后天數(shù)的曲線圖。本發(fā)明的詳細(xì)說明縮寫"Ala"表示丙氨酸。"Boc"表示叔丁氧羰基。"CPI"表示環(huán)丙吡咯并吲咪。"Cbz"表示芐氧羰基。"DCM，，表示二氯甲烷。"DDQ"表示2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌。"DIPEA"表示二異丙基乙胺。"DMDA"表示N,N，-二甲基伸乙基二胺。"RBF，，表示圓底瓶。"DMF，表示N，B-二甲基甲酰胺。"HATU，，表示N-[[(二曱基氨基)-lH-l，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-l-基]亞甲基]-N-甲基六氟磷酸甲銨N-氧化物。符號"E"表示一個用酶可切割的基團(tuán)。"EDCr，表示l-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺。"FM0C"表示9-芴曱氧羰基。"H0At"表示7-氮雜-l-羥基苯并三唑。"Leu"表示亮氨酸。"PABA"表示對氨基苯甲酸。"PEG"表示聚乙二醇。"PMB"表示對甲氧節(jié)基。"TBAF"表示氟化四丁基銨。"TBS0"表示叔丁基二曱基硅烷基醚。"TEA"表示三乙胺。"TFA"表示三氟乙酸。"EDC"表示(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽)。"TBTU"表示(2-(lH-苯并三唑-l-基)-l，1,3，3-四甲基四氟硼酸脲鑰)。"H0BT"表示N-羥基苯并三唑。符號"Q，，表示治療劑、診斷劑、或可檢測的標(biāo)記。定義除非另外限定，此處所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
普通技術(shù)人員所通常理解的相同意義?？傮w而言，此處所使用的命名法以及以下說明的細(xì)胞培養(yǎng)、分子遺傳學(xué)、有機(jī)化學(xué)以及核酸化學(xué)以及雜交中的實(shí)驗(yàn)室程序都是本領(lǐng)域所熟知并且常用的程序。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行核酸合成以及肽合成。總體上，酶促反應(yīng)以及純化步驟是根據(jù)制造商的說明書來進(jìn)行的。技術(shù)以及程序總體上是根據(jù)本領(lǐng)域的常規(guī)方法以及本文件全文所提供的不同的一般性參考文獻(xiàn)來進(jìn)4亍(總體上參見,Sambrookefa/.MolecularCloning:ALaboratoryManual,2ded.(1989)ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,該文獻(xiàn)通過引用結(jié)合在此)，將它們提供用于貫穿本文件全文。此處所使用的命名以及以下說明的分析化學(xué)以及有機(jī)合成的實(shí)驗(yàn)室程序?yàn)楸绢I(lǐng)域所熟知并且常用的程序。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)或其修改用于化學(xué)合成以及化學(xué)分析。術(shù)語"治療劑，，旨在表示一種化合物，當(dāng)該化合物以一種治療上有效的量存在時，可對哺乳動物產(chǎn)生一種所希望的治療效果。用于治療癌癥，希望該治療劑也能夠進(jìn)入靶標(biāo)細(xì)胞。術(shù)語"細(xì)胞毒素"旨在表示一種治療劑，該治療劑對癌細(xì)胞具有所希望的細(xì)胞毒性的效應(yīng)。細(xì)胞毒性一詞表示該藥劑可中止細(xì)胞的生長或殺死細(xì)胞。示例性的細(xì)胞毒素包括(通過舉例而不限于)考布他汀、多卡霉素、CC-1065抗腫瘤抗生素、蒽環(huán)類以及相關(guān)化合物。其他細(xì)胞毒素包括真菌毒素、蓖麻毒蛋白及其類似物、刺孢霉素、阿霉素(doxirubicin)以及美登素f汴生物。"藥物前體"以及"藥物偶聯(lián)物"二詞在此處互換使用。二術(shù)語皆是指一種化合物，該化合物當(dāng)仍然呈偶聯(lián)形式時對細(xì)胞相對無害，但通過位于靶標(biāo)細(xì)胞內(nèi)部或靶標(biāo)細(xì)胞附近的條件(例如酶)可被選擇性降解成為藥理學(xué)的活性形式。術(shù)語"標(biāo)記物"旨在表示在腫瘤或其他醫(yī)療病情的表征中有用的一種化合物，例如可用于診斷、腫瘤的進(jìn)展及由腫瘤細(xì)胞所分泌的各200880005895.0項(xiàng)因子的測定的化合物。標(biāo)記物被視為"診斷劑"的一個子集。與酶的切割結(jié)合所使用的術(shù)語"可選擇的，，是指連接物部分的切割速率高于具有隨機(jī)氨基酸序列的肽的切割速率。術(shù)語"靶向基團(tuán)"及"靶向劑"旨在表示一個部分，該部分(1)可導(dǎo)引它所附聯(lián)的實(shí)體(例如治療劑或標(biāo)記物)至靼標(biāo)細(xì)胞，例如導(dǎo)引至特定類型的腫瘤細(xì)胞或(2)優(yōu)選地在靶標(biāo)組織(例如腫瘤)被激活。靶定基或靶向劑可以是小分子，旨在包括非肽類及肽類二者。靼定基也可以是大分子，包括糖類、凝集素、受體、受體的配體、蛋白質(zhì)(如BSA、抗體等)。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，靼向基團(tuán)是抗體或抗體片段，更優(yōu)選地是單克隆抗體或單克隆抗體片段。術(shù)語"自消間隔物"指一個雙官能的化學(xué)部分，該化學(xué)部分可共價連接兩個化學(xué)部分到一個正常穩(wěn)定的三聯(lián)分子中。如果鍵合至第一部分的鍵被切割，則該自消間隔物可自發(fā)從第二部分分離。術(shù)語"可檢測的標(biāo)記"旨在表示具有可檢測的物理特性或化學(xué)特性的一個部分。術(shù)語"可切割的基團(tuán)"旨在表示在活體內(nèi)不穩(wěn)定的部分。優(yōu)選地"可切割的基團(tuán)"允許從偶聯(lián)物的其余部分切割標(biāo)記物或治療劑而讓該標(biāo)記物或治療劑激活。就運(yùn)作上的定義而言，連接物優(yōu)選在活體內(nèi)由生物環(huán)境進(jìn)行切割。這種切割可由任何方法來進(jìn)行而沒有限制，例如酶法、還原法、pH法等。優(yōu)選地，可切割的基團(tuán)被選擇以使得激活發(fā)生在所希望的作用部位，該希望的作用部位可位于或接近于靶標(biāo)細(xì)胞(例如癌細(xì)胞)或組織的位置，如在治療劑作用部位或標(biāo)記物活性部位。此類切割可以是酶促法的，并且示例性經(jīng)酶可切割的基團(tuán)包括天然氨基酸或以天然氨基酸為端基的肽序列，并且這些基團(tuán)在它們的羧基端被附聯(lián)至該連接物。雖然切割速率提升的程度對本發(fā)明并非關(guān)鍵性的，但可切割連接物的優(yōu)選實(shí)例是其中至少約10%的可切割基團(tuán)在給藥后的24小時內(nèi)在血流中進(jìn)行切割，最優(yōu)選是至少約35%。術(shù)語"配體"表示與受體、底物、抗原決定簇、或靶細(xì)胞或靶組織上的其他結(jié)合部位進(jìn)行特異性結(jié)合或反應(yīng)性關(guān)聯(lián)或復(fù)合的任何分子。配體的實(shí)例包括抗體及其片段(例如單克隆抗體或其片段)、酶(例如纖維蛋白溶酶)、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(例如白介素、干擾素、紅細(xì)胞生成素、或集落刺激因子)、肽激素、及其抗原結(jié)合片段。術(shù)語"環(huán)化反應(yīng)"當(dāng)用來表示連接物或其任何部分的環(huán)化時，指示該連接物環(huán)化成為一個環(huán)，并開始藥物-配體復(fù)合物的分離。環(huán)化率可于非原位測定，并且當(dāng)至少形成90%、95%、或100%產(chǎn)物時反應(yīng)完成。術(shù)語"多肽"、"肽，，、以及"蛋白"在本文中可以互換使用，指氨基酸殘基的聚合物。這些術(shù)語應(yīng)用于這樣的氨基酸聚合物，其中一個或多個氨基酸殘基是對應(yīng)的天然存在的氨基酸的人工化學(xué)模擬物，連同應(yīng)用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。這些術(shù)語也涵蓋術(shù)語"抗體"。術(shù)語"氨基酸"是指天然存在的氨基酸以及合成氨基酸，連同以類似于天然存在的氨基酸的方式發(fā)揮功能的氨基酸類似物以及氨基酸模擬物。天然存在的氨基酸是遺傳密碼所編碼的氨基酸，連同后來經(jīng)過修飾的那些氨基酸，例如羥基脯氨酸、y-羧基谷氨酸以及O-磷酸絲氨酸(O-phosphoserine)。氨基酸類似物是指具有與天然氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，即一個a碳，該a碳結(jié)合至一個氫、一個羧基、一個氨基、以及一個R基，例如高絲氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亞砜、蛋氨酸曱基硫鑰。這些類似物具有經(jīng)修飾的R基(例如正亮氨酸)或經(jīng)修飾的肽主鏈，但仍然保持有與天然氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。一種可以使用的氨基酸具體是瓜氨酸，它是精氨酸的前體，并且參與肝臟中尿素的形成。氨基酸模擬物是指具有與氨基酸的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的結(jié)構(gòu)，但以類似于天然氨基酸的方式發(fā)揮功能的化學(xué)化合物。術(shù)語"非天然氨基酸，，旨在表示以上所說明的20種天然氨基酸的"D"立體化學(xué)形式。進(jìn)一步須了解術(shù)語非天然氨基酸包括天然氨基酸的同系物以及天然氨基酸的合成修飾的形式。合成修飾的形式包括但不限于具有至多2個碳原子縮短或延長的亞烷基鏈的氨基酸、包含可任選地取代的芳基基團(tuán)的氨基酸、以及包含閨化基團(tuán)(優(yōu)選的為卣化烷基和芳基)的氨基酸。當(dāng)附聯(lián)至本發(fā)明的連接物或偶聯(lián)物時，氨基酸是呈"氨基酸支鏈"形式，此處氨基酸的羧酸基已是用酮基(c(o))替換。因此，例如丙氨酸支鏈為-C(0)-CH(NH2)-CH3等。氨基酸和肽由封端基團(tuán)保護(hù)。封閉基團(tuán)是保護(hù)氨基酸或肽的N-端避免發(fā)生不希望的反應(yīng)的一個原子或一個化學(xué)部分，并可在藥物-配體偶聯(lián)物的合成過程中使用。整個合成期間封端基團(tuán)須維持附聯(lián)至N-端，而在藥物偶聯(lián)物合成完成后，由化學(xué)或其他條件可選擇性地將其移除。適合用于N-端保護(hù)作用的封端基團(tuán)在肽化學(xué)領(lǐng)域是眾所周知的。封端基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于氫、D-氨基酸、以及千氧羰基(Cbz)氯化物。"核酸"是指脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸以及呈單鏈或雙鏈形式的聚合物。該術(shù)語涵蓋含有已知的核苷酸類似物、或經(jīng)修飾的主鏈殘基、或連接的核酸，這些核酸是合成的、天然存在的、以及非天然存在的，具有類似于參考核苷酸的相似結(jié)合特性，并且是以類似于參考核苷酸的方式代謝。這些類似物的實(shí)例包括但不限于硫代磷酸酯類、氨基磷酸酯類、甲基磷酸酯類、手性-甲基磷酸酯類、2-0-甲基核糖核苷酸類、肽-核酸(PNA)。除非另外指出，否則特定核酸序列也隱含地涵蓋其保守修飾的變體(例如簡并密碼子的替換)以及互補(bǔ)序列，連同明確表明的序列。確切地說，簡并密碼子的替換可通過產(chǎn)生序列來達(dá)成，在該序列中一個或多個選定的(或全部)密碼子的第三位置是用混合堿基和/或脫氧肌苷的殘基進(jìn)4亍替換，(BatzerefaA，Wuc7e/cJc/"19:5081(1991);0htsukaefaA，/.Oe邁.260:2605—2608(1985);Rossolini"a7.，#oACe/人戶,o6es8:91-98(1994))。術(shù)語核酸是與基因、cDNA、niRNA、寡核苷酸、以及多核苷酸互換使用。符號wv^不論是用作一個鍵或顯示為垂直于一個鍵時均表明一個點(diǎn)，在該點(diǎn)處所展示的部分(moiety)被附聯(lián)至該分子的其余部分、固相支撐體等。術(shù)語"烷基"其本身或作為另一個取代基的一部分(除非另行說明)表示具有所示碳原子數(shù)(即d-d。表示l至10個碳原子)的一個直鏈或支鏈、或環(huán)烴基、或它們的組合，它可以是完全飽和的、單不飽和的、或多不飽和的，并且可包括二價基團(tuán)以及多價基團(tuán)。飽和經(jīng)基的實(shí)例包括但不限于以下基團(tuán)，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、仲丁基、環(huán)己基、(環(huán)己基)甲基、環(huán)丙基曱基，以及(例如)正戊基、正己基、正庚基、正辛基等的同系物和異構(gòu)體。不飽和烷基基團(tuán)是具有一個或多個雙鍵或叁鍵的基團(tuán)。不飽和烷基基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-異戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(l，4-戊二烯基)、乙炔基、l-丙炔基以及3-丙炔基、3-丁炔基，以及更高級的同系物和異構(gòu)體。除非另外指出，否則該術(shù)語"烷基"也意在包括那些在以下詳細(xì)定義的烷基衍生物，例如"雜烷基"。限于烴基的烷基定名為"同源烷基"(homoalkyl)。術(shù)語"亞烷基"其本身或作為另一個取代基的一部分表示衍生自烷的二價基團(tuán)，例如但不限于-CH2CH2CH2CH廣，并且進(jìn)一步包括那些以下描述為"雜亞烷基，，的基團(tuán)。典型地，烷基(或亞烷基)基團(tuán)具有l(wèi)至24個碳原子，其中具有10個或更少的碳原子的那些基團(tuán)在本發(fā)明中是優(yōu)選的。"低級烷基"或"低級亞烷基"是一般具有八個或更少的碳原子的較短的鏈烷基或亞烷基基團(tuán)。術(shù)語"雜烷基"其本身或與另一個術(shù)語的組合(除非另行說明)表示由所說明的數(shù)目的碳原子以及至少一個雜原子組成的一個穩(wěn)定的直鏈或支鏈、或環(huán)烴基、或它們的組合，該雜原子是選自下組，其構(gòu)成為0、N、Si、以及S,并且其中氮原子、碳原子以及硫原子可以任選地被氧化，并且氮雜原子可以任選地被季銨化。一個或多個雜原子o、N、S、以及Si可在雜烷基基團(tuán)的任何內(nèi)部位置或在烷基基團(tuán)附聯(lián)至分子其余部分的位置被替代。實(shí)例包括但不限于-CH廠CHH)-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH廣N(CH3)-CH3、-CH廣S-CH廣CH3、-CH2-CH2、-S(0)-CH3、-CH2-CH2-S(0)2-CH3、-CH=CH-0-CH3、-Si(CH3)3、-CH2-CH=N-OCH3、以及-CH-CH-N(CH》-CH3。至多2個雜原子可以是連續(xù)的，例如-CH2-NH-OCH3以及-CH廣0-Si(CH3)3。類似地，術(shù)語"雜亞烷基"其本身或作為另一個取代基的一部分，表示一個衍生自雜烷基的二價基團(tuán)，例如但不限于-CH廣CH2-S-CH2-CH2-以及-CH廣S-CH2-CH2-NH-CH廣。對于雜亞烷基基團(tuán)，雜原子也可占據(jù)鏈末端的任一端或兩端(例如亞烷基氧基、亞烷基二氧基、亞烷基氨基、亞烷基二氨基等)。術(shù)語"雜烷基，，以及"雜亞烷基"涵蓋聚(乙二醇)及其衍生物(參見例如，ShearwaterPolymersCatalog,2001)。再者，對于亞烷基以及雜亞烷基連接基團(tuán)，書寫連接基團(tuán)的化學(xué)式的方向并不表示連接基團(tuán)的方向。例如化學(xué)式-C(0)2R，-表示-C(0)2R，-以及-R，C(0)廣。與術(shù)語"烷基"或"雜烷基"組合使用的術(shù)語"低級"是指具有l(wèi)到6個碳原子的部分。術(shù)語"梡氧基"、"烷氨基"、"烷基磺?；?、以及"烷硫基"或(硫烷氧基)都是以它們的常規(guī)意義使用，涉及那些分別通過氧原子、氨基基團(tuán)、S02基團(tuán)或硫原子而附聯(lián)至分子其余部分的垸基。術(shù)語"芳基磺?；?表示通過S02基團(tuán)而附聯(lián)至分子其余部分的芳基，"氫硫基"一詞表示SH基團(tuán)。總體上，"?；〈?也是選自以上給出的基團(tuán)。如此處所使用，術(shù)語"酰基取代基"表示附聯(lián)于羰基碳并滿足其化合價的基團(tuán)，該羰基碳直接或間接地附聯(lián)于本發(fā)明的化合物的多環(huán)核上。術(shù)語"環(huán)烷基，，以及"雜環(huán)烷基"其本身或與其他術(shù)語組合(除非另行說明)分別獨(dú)立地表示取代或未取代的"烷基"以及取代或未取代的"雜烷基"的環(huán)型形式。此外，至于雜環(huán)烷基，雜原子可占據(jù)雜環(huán)附聯(lián)至分子其余部分的位置。環(huán)烷基的實(shí)例包括但不限于環(huán)戊基、環(huán)己基、l-環(huán)己烯基、3-環(huán)己烯基、環(huán)庚基等。雜環(huán)烷基的實(shí)例包括但不限于l-(l，2，5，6-四氫吡咬基)、1-p底咬基、2-旅咬基、3-哌咬基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃-2-基、四氫呋喃-3-基、四氫噻吩-2-基、四氫噻吩-3-基、l-哌溱基、2-哌嗪基、以及類似基團(tuán)。環(huán)狀結(jié)構(gòu)的雜原子以及碳原子可任選地被氧化。術(shù)語"卣"或"卣素"其本身或作為另一個取代基的一部分(除非另行說明)表示一個氟、氯、溴或多輿原子。此外，例如"鹵烷基"意在包括單卣烷基以及多卣烷基。術(shù)語例如"卣(C「C4)烷基，，意在包括但不限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基、以及類似基團(tuán)。術(shù)語"芳基"(除非另行說明)表示取代或未取代的多不飽和的芳香族烴取代基，它可以是單環(huán)或多環(huán)(優(yōu)選的為1環(huán)至3環(huán))，這些環(huán)稠合在一起或以共價鍵相連接。術(shù)語"雜芳基"涉及含有1至4個雜原子的芳基基團(tuán)(或芳香環(huán))，這些雜原子選自N、0以及S，其中氮原子、碳原子以及硫原子可任選地被氧化，并且氮原子可任選地被季銨化。雜芳基基團(tuán)可通過雜原子而附聯(lián)于分子的其余部分。芳基以及雜芳基基團(tuán)的非限制性實(shí)例包括苯基、l-萘基、2-萘基、4-聯(lián)苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡溱基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-異噁唑基、4-異噁唑基、5-異噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-異喹啉基、5-異喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基、以及6-喹啉基。以上提到的每一個芳基以及雜芳基環(huán)狀體系的取代基選自以下說明的可接受的取代基的組。"芳基"以及"雜芳基"還涵蓋環(huán)狀體系，其中一個或多個非芳香族環(huán)狀體系被稠合、或者以其他方式結(jié)合至芳基或雜芳基體系上。簡言之，術(shù)語"芳基"當(dāng)用來與其他術(shù)語組合(例如芳氧基、芳硫代基、芳烷基)時，包括如以上所定義的芳基環(huán)以及雜芳基環(huán)。因此，術(shù)語"芳烷基"意在包括那些基團(tuán)，其中一個芳基基團(tuán)附聯(lián)于一個烷基基團(tuán)(例如苯甲基、苯乙基、吡啶甲基、以及類似物)，該烷基基團(tuán)包括這樣的烷基基團(tuán)，其中一個碳原子(例如，亞甲基基團(tuán))已被(例如)一個氧原子(如苯氧曱基、2-吡啶氧甲基、3-(l-萘氧基)丙基、以及類似物)替換。以上給出的術(shù)語(例如"烷基"、"雜烷基"、"芳基"以及"雜芳基")各自均包括指定基團(tuán)的取代形式以及未取代形式。以下提供每個類型基團(tuán)的優(yōu)選取代基。烷基以及雜烷基基團(tuán)(包括那些經(jīng)常提到的基團(tuán)，如亞烷基、烯基、雜亞烷基、雜烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基、以及雜環(huán)烯基)的取代基一般分別稱為"烷基取代基"以及"雜烷基取代基"，可以是選自下組的一種或多種基團(tuán)，但不限于-OR，、=0、=NR，、-N-OR，、-NR，R，，、-SR，、-卣素、-SiR，R"R，，，、-OC(O)R，、-C(0)R，、-C02R，、-CONR，R，，、-OC(0)NR，R，，、-NR"C(0)R，、-NR，-C(O)NR"R"，、-NR"C(0)2R，、-NR-C(NR,R"R，，，)-NR，，，，、-NR-C(NR，R，，)-NR"，、-S(0)R，、-S(0)2R，、-S(0)2NR，R，，、-NRS02R，、-CN以及-N02，其數(shù)目是在0至(2m，+1)的范圍，其中ffl，為這種基團(tuán)中的碳原子總數(shù)。R，、R"、R"，以及R"，，各自優(yōu)選的獨(dú)立地表示氫、取代或未取代的雜烷基、取代或未取代的芳基(例如由1至3個卣素取代的芳基)、取代或未取代的坑基、烷氧基或硫烷氧基基團(tuán)，或芳烷基基團(tuán)。當(dāng)本發(fā)明的化合物包括多于一個R基團(tuán)時，例如，當(dāng)這些基團(tuán)中多于一個基團(tuán)存在時這些R基團(tuán)各自均被獨(dú)立地選為R，、R"、R，"以及R""基團(tuán)。當(dāng)R，以及R"附聯(lián)于同一個氮原子時，它們可與氮原子組合來形成5-元、6-元或7-元環(huán)。例如，-NR，R"意在包括但不限于l-吡咯烷基以及4-嗎啉基。由以上取代基的討論，本領(lǐng)域的技術(shù)人員須了解術(shù)語"烷基，，意在包括這樣一些基團(tuán)，這些基團(tuán)包括的碳原子與氫基團(tuán)以外的基團(tuán)結(jié)合，這些基團(tuán)例如是g烷基(例如-CFs以及-CH2CF3)以及酰基(例如-C(0)CH3、-C(0)CF3、-C(0)CH2OCH3、以及類似基團(tuán))。類似對烷基基團(tuán)所說明的取代基，芳基取代基以及雜芳基取代基通常分別被稱為"芳基取代基，，以及"雜芳基取代基，，，并且是可變化的并選自例如卣素、-OR，、=0、-NR，、-N-OR，、-NR，R，，、-SR，、一囟素、-SiR，R，，R"，、-OC(O)R，、—C(0)R，、-C02R，、-CONR，R"、-OC(0)NR，R"、-NR"C(0)R，、-NR，-C(0)NR"R"，、-NR"C(0)2R，、-NR-C(NR，R")-NR"，、-S(0)R，、-S(0)2R，、-S(0)2NR，R"、-NRS02R，、-CN以及-N()2、-R，、-N3、-CH(Ph)2、氟(C廣。烷氧基以及氟(C廣。烷基，其數(shù)目是由O至芳香族環(huán)狀體系的開放價數(shù)(openvalence)總數(shù)的范圍；并且其中R，、R"、R"，、以及R""優(yōu)選的是獨(dú)立地選自氫、(d-。烷基以及雜烷基、未取代的芳基以及雜芳基、(未取代的芳基)-(d-C,)烷基、以及(未取代的芳基)氧基-(C-C,)烷基。當(dāng)本發(fā)明的化合物包括多于一個R基團(tuán)時，(例如)，當(dāng)這些基團(tuán)中多于一個基團(tuán)存在時這些R基團(tuán)各自均被獨(dú)立地選為R，、R"、R，"以及R""芳基環(huán)或雜芳基環(huán)的相鄰原子上的芳基取代基中的兩個可任選地被具有化學(xué)式-T-C(0)-(CRR，)q-U-的取代基所替換，其中T以及U獨(dú)立地是-NR-、-0-、-CRR，-或一個單鍵，并且q為0至3的整數(shù)?？商娲?，在芳基環(huán)或雜芳基環(huán)的相鄰原子上的取代基中的兩個可任選地被具有化學(xué)式-A-(CH丄-B-的取代基所替換，其中A和B獨(dú)立地為-CRR，-、-O-、-NR-、-S-、-S(0)-、-S(0)廣、-S(0)2NR，-或單鍵，以及r為l至4的整數(shù)。如此所形成的新環(huán)的單鍵中之一可任選地用雙鍵替換。可替代地，芳基環(huán)或雜芳基環(huán)的相鄰原子上的取代基中的兩個可任選地被具有化學(xué)式-(CRR，)S-X-(CR"R，，，)r的取代基替換，此處s以及d獨(dú)立地為0至3的整數(shù)，并且X為-0-、-NR，-、-S-、-S(O)-、-S(O)廣、或-S(0)2NR，-。取代基R、R，、R"以及R"，優(yōu)選的是獨(dú)立地選自氫或取代或未取代的(d-C6)烷基。如此處所使用，術(shù)語"二磷酸酯"包括但不限于含有兩個磷酸基團(tuán)的磷酸的酯。術(shù)語"三磷酸酯"包括但不限于含有三個磷酸基團(tuán)的磷酸的酯。例如具有二磷酸酯或三磷酸酯的特定藥物包括基團(tuán)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>如此處所使用，術(shù)語"雜原子"包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、以及硅(Si)。符號"R"為通用縮寫，代表選自以下各項(xiàng)的一個取代基取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、以及取代或未取代的雜環(huán)基的基團(tuán)。如此處所使用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"表示一種參與攜帶或運(yùn)輸化學(xué)劑的藥學(xué)上可接受的材料、組合物、或運(yùn)載體(vehicle)，例如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或裝膠嚢的材料。藥學(xué)上可接受的載體(carrier)包括藥學(xué)上可接受的鹽類，其中術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽類，，包括活性化合物的鹽類，依據(jù)此處所述化合物中出現(xiàn)的特定取代基而定，該鹽類可使用相對無毒的酸或堿制備。當(dāng)本發(fā)明的化合物含有相對酸性的官能度時，堿加成鹽可通過將中性形式的此類化合物與足量的所希望的堿，凈接觸或于適當(dāng)惰性溶劑內(nèi)接觸獲得。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽的實(shí)例包括鈉、鉀、鈣、銨、有機(jī)胺、或鎂鹽、或類似的鹽。當(dāng)本發(fā)明的化合物含有相對堿性的官能度時，酸加成鹽可通過將中性形式的此類化合物與足量所希望的酸，凈接觸或于適當(dāng)惰性溶劑內(nèi)接觸獲得。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的實(shí)例包括衍生自以下無機(jī)酸的酸加成鹽，例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸、一氫碳酸、磷酸、一氫磷酸、二氫磷酸、硫酸、一氫硫酸、氫碘酸、或亞磷酸等；連同包括衍生自以下相對無毒的有機(jī)酸的鹽類，例如乙酸、丙酸、異丁酸、順丁烯二酸、丙二酸、苯甲酸、丁二酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸、甲磺酸等。也包括氨基酸的鹽類(例如精氨酸鹽(arginate)等)以及有機(jī)酸的鹽類(例如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等)(參見例如，Bergeefa人，"PharmaceuticalSalts"，/of/r/7a7o尸尸力ar邁aceu"ca/i^'e/3ce，1977，(f<5"，1-19)。本發(fā)明的某些特定的化合物含有允許該化合物被轉(zhuǎn)成堿加成鹽或酸加成鹽的堿性官能度以及酸性官能度二者。該化合物的中性形式優(yōu)選是通過鹽與堿或與酸接觸，以常規(guī)的方式分離親代化合物而再生。該化合物的親代形式在某些物理特性(例如在極性溶劑中的溶解度)上與各種鹽形式不同，但在其他特性上這些鹽與用于本發(fā)明的目的的化合物的親代形式是等效的。除了鹽形式之外，本發(fā)明提供呈藥物前體形式的化合物。此處所述的化合物的藥物前體是在生理?xiàng)l件下容易進(jìn)行化學(xué)變化來提供本發(fā)明的化合物的那些化合物。此外，在活體外環(huán)境下，由化學(xué)方法或生物化學(xué)方法，可將藥物前體轉(zhuǎn)成本發(fā)明的化合物。例如，當(dāng)藥物前體置于經(jīng)皮貼片貯器內(nèi)部時使用適宜的酶或化學(xué)試劑可將藥物前體緩慢轉(zhuǎn)成本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的某些化合物能夠以非溶劑化形式以及溶劑化形式(包括水合形式)存在?？傮w上，溶劑化形式等效于非溶劑化形式并且被涵蓋在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明的某些化合物可以多結(jié)晶的形式或非晶相的形式存在。大體上全部物理形式對本發(fā)明的所希望的用途來說都是等效的并且旨在涵蓋在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明的某些化合物具有非對稱碳原子(光學(xué)中心)或雙鍵；消旋體、非對映異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體以及個別異構(gòu)體均涵蓋在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明的化合物還可以在組成此類化合物的一個或多個原子處含有非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以用放射性同位素例如氚(力)、碘-125(1251)、或碳-14("C)進(jìn)行標(biāo)記。本發(fā)明的化合物的全部同位素的變化，無論是放射性還是非放射性的，旨在都涵蓋在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。術(shù)語"附聯(lián)部分"或"用來附聯(lián)一個靶向基團(tuán)的部分"是指允許靶向基團(tuán)附聯(lián)至連接物的一個部分。典型的附聯(lián)基團(tuán)以舉例說明的方式包括但不限于烷基、氨基烷基、氨基羰基烷基、羧基烷基、幾基烷基、烷基-順丁烯二酰亞胺、烷基-N-幾基丁二酰亞胺、聚(乙二醇)-順丁烯二酰亞胺以及聚(乙二醇)-N-幾基丁二酰亞胺，它們?nèi)慷伎蛇M(jìn)一步被取代。連接物也可具有實(shí)際上附接至該靶向基團(tuán)的附聯(lián)部分。如此處所使用，術(shù)語"離去基團(tuán)"是指在反應(yīng)中由底物所切割的底物的一部分。如此處所指的術(shù)語"抗體"包括完整抗體或其任何抗原結(jié)合片段(即"抗原結(jié)合部分")或其單鏈。"抗體"是指包含至少兩個重(H)鏈以及兩個輕(L)鏈的一種糖蛋白或其抗原結(jié)合部分，其中兩條重鏈以及兩條輕鏈通過雙硫鍵互相連接。每一種重鏈都是由一個重鏈可變區(qū)(Vh)以及一個重鏈恒定區(qū)所組成。重鏈恒定區(qū)是由三個結(jié)構(gòu)域ch"Ch2以及Ch3所組成，并且可以是u、5、y、oc或s同同種型。每一種輕鏈都是由一個輕鏈可變區(qū)(VJ以及一個輕鏈恒定區(qū)所組成。輕鏈恒定區(qū)由一個結(jié)構(gòu)域G所組成，該結(jié)構(gòu)域可以是k或A同種型。Vh區(qū)以及、區(qū)能夠進(jìn)一步劃分為高度可變區(qū)，定名為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，其間分散有更保守的、定名為框架區(qū)(FR)的多個區(qū)域。毎個Vh以及、均是由三個CDR以及四個FR按照以下順序由氨基端排列至羧基端所構(gòu)成FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈可變區(qū)以及輕鏈可變區(qū)含有一個可與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w的恒定區(qū)可介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞(例如效應(yīng)細(xì)胞)以及經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組分(Clq)。如此處所使用，術(shù)語抗體的"抗體片段"或"抗原結(jié)合部分"(或簡稱為"抗體部分")是指保持與抗原特異性結(jié)合的能力的抗體的一個或多個片段。已經(jīng)顯示抗體的抗原結(jié)合功能可由全長抗體的片段來執(zhí)行。涵蓋于術(shù)語抗體的"抗體片段"或"抗原結(jié)合部分"之內(nèi)的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段，即由l、VH、a以及Cm結(jié)構(gòu)域所組成的一價片段；(H)F(ab'h片段，包括在鉸鏈區(qū)由二硫橋連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii)由vh以及(^結(jié)構(gòu)域所組成的Fd片段；(iv)由抗體的一個單臂的W以及VH結(jié)構(gòu)域所組成的Fv片段，(v)由Vh結(jié)枸域所組成的dAb片段(Warde纟a人，(1989)^""re里544-546);以及(vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。此外，雖然Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域VL以及VH是由獨(dú)立的基因所編碼的，但是可以使用重組方法通過一個合成連接物將它們連接起來，使它們形成一個單一蛋白鏈，其中V,區(qū)與VH區(qū)配對來形成一價分子(稱作為單鏈Fv(scFv);參見例如Birdeta人(1988)5We/ce^;423-426;以及Hustone"/.(1988)戶roc.A"a〃.^catf.i"c/.〃W11:5879-5883)。此類單鏈抗體也旨在涵蓋于術(shù)語抗體的"抗原結(jié)合部分"之內(nèi)。這些抗體片段是使用本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得，并且對這些片段采用與完整抗體相同的方式進(jìn)行有用性篩選。如此處所使用，術(shù)語"單克隆抗體"是指具有單一分子組成的抗體分子的制品。單克隆抗體組合物顯示了對某一特定表位的單一結(jié)合特異性以及親和力。可以使用本領(lǐng)域已知的任何一種技術(shù)用于單克隆抗體或多克隆抗體的制備，可使用(參見例如Kohler&MUstein，iVWi/re256:495-497(1975)'，Kozbore力".，/騰/7o/ogy7Way4:72(1983);Cole<s7.，pp.77-96inMonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss，Inc.(1985))。多克隆抗體的生產(chǎn)方法為本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所已知。近交品系的小鼠(例如BALB/C小鼠)或兔子使用標(biāo)準(zhǔn)佐劑(例如弗氏佐劑)及標(biāo)準(zhǔn)免疫接種方案用蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫接種。動物對免疫原制品的免疫反應(yīng)是通過采集測試血液并通過測定對P亞單元的反應(yīng)性的效價來進(jìn)行監(jiān)測。當(dāng)獲得對免疫原的適當(dāng)高抗體效價時，從動物采血，并制備抗血清。若有所需可針對血清進(jìn)行進(jìn)一步分級分離來富集對該蛋白具有反應(yīng)性的抗體。可通過多種本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員熟知的方法獲得單克隆抗體。簡言之，將來自用所希望的抗原進(jìn)行免疫接種的動物的脾細(xì)胞通常是通過與骨髓瘤細(xì)胞融合而被7Jc生化(參見Kohler&Milstein，Af/r././/肺w70/.6:511-519(1976))。可替代的永生化方法包括使用愛潑斯坦-巴爾病毒、癌基因、或逆轉(zhuǎn)錄病毒、或其他本領(lǐng)域眾所周知的方法來轉(zhuǎn)化。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體為嵌合型抗體或人源化抗體。本發(fā)明的嵌合型抗體或人源化抗體可基于鼠類單克隆抗體的序列來制備。編碼重鏈以及輕鏈免疫球蛋白的DNA可從感興趣的鼠類融合瘤獲得，并且使用標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行工程處理，來含有非鼠類(例如人)的免疫球蛋白序列。例如，為了產(chǎn)生嵌合型抗體，使用本領(lǐng)域已知方法可將鼠類可變區(qū)連接至人恒定區(qū)(參見例如Cabilly等人的美國專利號4，816，567)。為產(chǎn)生人源化抗體，可使用本領(lǐng)域已知方法將鼠類CDR區(qū)插入至人類構(gòu)架中(參見例如Winter的美國專利號5,225,539，以及Queen等人的美國專利號5，530，101;5，585，089;5,693，762以及6，180,370)。在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體為人類抗體。這種人類抗體可通過免疫接種轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體小鼠而產(chǎn)生，其中內(nèi)生性小鼠免疫球蛋白基因已被失活，并且外源性人免疫球蛋白基因已被導(dǎo)入。此類小鼠為本領(lǐng)域所已知(參見例如Lonberg以及Kay的美國專利號5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;5,789,650;5，877，397;5,661,016;5,814,318;5,874,299;以及5，770，429;Kucherlapati等人的美國專利號5，939，598;6，075，181;6,114,598;6，150,584以及6，162，963;以及Ishida等人的PCT公開文件WO02/43478)。也可使用篩選人免疫球蛋白基因文庫的噬菌體展示方法來制備人類抗體。此類用于分離人類抗體的噬菌體展示方法在本領(lǐng)域內(nèi)也是已知的(參見例如Ladner等人的美國專利號5，223，409;5,403,484;以及5，571，698;Dower等人的美國專利號5，427，908以及5，580,717;McCafferty等人的美國專利號5，969，108以及6，172，197;以及美國專利號5，885，793;6,521,404;6，544，731;6'555，313;Griffiths等人的6，582，915以及6，593，081)。如此處所使用，"固相支撐體"表示一種材料，該材料基本上不溶于所選用的溶劑系統(tǒng)，或容易地(例如通過沉淀)從選定的溶劑系統(tǒng)(它可溶于其中)分離。對實(shí)施本發(fā)明有用的固相支撐體包括被激活或可激活來允許選定的種類結(jié)合至固相支撐體的基團(tuán)。固相支撐體也可以是本發(fā)明的個別化合物或多于一種化合物結(jié)合至其上的基質(zhì)，例如芯片、晶片或孔。如此處所使用，"反應(yīng)性官能團(tuán)"一詞是指以下基團(tuán)，包括但不限于烯烴類、炔類、醇類、酚類、醚類、氧化物類、卣化物類、醛類、酮類、羧酸類、酯類、酰胺類、氰酸酯類、異氰酸酯類、硫氰酸酯類、異硫氰酸酯類、胺類、肼類、腙類、酰肼類、重氮類(diazo)、重氮基(diazonium)、硝基、腈類、硫醇類、硫化物類、二疏化物類、亞砜類、砜類、磺酸類、亞磺酸類、縮醛類、縮酮類、酸酐類、硫酸酯類、次磺酸類、異腈類、脒類、酰亞胺類、亞氨酸酯類、硝酮類、羥胺類、肟類、氧肟酸類、硫羥肟酸類、丙二烯類、原酸酯類、亞硫酸酯類、烯胺類、炔胺類、脲類、假脲類、氨基脲類、碳二亞胺類、氨基甲酸酯類、亞胺類、疊氮化物類、偶氮化合物、氧化亞氮化合物、以及亞硝基化合物。反應(yīng)性官能團(tuán)也包括用來制備生物偶聯(lián)物的那些反應(yīng)性官能團(tuán)，例如N-羥基丁二酰亞胺酯類、順丁烯二酰亞胺類等(參見例如Hermanson，Bioco腿gateTechniques,Academicpress,SanDiego，1996)。這些官能團(tuán)各自的生產(chǎn)方法為本領(lǐng)域眾所周知，它們針對特定目的的應(yīng)用或改變是在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的能力之內(nèi)(參見例如SandlerandKaro，eds.OrganicFunctionalGroupPreparations,AcademicPress,SanDiego,1989)。反應(yīng)斗生官能團(tuán)可受保護(hù)或不受保護(hù)。本發(fā)明的化合物可制備成單一異構(gòu)體(例如對映異構(gòu)體、順-反異構(gòu)體、位置異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體)，或制備成異構(gòu)體的混合物。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物被制備成基本上單一異構(gòu)體。制備基本上同分異構(gòu)純的化合物的方法為本領(lǐng)域所已知。例如富含對映異構(gòu)體的混合物以及純對映異構(gòu)化合物可通過使用對映異構(gòu)純的合成中間產(chǎn)物與一些反應(yīng)相組合來制備，這些反應(yīng)留下手性中心的立體化學(xué)不變或?qū)е缕渫耆崔D(zhuǎn)?？商娲?，終產(chǎn)物或合成途徑沿線的各個中間產(chǎn)物可被分解為單一立體異構(gòu)體。反轉(zhuǎn)或留下不變的特定立構(gòu)中心的技術(shù)以及立體異構(gòu)體混合物的解析技術(shù)為本領(lǐng)域眾所周知，并且針對特定情況選擇適當(dāng)?shù)姆椒ㄊ窃诒绢I(lǐng)域的普通技術(shù)人員的能力之內(nèi)?？?、體上參見Furnisseta/.(eds.)，Vogel，sEncyclopediaofPracticalOrganicC醒istry5thEd.，LongmanScientificandTechnicalLtd.,Essex,1991，pp.809-816;andHeller，Jcc.C力e瓜Ae義23:128(1990)。連接物本發(fā)明提供藥物-配體偶聯(lián)物，此處藥物是通過氨基酸連接物而連接至配體，在此處描繪為o;)pfo;)m。除了附聯(lián)至藥物的連接物之外，本發(fā)明還提供適合附聯(lián)至基本上任何分子種類的可切割的連接物臂。本發(fā)明的連接物臂方面在此處是就其附聯(lián)至治療部分而舉例說明。但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員顯然易知，連接物可附聯(lián)至多個不同種類，包括但不限于診斷劑、分析劑、活質(zhì)分子、靶向劑、可檢測的標(biāo)i己、以及類4以物。在藥物-配體偶聯(lián)物中的肽基以及其他連接物的使用是說明于美國臨時專利申請系列號60/295，196;60/295,259;60/295,342;60/304,908;60/572,667;60/661,174;60/669,871;60/720,499;60/730,804;60/735,657;60/882,461;以及60/991，300以及美國專利申請系列號10/160，972;10/161,234;11/134,685;11/134,826;以及11/398，854以及美國專利號6，989，452以及PCT專利申請?zhí)朠CT/US2006/37793、PCT/US2006/60050、PCT/US2006/60711、以及PCT/SU2007/89100,它們?nèi)客ㄟ^引用結(jié)合在此。在一個方面，本發(fā)明是涉及用于將靶向基團(tuán)附聯(lián)至治療劑以及標(biāo)記物的連接物。在另一方面，本發(fā)明提供了可對化合物提供穩(wěn)定性，降低活體內(nèi)毒性或以其他方式有利于化合物的藥物代謝動力學(xué)、生物利用率和/或藥效學(xué)等方面的連接物。通常優(yōu)選的是在此類實(shí)施方案中，一旦藥物被輸送至其作用部位，連接物即被切割，釋放出活性藥物。如此在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的連接物是無痕跡的，這樣一旦從治療劑或標(biāo)記物上移除(例如在激活期間移除)不會留下連接物存在的痕跡。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，連接物的特征為可在靶標(biāo)細(xì)胞內(nèi)部或附近的部位被切割，例如在治療作用部位或標(biāo)記物活性部位被切割。這種切割本質(zhì)上可以是酶的作用。此項(xiàng)特征可輔助減少治療劑或標(biāo)記物的系統(tǒng)性激活，降低毒性以及系統(tǒng)性副作用。在其他實(shí)施方案中，對pH敏感的連接物可通過pH的改變來切割。在連接物中包括單個氨基酸的本發(fā)明的化合物的一個出人意料物。因?yàn)閱蝹€氛基酸與肽相反并非必需是一種酶的底物，人們將預(yù)期相當(dāng)?shù)偷幕钚?。這些連接物也有助于在循環(huán)中穩(wěn)定治療劑或標(biāo)記物，防止其降解。這一特性提供了重要的有利因素，因?yàn)檫@種穩(wěn)定性導(dǎo)致所附聯(lián)的試劑或標(biāo)記物的循環(huán)半衰期延長。該連接物還可用于減弱所附聯(lián)的試劑或標(biāo)記物的活性，使得該偶聯(lián)物在循環(huán)時相對為良性，而在所希望的作用位點(diǎn)激活后具有所希望的效應(yīng)，例如具有細(xì)胞毒性。對于治療劑偶聯(lián)物而言，連接物的這一特點(diǎn)用于改善該藥劑的治療指數(shù)。穩(wěn)定基團(tuán)被優(yōu)選地選擇出來，來限制由可能存在于血液或者非靶標(biāo)組織中的酶產(chǎn)生的治療劑或標(biāo)記物的清除及代謝，并且進(jìn)一步選擇這些穩(wěn)定基團(tuán)，來限制該藥劑或者標(biāo)記物運(yùn)輸進(jìn)入細(xì)胞。這些穩(wěn)定基團(tuán)用于阻止該藥劑或者標(biāo)記物的降解，并且也可能在提供該試劑或標(biāo)記物的其他物理特性中發(fā)揮作用。穩(wěn)定基團(tuán)也可能在貯藏中以經(jīng)配制或未經(jīng)配制的形式改善藥劑或標(biāo)記物的穩(wěn)定性^理想情況下，穩(wěn)定基團(tuán)對于穩(wěn)定一種治療劑或標(biāo)記物是有用的，條件是該穩(wěn)定基團(tuán)所起的作用是在通過將一種治療劑或標(biāo)記物在人類血液中于37。C貯藏2小時而進(jìn)行測試時保護(hù)了該治療劑或標(biāo)記物免于降解、并且導(dǎo)致了在給定的測定條件下由存在于人類血液中的酶對該治療劑或標(biāo)記物的少于20%,優(yōu)選的少于10%，更優(yōu)選的少于5%、以及甚至更優(yōu)選的少于2%的切割。本發(fā)明還涉及包含這些連接物的偶聯(lián)物。更特別地，本發(fā)明涉及藥物前體，這些藥物前體可用于治療疾病，特別是癌癥化療。具體而言，使用在此說明的連接物提供了多種藥物前體，這些藥物前體相對于相似結(jié)構(gòu)的藥物前體而言，展示出高的作用特異性、降低的毒性、以及改善的穩(wěn)定性。在此說明的本發(fā)明的連接物可位于細(xì)胞毒素偶聯(lián)物內(nèi)的多種位置。因此，提供了一種連接物，該連接物可包含多種基團(tuán)中的任何基團(tuán)作為其鏈的一部分，相對于缺乏此類基團(tuán)的構(gòu)建物而言，這些基團(tuán)在活體內(nèi)(例如，在血流中)切割的速率會增強(qiáng)^還提供了連接物臂與治療劑以及診斷試劑的偶聯(lián)物。這些連接物對于形成治療劑的藥物前體的類似物是有用的，并且對可逆地將治療劑或診斷試劑連接至靶向劑、可檢測的標(biāo)記、或固相支撐體是有用的。連接物可被結(jié)合進(jìn)入包括本發(fā)明的細(xì)胞毒素的復(fù)合物中。一個或多個自消性連接基團(tuán)1/被任選地導(dǎo)入細(xì)胞毒素與靶向劑之間。這些連接物基團(tuán)還可能被說明為間隔基團(tuán)，并且包含至少兩個反應(yīng)性官能團(tuán)。典型地，間隔基團(tuán)的一個化學(xué)官能度鍵合至該治療劑(例如細(xì)胞毒素)的化學(xué)官能度上，而間隔基團(tuán)的其他化學(xué)官能度被用于鍵合至靶向劑或者可切割的連接物的化學(xué)官能度上。間隔基團(tuán)的化學(xué)官能度的實(shí)例包括羥基、巰基、羰基、羧基、氨基、酮基、以及巰基基團(tuán)。該自消連接物由！^代表，一般是取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜烷基。在一個實(shí)施方案中，該烷基或芳基基團(tuán)可能包含1至20個碳原子。它們還可能包含一個聚乙二醇部分。示例性間隔基團(tuán)包括，例如6-氨基己醇、6-巰基己醇、10-羥基癸酸、甘氨酸以及其他氨基酸、1，6-己二醇、p-丙氨酸、2-氨基乙醇、半胱胺(2-氨基乙烷硫醇)、5-氨基戊酸、6-氨基己酸、3-馬來酰亞胺基苯甲酸、苯酞、a-取代的苯酞、羰基基團(tuán)、縮醛胺酯、核酸、肽、以及類似物。該間隔物可以用于引導(dǎo)另外的分子量以及化學(xué)官能度進(jìn)入該細(xì)胞毒素-耙向劑復(fù)合物。通常，另外的質(zhì)量以及官能度將影響該復(fù)合物的血清半衰期以及其他特性。因此，通過仔細(xì)挑選間隔基團(tuán)，可以制得血清半衰期在一定范圍內(nèi)的細(xì)胞毒素復(fù)合物。位于與藥物部分直接相鄰的位置的一個或多個間隔物也表示為(i;)m,其中m是選自0、1、2、3、4、5、以及6的一個整數(shù)。當(dāng)多個L1間隔物存在時，可使用相同或不同的間隔物。^可以是任何自消基團(tuán)。1/是一個連接物部分，利用包含該部分或改變該偶聯(lián)物的水解速率的連接物，它優(yōu)選地賦予偶聯(lián)物增大的溶解性或減小的聚集特性。L4連接物并非必須是自消亡的。在一個實(shí)施方案中，1/部分是取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的雜烷基、或未取代的雜烷基，這些基團(tuán)中的任一種可能是直鏈、支鏈、或環(huán)狀的。這些取代基可能是例如低級(C-C6)烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、或者二烷基氨基。在一些實(shí)施方案中，L4包括非環(huán)狀部分。在另一個實(shí)施方案中，L4包括帶正電或負(fù)電的氨基酸聚合物，如聚賴氨酸或聚精氨酸。L4可包括例如聚乙二醇部分的聚合物。另外，1/連接物可以包括，例如一個多聚體成分以及一個小分子化學(xué)部分。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，L4包括一個聚乙二醇(PEG)部分。L4的PEG部分可以是長度為1到50個單元。優(yōu)選地，PEG含有1到12個重復(fù)單元，更優(yōu)選3到12個重復(fù)單元，更優(yōu)選2到6個重復(fù)單元，或甚至更優(yōu)選3到5個重復(fù)單元，并且最優(yōu)選4個重復(fù)單元。1/可僅僅含有PEG部分，或也可包括其他的取代或未取代的烷基或雜烷基。將PEG作為L4部分的一部分進(jìn)行組合可以用于提高復(fù)合物的水溶性。另外，該P(yáng)EG部分在藥物與抗體偶聯(lián)時降低了聚集度。如以上所討論，本發(fā)明的連接物可用通式(L4)p—F—(Ll表示，其中F表示包括氨基酸的連接物部分。在一個實(shí)施方案中，該F部分包括一個或多個任選的附加自消連接物L(fēng)2以及一個羰基基團(tuán)。在另一個實(shí)施方案中，該F部分包括一個氨基基團(tuán)以及一個或多個任選的間隔基團(tuán)L3。因此，在一個實(shí)施方案中，包含該連接物的偶聯(lián)物包括化學(xué)式l的結(jié)構(gòu)在這個實(shí)施方案中，i;為如以上所說明的自消性連接物，并且L4為如以上所說明的優(yōu)選的提供較高溶解度、或降低聚集性、或改變水解速率的一個部分。！/代表一個或多個自消性連接物。此外，m為0、1、2、3、4、5或6;并且o以及p獨(dú)立地是O或l。AA!代表天然氨基酸或非天然a-氨基酸。在以上化學(xué)式1的本發(fā)明的連接物中，AA'在其氨基端是直接連接至L4，或當(dāng)I/不存在時，直接連接至X4基團(tuán)(即靼向劑、可檢測的標(biāo)記、受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)或不受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán))。在另一個實(shí)施方案中，包含連接物的偶聯(lián)物包含化學(xué)式2的以下一個結(jié)構(gòu)在這個實(shí)施方案中，1/是一個部分，該部分優(yōu)選地賦予增加的溶解性、或減少的聚集特性，或改變水解速率，如以上所述；間隔基團(tuán)，該間隔基團(tuán)包括一個伯胺或仲胺或一個羧基官能團(tuán)，并且團(tuán)形成酰胺鍵；并且o和p獨(dú)立地為O或l。AA'代表天然氨基酸或非天然a-氨基酸。在這個實(shí)施方案中，1/不存在(即通式中的m為0)。自消性連接物L(fēng)2,鵬t自消連接物I/是一個雙官能化學(xué)部分，它能將兩個間隔的化學(xué)部分共價連接成通常穩(wěn)定的三聯(lián)分子，通過酶切割的方法從該三聯(lián)分子釋放所述間隔的化學(xué)部分中的一個；并且在所述酶切割之后，從該分子的其余部分中自發(fā)切割而釋放所述間隔的化學(xué)部分中的另一個。根據(jù)本發(fā)明，自消間隔物在其一端與氨基酸AA1共價連接，而在其另一端與藥物部分的化學(xué)反應(yīng)位點(diǎn)共價連接，藥物部分的衍生作用抑制藥理活性，以便將氨基酸AA1與藥物部分間隔開并且共價連接在一起成為一個三聯(lián)分子，該三聯(lián)分子在靶酶不存在的情況下是穩(wěn)定的并且無藥理活性，但在將間隔物部分與氨基酸AA1共價連接的鍵處可被酶切割，從而影響氨基酸AA〗從該三聯(lián)分子釋放。反過來，這種酶切割能激活間隔物部分的自消性質(zhì)，并引發(fā)對將間隔物部分共價連接至藥物部分的鍵的自發(fā)切割，由此影響藥理活性形式的藥物的釋放。自消連接物L(fēng)2可以是任何自消基團(tuán)。1/優(yōu)選是取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、未取代的雜環(huán)烷基、取代的雜環(huán)烷基、取代或未取代的芳基、或取代和未取代的雜芳基。一個特別優(yōu)選的自消間隔物1^可以由下化學(xué)式3表示氨基千基基團(tuán)的芳環(huán)可被一個或多個"K"基團(tuán)取代。"K"基團(tuán)是芳香環(huán)上的取代物，它替換原本附聯(lián)于為部分環(huán)結(jié)構(gòu)的四個未取代的碳之一的氫。"K"基團(tuán)可能是一個單一原子，如卣素，或可能是多原子的基團(tuán)，如烷基、雜烷基、氨基、硝基、羥基、烷氧基、囟烷基、以及氰基。每一個K均是獨(dú)立地選自下組，該組的構(gòu)成為取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的雜芳基、未取代的雜芳基、取代的雜環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)烷基、卣素、N02、NR21R22、NR"COR22、OCONR"R22、0C0R21、以及0R21，其中R"和R"是獨(dú)立地選自下組，該組的構(gòu)成為H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的雜芳基、未取代的雜芳基、取代的雜環(huán)烷基、以及未取代的雜環(huán)烷基。示例性K取代基包括但不限于F、Cl、Br、I、N02、0H、0CH3、NHC0CH3、N(CH3)2、NHC0CF3、以及曱基。對于"Ka"，a是0、1、2、3或4的一個整數(shù)。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，a是0。以上所顯示的結(jié)構(gòu)的醚氧原子與一個羰基基團(tuán)相連。從NR"官能度進(jìn)入芳環(huán)的線表示胺官能度可能被鍵合至5個碳的任何一個，這5個碳形成環(huán)、并且未被CH2-0-基團(tuán)取代。優(yōu)選地，X的NR"官能度在相對于CH廣O-基團(tuán)的對位與芳環(huán)共價結(jié)合。R"是選自下組的一員，該組的構(gòu)成為H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、以及未取代的雜烷基。在一個具體的實(shí)施方案中，R"是H。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供以上化學(xué)式(l)的一種連接物，其中F包含以下結(jié)構(gòu)其中，R"是選自下組，該組的構(gòu)成為H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、以及未取代的雜烷基。每一個K均是獨(dú)立地選自下組的成員，該組的構(gòu)成為取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的雜芳基、未取代的雜芳基、取代的雜環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)烷基、鹵素、N02、NR21R22、NR21COR22、OCONR21R22、0C0R21、以及OR21,其中R21和R22是獨(dú)立地選自下組，該組的構(gòu)成為H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的雜芳基、未取代的雜芳基、取代的雜環(huán)烷基、以及未取代的雜環(huán)烷基，并且a是一個整數(shù)O、1、2、3、或4。在另一個實(shí)施方案中，以上化學(xué)式(l)的連接物包含一個具有以下結(jié)構(gòu)的-F-(I/;L-:瞎~JAA11——N,S=其中每個R"是獨(dú)立地選自下組的一員，該組的構(gòu)成為H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、以及未取代的雜烷基。在某些實(shí)施方案中，自消性間隔物y包括其中R17、R"以及R"各自是獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、以及取代或未取代的芳基，并且w為0至4的整數(shù)。在某些實(shí)施方案中，R"以及R"獨(dú)立地是H或烷基(優(yōu)選的是未取代的Cl-4烷基)。優(yōu)選地，R"以及R"是Cl-4烷基，例如甲基或乙基。在某些實(shí)施方案中，w為O。在某些實(shí)施方案中，！^包括間隔物基團(tuán)L3間隔基團(tuán)I^的特征在于它包括伯胺或仲胺或羧基官能團(tuán)，并且L3基團(tuán)的胺基與D的側(cè)羧基官能團(tuán)形成一個酰胺鍵，或者L3的羧基與D的側(cè)胺基官能團(tuán)形成一個酰胺鍵。L3可選自下組，該組的構(gòu)成為取代RIN42R,442、R4—R或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜環(huán)烷基。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，1/包括一個芳香族基團(tuán)。更優(yōu)選地，L3包括苯一個甲酸基團(tuán)、苯胺基團(tuán)、或-引咮基團(tuán)。用作-L3-NH-間隔物的結(jié)構(gòu)的非限制性實(shí)例包括以下結(jié)構(gòu)其中Z是選自0、S和NR"的成員，并且其中R"是選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、以及酰基的一員。切割本發(fā)明的包含I^的連接物時，L3部分仍然附聯(lián)在藥物D上。因此，選擇l/部分，使得它附聯(lián)到D的存在不會顯著地改變D的活性。在另一個實(shí)施方案中，藥物D的一部分本身起I^間隔物的功能。例如，在一個實(shí)施方案中，藥物D是多卡霉素的衍生物，其中該藥物的一部分起L"'司隔物的作用。此類實(shí)施方案的非限制性實(shí)例包括那些實(shí)例，其中NH2-(L"-D具有選自下組的一個結(jié)構(gòu)，該組的構(gòu)成為及其中Z是選自0、S以及NR"中的一員，其中R"是選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、以及?；械囊粏T；并且其中在各個結(jié)構(gòu)上的麗2基團(tuán)與AAi進(jìn)行反應(yīng)而形成-AA1-NH-。氨基酸AA1基團(tuán)AA'代表一個單一氨基酸并且可以是天然氨基酸或非天然ot-氨基酸。氨基酸可呈L構(gòu)型或D構(gòu)型。氨基酸可基于其適合由特定分子(例如肺瘤特異性蛋白酶)作選擇性切割的適宜性來選擇。不希望受任何從抗體切割毒素的特異機(jī)制所限，相信至少某些本發(fā)明的化合物由組織蛋白酶B切割。還考慮了在適當(dāng)環(huán)境中切割或釋出本發(fā)明的毒素的機(jī)制并且含括在本發(fā)明中。在一個實(shí)施方案中，是基于連接物被溶酶體蛋白酶切割的能力來選擇氨基酸AA1，溶酶體蛋白酶的非限制性實(shí)例包括組織蛋白酶B、C、D、H、L以及S。在某些實(shí)施方案中，包含氨基酸A^的連接物可在體外由組織蛋白酶B切割，這可使用本領(lǐng)域已知的體外蛋白酶切割測定來測試。在某些實(shí)施方案中，包含氨基酸AAi的連接物在體外實(shí)質(zhì)上并未由組織蛋白酶B切割(例如，在24小時內(nèi)無實(shí)質(zhì)上的切割)，但在活體內(nèi)仍可切割來產(chǎn)生活性藥物。在另一個實(shí)施方案中，是基于連接物被腫瘤相關(guān)的蛋白酶切割的能力來選擇氨基酸AA1，該種蛋白酶是例如在胞外出現(xiàn)于腫瘤細(xì)胞附近的蛋白酶，其非限制性實(shí)例包括曱拌磷寡肽酶(TOP)以及CDIO。連接物被TOP或CD10切割的能力可使用本領(lǐng)域已知的體外蛋白酶切割測定進(jìn)行測試。在一個實(shí)施方案中，該氨基酸是選自下組，其構(gòu)成為Ala、Arg、Asn、Asp、Cit、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、以及Val。在另一個實(shí)施方案中，氨基酸是選自下組，其構(gòu)成為Cit、Glu、Lys、以及Ser。蛋白酶與癌癥轉(zhuǎn)移有關(guān)。蛋白酶尿激酶合成的增加在許多癌癥中與轉(zhuǎn)移能力的增加相關(guān)。尿激酶將纖溶酶原激活為纖溶酶，它在細(xì)胞外間隙中廣泛存在，并且其激活作用導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)中的蛋白降解，由此轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞侵入。纖溶酶也可以激活膠原酶，因此促進(jìn)在圍繞毛細(xì)管以及淋巴系統(tǒng)的基底膜中膠原的降解，由此允許肺瘤細(xì)胞侵入到耙組織中(Dano，e"/.她Ca膨r.紋，44:139(1985))。因此，利用由尿激酶切割的連接物是在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明也提供了對類胰蛋白酶切割敏感的連接物的用途。人類的肥大細(xì)胞表達(dá)至少四種不同的類胰蛋白酶，被指定為oc、|31、1311、以及pni。這些酶不被血漿蛋白酶抑制劑控制，并且僅在體外切割一些生理學(xué)的底物。絲氨酸蛋白酶的類胰蛋白酶家族與涉及肥大細(xì)胞的多種過敏性疾病以及炎癥有關(guān)，因?yàn)樵诨加羞@些病癥的患者的體液里發(fā)現(xiàn)了類胰蛋白酶水平升高。然而，仍需要對類胰蛋白酶在疾病的病理生理學(xué)中的確切作用進(jìn)行描繪。類胰蛋白酶的生物學(xué)功能的范圍以及相應(yīng)的生理學(xué)結(jié)果基本上由它們的底物的特異性限定。類胰蛋白酶是前-尿激酶血纖維蛋白溶酶原活化子(uPA)的有效的激活劑，uPA是與肺瘤轉(zhuǎn)移以及侵入有關(guān)的蛋白酶的酶原形式。纖維溶酶原級聯(lián)反應(yīng)的激活，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的破損而產(chǎn)生細(xì)胞溢出物及遷移，可能是在Pro-Arg-Phe-Lys的P4-Pl序列(SEQ.IDNO:1)上的尿激酶原纖維溶酶激活物的類胰蛋白酶活化子的一個功能(Stack,Wa/.，/our/7s/o,5/c7og/ca/C力e/z/2、try269(13):9416—9419(1994))。血管活性腸肽(一種神經(jīng)肽，與血管滲透性的調(diào)控有關(guān))也被類胰蛋白酶切割，主要在Thr-Arg-Leu-Arg(SEQ.IDNO:2)序列上(Tam,eta/.,j瓜/.i(^/7/r.Ce〃^/o入3:27-32(1990))。G-蛋白偶合受體PAR-2可在Ser-Lys-Gly-Arg(SEQ.IDNO:3)序列上被切割并被類胰蛋白酶激活，以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖，然而凝血酶激活受體PRA-l在Pro-Asn-Asp-Lys(SEQ.IDNO:4)序列上被類腹蛋白酶失活(Molinoa人，/owr/7a/o/*A/o7o《yca7C力e邁j."rj272(7):4043-4049(1997))。綜合在一起，這一證據(jù)提示類蛋白激酶作為疾病導(dǎo)致的結(jié)果在組織重塑中起核心作用。這與在幾個肥大細(xì)胞介導(dǎo)的病癥中觀察到的深刻變化一致。慢性哞喘以及其他的長期的呼吸道疾病的特點(diǎn)是下面的組織(underlyingtissue)的纖維化以及增厚，這可能是類胰蛋白酶激活其生理學(xué)靶的結(jié)果。類似地，一系列報(bào)道已經(jīng)表明血管生成與多種癌癥中的肥大細(xì)胞密度、類胰蛋白酶活性、以及不良的預(yù)后有關(guān)(Coussensa/.，〃e/7e51/ere7o/w7e/7f13(11):1382-97(1999));Takanamie"人，Ca/2cer88(12):2686-92(2000);Toth-Jakatics"a厶，戶"力o/og/31(8):955-960(2000);Ribattie"/.，//^er/"/o/7s//owi73fl/o/*Ca/7cer85(2):171-5(2000))。本發(fā)明的藥物-配體偶聯(lián)物可任選地包含兩個或更多個連接物。例如，一個連接物可用來將藥物連接至配體而第二連接物可將診斷劑附聯(lián)至該復(fù)合物。額外的連接物的其他用途包括將分析劑、活質(zhì)分子、耙向劑以及可檢測的標(biāo)記連接至藥物-配體復(fù)合物。多個連接物可相同或不同。同樣在本發(fā)明的范圍之內(nèi)的是本發(fā)明的多種化合物，它們是多聚的或多價的種類(species)，包括例如一些種類，如本發(fā)明的化合物或其反應(yīng)性類似物的二聚體、三聚體、四聚體、或更高的同系物。多聚以及多價的種類可由本發(fā)明的一個單一種類或多于一個種類裝配而成。例如，二聚體構(gòu)建物可以是"同源二聚體"或者"異源二聚體"。此外，多聚和多價的構(gòu)建物(例如聚賴氨酸、右旋糖酐、羥乙基淀粉、以及類似物)也是在本發(fā)明的范圍內(nèi)，在這些構(gòu)建物中本發(fā)明的化合物或其反應(yīng)性類似物附聯(lián)至寡聚體或多聚體的構(gòu)架上。該構(gòu)架優(yōu)選是多官能的(即，具有一批用于附聯(lián)本發(fā)明的化合物的反應(yīng)性位點(diǎn))。此外，該構(gòu)架可用本發(fā)明的單一種類或本發(fā)明的多于一個的種類進(jìn)行衍生。此外，本發(fā)明包括多種化合物，相對于沒有被相似地官能化的類似的化合物而言，這些化合物被官能化以產(chǎn)生具有增強(qiáng)了的水溶性的化合物。因此，在此給出的取代基中的任何取代基可被類似的具有增強(qiáng)了的水溶性的基團(tuán)替換。例如，用二醇或具有季銨、羥基胺或類似的更具有水溶性部分的胺替換一個羥基基團(tuán)，這也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過用增強(qiáng)親本化合物水溶性的部分對在此給出的化合物的離子通道的活性沒有重要作用的位點(diǎn)進(jìn)行取代，賦予了附加的水溶性。增強(qiáng)有機(jī)化合物水溶性的方法在本領(lǐng)域中是已知的。此類方法包括，但不局限于，用永久帶電的部分，例如季銨、或在生理學(xué)上相關(guān)的pH條件下帶電的基團(tuán)(例如羧酸、胺)使一個有機(jī)核官能化。其他方法包括向有機(jī)核添加包含羥基或胺的基團(tuán)，例如醇、多元醇、聚醚、以及類似物。代表性的例子包括但不局限于，聚賴氨酸、聚乙烯亞胺、聚(乙二醇)以及聚(丙二醇)。這些化合物的適宜的官能化的化學(xué)品以及方案在本領(lǐng)域中是已知的。參見，例如，Dunn，R.L.，a厶,Eds.PolymericDrugsandDrugDeliverySystems,ACSSymposiumSeriesVol.469，AmericanChemicalSociety,Washington,D.C.1991。藥物在此處表示為"D"的藥物可在本發(fā)明中提供為藥物-配體偶聯(lián)物的一部分，其中該藥物通過一種連接物而連接至配體。藥物必須具有希望的生物活性，并包含一種反應(yīng)性官能團(tuán)以便連接至配體。希望的生物活性包括體診斷、治療、減輕、處理或預(yù)防動物體內(nèi)(如人)的疾病。因此只要具有所需的反應(yīng)性官能團(tuán)，術(shù)語"藥物"是指在官方美國藥典、官方美國順勢療法藥典或官方國家處方集或其任何補(bǔ)充中識別為藥物的化學(xué)品。示例性藥物陳述于醫(yī)師參考手冊(PDR)及美國食品藥物管理局(FDA)所維持的橙皮書中。隨著新藥持續(xù)地被發(fā)現(xiàn)與開發(fā)，本發(fā)明提供了使得這些新藥也并入本發(fā)明的藥物-配體復(fù)合物中的可能性。優(yōu)選的官能團(tuán)包括伯胺或仲胺、羥基、巰基、羧基、醛及酮。更優(yōu)選的官能團(tuán)包括羥基、伯胺或仲胺、巰基、以及羧酸官能團(tuán)。甚至更優(yōu)選的官能團(tuán)包括羥基、伯胺和仲胺以及羧酸官能團(tuán)。藥物必須具有至少一個，但可具有2、3、4、5、6或更多個反應(yīng)性官能團(tuán)。此外，自消間隔物！/可并入至藥物的反應(yīng)性官能團(tuán)與連接物之間。藥物-配體偶聯(lián)物對于通常目的(相應(yīng)的藥物是有效的)來說是有效的，但因其將藥物運(yùn)送至特別有益的希望的細(xì)胞的能力(對于至少一些配體來說是固有的)而具有優(yōu)異療效。示例性藥物包括蛋白質(zhì)、肽、及包含連接至配體的官能團(tuán)的小分子藥物。更確切地說，這些藥物包括(例如)酶抑制劑，如二氫葉酸還原酶抑制劑、胸甘酸合酶抑制劑、DNA插層劑、DNA切割劑、拓樸異構(gòu)酶抑制劑、蒽環(huán)類抗生素家族藥物、長春胺藥物、絲裂霉素、博來霉素、細(xì)胞毒性核苷、蝶啶家族藥物、伸二炔(diynene)類、鬼臼毒素、分化誘導(dǎo)劑及紫杉酚類。本發(fā)明優(yōu)選的藥物包括在癌癥治療中有用的細(xì)胞毒類藥物及其他具有希望的生物活性的小分子、蛋白質(zhì)或多肽，如毒素。藥物可選擇在腫瘤細(xì)胞通過偶聯(lián)至腫瘤特異性配體而被激活。這些腫瘤特異性藥物-配體偶聯(lián)物具有來自于配體的特異性的腫瘤特異性。其實(shí)例是藥物-配體偶聯(lián)物，藥物-配體偶聯(lián)物是對肺瘤特異性酶的高度選擇性底物，其中這些酶以充足的量存在于腫瘤附近以便在腫瘤附近產(chǎn)生細(xì)胞毒性水平的游離態(tài)藥物。這些腫瘤特異性藥物-配體復(fù)合物的一個優(yōu)點(diǎn)是它們對人血清中的伺機(jī)性蛋白是穩(wěn)定的。藥物-配體復(fù)合物的另一個優(yōu)點(diǎn)是比相對應(yīng)的游離態(tài)藥物的毒性低；此外，因特異性增高將導(dǎo)致較高百分比的復(fù)合物存在于腫瘤部位，故復(fù)合物的特異性允許相對于游離態(tài)藥物使用更低的總濃度。細(xì)胞毒素在本發(fā)明中有用的細(xì)胞毒類藥物例如包括多卡霉素類及CC-1065、以及及它們的類似物，包括多卡霉素的基于CBI(l，2，9，9a-四氫環(huán)丙烷[c]苯并[e]-引咮-4-酮)的類似物，基于MCBI(7-曱氧基-1，2，9，9a-四氫環(huán)丙烷[c]苯并[e]吲咮-4-酮)的類似物，以及CCBI(7-氰基-l，2，9，9a-四氫環(huán)丙烷[c]苯并[e]吲哚-4-酮)的類似物及CC-1065，阿霉素及阿霉素偶聯(lián)物(如嗎啉代-阿霉素及氰基嗎啉代-阿霉素)、多拉司他汀類(如多拉司他汀-IO、考布他汀、刺孢霉素、美登素、美登素類似物、DM-1、歐瑞抑制素(auristatin)E、歐瑞抑制素EB(AEB)、歐瑞抑制素EFP(AEFP)、一甲基歐瑞抑制素E(MMAE)、5-苯曱?；焖?AE酯(AEVB)、管溶解素類(tubulysins)、戴索拉左(disorazole)、埃博霉素(epothilones)、紫杉醇、多西他賽、SN-38、拓樸替康、根霉素、棘霉素、秋水仙堿、長春堿、長春地辛、雌莫司汀、西馬多丁、伊魯色洛水(eleutherobin)、甲氨蝶呤、曱基葉酸、二氯曱氨喋呤、5-氟尿嘧啶、6-巰嘌呤、阿糖胞苷、美法侖、洛諾生、異長春堿、放線菌素、柔紅霉素及柔紅霉素偶聯(lián)物、絲裂霉素C、絲裂霉素A、洋紅霉素、絲裂霉素、太利蘇霉素)，鬼臼毒素及鬼臼毒素衍生物(如依托泊苷或磷酸依托泊苷、長春新堿、紫杉酚、多西他賽、視黃酸、丁酸、N8-乙?；鶃喚?、喜樹堿及它們的類似物)。其他已知藥物也可經(jīng)改性來提供偶聯(lián)至此處所述連接物的一個官能團(tuán)。這種種化學(xué)修飾為本領(lǐng)域所已知。優(yōu)選的用于本發(fā)明的細(xì)胞毒素包括多卡霉素類、CC-1065及其基于CCBI的類似物及基于MCBI的類似物、嗎啉代-阿霉素、氰基嗎啉代-阿霉素、多拉司他汀-10、考布他汀、刺孢霉素、美登素、DM-1、歐瑞抑制素E、AEB、AEFP、醒AE、管溶解素A、戴索拉左、埃博霉素A及埃博霉素B。本發(fā)明的特別優(yōu)選的細(xì)胞毒素是強(qiáng)力活性的多卡霉素衍生物及CC-1065。親代藥劑是格外強(qiáng)力的抗腫瘤抗生素，可通過DNA的可逆的空間電子控制序列選擇性烷化來衍生其生物功效(Bogerefa厶/.Org.C力e邁.55:4499(1990);Bogerofa/./.J邁.C力e瓜Soc.112:8961(1990);Bogers人，/.J瓜C力e瓜Soc.113:6645(1991);Bogere"人/.爿邁.Soc.115:9872(1993);Bogere"7"ZeH.2:759(1992))。在最初揭示多卡霉素類之后，有全面性研究致力于闡明多卡霉素類的DM烷化選擇性及其結(jié)構(gòu)起源。本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的方面提供了一種細(xì)胞毒素化合物，該化合物具有根據(jù)以下化學(xué)式4的一個結(jié)構(gòu)其中，環(huán)狀體系A(chǔ)是選自取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、以及取代或未取代的雜環(huán)烷基中的一員。示例性的環(huán)狀體系包括苯基以及吡咯。符號E和G獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、一個雜原子、一個單鍵，或者E和G可任選地相接合以形成一個環(huán)狀體系，該系統(tǒng)選自取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、以及取代或未取代的雜環(huán)烷基。符號X表示選自0、S以及NR"中的一員。R"是選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、以及?；囊粏T。符號113表示選自(=0)、SR11、NHR"以及OR"中的一員，其中R11是H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、二磷酸酯類、三磷酸酯類、酰基、C(0)R12R13、C(O)OR12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHR12R13、SR"或SiR12R13R14。符號R12、R13、以及R"獨(dú)立地表示H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、以及取代或未取代的芳基，其中R"和R"與它們所附聯(lián)的氮原子或碳原子一起可任選地相接合以形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系。R4、R"、R5以及R5，是獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、卣素、N02、NR15R16、NC(O)R15、OC(0)NR15R16、OC(O)OR15、C(O)R15、SR15、OR15、S03、S02R15、CR15-NR16、以及O(CH2)J(CH3)2的成員，其中，n是從l到20的一個整數(shù)，或者R4、R4，、W及R5，的任何相鄰的一對與它們所附著的碳原子一起相接合以形成一個具有4至6元的、取代或未取代的環(huán)烷基或雜環(huán)烷基環(huán)狀體系。R"和R"獨(dú)立地表示H、取代或未取代的炕基、取代或未取代的雜烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、以及取代或未取代的肽基，其中R"和R"與它們所附聯(lián)的氮原子一起可任選地相接合以形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系。一個示例性的結(jié)構(gòu)是苯胺。R4、R4'、R5、R5'、R11、R12、R13、R"以及R"中的至少一個用來將藥物結(jié)合至如此處所述的本發(fā)明的連接物，例如將藥物連接至L1(若存在時)、或連接至F。在一個實(shí)施方案中，R4、R4，、R5、R5，、R11、R12、R13、R15以及R"中的至少一個帶有適合用于偶聯(lián)該化合物的一個反應(yīng)基團(tuán)。在另一個示例性實(shí)施方案中，R4、R4，、R5、R5，、R11、R12、R13、R15以及R16獨(dú)立地選自H、取代的烷基以及取代的雜烷基，并且在烷基或雜烷基部分的自由末端具有一個反應(yīng)性官能團(tuán)。R4、R"、R5、R5，、R11、R12、R13、R"以及R"中的一個或多個可偶聯(lián)至其他的種類上，例如靶向劑、可檢測的標(biāo)記、固相支撐體等。R6是一個單鍵，該單鍵存在或不存在。當(dāng)R6存在時，R6和R'相接合以形成一個環(huán)丙基的環(huán)?！菏荂H2-X'或-CH廣。當(dāng)R'是-CH廣時，它是環(huán)丙烷環(huán)的一個組成部分。符號Xi表示離去基團(tuán)如囟素，例如C1、Br或F。以不會違反化學(xué)價原則的方式解釋W(xué)和R'的組合。X'可以是任何離去基團(tuán)。有用的離去基團(tuán)包括但不限于鹵素、疊氮化物、磺酸酯類(如烷基磺酰基、芳基磺?；?、氧鐵離子、高氯酸烷基酯、銨基烷基磺酸酯、烷基氟代磺酸酯以及氟化化合物(如三氟甲磺酸鹽、全氟丁基甲磺酸鹽、三氟乙磺酸鹽)以及類似物。作為離去基團(tuán)有用的具體的卣素是F、Cl以及Br。對于特定的反應(yīng)條件組合來說適當(dāng)?shù)倪@些以及其他離去基團(tuán)的選擇是在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的能力之內(nèi)(參見，例3口，MarchJ，AdvancedOrganicChemistry,2ndEdition,JohnWileyandSons,1992;SandlerSR，KaroW，OrganicFunctionalGroupPreparations，2ndEdition,AcademicPress,Inc.,1983;以及WadeLG，CompendiumofOrganicSyntheticMethods,JohnWileyandSons,1980)。六元環(huán)中的曲線表明該環(huán)可具有一個或多個不飽和度，并且它可以是芳香的。因此，環(huán)結(jié)構(gòu)(如以下所給出)、以及相關(guān)結(jié)構(gòu)在化學(xué)式(5)的范圍內(nèi)在某些實(shí)施方案中，R4、R4'、R5以及IT中的至少一個將所述藥物連接至L1(若存在時)、或連接至F。在一個實(shí)施方案中，rh包括一個部分x5，該xs不會自我環(huán)化并且將藥物連接至L1(若存在時)、或連接至F。X5部分優(yōu)選的可使用酶切割，并且當(dāng)切割后產(chǎn)生活性藥物。作為一個實(shí)例，ir可具有以下結(jié)構(gòu)(右側(cè)是偶合至該藥物的其余部分)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>在一個示例性實(shí)施方案中，具有化學(xué)式(4)的環(huán)狀體系A(chǔ)是一個取代或未取代的苯基環(huán)。環(huán)狀體系A(chǔ)可被在此限定部分中給出的一個或多個芳基基團(tuán)取代基所取代。在一些實(shí)施方案中，該苯基環(huán)被CN或甲氧基部分所取代。在另一個示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種具有根據(jù)化學(xué)式6的結(jié)構(gòu)的化合物在這個實(shí)施方案中，取代基R3、R4、R4，、R5、R5'、R6、W以及X的身份，連同對于特定的實(shí)施方案的優(yōu)選項(xiàng)，基本上如同以上對于化學(xué)式4所做的說明所述。符號Z是獨(dú)立選自0、S和NR"的成員。符號R"表示選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、以及?；某蓡T。對每個R"進(jìn)行獨(dú)立地選擇。符號W代表H、取代或未取代的低級烷基，或C(0)R8或C02R8。118是選自取代的烷基、未取代的烷基、NR9lT、NR9NHIT以及0R9中的一員。R9和R"獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的雜烷基。f是H、或取代或未取代的低級烷基。通常優(yōu)選的是當(dāng)W是取代的烷基時，它不同于全氟烷基，例如CF"在一個實(shí)施方案中，112是一個取代的烷基，其中該取代物不是囟素。在另一個實(shí)施方案中，R2是一個未取代的烷基。在某些實(shí)施方案中，W是一個酯部分，例如C02CH3。在某些實(shí)施方案中，R2是一個低級的烷基基團(tuán)，它可以是取代或未取代的。一個目前優(yōu)選的低級烷基基團(tuán)是CH3。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，W是C02CH3并且Rid在某些實(shí)施方案中，R4、R4，、R5、以及R5，是獨(dú)立地選自H、卣素、NH2、OMe、0(CH2)2N(R29)2、以及即2的成員。每個R"均獨(dú)立地是H或低級烷基(例如甲基)。在某些實(shí)施方案中，對藥物進(jìn)行選擇，使離去基團(tuán)r是選自下組的成員，該組的構(gòu)成為卣素、烷基磺?；?、芳基磺酰基、以及疊氮化物。在某些實(shí)施方案中，Xi是F、Cl、或Br。在某些實(shí)施方案中，Z是O或NH。在某些實(shí)施方案中，X是O。在又另一個示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有根據(jù)化學(xué)式7或8的結(jié)構(gòu)的化合物(7)(8)具有化學(xué)式4的多卡霉素類似物的另一個優(yōu)選的結(jié)構(gòu)是這樣一個結(jié)構(gòu)，其中環(huán)狀體系A(chǔ)是一個未取代的或取代的苯基環(huán)。當(dāng)環(huán)狀體系A(chǔ)是吡咯時，在以上說明的具有化學(xué)式4的結(jié)構(gòu)的藥物分子上的優(yōu)選的取代基也是當(dāng)環(huán)狀體系A(chǔ)是未取代的或取代的苯基環(huán)時優(yōu)選的取代基。例如，在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物(D)包含化學(xué)式(9)的結(jié)構(gòu)在這個結(jié)構(gòu)中，R3、R6、R7、X是如以上對化學(xué)式4所述。此外，Z是選自0、S以及NR"中的一員，其中R"是選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、以及?；械囊粏T；W是H、取代或未取代的低級烷基、C(0)R8或C02R8，其中R8是選自NRY。以及or中的一員，其中R'以及IT是獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烷基以及取代或未取代的雜烷基中的成員；R1'是H、取代或未取代的低級烷基、或C(O)R8，其中R8是選自NR9R1。以及0R'中的一員，其中RV乂及l(fā)T是獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烷基以及取代或未取代的雜烷基中的成員；R'是H、或取代或未取代的低級烷基、或未取代的雜烷基、或氰基、或烷氧基；以及R〃是H、或取代或未取代的低級烷基、或未取代的雜烷基。R4、R4'、R5、R5'、R11、R12、R13、R"或R"中的至少一個將藥物連接至L1(若存在時)、或連接至F。藥物(D)的另一個實(shí)施方案包含一個結(jié)構(gòu)(13),此處R4與IT已經(jīng)接合而形成一個雜環(huán)烷基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>在這個結(jié)構(gòu)中，R3、R5、R5'、R6、R7、X是如以上對化學(xué)式4所述。此外，Z是選自0、S以及NR"中的一員，其中R"是選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、以及?；械囊粏T；R32是選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、卣素、N02、NR15R16、NC(0)R15、0C(0)NR"R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、以及0(CH》J(CH3)2,其中n是l至20的整數(shù)。R"以及R"獨(dú)立地代表H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、以及取代或未取代的肽基，其中R"以及R"與它們所附聯(lián)的氮原子一起可任選地相接合以形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系。R5、R5'、R11、R12、R13、R15、R"或R32中的至少一個將藥物連接至L1(若存在時)、或連接至F。在至少某些實(shí)施方案中，R32將藥物連接至L1(若存在時)、或連接至F。這個化合物的一個優(yōu)選的實(shí)施方案是W是H、取代或未取代的低級烷基、C(0)R8、或C02R8，其中R8是選自NR'!T以及0R'中的一員，其中W以及IT是獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烷基以及取代或未取代的雜烷基中的成員；R1'是H、取代或未取代的低級烷基、或C(O)R8，其中R8是選自NRY。以及0W中的一員，其中R'以及R"是獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烷基、以及取代或未取代的雜烷基中的成員；R2是H、或取代或未取代的低級烷基、或未取代的雜烷基、或氰說明書第45/121頁基、或烷氧基；以及W是H、或取代或未取代的低級烷基、或未取代的雜烷基。又一個實(shí)施方案具有以下化學(xué)式在這個結(jié)構(gòu)中，A、R6、R7、X、R4、R4'、R5以及IT是如以上對化學(xué)式4所述。此外，Z是選自0、S以及NR"中的一員，其中R"是選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜垸基、以及?；械囊粏T；R"是選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、閨素、N02、NR"R"、NC(0)R15、0C(0)NR"R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=NR"、以及0(CH丄N(CH3)2,其中n是l至20的整數(shù)。R"以及R"獨(dú)立地選自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、以及取代或未取代的肽基，其中R"以及R"與它們所附聯(lián)的氮原子一起可任選地相接合來形成一個具有4至6元的、可任選地含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系。R"將該藥物連接至L1(若存在時)、或連接至F。優(yōu)選地，A是取代或未取代的苯基或取代或未取代的吡咯。另外，此處說明的用于R"的取代基的任何選擇也可應(yīng)用于R33。配體X4代表選自下組的一個配體，該組的構(gòu)成為受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、不受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的標(biāo)記、以及靶向劑。優(yōu)選的配體是靶向劑，例如抗體及其片段。W、i]-「—a|kyl在某些實(shí)施方案中，基團(tuán)X4可被描述為選自R29、COOR29、C(O)NR29以及C(0)NNR"中的一員，其中R"是選自取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、以及取代或未取代的雜芳基中的一員。在又另一個示例性實(shí)施方案中，R"是選自以下各項(xiàng)中的一員H;OH;NHNH2;、N柳.(N柳.及00其中『代表取代或未取代的烷基，該烷基以一個反應(yīng)性官能團(tuán)封端；取代或未取代的雜芳基，該雜芳基以一個官能團(tuán)封端。以上結(jié)構(gòu)可以充當(dāng)反應(yīng)保護(hù)基團(tuán)，這些反應(yīng)保護(hù)基團(tuán)可以與(例如)靶向劑(如抗體)的一個氨基酸的側(cè)鏈進(jìn)行反應(yīng)，由此使該靶向劑連接至該連接物-藥物部分上。耙向劑本發(fā)明的連接物臂及細(xì)胞毒素可連接至靶向劑，該靶向劑選擇性遞送一個有效負(fù)載至身體的細(xì)胞、器官或區(qū)域。示例性的靶向劑類，如各種抗體(例如嵌合型抗體、人源化抗體及人抗體)、用于受體的配體、凝集素類、糖類、抗體類等等在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的并且是有用的而對實(shí)施本發(fā)明沒有限制。其他一些靶向劑包括一類化合物，這些化合物不包括特定的分子辨識基序，而包括大分子類，如聚(乙二醇)、多糖、聚氨基酸等，它們增加細(xì)胞毒素的分子量。額外的分子量影響細(xì)胞毒素的藥物代謝動力學(xué)，例如血清半衰期。在一個具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供具有靶向劑的細(xì)胞毒素、連接物或細(xì)胞毒素-連接物偶聯(lián)物，該靶向劑是活質(zhì)分子，例如抗體、受體、肽、凝集素、糖、核酸或它們的一個組合?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明的活質(zhì)分子可衍生自任何來源?；钯|(zhì)分子可從天然來源分離，或可通過合成方法產(chǎn)生。蛋白質(zhì)可以是天然蛋白質(zhì)或突變蛋白質(zhì)?？赏ㄟ^本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的化學(xué)誘變、位點(diǎn)定向誘變、或其他誘導(dǎo)突變的手段執(zhí)行突變。可用于實(shí)施本發(fā)明的蛋白200880005895.0質(zhì)包括(例如)酶、抗原、抗體、以及受體。抗體可以是多克隆抗體或單克隆抗體，但最優(yōu)選為單克隆抗體。肽及核酸可分離自天然來源，或可以是全部合成或部分合成來源。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，靼向劑是一種抗體或抗體片段，該抗體或抗體片段是基于它對于在所感興趣的靶細(xì)胞或靶位點(diǎn)上表達(dá)的抗原的特異性來進(jìn)行選擇。已經(jīng)識別廣泛的多種腫瘤特異性抗原或其他疾病特異性抗原，并且這些抗原的抗體已被使用或已經(jīng)提出用于治療此類腫瘤或其他疾病。本領(lǐng)域已知的抗體可用于本發(fā)明的偶聯(lián)物，特別用于治療靶抗原相關(guān)聯(lián)的疾病。本發(fā)明的抗體-連接物-藥物偶聯(lián)物可鎖定目標(biāo)的靶抗原(及其相關(guān)疾病)的非限制性實(shí)例包括Her2(乳癌)、CD20(淋巴瘤)、EGFR(實(shí)體瘤)、CD22(淋巴瘤，包括非何杰金氏淋巴瘤)、CD52(慢性淋巴細(xì)胞白血病)、CD33(急性骨髓性白血病)、CD4(淋巴瘤、自身免疫疾病，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、CD30(淋巴瘤，包括非何杰金氏淋巴瘤)、Mucl8(黑素瘤)、整聯(lián)蛋白類(實(shí)體瘤)、PSMA(前列腺癌、良性前列腺增生)、CEA(結(jié)腸直腸癌)、CDlla(牛皮褲)、CD80(牛皮褲)、CD23(氣喘)、CD40L(免疫性血小板減少性紫癜)、CTLA4(T細(xì)胞淋巴瘤)、以及BLys(自身免疫疾病，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡)。在這些實(shí)施方案中，其中識別部分為蛋白質(zhì)或抗體的，蛋白質(zhì)可被系至表面或自我組裝單層(SAM)組件，或蛋白質(zhì)通過蛋白質(zhì)表面上可用的任一個反應(yīng)性肽殘基而通過一個間隔物連接。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，反應(yīng)基團(tuán)為胺或羧酸根。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，反應(yīng)基團(tuán)是賴氨酸殘基的e-胺基團(tuán)。此外，這些分子可通過非特異性相互作用(例如化學(xué)吸附、物理吸附)而吸附至基質(zhì)或SAM表面。屬于抗體的識別部分可用來識別分析物，分析物為蛋白質(zhì)，肽，核酸，糖類或小分子(例如藥物、除草劑、殺蟲劑)，工業(yè)用化學(xué)品、以及戰(zhàn)爭試劑。對特定分子提引出抗體的方法為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知。參見例如美國專利號5，147，786;5，334，528;5，686，237;以及5，573，922。將抗體附聯(lián)至表面的方法也是領(lǐng)域已知的。參見例如Delamarche"Za邱脂'r12:1944-1946(1996)。靶向劑可通過任一種可用的反應(yīng)基團(tuán)附聯(lián)至本發(fā)明的連接物。例如，肽可通過胺、羧基、巰基或羥基基團(tuán)而附聯(lián)。這樣一種基團(tuán)可駐在肽末端或駐在肽鏈內(nèi)部的一個位置。核酸可通過堿基上的反應(yīng)基團(tuán)(例如環(huán)外胺)或糖部分上可用的羥基(例如3，-羥基或5'-羥基)而附聯(lián)。肽及核酸鏈可進(jìn)一步在一個或多個部位衍生來允許適當(dāng)反應(yīng)基團(tuán)附聯(lián)至鏈上。參見例如Chriseyefa人iV"c/e/cJc/^ies.24:3031-3039(1996)。當(dāng)肽或核酸為全部合成分子或部分合成分子時，反應(yīng)基團(tuán)或經(jīng)過遮蔽的反應(yīng)基團(tuán)可在合成過程結(jié)合入其中。多種適合結(jié)合于肽及核酸二者的反應(yīng)基團(tuán)的衍生單體為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所已知。參見例如ThePeptides:Analysis,Synthesis,Biology,Vol.2:"SpecialMethodsinPeptideSynthesis,"Gross,E.andMelenhofer，J.，Eds"AcademicPress,NewYork(1980)。許多有用的單體是可商購的(Bachem、Sigma等)。然后這種經(jīng)遮蔽的基團(tuán)在合成后4皮解除遮蔽，此時變成可供與本發(fā)明化合物的組分反應(yīng)。示例性核酸靶向劑包括適體、反義化合物、以及形成三螺旋的核酸。典型地，糖殘基的羥基、來自于堿殘基的氨基、或核苷酸的磷酸氧被用作所需的化學(xué)官能度，來將基于核苷酸的靶向劑偶合至細(xì)胞毒素。然而，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易地理解其他"非天然"反應(yīng)官能度可通過常規(guī)技術(shù)附加至核酸。例如，糖殘基的羥基可使用本領(lǐng)域所熟知的技術(shù)而轉(zhuǎn)換成為巰基或氨基。適體(或核酸抗體)是可與特定的分子標(biāo)靶結(jié)合的單鏈或雙鏈DNA或單鏈RNA分子。通常，適體是通過與血液中循環(huán)的標(biāo)靶匯集物結(jié)合，通過抑制分子標(biāo)靶(例如蛋白質(zhì))的作用來發(fā)揮功能。適體具有化學(xué)官能度，并因此可如此處所述而共價鍵合至細(xì)胞毒素。雖然廣泛的多種分子標(biāo)靶可與適體形成非共價關(guān)聯(lián)，但為特異性關(guān)聯(lián)，包括小分子藥物、代謝產(chǎn)物、輔因子、毒素、基于糖的藥物、基于核苷酸的藥物、糖蛋白、以及類似物，但通常分子標(biāo)靶將包含蛋白質(zhì)或肽，包括血清蛋白、激肽、類二十烷酸類、細(xì)胞表面分子等。適體的實(shí)例包括吉里(Gilead，s)抗凝血酶抑制劑GS522、以及其衍生物(GileadScience,FosterCity,Calif.)。還參見Macaya"a入戶roc.iV"/.Jcad.Sc/.90:3745-9(1993);Bock".V由re"o油W355:564-566(1992)andWang"a/.A/oc力e邁.32:1899-904(1993)。給定活質(zhì)分子的特定適體可使用本領(lǐng)域已知的技術(shù)識別。參見例如Toole等人(1992)PCT公開號W092/14843;Tuerk及Gold(1991)PCT公開號W091/19813;Weintraub及Hutchinson(1992)PCT公開號92/05285;及EllingtonandSzostak，V由re346:818(1990)。簡言之，這些技術(shù)典型地涉及分子標(biāo)靶與寡核苷酸的隨機(jī)混合物的復(fù)合。將適體-分子標(biāo)靶復(fù)合物從未經(jīng)復(fù)合的寡核苷酸分離。將適體從分離的復(fù)合物中回收及擴(kuò)增。這種循環(huán)被重復(fù)進(jìn)行來識別出對分子標(biāo)靶具有最高親和力的這些適體分子。對于由于基因的不適當(dāng)表達(dá)所導(dǎo)致的疾病，特異性預(yù)防或減少此類基因的表達(dá)代表著理想的治療。原則上，通過與mRNA中可接近的一個序列、或前mRNA加工所必需的轉(zhuǎn)錄本內(nèi)部的一個序列、或基因本身內(nèi)部的一個序列互補(bǔ)的單鏈脫氧核苷酸或核糖脫氧核苷酸的雜交，可抑制、減少、或關(guān)閉特定基因產(chǎn)物的產(chǎn)生。這種基因控制模式通稱為反義抑制或反基因抑制。通過偶聯(lián)至烷化劑的核酸(例如本發(fā)明的烷化劑的核酸)可賦予額外療效。反義化合物是一些核酸，這些核酸被設(shè)計(jì)用來結(jié)合并使之失去功能、或防止負(fù)責(zé)生成特定蛋白質(zhì)的mRM的產(chǎn)生。反義化合物包括反義RNA或反義DNA、單鏈或雙鏈寡核苷酸或它們的類似物，它們可特異地雜交至個別mRNA種類，并防止該mRNA種類的轉(zhuǎn)錄和/或RM加工，和/或防止所編碼的多肽的翻譯，并由此執(zhí)行個別編碼多肽量的減少。ChingAaW.JcaASc/.K&A86:10006-10010(1989);Brodere"厶細(xì).M艦113:604-618(1990);Loreau"a/.Ze"e"274:53-56(1990);Holcenberg等人的,1/11535;WO91/09865;WO91/04753;W090/13641;WO91/13080，WO91/06629,以及EP386563)。由于其優(yōu)異的標(biāo)靶敏感度、以及選擇性，反義寡核苷酸可用于將治療劑(例如本發(fā)明的細(xì)胞毒素)遞送至期望的分子標(biāo)靶。其他文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道，核酸可通過三股螺旋的形成而結(jié)合至雙螺旋DNA,并抑制轉(zhuǎn)錄和/或DNA合成。三股螺旋化合物(也稱作為三股藥物)是寡核苷酸，該寡核苷酸結(jié)合至雙鏈DNA序列并意在選擇性抑制致病基因的轉(zhuǎn)錄，致病基因例如是病毒基因(如HIV病毒及單純皰療病毒)、以及致癌基因，即三股螺旋化合物停止細(xì)胞核的蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。這些藥物可直接結(jié)合至細(xì)胞基因組中的雙鏈DNA來形成三股螺旋，并阻止細(xì)胞制造靶蛋白質(zhì)。參見例如PCT公開文件號W092/10590、W092/09705、W091/06626、以及美國專利號5,176,996。因此，本發(fā)明的細(xì)胞毒素也可與形成三股螺旋的核酸序列相偶聯(lián)。核酸(例如反義化合物、以及三股螺旋藥物)的位點(diǎn)特異性不會顯著受到磷酸二酯鍵的修飾、或受到寡核苷酸末端的化學(xué)修飾的顯著影響。結(jié)果，這些核酸可經(jīng)過化學(xué)修飾；提升總的結(jié)合穩(wěn)定性，提高對化學(xué)分解的穩(wěn)定性，提高寡核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞內(nèi)部的速率，并對分子給予化學(xué)反應(yīng)性。組成反義治療中有用的各種核酸的總體辦法已由vanderKrol"a/.，"/o"c力/z/,s6:958-976(1988)andSteina人48:2659-2668(1988)綜述。因此，在一個示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明的細(xì)胞毒素是通過磷酸二酯鍵的修飾而與核酸相偶聯(lián)。此外，本發(fā)明的適體、反義化合物、以及載有細(xì)胞毒素的三股螺旋藥物也包括核苷酸置換、添加、缺失或轉(zhuǎn)座，只要保有與相關(guān)耙序列特異性雜交或結(jié)合作為寡核苷酸的功能特性即可。例如，一些實(shí)施方案采用疏代磷酸酯類似物，它們比其天然存在的磷酸二酯相似物，對被核酸酶分解更具有抵抗力，因此預(yù)期在活體內(nèi)將有更高持久性與更大強(qiáng)度(參見命J:i(口Campbellefa/.,/.A/oc力e邁.A/opAj^.#e^ods20:259-267(1990))。寡核苷酸的氨基磷酸酯衍生物也已知可結(jié)合至互補(bǔ)的多核苷酸，有額外適應(yīng)共價附聯(lián)配體種類的能力，并適合用于本發(fā)明方法。參見命'J^t口Froehlereta人，iYi/(/e/cJc/^y16(11):4831(1988)。在某些實(shí)施方案中，適體、反義化合物、以及三股螺旋藥物將包含0-甲基核糖核苷酸(EP公告號360609)。也可使用嵌合型寡核苷酸(Dagle"a人，yVuc/e/cWes.18:4751(1990))。為了一些應(yīng)用，反義寡核苷酸、以及三股螺旋可包括聚酰胺核酸(Nielsen"".,Sc/e/ce254:1497(1991)以及PCT公開號W090/15065)或其他陽離子矛汁生物(Letsingerefa/.,/.j邁.C力e邁.Soc110:4470-4471(1988))。其他應(yīng)用可利用寡核苷酸，其中磷酸二酯鍵中的一個或多個已經(jīng)被電子等排基團(tuán)(例如長2-4個原子的核苷酸間鍵，如PCT乂^開號W092/05186及91/06556所述)取代，或被曱酰縮醛基(formacetal)取代(Matteuccie"/.,/.j瓜C力e邁.Soc.113:7767-7768(1991))或^皮酰胺基取代(Nielsen"a厶，Sc/e/7ce254:1497-1500(1991))。此外，核普酸類似物(例如其中糖或堿經(jīng)過化學(xué)修飾)可在本發(fā)明中采用。嘌呤類、以及嘧啶類的"類似的"形式是本領(lǐng)域通常已知的那些形式，其中多種被用作化學(xué)治療劑。示例性的但未窮盡的名單包括4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羥基曱基)尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羧基甲基胺基曱基-2-硫尿嘧^！、5-羧基曱基胺基甲基尿嗜咬、二氫尿嘧啶、肌苷、N6-異戊烯腺嘌呤、1-甲基腺噪呤、1-甲基假尿嘧啶、1-曱基鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2，2-二曱基鳥嘌呤、2-曱基腺嘌呤、2-曱基鳥嘌呤、3-曱基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-甲基腺噪呤、7-曱基鳥嘌呤、5-曱氨基曱尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嗜啶、P-D-甘露糖基奎辛(mannosylqueosine)、5，-曱氧羰基曱尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲疏基-W-異戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、偉伯妥索辛(wybutoxosine)、假尿嘧咬、查辛(queosine)、2-硫胞嗜啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧咬、4-硫尿嘧啶、5-甲尿嘧啶、N-尿嘧啶-5-氧基乙酸曱酯、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、假尿嘧啶、奎辛、2-硫胞嘧啶、及2,6-二氨基嘌呤。此外，常規(guī)堿基為g化堿基。此外，堿基上的2，-呋喃糖位置可具有未帶電的龐大基團(tuán)取代。未帶電的龐大基團(tuán)的實(shí)例包括支鏈烷基、糖、以及支鏈糖。末端修飾也提供有用程序來將細(xì)胞毒素偶聯(lián)至核酸，修飾細(xì)胞類型特異性、藥物代謝動力學(xué)、核通透性、以及寡核苷酸藥劑的絕對細(xì)胞攝取速率。例如，在5，端與3，端包括反應(yīng)基團(tuán)的一系列取代包括反應(yīng)基團(tuán)是已知的，允許細(xì)胞毒素的共價附聯(lián)。參見例如Oligodeoxynucleotides:AntisenseInhibitorsofGeneExpression,(1989)Cohen，Ed.，CRCPress;ProspectsforAntisenseNucleicAcidTherapeuticsforCancerandAIDS,(1991)，Wickstrom，Ed.，Wiley-Liss;GeneRegulation:BiologyofAntisenseRNAand廳，(1992)EricksonandIzant，Eds.，RavenPress;以及Antise證RNAand腿，(1992)，Murray:Ed.，Wiley-Liss。有關(guān)反義化合物的總體方法可參見antisenseRNAandDNA，(1988)，D.A.Melton,Ed.，ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,N.Y.)。可檢測的4示i己與本發(fā)明的化合物結(jié)合使用的特定的標(biāo)記或可檢測的基團(tuán)以及本發(fā)明的方法，只要它不顯著干擾本發(fā)明的化合物的活性或使用，通常不是本發(fā)明的關(guān)鍵方面?？蓹z測的基團(tuán)可以是任何具有可檢測的物理或化學(xué)特性的物質(zhì)。此類可檢測的標(biāo)記在免疫測定的領(lǐng)域中已得到很好的發(fā)展，并且通常，在此類方法中有用的大部分任何標(biāo)記都能被應(yīng)用至本發(fā)明中。因此，標(biāo)記是可通過光譜學(xué)、光化學(xué)、生物化學(xué)、免疫化學(xué)、電學(xué)、光學(xué)或化學(xué)手段可檢測的任何組分。本發(fā)明中有用的標(biāo)記包括磁珠(例如DYNABEADSTM)、熒光染料(例如，異硫氰酸熒光素、德克薩斯紅、堿性玫瑰精等)、放射性標(biāo)記(例如311、125I、35S、14C、或32P)、酶(例如，辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶以及其他在ELISA中常用的酶)、以及比色標(biāo)記，如膠體金或有色玻璃或塑料珠(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、膠乳等)。根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法，標(biāo)記可直接或間接偶合到本發(fā)明的化合物上。如以上所指，可使用多種標(biāo)記，標(biāo)記的選擇取決于所需的靈敏度、與化合物的結(jié)合的容易程度、穩(wěn)定性需求、可用的儀器操作、以及可支配的供應(yīng)物。當(dāng)本發(fā)明的化合物與可檢測的標(biāo)記相偶聯(lián)時，該標(biāo)記優(yōu)選是選自下組的一個成員，該組的構(gòu)成為放射性同位素、熒光試劑、熒光試劑前體、生色團(tuán)、酶類、以及它們的組合。將各種基團(tuán)結(jié)合到抗體的方法在本領(lǐng)域是熟知的。例如，經(jīng)常被偶聯(lián)到抗體的可檢測的標(biāo)記是一種酶，如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、p-半乳糖苷酶、以及葡萄糖氧化酶。非放射性標(biāo)記常常是通過間接手段附聯(lián)的。通常，配體分子(例如生物素)被共價地結(jié)合到該偶聯(lián)物的一個成分上。然后該配體與另一個分子(如抗生蛋白鏈菌素)結(jié)合，該分子是固有地可檢測的或者與信號系統(tǒng)(如可檢測的酶、熒光化合物、或化學(xué)發(fā)光化合物)共價結(jié)合。本發(fā)明的偶聯(lián)物的成分還可以直接偶聯(lián)到產(chǎn)生信號的化合物上，例如通過與酶或熒光團(tuán)相偶聯(lián)。作為標(biāo)記的所感興趣的酶主要是水解酶，特別是磷酸酶、酯酶以及糖苷酶、或氧化酶(oxidotase)，特別是過氧化物酶。熒光化合物包括熒光素及其衍生物、堿性玫瑰精及其衍生物、丹酰、傘形酮等?；瘜W(xué)發(fā)光化合物包括熒光素、以及2，3-二氫酞溱二酮，例如魯米諾。對于可以使用的各種標(biāo)記或信號產(chǎn)生體系的評述，參見美國專利號4，391，904。檢測標(biāo)記的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。因此，例如，當(dāng)該標(biāo)記是一種放射性標(biāo)記時，檢測方法包括閃爍計(jì)數(shù)器或如在放射自顯影法中的照相膠片的使用。當(dāng)該標(biāo)記是熒光標(biāo)記時，可通過用適當(dāng)光波長激發(fā)熒光染料并檢測產(chǎn)生的熒光可對其進(jìn)行檢測?？赏ㄟ^照相膠片、通過使用電子探測器(例如電荷耦合器件(CCD)或光電倍增管、以及其類似物)，可對該熒光進(jìn)行視覺上的檢測。類似地，可通過提供酶的適當(dāng)?shù)孜锊z測產(chǎn)生的反應(yīng)產(chǎn)物來對酶標(biāo)記進(jìn)行檢測。最后，可通過觀察與該標(biāo)記相關(guān)的顏色對簡單的比色標(biāo)記進(jìn)行簡單地檢測。因此，在各種試紙條測定(dipstickassay)中，所偶聯(lián)的金經(jīng)常顯示成粉紅色，而各種結(jié)合的珠顯示出珠的顏色。熒光標(biāo)記是目前優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈兙哂胁僮魃闲枰念A(yù)防措施少、并適合高通量顯像技術(shù)(光學(xué)分析包括在包含計(jì)算機(jī)的集成系統(tǒng)中用于分析的圖像的數(shù)字化)的優(yōu)點(diǎn)。優(yōu)選的標(biāo)記典型地具有以下的一項(xiàng)或多項(xiàng)特征高靈敏度、高穩(wěn)定性、低背景、低環(huán)境敏感性、以及標(biāo)記的高特異性。許多熒光標(biāo)記可從以下公司商購獲得SIGMA化學(xué)公司(SaintLouis,MO)、MolecularProbes(Eugene,OR)、R&Dsystems(Minneapolis,MN)、PharmaciaLKBBiotechnology(Piscataway，NJ)、C固TECHLaboratories，Inc.(PaloAlto,CA)、ChemGenesCorp.、AldrichChemicalCompany(Milwaukee,WI)、GlenResearch,Inc.、GIBC0BRLLifeTechnologies,Inc.(Gaithersburg，MD)、FlukaChemica-BiochemikaAnalytika(FlukaChemieAG,Buchs，Switzerland)、以及AppliedBiosystems(FosterCity，CA)、連同許多技術(shù)人員已知的其他的商業(yè)來源。此外，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員知道如何選擇合適的熒光團(tuán)用于特定的應(yīng)用中，并且如果商業(yè)上不容易獲得，則能夠從頭合成必需的熒光團(tuán)或?qū)缮藤彽臒晒饣衔镞M(jìn)行合成地修飾以達(dá)到希望的熒光標(biāo)記。除了小分子熒光團(tuán)外，自然發(fā)生的熒光蛋白以及此類蛋白的經(jīng)工程處理的類似物在本發(fā)明中也是有用的。此類蛋白包括(例如)刺胞動物的綠色焚光蛋白(Ward"".,飾W/o/.35:803—808(1982);Levinea/.,Co/zz/.^/oc力e邊.,力j^/(入，72B:77-85(1982))、來自費(fèi)氏弧菌菌林的黃色熒光蛋白(BaldwinWa/.,"/oc力e邁""/29:5509-15(1990))、來自共生甲藻屬甲藻(dinoflage1lateSymbiodiniumsp.)的多曱藻黃素-葉綠素(Morrisa人，尸/a/^#o/ecu/ar"/o7o^r24:673:77(1994))、來自海底藍(lán)細(xì)菌如藍(lán)藻的藻膽蛋白，例如藻紅蛋白和藻藍(lán)蛋白(Wilbanksefa/.，/.^'o人C力e邁.268:1226-35(1993)),及類似物。通常，在細(xì)胞毒素與靼向(或其他)試劑的間形成連接(并且任選是間隔基團(tuán))之前，這些化學(xué)官能度中的至少一個會被激活。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將理解，使用許多種標(biāo)準(zhǔn)方法和條件可以激活化學(xué)官能度，包括羥基、氨基以及羧基基團(tuán)。例如，可以通過用碳酰氯處理形成相應(yīng)的氯甲酸鹽或用對硝基苯氯曱酸鹽處理形成相應(yīng)的碳酸鹽來激活細(xì)胞毒素或靶試劑的羥基。在一個示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明利用包括一個羧基官能度的靶向劑。羧基可通過(例如)轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的?；栈锘蚧钚怎ザ患せ?。這個反應(yīng)可在如March，suprapp.388-89中所闡述的各種條件下進(jìn)行^在一個示例性實(shí)施方案中，通過含羧基的基團(tuán)與草酰氯進(jìn)行反應(yīng)來制備?；栈?。被激活的試劑與細(xì)胞毒素或細(xì)胞毒素-連接物臂結(jié)合體進(jìn)行反應(yīng)，以形成本發(fā)明的偶聯(lián)物。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將理解使用含羧基的靶向劑僅僅是說明性的，并且具有許多其他官能團(tuán)的試劑可偶聯(lián)到本發(fā)明的連接物上。反應(yīng)性官能團(tuán)為了說明的清晰，下面的討論集中在本發(fā)明的細(xì)胞毒素對靶試劑的結(jié)合上。焦點(diǎn)例證本發(fā)明的一個實(shí)施方案，從這個實(shí)施方案，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員很容易推斷出其他的實(shí)施方案。集中討論單一的實(shí)施方案并不意味著對本發(fā)明的限制。本發(fā)明的示例性化合物包含一個反應(yīng)性官能團(tuán)，該官能團(tuán)通常位于取代或未取代的烷基或雜烷基鏈上，使它們易附聯(lián)于其他種類上。該反應(yīng)性官能團(tuán)的一個有利位置是該鏈的末端位置。在操作本發(fā)明時有用的反應(yīng)基團(tuán)和反應(yīng)種類通常是那些在生物結(jié)合化學(xué)領(lǐng)域所熟知的反應(yīng)基團(tuán)和反應(yīng)種類。反應(yīng)性官能團(tuán)可以是受保護(hù)的或未受保護(hù)的，并且該官能團(tuán)的受保護(hù)的本性可以通過有機(jī)合成領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行改變。用反應(yīng)性細(xì)胞毒素類似物可獲得的目前偏愛的反應(yīng)種類是那些在相對溫和的條件下進(jìn)行的反應(yīng)種類。這些反應(yīng)種類包括擔(dān)不限于親核取代(例如，胺以及醇與?；栈?、活性酯的反應(yīng))、親電取代(例如，烯胺反應(yīng))以及碳-碳以及碳-雜原子多重鍵的加成(例如，邁克爾反應(yīng)、狄爾斯-阿爾德反應(yīng))。這些以及其他有用的反應(yīng)i寸論于例:ft口March,AdvancedOrganicChemistry,3rdEd.JohnWiley&Sons,NewYork,1985;Hermanson，BioconjugateTechniques,AcademicPress,SanDiego，1996;以及Feeney"a/.，ModificationofProteins;AdvancesinChemistrySeries,Vol.198，AmericanChemicalSociety,Washington,D.C.，1982。示例性反應(yīng)類型包括羧基及其不同的衍生物的反應(yīng)，羧基衍生物包括但不限于N-羥基丁二酰亞胺酯、N-羥基苯并三唑(N—hydroxybenztriazole)酉旨、醜基閨、醜Ip米峻、石克4戈酸酉旨、對^^基苯基酯、烷基、鏈烯基、炔基以及芳香酯。羥基基團(tuán)可被轉(zhuǎn)變?yōu)轷ァ⒚?、醛等。通過與例如胺、羧酸陰離子、硫醇陰離子、碳負(fù)離子或醇鹽離子進(jìn)行反應(yīng)，卣烷基基團(tuán)可被轉(zhuǎn)變?yōu)樾碌姆N類。二烯親合物(例如馬來酰亞胺)基團(tuán)參與狄爾斯-阿爾德反應(yīng)。醛基或酮基基團(tuán)可被轉(zhuǎn)變?yōu)閬啺?、腙、縮氨基脲或肟，或通過例如Grignard加成反應(yīng)或烷基鋰加成反應(yīng)這樣的機(jī)制完成這些轉(zhuǎn)變?；酋；|化物容易與胺進(jìn)行反應(yīng)，例如形成磺酰胺。胺或巰基基團(tuán)被(例如)?；?、烷基化或氧化。使用環(huán)加成作用、?；饔?、邁克爾加成等，可將烯轉(zhuǎn)變?yōu)橐幌盗行碌姆N類。環(huán)氧化物容易與胺以及羥基化合物進(jìn)行反應(yīng)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將容易理解，這些連接中有許多可通過多種方法并j吏用多種條件產(chǎn)生。對酯的制備，見例如，Marchw/raat1157;對于石克代酸酯，見March,sw/raat362-363，491，720-722，829，941，and1172;對于碳酸酯，見March,at346-347;對于氨基曱酸酯，見March，wpraat1156-57;對于酰胺，見Marchwpraat1152;對于脲及石克脲，見Marchswpraat1174;對于縮醛以及縮酉同，見Greeneeta人s"pra178—210和Marchsu;raat1146;對于酰氧基烷基f汴生物，見Prodrugs:TopicalandOcularDrugDelivery,K.B.Sloan,ed.，MarcelDekker，Inc.,NewYork,1992;對于烯醇酯，見Marchsupraat1160;對于N-亞磺亞酰胺(N-sulfonylimidates)，見例如Bundgaarde"/.，/.#e<!C力復(fù),31:2066(1988);對于酸酐，見Marchswpraat355-56，636-37，990-91,and1154;對于N-酰胺，見Marchwpraat379;對于N-曼尼希堿，見Marchat800-02，and828;對于羥甲基酮酯，見Petraceka/,^/ah#FJcad.Sc/.，507:353—54(1987);對于二石克化物，見Marchat1160;以及對于磷酸酯及膦酰胺酯的制備。反應(yīng)性官能團(tuán)可以未被保護(hù)并被選擇，這樣它們不參與或干涉反應(yīng)。可替代地，反應(yīng)性官能團(tuán)可通過保護(hù)基團(tuán)的存在受到保護(hù)而不參與反應(yīng)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將領(lǐng)會怎樣保護(hù)特定官能團(tuán)不干擾已選擇的一組反應(yīng)條件。對于有用的保護(hù)基的例子，參見GreeneWa/.，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,JohnWiley&Sons,NewYork,1991。典型地，使用標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)技術(shù)將靶向劑通過它們各自的化學(xué)官能度被共價連接至細(xì)胞毒素上。任選地，連接物或試劑通過一個或多個間隔基團(tuán)與該試劑進(jìn)行偶合。當(dāng)組合使用時，間隔基團(tuán)可以是等效的或不同的。通常，在細(xì)胞毒素與反應(yīng)性官能團(tuán)(并且任選地是間隔基團(tuán))之間形成連接之前，化學(xué)官能團(tuán)中的至少一個將被激活。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將理解，使用許多種標(biāo)準(zhǔn)方法和條件可以激活化學(xué)官能度，包括羥基、氨基以及羧基基團(tuán)。在一個示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明包含了一個作為反應(yīng)性官能團(tuán)的羧基官能度。羧基可以如此處以上說明被激活。偶聯(lián)物的實(shí)例本發(fā)明的連接物可用于包含多卡霉素或CBI類似物作為細(xì)胞毒劑的偶聯(lián)物中。本發(fā)明的偶聯(lián)物的實(shí)例的進(jìn)一步細(xì)節(jié)說明如下。除非另外指出，否則如以上有關(guān)細(xì)胞毒素以及連接物的相關(guān)章節(jié)中對取代基進(jìn)行定義。適當(dāng)偶聯(lián)物的一個實(shí)例是一種以下化學(xué)式的化合物X4——(L4)p-F—(L"m十D其中1^是一種自消性連接物；m是一個整數(shù)0、1、2、3、4、5、或6;F是包含以下結(jié)構(gòu)的連接物其中AA是選自下組的一個氨基酸，該組的構(gòu)成為天然氨基酸以及非天然oc-氨基酸；L2是自消性連接物；o是0或l;1/是一個連接物成員；P是0或1;r是選自下組的一員不受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)該組的構(gòu)成為受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的標(biāo)記、以及靼向劑；并且D包含一個結(jié)構(gòu):其中環(huán)狀體系A(chǔ)是取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜環(huán)烷基的基團(tuán)；E以及G是獨(dú)立地選自H、取代和未取代的烷基、取代和未取代的雜烷基、雜原子、以及單鍵中的成員，或E與G相接合來形成一個環(huán)狀體系，該環(huán)狀體系選自取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜芳基以及取代和未取代的雜環(huán)烷基；x是選自0、s以及nr"中的一員；r"是h、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、或?；?；R3是0r11，其中RH是選自下組的一員，該組的構(gòu)成為h、取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、二磷酸酯、三磷酸酯、?；?、c(o)rT、c(o)or12、c(o)nr12r13、p(o)(or12)2、c(o)chr12r13、SR12、或SiRH〗4，其中r12、r"以及r"是獨(dú)立地選自h、取代和未取代的烷基、取代和未取代的雜烷基、以及取代和未取代的芳基中的成員，其中f以及r"與它們所附聯(lián)的氮原子或碳原子一起可任選地相接合以形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；r4、r4'、r5、以及f是獨(dú)立地選自下組的成員，該組的構(gòu)成為h、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的雜芳基、未取代的雜芳基、取代的雜環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)烷基、鹵素、n02、nr"r"、nc(0)r15、0c(0)nr"r16、0c(0)0r15、c(0)r15、sr15、0r15、s03、s02r15、cr15=nr16、以及0(ch2)nn(ch3)2，或者r4、r"、r5"及r5，的任何相鄰的一對與它們所附聯(lián)的碳原子一起相接合以形成一個具有4至6元的、取代或未取代的環(huán)烷基或雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；其中n是l至20的整數(shù)；r"以及r"獨(dú)立地選自h、取代和未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜芳基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、以及取代和未取代的肽基，其中r"以及r"與它們所附聯(lián)的氮原子一起可任選地相接合以形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；!^是一個單鍵，該單鍵存在或不存在，并且當(dāng)其存在時，！^與r7相接合以形成一個環(huán)丙基的環(huán)；并且R'是所述環(huán)丙基的環(huán)中與W相接合的CH2-Xi或-CH2-，其中Xi是離去基團(tuán)，其中R4、R4'、R5、R5'、R11、R12、R13、R15、或R"中的至少一個將所述的藥物連接至L1(若存在時)、或連接至F;或其藥學(xué)上可接受的鹽。另一個實(shí)施方案是以下化學(xué)式的一種化合物x,AAlhHLt其中i/是取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜烷基；m是一個整數(shù)0、1、2、3、4、5、或6;AA工是選自下組的一個氨基酸，該組的構(gòu)成為天然氨基酸以及非天然a-氨基酸；y是取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、未取代的雜環(huán)烷基、取代的雜環(huán)烷基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的雜芳基；L3是取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜環(huán)烷基；o是0或l;1/是一個連接物成員；P是0或1;X4是選自下組的一員，該組的構(gòu)成為受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、不受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的標(biāo)記、以及靶向劑；并且D包括一種結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula>其中環(huán)狀體系A(chǔ)是取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜環(huán)烷基；E以及G是獨(dú)立地選自H、取代和未取代的烷基、取代和未取代的雜烷基、雜原子、以及單鍵中的一員，或E與G相接合來形成一個環(huán)狀體系，該環(huán)狀體系選自取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜芳基、以及取代和未取代的雜環(huán)烷基；X是選自0、S以及NR"中的一員；R"是H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、或?；籖3是0R11,其中ru是h、取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、二磷酸酯、三磷酸酯、?；?、C(0)R"R13、C(0)0R12、C(0)NR12R13、P(0)(OR12)2、C(0)CHRT、SR12、或SiRTR"，其中R12、R"以及R"是獨(dú)立地選自H、取代和未取代的烷基、取代和未取代的雜烷基、以及取代和未取代的芳基中的成員，其中R"以及R"與它們所附聯(lián)的氮原子或碳原子一起可任選地相接合來形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的一個取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；R4、R4'、R5、以及115'是獨(dú)立地選自下組的成員，該組的構(gòu)成為H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的雜芳基、未取代的雜芳基、取代的雜環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)烷基、鹵素、N02、S03、S02R15、NR"R"、NR"C(0)R15、0C(0)NR15R16、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15-NR16、以及0(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4，、R5以及R5，的任何相鄰的一對與它們所附聯(lián)的碳原子一起相接合以形成一個具有4至6元的、取代或未取代的環(huán)烷基或雜環(huán)坑基環(huán)狀體系；其中n是l至20的整數(shù)；R"以及R"獨(dú)立地選自H、取代和未取代的烷基、取代和未取代的雜烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜芳基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、以及取代和未取代的肽基，其中R"以及R"與它們所附聯(lián)的氮原子一起可任選地相接合以形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；W是一個單鍵，該單鍵可存在或不存在，并且當(dāng)其存在時，W與R'相接合以形成一個環(huán)丙基的環(huán)；并且R'是所述環(huán)丙基的環(huán)中與W相接合的CH2-r或-CH2-,其中乂1是離去基團(tuán)，其中R4、R4，、R5、R5'、R11、R12、R13、R15、或R"中的至少一個將D連接至化合物的其余部分；或其藥學(xué)上可接受的鹽。適合用作是偶聯(lián)物的化合物的確切的實(shí)例包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage72</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage73</formula>.0o其中t是Cl或Br。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，Xi是Cl。藥物配方與給藥在另一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包括本發(fā)明化合物及藥學(xué)上可接受的載體的藥物配方。此處所述化合物包括藥學(xué)上可接受的載體(如加成鹽類或其水合物)，可使用多種途徑或多種給藥模式遞送給病人。適宜的給藥途徑包括但不限于吸入、經(jīng)皮、口服、直腸、經(jīng)黏膜、經(jīng)腸道、及腸胃外給藥，包括肌內(nèi)注射、皮下注射、以及靜脈內(nèi)注射。優(yōu)選地，本發(fā)明的偶聯(lián)物系經(jīng)腸胃給藥，更優(yōu)選地經(jīng)靜脈內(nèi)給藥。如此處所使用，"給藥"或"給藥方式"等詞意圖涵蓋直接或間接遞送化合物至其預(yù)期作用部位的全部手段。此處所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和/或水合物可單獨(dú)給藥或組合本發(fā)明的其他化合物給藥，和/或與其他治療劑組合成混合液給藥。當(dāng)然，可與本發(fā)明的化合物共同給藥的治療劑的選擇將部分取決于處理的病情。例如，當(dāng)對患有由依賴自體誘導(dǎo)劑的有機(jī)體引發(fā)的疾病狀態(tài)的病人給藥時，本發(fā)明化合物可以包含藥劑的混合液給藥，該藥劑用來治療與該疾病常見相關(guān)聯(lián)的疼痛、感染、以及其他癥狀和副作用的藥劑的。此類藥劑包括止痛劑、抗生素等。當(dāng)對接受癌癥治療的病人給藥時，化合物可在包含抗癌劑和/或補(bǔ)充增強(qiáng)劑的混合液中給藥。化合物也可在包含治療放射性治療的副作用的藥劑的混合液中給藥，該藥劑例如止吐劑、輻射保護(hù)劑等。可與本發(fā)明化合物共同給藥的補(bǔ)充增強(qiáng)劑包括(例如)三環(huán)抗抑郁劑(丙米嗪、去曱丙咪嗪、阿米替林、氯米帕明、曲米帕明、多塞平、去甲替林、普羅替林、氯氧平、馬普替林)；非三環(huán)抗抑郁藥(舍曲林、曲唑酮、及西塔洛潘(citalopram));Ca+2拮抗劑(例如維拉帕米、硝苯地平、尼群地平、及卡羅維林)；兩性霉素；曲帕拉醇類似物(例如它莫西芬)；抗心律不齊藥(例如奎尼丁)；抗高血壓藥(例如利血平)；硫醇排空劑(例如布席歐寧(buthionine)、以及舒服希敏(sulfoximine));及亞葉酸釣。本發(fā)明的活性化合物可本身給藥，或以藥物組合物的形式給藥，其中該活性化合物混合一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。根據(jù)本發(fā)明使用的藥物組合物典型地是以常規(guī)方式配制，使用一種或多種包含賦形劑及助劑的生理上可接受的載體，該載體促進(jìn)將活性化合物加工成為制劑，該制劑可供藥用。適當(dāng)配方是取決于所選擇的給藥方式的途徑。對于經(jīng)勦膜的給藥方式，在配方中使用了適合欲穿透的障壁的穿透劑。此類滲透劑通常在本領(lǐng)域是已知的。對于口服給藥方式，可容易地通過將活性化合物與本領(lǐng)域所熟知的藥學(xué)上可接受的栽體相組合來配制化合物。此類載體使得本發(fā)明化合物能夠配制成為片劑、丸劑、糖錠劑、膠嚢劑、液劑、凝膠劑、糖漿、料漿、懸浮液等，供待治療的病人口服食用。供口服用的藥物制劑可通過固體賦形劑獲得，任選地將所得的混合物磨碎，并加工顆?；旌衔?如果希望的話，可在添加合適的助劑后)，從而得到片劑或糖錠劑核心。適當(dāng)賦形劑特別地是填充劑，例如糖類，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制劑例如玉米淀粉、小麥淀粉、稻米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍膠、曱基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯酮(PVP)。如果希望，可添加崩解劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或海藻酸或它的鹽，例如海藻酸鈉。糖錠劑核心用合適的涂層提供。為此目的，可使用濃縮的糖溶液，該糖溶液可以任選地包含阿拉伯樹膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆膠(carbopolgel)、聚乙二醇和/或二氧化鈦，漆溶液，以及合適的多種有機(jī)溶劑或多種溶劑混合物。可將染料或顏料添加到片劑或糖錠劑的涂層以用于識別或標(biāo)明活性化合物劑量的不同組合。可用于口服的藥物制劑包括由明膠制成的插接式膠嚢(push-fitcapsule)以及由明膠和一種增塑劑(例如甘油或山梨醇)制成的密封式軟膠嚢。插接式膠嚢可包含與一種填料(如乳糖)、粘合劑(如淀粉)，和/或潤滑劑(如滑石粉或硬脂酸鎂)以及，任選的穩(wěn)定劑混合的活性成分。在軟膠嚢中，該活性化合物可溶解或懸浮于合適的液體中(如脂肪油、液體石蠟，或液體聚乙二醇)。此外，可添加穩(wěn)定劑。所有用于口服給藥方式的制劑應(yīng)當(dāng)是處于適合于這種給藥方式的劑量中。對于口腔含化給藥方式，組合物可采用以常規(guī)方式配制的片劑或錠劑形式。對于通過吸入給藥，根據(jù)本發(fā)明所使用的化合物可方便地使用適宜的推進(jìn)劑(例如二氯二氟乙烷、三氯氟甲烷、克立氟烷、二氧化碳、或其他適宜氣體)從加壓包裝或霧化器以氣霧劑噴霧的形式遞送。在加壓氣霧劑的情況下，劑量單位可通過提供一閥以遞送經(jīng)過計(jì)量的量來決定。所制成的供在吸入器或吹入器使用的的膠嚢和藥筒(例如明膠的)被配制成包含化合物與適當(dāng)粉末基(例如乳糖或淀粉)的粉狀混合物?？膳渲苹衔镉糜谕ㄟ^注射進(jìn)行腸胃外給藥，例如通過大劑量注射或通過連續(xù)輸注。注射是本發(fā)明組合物的一種優(yōu)選的給藥方法。注射用的配制品可呈現(xiàn)在單位劑型中，單位劑型例如包裝于安瓿劑或包裝于多劑量容器中。組合物可采取油性或水性載體中懸浮液、溶液或乳液形式，并可含有配方劑，例如可添加懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑，例如交聯(lián)聚乙烯基吡咯酮、瓊脂或海藻酸或例如海藻酸的鹽。腸胃外給藥方式用的藥物配制品包括呈水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，可將活性化合物的懸浮液制備成適當(dāng)油性注射懸浮液。適宜的親脂溶劑或親脂載體包括脂肪油類(例如芝麻油)、或合成脂肪酸酯類(例如油酸乙酯或甘油三酯類)、或脂質(zhì)體。水性注射懸浮液劑可包含提高懸浮液的黏度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。任選地，懸浮液也可包含適宜的穩(wěn)定劑或試劑，它們可提高化合物的溶解度，允許制備高度濃縮溶液。用于注射，本發(fā)明藥劑可在水性溶液中配制，優(yōu)選地在生理上可相容的緩沖液中配制，例如漢克氏溶液、林格氏溶液、或生理食鹽水緩沖液?？商娲?，活性成分可呈粉末形式供在使用前用適宜運(yùn)載體(例如無菌無熱原水)配制?；衔镆部膳渲瞥芍蹦c用組合物，例如栓劑或灌腸劑，例如包含常規(guī)栓劑基例如可可緩沖液或其他甘油酯類。除了先前說明的配制品之外，化合物還可配制成長效制劑。此類長時間作用的配制品可通過植入或通過經(jīng)皮遞送(例如皮下遞送或肌內(nèi)遞送)、肌內(nèi)注射或經(jīng)皮貼片給藥。因此，例如，化合物可使用適宜聚合物料或疏水性材料(例如，接受的油中的乳液劑)或離子交換樹脂、或呈極微溶性衍生物(例如極微溶性鹽)配制。藥物組合物也可包含適宜的固相或凝膠相載體或賦形劑。此類載體或賦形劑的實(shí)例包括但不限于碳酸釣、磷酸4丐、各種糖類、淀粉類、纖維素衍生物、明膠、以及聚合物(例如聚乙二醇)。優(yōu)選的藥物組合物是配制供注射用的組合物，例如靜脈內(nèi)注射，并基于總的藥物組合物的100%重量，包括約0.01°/。到約100%按重量計(jì)的藥物偶聯(lián)物。藥物偶聯(lián)物可以是抗體-細(xì)胞毒素-偶聯(lián)物，其中已經(jīng)選捧該抗體來靶向特定癌癥。文庫在本發(fā)明范圍內(nèi)也包含細(xì)胞毒素、細(xì)胞毒素-連接物以及本發(fā)明的細(xì)胞毒素與連接物的藥劑-連接物偶聯(lián)物的文庫。文庫的實(shí)例包括至少10種化合物，更優(yōu)選的至少100種化合物，甚至更優(yōu)選的至少IOOO種化合物，以及又更優(yōu)選的至少IOO，ooo種化合物。文庫是以方便查詢具體特性的形式，例如查詢細(xì)胞毒性、連接物由酶或其他切割劑切割。示例性的形式包括芯片格式、微陣列、以及類似物。平行合成或組合合成的主要目的是生成多樣化分子的一個文庫，這些分子全部共享一個共同的特征，該共同特征在本文說明中稱作為支架。通過在支架分子的可變部分(part)各自取代不同部分(moiety)，在文庫中可探測的空間的量生長。理論及現(xiàn)代藥物化學(xué)提倡一種概念，占據(jù)的空間作為決定一種給定化合物作為針對一種給定生物靶標(biāo)的效力的關(guān)鍵因素。通過產(chǎn)生一個多樣的分子文庫(該文庫探索大量百分比的靶向空間)，大大增加了發(fā)展高度有效導(dǎo)向化合物的機(jī)率。平行合成通常是在固相支撐體例如聚合物樹脂上進(jìn)行。支架或其他適宜的中間體可通過化學(xué)連接物可切割地被系到樹脂。進(jìn)行反應(yīng)來修飾支架同時反應(yīng)被系到顆粒。反應(yīng)物和/或反應(yīng)條件的變化產(chǎn)生結(jié)構(gòu)的多樣性，這是各個文庫的特點(diǎn)。"小"分子(具有分子量200至1000的非寡聚物)的平行合成在1990年的前罕見嘗試進(jìn)行合成。參見例如Camps,efaA，^/3ai^c/e(i/2'邁/ca,70:848(1990)。最近Ellmann披露了11種苯并二氮類似物連同一些前列腺素及l(fā)3-轉(zhuǎn)才莫擬物(beta-turnmimetic)的固相支撐的并列(也稱作為"組合的")合成。這些披露舉例說明于美國專利號5，288，514。小分子的平行合成的另一項(xiàng)相關(guān)披露可在美國專利號5，324,483中找到。這項(xiàng)專利披露在十六個不同支架中各自平行合成4至40種化合物。Chen等人也在聚合物支撐體上使用多步驟方法，應(yīng)用有機(jī)合成策略來發(fā)展的非肽文庫。(ChenWaA，/.J瓜C力e瓜紋，116:2661-2662(1994))。一旦制備了獨(dú)特化合物的文庫，可使用自動誘導(dǎo)劑文庫作為起點(diǎn)并使用此處所述方法來制備免疫偶聯(lián)物或抗體的文庫。試劑盒在另一方面，本發(fā)明提供包含一種或多種本發(fā)明化合物或組合物以及該化合物或組合物的使用指南的試劑盒。在一個示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明提供將本發(fā)明的連接物偶聯(lián)至另一個分子的試劑盒。試劑盒包括連接物及將連接物附聯(lián)至特定官能團(tuán)的指南。試劑盒還可以或可替代地包括細(xì)胞毒類藥物、靶向劑、可檢測的標(biāo)記、以及藥物鹽類或藥物緩沖液中的一種或多種。試劑盒還包括一個容器及任選地一種或多種小瓶、試管、燒瓶、瓶子、或注射器。試劑盒的其他形式對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將是明白的并且是在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。純化在另一個示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種分離本發(fā)明的配體-細(xì)胞毒素的分子靶標(biāo)的方法，該分子靶標(biāo)是結(jié)合至配體X4。該方法優(yōu)選的包括將靶標(biāo)的細(xì)胞制劑與固定的化合物接觸，由此形成受體與固定的化合物之間的一種復(fù)合物。本發(fā)明的細(xì)胞毒素可通過任何領(lǐng)域了解的手段被固定在親和支撐體上。可替代地，細(xì)胞毒素可使用本發(fā)明的連接物中的一種或多種來固定。在又另一個具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種親和純化基體。本發(fā)明的靶標(biāo)分離方法典型是利用一項(xiàng)或多項(xiàng)親和層析技術(shù)。親和層析術(shù)允許利用對某些所支載的化學(xué)結(jié)構(gòu)式有高度選擇性的辨識位置，來有效分離各種化合物，例如活質(zhì)分子或生物聚合物。文獻(xiàn)有大量的關(guān)于親和層析術(shù)主題的文章、專著及書籍，包括親和層析術(shù)支撐體、交聯(lián)成員、配體及其制備及其使用的文章。這些參考文獻(xiàn)例如包括0st面e，f/7z，入182:357-71(1990);Ferment,"/o卿.70:199-209(1990).H廳g"，/.C力層"ogr.492:431-69(1989);"Purificationofenzymesbyheparin-Sepharoseaffinitychromatography,"/.C力roj27"o^r.，184:335-45(1980);Farooqi，f/L/邁e^ng.，4:441-2(1978);Nishikawa，C力e邁.7ec力刀o人，5(9):564—71(1975);Guilforda/.，in，Pract.HighPerform.Liq.Ch廳atogr.，Simpson(ed.)，193-206(1976);Nishikawa，戶roc./"L^ori^力o/TecAno/.戶rofe//7Sep./邁proF.脅ot/戶/雄aFrac〃,〃叫Sandberg(ed.)，422-35;(1977)"Affinitychromatographyofenzymes,"J/77"CAroizzafogr.,//2liy邁p.25-38，(1977)(Pub.1978);以及Affinitychromatography:Apracticalapproach,Deana/,(ed.)，IRLPressLimited,Oxford,England(1985)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員利用本發(fā)明材料發(fā)展特殊親和層析術(shù)方法有大量指南。在本發(fā)明的方法中，可使用多種化學(xué)結(jié)構(gòu)式的親和層析術(shù)介質(zhì)來作為支撐體。例如，瓊脂糖凝膠及交聯(lián)瓊脂糖凝膠由于其親水性，讓其相對不含非特異性結(jié)合故也可用作為支撐體材料。其他有用的支撐體例如包括具有經(jīng)過控制孔隙的玻璃(CPG)珠粒、纖維素顆粒、聚丙烯酰胺、凝膠珠粒及由葡聚糖及表氯醇所制造的西法戴斯(Sephadex)凝膠珠粒。藥物偶聯(lián)物的使用方法除了以上說明的組合物及構(gòu)建物之外，本發(fā)明也提供可利用本發(fā)明化合物及偶聯(lián)物實(shí)施的多種方法。使用本發(fā)明的藥物-配體偶聯(lián)物的方法包括殺死或抑制腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞的生長或復(fù)制；治療癌癥；治療前期癌癥；殺死或抑制可表現(xiàn)自體免疫抗體的細(xì)胞的生長或復(fù)制；治療自身免疫疾??；治療傳染病；預(yù)防腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞的增生；預(yù)防癌癥；預(yù)防可表現(xiàn)自體免疫抗體的細(xì)胞繁殖；預(yù)防自身免疫疾??；及預(yù)防傳染病。這些使用方法包含對有需要的動物例如哺乳動物或人類，施予有效量的藥物-配體偶聯(lián)物。在某些實(shí)施方案中，酶可分開給藥，這樣酶變成與腫瘤或靶標(biāo)細(xì)胞相關(guān)聯(lián)。本發(fā)明的藥物-配體偶聯(lián)物復(fù)合物例如可用于治療例如動物體的癌癥、自身免疫疾病及傳染病。通過對個體以藥學(xué)上可接受的方式提供腫瘤治療用組合物及方法，是通過以藥學(xué)上有效量的本發(fā)明組合物對個體以藥學(xué)上可接受的方式提供該組合物。本發(fā)明特別可用于治療動物體的癌癥，以及用于抑制腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞的增生。癌癥或癌前病變包括但不限于腫瘤、腫瘤轉(zhuǎn)移或以未經(jīng)控制的細(xì)胞生長為特征的任何疾病或病癥可通過給藥本發(fā)明的藥物-配體復(fù)合物來治療或預(yù)防。該復(fù)合物遞送藥物至腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞。在使用藥物-配體復(fù)合物的一個實(shí)例中，配體特異性結(jié)合或關(guān)聯(lián)癌細(xì)胞相關(guān)的抗原或腫瘤細(xì)胞相關(guān)的抗原。由于藥物與配體的緊密接合，藥物可通過受體所媒介的吞噬作用而被吞噬入胂瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞內(nèi)部?？乖筛铰?lián)至胂瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞，或抗原可以是與胂瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞結(jié)合的胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)。一旦偶聯(lián)物在細(xì)胞內(nèi)部，連接物被腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞相關(guān)的蛋白酶切割，由此釋放藥物。釋放出的藥物可自由擴(kuò)散并且誘導(dǎo)細(xì)胞毒活性。在另一個實(shí)施方案中，藥物是從腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞外側(cè)的藥物-配體復(fù)合物切割，隨后藥物穿透該細(xì)胞。配體可結(jié)合至(例如)腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞、在腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞表面上的腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞的抗原、或?qū)儆谀[瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞相關(guān)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)的腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞的抗原。配體可對特定腫瘤細(xì)胞類型或癌細(xì)胞類型設(shè)計(jì)。因此，通過配體的選擇可改變可有效治療的腫瘤類別或癌癥類別?？捎膳悸?lián)物靶向的癌前病變的代表性實(shí)例包括但不限于組織轉(zhuǎn)化、超常增生、發(fā)育異常、結(jié)腸直腸息肉、光化性角化癥、光化性唇炎、人乳頭瘤病毒、粘膜白斑病、扁平莒蘚及博溫氏病?？捎膳悸?lián)物靼向的癌癥或腫瘤的代表性實(shí)例包括但不限于肺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、淋巴瘤、黑素瘤、乳癌、卵巢癌、睪丸癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、腎細(xì)胞癌(renalcancer)、腎癌、胰腺癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、子宮頸癌、及白血病。用于偶聯(lián)物中的特定配體或可切割的底物可選擇讓其將該藥物靶向于欲使用該藥物進(jìn)行治療的胂瘤組織，這對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員是容易明白的。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種殺死細(xì)胞的方法。該方法包括對該細(xì)胞施予足夠殺死該細(xì)胞的量的本發(fā)明化合物。在一個示例性實(shí)施方案中，對有該細(xì)胞受試者施予該化合物。在又一個示例性實(shí)施方案中，該給藥是用來延緩或中止包括該細(xì)胞(例如細(xì)胞可以是腫瘤細(xì)胞)的胂瘤的生長。用于延緩生長的給藥，細(xì)胞生長速率須比給藥前的生長速率至少低io、優(yōu)選的，生長速率須延緩至少2oy。、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90°/。、或完全停止。有效劑量適合用于本發(fā)明的藥物組合物包括其中含有治療有效量，即可有效達(dá)成其所希望的目的的量的活性成分的組合物。對特定應(yīng)用的實(shí)際有效量將依據(jù)待治療的病癥決定。有效量的確定是在本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)，特別是鑒于在此處的詳細(xì)披露。對此處所述的任何化合物，治療有效量初步可由細(xì)胞培養(yǎng)測定來確定。目標(biāo)血漿濃度為可抑制細(xì)胞生長或細(xì)胞分裂的活性化合物的濃度。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞活性為至少抑制25%。目前以可誘導(dǎo)抑制細(xì)胞活性至少約50%、75%、或甚至90%或以上的活性化合物的目標(biāo)血漿濃度是優(yōu)選的。病人體內(nèi)細(xì)胞活性的抑制百分比可經(jīng)監(jiān)測來評估所達(dá)成的血漿藥物濃度的適宜性，劑量可向上或向下調(diào)整來達(dá)成期望的抑制百分比。如本領(lǐng)域所熟知，供人體使用的治療有效量也可由動物模型確定。例如，供人類使用劑量可經(jīng)配制來達(dá)成在動物體內(nèi)有效的循環(huán)濃度。人體劑量可通過監(jiān)測細(xì)胞抑制作用并且如以上說明上下調(diào)整劑量來進(jìn)行調(diào)整。治療有效劑量還可以從已知具有類似的藥理活性的化合物用于人體的數(shù)據(jù)來確定。應(yīng)用劑量可基于給藥化合物比較已知化合物的相對生物利用率及強(qiáng)度進(jìn)行調(diào)整?；谝陨险f明的方法及本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所熟知的其他方法，調(diào)整劑量來在人體達(dá)成最大功效，是在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。在局部給藥的情況下，給藥化合物的系統(tǒng)循環(huán)濃度并無特殊重要性。在此類情況下，化合物經(jīng)給藥來以便在局部區(qū)域達(dá)到可有效獲得預(yù)期結(jié)果的濃度。為用于與細(xì)胞增殖異常有關(guān)的疾病預(yù)防和/或治療，所給化合物的循環(huán)濃度優(yōu)選為大約0.001)iM到20^M，其中優(yōu)選大約0.01到5(iM。此處說明的化合物的患者口服給藥方式的劑量典型地是從大約1fflg/天到大約10,000mg/天的范圍內(nèi)，更典型地從大約10mg/天到大約l，OOOmg/天，并且最典型地從大約50mg/天到大約500mg/天。按照患者體重所述，典型的劑量是從大約0.01到大約150mg/kg/天的范圍內(nèi)，更典型地從大約0.1到大約15mg/kg/天，并且最典型地從大約1到大約10mg/kg/天，例如5mg/kg/天或3mg/kg/天。在至少一些實(shí)施方案中，患者的延緩或抑制腫瘤生長的劑量可以是1jufflol/kg/天或者更少。例如，患者的劑量可以是0.9、0.6、0.5、0.45、0.3、0.2、0.15、0.1、0.05、0.03、0.01、或者0.005,1/kg/天或者更少(按照藥物的摩爾量)的藥物或藥物偶聯(lián)物，如抗體-藥物偶聯(lián)物。優(yōu)選地，藥物或藥物偶聯(lián)物當(dāng)在至少5天時間內(nèi)以日劑量給藥時，延緩腫瘤的生長。在至少一些實(shí)施方案中，該肺瘤為SCID小鼠體內(nèi)的人的類型的腫瘤。作為一個例子，SICD小鼠可以是CB17.SCID小鼠(可從Taconic，Ger邁antown，NY獲得)。至于其他給藥模式，劑量及間隔可個別調(diào)整來獲得對待治療的臨床適應(yīng)癥是有效的給藥化合物的血漿水平。例如，在一個實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以相對高濃度每天給藥多次?？商娲?，更希望的是以最低有效濃度并且使用較不頻繁的給藥方案來施予本發(fā)明化合物。因此將提供識別個別疾病嚴(yán)重程度的治療方案。利用此處所提供的教導(dǎo)，可計(jì)劃有效的治療方案，該方案不會造成實(shí)質(zhì)毒性，但又可完全有效治療由特定病人所表現(xiàn)的臨床癥狀。這項(xiàng)計(jì)劃應(yīng)通過考慮以下因素來仔細(xì)選擇活性化合物，這些因素例如化合物強(qiáng)度、相對生物利用率、病人體重、是否存在有副作用及副作用83嚴(yán)重程度、所選藥劑的優(yōu)選的給藥模式、及毒性性質(zhì)。本發(fā)明的化合物、組合物及方法將通過以下實(shí)例進(jìn)一步展示。提供這些實(shí)例是為了展示但并不限制本申請所請求的發(fā)明。實(shí)例#并和才法在以下實(shí)例中(除非另外說明)溫度是以攝氏度數(shù)(x:)給出；操作是在室溫或環(huán)境溫度(典型在約18-25TC的范圍)進(jìn)行；溶劑的蒸發(fā)是使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在減壓下(典型為4.5-30mmHg)、浴溫達(dá)到60。C進(jìn)行；反應(yīng)過程典型是通過TLC追蹤，并且提供反應(yīng)時間僅用于說明；熔點(diǎn)是未校正的；產(chǎn)物顯示了滿意的^-NMR資料和/或微分析資料；提供產(chǎn)量僅用于舉例說明；也使用以下常規(guī)縮寫mp(熔點(diǎn))、L(升)、mL(毫升)、mmo1(亳摩爾)、g(克)、mg(毫克)、min(分鐘)、LC-MS(液相色譜-質(zhì)鐠)、以及h(小時)。在VarianMercury300MHz光鐠儀上測量111-NMR光鐠，并與所設(shè)計(jì)的結(jié)構(gòu)符合一致?；瘜W(xué)移位是以距四甲基硅烷低磁場的每百萬份的份數(shù)(ppm)報(bào)告。在PerkinElmerSciexAPI365質(zhì)鐠儀上記錄電噴射質(zhì)譜數(shù)據(jù)。由羅博森孩吏里特實(shí)驗(yàn)室(RobertsonMicrolitLaboratories,Madison,NJ)進(jìn)4亍元素分析。用于快速層析法的硅膠是E.Merck等級(230-400篩目)。在HP1100或VarianProStar210儀器上進(jìn)行反相分析HPLC，HP1100或VarianProStar210儀器帶有PhenomenexLuna5拜C-18(2)150mmx4.6mm柱或VarianMicrosorb-MV0.1jumC-18150mmx4.6mm柱。使用1mL/min流速，使用oy。至5o。/。緩沖液B梯度經(jīng)i5分鐘，或ioy。至iooy。緩沖液B梯度經(jīng)io分鐘，通過UV在254nm處檢測。緩沖液A，20mM甲酸銨+20%乙腈或0.1%乙腈中的三氟乙酸；緩沖液B，20mM甲酸銨+80%乙腈或0.1%水性三氟乙酸。在VarianProStar215儀器上進(jìn)行反相制備性HPLC，該儀器帶有WatersDeltaPak15jimC-18300mmx7.8咖柱。實(shí)例lHBr，H2N氯曱酸芐西盲THF,D，EA64%O、0ANHHCI，H'VaKMBu,DMF,K，，K2COa'100C，隔夜一69%、0U人JcH2,Pd/C，MeOH98%H2N3FmocOSu，CH2CI2抑％HCI,THF/H20(3Z1)，37C98%OHHCI、0l)甲苯中的2Nff整氯，H2N卞0，、、力—35%12"一CI131|TFA^H2CI22)BOP,薩，DIEA，550、H0。。/，。inv《。二w，141)在DMF中的喊啶2)GMBS,DIEAt茌CH2Cfe中的10WH0OuO75*4H;H-oJ、N久015化合物1的合成向在DMF(50mL)中的2-溴乙基胺溴化物(5g，24.4毫摩爾)的溶液內(nèi)添加二異丙基乙胺(8.5mL,48.8毫摩爾)及氯曱酸芐酯(3.48、Hnn、兒(T^oNBSC，，DIEA罕A，CHaCI2，32%694%(z當(dāng)量)DMAF(2當(dāng)量、DIEA(1當(dāng)量、在THF中的10MDMF,65Cio天I0一火o人H40%DMF,苯疾,K2CC^87%iiiL,24.4毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌2小時。反應(yīng)混合物經(jīng)濃縮，并將殘余物在硅膠上用乙酸乙酯/己烷(3/7)梯度通過快速層析法純化以給出呈一種油的化合物1(4g，64。/。)JHNMR(CDC13)53.54(bs，2H)，3.61(bs，2H),5.12(s，2H)，7.36(m，5H)?；衔?的合成向化合物1(3.34g，12.99毫摩爾)和在DMF(50mL)中的纈氨酸叔丁基酯(3.27g，15.59亳摩爾)的一種溶液內(nèi)添加碳酸鉀(5.39g，38.97毫摩爾)和碘化鉀(2.59g，15.59毫摩爾)。如此獲得的混合物在ioox:下攪拌過夜。反應(yīng)混合物經(jīng)濃縮，并將殘余物在硅膠上用乙酸乙酯/己烷(2/8)梯度通過快速層析法純化以給出呈一種油的化合物2(3.12g，69%)。'HNMR(CDCU50.92(m，6H)，1.46(s，9H)，1.86(m，1H)，2.53(m，1H)，2.80(m，2H)，3.18(m，1H),3.31(m，1H)，5.10(s，2H)，5.25(bs，1H)，7.36(m，5H);LC-MS(ESI)296(M+H-叔丁基+)，352(M+H+)?；衔?的合成將化合物2(3.4g，9.72亳摩爾)和在甲醇(30mL)中的鈀炭(200mg)的一種溶液在室溫置于氫氣大氣壓下。如此獲得的混合物在室溫下攪拌2小時。將鈀過濾，并反應(yīng)混合物濃縮至干燥以給出呈一種油的化合物3(2.1g，98%)。力畫R(CD3OD)50.94(m，6H)，1.47(s，9H)，1.63(bs,2H)，1.90(m，1H)，2.47(m，1H)，2.73(m，2H)?；衔?的合成在0'C向在二氯曱烷(30mL)中的化合物3(2.1g，9.72毫摩爾)的溶液內(nèi)添加FmocOSu(N-(9-芴基甲氧羰基氧基)丁二酰亞胺(3.28g，9.72毫摩爾)。如此所得的混合物在(TC攪拌2小時。將混合物濃縮至干燥，然后將殘余物在硅膠上通過快速層析法用100%二氯甲烷純化，接著用在二氯甲烷中的0.5%甲醇，及最后用在二氯甲烷中的1%甲醇作為梯度以給出呈無色油的化合物4(2.55g，60。/。)？H-NMR(CDC13)S1.03(d，3H),1.14(d，3H)，1.52(s，9H)，2.28(m，1H)，3.14(m，2H),3.46(m，2H),3.89(d，1H)，4.24(m，1H)，4.44(m，2H)，7.29(m，2H)，7.40(m，2H)，7.64(m，2H)，7.80(d，2H);LC-MS(ESI)383(M+H-rtutyl+)，440(M+H+)，462(M+Na+)，478(M+K+)?；衔?的合成向在四氫呋喃-水(3/1，8mL)中的化合物4(177mg，0.4毫摩爾)的一種溶液內(nèi)通入HC1氣體5分鐘。將反應(yīng)混合物在37'C攪拌過夜，然后將混合物濃縮至干燥以給出呈固體的化合物5(168mg,98%),該化合物未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。'H-NMR(CDC13)S1.04(d，3H)，1.14(d，3H)，2.32(m，1H),3.18(m，2H)，3.46(m，2H),3.95(d，1H)，4.22(m，1H)，4.42(m，2H)，7.29(m，2H)，7.39(m，2H)，7.64(m，2H)，7.79(d，2H);LC-MS(ESI)383(M+H+)，405(M+Na+)。化合物6的合成向在THF(15mL)中的N-曱基-l,2-苯二胺(2mL，17.6毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加二-叔丁基重碳酸酯(3.32g,15.2毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌過夜。將溶劑除去，并將殘余物在硅膠上用己烷中的30%乙酸乙酯作為梯度通過快速層析法純化以給出呈無色油的化合物6(1.12g，32%)。力固R(CDC13)S1.46(bs，9H)，3.15(s,3H)，3.73(bs，2H)，6.75(d，2H)，7.06(m，2H)?；衔?的合成在0'C向在二氯甲烷(30mL)中的化合物6(777mg，3.05毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加2-硝基苯磺酰氯(811mg,3.66毫摩爾)及二異丙基乙胺(796jaL，4.57毫摩爾)。如此所得的混合物在室溫?cái)嚢柽^夜。將溶劑除去，并將殘余物在硅膠上用10%己烷中的乙酸乙酯作為梯度通過快速層析法純化以給出呈黃色固體的化合物7(1.17g,94%)。力醒(CDC13)51.49(bs，9H)，2.47及2.61(2bs，3H)，7.05(bd，1H)，7.27(m，2H)，7.56-7.92(m，5H)。化合物8的合成向在DMF(50mL)中的化合物7(326mg，0.8毫摩爾)內(nèi)添加碳酸鉀(164mg，1.19毫摩爾)及甲基碘(148jaL，2.39毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌過夜。將溶劑除去，并將殘余物在硅膠上用10%己烷中的乙酸乙酯作為梯度通過快速層析法純化以給出呈黃色固體的化合物8(370mg，65%)。！HNMR(CD30D)S1.35及1.52(2s，9H)，3.16及3.21(2s，3H)，3.26及3.29(2s，3H),6.93(d，1H)，7.20(in,1H),7.6(m，2H)，7.68—7.80(m，4H);LC-MS(ESI)444(M+Na+)，460(M+K+)?；衔?的合成在室溫下向在二氯甲烷(5mL)中的化合物8(355mg，0.85毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加三氟乙酸(5mL)。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后分配于乙酸乙酯(lOOmL)以及飽和碳酸氫鈉銨(200mL)之間。將有機(jī)層用鹽水(100mL)洗滌，在Na2S04上進(jìn)行干燥并進(jìn)行濃縮以給出呈白色固體(270mg，98%)的游離胺(化合物9)。^NMR(CDCh)52.68(s，3H)，3.30(s，3H)，6.56(m，2H),6.88(m，1H)，7.20(m，1H),7.48(m，1H),7.57(m，1H)，7.65(m，2H)?；衔?0的合成在0°C向在二氯曱烷(10mL)中的化合物9(270mg，0.84毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加2N的在甲苯中的碳酰氯(440nL，2.5毫摩爾)。將混合物攪拌30分鐘，并濃縮至干燥以給出呈白色固體的化合物10(297，92%),該化合物未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。^麗R(CDC13)53.25及3.30(2s，3H)，3.34及3.44(2s，3H)，6.98(m，1H)，7.25-7.40(m，2H)，7.45(m，1H)，7.55-7.80(m，4H);LC-MS(ESI)384(M+H+)，407(M+Na+)，422(M+K+)。化合物11的合成向在含10°/。DMF的THF溶液(3mL)中的化合物10(120mg，0.31毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加Boc-CU-PABOH((S)-叔丁基-l-(4-(羥曱基)苯氨基)-卜氧代-5-脲基戊烷(ureidopentan)-2-基氨基甲酸酯(238mg，0.62毫摩爾)、N，N-二甲基氨基吡啶(76mg，0.62毫摩爾)、以及二異丙基乙胺(550.31毫摩爾)。如此獲得的混合物在65t:下攪拌10天。將溶劑除去，并將殘余物在硅膠上用二氯甲烷中的5%甲醇為梯度通過快速層析法純化以給出呈固體的化合物11(90mg，40%)。'HNMR(CD卿51.43(bs，9H),1.56-1.70(m，3H),1.79(m，1H)，3.06-3.27(m，8H)，4.17(2m，1H),5.04and5.17(2bs，2H)，6.89and6.95(2d，1H)，7.15-7.26(m,2H)，7.37-7.72(in,8H)，7.80(m，1H);LC-MS(ESI)729(M+H+)，751(M+Na+)，767(M+K+)?；衔?2的合成向在DMF(2mL)中的化合物11(84mg，0.11毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加碳酸鉀(48mg，0.33毫摩爾)以及苯硫酚(60jiL，0.55毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌2小時。將溶劑除去，并將殘余物在硅膠上用二氯曱烷中的5°/甲醇為梯度通過快速層析法純化以給出呈一種固體的化合物12(55mg，87%)。、NMR(CD3OD)S1.44(bs，9H)，1.56-1.70(m，3H),1.78(m,1H)，2.76(bs，3H)，3.05-3.20(m，5H)，4.17(bs，1H)，4.99(bs，2H),6.62(m，2H)，6.93(m，1H)，7.15(ra，2H)，7.40-7.60(m，3H);LC-MS(ESI)，566(M+Na+)，581(M+K+)?；衔?3的合成向在二氯甲烷(3mL)中的化合物12(65mg，0.12毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加2N甲苯中的碳酰氯(180inL，0.36亳摩爾)。如此獲得的混合物在or下攪拌1小時。然后將混合物濃縮至干燥以給出一種油(72rag,100%)，該油未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。向這種油(72mg，0.I2毫摩爾)在二氯甲烷(1mL)中含有5%N-甲基吡咯烷酮的溶液內(nèi)添加化合物18(參見以下實(shí)例2)(25mg，0.06亳摩爾)及N，N-二曱基氨基吡啶(22mg，0.18毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌過夜。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物13(15mg，35%)。^NMR(CD3OD)S1.42(bs，9H)，1.45-1.80(m，4H),2.97(bs,6H)，3.10-3.36(in,7H),3.57(bs，3H)，3.98(bs，1H)，4.10-4.35(m，4H)，4.50-4.75(m，3H)，5.15(bs，2H),7.16-7.95(m，16H)，8.2(d，1H);LC-MS(ESI),1034(M+H+)，1056(M+Na+)，1073(M+K+)?；衔?4的合成在室溫下向在二氯甲烷(0.5mL)中的化合物13(13mg，0.011毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加三氟乙酸(0.5mL)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌30分鐘。然后將混合物濃縮至干燥以給出一種油，該油未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。向在二氯甲烷(0.5fflL)中的TFA鹽化胺的一種溶液內(nèi)添加化合物5(5mg,0.012毫摩爾)、苯并三唑-l-基-氧代-三-(二甲氨基)-磷総六氟磷酸鹽(BOP)(6mg，0.013毫摩爾)及二異丙基乙胺(80.044毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌1小時。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物14(9mg，50%)。^腿(CD30D)51.03及1.10(2m，6H),1.60(m，2H),1.80(m，2H)，2.20(m，1H),2.99(s，6H),3.04-3.50(m，IIH)，3.60(bs，3H),3.8(bs，1H)，4.00(bs，1H),4.20-4.45(m，6H)，4.50-4.75(m，4H)，5.15(bs，2H)，7.20-7.70(m，22H),7.77(d，2H)，7.90(bs，2H);LC-MS(ESI),1300(M+H+)。化合物15的合成在室溫下向在鹿F(0.5fflL)中的化合物14(9ing，0.006亳摩爾)的一種溶液內(nèi)添加哌啶(6pL，0.06毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌l小時。然后將混合物濃縮至干燥以給出一種油，該油未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。向在含10°/。DMF的二氯甲烷的溶液(1mL)中的含該油的一種溶'液內(nèi)添力口N—(y—maleimidobutyrloxy)丁二醜亞胺酉旨(GMBS)(3.5mg，0.012毫摩爾)及二異丙基乙胺(2^L,0.012毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌l小時。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物15(6.5mg，75°/。)。^NMR(CD3OD)51.04-1.13(m，6H),1.65(m,2H)，1.75(m，1H)，1.90(邁，3H)，2.23(m，3H),2.98and3.01(2s，6H)，3.05-3.25(m，6H),3.60(m，2H),3.45-3.55(m，6H)，3.64(t,2H)，3.80(m，2H)，4.05(m，1H)，4.35(bs，1H)，4.41(m，2H)，4.55(m，2H)，4.80(m，1H)，5.15(bs，2H)，6.78(s，2H),7.22(dd，2H)，7.35-7.65(m,IIH)，7.90-8.00(m，3H),7.77(d，2H)，7.90(bs，2H);LC-MS(ESI)，1243(M+『)。實(shí)例2HBr，H2N氯甲酸芐酯THF，D舊A64%O、0ANHHC',H-VaKHBu，加F,KI，K2C03,，OOC，過夜fc69%OHH2,Pd/C，MeOH*H2N98%3FmocOSu,CH2CI260%cr、nHTHF/H20《3/1)，37C抑％復(fù)HJ'0入EJ^^N"^OHHCIH入s<formula>formulaseeoriginaldocumentpage92</formula>化合物16的合成在室溫下向在DMF(45mL)中的Fmoc-Cit-PABOH(2g,3.98毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加哌啶(5mL)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物濃縮至干燥，然后殘余物在硅膠上通過快速層析法純化，使用100%二氯甲烷，接著是在二氯曱烷中的10%甲醇及最后是在二氯曱烷中的30%甲醇為梯度以給出呈無色油的H-Cit-PABOH(1g，90%)。向在DMF(4mL)中的H-Cit-PAB0H(80mg，0.28亳摩爾)的一種溶液內(nèi)添加化合物5(100mg,0.24毫摩爾)(見實(shí)例l制備)，26毫摩爾)及二異丙基乙胺(125jiL，0.84毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌1小時。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物16(119mg，66%)。^醒(CD30D)51.03-1.11(2d，6H)，1.58(m，2H),1.77(m，1H)，1.88(m，1H)，2.23(m，1H)，3.05-3.20(m,4H),3.44(m，2H)，3.83(d，1H)，4.21(m，1H)，4.39(m，2H),4.54(bs，2H)，4.60(in,1H)，7.30(m，4H)，7.37(m，2H)，7.51(m，2H)，7.62(m，2H)，7.77(m，2H)，8.80(d，1H)，10.05(s，1H);LC-MS(ESI)，646(M+H+)，668(M+Na+),684(M+K+)?；衔?7的合成向在含10°/。NMP的二氯甲烷(4mL)的化合物16(190mg，0.25毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加二異丙基乙胺(131pL，0.75毫摩爾)，N，N-二曱基氨基吡啶(15mg，0.12毫摩爾)及4-硝基苯基氯甲酸酯(101mg，0.5毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌1小時。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物17(151mg，65%)。(CD3OD)S1.04-1.11(2d，6H),1.59(m,2H)，1.79(m，1H),1.89(m，1H)，2.24(m，1H),3.05-3.20(m，4H)，3.44(m,2H)，3.83(d，1H)，4.20(m，1H)，4.39(m，2H)，4.60(m，1H)，5.22(bs，1H)，7.29(m，2H)，7.39(m,4H),7.60(ffl，4H)，7.75(d，2H)，8.81(d，1H)，10.05(s，1H);LC-MS(ESI)，811(M+H+)，833(M+Na+)，848(M+K+)?；衔?9的合成在0'C向在含40。/。THF的二氯甲烷(8mL)中的化合物18(50mg，0.ll毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加4-硝基苯基氯甲酸酯(87mg，0.43毫摩爾)及三乙胺(88^L，0.64亳摩爾)。如此獲得的混合物讓其溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^夜。將溶劑蒸發(fā)，在醚中將殘余物通過沉淀而分離，接著過濾以給出呈黃色固體的PNPC-18(60mg，90%)。向在二氯曱烷(5mL)中的PNPC-18(60mg，0.095亳摩爾)的一種溶液內(nèi)添加化合物boc哌溱(71mg,0.38毫摩爾)及三乙胺(53jiL，0.38毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌過夜。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物18(77mg，90%)。LC-MS(ESI),678(M+H+)，700(M+Na+),716(M+K+)?；衔?0的合成在室溫下向在二氯甲烷(0.5mL)中的化合物19(28mg，0.035毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加三氟乙酸(0.5mL)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌30分鐘。然后將混合物濃縮至干燥以給出一種油，該油未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。向在DMF(lmL)中的該油的一種溶液內(nèi)添加化合物17(28mg，0.035毫摩爾)及二異丙基乙胺(18jiL，0.105毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌過夜。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物20(36mg，70%)。^NMR(CD3OD)51.03-1.10(2d，6H)，1.58(m，2H)，1.77(m，1H)，1.87(m，1H)，2.23(m，1H)，2.97(bs，6H),3.05-3.20(m，4H)，3.30-3.85(m，14H),3.97(m，1H)，4.19-4.41(m，6H),4.60(m，2H)，4.69(m，1H)，5.11(bs，2H)，7.16(dd，1H)，7.27-7.38(m，7H)，7.45(m，1H)，7.51-7.63(m,7H)，7.76(d，2H)，7.85(d，2H)，8.24(bs，1H)，8.79(d，1H),10.00(s，1H);LC-MS(ESI),1248(M+H+)?；衔?1的合成在室溫下向在DMF(1mL)中的化合物20(36mg，0.024亳摩爾)的一種溶液內(nèi)添加哌啶(12pL，0.12毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌l小時。然后將混合物濃縮至干燥以給出一種油，該油未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。向在含10%DMF的二氯曱烷(1mL)中的該油的一種溶液內(nèi)添加MAL-PEGrNH酯(19mg，0.037毫摩爾)及二異丙基乙胺(8.5pL，0.048毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌1小時。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物21(25mg，62%)。^醒(CD3OD)S1.06-1.12(2d,6H)，1.59(m，2H),1.78(m，1H),1.89(m，1H)，2.24(m，1H),2.44(t，2H),2.50(t，2H)，2.99(bs，6H)，3.05-3.20(m，4H)，3.46-3.85(m，34H)，3.99(m，1H)，4.25(in,1H)，4.35(m，2H)，4.59-4.73(m，3H)，5.13(bs，2H)，6.79(s，2H)，7.18(dd，1H)，7.31(d，1H)，7.36(m,2H),7.47(m，1H)，7.58(m，5H)，7.89(m，2H)，8.24(bs，1H)，8.79(d,1H);LC-MS(ESI)，1423(M+H+)?；衔?2的合成在室溫下向在DMF(1mL)中的化合物20(26mg，0.017毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加哌啶(9j^L,0.088毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌l小時。然后將混合物濃縮至干燥以給出一種油，該油未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。向含10。/。DMF的二氯甲烷(lmL)中的該油的一種溶液內(nèi)添加GMBS(7.5mg,0.025亳摩爾)及二異丙基乙胺(6pL，0.034毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌l小時。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物22(13mg，52%)。S1.07-1.13(2d，6H)，1.60(m，2H)，1.78(m，1H),1.90(m，3H)，2.24(m，3H)，3.00(bs，6H)，3.05-3.24(m，4H)，3.42-3.74(m，16H),3.78-3.90(m，4H),4.00(m，1H)，4.34(m，1H),4.39(m，2H)，4.60(m，1H)，4.80(m，2H)，5.14(bs，2H)，6.81(s，2H),7.22(dd，1H)，7.37(m，3H),7.50(m，1H),7.60(m，5H),7.92(m，2H)，8.24(bs,1H)，8.79(d，1H),10.05(s,1H);LC-MS(ESI)，1191(M+H+)。實(shí)例3HBr,H2M氯曱酸節(jié)西旨THF，眺A64%OHCI，H'Va"Ot8u,OMF，IO,K2CO3，100C,過夜，69%OH2,Pd/C,MeOHH2NS^A098%FmocOSutCH2Ct360%HCI,THF/H20<3/1>，37C96%H2,Pd/C叔丁基-4-氨基苯甲酸酯，EOC，HOBt,CuC，,，DMF,62%、"^，泉啶的2>MAL-PEG4-NH酯，DIEA,10%DMF的CHjCl3;，2)5，HATU啶的2)5，HATU，DIEA,DMFfO、O126HO'O'HN,Vn'h"8299Ol。0人。'匸入oo301)HBr，乙酸乙酯2)HATU，25，DMF，3小時57%一Bro,"尸3，"TFA，CH2C，2，齒fS|D，EA,2930%化合物23的合成將乙基-5-硝基吲哚-2-羧酸酯(2g,8.5亳摩爾)和在含50%曱醇的二氯曱烷(100mL)中的鈀炭(200mg)的一種溶液在室溫置于氫氣大氣壓下。如此獲得的混合物在室溫下攪拌2小時。將鈀過濾，并反應(yīng)混合物濃縮至干燥以給出呈無色油的化合物23(1.68g，97°/。)。^腿(CD30D)51.38(t，3H)，4.34(q，2H)，6.86(dd，1H)，6.95(d，1H)，6.98(d，1H)，7.25(d，1H)?；衔?4的合成向在二氯曱烷(5mL)中的化合物23(300mg,1.47毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加Boc20(385mg，1.76毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌2小時。將反應(yīng)混合物濃縮，并將殘余物在硅膠上用己烷中的10%乙酸乙酯作為梯度通過快速層析法純化以給出呈白色固體的化合物24(272mg，61%)。腿(CD30D)51.39(t，3H)，1.52(s，9H)，4.37(q，2H)，7.07(s，1H)，7.23(dd，1H)，7.34(d，1H),7.68(bs，1H)?；衔?5的合成向在乙醇(3mL)中的化合物24(100mg，0.33毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加溶于水(1mL)中的LiOH溶液(12mg，0.49毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下50t:攪拌2小時。將反應(yīng)混合物濃縮至干燥，產(chǎn)生一種油。將殘余物溶解于水中，并用10%HC1使之酸化到pH3，隨后用EtOAc萃取。將有機(jī)溶液通過Na2S04千燥，過濾并濃縮至干燥以給出呈無色油的化合物25(85mg,92%)。力NMR(CD3OD)S1.51(s，9H)，7.07(d，1H)，7.23(dd，1H)，7.33(d，1H)，7.68(bs，1H)?；衔?6的合成在室溫向在含30%DMF的二氯甲烷的溶液(3mL)中所含F(xiàn)moc-Cit-OH(206mg，0.52毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加EDC(120mg，0.62毫摩爾)、HOBt(84mg，0.62亳摩爾)及4-氨基苯曱酸叔丁酯(120mg，0.62毫摩爾)。將如此所得的混合物攪拌10分鐘，然后添加氯化銅(84mg，0.62毫摩爾)到混合物中。將該混合物攪拌過夜。將混合物濃縮至干燥，然后將殘余物在硅膠上用二氯甲烷中的5%甲醇為梯度通過快速層析法純化以給出呈無色油的化合物26(184mg，62%)。'HNMR(CD卿51.53-1.58(m，2H)，1.57(s，9H)，1.71(m，1H)，1.82(m，1H),3.08(m，1H)，3.19(m，1H)，4.21(m，1H)，4.28(m，1H)，4.38(m，2H)，7.28-7.39(m，3H)，7.49(m，2H)，7.56-7.86(m，5H)，7.89(m,2H);LC-MS(ESI)，573(M+H+)，595(M+Na+)，611(M+K+)。化合物27的合成在室溫下向在DMF(18mL)中的化合物26(1g,1.75毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加哌啶(2mL)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌1小時。將混合物濃縮至干燥，然后殘余物通過快速層析法純化，使用100%二氯甲烷，接著是在二氯甲烷中的5%甲醇及最后是在二氯甲烷中的20%曱醇為梯度以給出無色的油(561mg，92%)。在室溫下向在DMF(10mL)中的該油的一種溶液(561mg,1.6毫摩爾)內(nèi)添加二異丙基乙胺(679^L，3.9毫摩爾)、化合物5(509mg，1.3毫摩爾)(參見實(shí)例1制備)及HATU(494mg，1.3亳摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌3小時。將混合物濃縮至千燥，然后將殘余物在硅膠上用二氯甲烷中的5%甲醇為梯度通過快速層析法純化以給出呈無色油的化合物27(691mg，65%)。力NMR(CD30D)S1.36(dd，6H)，1.58-1.62(m，2H)，1.6(s，9H)，1.71(m，1H),1.82(m，1H)，2.00(m，1H)，2.65(m，2H)，3.2-3.3(m，4H)，3.70(m，1H)，4.21(m，1H)，4.28(m，2H)，4.38(m，2H)，4.60(m，1H)，7.28-7.39(m,4H)，7.60-7.70(m,4H)，7.8(d，2H),7.89(d，2H);LC一MS(ESI),716(M+H+)，737(M+Na+)，753(M+K+)?；衔?8的合成在室溫下向在DMF(9mL)中的化合物27(300mg，0.45毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加哌啶(1mL)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌1小時。然后將混合物濃縮至干燥以給出一種油，將該油臨時存放于醚(20mL)中。將該材料過濾，得到一種白色固體(186mg，84%)。向在二氯曱烷(1mL)中的游離胺(32mg，0.065毫摩爾)的溶液內(nèi)添加MAL-PEG廣冊酯(50mg，G.097毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌4小時。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物28(47mg，95%)。^NMR(CD3OD)51.10及1.15(2d，6H)，1.58-1.62(m，2H)，1.6(s,9H)，1.75(m，1H)，1.90(m，1H)，2.25(m，1H)，2.45(t，2H)，2.5(t，2H),3.10-3.25(m，4H)，3.30(m，2H)，3.45-3.65(m，16H)，3.75(m，4H)，3.85(d，1H),4.65(m，1H)，6.80(s，2H)，7.67(d，2H)，7.90(d，2H)，8.80(d，1H)，10.20(s，1H);LC-MS(ESI)，891(M+H+)，913(M+Na+),929(M+K+)?；衔?9的合成在室溫下向在二氯甲烷(0.5mL)中的化合物28(47mg,0.062毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加三氟乙酸(0.5mL)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌30分鐘。然后將混合物濃縮至干燥以給出呈一種油的化合物29,該油未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟(40mg,92°/。)。^NMR(CD3OD)51.10and1.15(2d，6H)，1.60(m，2H)，1.80(m，1H)，1.90(m，1H),2.25(m，1H)，2.45(t，2H)，2.5(t，2H)，3.10-3.25(m，4H)，3.30(m，2H)，3.45-3.65(m，16H)，3.75(m,4H)，3.85(d,1H)，4.65(m，1H)，6.80(s，2H)，7.67(d，2H)，7.95(d，2H)，8.80(d，1H);LC-MS(ESI)，836(M+『)，858(M+Na+)，874(M+1T)?；衔?1的合成在室溫下向在EtOAc(2niL)中的30(100mg,0.2毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加濃縮的HBr的EtOAc(3mL)溶液。1小時后完成Boc脫保護(hù)。將沉淀出的材料過濾(定量的產(chǎn)量)。然后將TFA鹽化胺溶解于DMF(3mL)。向此溶液內(nèi)添加化合物25(55mg，0.2毫摩爾)、二異丙基乙胺(173jaL，1亳摩爾)及HATU(79mg，0.2毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌3小時。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈白色固體的化合物31(86mg，57°/。)。丄H腿(CD3OD)51.54(s,9H)，2.91(s，3H),3.10-3.60(m，8H)，3.72(m，1H)，3.97(m，1H)，4.30-4.60(m，3H)，6.94(bs，1H)，7.05(m，1H)，7.12(d，1H)，7.45(m，2H)，7.68(d,1H)，7.75(bs,1H)，7.86(d，1H)，8.23(bs，1H);LC-MS(ESI)，562(M+H-100+)，606(M+H-56+)，662(M+H+)，685(M+Na+)，701(M+K+)。化合物32的合成在室溫下向在二氯甲烷(0.5mL)中的化合物31(30mg,0.039毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加茴香醚(lOO^L)及三氟乙酸(0.4mL)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌30分鐘。然后將該混合物濃縮至干燥以給出一種油，該油未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。向該油的DMF溶液(lmL)內(nèi)添加化合物29(36mg，0.039毫摩爾)、二異丙基乙胺(40pL，0.23毫摩爾)、以及HATU(15mg，0.039毫摩爾)。如此獲得的混合物在室溫下攪拌1小時。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物通過半制備性HPLC純化以給出呈一種油的化合物32(36mg，60%)。腿(CD3OD)S1.09and1.15(2d，6H)，1.62(m，2H)，1.81(m，1H)，1.93(m，1H)，2.27(m，1H)，2.45(t，2H)，2.51(t，2H)，2.98(s，.3H)，3.13-3.25(m，4H)，3.47-3.62(m，24H)，3.76(m，4H)，3.82(m，1H)，3.85(d，1H)，4.20(m，1H)，4.55-4.70(m,4H)，6.79(s，2H)，7.06(s，1H),7.36(bs，1H),7.43-7.54(m，2H)，7.72-7.81(m，3H),7.91(m,3H)，8.05(s，1H),8.25(bs，1H)，8.82(d，1H)，10.25(s，1H);LC-MS(ESI)，691(M+2『)/2，1381(M+H+),1419(M+K+)。化合物3的合成在0。C將溴乙酰氯2(240pL，2.86毫摩爾)逐滴添加至2-氨基乙基氨基甲酸節(jié)酯l(500mg，2.6亳摩爾)及10mL二氯曱烷中的TEA(800^L，5.7毫摩爾)的一種溶液內(nèi)。讓反應(yīng)混合物攪拌2小時，并將溫度逐漸升高至室溫。將溶劑蒸發(fā)，接著進(jìn)行水的后續(xù)處理以及用實(shí)例4乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用10%檸檬酸、水、以及飽和碳酸氫鈉、以及鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥以給出化合物3(260mg，32。/。產(chǎn)率)MS:M+1-315.3.H1NMR(CDCL3):7.37ppm(5H),5.llppm(2H)，3.83ppm(2H),3.40ppm(4H)。5§化合物6的合成在9mLDCM/DMF(2:1)的混合物中將1.5克Fmoc-Citruline5(0.0038摩爾)、0.88克4-氨基苯甲酸叔丁酯4(0.0045摩爾)、0.6克HOBt(0.0045摩爾)、0.68克EDC(0.0(M3摩爾)及催化量的氯化銅攪拌過夜。去除溶劑，并將產(chǎn)物通過硅膠急驟柱層析法使用DCM中的5-10°/。MeOH進(jìn)行純化以給出化合物6(1.54g，71%產(chǎn)率)。MS:M+1=573.9?；衔?的合成化合物6(300mg，0.66亳摩爾)中的Fmoc保護(hù)基的脫保護(hù)是使用在DMF中的5%吡啶在20分鐘時間內(nèi)進(jìn)行的。將溶劑蒸發(fā)，并將粗產(chǎn)物固體使用二乙醚漂洗以給出230mg化合物7(99%產(chǎn)率)。MS:M+1-352。將230mg化合物7(0.65毫摩爾)與在DMF中及DCM中的Fmoc-纈氨酸333mg(0.98毫摩爾)以及188mgEDC(0.98毫摩爾)進(jìn)行反應(yīng)，在硅膠上用在DCM中的5-10。/。MeOH純化后以給出240mg化合物8(55%產(chǎn)率)。MS:M"=673。9is化合物10的合成500mg化合物8(0.75毫摩爾)使用吡啶在DMF中脫保護(hù)獲得化合物9，在去除溶劑后將該化合物用二乙醚漂洗。未經(jīng)進(jìn)一步純化的化合物9與235mg化合物3(0.75毫摩爾)在125mgKI(0.75毫摩爾)及313^L三乙胺存在下在40。C反應(yīng)2小時。將粗反應(yīng)混合物濃縮，并通過反相HPLC純化獲得300mg化合物10,55.8%產(chǎn)率。MS:M[+1]=685?；衔飈l的合成用HCL-EA將化合物IO(300mg)脫保護(hù)3小時。將溶劑蒸發(fā)，并將產(chǎn)物在高度真空下干燥以給出化合物ll。MS:M[+1=628。H1NMR(DMSO):10.45ppm(1H)，8.8ppm(1H),8.5(1H)，7.88ppm(2H)，7.75ppm(2H)，7.3ppm(5H)，6.1(1H)，5.5(2H)，4.99(2H),4.5ppm(1H)，3.7-3.4(3H)，3.2-2.9(5H)，2.16(1H)，1.45(2H).1.1(3H)，0.92ppm(3H)?；衔?4的合成將溶于含4NHBr的EtOAc(5mL)中的化合物12(42mg,0.09毫摩爾)的一種溶液在25'C攪拌45分鐘。將溶劑去除，并在高度真空下進(jìn)一步干燥4小時。向在DMF(2mL)中的殘余物內(nèi)添加5-(氨基-叔丁基-丁氧基羰基)-茚酮-2-羧酸(39.2mg，0.14毫摩爾)及B0P(71mg，0.16毫摩爾)，接著添加DIPEA(83^L，0.48毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在25X:攪拌20分鐘并使之通過硅膠短的管柱。溶劑經(jīng)去除，并將粗產(chǎn)物在硅膠上用己烷中的20°/。EtOAc層析洗脫以給出化合物14(49mg,88%)。力證DMSO-d6)511.63(s，1H)，9.18(brs，1H),8.19(d,1H,J=8.4Hz)，8.09(brs,1H)，7.90(d,1H，J=8.4Hz)，7.79(brs，1H)，7.53—7.58(m，3H)，7.39-7.43(m，3H)，7.28-7.35(m，3H),7.11(s，1H)，5.29(s,2H)，4.80(t，1H，11.2Hz)，4.54(dd，1H，8.8Hz)，4.31(m，1H)，3.92(dd，1H，J-10.2Hz)，3.82(dd，1H，J=10.7Hz),1.47(s，9H)。14lf化合物15的合成化合物14(49mg，0.08亳摩爾)及在MeOH/CH2Cl2(1/2，10mL)中的10。/。Pd-C(35mg)的一個混合物在真空下除氣40s。所得混合物置于氫氣氣氛下，并在25t:下攪拌7小時。反應(yīng)混合物經(jīng)西萊特(Celite)過濾(Me0H/CH2Clr洗滌)。將溶劑在真空中去除。在硅膠上用DCM中的2。/aMeOH洗脫的層析法獲得化合物15(40.6mg，97%)。物RDMSO-(U511.59(s，1H)，10.43(s，1H)，9.18(brs，1H)，8.09(d，1H，J-8.2Hz)，7.93(brs，1H)，7.81(d，1H，2Hz)，7.78(brs，1H)，7.49(t，1H，J-8.4Hz),7.27-7.35(m，3H)，7.08(s，1H)，4.80(t，1H，11.2Hz)，4.54(dd，1H，8.8Hz)，4.31(m，1H)，3.92(dd，1H,J-10.2Hz)，3.82(dd，1H，J-10.7Hz)，1.47(s，9H)?；衔?6的合成將化合物15(36mg，0.07毫摩爾)、4-甲基-l-哌溱碳酰氯鹽酸鹽(20mg,0.IO毫摩爾)、丙烯醇(0.1mL)及CH2Cl2(7mL)中的無水吡啶(63jaml)的溶液混合物在室溫下攪拌16小時。未去除溶劑，并將粗產(chǎn)物在硅膠上層析，用(^2(:12中的2%-10%MeOH洗脫以給出化合物16(32.4mg，73%)。卞MRDMSO-d6)5H.59(s，1H),9.18(brs，1H)，8.09(d，1H，J=8.2Hz)，7.93(brs，1H)，7.81(d,1H，J=8.2Hz)，7.78(brs，1H)，7.49(t，1H，J-8.4Hz)，7.27-7.35(m，3H)，7.08(s，1H)，4.80(t，1H，11.2Hz),4.54(dd，1H，8.8Hz)，4.31(m，1H)，3.92(dd，1H，J=10.2Hz)，3.82(dd，1H,J-10.7Hz)，3.77(brs，2H)，3.47(brs，2H)，3.37(brs，2H)，2.63(s，3H)，2.38(brs，2H)，1.47(s，9H)。M12化合物17的合成將溶于含4NHBr的EtOAc(4mL)中的化合物16(32mg,0.05毫摩爾)的一種溶液在251C攪拌45分鐘。將溶劑去除，并在高度真空下進(jìn)一步干燥4小時。向在DMF(2mL)中的殘余物內(nèi)添加化合物ll(48.2mg，0.0了毫摩爾)及苯并三唑-l-基-氧代-三-(二甲氨基)-磷鎩六氟磷酸鹽(B0P)(34.5mg，0.08毫摩爾)，接著添加DIPEA(68uL),并將反應(yīng)混合物在25。C攪拌25min。在真空下去除溶劑，并將產(chǎn)物通過PrepHPLC(SymmetrPrepC18,7叫19x150mm柱)純化，以10ml/min(在水/乙腈中的0.01%TFA)的以下迷梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50%乙腈15分鐘，維持50%乙腈5分鐘，50%至100%乙腈5分鐘以給出化合物17(42.1mg,64%)。MS:C58H67BrN12O10(M+H)m/z的計(jì)算值1171.43，實(shí)測值1172.40。12II化合物18的合成向溶于MeOH(5mL)中的化合物17(33.6mg，0.025毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加10%Pd-C(28mg)，并且混合物用扎除氣。反應(yīng)混合物用H2沖洗，然后在H2氣氛下攪拌。在反應(yīng)完成時(40min)，將反應(yīng)混合物過濾并濃縮以給出化合物18(31.5mg，96%)。MS:C5。H61BrN1208(M+H)m/z的計(jì)算值1037.39，實(shí)測值1038.20<Mal-PGE4-NHSN廣l.o^~oo12化合物19的合成向在DMF(2niL)中的化合物18(31.5mg，0.024毫摩爾)的一種溶液內(nèi)添加DCM(0.5mL)中的Mal-PEG4-NHS酯(42mg，0.08毫摩爾)。反應(yīng)混合物在25。C攪拌1小時。將終產(chǎn)物通過制PrepHPLC(SymmetrPrepC18,7pm，19x150mm柱)純化，在10ml/min(在水/乙腈中的0.01。/。TFA)用以下述梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50%乙腈15分鐘，維持50%乙腈5分鐘，50%至100%乙腈5分鐘以給出化合物19(29.7mg，77%)。MS:C68H87BrN14016(M+H)m/z的計(jì)算值1435.56,實(shí)測值1437.00。實(shí)例5CHO^/^Y^N3CH2C。2Me"^"-^^HNaOMe,MeOH化合物2的合成向丐l哚—4-羧醛(indole-4-carboxaldehyde)(1，583mg，4毫摩爾)及無水曱醇(20mL)中的疊氮乙酸甲酯(460mg,40毫摩爾)的一種溶液內(nèi)在-25t:(干冰/CCL)在N2下逐滴添加溶于甲醇中的曱醇鈉(6.9mL25%NaOMe,32毫摩爾)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?TC并攪拌3.5小時。反應(yīng)混合物倒入水(120mL)中，并用EtOAc(2x60mL)萃取。將組合的萃取物用飽和水性NaCl(60mL)洗滌并干燥(MgSO,)。將溶劑在真空下去除以給出化合物2(890mg，91%)。匪R(CDC13)58.28(brs，1H)，8,06(d，1H，J-7.6Hz)，7.45(s，1H),7.42(d，1H，J-7.6Hz),7.30(t，1H，J-3.2Hz)，7.26(s，1H)，6.73(brs,1H)，3.96(s，3H)。化合物3的合成將無水二甲苯(lOOmL)中的2-疊氮基-3-(1H-吲哚-4-基)丙烯酸甲酯(2,890mg，3.68毫摩爾)的懸浮液在^下回流1小時。在真空下去除溶劑，并使殘余物通過硅膠柱(30%EtOAc-己烷)以給出3(663mg,85%)。力NMR(CDCh)58.97(brs，1H)，8.36(brs，1H)，7.47(d，1H，J-2Hz)，7.40(d，1H，J=9.2Hz)，7.26(t，1H，J-2.8Hz)，7.22(d，1H，J-9.2Hz)，6.82(t,1H，J=2.4Hz),3.95(s，3H)。化合物4的合成在氮?dú)庀略?5。C向甲基吡咯并[3，2-e]丐l咪-2-羧酸甲酯(3，663mg，3.l毫摩爾)的冰醋酸溶液(9mL)內(nèi)添加氰基硼氫化鈉(600mg，9.5毫摩爾)，并將反應(yīng)混合物攪拌2.5小時(13-18'C)。將反應(yīng)混合物倒入水(60mL)內(nèi)，通過小心添加固體碳酸鈉調(diào)整至pH8-9。用EtOAc(3x60mL)萃取水性混合物，并將組合萃取物干燥(MgSO,)。將溶劑在真空中去除。快速層析法(硅膠，20%EtOAc-己烷)獲得化合物4(562mg，84%)。^NMR(CDC13)58.85(brs，1H)，7.15(d，1H，J-8.4Hz)，7.04(s，1H)，6.89(d，1H，J=8.4Hz)，3.94(s，3H)，3.68(t，2H，J-8.4Hz)，3.24(t，2H，J=8.4Hz)?；衔?的合成將無水THF(8mL)中的1,2-二氫-3H-吡咯并[3，2-e]吲咪-7-羧酸曱酯(4，450mg，1.42毫摩爾)的一種溶液在25X:在N2下用二-叔丁基-重碳酸酯(621g,2.8毫摩爾)進(jìn)行處理。將反應(yīng)混合物攪拌16h，然后在真空下去除溶劑。快速層析法(硅膠，30y。EtOAc-己烷)產(chǎn)生化合物5(551mg，84%)。'HNMR(CDCh)58.78(brs，1H)，7.26(s，1H)，7.25(d，1H，J=8.5Hz)，7.07(s，1H),4.12(brs，2H)，3.94(s，3H)，3.27(t，2H，J-8.8Hz)，1.57(s，9H)。化合物6的合成將LiOH水溶液(2.2mL4.0M溶液，8.7毫摩爾)添加至含3-(叔-丁氧羥基)-1，2-二氫-3H-吡咯并[3，2-e]吲哚-7-羧酸甲酯(5，551mg，1.74亳摩爾)的60mLTHF/MeOH/H20(3:2:1)的漿料中，將反應(yīng)混合物在25X:攪拌14小時。反應(yīng)混合物用水(30mL)稀釋，然后用2NHCl調(diào)整pH至4，產(chǎn)生一種白色沉淀。通過過濾收集固體，并用水(lOmL)洗滌。在高度真空下干燥固體獲得化合物6(524mg，99%)。'匪R(面0-《)512.93(brs，1H)，11.69(s，1H)，7.80(brs，1H)，7.20(d，1H，J=8.8Hz)，6.91(s，1H)，3.96(t，2H，J=8.8Hz)，3.18(t，2H，J=8.8Hz)，1.48(s，9H)。化合物9的合成將在4NHBr中的化合物7(48mg,0.l毫摩爾)的EtOAc的一種溶液(5mL)在25。C在氮?dú)庀聰嚢?5分鐘。將溶劑去除，并在高度真空下進(jìn)一步干燥4小時。向殘余物內(nèi)添加3-(叔-丁氧羥基)-1，2-二氫-3^吡咯并[3，2-e]吲哚-7-羧酸(6,36.24mg，0.12mmol)。將EDC(22.9mg，0.12毫摩爾)的DMF(3mL)溶液加入并且將反應(yīng)混合物在25。C攪拌6小時。去除溶劑。將粗產(chǎn)物在硅膠上層析，用(^0:12中的3%-10%MeOH洗脫以給出化合物9(26mg，40%)。力NMR(DMSO-cQ511.69(s,1H)，8.17(s，1H)，8.01(d，1H，J=8.4Hz)，7.81(d，2H，J=8.8Hz),7.59(t，1H，J-7.6Hz)，7.49(t，1H，J=7.6Hz)，7.29(d，1H，J=9.2Hz)，7.07(s，1H)，4.87(t，1H，10Hz)，4.54(d，1H，8.8Hz)，4.43(brs，1H)，3.89-4.03(m，4H)，3.76(brs，2H)，3.46(brs，2H).3.26(m，2H)，2.46(brs，2H),2.38(brs,2H)，2.24(s，3H)，1.49(s,9H)。化合物10的合成將在4NHBr中的化合物9(26mg，0.04毫摩爾)的EtOAc(5mL)的一種溶液在25X:在氮?dú)庀聰嚢?5分鐘。去除溶劑，并進(jìn)一步在真空下干燥14小時以給出化合物10(27.7mg，98%)。力NMR(DMSO-A)512.09(s，1H)，8.25(s，1H),8.03(d，1H，J=8.4Hz)，7.92(d，1H，J=8.8Hz)，7.63(t，1H，J-7.6Hz)，7.49-7.55(m，2H)，7.34(d，1H，J=8.8Hz)，7.32(s，1H)，4.91(t，1H，10.8Hz)，4.54(d,1H，10.8Hz),4.47(brs，1H),3.84-3.99(m，4H)，3.27-3.50(m，IOH)，2.88(s，3H)?；衔?2的合成將化合物ll(20mg，0.05mmol)及MeOH/CH2Cl2(1/2，10mL)中的10y。Pd-C(15mg)的一種溶液在真空下除氣40s。所得混合物置于氫氣氣氛下，并在25。C下攪拌7小時。反應(yīng)混合物經(jīng)西萊特(Celite)過濾(CH2Ch洗滌)。將溶劑在真空中去除。在硅膠上用EtOAc/Hex(2/8)洗脫的層析獲得化合物12(15.4mg,98%)。卞MR(DMSO-A)510.36(s，1H),8.04(d，1H，J=8.2Hz)，7.72(d，1H，J=8.2Hz)，7.61(brs，1H)，7.45(t，1H，J-8.4Hz)，7.261(t，1H，J-8.4Hz)，4.06(m，4H)，3.73(brs，1H)，1.52(s，9H)。化合物13的合成將溶于含4NHC1的EtOAc(3mL)中的化合物12(14mg，0.04mmol)的溶液在25。C在氮?dú)庀聰?0-45min。將溶劑去除，并在高度真空下進(jìn)一步干燥14小時。向殘余物內(nèi)添加3-(叔-丁氧羥基)-1，2-二氫-3^"吡咯并[3，2-e]吲哚-7-羧酸(6，15.1mg，0.05mmol)。添力口溶于DMF(2ml)中的EDC(9.6mg，0.05mmol)的溶液，反應(yīng)混合物在25。C攪拌15小時。去除溶劑。將粗產(chǎn)物在硅膠上層析，用(^2(:12中的3%-10%MeOH洗脫以給出化合物13(18.6mg，86%)。力NMR(CDCh)59.45(s，1H)，8.31(s，1H)，8.29(d，1H,J=8.4Hz)，8.02(s，2H)，7.63(d，1H，J-8.4Hz)，7.54(t，1H，J-6.8Hz)，7.43(t，1H，J=6.8Hz)，7.29(d，1H，J=8.0Hz)，6.89(s，1H)，4.75(d，1H，10.8Hz)，4.64(t，1H，8.8Hz)，4.12(brs，2H)，4.03(t，1H，J=8.8Hz)，3.93(dd，1H，J=11.2Hz)，3.42(t，1H，J=10.8Hz)，3.22-3.31(m，2H)，1.61(s，9H)。14if化合物14的合成向在DMF(3mL)中的化合物13(19mg，0.04毫摩爾)的一種溶液內(nèi)在0。C-5。C添加甲氧鈉(0.5M溶于MeOH中，79^L，0.04毫摩爾)及攪拌5分鐘。向反應(yīng)混合物中加水(20mL)，并用EtOAc(2x10mL)萃取水性混合物。對組合萃取物進(jìn)行干燥(MgS04)。在真空中去除溶劑，并將粗產(chǎn)物在硅膠上用CH2Cl2中的10y。MeOH層析洗脫以給出化合物14(15.3mg，87%)。、MR(CDCU59.24(brs，1H)，8.25(dd，1H，J=9.2，1.6Hz)，8.02(s，1H)，7.54(tt，1H，J=7.6，1.6Hz)，7.43(tt，1H，J=7.6，1.6Hz)，7.28(d，1H，J=9.2Hz)，7.20(s,1H)，6.94(d，1H,J-7.6Hz)，6.88(s，1H)，4.49(m，2H)，4.12(brs，2H)，3.26(m，2H)，2.92(m，1H)，1.76(dd，2H，J-7.6Hz),1.61(s，9H)?；衔?5的合成溶于含4NHBr的EtOAc(3mL)的化合物14(6.4mg，0.013mmol)的溶液在25T在氮?dú)庀聰嚢?0min。在真空中去除溶劑，并進(jìn)一步在真空下干燥14小時以給出15(7.lmg，99%)。'HNMR(DMSO-cO512.16(s，1H)，10.45(s，1H),8.11(d,1H，J=8.4Hz)，7.94(brs,1H)，7.83(d,1H，J=8.OHz)，7.51(m，2H)，7.34(m，2H)，7.27(s，1H)，4.81(t，1H，10.8Hz)，4.48(d，1H，10.8Hz),4.28(brs，1H)，3.77-3.91(m，4H)，3.41-3.48(m，2H)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage112</formula>29(得自實(shí)例3)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage112</formula>化合物16的合成將化合物IO(0.033毫摩爾，2HBr鹽)與在2.5mLDMF中的實(shí)例3的化合物29(45mg，0.054毫摩爾)在HATU(20mg，0.054毫摩爾)及TEA(15-20pL)的存在下反應(yīng)50分鐘。將溶劑蒸發(fā),并將粗產(chǎn)物通過反相HPLC純化以給出IOmg化合物16(21%產(chǎn)率)。MS:1405.6、1427.8及1444.6。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage112</formula>化合物19的合成將化合物10(25mg，0.033毫摩爾，2HBr鹽)與2.5mLDMF中的實(shí)例5的化合物D(21.5mg，0.043亳摩爾)在HATU(16.5mg，0.0433毫摩爾)及TEA(10-15^iL)的存在下進(jìn)行反應(yīng)45分鐘。將溶劑蒸發(fā)，并將粗產(chǎn)物通過反相HPLC純化以給出25mg化合物17(71%產(chǎn)率)。MS:1067.0?；衔?7(0.0187毫摩爾)用DMF(3mL)中的5%吡咬進(jìn)行脫保護(hù)45分鐘。溶劑經(jīng)蒸發(fā)去除，殘余物用二乙醚洗滌獲得化合物18(MS:845.2)。向溶于3mLDMF的0.00935毫摩爾化合物18的一種溶液內(nèi)添加溶于DCM1mL的Mal-dPEG4-NHS酯(10mg，0.019毫摩爾)，接著添加TEA(5nL)。30分鐘后將溶劑蒸發(fā)，并將粗產(chǎn)物通過反相HPLC純化以給出5.2mg的化合物19(MS:1243.2、1266.8以及1281.2)。實(shí)例6戰(zhàn)J廣N'ONHNH2J三，F(xiàn)mcHATU,N」自產(chǎn)，0N^N'Fm°e。底啶互oISCI。輪w'人嗎fH。T>OHO,n一TFA/PCMCl、O力JNO化合物3的合成向在DMF(2mL)中的化合物l(18.2mg,0.03mmol)內(nèi)力口入4匕合物2(16mg，0.036mmol)以及HATU(14mg，0.036mmol)，接著添加DIPEA(19pi)，將反應(yīng)混合物在25。C攪拌7小時。在真空下去除溶劑，產(chǎn)物由PrepHPLC(SymmetrPrepC18，7pm,19x150mm柱)純化，在10mL/分鐘(在水/乙腈中的0.01%TFA)使用下述梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50%乙腈15分鐘，維持50%乙腈5分鐘，50%至100°/。乙腈5分鐘洗脫，以給出化合物3(15.8mg,53%)。MS:C59H58C1N709(M+H)m/z的計(jì)算值1044.4，實(shí)測值1045。化合物4的合成將在DMF(2niL)中的化合物3(15mg，0.014mmo1)的一種溶液用在DMF(2mL)中的5%哌啶進(jìn)行處理。將反應(yīng)混合物在25。C攪拌5分鐘。終產(chǎn)物由PrepHPLC(SymmetrPrepC18,7|im，19x150mm柱)純化，在IOmL/分鐘(在水/乙腈中的0.01%TFA)使用下述梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50%乙腈15分鐘，維持50%乙腈5分鐘，50%至100%乙腈5分鐘洗脫，以給出化合物4(11.2mg，95%)。MS:C"H"C1線(M+H)m/z的計(jì)算值822.33，實(shí)測值822.6?；衔?的合成將在DMF(2mL)中的化合物4(11.2mg,0.014mmol)的一種溶液添加至在DCM(0.5mL)中的化合物5(5.5mg,0.018mmol)。將反應(yīng)混合物在25'C攪拌1小時。終產(chǎn)物由PrepHPLC(SymmetrPrepC18,7iim，19x150mm柱)純化，在10mL/分鐘(在水/乙腈中的0.01。/。TFA)使用下述梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50%乙腈15分鐘，維持50%乙腈5分鐘，50%至100%乙腈5分鐘洗脫，以給出化合物19(13mg，94%)。MS:C54H59C1N8010(M+H)m/z的計(jì)算值1015.4，實(shí)測值1016.0?；衔?的合成將在TFA/DCM(1/1，2mL)中的化合物6(13mg，0.013mmo1)的一種溶液攪拌15分鐘。在真空下去除溶劑，產(chǎn)物由PrepHPLC(SymmetrPrepC18,7pm，19x150mm柱)純化，在IOmL/分鐘(在水/乙腈中的0.01%TFA)使用下述梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50°/。乙腈15分鐘，維持50%乙腈5分鐘，50%至100%乙腈5分鐘洗脫，以給出化合物7(12mg，97%)。MS:C5。H51C1N8010(M+H)m/z的計(jì)算值959.34，實(shí)測值960。實(shí)例7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage115</formula>化合物3的合成化合物l(47mg，0.06mmol)，化合物2(40mg，0.078mmol)以及B0P(34.5mg，0.078mmol)的DMF(3mL)溶液用DIPEA(68pi)處理。將反應(yīng)混合物在25'C攪拌30分鐘。去除溶劑，進(jìn)一步在高度真空下干燥4小時。在真空下去除溶劑，粗產(chǎn)物由PrepHPLC(SymmetrPrepC18，7，19x150mm柱)純化，在10mL/分鐘(在水/乙腈中的0.01%TFA)使用下述梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50%乙腈15分鐘，維持50。/。乙腈5分鐘，50%至100%乙腈5分鐘洗脫，以給出化合物3(56mg,85%)。MS:C56H54BrN908(M+H)m/z的計(jì)算值1060.33，實(shí)測值1060.44?；衔?的合成將在DMF(2mL)中的化合物3(22mg，0.02mmo1)的一種溶液用在DMF(2mL)中的5%哌啶進(jìn)行處理。將反應(yīng)混合物在25。C攪拌5分鐘。終產(chǎn)物由PrepHPLC(SymmetrPrepC18,7|Lim,19x150mni柱)純化，在10mL/分鐘(在水/乙腈中的0.01%TFA)使用下述梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50%乙腈15分鐘，維持50%乙腈5分鐘，50°/。至100%乙腈5分鐘洗脫，以給出化合物4(16.2mg，93%)。MS:C"H44BrN906(M+H)m/z的計(jì)算值838.26，實(shí)測值839.2。化合物6的合成在DMF(2mL)中的化合物4(16mg,0.015mmol)以及化合物5(6.2mg，0.02mmol)的一種溶液用DIPEA(10pi)處理。將反應(yīng)混合物在25X:攪拌1小時。終產(chǎn)物由PrepHPLC(SymmetrPrepC18,7jam,19x150mm柱)純化，在10mL/分鐘(在水/乙腈中的0.Or/。TFA)使用下述梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50%乙腈"分鐘，維持50%乙腈5分鐘，50%至100°/。乙腈5分鐘洗脫，以給出化合物6(13mg，75%)。MS:C51H55BrN10O9(M+H)m/z的計(jì)算值1031.33,實(shí)測值1031.6。實(shí)例8<formula>formulaseeoriginaldocumentpage116</formula>aEDC，HOBt,CuCl2,5%DMF的CH2CI240七0%bTFA,CH^C^98%cBot^O,DMF70%dHATU化合物ADMF,DIEA5766。/oe哌啶，DMF98%f20%DMF的cf^12,DIEA,6-(馬來酖亞胺基)己酸琥詢酰亞胺酯60-79%化合物l的合成向Fmoc-Lys(Boc)-0H(500mg，1.07mmol)的5%DMF的THF(21mL)溶液內(nèi)在室溫下添加EDC(245mg，1.28mmol)、H0Bt(173mg，1.28mmol)以及4-氨基苯曱酸叔丁酯(247mg，1.28mmol)。如此所得混合物攪拌10分鐘，然后將氯化銅(172mg，1.28mmol)添加至混合物。將混合物攪拌過夜。將混合物濃縮至干燥，然后殘余物在硅膠由快速層析法純化，以5%甲醇的二氯曱烷洗脫，以給出呈無色油的化合物l(286mg，42%)。NMR(CD30D)51.38(s，9H)，1.45-1.54(m，4H)，1.58(s，9H)，1.80(m，2H)，3.05(t，2H)，4.22(m，2H),4.38(d，2H)，7.30(m，2H)，7.38(m，2H)，7.68(in,4H),7.78(d，2H)，7.90(d，2H);LC-MS(ES+)，544(M+H-Boc)+，667(M+Na)+。化合物2的合成對于一般的EDC偶合程序參見化合物1的制備。Fmoc-Leu-OH(500mg，1.42mmol)與4-氨基苯甲酸叔丁酯(328mg,1.70mmol)的偶合給出335mg2(44%)。^NMR(CD30D)50.95(t，6H),1.58(s,9H)，1.55-1.80(m，3H)，4.22(m，1H)，4.28(m，1H)，4.40(m，2H)，7.35(m，4H)，7.65(m，4H)，7.78(d，2H)，7.90(d，2H)?；衔?的合成對于一般的EDC偶合程序參見化合物1的制備。Fmoc-Cit-0H(206mg，0.52mmol)與4-氨基苯曱酸叔丁酯(120mg，0.62mmol)的偶合給出184mg3(62%)。HNMR(CD30D)51.53-1.58(m，2H)，1.57(s，9H)，1.71(m，1H)，1.82(m，1H)，3.08(m，1H)，3.19(m，1H)，4,21(m，1H)，4.28(m，1H)，4.38(m，2H)，7.28-7.39(m，3H)，7.49(m，2H)，7.56-7.86(m，5H),7.89(m，2H);LC-MS(ES+)，573(M+H)+，595(M+Na)+，611(M+K)+?；衔?的合成向在二氯甲垸(4mL)中的化合物l(280mg，0.44mmo1)的一種溶液內(nèi)添加TFA(2mL)。將所得溶液攪拌20分鐘。在真空下蒸發(fā)去除溶劑。殘余物(260mg,98%)未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。'HNMR(CD3OD)S1.45-1.80(m，5H)，1.88(m,1H)，2.09(t，2H)，4.25(m，2H)，4.45(m，2H)，7.30(m，2H)，7.38(m，2H),7.68(m，4H)，7.80(d，2H)，7.98(d，2H)。化合物5的合成向在DMF(5mL)中的化合物4(214mg，0.44mmol)的一種溶液內(nèi)在室溫添加二異丙基乙胺(153(xl，0.88mmol)，Boc20(144mg，0.66mmol)。將混合物攪拌過夜。溶劑經(jīng)蒸發(fā)去除，殘余物由半制備性HPLC純化，以給出化合物5，呈白色固體(181mg，70°/。)。^腿(CD卿51.40(s，9H)，1.45-1.50(m，4H)，1.80(m，2H)，3.03(t，2H)，4.21(m，2H)，4.40(d，2H),7.35(m，4H)，7.65(m，4H)，7.68(d，2H)，7.95(d，2H);LC-MS(ES+)489(M+H-Boc)+，610(M+Na)+?；衔?的合成對于叔丁酯的脫保護(hù)程序參見化合物4的制備?；衔?(15mg，0.028mmol)的脫保護(hù)給出13mg化合物6(98%)。殘余物未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。LC-MS(ES+)495(M+H)+?；衔?的合成對于叔丁酯的脫保護(hù)程序參見化合物4的制備?；衔?(20mg，0.035mmol)的脫保護(hù)給出17mg化合物7(98%)。殘余物未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟?；衔?的合成在室溫向在DMF(1mL)中的化合物A(化合物A是以類似于實(shí)例4中對化合物16所述的方式合成)(24mg，0.032mmol)的一種溶液內(nèi)添加化合物5(19mg,0.032mmo1)、二異丙基乙胺(28pi,0.16mmol)以及HATU(12mg，0.032mmol)。如此所得混合物攪拌2小時。蒸發(fā)去除溶劑，殘余物由半制備性HPLC純化，以給出標(biāo)題化合物，呈白色固體(25mg,66°/。)。力NMR(CD30D)51.40(s，9H)，1.45-1.50(m，4H)，1.80(m，2H)，2.93(s,3H)，3.03(t，2H)，3.10-3.60(m，8H)，3.85(d，1H)，4.05(m，1H)，4.21(m,2H)，4.40(m，4H)，4.52(m，1H)，6.95(s，1H)，7.27—7.50(m，8H)，7.63-7.77(m，7H)，7.84(m，3H)，7.99(s，1H)，8.25(bs，1H);LC-MS(ES+)1088(M+H)+?；衔?的合成對于HATU偶合程序參見化合物8的制備?；衔?(13mg,0.027mmol)與化合物25(20mg，0.027mmol)的偶合給出17mg化合物9(57%)。4NMR(CD3OD)50.86(m，6H)，1.45-1.70(m，3H)，2.78(s，3H)，3.05-3.50(m，8H)，3.70(d，1H)，3.80(m，1H)，4.07(m，1H)，4.20-4.40(m，6H)，6.76(s，1H)，7.13-7.30(m，8H)，7.51-7.72(m，IOH)，7.86(s，1H)，8.15(bs，1H);LC-MS(ES+)973(M+H)+。化合物10的合成對于HATU偶合程序參見化合物8的制備?；衔?(27mg，0.053mmol)與化合物25(39mg，0.053mmol)的偶合給出36mg化合物IO(60%)。化合物ll的合成向在DMF(1mL)中的化合物8(25mg，0.02mmol)的一種溶液內(nèi)添加哌啶(lOnl，0.lmmol)。將所得溶液攪拌l小時。在真空下蒸發(fā)去除溶劑。殘余物在醚中崩解并過濾(18mg,98%)?；衔镂唇?jīng)進(jìn)一步純化即供使用。LC-MS(ES+)866(M+H)+，888(M+Na)+?；衔?2的合成對于一般的Fmoc脫保護(hù)程序參見化合物ll的制備?；衔?(17mg，0.016mmol)的脫保護(hù)給出14mg化合物12(98%)。殘余物未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。化合物13的合成對于一般的Fmoc脫保護(hù)程序參見化合物11的制備?；衔颕O(36mg，0.036nunol)的脫保護(hù)給出28mg化合物13(98%)。殘余物未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟?；衔?4的合成向化合物ll(18mg，0.021咖ol)的20%DMF的二氯曱烷(lmL)—種溶液內(nèi)在室溫添加二異丙基乙胺(110.63mmo1)以及6-(馬來酰亞胺基)己酸琥珀酰亞胺酯(10mg，0.031mmol)。如此所得混合物攪拌2小時。溶劑經(jīng)蒸發(fā)去除，殘余物由半制備性HPLC純化，以給出化合物14，呈白色固體(19mg，79%)。^NMR(CD30D)S1.32(m,2H)，1.42(s,9H)，1.45-1.80(m，8H)，1.78(m，1H)，1.85(m，1H)，2.28(t，2H)，2.96(s，3H)，3.05(t，3H)，3.35-3.70(bs，8H)，3.47(t，2H)，3.60(m,1H)，3.90(m，1H)，4.05(m，1H)，4.44(m，2H)，4.55(m，1H)，6.76(s，2H)，6.96(s，1H)，7.31(bs，2H)，7.42(m，1H)，7.46(m，1H),7.71(m，3H)，7.86(m，3H)，7.99(s，1H)，8.25(bs，1H);LC-MS(ES+)1059(M+H)+，1082(M+Na)+?；衔?5的合成向在二氯曱烷(O.8mL)中的化合物14(19mg，0.08mmol)的一種溶液內(nèi)添加TFA(0.2mL)。將所得'溶液攪拌20分鐘。溶劑經(jīng)蒸發(fā)去除并凍干，以給出化合物15，呈白色固體(17mg，90%)。力畫(CD3OD)S1.34(m，2H)，1.45-1.80(m，9H)，1.95(m，1H)，2.29(t，2H)，2.96(t，3H)，3.00(s，3H)，3.35-3.70(bs，8H)，3.48(t，2H)，3.75(m，1H)，3.98(dd，1H)，4.20(m，1H)，4.50(m，1H)，4.69(m，2H)，6.78(s，2H)，7.12(s，1H)，7.42(bs，2H)，7.48(m，1H)，7.57(m，1H)，7.73(m,2H)，7.87-7.95(m，4H),8.05(s，1H)，8.25(bs，1H);LC-MS(ES+)959(M+H)+，982(M+Na)+?；衔?6的合成對于6-(馬來酰亞胺基)己酸琥珀酰亞胺酯偶合程序參見化合物14的制備。化合物12(11mg，0.015mmol)與6-(馬來酰亞胺基)己酸琥珀酰亞胺酯(7mg，0.022mmol)的偶合給出10mg化合物16(66%)。力NMR(CD3OD)S0.97(d，3H)，1.01(d，3H)，1.31(m，2H),1.56-1.75(m，7H)，2.28(t，2H)，2.97(s，3H)，3.35-3.55(m，8H)，3.47(t，2H)，3.62(m，1H)，3.90(m，1H)，4.06(m，1H)，4.51(m，1H)，4.55(m，2H)，6.76(s，2H)，6.99(s，1H)，7.33(bs,2H)，7.42(m，1H)，7.49(m，1H)，7.69(d，2H)，7.75(m，1H)，7.86(m，3H)，8.00(s，1H)，8.25(bs，1H);LC-MS(ES+)944(M+H)+，966(M+Na)+。化合物17的合成對于6-(馬來酰亞胺基)己酸琥珀酰亞胺酯的偶合程序參見化合物14的制備?；衔?3(28mg,0.035mmol)與6-(馬來酰亞胺基)己酸琥珀酰亞胺酯(16mg，0.053mmol)的偶合給出24mg化合物17(60%)。NMR(CD3OD)S1.34(m，2H)，1.55-1.68(m，6H)，1.68-190(m，2H)，2.29(t，2H)，3.00(s，3H)，3.12-3.30(m，2H)，3.35-3.70(bs，8H)，3.48(t,2H)，3.70(m，1H)，3.96(dd，1H)，4.20(m，1H)，4.50(m，1H)，4.65(m，2H)，6.78(s，2H)，7.08(s，1H)，7.41(bs，2H)，7.47(m,1H)，7.56(m，1H)，7.73(d，2H)，7.86(d，4H)，7.90(d，2H)，8.03(s，1H)，8.25(bs，1H);LC-MS(ES+)988(M+H)+，1010(M+Na)+。實(shí)例9<formula>formulaseeoriginaldocumentpage121</formula>化合物3的合成向在DMF(2mL)中的化合物l(50mg，0.079mmol)內(nèi)力口入化合物2(49mg，0.085mmol)以及HATU(33mg，0.086mmo1)，接著添加DIPEA(45pl)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時。在真空下去除溶劑，產(chǎn)物由PrepHPLC(SymmetrPrepC18，7pm，19x150簡柱)純化，在10mL/分鐘(在水/乙腈中的0.01°/。TFA)使用下述梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50%乙腈15分鐘，維持50%乙腈5分鐘，50%至100°/。乙腈5分鐘洗脫，以給出化合物3(47mg，60%)。MS:(M+H)+1003。化合物5的合成將在DMF(2mL)中的化合物3(15mg，0.014醒ol)的一種溶液用在DMF(2mL)中的5%哌啶進(jìn)行處理，將反應(yīng)混合物在25。C攪拌10分鐘。粗產(chǎn)物用乙醚沉淀，未經(jīng)進(jìn)一步純化即用于下一步驟。粗產(chǎn)物溶解于DMF(3mL)，接著添加化合物4(25mg,0.025mmol)的DMF(2mL)以及DIEA(20jnl)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時。添加TFA至反應(yīng)混合物，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌45分鐘，如由分析型HPLC所指示，給出化合物5。粗產(chǎn)物由PrepHPLC(Sy咖etrPrepC18，7罔，19x150mm柱)純化，在10mL/分鐘(在水/乙腈中的0.Or/。TFA)使用下述梯度洗脫10%乙腈5分鐘，10%至50%乙腈15分鐘，維持50%乙腈5分鐘，50%至100°/。乙腈5分鐘洗脫，以給出化合物5(3mg，94%)。MS:(MH)+889。實(shí)例IO化合物l的合成將1.5g(3.77mmol)Fmoc-瓜氨酸溶解于圓底瓶內(nèi)的3mLDMF中，在其中添加O.87g(4.5mmol)EDC，0.61g(4.5mmol)廳t。然后添加6diL固，接著添加O.88g(4.5畫l)4-氨基苯甲酸叔丁酯以及催化劑量的氯化銅。讓反應(yīng)混合物攪拌過夜。溶劑經(jīng)蒸發(fā)去除，粗產(chǎn)物在硅膠上用在DCM中的5%至10%甲醇進(jìn)行純化，以給出2g化合物l，92%產(chǎn)率。M+1=574。化合物7的合成210mg(0.63mmol)化合物2用HBr-乙酸乙酯溶液處理30分鐘。蒸發(fā)去除溶劑，將所得的鹽3在高度真空下干燥。0.63mmol以上制備的3與210mg(0.69mmol)化合物4在10mLDMF中，在133mg(0.69mmo1)EDC存在下反應(yīng)2小時。蒸發(fā)去除溶劑，粗產(chǎn)物以硅膠純化。給出160mg化合物5(47.6%產(chǎn)率)。M+1=518。將40mg(0.27mmol)化合物5與160mg(0.81mmol)可商購獲得的4-曱基哌溱碳酰氯鹽酸鹽在17mLDCM(含l.7mL丙烯醇以及214pl吡啶)中反應(yīng)過夜。蒸發(fā)去除溶劑，粗產(chǎn)物化合物以硅膠純化，使用5。/。MeOH/DCM作為洗脫液，以給出70mg(40%產(chǎn)率)化合物6。M+1=645。將35mg(0.054邁mol)化合物6用5mLl:2TFA-DCM處理5分鐘。蒸發(fā)去除溶劑，所得鹽7在高度真空下干燥過夜。M"-544并用于下一步18化合物8的合成將66mg(0.11mmol)4匕合物1通過與3mLl:2TFA:DCM攪拌20分鐘來轉(zhuǎn)成化合物8。蒸發(fā)去除溶劑并且將該酸在高度真空下干燥。M+1=517.8，M+Na=540。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage124</formula>化合物10的合成將O.065邁mol化合物8以及44.7mg(0.065mmol)B0P作為2mL無水DMF中的一種溶液添加至含O.054mmol化合物7(MBD-2477)的燒瓶內(nèi)。然后添加DIPEA(93^L，0.54mmol)并且攪拌1小時。蒸發(fā)去除溶劑，粗產(chǎn)物混合物由反相制備性HPLC純化。在純化后給出48mg化合物9(作為其TFA鹽，77%產(chǎn)率)。M+1=1043。16mg(0.015mmol)化合物9用1mL的5。/。哌啶的DMF溶液處理10分鐘。蒸發(fā)去除溶劑，固體殘余物用己烷類以及乙醚洗滌。產(chǎn)物10在高度真空下干燥。M+1=821。化合物ll的合成將O.015mmol以上制備的化合物10與11mg(0.035mmol)可商購獲得的6-(馬來酰亞胺基)己酸琥珀酰亞胺酯在1.5mL無水DMF以及10pLDIPEA中進(jìn)行反應(yīng)l小時。蒸發(fā)去除溶劑，粗產(chǎn)物由反相HPLC純化，以給出IO.7mg化合物ll(作為其TFA鹽，63°/。產(chǎn)率)。M+1-1014。實(shí)例ll:藥物-連接物分子與抗體的偶聯(lián)用于氨基酸以及肽連接物本實(shí)例說明了將本發(fā)明的藥物-偶聯(lián)物分子(視需要包括其他基團(tuán)，如間隔物、反應(yīng)性官能團(tuán)等)偶聯(lián)至作為靶向劑的抗體X4的反應(yīng)條件及方法。這些條件及方法僅是示例性而非限制性的。將藥物-連接物分子偶聯(lián)至抗體的其他辦法在本領(lǐng)域中是已知的。此處所述的偶聯(lián)方法是基于將游離的硫醇基團(tuán)引入至抗體，這種引入是通過抗體的賴氨酸與2-亞氨基硫烷的反應(yīng)，接著通過藥物連接物分子與活性馬來酰亞胺基的反應(yīng)而進(jìn)行的。最初待偶聯(lián)的抗體經(jīng)緩沖液交換入包含50raMNaCl、2mMDTPA、pH8.0的0.1M磷酸鹽緩沖液pH8.0內(nèi)并濃縮至5-10mg/ml。通過向抗體添加2-亞氨基石克烷來實(shí)現(xiàn)硫醇化。待添加的2-亞氨基硫烷的量是在初步實(shí)驗(yàn)中確定，并因各種抗體而異。在初步實(shí)驗(yàn)中，增加量的2-亞氨基硫烷的滴定添加至抗體，緊接著在室溫下與抗體孵育1小時，使用SephadexG-25柱將抗體脫鹽進(jìn)入50mMHEPES緩沖液pH6.0，并通過與二石克基二吡啶(DTDP)的反應(yīng)來快速測定導(dǎo)入的疏醇基團(tuán)數(shù)目。硫醇基團(tuán)與DTDP反應(yīng)，導(dǎo)致釋放出硫吡啶，在324認(rèn)對硫吡啶進(jìn)4亍檢測。使用蛋白質(zhì)濃度為0.5-1.Omg/ml的樣本。在280認(rèn)處的吸光度用來準(zhǔn)確測定樣本中的蛋白質(zhì)濃度，然后每份樣本的等分部分(O.9mL)與0.lmLDTDP(乙醇中的5mM備料溶液)在室溫下孵育10分鐘。單獨(dú)緩沖液加DTDP的空白樣本也一起培養(yǎng)。經(jīng)10分鐘后，測量324nm的吸光度，并使用硫吡啶的消光系數(shù)19800M—'來對所存在的硫醇數(shù)目進(jìn)行定量。典型地，每個抗體含三個硫醇基團(tuán)的硫醇化水平是所希望的。例如，使用一種特定抗體，通過添加15倍摩爾過量2-亞胺基硫烷，接著在室溫下孵育1小時可達(dá)成此項(xiàng)目的。因此，將待偶聯(lián)的抗體與2-亞胺基硫烷以希望的摩爾比進(jìn)行孵育，然后脫鹽進(jìn)入偶聯(lián)緩沖液(包含5mM甘氨酸的50mMHEPES緩沖液pH6.0、0.5%聚乙烯吡咯酮(10k)及2mMDTPA)。將硫醇化材料維持在冰上，同時如以上所說明對所引入的硫醇數(shù)目進(jìn)行定量。證實(shí)所引入的硫醇數(shù)目后，以每個硫醇3倍摩爾過量，添加包含活性順丁烯二酰亞胺基團(tuán)的藥物-連接物分子。偶聯(lián)反應(yīng)是在偶聯(lián)緩沖液內(nèi)進(jìn)行，偶聯(lián)緩沖液還含有終濃度為5%DMSO(或一種適合的可替代的溶劑)。通常，將藥物-連接物母液溶解于100%二曱亞砜中。為了添加至抗體，將母液直接添加至硫醇化抗體，該抗體經(jīng)過充分添加DMSO來調(diào)整終濃度至10%;或?qū)⒛敢涸诎K濃度10%的DMSO的偶聯(lián)緩沖液中進(jìn)行預(yù)稀釋，接著添加至等體積的硫醇化抗體。偶聯(lián)反應(yīng)用攪拌在室溫下孵育2小時。孵育后，將反應(yīng)混合物離心并通過0.2微米過濾器進(jìn)行過濾。使用多種方法通過層析法實(shí)現(xiàn)偶聯(lián)物的純化?？墒褂贸叽缗抛鑼游龇ㄔ赟ephacrylS200柱上對偶聯(lián)物進(jìn)行純化，柱子用含5mM甘氨酸、50mMNaCl及0.5%聚乙烯吡咯酮(10k)的50mMHEPES緩沖液pH7.2進(jìn)行預(yù)平衡。以線性流速28cm/h進(jìn)行層析法。收集、匯集并濃縮包含偶聯(lián)物的餾分?？商娲兀赏ㄟ^離子交換層析實(shí)現(xiàn)純化。條件隨抗體而變化，并且在每種情況下需要4皮優(yōu)化。例如，抗體-藥物偶聯(lián)物反應(yīng)混合物應(yīng)用于SP-Sepharose柱，該柱用50mMHEPES、5mM甘氨酸、0.5%聚乙烯吡咯酮(10k)、pH5.5進(jìn)行預(yù)平衡。使用平衡緩沖液(pH5.5)中0-1MNaCl的一個梯度將抗體偶聯(lián)物洗脫。將包含偶聯(lián)物的相關(guān)餾分匯集并對配方緩沖液進(jìn)行透析(使用包含5mM甘氨酸、100mMNaCl及0.5%聚乙烯吡咯酮(10k)的50mMHEPES緩沖液pH7.2)。實(shí)例12:活體內(nèi)研究使用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室程序在體外對786-0(ATCC登記號CRL-1932)細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增。在每只6-8周齡的雄性CB17.SCID小鼠(Taconic，Hudson,NY)右側(cè)經(jīng)皮下植入O.2ml含250萬786-0的PBS/基質(zhì)膠(Matrigel)(1:1)。植入后每周兩次對小鼠稱重，并^f吏用電子測徑器來測量腫瘤的三維。腫瘤體積計(jì)算為高x寬x長。將具有平均為200mm3腫瘤的小鼠隨機(jī)分配入各個處理組。第O天用PBS載體、毒素-偶聯(lián)的同種型對照抗體、或毒素-偶聯(lián)的抗-CD70HuMAb2H5對小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)給藥。每個組包括8只小鼠。研究以下毒素<formula>formulaseeoriginaldocumentpage128</formula>化合物G表l是基于毒素(化合物A-G)的微摩爾數(shù)各給藥組的概述。表l.研究概述<table>tableseeoriginaldocumentpage129</column></row><table>圖l、圖2、圖5以及圖6顯示腫瘤體積平均數(shù)相對于給藥后天數(shù)，圖3、圖4、圖7以及圖8顯示肺瘤體積中位數(shù)(0.03nmol-圖l、圖3、圖5以及圖7;0.005jimol-圖2、圖4、圖6以及圖8)相對于給藥后天數(shù)。圖9顯示0.03^nol以及0.0005^imol兩種劑量的體重變化百分比中位數(shù)相對于給藥后天數(shù)。基于O.03inmol劑量實(shí)驗(yàn)，療效顯然是以如下順序遞減化合物E〉化合物F〉化合物A〉化合物C,化合物D〉化合物B〉化合物G。實(shí)例13:組織蛋白酶B介導(dǎo)的單個氨基酸連接物的切割一組具單個氨基酸的化合物，彼此在氨基酸組成方面不同，但其他方面具有類似結(jié)構(gòu)，測定該組化合物的組織蛋白酶B活性。測試以下化合物化合物A、B、C、D、E、以及F。組織蛋白酶B介導(dǎo)的產(chǎn)物的出現(xiàn)是通過應(yīng)用RP-HPLC進(jìn)行監(jiān)測，藥物產(chǎn)物以其在340nm的吸光度來定量?；衔锱c組織蛋白酶B—起孵育不同的時間長度，而其近似的半衰期(U是報(bào)告于以下表2。所測試的化合物中，只有化合物A以及化合物D被組織蛋白酶B切割。表2:組織蛋白酶B介導(dǎo)帶有單個氨基酸可切割連接物的化合物的<table>tableseeoriginaldocumentpage130</column></row><table>組織蛋白酶B的酶測定法牛脾臟的組織蛋白酶B(Sigma,產(chǎn)品代碼C-6286)的儲備溶液是通過將凍干固體(6mg，56%蛋白)溶解于25mM乙酸鈉/1mMEDTApH5.O緩沖液(10mL)中進(jìn)行制備。通過將儲備溶液50(jLil)與30mMDTT/15mMEDTA所組成的激活緩沖液(100pl)混合，接著在室溫下孵育15分鐘來完成酶的激活。激活的組織蛋白酶B在使用前，用25mM乙酸鈉/1mMEDTApH5.0的溶液進(jìn)行1:l稀釋。為了測定藥物的釋放，將經(jīng)半胱氨酸修飾的化合物(4pl2.5mM的DMSO中的溶液)以及激活的組織蛋白酶B(10pl，3.6U/mL)添加至25mM乙酸鈉/1mMEDTApH5.O緩沖液(86pl)。將樣品在37X:孵育經(jīng)歷適當(dāng)時間點(diǎn)，并且使用甲醇(100pi)中止。將化合物樣品(40pi)應(yīng)用于Waters2795HPLC系統(tǒng)，該系統(tǒng)裝酉己有反相柱(WatersNova—pakC18,3.9x150mm柱，產(chǎn)品4戈碼WAT086344)。樣品的層析是使用雙移動相系統(tǒng)完成，該系統(tǒng)包含水/0.1%TFA(A緩沖液)以及乙腈/O.1°/。TFA(B緩沖液)，在l.0mL/分鐘經(jīng)2O分鐘時間以10-100%B緩沖液進(jìn)行梯度洗脫?；衔锸峭ㄟ^它們在340nm的吸光度(Aw。)進(jìn)行檢測。本說明書中所提及或所指的各個專利申請、專利、公開文本及其他公開的文件均以全文通過引用結(jié)合在此，就像通過引用將單獨(dú)的每一項(xiàng)專利申請、專利、公開文本及其他公開的文件都專門結(jié)合在此一樣。雖然已經(jīng)對本發(fā)明參照其特定的實(shí)施方案進(jìn)行了說明，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，無須背離本發(fā)明的精髓及范圍以及隨附的權(quán)利要求即可進(jìn)行多項(xiàng)改變并可進(jìn)行等效物代換。此外，可做多項(xiàng)變更來調(diào)整特殊的情況、材料、物質(zhì)組成、方法、方法步驟或步驟，使之適合本發(fā)明的目的、精髓及范圍。全部此類變更意在涵蓋于在此所附的權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種具有以下化學(xué)式的化合物其中L1為取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜烷基；m是一個整數(shù)0、1、2、3、4、5、或6；AA1是選自下組的一種氨基酸，該組的構(gòu)成為天然的氨基酸類以及非天然的α氨基酸類；L2為取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、未取代的雜環(huán)烷基、取代的雜環(huán)烷基、取代或未取代的芳基、或取代或未取代的雜芳基；L3為取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜環(huán)烷基；o是0或1；L4是一個連接物成員；p是0或1；X4是選自下組的一個成員，該組的構(gòu)成為受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、不受保護(hù)的反應(yīng)性官能團(tuán)、可檢測的標(biāo)記、以及靶向劑；并且D包括一種結(jié)構(gòu)其中，該環(huán)狀體系A(chǔ)是取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜環(huán)烷基；E和G是獨(dú)立地選自以下各項(xiàng)的成員H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、一個雜原子、以及一個單鍵，或者E和G相接合以形成一個環(huán)狀體系，該環(huán)狀體系選自取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、以及取代或未取代的雜環(huán)烷基；X是選自O(shè)、S以及NR23中的一員；R23是H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、或酰基；R3是OR11，其中R11是H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的雜烷基、未取代的雜烷基、二磷酸酯、三磷酸酯、?；?、C(O)R12R13、C(O)OR12、C(O)NR12R13、P(O)(OR12)2、C(O)CHR12R13、SR12、或SiR12R13R14，其中R12、R13以及R14是獨(dú)立地選自以下各項(xiàng)的成員H、取代和未取代的烷基、取代和未取代的雜烷基、以及取代和未取代的芳基中，其中R12和R13與它們所附聯(lián)的氮原子或碳原子一起可任選地相接合以形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；R4、R4’、R5以及R5’是獨(dú)立地選自下組的成員，該組的構(gòu)成為H、取代的烷基、未取代的烷基、取代的芳基、未取代的芳基、取代的雜芳基、未取代的雜芳基、取代的雜環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)烷基、鹵素、NO2、SO3、SO2R15、NR15R16、NR16C(O)R15、OC(O)NR15R16、OC(O)OR15、C(O)R15、SR15、OR15、CR15＝NR16、以及O(CH2)nN(CH3)2，或者R4、R4’、R5以及R5’中的任何相鄰的一對與它們所附聯(lián)的碳原子一起相接合以形成一個具有4至6元的、取代或未取代的環(huán)烷基或雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；其中n是1至20的整數(shù)；R15和R16獨(dú)立地選自H、取代和未取代的烷基、取代和未取代的雜烷基、取代和未取代的芳基、取代和未取代的雜芳基、取代和未取代的雜環(huán)烷基、以及取代和未取代的肽基，其中R15和R16與它們所附聯(lián)的氮原子一起可任選地相接合以形成一個具有4至6元的、可任選地包含兩個或更多個雜原子的取代或未取代的雜環(huán)烷基環(huán)狀體系；R6是一個單鍵，該單鍵存在或不存在，并且當(dāng)其存在時，R6與R7相接合以形成一個環(huán)丙基的環(huán)；并且R7是所述環(huán)丙基的環(huán)中與R6相接合的CH2-X1或-CH2-，其中X1為一個離去基團(tuán)，其中R4、R4’、R5、R5’、R11、R12、R13、R15、或R16中的至少一個將D連接至化合物的剩余部分上；或其藥學(xué)上可接受的一種鹽。2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中D具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中Z是選自0、S以及NR"中的一員；其中R"是H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、或?；?；!^是H、取代或未取代的低級烷基、C(0)R8或C02R8，其中1(8為取代的烷基、未取代的烷基、NR9r、NR9NHir、或0R9其中^以及IT是獨(dú)立地選自以下各項(xiàng)的成員H、取代和未取代的烷基、以及取代和未取代的雜烷基；并且R2是H、取代的烷基或未取代的低級烷基。3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中D具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中Z是選自0、S以及NR"中的一員其中R"是H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、或?；?；r是H、取代或未取代的低級烷基、C(0)RS或C02R8，其中R8是選自NRY。以及0R9中的一員；其中R'和R"是獨(dú)立地選自以下各項(xiàng)的成員H、取代和未取代的烷基、以及取代和未取代的雜烷基；R1'是H、取代或未取代的低級烷基、或C(O)R8，其中R8是選自NRY°以及OR'中的一員；其中R'和R"是獨(dú)立地選自以下各項(xiàng)的成員H、取代和未取代的烷基、以及取代和未取代的雜烷基；W是H、取代或未取代的低級烷基、未取代的雜烷基、氰基或烷氧基；并且R2'是H、取代或未取代的低級烷基、或未取代的雜烷基。4.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中D為其中Z是選自0、S、以及NR"中的一員；其中R"是H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、或酰基；R"是選自氫、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、鹵素、N02、NR15R16、NR"C(0)R15、0C(0)NR"R6、0C(0)0R15、C(0)R15、SR15、0R15、CR15=NR16、或0(CH2)nN(CH3)2,其中n為從1至20的整數(shù)，并且R5、R5，、R11、R12、R13、R15、R"、或R"中的至少一個將D連接至該化合物的其余部分上。5.如權(quán)利要求4所述的化合物，其中D為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>R'是H、取代或未取代的低級烷基、C(0)R8、或C02R8，其中R8是選自NRY。以及0R9中的一員；其中W以及R"是獨(dú)立地選自以下各項(xiàng)的成員H、取代和未取代的烷基、以及取代和未取代的雜烷基；1^'是11、取代或未取代的低級烷基、或(:(0)118,其中Rs是選自NR9Rlfl以及0R'中的一員，其中^以及IT是獨(dú)立地選自以下各項(xiàng)的成員H、取代和未取代的烷基、以及取代和未取代的雜垸基；W是H、取代或未取代的低級烷基、未取代的雜烷基、氰基或烷氧基；以及R2'是H、取代或未取代的低級烷基、或未取代的雜烷基。6.如權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)所述的化合物，其中AA'是選自下組，該組的構(gòu)成為Ala、Arg、Asn、Asp、Cit、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Uu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、以及Val。7.如權(quán)利要求6所述的化合物，其中AAi是選自下組，該組的構(gòu)成為CU、Glu、Lys、以及Ser。8.如權(quán)利要求1至7中任何一項(xiàng)所述的化合物，其中R4、R4，、R5、R5，、R"或R"中的至少一個將D連接至該化合物的其余部分上。9.如權(quán)利要求1至8中任何一項(xiàng)所述的化合物，其中m不是O,并且L'是自消性連接物。10.如權(quán)利要求1至9中任何一項(xiàng)所述的化合物，其中1/是存在的并且是自消性連接物。11.如權(quán)利要求1至8中任何一項(xiàng)所述的化合物，其中y是存在的并且-L3-NH-是選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中Z是選自0、S以及NR"中的一員；其中R"是H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的雜烷基、或?；?2.如權(quán)利要求11所述的化合物，其中-L3-NH-是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>13.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中該化合物是選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中X〗為Cl或Br。14.如權(quán)利要求13所述的化合物，其中Xi是Cl。15.如權(quán)利要求1至12中任何一項(xiàng)所述的化合物，其中乂4是一種靶向劑。16.如權(quán)利要求15所述的化合物，其中r是一種抗體。17.—種藥學(xué)配制品，包括如權(quán)利要求1至16中任何一項(xiàng)所述的化合物以及一種藥學(xué)上可接受的載體。18.—種殺死細(xì)胞的方法，所述方法包括對所述細(xì)胞給予足以殺死所述細(xì)胞的量的如權(quán)利要求1至16中任何一項(xiàng)所述的化合物。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中該細(xì)胞是一種腫瘤細(xì)胞。20.—種在哺乳動物受試者體內(nèi)延遲或停止腫瘤的生長的方法，該方法包括對所述受試者給予足以延遲或停止該生長的量的如權(quán)利要求l至16中任何一項(xiàng)所述的化合物。全文摘要本發(fā)明提供的藥物-配體偶聯(lián)物是強(qiáng)力的細(xì)胞毒素并且包括在藥物與配體之間的一個連接物，其中該連接物具有一個單一的氨基酸。本發(fā)明還針對含有該藥物-配體偶聯(lián)物的組合物以及使用它們的治療方法。文檔編號C07D403/14GK101616911SQ200880005895公開日2009年12月30日申請日期2008年2月20日優(yōu)先權(quán)日2007年2月21日發(fā)明者L·陳,N·龍伯格,Q·張,S·岡沃,V·古爾拉維斯申請人:梅達(dá)萊克斯公司