本申請為申請?zhí)?01480036509.x(pct申請?zhí)枮閜ct/il2014/050575)、申請日2014年06月26日、發(fā)明名稱“包含聚合物蛋白質(zhì)偶聯(lián)物及環(huán)境響應(yīng)性聚合物的組成物及其應(yīng)用”的分案申請。

在本發(fā)明的一些實施例中，是有關(guān)于環(huán)境響應(yīng)性聚合物的多個組成物，更特別但不排除的，是有關(guān)于包含一聚合物蛋白質(zhì)偶聯(lián)物及一環(huán)境響應(yīng)性聚合物的多個組成物、從其形成多個支架、及其在例如組織工程的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

多個熱反應(yīng)聚合物是能在低溫下產(chǎn)生低粘度的多個水溶液，及在一較高溫度下形成一凝膠，也被稱為「反向熱凝膠作用」的一種性質(zhì)。這些聚合物因此也被稱為多個「反向熱反應(yīng)」聚合物。多個熱反應(yīng)聚合物已經(jīng)廣泛的應(yīng)用在生醫(yī)應(yīng)用中，例如多個可注射及可控制的藥物輸送系統(tǒng)的所述開發(fā)[qiu&park,advdrugdelivrev2001,53:321-339]。此外，多個熱反應(yīng)聚合物已經(jīng)應(yīng)用在原位產(chǎn)生的多個植入物[cohnetal.,biomacromolecules2005,6:1168-1175]或多個藥物[bouchotetal.,annthoracsurg2010,89:1912-1917]的所述開發(fā)。

美國發(fā)明專利申請公開第2011/0052490號公開一種多個組成物的應(yīng)用包含在一內(nèi)窺鏡檢查過程的一純化的熱反應(yīng)聚合物以達成胃腸黏膜的切除。

多個熱反應(yīng)聚合物具有一種聚環(huán)氧乙烷(poly(ethyleneoxide)；peo)-聚氧化丙烯(poly(propyleneoxide)；ppo)-聚環(huán)氧乙烷的三段(tri-block)結(jié)構(gòu)，被稱為泊洛沙姆(poloxamers)，已經(jīng)報導出顯示反向熱凝膠作用。由于通過隨著溫度增加來釋放連接到所述聚氧化丙烯的多個片段的多個水分子所引起的亂度的增加，所述吸熱溶膠-凝膠(sol-gel)轉(zhuǎn)變發(fā)生[alexandridis,colloidsurfacea1995,96:1-46]。

普朗尼克(pluronic，商標名)f127泊洛沙姆是一種公知的合成三段共聚物(peo99-ppo67-peo99)[nagarajanandganesh,jcolloidinterfacesci1996,184:489-499；sharmaandbhatia,intjpharm2004,278:361-377；cohnetal.,biomaterials2003,24:3707-3714]，其在多個水溶液中顯示在一臨界溫度之上的一反向熱凝膠作用(rtg)的性質(zhì)。普朗尼克(商標名)f127泊洛沙姆被所述美國食品藥品管理局(fda)批準應(yīng)用在人體中及已經(jīng)被調(diào)查用在多個生物醫(yī)學應(yīng)用，例如用于各種施用途徑的藥物載體、人造皮膚、及作為治療手術(shù)后黏合的一屏障[escobar-chavez,jpharmpharmaceutsci2006,9:339-358]。

另外顯示反向熱凝膠作用的多個熱反應(yīng)聚合物包含市售的聚(n-異丙基丙烯酰胺)(poly(n-isopropylacrylamide)；pnipaam)和聚(n,n-二乙基丙烯酰胺)(poly(n,n-diethylacrylamide)；pdeaam)。

國際專利申請第pct/il2004/001136號(公開于wo2005/061018)及美國發(fā)明專利第7,842,667號揭示多個聚合物蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，例如聚乙二醇(polyethyleneglycol；peg)-血纖維蛋白原的多個偶聯(lián)物，及通過交聯(lián)所述多個偶聯(lián)物產(chǎn)生的多個生物可降解支架，例如通過紫外光(uvlight)。所述支架可以應(yīng)用在治療需要組織再生的多個病癥。

當所述生物合成水凝膠網(wǎng)絡(luò)的所述多個結(jié)構(gòu)特性是通過所述合成成分來控制時，聚乙二醇-血纖維蛋白原的多個水凝膠模仿所述細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix；ecm)，及包含在氨基酸序列中必要的多個細胞信號域，包含附著力和蛋白酶降解基質(zhì)[dikovskyetal.,biomaterials2006,27:1496-1506]。

國際專利申請第pct/il2010/001072號(公開于wo2011/073991)揭示多個聚合物蛋白質(zhì)偶聯(lián)物包含連接至少二聚合官能基的一蛋白質(zhì)，其中之至少一個顯示反向熱凝膠作用。所述多個偶聯(lián)物適用于通過非共價及/或共價交聯(lián)來進行交聯(lián)。通過交聯(lián)所述多個偶聯(lián)物形成的所述多個偶聯(lián)物及多個物質(zhì)的組合可以用在細胞成長、組織形成及治療特征為組織損傷或損失的多個疾病。

另外的技術(shù)包含cohn等人[polymadvtech2007；18:731–736]。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種藥物的、化妝品的或藥妝的組成物，包含：

(a)一聚合物與多肽的偶聯(lián)物，包含一多肽，具有附加于其上的至少二個聚合官能基，其中所述多個聚合官能基中的至少一個還包含至少一可聚合基團，其中所述偶聯(lián)物的多個分子未相互共價連結(jié)；

(b)一泊洛沙姆；

(c)通過至少一可聚合基團取代的一泊洛沙姆；及

(d)一藥物的、化妝品的或藥妝的可接受載體，

其中所述組成物顯示一反向熱凝膠作用。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種套裝產(chǎn)品，包含：本文描述的一種組成物。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種物質(zhì)的組合，包含：本文描述的一種組成物的一交聯(lián)形式，所述交聯(lián)形式包含當聚合所述可聚合基團時，所述偶聯(lián)物及通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆相互共價交聯(lián)的多個分子。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種用以制造本文描述的物質(zhì)的組合的方法，所述方法包含：使本文描述的一組成物遭遇到通過聚合所述可聚合基團來影響共價交聯(lián)的多個條件，從而產(chǎn)生所述物質(zhì)的組合。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種本文描述的一組成物或物質(zhì)的組合在用于制造修復(fù)組織損傷的一藥品的用途。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種本文描述的一組成物或物質(zhì)的組合在用于制造治療具有以組織損傷或損失為特征的一疾病的一患者的用途。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種在生物體內(nèi)誘導形成一組織的方法，所述方法包含把本文描述的一物質(zhì)的組合植入一患者內(nèi)，從而誘導所述組織的所述形成。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種在生物體內(nèi)誘導形成一組織的方法，所述方法包含施加本文描述的一組成物予一患者，及使所述組成物遭遇到通過聚合所述可聚合基團來影響共價交聯(lián)，從而誘導所述組織的所述形成。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種治療具有以組織損傷或損失為特征的一疾病的一患者的方法，所述方法包含把本文描述的一物質(zhì)的組合植入到一患者內(nèi)，從而誘導所述組織的所述形成，從而治療以組織損傷或損失為特征的所述疾病。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種治療具有以組織損傷或損失為特征的一疾病的一患者的方法，所述方法包含施加本文描述的一組成物予所述患者，及使所述組成物遭遇到通過聚合所述可聚合基團來影響共價交聯(lián)的多個條件，從而誘導所述組織的形成，從而治療以組織損傷或損失為特征的所述疾病。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種反向熱凝膠作用的組成物，所述組成物的特征是：

顯示一剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是100帕(pa)，

及一剪力儲存模數(shù)在4℃的溫度下是小于100帕；及

在一生理介質(zhì)內(nèi)可以固化；

應(yīng)用在修復(fù)受損的軟骨。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種反向熱凝膠作用的組成物，所述組成物的特征是：

顯示一剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是100帕，及

一剪力儲存模數(shù)在4℃的溫度下是小于100帕；及

在一生理介質(zhì)內(nèi)可以固化；

應(yīng)用來治療具有以軟骨的損傷或損失為特征的一疾病的一患者。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種將一反向熱凝膠作用的組成物應(yīng)用在制造修復(fù)受損的軟骨的一藥品的用途，所述組成物的特征是：

顯示一剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是100帕，及

一剪力儲存模數(shù)在4℃的溫度下是小于100帕；及

在一生理介質(zhì)內(nèi)可以固化。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種將一反向熱凝膠作用的組成物應(yīng)用在治療具有以軟骨的損傷或損失為特征的一疾病的一患者的一藥品的用途，所述組成物的特征是：

顯示一剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是100帕，及

一剪力儲存模數(shù)在4℃的溫度下是小于100帕；及

在一生理介質(zhì)內(nèi)可以固化。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種在生物體內(nèi)誘導軟骨形成的方法，所述方法包含：施加一反向熱凝膠作用的組成物，所述組成物的特征是：

顯示一剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是100帕，及

一剪力儲存模數(shù)在4℃的溫度下是小于100帕；及

在一生理介質(zhì)內(nèi)可以固化；

所述方法還包含在生物體內(nèi)使所述組成物遭遇到影響固化所述組成物的

多個條件，從而誘導軟骨的形成。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例的一種樣態(tài)，有提供一種治療具有以軟骨的損傷或損失為特征的一疾病的一患者的方法，所述方法包含：施加一反向熱凝膠作用的組成物，所述組成物的特征是：

顯示一剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是100帕，及

一剪力儲存模數(shù)在4℃的溫度下是小于100帕；及

在一生理介質(zhì)內(nèi)可以固化；

所述方法還包含在生物體內(nèi)使所述組成物遭遇到影響固化所述組成物的

多個條件，從而誘導軟骨的形成。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組成物的一剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是100帕，及在4℃的溫度下是小于100帕。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是1000帕。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下不多于20000帕。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述剪力儲存模數(shù)在4℃的溫度下是小于10帕。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組成物在一含水環(huán)境中的一溶解速率是每小時小于50毫克/平方厘米。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述偶聯(lián)物的一濃度在從2至15毫克/毫升的一范圍內(nèi)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述泊洛沙姆的一濃度在從13至25重量百分比的一范圍內(nèi)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，通過至少一聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一濃度在從7.8至15重量百分比的一范圍內(nèi)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述泊洛沙姆及通過至少一聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一總濃度至少是21重量百分比。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述偶聯(lián)物具有通式：

x(-y-zm)n

其中：

x是所述多肽；

y是所述聚合官能基；

z是所述可聚合基團；

n是大于1的一整數(shù)；及

m是1或大于1的一整數(shù)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述多肽包含一蛋白質(zhì)或其一片段。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述蛋白質(zhì)選自于一細胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)、一細胞信號蛋白質(zhì)、一細胞粘附蛋白質(zhì)、一生長因子、一蛋白質(zhì)a(proteina)、一蛋白酶和蛋白酶受質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述蛋白質(zhì)是一細胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述細胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)選自于由血纖維蛋白原、膠原蛋白、纖連蛋白、彈性蛋白、原纖蛋白、纖蛋白、波形蛋白、層粘連蛋白和明膠所組成的所述族群。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述多肽包含一血纖維蛋白原或其一片段。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述多肽是一變性蛋白質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述多肽是一變性血纖維蛋白原。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述多個聚合官能基的每一個包含一合成聚合物。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述合成聚合物選自于由一聚乙二醇及一泊洛沙姆(聚(乙二醇-丙二醇)共聚物)組成的族群。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述可聚合基團是可通過自由基聚合的方式來聚合。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述可聚合基團選自于由丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺和乙烯基砜所組成的所述族群。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述多肽是變性血纖維蛋白原，及所述多個聚合官能基中的每一個包含聚乙二醇。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述多個聚乙二醇官能基中的每一個包含一聚乙二醇二丙烯酸酯官能基，其中所述聚乙二醇二丙烯酸酯官能基的一丙烯酸酯基團連接到所述血纖維蛋白原的一個半胱氨酸殘基。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述多肽是變性血纖維蛋白原，及所述多個聚合官能基中的每一個包含f127泊洛沙姆。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述多個聚合官能基中的每一個包含一f127泊洛沙姆二丙烯酸酯官能基，其中所述f127泊洛沙姆二丙烯酸酯官能基的一丙烯酸酯基團連接到所述血纖維蛋白原的一個半胱氨酸殘基。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組成物還包含一自由基引發(fā)劑。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述反向熱凝膠作用的特征是在從10℃至20℃的一范圍內(nèi)的一相變溫度。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組成物的所述反向熱凝膠作用使所述組成物的一剪力儲存模數(shù)增加至少10倍。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組成物在17℃的一溫度下的一剪力儲存模數(shù)在從9000帕到15000帕的一范圍內(nèi)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組成物被鑒定應(yīng)用在產(chǎn)生一水凝膠支架。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述套裝產(chǎn)品還包含用在修復(fù)組織損傷的多個指示。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述套裝產(chǎn)品還包含用在治療具有以組織損傷或損失為特征的一疾病的一患者的多個指示。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述物質(zhì)的組合是一支架。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述物質(zhì)的組合是一水凝膠。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，在17℃的一溫度下，所述物質(zhì)的組合的一剪力儲存模數(shù)至少是30000帕。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述物質(zhì)的組合是生物可降解的。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述物質(zhì)的組合被鑒定應(yīng)用在誘導形成一組織及/或修復(fù)組織損傷。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，在生物體內(nèi)影響所述共價交聯(lián)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，上述多個條件包含射線照射。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，本文描述的所述組成物及/或物質(zhì)的組合被鑒定應(yīng)用在修復(fù)組織損傷。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，本文描述的所述組成物及/或物質(zhì)的組合被鑒定應(yīng)用在治療具有以組織損傷或損失為特征的一疾病的一患者。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組織包含軟骨。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組成物應(yīng)用在關(guān)節(jié)鏡手術(shù)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述藥品應(yīng)用在關(guān)節(jié)鏡手術(shù)。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述方法通過關(guān)節(jié)鏡手術(shù)來影響。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組成物可通過在一生理介質(zhì)內(nèi)聚合來固化。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，在一生理介質(zhì)中的所述聚合是通過射線放射來開始。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組成物顯示一反向熱凝膠作用且特征是在從10℃至20℃的一范圍內(nèi)的一相變溫度。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，所述組成物顯示一反向熱凝膠作用且特征是使所述組成物的一剪力儲存模數(shù)增加至少10倍。

根據(jù)本發(fā)明一些實施例，當在所述生理介質(zhì)中固化時，所述組成物形成一水凝膠支架。

除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和/或科學術(shù)語以本領(lǐng)域具有一般技術(shù)人員對本發(fā)明所屬的理解具有相同的含義。盡管類似或等同于本文描述的方法與材料可以在本發(fā)明的實施例的實踐或測試中使用，示例性方法和/或材料描述如下。在沖突的情況下，以包括定義的專利說明書進行解釋。此外，所述多個材料、方法和實施例僅是說明性的，并不意在必然的限制。

附圖說明

本發(fā)明的一些實施例僅通過舉例的方式并參照所附圖式在此描述?，F(xiàn)在具體參照附圖詳細的說，要強調(diào)的是所繪示的細節(jié)是通過舉例的方式和為了本發(fā)明的多個實施例的說明性討論的目的。在這方面上，結(jié)合所述多個附圖的描述對于本領(lǐng)域技術(shù)人員如何本發(fā)明實施例可以實施變得明顯。

在所述附圖中：

圖1繪示對于包含7.3毫克/毫升聚乙二醇-血纖維蛋白原、15.4％泊洛沙姆及8.1％f127泊洛沙姆-二丙烯酸酯(深灰色)的一示例性的組成物及包含7.4毫克/毫升聚乙二醇-血纖維蛋白原、10％f127泊洛沙姆-二丙烯酸酯(亮灰色)的作為一溫度函數(shù)的所述剪力儲存模數(shù)(g’)的一圖式；

圖2a-2b繪示一示例性的組成物顯示在4℃的流動性(圖2a)及在室溫下的剛性的圖像；

圖3繪示一示例性組成物在室溫通過注射器注射的一圖像；

圖4繪示一示例性組成物在室溫下附著到一垂直表面的一圖像；

圖5a-5d繪示一示例性組成物(灰色底層)以水染料溶液培育之前(圖5a)、立即之后(圖5b)、一小時后(圖5c)及二小時后(圖d)的圖像；

圖6顯示繪示為了可視化(灰色底層)以水染料溶液培育，把靛藍胭脂紅加到一示例性組成物內(nèi)的一圖像；

圖7a-7d繪示注射一示例性組成物到一人工病變內(nèi)(圖7a)、所述組成物充滿所述人工病變(圖7b)、紫外光射線照射以達成交聯(lián)所述組成物(圖7c)、及通過交聯(lián)所述組成物形成一水凝膠(圖7d)的圖像；

圖8a-8d繪示在21℃下(圖8a)、在以4毫瓦/平方公分的紫外光射線照射達5分鐘移除所述模具(圖8b)、及通過水下交聯(lián)所述組成物形成所述水凝膠(圖8b-8d)的水下注射一示例性組成物到一圓筒形模具內(nèi)的圖像；

圖9繪示對于具有0、4、7或10毫克/毫升聚乙二醇-血纖維蛋白原的示例性組成物的作為一溫度函數(shù)的所述剪力儲存模數(shù)(g’)的一圖式；

圖10繪示當交聯(lián)具有0、4、7或10毫克/毫升聚乙二醇-血纖維蛋白原的示例性組成物時，剪力儲存模數(shù)(g’)的所述改變的一圖式；

圖11繪示對于具有7.3毫克/毫升聚乙二醇-血纖維蛋白原或f127-血纖維蛋白原、15.4％f127泊洛沙姆、及8.1％f127泊洛沙姆-二丙烯酸酯的多個示例性組成物的作為一溫度函數(shù)的所述剪力儲存模數(shù)(g’)的一圖式；

圖12繪示當交聯(lián)具有7.3毫克/毫升聚乙二醇-血纖維蛋白原或f127-血纖維蛋白原、15.4％f127泊洛沙姆、及8.1％f127泊洛沙姆-二丙烯酸酯的多個示例性組成物時，剪力儲存模數(shù)(g’)的所述改變的一圖式；

圖13繪示在50℃下一示例性水凝膠培育在磷酸鹽緩沖鹽水(酸堿值7.4)內(nèi)12或34天后的干重的所述變化的一條狀圖；及

圖14繪示一示例性水凝膠在37℃下的磷酸鹽緩沖鹽水內(nèi)24小時后，有無0.1％的胰蛋白酶時的血纖維蛋白原濃度的所述變化的一條狀圖。

具體實施方式

在本發(fā)明的一些實施例中，是有關(guān)于環(huán)境響應(yīng)性聚合物的多個組成物，更特別但不排除的，是有關(guān)于包含一聚合物蛋白質(zhì)偶聯(lián)物及一環(huán)境響應(yīng)性聚合物的多個組成物、從其形成多個支架、及其在例如組織工程的應(yīng)用。

在詳細解釋本發(fā)明的至少一實施例之前，要知道的是本發(fā)明不必限于在其應(yīng)用中所闡述的以下描述或例舉的實施例中的細節(jié)。本發(fā)明能有其它實施例或能以各種方式被實踐或進行。

本案發(fā)明人已經(jīng)設(shè)定及成功制備及實踐一組成物，其具有顯示高度適用于從其形成的一支架的多個性質(zhì)。當設(shè)計這種一組成物，本案發(fā)明人已考慮到這種組合物應(yīng)表現(xiàn)出以下的一般多個性質(zhì)：在低溫下相對高流動性、在室溫下相對高黏性及在一生理介質(zhì)內(nèi)欲交聯(lián)的能力，例如在生物體內(nèi)。本案發(fā)明人還已考慮在它的結(jié)構(gòu)內(nèi)的一多肽(例如蛋白質(zhì))的所述有利結(jié)合。本案發(fā)明人已經(jīng)考慮當所得的一組成物在室溫下足夠粘稠以保持在期望的位置而不溢出，當具有足夠的流體以便可注射(例如，通過注射器)，這樣的性質(zhì)能夠簡單制備及在低溫下處理一自由流動的液體(例如當冷藏時)。一旦發(fā)生，所述組成物能夠之后交聯(lián)以形成一想要的材料(例如一支架)，其將包含提供優(yōu)良生物信號性質(zhì)及/或生物可降解的一多肽。

本案發(fā)明人已經(jīng)設(shè)想顯示反向熱凝膠作用的多個聚合物，例如泊洛沙姆，可有用的達成在各種溫度獲得所想要的黏度。但是應(yīng)當理解的是，通過本案發(fā)明人設(shè)計及實現(xiàn)的所述組成物內(nèi)，這樣的聚合物的所述反向熱凝膠作用在注射之前影響，而不是在原位影響。

繼費力的實驗后，本案發(fā)明人已發(fā)明一種適合的組成物，其組合至少下面的多個成分：一聚合物多肽偶聯(lián)物，包含促進交聯(lián)的一可聚合基團；一泊洛沙姆，其提供由于多個反向熱凝膠作用性質(zhì)的在室溫下的高黏性；及通過至少一可聚合基團取代的一泊洛沙姆，其還皆促進交聯(lián)及增加在室溫下的黏度。

如在所述例示部分下面，這樣的組成物被證明顯示出所需的流變性質(zhì)和藥理性能。

因此，根據(jù)本發(fā)明的多個實施例的一樣態(tài)，有提供一反向熱凝膠作用組成物的特征為：

顯示一剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是100帕，及一剪力儲存模數(shù)在4℃的溫度下是小于100帕；及

在一生理介質(zhì)內(nèi)可以固化。

如本文所使用的，所述用語「生理介質(zhì)」是指水或一水溶液，特征為范圍在5到9之間的一酸堿值，及范圍在大致20℃到37℃的一溫度下。在一些實施例中，所述生理介質(zhì)是在大致20℃的一溫度下的磷酸鹽緩沖鹽水(酸堿值7.4)溶液。

如本文所使用的，所述用語「可以固化」是指對應(yīng)于一化學的及/或物理的刺激物(例如照明)經(jīng)歷固化的一能力。當所述用語「可以固化」有關(guān)于被給定的條件(例如在一生理介質(zhì)內(nèi))，影響固化的所述刺激物必須與所給定的條件兼容(例如，不包含不相容所述多個條件的所述定義的一酸堿值或溫度)，及在所述多個條件下影響固化。

在此，所述多個用語「正在固化」及「固化」及其衍生詞是指通過交聯(lián)的形成來使一物質(zhì)硬化，以響應(yīng)一化學及/或物理的刺激(例如照明)。在一些實施例中，一物質(zhì)的7所述硬化導致所述物質(zhì)的一剪力儲存模數(shù)在17℃的一溫度下具有30000帕。

預(yù)計從本申請成熟的一專利的所述壽命的期間，顯示反向熱凝膠作用的許多相關(guān)的聚合物將被開發(fā)，及所述片語的所述范圍「反向熱凝膠作用組成物」意欲包含基于演譯所有這種新科技的多個組成物。

本文描述的一組成物可以被認為是環(huán)境響應(yīng)性組成物，因為它顯示在它自身多個性質(zhì)(例如多個流變學性質(zhì)、固化性)的改變，其響應(yīng)于多個環(huán)境條件(例如溫度、照明等)。

本文遍布所述揭示的多個組成物是指可互換的「多個熱反應(yīng)組成物」、「多個反向熱凝膠作用組成物」及「多個環(huán)境響應(yīng)性組成物」。

根據(jù)本發(fā)明多個實施例的一樣態(tài)，有提供一種藥物的、化妝品的或藥妝的組成物，包含：

一聚合物與多肽的偶聯(lián)物，包含一多肽，具有附加于其上的至少二個聚合官能基，其中所述多個聚合官能基中的至少一個還包含至少一可聚合基團，其中所述偶聯(lián)物的多個分子未相互共價連結(jié)；

一泊洛沙姆；

通過至少一可聚合基團取代的一泊洛沙姆(為了簡短的目的，本文也稱之為一聚合泊洛沙姆；及

一藥物的、化妝品的或藥妝的可接受載體，

其中所述組成物顯示一反向熱凝膠作用。

如這里所列舉，這樣的組成物易受于通過在所述組成物內(nèi)聚合多個可聚合基團以使多個偶聯(lián)物的分子(其未互相共價連接)變成共價連接的影響而固化。

這樣的組成物可以被認為是如本文定義的一環(huán)境響應(yīng)性組成物。

本文中所述用語「泊洛沙姆」是指一種聚環(huán)氧乙烷(poly(ethyleneoxide)；peo)-聚氧化丙烯(poly(propyleneoxide)；ppo)-聚環(huán)氧乙烷的嵌段聚合物，其具有一聚環(huán)氧乙烷-聚氧化丙烯-聚環(huán)氧乙烷結(jié)構(gòu)。合適的泊洛沙姆是市售的，例如，多個普朗尼克(pluronic，商標名)聚合物。一「聚環(huán)氧乙烷」嵌段是一官能基，其中多個環(huán)氧乙烷殘基包含至少90％的所述官能基的所述多個原子(除了多個氫原子)，及一聚氧化丙烯嵌段是一官能基，其中多個氧化丙烯殘基包含至少90％的所述官能基的所述多個原子(除了多個氫原子)。

本文中，無論何處它未被指出是通過至少一可聚合基團取代的一泊洛沙姆，應(yīng)當理解的是通過至少一可聚合基團取代的一泊洛沙姆不包含所述用語「泊洛沙姆」。

如本文中及本領(lǐng)域中所使用，所述片語「反向熱凝膠作用」描述當增加溫度時通過一物質(zhì)(例如，如本文描述的一組成物)增加黏度的一性質(zhì)。所述黏度增加可以是，例如從液態(tài)轉(zhuǎn)化成半固態(tài)(例如凝膠)、從液態(tài)轉(zhuǎn)換為更粘稠的液體狀態(tài)、或從半固態(tài)轉(zhuǎn)換到更堅硬的半固體狀態(tài)。在本文中，所有這樣的轉(zhuǎn)換通過所述用語「凝膠化」來包含。影響凝膠化的所述溫度的增加可以是在任何二溫度之間。選擇的，影響所述凝膠化是在0℃到55℃的所述范圍之內(nèi)的一溫度。

為了簡短的目的，所述用語「熱反應(yīng)」在本文是指顯示反向熱凝膠作用的所述性質(zhì)(對于一組成物及一物質(zhì)均是)。

如本文中及本領(lǐng)域中所使用，一「剪切模量」被定義成剪切壓力與所述剪切應(yīng)變的所述比例。所述剪切模量可以是一復(fù)合變量(complexvariable)，在這情況下所述「剪力儲存模數(shù)」(被指稱為g’)是所述實部分量，及所述「剪切損耗模數(shù)」(被指稱為g”)是所述虛部分量。在黏彈性固體內(nèi)的所述儲存模數(shù)及損耗模數(shù)測量所述儲存能代表所述彈性部分，及所述作為熱量耗散的能量代表所述黏性部分。

在一些實施例中，所述組成物的所述反向熱凝膠作用是所述組成物顯示一剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍內(nèi)至少是100帕(例如在前述范圍內(nèi)的所有溫度下)，及示一剪力儲存模數(shù)在4℃的溫度下是小于100帕。

根據(jù)本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例，所述剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是1000帕。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是2000帕。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是5000帕。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下至少是10000帕。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下大致是12000帕。

在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下不多于20000帕。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在從17℃到21℃的溫度范圍下不多于15000帕。

根據(jù)本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例，所述剪力儲存模數(shù)在17℃的溫度下是在從9000帕到15000帕的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在17℃的溫度下是在從10000帕到13000帕的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在17℃的溫度下是大致12000帕。

在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在4℃的一溫度下是小于10帕。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在4℃的一溫度下是小于5帕。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在4℃的一溫度下是小于2帕。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在4℃的一溫度下是小于1帕。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在4℃的一溫度下是小于0.5帕。在一些實施例中，所述剪力儲存模數(shù)在4℃的一溫度下是小于0.2帕。

多個低粘度液體在多個組合物的所述制造階段是特別有利的，如本文中所描述，因為它們?nèi)菀自S可多個成分混合，以及純化和消毒步驟，例如過濾。

不受限任何特定理論，相信在適度低溫下具有一低黏度狀態(tài)的多個組成物的優(yōu)點在它們只需要一適當程度的冷卻(例如從而節(jié)省能源)，以為了受益于低粘度狀態(tài)的上述優(yōu)點。

在本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例，所述反向熱凝膠作用的特征為在從10℃至20℃的一范圍內(nèi)的一相變溫度(其中所述組成物是在溫度高于所述相變溫度的一個更粘稠狀態(tài))。在一些實施例中，所述反向熱凝膠作用的特征為在從13℃至19℃的一范圍內(nèi)的一相變溫度。在一些實施例中，所述反向熱凝膠作用的特征為在從15℃至18℃的一范圍內(nèi)的一相變溫度。

利用本領(lǐng)域已知的多個步驟，通過辨別所述組成物遭遇在多個性質(zhì)上的一突然改變的一溫度下，例如剪力儲存模數(shù)的一突然改變及/或以利用熱量測定判斷的一相變化，所述相變溫度可以被判斷。

在本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例中，所述組成物的所述反向熱轉(zhuǎn)變使所述組成物的一剪力儲存模數(shù)增加至少10倍。在本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例中，所述組成物的所述反向熱轉(zhuǎn)變使所述組成物的一剪力儲存模數(shù)增加至少30倍。在本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例中，所述組成物的所述反向熱轉(zhuǎn)變使所述組成物的一剪力儲存模數(shù)增加至少100倍。在本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例中，所述組成物的所述反向熱轉(zhuǎn)變使所述組成物的一剪力儲存模數(shù)增加至少300倍。在本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例中，所述組成物的所述反向熱轉(zhuǎn)變使所述組成物的一剪力儲存模數(shù)增加至少1000倍。在本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例中，所述組成物的所述反向熱轉(zhuǎn)變使所述組成物的一剪力儲存模數(shù)增加至少3000倍。在本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例中，所述組成物的所述反向熱轉(zhuǎn)變使所述組成物的一剪力儲存模數(shù)增加至少10000倍。

如本文所例示，多個例示性的組成物在即使在水中培育之后，保持它們的優(yōu)良流變及固化性質(zhì)。

不受限任何特定理論，相信這樣的性質(zhì)增強本文描述的多個組成物的用途以達成在一水環(huán)境的多個應(yīng)用，包含在生物體內(nèi)的多個環(huán)境。

因此，根據(jù)在本文描述的所述任何樣態(tài)的一些實施例，所述組成物是防水的。

本文中所述用語「防水」是指一物質(zhì)(例如本文描述的一組成物)，其當它在水中培育達至少一小時，沒有通過所述物質(zhì)造成明顯的水吸收，及沒有通過所述水造成明顯的物質(zhì)或其一部分的吸收。所述物質(zhì)因此與所述相鄰的水保留一可識別的及相對靜止的邊界，其通過加入水溶性染料的水或物質(zhì)可以被呈現(xiàn)高度可見的，如本文所列舉。

在本文所述片語「明顯吸收」是指在至少500毫克/平方公分的一程度，從一物體到另一個的多個分子的一網(wǎng)絡(luò)移動(例如從本文描述的一組成物到水，或反之亦然)。

在一些實施例中，所述防水是這樣的使所述組成物的特征為一溶解速率在一含水環(huán)境內(nèi)是每小時小于100毫克/平方公分。

如本文所定義，所述「溶解速率」是通過所述組成物接觸一水溶液(例如酸堿值為7.4的磷酸鹽緩沖鹽水)且沒有攪拌時達一小時來判斷，例如，通過平緩的把所述水溶液放在所述組成物之上，及判斷在20℃的一溫度下所述組成物的一溶解量(如通過在所述組成物中的所述重量的一減少量來確定)。在一些實施例中，所述溶解速率每小時小于50毫克/平方公分。在一些實施例中，所述重量改變每小時小于40毫克/平方公分。每小時小于30毫克/平方公分。

所述以毫克/平方公分單位的重量改變可以通過測量一樣品內(nèi)的一組成物的重量的改變，及把所述重量改變除以位在所述組成物及所述水溶液之間的所述界面的一區(qū)域。如本文所例示，這樣的測試可以使用大概一毫升的每個所述組成物及水溶液來實現(xiàn)，具有位在所述組成物及水之間大致是38平方毫米的一界面。

所述「防水」包含多個水不混溶的物質(zhì)及當充分攪拌時可與水混溶的物質(zhì)，但在缺少足夠攪拌時是防水(例如在所述水中溶解的非常慢)。

所述高分子多肽偶聯(lián)物：

根據(jù)在此段落描述的任一實施例的所述高分子多肽偶聯(lián)物可以在本文描述的所述多個發(fā)明的任何所述多個樣態(tài)的所述多個實施例的任一個的上下文中使用，及可以與根據(jù)本文描述的各實施例的任一個的一泊洛沙姆，及本文描述的各實施例的任一個的一聚合泊洛沙姆結(jié)合。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，在所述組成物內(nèi)的所述聚合物多肽(或聚合物蛋白質(zhì))偶聯(lián)物的一濃度是在從2到15毫克/毫升的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述偶聯(lián)物的一濃度是在從5到10毫克/毫升的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述偶聯(lián)物的一濃度是在從6到9毫克/毫升的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述偶聯(lián)物的一濃度大致是7.3毫克/毫升。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，在所述組成物內(nèi)的所述偶聯(lián)物的一濃度是在從2到8毫克/毫升的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述偶聯(lián)物的一濃度是在從5到8毫克/毫升的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述偶聯(lián)物的一濃度是在從6到8毫克/毫升的一范圍內(nèi)。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，在所述組成物內(nèi)的所述偶聯(lián)物的一濃度是在從6到15毫克/毫升的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述偶聯(lián)物的一濃度是在從6到10毫克/毫升的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述偶聯(lián)物的一濃度是在從6到9毫克/毫升的一范圍內(nèi)。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述偶聯(lián)物具有通式：

x(-y-zm)n

其中x是如本文描述的一多肽、y是如本文描述的一聚合官能基、z是如本文描述的一可聚合基團、n是大于1的一整數(shù)(例如2、3、4及高達20)、及m是1或大于1的一整數(shù)(例如2、3、4及高達20)，其代表每個聚合官能基的可聚合基團的所述數(shù)量。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，m是在從1到10的范圍內(nèi)。在一些實施例中，m是在從1到4的范圍內(nèi)。在一些實施例中，m是1。

但應(yīng)該理解的是，作為上述通式包含超過一個–y-zm官能基，在一偶聯(lián)物的不同–y-zm官能基可以選擇的具有對于m的一區(qū)別數(shù)值。

本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述多個聚合官能基包含一合成聚合物。根據(jù)本發(fā)明的多個實施例，多個泊洛沙姆(例如f127泊洛沙姆)及聚乙二醇是適用于多個聚合官能基的示例性的合成聚合物。

不受限任何特定理論，相信把一合成聚合物結(jié)合到一多肽(例如一天然蛋白質(zhì)，如血纖維蛋白原)提供當通過所述萬用合成分量而不是折衷的生物相容性來控制它們的物理性質(zhì)(例如密度、剛度及蛋白水解降解性)。

所述偶聯(lián)物的所述多肽在長度上至少是10氨基酸，選擇的在長度上至少是20氨基酸及選擇的在長度上至少是50氨基酸。

如本文所使用的所述用語「多肽」包含多個原生多肽(多個降解產(chǎn)物、多個綜合合成多肽或多個重組多肽中的任一者)及多個擬肽物(典型的，多個綜合合成多肽)，及是多個多肽類似物的多個擬肽及半擬肽，其可能具有例如當在一體內(nèi)使所述多肽更穩(wěn)定或更能夠滲入細胞內(nèi)時的多個修飾。這樣的修飾包含但不限于，n-末端修飾、c-末端修飾、肽鍵修飾，包含但不限于，ch2-nh、ch2-s、ch2-s＝o、o＝c-nh、ch2-o、ch2-ch2、s＝c-nh、ch＝ch或cf＝ch、骨架修飾及殘基修飾。用以準備多個擬態(tài)物化合物的多個方法在本領(lǐng)域中是被熟知且是具體的，例如，在quantitativedrugdesign,c.a.ramsdengd.,chapter17.2,f.choplinpergamonpress(1992)，其通過引用的方式并入，就如同在本文完全闡述。

在所述多肽內(nèi)的多個鈦鍵(-co-nh-)可以被取代，例如通過多個n-甲基化鍵(-n(ch3)-co-)、多個酯鍵(-c(r)h-c-o-o-c(r)-n-)、多個酮基亞甲基鍵(-co-ch2-)、多個α-氮雜鍵(-nh-n(r)-co-)，其中r是任意烷基，例如甲基-胺鍵(-ch2-nh-)、羥基亞乙基鍵(-ch(oh)-ch2-)、硫代酰胺鍵(-cs-nh-)、烯屬雙鍵(-ch＝ch-)、反向酰胺鍵(-nh-co-)、肽衍生物(-n(r)-ch2-co-)，其中r是「正常側(cè)鏈」，自然地呈現(xiàn)在碳原子上。這些修飾可以在沿著所述多肽鏈的任意所述多個鍵處及甚至在好幾個地方(2-3個)同時發(fā)生。

如貫穿本文中所使用，所述用語「氨基酸」或「多個氨基酸」被理解以包含所述20個天然存在的氨基酸；那些氨基酸時常在體內(nèi)轉(zhuǎn)譯后修飾，包含，例如羥脯氨酸、磷酸絲氨酸及磷酸蘇胺酸，及其他不常見的氨基酸，包含但不限于，2-氨基己二酸、羥離胺酸、異鎖鏈賴氨素、正纈氨酸、正亮氨酸及鳥氨酸。再者，所述用語「氨基酸」包含d-及l(fā)-氨基酸。

根據(jù)本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例，所述多肽包含一蛋白質(zhì)或其一片段。

在一些實施例中，所述多個用語「多肽」及「蛋白質(zhì)」是可交換的被使用。

所述蛋白質(zhì)可以是一天然存在蛋白質(zhì)(例如一蛋白質(zhì)存在于真核生物及/或原核生物、細胞、細胞材料、非多孔材料等)或均質(zhì)于(例如至少90％均質(zhì)、選擇的至少95％均質(zhì)及選擇的至少99％均質(zhì))一天然存在蛋白質(zhì)的一多肽。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述蛋白質(zhì)(或蛋白質(zhì)片段)是變性的。

要了解的是本文描述的所述蛋白質(zhì)可以選擇的包含超過一多肽鏈。

在多個實施例中包含特征為超過一多肽鏈的一蛋白質(zhì)，本文描述的所述偶聯(lián)物選擇的包含所述蛋白質(zhì)的一多肽。

或者，本文描述的所述偶聯(lián)物包含所述蛋白質(zhì)的多個多肽(例如所述蛋白質(zhì)的所有所述多肽)。在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述多個多肽連接在一起(例如通過非共價及/或共價鍵)以形成一多聚體(例如，二聚物、三聚物、四聚物、六聚物等)，所述多聚體具有連接其上的至少二聚合官能基，如本文所描述。在一些實施例中，所述蛋白質(zhì)的所述多個多肽是分開的(例如通過所述蛋白質(zhì)的變性來分開)，以使本文描述的所述偶聯(lián)物是不同偶聯(lián)物種類的一混合物，其中所述偶聯(lián)物種類中的每一個包含一不同的多肽。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述多肽(例如蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段)被選擇以顯示一生物活性。在一些實施例中，所述生物活性包含用于細胞成長及/或侵入的支持。

多個蛋白質(zhì)的多個例子顯示一生物活性，其在本發(fā)明的多個實施例的上下文中是優(yōu)良的，包含而非限制，一細胞信號蛋白質(zhì)、一細胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)、一細胞粘附蛋白質(zhì)、一生長因子、一蛋白質(zhì)a、一蛋白酶和蛋白酶受質(zhì)。在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述蛋白質(zhì)是一細胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)。

根據(jù)本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例，所述多肽包含一血纖維蛋白原多肽(血纖維蛋白原的α、β及/或γ鏈)或其一片段。在一些實施例中，本文描述的所述偶聯(lián)物包含血纖維蛋白原的所述α、β及γ鏈。在一些實施例中，所述多肽是一變性血纖維蛋白原(例如血纖維蛋白原的變性α、β及γ鏈的一混合物)。

多個細胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)的例子包含但不限于，血纖維蛋白原(例如α-鏈，genbank登錄號np_068657；β-鏈，genbank登錄號p02675；γ-鏈-genbank登錄號p02679)、膠原(例如genbank登錄號np_000079)、纖維連接蛋白(例如genbank登錄號np_002017)、波形蛋白(例如genbank登錄號np_003371)、彈性蛋白、原纖蛋白、纖蛋白、層粘連蛋白(例如genbank登錄號np_000218)及明膠。

多個細胞信號蛋白質(zhì)的多個例子包含但不限于，p38促分裂原活化蛋白激酶(例如，genbank登錄號np_002736)、核因子kappab(例如，genbank登錄號np_003989)、raf激酶抑制劑蛋白(rkip)(例如，genbank登錄號xp_497846)、raf-1(例如，genbank登錄號np_002871)、mek(例如，genbank登錄號np_002746)，蛋白激酶c(pkc)(例如，genbank登錄號np_002728)，磷酸肌醇3-激酶γ(例如，genbank登錄號np_002640)、受體酪氨酸激酶，例如胰島素受體(例如，genbank登錄號np_000199)、異源g蛋白質(zhì)(例如，galpha(i)-genbank登錄號np_002060；galpha(s)-genbank登錄號np_000507；galpha(q)-genbank登錄號np_002063)、小窩蛋白3(例如，genbank登錄號np_001225)、微管相關(guān)蛋白質(zhì)1b、及14-3-3蛋白質(zhì)(例如，genbank登錄號np_003397)。

多個細胞粘附蛋白質(zhì)的多個例子包含但不限于，組合蛋白(例如，genbank登錄號np_002202)、細胞間粘附分子(icam)1(例如，genbank登錄號np_000192)、n-cam(例如，genbank登錄號np_000606)、鈣粘蛋白(例如，genbank登錄號np_004351)、腱生蛋白(例如，genbank登錄號np_061978)、gicerin(例如，genbank登錄號np_006491)、及神經(jīng)損傷誘導蛋白2(ninjurin2)(例如，genbank登錄號np_067606)。

多個生長因子的多個例子包含但不限于，表皮生長因子(例如，genbank登錄號np_001954)、轉(zhuǎn)化生長因子β(例如，genbank登錄號np_000651)、成纖維細胞生長因子-酸性(例如，genbank登錄號np_000791)、成纖維細胞生長因子-堿性(例如，genbank登錄號np_001997)、促紅細胞生成素(例如，genbank登錄號np_000790)、血小板生成素(例如，genbank登錄號np_000451)、神經(jīng)突增生因子、肝細胞生長因子(例如，genbank登錄號np_000592)、胰島素樣生長因子-i(例如，genbank登錄號np_000609)、胰島素樣生長因子-ii(例如，genbank登錄號np_000603)、干擾素γ(例如，genbank登錄號np_000610)、和血小板衍生生長因子(例如，genbank登錄號np_079484)。

多個蛋白酶的多個例子包含但不限于，胃蛋白酶(例如，genbank登錄號np_055039)、低特異性胰凝乳蛋白酶、高特異性胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶(例如，genbank登錄號np_002760)，羧勝酶(例如，genbank登錄號np_001859)、氨基肽酶(例如，genbank登錄號np_001141)、脯氨酸內(nèi)肽酶(例如，genbank登錄號np_002717)、金黃色葡萄球菌v8蛋白酶(例如，genbank登錄號np_374168)、蛋白酶k(pk)(例如，genbank登錄號p06873)、天冬氨酸蛋白酶(例如，genbank登錄號np_004842)、絲氨酸蛋白酶(例如，genbank登錄號np_624302)、金屬蛋白酶(例如，genbank登錄號np_787047)、adamts17(例如，genbank登錄號np_620688)、類胰蛋白酶-γ(例如，genbank登錄號np_036599)、matriptase-2(例如，genbank登錄號np_694564)。

多個蛋白酶受質(zhì)的多個例子包含所述肽或多個肽序列作為蛋白酶蛋白的靶標。例如，賴氨酸和精氨酸是胰蛋白酶的目標；酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸是糜蛋白酶的目標。

這種天然存在蛋白質(zhì)可以從任何已知的分子生物學試劑的提供者獲得。

根據(jù)本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例，所述偶聯(lián)物的所述多個聚合官能基包含多個可聚合基團(例如如本文描述)，其可連接到一多肽。例如，丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、及乙烯基砜，除了多個可聚合基團，是適合于通過麥可加成(michael-typeaddition)附著到一氫硫基團(例如，在一個半胱氨酸殘基)。

因此，如例示在本文的所述多個例子段落中，一聚合官能基可以包含多個這樣的基團(例如，丙烯酸酯)，其中一個被反應(yīng)(其可以使所述基團不再聚合)以連接所述聚合官能基到所述多肽，所述剩下的基團或多個基團成為多個可聚合基團。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述偶聯(lián)物包含聚合物二丙烯酸酯(例如聚乙二醇二丙烯酸酯)的多個官能基，其中，在每一官能基內(nèi)的一個丙烯酸酯基團附加到一多肽(例如變性血纖維蛋白原)的一個半胱氨酸殘基，及一丙烯酸酯基團當作一可聚合基團。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述偶聯(lián)物包含通過超過二個丙烯酸酯基團(例如四臂聚乙二醇四丙烯酸酯官能基)取代的一分支聚合官能基，其中在每一官能基中的一丙烯酸酯基團附加到一多肽(例如變性血纖維蛋白原)的一個半胱氨酸殘基，及另外的多個丙烯酸酯基團(例如在在一個四丙烯酸酯官能基內(nèi)的三個丙烯酸酯基團)作為多個可聚合基團。

根據(jù)一些實施例，所述多肽是變性血纖維蛋白原及每個所述多個聚合官能基包含聚乙二醇。

根據(jù)在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例，所述聚乙二醇官能基的每一個包含一聚乙二醇二丙烯酸酯官能基，其中所述聚乙二醇二丙烯酸酯官能基的一丙烯酸酯基團附加到所述血纖維蛋白原的一個半胱氨酸殘基。

根據(jù)在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例，所述多肽是變性血纖維蛋白原及所述多個聚合官能基的每一個包含f127泊洛沙姆。

根據(jù)在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例，所述多個聚合官能基的每一個包含一f127泊洛沙姆二丙烯酸酯官能基，其中所述f127泊洛沙姆二丙烯酸酯官能基的一丙烯酸酯基團附加到所述血纖維蛋白原的一個半胱氨酸殘基。

適用于使用在本發(fā)明的一些實施例中的多個聚合物多肽偶聯(lián)物也描述在國際專利申請公開wo2005/061018、美國專利號7,842,667及國際專利申請公開wo2011/073991，其內(nèi)容通過引用并入本文。

所述多個可聚合基團及聚合：

根據(jù)在此段落中描述的所述多個實施例的任一個的所述多個可聚合基團及聚合可以用在本文描述的所述多個發(fā)明的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的內(nèi)容中，及可以被合并在根據(jù)本文描述的所述各實施例的任一個的一可聚合的聚合物多肽偶聯(lián)物之內(nèi)，及根據(jù)本文描述的所述各實施例的任一個的一聚合泊洛沙姆。

如本文所使用，所述片語「可聚合基團」是指一官能基團的特征是通過聚合具有另一分子(例如另一個偶聯(lián)物)的一官能基團的所述可聚合基團來影響共價交聯(lián)的一能力。在本發(fā)明的任何實施例的內(nèi)容中，所述多個可聚合基團可以當作多個單體，其中聚合所述多個可聚合基團交聯(lián)包含所述多個可聚合基團的所述多個偶聯(lián)物。

根據(jù)本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例，所述可聚合基團能夠通過聚合相似于及/或等同于本文描述一含可聚合基團分子(例如包含一可聚合基團化學的關(guān)聯(lián)于及/或等同于所述可聚合基團的一偶聯(lián)物或泊洛沙姆)的一分子(例如聚合物-蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、被取代的泊洛沙姆)來影響交聯(lián)。

在本文中，所述用語「聚合」是指一反應(yīng)，其中至少二個化學相似或等同的多個分子或多個官能基通過一或更多鍵變成共價連接。從而形成的所述反應(yīng)及所述多個鍵是一種型態(tài)，允許至少當一些條件時，達成超過二個(例如10或更多)的化學相似或等同的多個分子或多個官能基變成共價連接。

許多可聚合基團在本領(lǐng)域中是已知的，包含多個基團(例如多個不飽合基團)，其容易遭遇自由基聚合，及多個環(huán)基(例如多個內(nèi)酯)，其容易通過開環(huán)而聚合。

用于影響聚合的各種條件(例如自由基聚合)在本領(lǐng)域是已知的。聚合可以被影響，例如通過光引發(fā)(在照射適當?shù)墓獾拇嬖谙?，例?65納米，及也選擇的有如本文描述的一引發(fā)劑)、通過化學交聯(lián)(在一自由基供體的存在下)及/或加熱(在所述適合的溫度)。根據(jù)多個示例性的實施例，通過以紫外光射線照射來影響聚合(例如以大致365納米的一波長)。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，一可聚合基團被選擇以使其聚合可以在無害于多個活細胞的相對溫和的多個條件下被影響。例如，所述多個聚合條件選擇的充分無毒及無危險的，以適用于在生物體內(nèi)影響聚合，如本文所描述。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述可聚合基團是通過自由基聚合來聚合。這樣的多個基團的多個例子包含但非限定，丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、和乙烯基砜。

在本發(fā)明的多個實施例的所述多個樣態(tài)的任一個中，為了開始進行本文描述的聚合所述多個可聚合基團，一自由基引發(fā)劑可以選擇的被使用。所述技術(shù)人員將可以選擇適用于開始進行聚合所述選擇的多個可聚合基團的一引發(fā)劑。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，如本文描述的一組成物還包含一自由基引發(fā)劑(例如如本文所描述)。

所述泊洛沙姆及通過至少一可聚合基團取代的泊洛沙姆：

根據(jù)在此段落內(nèi)描述的所述多個實施例的任一個的所述泊洛沙姆及通過至少一可聚合基團取代的泊洛沙姆可以用在本文描述的所述多個發(fā)明的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的內(nèi)容中，及可以與根據(jù)本文描述的所述各個實施例的任一個的一偶聯(lián)物合并，及可以包含根據(jù)本文描述的所述各實施例的任一個的一可聚合基團。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述泊洛沙姆的一濃度是至少5重量百分比。在一些實施例中，所述泊洛沙姆的一濃度是至少8重量百分比。在一些實施例中，所述泊洛沙姆的一濃度是至少10重量百分比。在一些實施例中，所述泊洛沙姆的一濃度是至少12重量百分比。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述泊洛沙姆的一濃度是在從13到25重量百分比的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述泊洛沙姆的一濃度是在從13到20重量百分比的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述泊洛沙姆的一濃度是在從13.5到17.5重量百分比的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述泊洛沙姆的一濃度大致是15.4重量百分比。

f127泊洛沙姆是一例示性泊洛沙姆，其可以選擇的用在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一濃度是至少3重量百分比。在一些實施例中，通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一濃度是至少5重量百分比。通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一濃度是至少7重量百分比。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一濃度是在從7.8到15重量百分比的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一濃度是在從7.8到12重量百分比的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一濃度是在從7.8到10重量百分比的一范圍內(nèi)。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一濃度大致是8.1重量百分比。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述泊洛沙姆及通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一總濃度是至少19重量百分比。在一些實施例中，所述總濃度是至少21重量百分比。一些實施例中，所述總濃度是至少22重量百分比。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述泊洛沙姆及通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一總濃度是不多于30重量百分比。在一些實施例中，所述總濃度是不多于27重量百分比。在一些實施例中，所述總濃度是不多于25重量百分比。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述泊洛沙姆及通過至少一可聚合基團取代的所述泊洛沙姆的一總濃度大致是23.5重量百分比。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述被取代的泊洛沙姆是通過至少一可聚合基團取代的一f127泊洛沙姆。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述被取代的泊洛沙姆是利用本文描述的至少二個可聚合基團(例如丙烯酸酯)來取代，例如，2、3、7及高達20個可聚合基團。在一些實施例中，所述被取代的泊洛沙姆包含本文描述的二個可聚合基團，例如所述被取代的泊洛沙姆是一泊洛沙姆二丙烯酸酯。f127泊洛沙姆二丙烯酸酯是一示例性的泊洛沙姆二丙烯酸酯，其可以選擇的用在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中。

以交聯(lián)形式的所述物質(zhì)的組合：

根據(jù)在此段落中描述的所述多個實施例的任一個的所述物質(zhì)的組合可以用在本文描述的所述多個發(fā)明的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的內(nèi)容中，及可以包含根據(jù)本文描述的所述各實施例的任一個的一偶聯(lián)物、根據(jù)本文描述的所述各實施例的任一個的一泊洛沙姆、及根據(jù)本文描述的所述各實施例的任一個的一聚合泊洛沙姆。另外，所述交聯(lián)可以通過根據(jù)本文描述的所述各實施例的任一個的一可聚合基團來影響。

根據(jù)本發(fā)明的多個實施例的另一樣態(tài)，有提供任何所述組成物的一交聯(lián)型式，包含如本文描述的一聚合物多肽偶聯(lián)物。所述交聯(lián)型式包含所述偶聯(lián)物(如本文所描述)的多個分子、及當聚合所述可聚合基團時(如本文所描述)，通過至少一可聚合基團(如本文所描述)取代的一泊洛沙姆與另一個共價交聯(lián)的多個分子。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述物質(zhì)的組合是一支架。

如本文所使用，所述用語「支架」描述為一種二維或三維支撐框架。根據(jù)本發(fā)明的多個實施例的所述支架是由多個前導單元組成(包含所述多個偶聯(lián)物及/或通過至少一可聚合基團取代的泊洛沙姆，如本文所述)，其在其之間交聯(lián)。所述支架可以還包含多個化合物(例如本文描述的所述泊洛沙姆)，其被包含在所述支架之內(nèi)，而沒有交聯(lián)到前述的多個前導單元。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，一支架可以被使用作為細胞生長、附著及/或散布的一支撐，及因此促進組織再生及/或組織修復(fù)。在一些實施例中，一支架維持一組織的一所需形狀及/或從而支持細胞復(fù)制。

要知道的是，如本文描述的一組成物的一「交聯(lián)型式」可以包含相較于所述組成物本身，泊洛沙姆(如本文所描述)的一較低部分，因為所述泊洛沙姆一般不遭遇共價交聯(lián)(相對于所述偶聯(lián)物及通過至少一可聚合基團取代的泊洛沙姆，如本文所描述)，及因此可能會泄露出所述交聯(lián)型式。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述物質(zhì)的組合是一水凝膠。

如本文所使用及本領(lǐng)域所熟知，所述用語「水凝膠」是指包含形成天然水溶性及合成聚合物鏈的固態(tài)網(wǎng)絡(luò)(例如本文描述的一支架)的一材料，其可以包含大量(例如超過99％)的水。

所述水凝膠可以是本文描述的一組成物的一交聯(lián)型式自身，也就是說，在交聯(lián)之前，包含在水凝膠內(nèi)的所述水分是大致的相同于所述組成物內(nèi)的所述水分。

或者，在本文描述的一組成物的交聯(lián)之后，所述水凝膠可能包含通過所述物質(zhì)的組合吸收的水分。

不受限于任何特定理論，要相信的是，多個水凝膠用于諸如組織再生是特別有利的，因為當含有適合于允許水凝膠內(nèi)的細胞生長和遷移的相當程度的水環(huán)境，它們提供一理想的固體或半固體稠度。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述物質(zhì)的組合的特征是在17℃的一溫度下的一剪力儲存模數(shù)至少是30000帕。在一些實施例中，所述物質(zhì)的組合的特征是在17℃的一溫度下的一剪力儲存模數(shù)至少是35000帕。在一些實施例中，所述物質(zhì)的組合的特征是在17℃的一溫度下的一剪力儲存模數(shù)至少是40000帕。在一些實施例中，所述物質(zhì)的組合的特征是在17℃的一溫度下的一剪力儲存模數(shù)至少是45000帕。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述物質(zhì)的組合是生物可降解的，例如當接觸一組織及/或一細胞時(例如通過蛋白酶解及/或水解)，所述物質(zhì)的組合進行降解。生物降解材料在各種醫(yī)學應(yīng)用內(nèi)使用，例如當作暫時植入體。另外，生物可降解材料是高度適用以作為支撐細胞生長及/或遷移、作為細胞生長及/或遷移是有關(guān)于一周圍基質(zhì)的降解。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，一物質(zhì)的組合的生物降解能力是在所述物質(zhì)的組合內(nèi)的一偶聯(lián)物(如本文所描述)的一多肽的所述生物降解能力的結(jié)果，以使所述多肽的降解引起所述物質(zhì)的組合的降解。

根據(jù)本發(fā)明的多個實施例的另一個樣態(tài)，有提供一種制造本文描述的一物質(zhì)的組合的制造過程，所述制造過程包含使本文描述的一組成物遭受通過聚合所述可聚合基團來影響共價交聯(lián)的多個條件，如本文所描述。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，在生物體內(nèi)影響所述共價交聯(lián)。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，在生物體外影響所述共價交聯(lián)。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，通過聚合影響共價交聯(lián)的多個條件包含射線照射(如本文所描述)。

所述組成物及物質(zhì)的組成的多個應(yīng)用：

根據(jù)在此段落中描述的所述多個實施例的任一個的所述多個應(yīng)用可以實現(xiàn)在本文描述的所述多個發(fā)明的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的內(nèi)容中，及可以利用根據(jù)本文描述的所述各實施例的任一個的一組成物及/或根據(jù)本文描述的所述各實施例的任一個的一物質(zhì)的組合。

根據(jù)本文描述的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的一些實施例，如本文所描述的所述多個組成物的任一個是辨識來用于產(chǎn)生一水凝膠支架(例如如本文所描述)。

根據(jù)本文描述的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的一些實施例，如本文所描述的所述多個組成物的任一個及/或如本文所描述的所述物質(zhì)的組成的任一個是辨識來用在修復(fù)損傷的組織。

根據(jù)本文描述的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的一些實施例，如本文所描述的所述多個組成物的任一個及/或如本文所描述的所述物質(zhì)的組成的任一個是辨識來治療具有以組織損傷或損失的特征的一疾病的一患者。

根據(jù)本文描述的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的一些實施例，如本文所描述的所述多個組成物的任一個及/或如本文所描述的所述物質(zhì)的組成的任一個是辨識來用在誘導一組織的形成。

根據(jù)本文發(fā)明的多個實施例的另一個樣態(tài)，有提供如本文所描述的所述多個組成物的任一個及/或如本文所描述的所述物質(zhì)的組成的任一個的一用途用于修復(fù)組織損傷的一藥品的制造。

根據(jù)本發(fā)明的多個實施例的另一樣態(tài)，有提供一種在生物體內(nèi)誘導一組織的形成的方法，所述方法包含把本文描述的所述多個組成物的任一個施予一患者。

根據(jù)本發(fā)明的多個實施例的另一樣態(tài)，有提供一種治療具有以組織損傷或損失為特征的一疾病的一患者，所述方法包含把本文描述的所述多個組成物的任一個施予一患者。

利用如本文描述的一組成物的所述多個方法及用途的任一個(例如為修復(fù)修補組織損傷、用于制造藥品、用于治療的受試者及/或用于誘導一組織形成)可以通過使所述組成物(例如在生物體內(nèi))遭受影響固化所述組成物的多個條件來影響，如本文所描述，從而誘導組織的形成。在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，通過共價交聯(lián)影響固化。在一些實施例中，通過聚合所述可聚合基團影響共價交聯(lián)，如本文所描述。

根據(jù)本發(fā)明的多個實施例的另一樣態(tài)，還提供一種在生物體內(nèi)誘導一組織的形成的方法，所述方法包含把本文所描述的所述物質(zhì)的組成的任一個植入到一患者內(nèi)，從而誘導組織的所述形成。

根據(jù)本發(fā)明的多個實施例的另一樣態(tài)，還提供一種治療具有以組織損傷或損失為特征的一疾病的一患者，所述方法包含把本文所描述的所述物質(zhì)的組成的任一個植入到一患者內(nèi)，從而誘導所述形成的組織。

在利用如本文所描述的物質(zhì)的組合的所述多個方法及用途的任一個的所述多個實施例的任一個的一些實施例中(例如通過把所述物質(zhì)的組合的植入及/或用于制造一藥品)，所述物質(zhì)的組合制備于適用欲把所述物質(zhì)的組合植入的一患者的形狀以作為判斷，例如，通過一主治醫(yī)生(例如一外科醫(yī)生)。在一些實施例中，通過以所述需要的形狀制備一模具，及使本文描述的一組成物遭遇到在所述模具內(nèi)(例如如本文所描述)的共價交聯(lián)來制備所需要的形狀的所述物質(zhì)的組合。

根據(jù)本文描述的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述組織包含軟骨，及所述組成物是用在修復(fù)受損的軟骨及/或治療具有以軟骨的損傷或損失為特征的一疾病的一患者。

在本文描述的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述組成物及/或藥品被辨識用在關(guān)節(jié)鏡手術(shù)中。

在本文描述的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述方法及/或用途是通過關(guān)節(jié)鏡手術(shù)來影響。

如本文所使用，所述片語「關(guān)節(jié)鏡手術(shù)」是指一種微創(chuàng)外科手術(shù)，其中通過一小切口進行一接合的內(nèi)部的損傷的治療。

不受限于任何特定理論，相信本文所描述的組成物的流動性使得它們特別是適于于通過一小切口，如在關(guān)節(jié)鏡手術(shù)中使用，來進行注射，而它們的粘度和欲被固化的能力使得它們特別適合于在手術(shù)期間及之后殘留在所希望的位置。

根據(jù)本發(fā)明的多個實施例的關(guān)于可以被治療的軟骨的損傷或損失的多個條件的多個例子，通過包含關(guān)節(jié)鏡手術(shù)的多個實施例來包含、包含撕裂浮動軟骨、撕裂表面軟骨、及撕裂及/或重建前交叉韌帶。

根據(jù)本文描述的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述組成物可以通過在一生理介質(zhì)內(nèi)聚合(如本文所描述)來固化。在一些實施例中，所述聚合物通過射線照射開始(例如如本文所描述)。

不受限于任何特定理論，被相信的是，聚合，及通過射線照射來開始的特別的聚合，是一特別適合的(例如生物可相容的)反應(yīng)機制，用于包含肝臟組織的多個應(yīng)用(例如在生物體內(nèi)的多個應(yīng)用)，例如如本文所描述，因為共價交聯(lián)的一高度程度可以通過只有一相當小量的一反應(yīng)化合物(例如一引發(fā)劑)來誘導，其可以幫助通過多個化學反應(yīng)引起的最小化毒性或其他多個不利影響。另外，射線照射可容易的集中到一需要的位置(例如，在手術(shù)過程中)，從而進一步最小化不利的多個化學反應(yīng)。

本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，當在所述生理介質(zhì)內(nèi)固化時，所述組成物形成一水凝膠支架(例如如本文所描述)。

在本文描述的所述多個樣態(tài)的任一個的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述組成物被制備及/或儲存在一溫度下，其中所述組成物不是一黏性流體及/或凝膠，例如如本文所述描述。這種溫度可以是，例如，所述組成物是一冷凍固體的所處一溫度，或所述組成物是相對低黏度流體所處一溫度(例如如本文描述的低于一相變溫度的一溫度)。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，使所述組成物遭遇到在所述組成物轉(zhuǎn)變成一粘性物體及/或膠體，例如如本文所描述(例如，通過遭遇反向熱凝膠作用)所處的一溫度(例如如本文所述的一相變溫度之上的一溫度)。通過所述組成物的一外觀的外觀檢查(例如所述組成物出現(xiàn)渾濁)及/或通過評估所述組成物(例如，通過反轉(zhuǎn)及/或搖動所述組成物)的一稠度(例如粘度)，所述組成物可以被判斷為轉(zhuǎn)換成所述粘性物體及/或膠體狀態(tài)。

其他的多個成分、包裝及多個套裝產(chǎn)品(kits)：

根據(jù)本文描述的所述多個實施例的任一個的所述多個組成物的任一個可以配制用于促進其施用(例如，植入)。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，本文描述的任何所述組成物可以還包含一藥物可接受的載體。

在本文中所述用語「藥物可接受的載體」是指一載體或一稀釋劑，其不會引起顯著刺激到一生物體及不會消除生物活性和所施用的化合物的性質(zhì)。不是限制的多個載體的多個例子是：丙二醇、鹽水、乳液及具有水分的有機溶劑、以及固體(例如，粉末狀)和氣態(tài)載體的混合物。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述載體是一水性載體，例如一水溶液(例如鹽水)。磷酸鹽緩沖鹽水是一示例性水性載體，其可以選擇的用在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述水性載體的一酸堿值是在從5到9的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述酸堿值是在從6到8的一范圍內(nèi)。在一些實施例中，所述酸堿值是在從7到7.5的一范圍內(nèi)。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述水性載體的一酸堿值大致是7.4。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，本文描述的任何所述多個組成物是包裝在一包裝材料內(nèi)，及以列印方式辨識，在所述包裝材料內(nèi)或上，用在修復(fù)組織的用途，誘導組織的形成及/或治療具有一疾病的一患者，如本文所描述。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，本文描述的任何所述物質(zhì)的組成是包裝在一包裝材料內(nèi)，及以列印方式辨識，在所述包裝材料內(nèi)或上，用在修復(fù)組織的用途，誘導組織的形成及/或治療具有一疾病的一患者，如本文所描述。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述組成物被配制用于儲存在低于0℃下的溫度，例如，在約-20℃。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述組成物包裝在一部分的或完整的不透明容器內(nèi)(例如一容器，其形成本文描述的一涂藥器的一部分)，以最小化聚合過早光引發(fā)的一危險。

本文描述的所述組成物也可以提供作為一套裝產(chǎn)品的部分。

因此，根據(jù)本發(fā)明的多個實施例的另一態(tài)樣，還提供一種套裝產(chǎn)品，包含本文描述的任何所述多個組成物。

在本文描述的所述實施例的任一個的一些實施例中，所述套裝產(chǎn)品包含裝載有所述組成物的一涂藥器，所述涂藥器配置成釋放所述組合物，結(jié)果壓力施加到所述組合物。如本文所例示，甚至所述組合物的一高粘度狀態(tài)在有壓力時可以流動。

在所述組成物的壓力可以被引起，例如通過手動壓力、通過在所述涂藥器內(nèi)的一壓縮氣體、及/或通過一個馬達(例如，電動馬達)。

在一些實施例中，所述涂藥器包含一活塞(例如在一注射器內(nèi))，配置成提供壓力到在所述涂藥器內(nèi)的所述組成物。

在一些實施例中，所述偶聯(lián)物、泊洛沙姆及被取代的泊洛沙姆(如本文所描述)是從在一套裝產(chǎn)品之內(nèi)的一自由基引發(fā)劑(如本文所描述)來分開的儲存(例如如本文所描述的以一組成物的一型式)，例如，在分開的多個包裝單元中，以使所述組成物被儲存而不包含一引發(fā)劑，直到在交聯(lián)之前短暫的接觸所述引發(fā)劑，如本文所描述。在使用前，所述組成物的所述多個部分的這樣的儲存可以幫助避免所述組成物的多個部分的交聯(lián)的過早啟動。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述偶聯(lián)物、泊洛沙姆及被取代的泊洛沙姆(如本文所描述)是從具有一套裝產(chǎn)品的一載體(如本文所描述)來被分開的儲存，例如，在分開的多個包裝單元中，以使所述偶聯(lián)物、泊洛沙姆及被取代的泊洛沙姆儲存在一干燥狀態(tài)，直到接觸所述載體以形成包含一載體的一組成物，如本文所描述。在使用前，所述組成物的所述多個部分的這種儲存可以增加所述多個部分(及套裝產(chǎn)品)的一有效壽命。

在本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述套裝產(chǎn)品還包含提供有關(guān)于儲存及/或在其內(nèi)的所述組成物的用途的指南的多個指令。

本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述套裝產(chǎn)品包含提供有關(guān)于選擇所述交聯(lián)的多個條件(例如有或無射線照射；有或無加熱；有或無加入一聚合引發(fā)劑)的指南的多個指令，用以獲得具有需要的多個性質(zhì)的一物質(zhì)的組合。

本文描述的所述多個實施例的任一個的一些實施例中，所述套裝產(chǎn)品包含提供有關(guān)于當所述組成物準備以使用時(例如如本文所描述)的指南的多個指令，例如如何判斷當足夠的反向熱凝膠作用已經(jīng)發(fā)生(例如如本文所描述)。

所述用語「包括(comprises)」、「包括(comprising)」、「包含(includes)」、「包含(including)」、「具有(having)」及他們的結(jié)合是意謂著「包含但不限于」。

所述用語「以…組成(consistingof)」意謂「包含且限制于」。

所述用語「基本上以…組成(consistingessentiallyof)」意謂著所述組成、方法或結(jié)構(gòu)可能包含另外的成分、步驟及/或部件，但僅當所述另外的成分，步驟和/或部件不實質(zhì)上改變所要求保護的組合物、方法或結(jié)構(gòu)的基本和新穎特征。

示例(exemplary)在本文中用于表示作為示例(servingasanexample)，實例(instance)或例證(illustration)。任何被描述為示例實施例不一定被解釋為優(yōu)于或勝過其他實施例和/或排除來自其它實施例的特征結(jié)合。

用語任選地(optionally)在本文中用于表示在一些實施例中提供的，而不是在其他實施例中提供的。任何特定的本發(fā)明的實施例可包括多個任選地特征，除非這些特征沖突。

如此處所使用的所述單數(shù)形式「一(a)」、「一(an)」及「所述(the)」包含復(fù)數(shù)形式，除非上下文另有明確規(guī)定。例如，所述用語「一組成物」或「至少一組成物」可能包含多個組成物，包含他們的混合物。

在整個本申請中，本發(fā)明的各種實施方式能以范圍的形式表示。應(yīng)當理解，范圍形式的描述僅僅是為了方便和簡潔，不應(yīng)該被解釋為對本發(fā)明的范圍的硬性限制。因此，一范圍的描述應(yīng)當被認為已經(jīng)具體公開了所有可能的子范圍以及在那范圍內(nèi)的單個數(shù)值。例如，一范圍的描述例如從1到6個，應(yīng)考慮到有具體公開的子范圍如從1到3、從1到4、從1到5、從2到4、從2至6、從3到6等等，以及在所述范圍內(nèi)的個體數(shù)，例如，1，2，3，4，5，和6。這適用于無論所述范圍的所述幅度。

每當在本文中所指出的一數(shù)值范圍，它是指包含在指示的范圍內(nèi)的任何引用數(shù)字(分數(shù)或整數(shù))。所述片語「范圍(ranging)/范圍(ranges)之間(between)」在第一指示數(shù)字和第二指示數(shù)字以及「范圍(ranging)/范圍(ranges)從(from)」第一指示數(shù)字「到(to)」第二指示數(shù)字在本文中是可互換使用的并且意味著包含所述第一和第二指示數(shù)字“范圍內(nèi)/范圍之間”和其間的所有分數(shù)和整數(shù)數(shù)字。

如本文所使用的所述用語「方法」是指用于完成給定任務(wù)的方式、手段、技術(shù)和程序，包括但不限于那些方式、手段、技術(shù)和程序或者是已知的或容易通過所述化學、藥理學、生物學、生物化學及醫(yī)學領(lǐng)域的從業(yè)人員而從已知的方式、手段、技術(shù)和程序開發(fā)的。

可以理解的是，本發(fā)明的某些特征，其中，為清楚起見在單獨實施例的上下文中描述，也可以提供在單個實施例中組合。相反地，本發(fā)明的各種特征，為簡明起見在單個實施例的上下文中描述，也可以分別地或以任何合適的子組合或作為適于在本發(fā)明的任何其他描述的實施例提供的。在各種實施例的上下文中描述的某些特征不被認為是那些實施方案的必要特征，除非所實施例沒有這些元件的話無法操作。

本發(fā)明的各種實施例和各方面所劃定上文和如權(quán)利要求段落下面所宣告的部分找到以下實施例的實驗支持。

多個例子

現(xiàn)請參照下述的多個例子，其以非限制性的方式連同以上描述說明了本發(fā)明的一些實施例。

多個材料及多個方法

多個材料：

衣格酷爾(irgacure，商標名)2959是從汽巴公司獲得。

f127泊洛沙姆-二丙烯酸酯(f127-da)及聚乙二醇-二丙烯酸酯(peg-da)分別的通過普朗尼克(商標名)f127(12.6千道爾頓)及聚乙二醇(peg)二元醇(12千道爾頓)的丙烯酸酯化來制備，如在國際專利申請第pct/il2010/001072號中(如wo2011/073991公開)所描述。

f127泊洛沙姆-血纖維蛋白原及多個聚乙二醇-血纖維蛋白原偶聯(lián)物分別從f127-da及peg-da來制備，如在國際專利申請第pct/il2010/001072號中(如wo2011/073991公開)所描述。

流變測量：

流變測量是使用裝備有珀爾帖板溫控基板的一個ar-g2流變儀(ta儀器；紐卡斯爾市，特拉華州，美國)。一個20毫米的不銹鋼板幾何形狀被用在所有的實驗中。每次進行測定用0.2毫升的含有0.1％(重量/體積)的衣格酷爾(irgacure，商標名)2959的引發(fā)劑的一聚合物溶液。用在流變測量的所述多個試驗條件分別為以每秒3弧度的振蕩頻率進行2％的應(yīng)變。

所述非交聯(lián)制劑作用的反向熱凝膠是通過與溫度相關(guān)的流變測量評價。當實行時間依賴性流變測量時，在配方流變上的交聯(lián)的所述多個影響通過交聯(lián)配方進行評估。

統(tǒng)計分析：

使用微軟試算表(microsoftexcel)統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計分析。兩種治療之間的比較是用一個學生的t-檢驗(雙尾、等方差性)制成。對小于0.05的一p值被認為是統(tǒng)計學上顯著的。

例子1

泊洛沙姆對聚乙二醇-血纖維蛋白原配方性質(zhì)的影響

用于水凝膠前體溶液的各種制劑是通過將在指定濃度的peg-da(peg-二丙烯酸酯)、f127-oh(f127泊洛沙姆)、f127-da(f127泊洛沙姆-二丙烯酸酯)及/或f127-ma(f127泊洛沙姆單丙烯酸酯)及在一酸堿值是7.4的磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)具有在7.3毫克/毫升的一溶液內(nèi)的0.1％(重量/體積)衣格酷爾(商標名)2959。所述混合物被保持在4℃的一溫度下直到觀察到完全溶解。

通過以紫外光射線(365納米、4-5毫瓦/平方公分)照射所述前體溶液來交聯(lián)水凝膠前體溶液，以形成多個水凝膠。100微升的水凝膠前體溶液的一體積是在5毫米直徑硅管內(nèi)以射線照射，以產(chǎn)生5毫米高的水凝膠圓柱體。

對于每個配方，所述水凝膠前體溶液(例如在紫外光交聯(lián)之前)的所述流變性質(zhì)(例如剪力儲存模數(shù)(g’))及多個水凝膠(例如在紫外光交聯(lián)之后)是如上述來測量。

膨脹被計算為超過所述多個水凝膠的初始重量的具有磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)的多個水凝膠膨脹的增加百分比。

具有所述各種配方的所獲得的所述剪力儲存模數(shù)(g’)數(shù)值及膨脹比例在下面的表格1中概述。

如表格1所繪示，所述各種型式的f127泊洛沙姆(f127-oh、f-127-ma及f127-da)在交聯(lián)之前每個是有效于增加g’數(shù)值，其中在交聯(lián)之前，peg-da降低g’數(shù)值(例如比較配方4及7)。相較于二丙烯酸酯聚合物，非丙烯酸和單丙烯酸聚合物(f127-oh及f127-ma)是相當有效的增加g'數(shù)值(例如比較配方2及配方3與4、配方5及配方7、及配方6及配方10)。

如其中進一步繪示，二丙烯酸酯聚合物(peg-da及f127-da)是高度有效的在增加交聯(lián)水凝膠的g'數(shù)值(例如比較配方2及配方3與4、配方4及配方7、及配方7及配方10)。

表格1：組成物及在交聯(lián)前后的示例性配方的物理性質(zhì)

在交聯(lián)之前顯示相對高黏度的多個組成物(例如一相對高的g’數(shù)值)，由于它們的流動性降低，在大致的室溫下是有利且容易的處理。

此外，假設(shè)是一個交聯(lián)配方的過度膨脹可能導致有害影響，因此不超過配方1(其經(jīng)驗顯示相對于它的膨脹性質(zhì)的是令人滿意的)的一膨脹程度被認為是優(yōu)良的。f127-da的存在是有關(guān)于較低程度的膨脹(例如比較配方2及配方3、配方3及配方4、及配方7及配方5與10)

兩者合計，上述結(jié)果表明，在一包含聚乙二醇血纖維蛋白原的組成物處于足夠高的濃度的f127-oh和f127-da的一結(jié)合(例如配方9及10)，導致少于100％的膨脹、在交聯(lián)之前具有至少10000帕的g’、及在交聯(lián)之后具有至少40000帕的g’。

例子2

包含具有丙烯酸酯化及非丙烯酸酯化的f127泊洛沙姆的聚二乙醇-血纖維蛋

白原的示例性配方的性質(zhì)

配方10，包含7.3毫克/毫升聚二乙醇-血纖維蛋白原、15.4重量百分比的f127-oh及8.1重量百分比的f127-da(如例子1中所描述)，被選定為進一步表征它的物理和化學特性。配方10預(yù)期是特別有利的，因為它顯示出在交聯(lián)之前具有相當?shù)恼扯?，而在交?lián)后，相較于相似的粘性配方顯示較少的膨脹。

配方10(作為一非交聯(lián)溶液的所述剪力儲存模數(shù)(g’)被測量以作為一溫度函數(shù)，如在多個材料及多個方法段落中所描述。為了比較，包含7.4毫克/毫升peg-血纖維蛋白原及10重量百分比的f127-da的一配方也被測量。

如圖1中所繪示，配方10在大致16℃下經(jīng)歷一轉(zhuǎn)變，特征為g’的一銳利增加。相對的，具有10重量百分比的f127-da的7.4毫克/毫升聚乙二醇-血纖維蛋白原的一溶液沒有顯示這種g’的增加。

如圖2a及2b中所繪示，配方10在4℃的溫度下是自由流動的液體(圖2a)，但在室溫下是足夠粘稠的，以便不顯示出流動過短的時間范圍(圖2b)。

配方10的所述水凝膠前體溶液在低溫下容易地吸入到注射器內(nèi)，因為在這樣的溫度下它是一種自由流動的液體。

如圖3中所繪示，以一粘性材料的形式，在室溫下將所述溶液從注射器注入。

如圖4中所繪示，所述注入的粘性材料可以粘附在一垂直表面而不向下流動。

這些結(jié)果表明，這樣的配方的所述多個物理性質(zhì)導致在低溫下的自由流動的液體以達成處理方便(例如加載到一注射器)，以及在室溫下一粘性物質(zhì)是可注射并且能夠保留在一目標內(nèi)而不管所述目標位置的空間定位。

為了評價所述配方的抗水的所述能力，所述粘性材料利用染料水溶液培育達兩小時。

如圖5a-5d中所繪示，所述粘性材料表現(xiàn)出基本上沒有吸收水或水溶性染料，甚至在以染料水溶液培育達2小時后。

為了定量地評價在所述配方溶解在一含水環(huán)境中的所述阻抗，約1毫升的配方10被放置在2毫升血清玻璃小瓶(惠頓)內(nèi)。所述配方暴露于20℃的一溫度下，其所述配方是一種粘稠的形式，及然后1毫升的pbs緩沖液(酸堿值7.4)傾倒在所述配方上。這種構(gòu)造產(chǎn)生在所述粘性配方和所述pbs之間的界面，具有38.48平方毫米的區(qū)域。所述配方的初始重量被測定及所述配方的所述最終重量(暴露于所述含水環(huán)境之后)在1或2小時后被測量(3個樣品在每個時間處被測量)。所述配方的所述重量改變被標準化以每1平方公分改變重量。

如下面的表格2及圖6中所繪示，所述配方在整個二小時曝露于一含水環(huán)境的所述過程中，以每小時只有大致34毫克/平方公分的一速率溶解。

此結(jié)果指出所述配方是防水的，也就是說，通過在短時間周期內(nèi)與水接觸，它基本上不被影響，及因此能在含水環(huán)境中，例如在所述身體內(nèi)，同時保持其粘性的性質(zhì)。

表格2：當暴露于pbs時，配方10的重量改變

例子3

包含具有丙烯酸酯化及非丙烯酸酯化的f127泊洛沙姆的聚二乙醇-血纖維蛋白原的示例性配方的交聯(lián)

為了評估配方10的用途，例如在例子1和2中所描述的，用于在原位植入及交聯(lián)，所述配方被放在一人工病變內(nèi)及通過以365納米的一波長的紫外光射線照射來進行交聯(lián)。

如圖7a-7d所繪示，允許用于把所述配方注射到所述人工病變內(nèi)及配方的所述成型以符合所述病變的形狀的所述一致性，及紫外光射線照射導致具有相對扎實一致性的一水凝膠，其符合所述病變的所述形狀。

再者，如圖8a-8d中所示，所述配方可以被注射到在一含水環(huán)境內(nèi)的一模具內(nèi)，及交聯(lián)以產(chǎn)生以所述模具的所述形狀的一水凝膠。

這些結(jié)果證實，所述配方可以通過注射及原位交聯(lián)來應(yīng)用以產(chǎn)生一水凝膠，即使是在含水環(huán)境，如在所述體內(nèi)。

例子4

多個配合性質(zhì)的聚二乙醇-血纖維蛋白原濃度的影響

為了評估在交聯(lián)之前及之后聚二乙醇-血纖維蛋白原濃度在所述多個配方的所述性質(zhì)上的影響，上述配方10被修飾以包含0、4、7或10毫克/毫升的聚二乙醇-血纖維蛋白原。

如上面在所述多個材料和多個方法的段落中描述的測定多個配方的所述流變。

如圖9中所述，當進行反向熱凝膠作用時，在所述配方中的聚二乙醇-血纖維蛋白原的較高濃度是有關(guān)于較低的g’數(shù)值，及具有稍微較高的凝膠化溫度。

這些結(jié)果表明，聚二乙醇-血纖維蛋白原的作用就像一種增塑劑，及與f127-oh和f127-da單獨進行比較時，降低反向程度熱凝膠作用的所述程度。

如圖10中所述，當進行交聯(lián)時，在所述配方中聚二乙醇-血纖維蛋白原的較高濃度是有關(guān)于較高的g’數(shù)值。

這些結(jié)果表明，聚二乙醇-血纖維蛋白原增加交聯(lián)密度，從而導致一較硬的水凝膠。

例子5

比較在配方中的聚二乙醇-血纖維蛋白原及泊洛沙姆-血纖維蛋白原

為了評價所述聚合物偶聯(lián)物對配方性質(zhì)上的所述蛋白質(zhì)的影響，一新的配方(「配方11」)被制備，其包含取代在配方10中的聚二乙醇-血纖維蛋白原的一f127泊洛沙姆-血纖維蛋白原。配方10及11在其他方面相同，包含7.3毫克/毫升的聚二乙醇-血纖維蛋白原或f127-血纖維蛋白原、15.4重量百分比的f127-oh及8.1重量百分比的f127-da。如上文在所述多個材料和多個方法段落中描述來測量配方10和11的流變性。

如圖11中所示，以f127-血纖維蛋白原取代聚二乙醇-血纖維蛋白原不會影響當進行反向熱凝膠作用時的所述凝膠的所述多個性質(zhì)或所述凝膠化溫度。然而，f127-血纖維蛋白原導致在低溫下的稍高的g'數(shù)值(在沒有反向熱凝膠作用時)。

如圖12中所示，以f127-血纖維蛋白原取代聚二乙醇-血纖維蛋白原不會顯著影響所述交聯(lián)水凝膠的所述多個性質(zhì)。

這些結(jié)果表明，在判斷所述多個配方在交聯(lián)之前或交聯(lián)之后的所述多個流變性能時，所述聚合物偶聯(lián)物對于所述蛋白質(zhì)的所述身分不是一個重要的因素。

例子6

多個水凝膠的水解及蛋白降解

配方10及11如上所述被制備及交聯(lián)。所述配方被交聯(lián)在直徑16毫米的模具特氟隆(teflon)內(nèi)，通過紫外光射線照射(365納米，5毫瓦/平方公分)達5分鐘以造成一碟型水凝膠。

為了評價多個水凝膠到水解降解的所述敏感性，水凝膠樣品在50℃的一溫度下浸漬在50毫升pbs(磷酸鹽緩沖鹽水)。在不同時間點，用50毫升冷(4℃)ddw(雙蒸餾水)將所述多個樣品洗滌三次，以便從所述水凝膠除去殘余的材料。然后將所述多個樣品冷凍且凍干24小時，及獲得它們的干重數(shù)值。所述質(zhì)量損失百分率表示所述水解降解的程度。

為了評價所述多個水凝膠到蛋白水解降解的所述抗藥性，所述多個水凝膠樣品在37℃的溫度浸入24小時在含有0.1重量百分比胰蛋白酶的pbs。然后如上所述將所述多個樣品洗滌、冷凍及凍干，及然后用凱氏(kjeldahl)氮判定系統(tǒng)測定蛋白質(zhì)濃度。

如圖13中所繪示，在50℃下及在34天之后大約15％的水凝膠降解在pba內(nèi)。這結(jié)果表明，所述水凝膠是易于水解。

如圖14中所繪示，用胰蛋白酶培育導致所述水凝膠的快速降解。這結(jié)果表明在血纖維蛋白原中多個肽鍵的裂解導致所述水凝膠的降解。

上述結(jié)果表明，通過本文描述的配方的交聯(lián)來制備的多個水凝膠是生物可降解的，通過水解(顯然是由于酯鍵的水解)及蛋白水解兩者來降解。降解之后，所述降解在所述交聯(lián)矩陣之外產(chǎn)生擴散。另外，在所述水凝膠內(nèi)的所述f127-oh不是共價鍵結(jié)，及可以在一含水環(huán)境內(nèi)擴散到所述交聯(lián)矩陣之外。

雖然本發(fā)明已結(jié)合其具體實施方案進行了描述，但很明顯的，許多替換，修改和變化對于那些熟悉的技術(shù)人員是顯而易見的。因此，涵蓋落入附屬權(quán)利要求的原著和范圍內(nèi)的所有此類替換，修改和變型。

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