專(zhuān)利名稱(chēng)：：施用長(zhǎng)效降血糖藥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及施用長(zhǎng)效降血糖藥的方法和藥物組合物，及使用具有GLP-1活性的化合物和/或GLP-1激動(dòng)劑的治療方案。
背景技術(shù)：
：降血糖藥可用于治療I型和II型糖尿病，以降低血液中的葡萄糖濃度。已有人暗示促胰島素肽有可能成為治療糖尿病的治療劑。促胰島素肽包括但不限于腸降血糖素激素(incretinhormones)，例如胃抑制性肽(gastricinhibitorypeptide,GIP)和胰高血糖素樣肽-1(GLP-1),及其片段、變體、和/或綴合物。促胰島素肽還包括例如毒蜥外泌肽(exendin)3和毒蜥外泌肽4。GLP-1是一種由腸中的L細(xì)胞應(yīng)答于食物攝取而分泌的、長(zhǎng)36個(gè)氨基酸的腸降血糖素激素。已經(jīng)顯示，GLP-1以生理性和葡萄糖依賴(lài)性方式刺激胰島素分泌，降低胰高血糖素分泌，抑制胃排空，降低食欲，和刺激p細(xì)胞增殖。在非臨床實(shí)驗(yàn)中，GLP-1通過(guò)刺激對(duì)于葡萄糖依賴(lài)性胰島素分泌重要的基因轉(zhuǎn)錄和通過(guò)促進(jìn)卩細(xì)胞新生來(lái)提升持續(xù)的卩細(xì)胞感應(yīng)性(competence)(Meier等，Biodrugs.2003;17(2):93-102).在健康個(gè)體中，GLP-1發(fā)揮重要的作用，即通過(guò)剌激胰腺的葡萄糖依賴(lài)性胰島素分泌來(lái)調(diào)節(jié)餐后血液葡萄糖水平，導(dǎo)致外周葡萄糖吸收升高。GLP-1還遏制胰高血糖素分泌，導(dǎo)致肝葡萄糖輸出降低。另外，GLP-1延遲胃排空并減緩小腸運(yùn)動(dòng)，以延遲食物吸收。在II型糖尿病(T2DM)患者中，GLP-1的正常餐后上升缺失或降低(VilsbollT等，Diabetes.2001;50:609-613)。因而，施用外源GLP-1、腸降血糖素激素、或腸降血糖素模擬物的一個(gè)理由是增強(qiáng)、替換或補(bǔ)充內(nèi)源GLP-l,以提高進(jìn)餐相關(guān)胰島素分泌、降低胰高血糖素分泌、和/或減緩胃腸運(yùn)動(dòng)。天然GLP-1具有很短的血清半衰期(<5分鐘)。因而，外源施用天然GUM作為糖尿病的治療性處理目前是不可行的。商品化的腸降血糖素模擬物諸如Exenatide(Byetta⑧)在給T2DM患者皮下施用(5嗎或10嗎BID)后通過(guò)降低空腹和餐后葡萄糖濃度來(lái)改善血糖控制(glycemiccontrol)。如此，人們?nèi)匀恍枰_(kāi)發(fā)這樣的降血糖藥施用方法，其中降血糖藥的平均曲線下面積(AUC)數(shù)值能夠得到維持或以其它方式得到改善，從而在維持治療收益的同時(shí)減少所需的注射頻率。附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明圖l。SEQIDNO:l在II型糖尿病受試者中的藥動(dòng)學(xué)譜。血漿濃度(nMELISA)隨時(shí)間(hr)的均#_(95%)圖。圖2。2型糖尿病患者中SEQIDNo:l濃度-暴露(AUC(o—無(wú)窮》根據(jù)注射部位(腹部、腿部和臂部)和劑量的箱線圖。圖3。SEQIDNO:l。發(fā)明概述在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了用于增強(qiáng)人體中的GLP-1活性的方法，該方法包括給所述人體施用包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物，其中所述多肽提供如下參數(shù)所述多肽的最大血漿濃度為至少約0.6nM，所述多肽在一周時(shí)間^艮里的曲線下面積數(shù)值為至少約3.5nMx天。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了用于增強(qiáng)有所需要的人體中的GLP-1活性的方法，該方法包括給所述人體施用包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑的組合物，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑提供如下參數(shù)所述至少一種GLP-l激動(dòng)劑的最大血漿濃度為至少約21.2pM;所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑在一周時(shí)間^歐里的曲線下面積數(shù)值為至少約149pMx天。定義"GLP-1激動(dòng)劑"在用于本文時(shí)意為任何能夠刺激和/或具有至少一種GLP-1活性的化合物或組合物，包括但不限于腸降血糖素激素和/或其片段、變體和/或綴合物及腸降血糖素模擬物和/或其片段、變體和/或綴合物。"腸降血糖素激素，，在用于本文時(shí)意為任何可加強(qiáng)胰島素分泌或以其它方式提高胰島素水平的激素。腸降血糖素激素的一個(gè)例子是GLP-1。GLP-1是由腸L細(xì)胞應(yīng)答于食物攝取而分泌的腸降血糖素。在健康個(gè)體中，GLP-1發(fā)揮重要的作用，即通過(guò)刺激胰腺的葡萄糖依賴(lài)性胰島素分泌來(lái)調(diào)節(jié)餐后血液葡萄糖水平，導(dǎo)致外周中葡萄糖吸收升高。GLP-1還遏制胰高血糖素分泌，導(dǎo)致肝葡萄糖輸出降低。另外，GLP-1延遲胃排空時(shí)間并減緩小腸運(yùn)動(dòng)，以延遲食物吸收。GLP-1通過(guò)刺激牽涉葡萄糖依賴(lài)性胰島素分泌的基因轉(zhuǎn)錄和通過(guò)促進(jìn)卩細(xì)胞新生來(lái)提升持續(xù)的卩細(xì)胞感應(yīng)性(Meier等，Biodrugs2003;17(2):93-102)。"GLP-1活性，，在用于本文時(shí)意為天然存在人GLP-1的一種或多種活性，包括但不限于降低血液和/或血漿葡萄糖、刺激葡萄糖依賴(lài)性胰島素分泌或以其它方式提高胰島素水平、遏制胰高血糖素分泌、降低果糖胺、提高對(duì)腦的葡萄糖投遞和代謝、延遲胃排空、及提升(3細(xì)胞感應(yīng)性和/或新生。具有GLP-1活性的組合物或GLP-1激動(dòng)劑可以直接地或間接地引起任何這些活性及其它與GLP-1活性有關(guān)的活性。舉例而言，具有GLP-1活性的組合物可以直接地或間接地刺激葡萄糖依賴(lài)性，而對(duì)胰島素生成的刺激可間接地降低哺乳動(dòng)物中的血漿葡萄糖水平。"腸降血糖素模擬物，，在用于本文時(shí)是能夠加強(qiáng)胰島素分泌或以其它方式提高胰島素水平的化合物。腸降血糖素模擬物可以能夠在哺乳動(dòng)物中刺激胰島素分泌、提高(3細(xì)胞新生、抑制p細(xì)胞凋亡、抑制胰高血糖素分泌、延遲胃排空和誘導(dǎo)飽滿(mǎn)感。腸降血糖素模擬物可以包括但不限于任何具有GLP-1活性的多肽，包括但不很于毒蜥外泌肽3和毒蜥外泌肽4，包括它們的任何片段和/或變體和/或綴合物。"降血糖藥，，在用于本文時(shí)意為任何能夠降低血液葡萄糖的化合物或包含所述化合物的組合物。降血糖藥可以包括但不限于任何GLP-1激動(dòng)劑，包括腸降血糖素激素或腸降血糖素模擬物、GLP-l和/或其片段、變體和/或綴合物。其它降血糖藥包括但不限于提高胰島素分泌、(例如磺酰脲(SU)和氯茴苯酸(meglitinides))、抑制GLP-1分解(例如DPP-IV抑制劑)、提高葡萄糖利用(例如格列酮(glitazones)、瘞唑烷二酮(TZD)和/或pPAR激動(dòng)劑)、降低肝葡萄糖生成(例如二曱雙胍(metformin))、和延遲葡萄糖吸收(例如a-葡糖苷酶抑制物)的藥物。磺酰脲的例子包括但不限于醋酸己脲(acetohexamide)、氯石黃丙脲(chlorpropamide)、妥4立石黃脲(tolazamide)、格列吡。秦(glipizide)、才各列奇特(gliclazide)、格列本脲(glibenclamide)(glyburide)、格列壹酮(gliquidone)、和格列美脲(glimepiride)。格列酮的例子包括但不限于羅西格列酮(rosiglitazone)禾口p比才各歹1]S同(pioglitazone)。"多核苷酸，，一般指任何多聚核糖核苷酸或多聚脫氧核糖核苷酸，其可以是未修飾的RNA或DNA，或者是經(jīng)過(guò)修飾的RNA或DNA。"多核苷酸"包括但不限于單鏈和雙鏈DNA,由單鏈和雙鏈區(qū)混合而成的或者由單鏈、雙鏈和三鏈區(qū)混合而成的DNA,單鏈和雙鏈RNA，由單鏈和雙鏈區(qū)混合而成的RNA,包含DNA和RNA的雜合分子，其中DNA和RNA可以是單鏈的，或者更通常的是雙鏈的，或者三鏈的區(qū)域，或單鏈和雙鏈區(qū)的混合物。另外，"多核苷酸，，在用于本文時(shí)指包含RNA或DNA或RNA和DNA二者的三鏈區(qū)。此類(lèi)區(qū)域中的各條鏈可以來(lái)自相同分子或來(lái)自不同分子。所述區(qū)域可以包括所述分子中一個(gè)或多個(gè)的整個(gè)，但更通常的是只牽涉所述分子中某一些的某個(gè)區(qū)域。三股螺旋區(qū)的分子之一常常是寡核苷酸。在用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)"多核苷酸"還包括包含一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾堿基的如上所述DNA或RNA。如此，主鏈為了穩(wěn)定性或?yàn)榱似渌蚨?jīng)過(guò)修飾的DNA或RNA是"多核苷酸"，正如該術(shù)語(yǔ)在本文中所意謂的。此外，包含不常見(jiàn)石咸基(諸如肌苷)或經(jīng)修飾石咸基(諸如三苯曱基化堿基)的DNA或RNA(只舉兩個(gè)例子)是多核苷酸，正如該術(shù)語(yǔ)在本文中所使用的。應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會(huì)，已經(jīng)對(duì)DNA和RNA進(jìn)行了極其多種修飾，適合于本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的許多有用目的。術(shù)語(yǔ)"多核苷酸"在用于本文時(shí)涵蓋此類(lèi)在化學(xué)、酶或代謝上修飾形式的多核普酸，以及病毒和細(xì)胞(包括例如簡(jiǎn)單的和復(fù)雜的細(xì)胞)特征性的化學(xué)形式的DNA和RNA。"多核苷酸"還涵蓋常常稱(chēng)作寡核苷酸的短多核苷酸。"多肽"指任何包含兩個(gè)或更多彼此通過(guò)肽鍵或經(jīng)修飾肽鍵(即肽等排體)相連接的氨基酸的肽或蛋白質(zhì)。"多肽"指短鏈(常常稱(chēng)作肽、寡肽或寡聚物)和較長(zhǎng)鏈(一般稱(chēng)作蛋白質(zhì))二者。多肽可以包含20種由基因編碼的氨基酸以外的氨基酸。"多肽"包括通過(guò)天然過(guò)程(諸如翻譯后加工)或通過(guò)本領(lǐng)域公知的化學(xué)修飾技術(shù)得到修飾的氨基酸序列。此類(lèi)修飾在基礎(chǔ)教科書(shū)中及在更詳細(xì)的專(zhuān)著中以及在巻巾失浩繁的研究文獻(xiàn)中有充分說(shuō)明。修飾可以發(fā)生在多肽中的任何地方，包括肽主鏈、氨基酸側(cè)鏈及氨基或羧基末端。應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會(huì)，可以在給定多肽中的數(shù)個(gè)位點(diǎn)處存在相同或不同程度的相同類(lèi)型修飾。還有，給定多肽可以包含許多類(lèi)型的修飾。多肽可以因?yàn)楸樵诘鞍谆欠种У?，而且它們可以是環(huán)狀的，有或沒(méi)有分支。環(huán)狀的、分支的和分支環(huán)狀的多肽可以是翻譯后天然過(guò)程的結(jié)果，或者可以通過(guò)合成方法來(lái)生成。修飾包括乙?；?、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黃素的共價(jià)附著、血紅素模塊的共價(jià)附著、核苷酸或核苷衍生物的共價(jià)附著、脂質(zhì)或脂質(zhì)衍生物的共價(jià)附著、磷脂酰肌醇的共價(jià)附著、交聯(lián)、環(huán)化、二硫鍵形成、脫曱基化、共價(jià)交聯(lián)的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸(pyroglutamate)的形成、曱?；-羧化、糖基化、GPI錨形成、羥基化、碘化、曱基化、肉豆蔻?；?、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、異戊二烯基化(prenylation)、外消旋、硒化(selenoylation)、硫酸化、tRNA介導(dǎo)的氨基酸向蛋白質(zhì)的添加諸如精氨?；?、和遍在蛋白化。參見(jiàn)例如PROTEINS誦STRUCTUREANDMOLECULARPROPERTIES,第2版，T.E.Creighton,W.H.FreemanandCompany,NewYork,1993及Wold,F.,PosttranslationalProteinModifications:PerspectivesandProspects,pp.1-12,于POSTTRANSLATIONALCOVALENTMODIFICATIONOFPROTEINS,B.C.Johnson,編，AcademicPress,NewYork:1983;Seifter等，"Analysisforproteinmodificationsandnonproteincofactors，，,Meth.Enzymol.(1990)182:626-646及Rattan等，"ProteinSynthesis:PosttranslationalModificationsandAging",AnnNYAcadSci(1992)663:48-62。術(shù)語(yǔ)"變體，，在用于本文時(shí)是分別與參照多核苷酸或多肽有差異但保留本質(zhì)特性的多核苷酸或多肽。典型的多核苷酸變體與另一參照多核苷酸在核苷酸序列上有差異。變體的核苷酸序列中的變化可以改變或不改變由參照多核芬酸所編碼的多肽的氨基酸序列。核苷酸變化可以導(dǎo)致由參照序列所編碼的多肽中的氨基酸替代、添加、刪除、融合和截短，如下文所討論的。典型的多肽變體與另一參照多肽在氨基酸序列中有差異。通常，差異是有限的，所以參照多肽和變體的序列在整體上是密切相似的且在許多區(qū)域中是相同的。變體和參照多肽可以因一處或多處任意組合的替代、添加、刪除而在氨基酸序列中有差異。替代或插入的氨基酸殘基可以是或不是由遺傳密碼編碼的。多核苷酸或多肽的變體可以是天然存在的，諸如等位變體，或者，它可以是已知非天然存在的變體。多核苷酸和多肽的非天然存在變體可以通過(guò)誘變技術(shù)或通過(guò)直接合成來(lái)生成。變體還可以包括但不限于其一個(gè)或多個(gè)氨基酸側(cè)鏈基團(tuán)具有化學(xué)修飾的多肽或其片段?；瘜W(xué)修飾包括但不限于添加化學(xué)模塊、創(chuàng)建新的鍵、及消除化學(xué)模塊。氨基酸側(cè)鏈基團(tuán)處的修飾包括但不限于賴(lài)氨酸s-氨基的?；?，精氨酸、組氨酸或賴(lài)氨酸的N-烴基化(alkylation),谷氨酸或天冬氨酸羧酸基團(tuán)的烴基化，及谷氨酰胺或天冬酰胺的脫酰胺化。末端氨基的修飾包括但不限于去氨基、N-低級(jí)烴基(loweralkyl)、N-二-低級(jí)烴基、和N-?；揎?。末端羧基的修飾包括但不限于酰胺、低級(jí)烴基酰胺、二烴基酰胺、和低級(jí)烴基酯修飾。另外，一個(gè)或多個(gè)側(cè)鏈基團(tuán)、或末端基團(tuán)可以用蛋白質(zhì)化學(xué)普通技術(shù)人員知道的保護(hù)基團(tuán)來(lái)保護(hù)。在用于本文時(shí)，"片段，，在提及多肽使用時(shí)指其氨基酸序列與完整的天然存在多肽的一部分相同，但非整個(gè)相同的多肽。片段可以是"自立的，，(free-standing)或者被包含在更大多肽內(nèi)而構(gòu)成該更大多肽的一部分或一個(gè)區(qū)域(以單一更大多肽中的單一連續(xù)區(qū)域的形式)。舉例而言，天然存在GLP-l的片段可包括天然存在的氨基酸l-36中的氨基酸7-36。另外，多肽的片段也可以是天然存在的部分序列的變體。例如，包含天然存在GLP-1的氨基酸7-30的GLP-l片段也可以是在其部分序列內(nèi)具有氨基酸替代的變體。在用于本文時(shí)，"綴合物"或"綴合的"指彼此相結(jié)合的兩個(gè)分子。例如，第一多肽可以共價(jià)地或非共價(jià)地結(jié)合第二多肽。第一多肽可以與化學(xué)接頭共價(jià)結(jié)合，或者可以與第二多肽在基因上融合(geneticallyfused),其中所述第一和第二多肽共享共同的多肽主鏈。在用于本文時(shí)，"串聯(lián)取向的"(tandemlyoriented)指作為同一分子的一部分彼此相鄰的兩個(gè)或更多多肽。它們可以是共價(jià)地或非共價(jià)地相連接的。兩個(gè)或更多串聯(lián)取向的多肽可以構(gòu)成同一多肽主鏈的一部分。串聯(lián)取向的多肽可以具有順的或反的取向，和/或可以由其它氨基酸序列分隔開(kāi)。在用于本文時(shí)，"降低，，血液或血漿葡萄糖指在施用降血糖藥后在患者的血液中觀察到血液葡萄糖的量下降。血液或血漿葡萄糖的降低可以按照個(gè)體來(lái)測(cè)量和評(píng)估，或者可以作為一組受試者的變化均值來(lái)測(cè)量和評(píng)估。另外，可以對(duì)一組受治療受試者測(cè)量和評(píng)估血液或血漿葡萄糖中的降低均值，即相對(duì)于基線的變化均值和/或與施用安慰劑的受試者的血液或血漿葡萄糖中的變化均值相比的變化均值。在用于本文時(shí)，"增強(qiáng)GLP-1活性"或"GLP-1活性的增強(qiáng)"指一切(anyandall)與天然存在的GLP-l的活性有關(guān)的活性升高。舉例而言，GLP-1活性的增強(qiáng)可以在給受試者施用至少一種具有GLP-1活性的多肽之后加以測(cè)量，并與施用具有GLP-1活性的多肽之前的同一患者中的GLP-1活性比較或與施用安慰劑的第二受試者比較。在用于本文時(shí)，"與血液葡萄糖升高有關(guān)的疾病"包括但不限于I型和II型糖尿病、葡萄糖耐受不良、高血糖癥、和阿耳茨海默氏病(Alzheimer，sdisease)。在用于本文時(shí)，"共施用"在用于本文時(shí)指給同一患者施用兩種或更多化小時(shí)內(nèi))，或者可以是彼此相隔數(shù)小時(shí)或數(shù)天。例如，可以每周一次施用第一化合物，同時(shí)每天一次共施用第二化合物。在用于本文時(shí)，"最大血漿濃度"或"Cmax，，意為在給哺乳動(dòng)物施用某物質(zhì)(例如具有GLP-1活性的多肽或GLP-1激動(dòng)劑)后在該哺乳動(dòng)物的血漿中觀察到的該物質(zhì)的最高濃度。在用于本文時(shí)，"曲線下面積，，或"AUC，，是某物質(zhì)在血漿中的濃度對(duì)時(shí)間的曲線圖中的曲線下面積。AUC可以是某時(shí)間區(qū)間里瞬間濃度的積分的度量，單位為質(zhì)量x時(shí)間/體積，其也可以表述成摩爾濃度x時(shí)間，諸如nMx天。AUC典型地通過(guò)梯形法來(lái)計(jì)算(例如線性的、線性-對(duì)數(shù))。通常給出零到無(wú)窮的時(shí)間區(qū)間的AUC,而指明其它時(shí)間區(qū)間(例如AUC(tl,t2)，其中tl和t2是區(qū)間的起始和終止時(shí)間)。如此，在用于本文時(shí)"八1;0).2411"指在24小時(shí)時(shí)間段上的AUC，而"AUC(Mh"指在4d、時(shí)的時(shí)間段上的AUC。在用于本文時(shí)，"AUC加權(quán)均值"(weightedmeanAUC)是AUC除以計(jì)算該AUC的時(shí)間上的時(shí)間區(qū)間。例如，AUCo.24h加權(quán)均值代表AUCo.24h除以24小時(shí)。在用于本文時(shí)，"置信區(qū)間"或"CI"是對(duì)應(yīng)于給定概率p，測(cè)量或試-瞼落在其中的區(qū)間，其中p指90。/?；?5。/0CI且是在算術(shù)均值、幾何均值、或最小二乘法均值周?chē)?jì)算得出的。在用于本文時(shí)，幾何均值是自然對(duì)數(shù)換算的數(shù)值的均值，所述自然對(duì)數(shù)換算的數(shù)值通過(guò)取冪來(lái)反向換算，而最小二乘法均值同樣可以是或不是幾何均值，而是從使用固定效應(yīng)(fixedeffect)的方差(ANOVA)模型分析導(dǎo)出的。在用于本文時(shí)，"變異系數(shù)(CV)"是分散的度量，而且定義為標(biāo)準(zhǔn)偏差對(duì)均值的比。它以百分比(％)來(lái)報(bào)告，即將上述計(jì)算結(jié)果乘以100(。/。CV)。在用于本文時(shí)，"Tmax，，指給哺乳動(dòng)物施用某物質(zhì)后觀測(cè)到的該物質(zhì)在該哺乳動(dòng)物的血漿中達(dá)到最大濃度的時(shí)間。在用于本文時(shí)，"血清或血漿半衰期"指給哺乳動(dòng)物施用的物質(zhì)中的半數(shù)通過(guò)正常生物學(xué)過(guò)程從哺乳動(dòng)物的血清或血漿中被代謝或消除掉所需要的時(shí)間。發(fā)明詳述在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了增強(qiáng)人體中的GLP-1活性的方法，該方法包括給所述人體施用包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物，其中所述多肽提供如下參數(shù)所述多肽最大血漿濃度為至少約0.6nM;所述多肽在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)值為至少約3.5nMx天。正如本領(lǐng)域所理解的，可以采用各種方法來(lái)收集、測(cè)量和評(píng)估藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)，諸如血液、血漿和/或其它組織中的化合物濃度。同樣如本領(lǐng)域所理解的，可以采用各種方法來(lái)收集、測(cè)量和評(píng)估各種藥效學(xué)數(shù)據(jù)，諸如但不限于血液和/或血漿和/或其它組織中的葡萄糖、胰島素、C肽、胰高血糖素和其它生物標(biāo)志水平。依照本發(fā)明，至少一種具有GLP-1活性的多肽可以是GLP-1激動(dòng)劑。GLP-1激動(dòng)劑可以選自下組腸降血糖素激素和/或其片段、變體和/或綴合物及腸降血糖素模擬物和/或其片段、變體和/或綴合物。腸降血糖素激素中包括人GLP-1和/或它們的片段、變體和/或綴合物。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案包括可以是但不限于GLP-1或其片段、變體、和/或綴合物的多肽。本發(fā)明的GLP-1片段和/或變體和/或綴合物典型地具有至少一種GLP-1活性。GLP-1或其片段、變體、和/或綴合物可以包含人血清白蛋白。人血清白蛋白可以與GLP-l或其片段和/或變體偶聯(lián)。人血清白蛋白可以在注射前與腸降血糖素激素(諸如GLP-1)和/或腸降血糖素模擬物(諸如毒蜥外泌肽3和毒蜥外泌肽4)和/或它們的片段和/或變體經(jīng)由化學(xué)接頭而綴合，或者，可以在體內(nèi)與天然存在的人血清白蛋白化學(xué)連接(參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利No.6,593，295和美國(guó)專(zhuān)利No.6,329,336，通過(guò)提及完整收入本文)。或者，可以將人血清白蛋白與GLP-1和/或它們的片段和/或變體或其它GLP-1激動(dòng)劑諸如毒蜥外泌肽-3或毒蜥外泌肽-4和/或它們的片段和/或變體加以基因融合。與人血清白蛋白在基因上融合的GLP-l及其片段和/或變體的例子見(jiàn)下列PCT申請(qǐng)WO2003/060071，WO2003/59934,WO2005/003296，WO2005/077042(通過(guò)才是及完整收入本文)。具有GLP-1活性的多肽可以包含至少一個(gè)人GLP-1片段和/或變體。兩個(gè)天然存在的人GLP-1片段呈現(xiàn)于SEQIDNO:2。7891011121314151617His-A1a-G1u-G1y-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp_Va1-Ser-1819202122232425262728Ser-Tyr-Leu-G1u-G1y-G1n-A1a-A1a-Lys-G1u-Phe-293031323334353637Ile-Ala_Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Xaa(SEQIDNO:2)其中第37位Xaa是Gly(此后稱(chēng)作"GLP-l(7-37)")或-腿2(此后稱(chēng)作"GLP-l(7-36)")。GLP-1片段可以包括但不限于包含人GLP-1的氨基酸7-36(GLP-1(7-36))或由其組成的GLP-1分子。GLP-1變體或其片段可以在野生型GLP-1中或者在SEQIDNO:2所示的天然存在的GLP-l片段中包括但不限于一處、兩處、三處、四處、五處或更多氨基酸替代。GLP-1變體或GLP-1片段可以包括但不限于與野生型GLP-1丙氨酸8同源的丙氨酸殘基的替代，該丙氨酸被突變成甘氨酸(此后稱(chēng)作"A8G")(參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利No.5,545,618中披露的突變體，通過(guò)提及完整收入本文)。在有些方面，至少一種GLP-1片段和變體包含GLP-1(7-36(A8G))，而且是基因融合于人血清白蛋白的。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明的多肽包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、或更多個(gè)串聯(lián)取向的GLP-l和/或其片段和/或變體分子，其融合至人血清白蛋白或其變體的N端或C端。其它實(shí)施方案中是這樣的A8G多肽融合至白蛋白或其變體的N端或C端。融合至人血清白蛋白的N端的兩個(gè)串聯(lián)取向的GLP-1(7-36)(A8G)片段和/或變體的一個(gè)例子包含SEQIDNO:l，如圖3所示。在另一方面，至少一種GLP-1片段和變體包含至少兩個(gè)串聯(lián)的GLP-1(7-36(A8G》，而且與人血清白蛋白基因融合。可以將至少兩個(gè)GLP-1(7-36(A8G))基因融合于人血清白蛋白的N端。至少一種具有GLP-1活性的多肽可以包含SEQIDNo:l。GLP-1(7-37)變體可以表述成例如Glu22-GLP-l(7-37)OH，其表示正常見(jiàn)于GLP-1(7-37)OH第22位的甘氨酸被替換為谷氨酸的GLP-1變體；Val8-Glu22-GLP-l(7-37)OH，其表示正常見(jiàn)于GLP-l(7-37)OH第8位的甘氨酸和正常見(jiàn)于第22位的甘氨酸分別被替換為纈氨酸和谷氨酸的GLP-1化合物。GLP-1變體的例子包括但不限于Val""GLP—1(7—37)OHAsp2"€LP-1(7-37)OHGly8~GLP—1(7—37)OHArg2"GLP-1(7-37)OH15Glf"GLP-1(7-37)OHLys2"GIJH(7-37)OHCys22，-1(7-37)OHVal8"Glu"k)LP-l(7-37)OHVal8-Asp2"GLIM(7-37)OHVal8-Arg""GLP-1(7-37)OHVaf-Lys"klLP-1(7-37)OHValkVs2-GLP-1(7-37)OHGlyk:iu。^LP-1(7-37)OHGlyLAsp"k;LP-l(7-37)OHGly8-Arg2-GLP-1(7-37)OHGly"-Lys"k!P-l(7-37)OHGl/"Cys"k;LP-l(7-37)OHG1/"GLP-1(7—36)OHAsp"k]LP-l(7-36)OHArg"^GLP-1(7-36)OHLys2~GLP-1(7-36)OHCys"kiLP-1(7-36)OHVaf""Gl/"GLP-1(7-36)OHVal8-Asp"klLP-1(7-36)OHValLArg、LP-l(7-36)OHVal8-Lys""GLP-1(7-36)OHValS-Cys"kJLP-1(7-36)OHGlyk;i/"GLP—1(7—36)OHGlyLAsp。"GLP-l(7-36)OHGlyLArg。"GLP-1(7-36)OHGly8-Lys"klP-1(7-36)OHGly^Cys22，-1(7-36)OHLys"k!LP-l(7-37)OHVal8-Lys2LGLP-l(7-37)OHGly8—Lys"k;iP-l(7-37)OHHis""GLP-1(7-37)OHVal8-His21"{;LP-1(7-37)OHGly4Us"k;LP-l(7—37)OHLys""GLP—1(7-37)OHVal8-Lys24~GLP-1(7-37)OHGly8-Lys2LGLP-l(7-37)OHGlu"""GLP-1(7-37)OHVal^Glu""""GLP—1(7-37)OHGl/"Glu力""GLP-l(7-37)OHAsp"k!LP-1(7-37)OHVal8—Asp"kJLP—1(7—37)OHGlyLAsp力""CLP-l(7-37)OHGln30，-1(7-37)OHVa"ln30，-1(7-37)OHGly8"Gln""-GLP-1(7-37)OHTyr》"GLP—1(7—37)OHVal8-Tyr30，-1(7-37)OHGly8-Ty/"GLP-1(7-37)OHSe,"GLP—1(7-37)OHValLSer30，-1(7-37)OHGl/-Ser"k;LP-l(7—37)OHHis^kSLP-1(7-37)OHVal8—His"-GLIM(7—37)OHGl/-His"k;LP-l(7—37)OHGl/^GLP-1(7-37)OHVa"l"LP-1(7-37)OHGly8"Gl""GLP-l(7—37)OHAla""GLP-l(7-37)OHVal8-Ala54^115-1(7-37)OHGlyLAla""GLP-l(7-37)OHGl/"GLP-1(7-37)OHVal^Gl/"GLP-1(7-37)OHGly8"Gly""GLP-l(7—37)OHAlaS"GLP-1(7-37)OHValLAla^LP-l(7-37)OHGly8—Ala"k;LP-1(7—37)OHLys1，-1(7-37)OHValLLys"kJLP-1(7-37)OHGl/-Lys"k;LP-l(7-37)OHHis"klLFH(7-37)OHVal8—Hiss~GLP-l(7-37)OHGly8-His^-GLP-1(7-37)OHPro》-GLP—1(7-37)OHVal8-Pro35，-1(7-37)OHGly8-Pros~GLP-l(7_37)OHGlf""GLP—1(7—37)OHGly^Gli^-GLP-1(7-37)OHVals-Ala"~GLP-l(7-37)OHVal8-His"~GLP-1(7-37)OHVa"lu22-Lys23~GLP-l(7-37)OHVal^li/kllua^GLP-l(7-37)OHVal8"Glu2-Ala"-GLP-l(7-37)OHVal8""GlyM-Lyss~GIJM(7—37)OHMLHis"-GLP-1-(7-37)OHGlyS-His"""GLP-1(7-37)OHVal^l/-Ala""GLP-l(7-37)OHGly^Gli^-Ala"""GLP—1(7-37)OHVal8-Lys2-Glif"GLP-1(7-37)OHGly8-Lys"kJlif"GLP—1(7-37)OHVal'-Glu"kJLP-l(7-37)OHGLP-1變體還可以包括但不限于其一個(gè)或多個(gè)氨基酸側(cè)鏈具有化學(xué)修飾的GLP-1或GLP-1片段?；瘜W(xué)修飾包括但不限于添加化學(xué)模塊、創(chuàng)建新的鍵、及消除化學(xué)模塊。氨基酸側(cè)鏈基團(tuán)處的修飾包括但不限于賴(lài)氨酸e-氨基的?；彼?、組氨酸或賴(lài)氨酸的N-烴基化(N-alkylation),谷氨酸或天冬氨酸羧酸基團(tuán)的烴基化(alkylation),及谷氨酰胺或天冬酰胺的脫酰胺化(deamidation)。末端氨基的修飾包括但不限于去氨基(des-amino)、N-低級(jí)烴基(N-loweralkyl)、N-二-低級(jí)烴基(N-di-loweralkyl)、和N-酰基修飾。末端羧基的修飾包括但不限于酰胺、低級(jí)烴基酰胺、二烴基酰胺、和低級(jí)烴基酯修飾。另外，一個(gè)或多個(gè)側(cè)鏈基團(tuán)、或末端基團(tuán)可以用蛋白質(zhì)化學(xué)普通技術(shù)人員知道的保護(hù)基團(tuán)來(lái)保護(hù)。GLP-1片段或變體還可以包括所述片段或變體的GLP-1(7-37)OH的N端和/或C端添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸的多肽。N端或C端添加了氨基酸的GLP-1中的氨基酸以與GLP-l(7-37)OH中相應(yīng)氨基酸相同的數(shù)字來(lái)表示。例如，通過(guò)在GLP-1(7-37)OH的N端添加兩個(gè)氨基酸得到的GLP-1化合物的N端氨基酸位于第5位；而通過(guò)在GLP-l(7-37)OH的C端添加一個(gè)氨基酸得到的GLP-l化合物的C端氨基酸位于第38位。如此，這兩種GLP-1化合物中第12位都由苯丙氨酸占據(jù)而第22位都由甘氨酸占據(jù)，正如GLP-l(7-37)OH中那樣。N端添加了氨基酸的GLP-1的氨基酸1-6可以與位于GLP-1(1-37)OH相應(yīng)位置的氨基酸相同或是其保守替代。C端添加了氨基酸的GLP-1的氨基酸38-45可以與位于胰高血糖素或毒蜥外泌肽-4相應(yīng)位置的氨基酸相同或是其保守替代。在本發(fā)明的另一方面，從每天一次到每月一次給人體施用包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物，而且可以每天一次、每?jī)商煲淮?、每三天一次、每七天一次、?4天一次、每四周一次和/或每月一次施用。在另一方面，給人體施用第一劑和第二劑包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物。所述第一劑和所述第二劑可以是相同的，或者可以是不同的。每一劑的至少一種具有GLP-1活性的多肽可以包含約0.25約1000mg所述至少一種具有GLP-1活性的多肽。各劑可以包括但不限于0.25iig、0.25mg、lmg、3mg、6mg、16mg、24mg、48mg、60mg、80mg、104mg、20mg、400mg、,mg直至約1000mg所述至少一種具有GLP-l活性的多肽。在本發(fā)明的另一方面，包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物所提供的具有GLP-1活性的多肽的最大血漿濃度為至少約0.6nM-約319nM，而具有GLP-1活性的多肽在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)值為至少約3.5-約1936nMx天。在有些情況中，具有GLP-1活性的多肽的血清半衰期是約4-約7天。在另一方面，具有GLP-l活性的多肽的Tmax數(shù)值是約l天-約5天。在有些情況中，包含所述至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物所提供的所述至少一種具有GLP-l活性的多肽的最大血漿濃度為至少約8nM-約54nM，且所述至少一種具有GLP-1活性的多肽在一周時(shí)間段里的AUC(第l周)數(shù)值為至少約29nMx天-約245nMx天。在另一方面，包含所述至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物在單個(gè)劑量的所述至少一種具有GLP-1活性的多肽之后所提供的所述至少一種具有GLP-1活性的多肽的最大血漿濃度為至少約8nM-約54nM，所提供的單劑后AUC(0-^)數(shù)值為至少約99nMx天-約637nMx天。依照本發(fā)明施用包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物的任何人體可以具有高血糖癥、葡萄糖耐受不良、和/或糖尿病，其可以是T2DM。還提供了這樣的方法，其中所述至少一種具有GLP-1活性的多肽降低所述人體中的血漿葡萄糖，其中在給T2DM人群樣本施用所述包含所述至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物后，血漿葡萄糖的AUCo-24h加權(quán)均值在約l周的時(shí)間段里與安慰劑相比顯著降低。在給T2DM人群樣本施用至少一劑所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物后至少一周的時(shí)程里，血漿葡萄糖的AUC。-24h均值(其可以作為相對(duì)于基線的變化來(lái)測(cè)量)與施用安慰劑的受試者中的變化相比可以降低約20mg/dL(其95%置信區(qū)間(-32.4,-7.8))至至少約49mg/dL(其95%置信區(qū)間(-76.6，-21.4))或更多。血漿葡萄糖中的降低可以是劑量依賴(lài)性的。另外，所述至少一種具有GLP-1活性的多肽降低所述人體中的血漿葡萄糖，其中空腹血漿葡萄糖可以在給T2DM人群樣本施用所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物后約一周的時(shí)間段里顯著降低。在T2DM人群中，空腹血漿葡萄糖均值(作為相對(duì)于基線的變化來(lái)測(cè)量)與安慰劑相比可以降低約7mg/dL(其95%置信區(qū)間(-25.9,+11.2)至約50.7mg/dL(其95%置信區(qū)間(-75.4,-26.0))或更多?？崭寡獫{葡萄糖均值(作為相對(duì)于基線的變化來(lái)測(cè)量)可以降低約4mg/dL(其95%置信區(qū)間(-16.5，+8.2))至約35mg/dL(其95%置信區(qū)間(-54.1，-15.6))或更多。另夕卜，在給T2DM人群樣本施用至少一劑所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物后至少一周的時(shí)程里，餐后血漿葡萄糖(AUCo-4h均值)與基線相比可以降低約6mg/dL(95%置信區(qū)間(-27.2，+14.9))至約53mg/dL(95%置信區(qū)間(-64.7，-40.8))或更多。還提供了這樣的方法，其中與所述人體的安慰劑相比，所述具有GLP-1活性的多肽降低所述人體中的血漿果糖胺(作為相對(duì)于基線的變化)，在施用至少一劑所述包含所述至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物后至少兩周的時(shí)程里降低了至少約34pM/L。本發(fā)明的具有GLP-1活性的多肽可以在所述人體的腿部、臂部、或腹部進(jìn)行皮下施用。本文中還提供了至少一種具有GLP-1活性的多肽在制備用于治療與血液葡萄糖升高有關(guān)的疾病的藥物中的用途，所述與血液葡萄糖升高有關(guān)的疾病包括但不限于II型糖尿病，其中所述多肽配制成供施用，以提供至少約0.6nM的所述多肽的最大血漿濃度和至少約3.5nMx天的所述多肽在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)值。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了用于增強(qiáng)人體中的GLP-1活性的方法，該方法包括給所述人體施用包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑的組合物，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑所提供的所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑的最大血漿濃度為至少約21.2pM-約51.6pM或更大，所提供的所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑在一周時(shí)間段里的曲線下面積lt值為至少約149pMx天-約361pMx天。在一個(gè)方面，GLP-1激動(dòng)劑所提供的所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑的最大血漿濃度為至少約1.4nM,所提供的所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)值為至少約8nMx天。GLP-1激動(dòng)劑選自下組腸降血糖素激素和/或其片段、變體和/或綴合物及腸降血糖素模擬物和/或其片段、變體和/或綴合物。在另一方面，至少一種GLP-l激動(dòng)劑的血清半衰期是約4-約7天。所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑的Tmax數(shù)值是約1天-約5天。在本發(fā)明的一個(gè)方面，接受至少一種GLP-1激動(dòng)劑治療的人體可患有高血糖癥和/或糖尿病。所述人體可患有T2DM。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了這樣的方法，其中所述包含所述GLP-1激動(dòng)劑的組合物降低所述人體中的血漿葡萄糖，且其中所述人體的血漿葡萄糖的八1;0).2411加權(quán)均值在施用所述包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑的組合物后約一周的時(shí)間段里在臨床上和統(tǒng)計(jì)上顯著降低。所述人體的安慰劑相比，作為相對(duì)于基線的變化而測(cè)量的血漿葡萄糖AUCo.24h加權(quán)均值與在施用至少一劑所述包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑的組合物后至少一周的時(shí)程里可以降低至少約5mg/dL、10mg/dL、15mg/dL和/或20mg/dL。在其它方面，所述包含所述GLP-1激動(dòng)劑的組合物降低所述人體中的血漿葡萄糖，其中所述人體的空腹血漿葡萄糖在施用所述包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑的組合物后約一周的時(shí)間段里在臨床上和統(tǒng)計(jì)上顯著降低。在另一方面，提供了這樣的方法，其中所述包含GLP-1激動(dòng)劑的組合物降低所述人體中的血漿葡萄糖，且其中餐后血漿葡萄糖在施用至少一劑所述包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑的組合物后降低。在本發(fā)明的另一方面，每七天一次施用包含GLP-1激動(dòng)劑的組合物?；蛘?，可以每天一次、每?jī)商煲淮巍⒚咳煲淮?、每?jī)芍芤淮巍⒚克闹芤淮魏?或每月一次施用包含GLP-1激動(dòng)劑的組合物。可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的數(shù)種路徑來(lái)施用GLP-1激動(dòng)劑，包括但不限于皮下注射、肌肉內(nèi)注射、靜脈內(nèi)注射、經(jīng)粘膜、經(jīng)口、和/或通過(guò)吸入。在本發(fā)明的另一方面，包含GLP-1激動(dòng)劑的組合物進(jìn)一步包含一種或多種選自下組的化合物過(guò)氧化物酶體增殖激活受體(PPAR)配體、p塞唑烷二酮(例如格列酮)、二甲雙胍、胰島素、和磺酰脲。在另一方面，提供了這樣的方法，其包括與一種或多種選自下組的化合物共施用至少一種GLP-1激動(dòng)劑過(guò)氧化物酶體增殖激活受體(PPAR)配體、噻唑烷二酮、DPP-IV抑制劑、二曱雙胍、胰島素、和石黃酰脲。包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑的組合物可以在至少一種具有GLP-1活性的多肽之外包含一種或多種這些化合物。另外，提供了用于降低有所需要的人體中的血液葡萄糖水平的方法，該方法包括給所述人體施用包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑的組合物，其中所述人體正在進(jìn)行控制葡萄糖的節(jié)食(onadietforcontrollingglucose)。本發(fā)明還提供了至少一種GLP-1激動(dòng)劑在制備用于治療與血液葡萄糖升高有關(guān)的疾病的藥物中的用途，所述與血液葡萄糖升高有關(guān)的疾病包括但不限于II型糖尿病，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑配制成供施用，以提供至少約21.2pM的所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑最大血漿濃度和至少約149pMx的所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)值。本發(fā)明提供了使用如本文所述的GLP-1和具有GLP-1活性的多肽治療與血液葡萄糖升高有關(guān)的疾病的方法，所述與血液葡萄糖升高有關(guān)的疾病包括但不限于II型糖尿病。還提供了GLP-1激動(dòng)劑和具有GLP-1活性的多肽在制備藥物中的用途，所述藥物配制成供在本文所述的每一種治療方法中施用。本文中還提供了能夠增強(qiáng)人體中的GLP-1活性的藥物組合物，其包含具有GLP-1活性的多肽和/或GLP-l激動(dòng)劑，且配制成供本文所述方法和用途之用。熟練技術(shù)人員會(huì)理解用于測(cè)量和計(jì)算本文所述藥動(dòng)學(xué)(例如但不限于Cmax、AUC、Tmax、血清半衰期)和藥效學(xué)(例如但不限于血清、血漿和血液葡萄糖水平)參數(shù)的各種方法。另外，熟練技術(shù)人員會(huì)理解用于進(jìn)行本文所述藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)參數(shù)的統(tǒng)計(jì)比較(例如但不限于自基線到治療后的變化的比較和/或各治療組間的比較)和/或分析的各種方法。另外，熟練技術(shù)人員會(huì)理解且能夠采用用于收集和分析藥動(dòng)學(xué)、藥效學(xué)和其它臨床數(shù)據(jù)的各種其它方法。實(shí)施例下列實(shí)施例例示本發(fā)明的多個(gè)非限制性方面。對(duì)于下列實(shí)施例，除非另有說(shuō)明，SEQIDNO:l自含2.8。/。甘露醇、4.2%二水合海藻糖、0.01%聚山梨醇酯80、20mMpH7.2的磷酸鹽緩沖液的凍干形式配制成25mg/mL。包含SEQIDNO:1的組合物根據(jù)相應(yīng)劑量給藥的需要用注射用水稀釋。實(shí)施例l這是一項(xiàng)單盲式、以安慰劑為對(duì)照的劑量上升研究，其中將包含SEQIDNO:l(0.25mg-104mg)的藥物組合物皮下施用于健康受試者的腹部。有39名健康男性和女性受試者參加了研究。五組健康受試者通過(guò)腹部皮下注射接受如下兩劑每周一次的、劑量上升的包含SEQIDNO:1的藥物組合物第l組(0.25mg+lmg);第2組(3mg+6mg);第3組(16mg+24mg);第4組(48mg+60mg);和第5組(80mg+104mg)。在第l-4組中，有6名受試者隨機(jī)化接受活性化合物，有2名受試者隨機(jī)化接受安慰劑。在第5組中，有5名受試者隨機(jī)化接受活性化合物，有2名受試者隨機(jī)化接受安慰劑。這樣，有29名受試者接受活性治療，有10名受試者接受安慰劑。對(duì)包含SEQIDNO:l的藥物組合物的暴露在所測(cè)試的劑量范圍里以大于與劑量成正比的方式增加。對(duì)于所有劑量，SEQIDNO:l的半衰期是大約7天，Tmax范圍為2-4天。接受活性化合物的健康受試者中的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)總結(jié)于表l。接受安慰劑的受試者的藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)未總結(jié)。AUC(Wkl)表示自第一劑的時(shí)刻起至第一劑后一周時(shí)止計(jì)算得到的濃度對(duì)時(shí)間曲線下面積。AUC(Wk2)表示自第二劑的時(shí)刻起至第二劑后一周時(shí)止計(jì)算得到的濃度對(duì)時(shí)間曲線下面積。Cmax(Wk1)表示自第一劑的時(shí)刻起至第一劑后一周時(shí)止觀察到的最大濃度。Cmax(Wk2)表示自第二劑的時(shí)刻起至第二劑后一周時(shí)止觀察到的最大濃度。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>數(shù)據(jù)表述成幾何均值(。/oCV)NC-未計(jì)算-濃度在測(cè)定法的定量限以下實(shí)施例2這是在T2DM受試者中進(jìn)行的一項(xiàng)單盲式、以安慰劑為對(duì)照的多劑量研究。有54名男性和女性受試者參加了研究。受試者或是接受了飲食控制，或是服用二甲雙胍、磺酰脲、或二曱雙胍與磺酰脲的組合。在研究開(kāi)始之前就服用二甲雙胍和/或磺酰脲的受試者在第一劑前2周從這些治療中淘汰出去。受試者如下隨機(jī)化接受腹部皮下注射每周一次、持續(xù)兩周的安慰劑或包含SEQIDNO:l的藥物組合物第l組(9mg+9mg;4名安慰劑，14名活性劑)；第2組(16mg+16mg;5名安慰劑，12名活性劑)；第3組(32mg+32mg;5名安慰劑，14名活性劑)。有40名受試者隨機(jī)化接受活性劑治療，有14名受試者隨機(jī)化接受安慰劑。有53名受試者完成了研究。第2組中有一名隨機(jī)化接受活性劑治療的受試者在施用第二劑(16mg)之前退出了研究。第2組中另有一名隨機(jī)化接受活性劑的受試者只接受了第一劑(16mg)。這名受試者沒(méi)有包括在藥動(dòng)學(xué)分析中。有3名受試者被錯(cuò)誤給藥(第3組中2名安慰劑受試者和1名隨機(jī)化接受活性劑治療的受試者(32mg))。被錯(cuò)誤給藥的受試者沒(méi)有包括在任何藥動(dòng)學(xué)分析中。對(duì)于所有劑量，SEQIDNO:l的半衰期是大約4-6天。Tmax范圍為服藥后約l-約5天，沒(méi)有明顯的劑量依賴(lài)性。接受活性化合物的受試者的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)總結(jié)于圖l和表2。隨機(jī)化接受安慰劑的受試者沒(méi)有包括在圖l或表2中。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>數(shù)據(jù)表述成幾何均值(。/。CV)1.n=112.n=10實(shí)施例3此實(shí)施例中提供了實(shí)施例2中所述受試者的藥效學(xué)譜。受試者接受安慰劑或包含SEQIDN0:1的藥物組合物的皮下注射，如下每周一次、持續(xù)兩周第l組(9mg+9mg;4名安慰劑，14名活性劑)；第2組(16mg+16mg;5名安慰劑，12名活性劑)；第3組(32mg+32mg;5名安慰劑，14名活性劑)。受試者在第l天和第8天給藥。評(píng)估了SEQIDNO:1對(duì)T2DM受試者中的葡萄糖和果糖胺的效應(yīng)。T2DM受試者或是在控制飲食或是在服用二曱雙胍、磺酰脲、或二曱雙胍和磺酰脲的組合，并自第一劑前2周起放棄了這些治療。在基線及第一劑和第二劑后24小時(shí)評(píng)估了空腹和24小時(shí)葡萄糖譜。在基線和第3天、第21天和最后一次給藥后隨訪(第56天或第63天)時(shí)評(píng)估了果糖胺。所有接受正確隨機(jī)化治療的受試者都包括在藥效學(xué)分析中。第2組中有1名受試者在第l天接受了正確給藥，但在第二劑之前退出了。該受試者被包括在第8天之前收集的數(shù)據(jù)的藥動(dòng)學(xué)分析中，但被排除在第8天服藥后的PD總結(jié)之外。有2名隨機(jī)化接受安慰劑而被錯(cuò)誤給藥的受試者被排除在所有藥效學(xué)分析之外。第3組中有1名隨機(jī)化接受32mg活性化合物的受試者被錯(cuò)誤給藥，且被排除在所有藥效學(xué)分析之外。在所有劑量水平上均觀察到24小時(shí)葡萄糖加權(quán)均值和空腹血漿葡萄糖(FPG)濃度在臨床上和統(tǒng)計(jì)上顯著降低。葡萄糖數(shù)據(jù)顯示于表3。與安慰劑相比接受活性化合物的T2DM受試者中的空腹和24小時(shí)葡萄糖降低<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>葡萄糖數(shù)值以mg/dL為單位；與安慰劑相比，相對(duì)于基線的變化在給藥后第13天和第21天在所有劑量水平都看到果糖胺的顯著降低。由于SEQIDN0:1的估計(jì)半衰期，預(yù)期最后一次隨訪(第56天或第63天)不會(huì)有降低。接受活性化合物的T2DM受試者中的果糖胺與安慰劑受試者的比較總結(jié)于表4。表4:與安慰劑受試者相比接受活性化合物的T2DM受試者中的果糖胺的總結(jié)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>果糖胺數(shù)值以pmol/L為單位；與安慰劑相比，相對(duì)于基線的變化實(shí)施例4這是在健康志愿者和T2DM受試者中進(jìn)行的一項(xiàng)標(biāo)簽開(kāi)放式(open-label)、隨機(jī)化的單劑量研究。有62名男性和女性受試者參加了研究。T2DM受試者或是在進(jìn)行飲食控制，或是在服用二曱雙胍或噻唑烷二酮，且在整個(gè)研究過(guò)程繼續(xù)進(jìn)行他們先前的治療。T2DM受試者通過(guò)皮下注射接受包含SEQIDNO:1的藥物組合物，其為16mg(腹部(N二8);臂部(N:7);或腿部(N二7))或64mg(腹部(N-8);臂部(N二8);或腿部(N二8))的單劑。健康志愿者通過(guò)腹部皮下注射接受16mg(N-8)或64mg(N=8)活性化合物。這樣，有16名健康的正常志愿者接受活性化合物，有46名T2DM受試者接受活性化合物。在T2DM受試者中，所有注射部位之間暴露是相當(dāng)?shù)?，而且暴露以稍大于正比的方式增加。暴露在健康受試者和T2DM受試者之間是相當(dāng)?shù)?。濃度鐠和AUC箱線圖分別呈現(xiàn)于圖1和圖2。藥動(dòng)學(xué)參數(shù)總結(jié)于表5。AUC(Wkl)表示自給藥的時(shí)刻起至給藥后一周時(shí)止計(jì)算得到的濃度對(duì)時(shí)間曲線下面積。AUC(O-w)表示自服藥的時(shí)刻起根據(jù)SEQIDNO:l的清除速率外推至無(wú)窮時(shí)間的濃度對(duì)時(shí)間曲線下面積。對(duì)于6名接受16mg劑量水平的受試者，可用的數(shù)據(jù)無(wú)法估算SEQIDN0:1的清除速率。因此，不可能外推至無(wú)窮時(shí)間，也沒(méi)有為這些受試者計(jì)算AUC(0-w)。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>數(shù)據(jù)表述成幾何均值(。/。CV)'n=6實(shí)施例5此實(shí)施例中提供了實(shí)施例4中所述受試者的藥效學(xué)譜。在此研究中調(diào)查了單個(gè)劑量的包含SEQIDNO:l的藥物組合物的藥效學(xué)譜，包括SEQIDNO:l對(duì)T2DM受試者中的葡萄糖、胰島素、胰高血糖素和C肽的效應(yīng)。T2DM受試者或是在控制飲食，或是在服用二曱雙胍或p塞唑烷二酮，且在整個(gè)研究中繼續(xù)進(jìn)行先前的治療。受試者如下接受單個(gè)劑量的包含SEQIDNO:l的藥物組合物對(duì)16名健康的正常志愿者通過(guò)腹部皮下注射施用單劑16mg或64mg,或者對(duì)46名T2DM在臂部、腿部或腹部施用單劑16mg或64mg，如實(shí)施例4所述。給藥后48小時(shí)在早餐前評(píng)估空腹葡萄糖。在給藥后48小時(shí)在早餐后4小時(shí)里評(píng)估餐后(4小時(shí))葡萄糖譜。每個(gè)施用劑量的葡萄糖降低在各注射部位間是一致的。在64mg的劑量觀察到餐后葡萄糖(4小時(shí)葡萄糖加權(quán)均值)和空腹血漿葡萄糖(FPG)在臨床上和統(tǒng)計(jì)上顯著的降低。葡萄糖數(shù)據(jù)顯示于表6。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>葡萄糖數(shù)值以mg/dL為單位；相對(duì)于基線的變化本申請(qǐng)要求優(yōu)先權(quán)的任何專(zhuān)利申請(qǐng)都通過(guò)提及以上文關(guān)于某些出版物和參考文獻(xiàn)所述方式完整收入本文。權(quán)利要求1.一種用于增強(qiáng)人體中GLP-1活性的方法，該方法包括給所述人體施用包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物，其中所述多肽提供所述多肽的最大血漿濃度為至少約0.6nM；所述多肽在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)值為至少約3.5nMx天。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種具有GLP-1活性的多肽包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑。3.權(quán)利要求2的方法，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑選自下組腸降血糖素激素和/或其片段、變體和/或綴合物，及腸降血糖素模擬物和/或其片段、變體和/或綴合物。4.權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種具有GLP-1活性的多肽包括至少一種與人血清白蛋白融合的人GLP-1片段和/或變體。5.權(quán)利要求4的方法，其中所述至少一種GLP-1片段和變體包括GLP-1(7-36(A8G))。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述至少一種GLP-1片段和變體與人血清白蛋白在基因上融合。7.權(quán)利要求6的方法，其中所述至少一種GLP-1片段和變體包含至少兩個(gè)串聯(lián)的GLP-1(7-36(A8G))，并且與人血清白蛋白在基因上融合。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述至少兩個(gè)GLP-1(7-36(A8G))與人血清白蛋白的N末端在基因上融合。9.權(quán)利要求l的方法，其中所述至少一種具有GLP-1活性的多肽包含SEQIDNo:l。10.權(quán)利要求l的方法，其中每七天一次給所述人體施用所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物。11.權(quán)利要求l的方法，其中每14天一次給所述人體施用所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物。12.權(quán)利要求l的方法，其中每4周一次給所述人體施用所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物。13.權(quán)利要求l的方法，其中每月一次給所述人體施用所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物。14.權(quán)利要求l的方法，其中給所述人體施用所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物的第一劑和第二劑。15.權(quán)利要求14的方法，其中所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物的第一劑和第二劑是相同的。16.權(quán)利要求14的方法，其中所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物的第一劑包含約0.25mg-約1OOOmg的至少一種具有GLP-1活性的多肽。17.權(quán)利要求14的方法，其中所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物的第二劑包含約0.25mg-約1000mg的至少一種具有GLP-l活性的多肽。18.權(quán)利要求l的方法，其中所述包含至少一種具有GLP-l活性的多肽的組合物提供所述至少一種具有GLP-1活性的多肽的最大血漿濃度為至少約0.6nM-約319nM;所述至少一種具有GLP-1活性的多肽在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)值為至少約3.5nMx天-約1936nMx天。19.權(quán)利要求l的方法，其中所述包含所述至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物提供所述至少一種具有GLP-1活性的多肽的最大血漿濃度為至少約8nM-約54nM;所述至少一種具有GLP-1活性的多肽在一周時(shí)間段里的AUC(第l周)數(shù)值為至少約29nMx天-約245nMx天。20.權(quán)利要求l的方法，其中所述包含所述至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物提供所述至少一種具有GLP-1活性的多肽最大血漿濃度為至少約8nM-約54nM，所述至少一種具有GLP-1活性的多肽的在一周時(shí)間段里的單劑后AUC(0-°°)數(shù)值為至少約99nMx天-約637nMx天。21.權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種具有GLP-l活性的多肽的血清半衰期是約4天-約7天。22.權(quán)利要求l的方法，其中所述至少一種具有GLP-l活性的多肽的Tmax數(shù)值是約l天-約5天。23.權(quán)利要求l的方法，其中所述人體具有高血糖癥。24.權(quán)利要求l的方法，其中所述人體具有糖尿病。25.權(quán)利要求23的方法，其中所述人體具有II型糖尿病。26.權(quán)利要求25的方法，其中所述至少一種具有GLP-1活性的多肽降低所述人體中的血漿葡萄糖，其中作為相對(duì)于基線的變化而測(cè)量的血漿葡萄糖AUC?！?4h加權(quán)均值在施用所述包含至少一種具有GLP-l活性的多肽的組合物后約1周的時(shí)間段內(nèi)與所述人體的安慰劑相比在臨床上和統(tǒng)計(jì)上顯著降低。27.權(quán)利要求26的方法，其中作為相對(duì)于基線的變化而測(cè)量的血漿葡萄糖AUC。-24h加權(quán)均值在施用至少一劑所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物后至少一周的時(shí)程里與所述人體的安慰劑相比降低了至少約20mg/dL。28.權(quán)利要求25的方法，其中所述至少一種具有GLP-1活性的多肽降低所述人體中的血漿葡萄糖，其中作為相對(duì)于基線的變化而測(cè)量的空腹血漿葡萄糖在施用所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物后約1周的時(shí)間段里與所述人體的安慰劑相比在臨床上和統(tǒng)計(jì)上顯著降低。29.權(quán)利要求28的方法，其中所述作為相對(duì)于基線的變化而測(cè)量的空腹血漿葡萄糖在施用至少一劑所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物后至少一周的時(shí)程里與所述人體的安慰劑相比降低了至少約7.0mg/dL。30.權(quán)利要求25的方法，其中所述作為相對(duì)于所述人體的基線的變化而測(cè)量的空腹血漿葡萄糖在施用至少一劑所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物后至少一周的時(shí)程里降J氐了至少約4mg/dL。31.權(quán)利要求25的方法，其中所述至少一種具有GLP-1活性的多肽降低所述人體中的血漿葡萄糖，其中作為相對(duì)于所述人體的基線的變化而測(cè)量的餐后血漿葡萄糖AUQMh在施用至少一劑所述包含至少一種具有GLP-l活性的多肽的組合物后至少一周的時(shí)程里降低了至少約6.0mg/dL。32.權(quán)利要求25的方法，其中所述至少一種具有GLP-1活性的多肽降低所述人體中的果糖胺，其中作為相對(duì)于基線的變化的血漿果糖胺與所述人體的安慰劑相比在施用至少一劑所述包含至少一種具有GLP-1活性的多肽的組合物后至少兩周的時(shí)程里降低了至少約34pM/L。33.權(quán)利要求25的方法，其中在所述人體的腿部、臂部、或腹部用所述具有GLP-1活性的多肽進(jìn)行皮下施用。34.—種用于增強(qiáng)人體中的GLP-1活性的方法，該方法包括給所述人體施用包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑的組合物，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑提供所述至少一種GLP-l激動(dòng)劑的最大血漿濃度為至少約21.2pM，所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)值為至少約149pMx天。35.權(quán)利要求34的方法，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑提供所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑的最大血漿濃度為至少約1.4nM，所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)值為至少約8nMx天。36.權(quán)利要求34的方法，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑選自下組腸降血糖素激素和/或其片段、變體和/或綴合物，及腸降血糖素模擬物和/或其片段、變體和/或綴合物。37.權(quán)利要求34的方法，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑的血清半衰期是約4天-約7天。38.權(quán)利要求34的方法，其中所述至少一種GLP-l激動(dòng)劑的Tmax數(shù)值是約l天-約5天。39.權(quán)利要求34的方法，其中所述人體具有高血糖癥。40.權(quán)利要求34的方法，其中所述人體具有糖尿病。41.權(quán)利要求40的方法，其中所述人體具有II型糖尿病。42.權(quán)利要求34的方法，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑降低所述人體中的血漿葡萄糖，其中所述人體的血漿葡萄糖AUQ)-24h加權(quán)均值在施用包含所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑的所述組合物后約1周的時(shí)間段里在臨床上和統(tǒng)計(jì)上顯著降低。43.權(quán)利要求34的方法，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑降低所述人體的血漿葡萄糖，其中所述人體的空腹血漿葡萄糖在施用包含所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑的所述組合物后約1周的時(shí)間段里在臨床上和統(tǒng)計(jì)上顯著降低。44.權(quán)利要求34的方法，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑降低所述人體的血漿葡萄糖，其中所述人體的餐后血漿葡萄糖在施用包含所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑的所述組合物后約1周的時(shí)間段里在臨床上和統(tǒng)計(jì)上顯著降低。45.權(quán)利要求34的方法，其中以選自下組的給藥方案施用所述包含所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑的組合物每天一次、每?jī)商煲淮?、每三天一次、每七天一次、每四周一次、和每月一次?6.—種能夠增強(qiáng)人體中的GLP-1活性的藥物組合物，其包含至少一種具有GLP-1活性的多肽，其中所述多肽在施用給人體時(shí)提供所述多肽的最大血漿濃度為至少約0.6nM，所述多肽在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)4直為至少約3.5nMx天。47.—種能夠增強(qiáng)人體中的GLP-1活性的藥物組合物，其包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑，其中所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑提供所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑的最大血漿濃度為至少約21.2pM，所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑在一周時(shí)間段里的曲線下面積數(shù)值為至少約149pMx天。全文摘要本發(fā)明涉及施用降血糖藥和/或GLP-1激動(dòng)劑的方法和藥物組合物，其中所述降血糖藥的平均最大血漿濃度(Cmax)數(shù)值和/或曲線下面積(AUC)數(shù)值升高和/或不變。文檔編號(hào)C07K14/605GK101516391SQ200780034106公開(kāi)日2009年8月26日申請(qǐng)日期2007年9月12日優(yōu)先權(quán)日2006年9月13日發(fā)明者杰茜卡·E·馬修斯,蘇珊·E·沃克,馬克·A·布什申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司