專利名稱：：可溶性腺苷酸環(huán)化酶抑制劑的制作方法可溶性腺苷酸環(huán)化酶抑制劑本發(fā)明涉及可溶性腺苷酸環(huán)化酶的抑制劑及其生產(chǎn)和用于生產(chǎn)避孕用藥品的用途。目前有大量的現(xiàn)代避孕方法用于女性，但很少有用于男性節(jié)育的方法(避孕套和絕育)。迫切需要開發(fā)可靠的、新的男性節(jié)育方法。由"男性避孕藥(malepill)"導(dǎo)致的不育應(yīng)該是可逆的，并且應(yīng)該與現(xiàn)有的用于女性的方法同樣有效。不育應(yīng)該較快產(chǎn)生，并且應(yīng)該持續(xù)盡可能長(zhǎng)的時(shí)間。這種避孕方法應(yīng)該不具有副作用，并且制劑可以是非激素性和激素性的。可能的切入點(diǎn)是調(diào)節(jié)在卵子受精中起重要作用的酶可溶性腺苷酸環(huán)化酶(sAC)的活性。這種酶主要在睪丸干細(xì)胞中表達(dá)并存在于成熟精子中。在1999年，作者Levin和Buck成功地從大鼠睪丸中純化并克隆了sAC的同工型(Proc.Natl.Acad.Sci.USA96(1):79-84)。重組大鼠酶可以由碳酸氫鹽刺激。已利用抗體證明所述酶的催化域定位于睪丸、精子、腎和脈絡(luò)叢。這些公開是申請(qǐng)WO01/85753的主題，其在美國(guó)被授權(quán)(US6544768)。WO01/21829(Conti等J要求專利保護(hù)編碼人sAC同工型的分離的多核苷酸序列、分離的sAC多肽和試驗(yàn)系統(tǒng)，禾偶它們可能能夠鑒別抑制sAC活性的物質(zhì)。已公開了以下的可能性利用這些物質(zhì)實(shí)現(xiàn)活動(dòng)精子計(jì)數(shù)的可逆性降低，以及它們作為控制男性生育的方法的用途。JohnHerr工作組證明從精子中分離和表征人sAC同工型。WO02/20745除了要求專利保護(hù)編碼sAC的核酸之外，還要求專利保護(hù)用于鑒別調(diào)節(jié)人sAC的表達(dá)或活性的物質(zhì)的試驗(yàn)系統(tǒng)。例如，這些化合物可能選擇性地抑制sAC的活性，從而使精子喪失使卵子受精的能力。因此，這些sAC抑制劑可能用作非激素避孕用藥品。但是，已知的sAC抑制劑表現(xiàn)出特定的問題兒茶酚雌激素(T.Braun，ProcSocExpBiolMed1990，194(1):58ff)和棉酚(KLOlgiati,ArchBiochemBiophys1984,231(2):411ff)本身具有毒性，而腺苷類似物僅具有非常微弱的抑制作用(MABrown和ERCasillas，JAndrol1984,5:361ff)。Zippin等所描述的重組人sAC的抑制劑在某種程度上更為有效(IC5。510nM)(JHZippin等人，JCellBiol2004，164(4):527ff)。為了提供用于男性節(jié)育的方法，對(duì)快速、可逆和成功地導(dǎo)致不育的物質(zhì)的需求越來越大。這個(gè)問題通過提供通式I的化合物解決，其中使用以下的符號(hào)-R1氫、鹵素、CF3、任選地為多飽和的且任選地被多取代的C3-CV環(huán)垸基；或者C廣CV烷基、d-CV芳基、C廣C6-?；?、鹵代-C廣CV烷基、d-C6-垸基-CrC6-垸基、d-C6-烷基-d-CV?；?、Cr(V酰基-d-C6-?；廣C6-烷基-C廣Q-芳基、C廣C6-芳基-C廣C6-垸基或CF3基團(tuán)，其中d-CV垸基、CrCV芳基、C廣C6-?；Ⅺu代-C廣C6-垸基、C廣C6-垸基-C,-C6-垸基、d-C6-烷基-d-C6-酰基、CrC6-?；?C廣Q-酰基、CrC6-垸基-CrCV芳基或CrC6-芳基-d-CV烷基可以任選地插入單個(gè)或多個(gè)、相同或不同的氧、硫或氮；或者磺酰基-CVCV烷基、氨磺酰或氰基基團(tuán)，R2鹵素、CF3、任選地為多飽和的且任選地被多取代的CVC6-環(huán)烷基；或者C廣C6-烷基、C廣C6-芳基、C廣C6-?；?、鹵代-C廣CV烷基、d-CV烷基-CrC6-烷基、CrC6-垸基-d-C6-?；?、CrC6-?；?d-Q-?；VC6-烷基-d-CV芳基、CrC6-芳基-d-C6-垸基或CF3基團(tuán)，其中CVC6-烷基、d-Q-芳基、d-Q-?；?、卣代-C-C6-垸基、C廣CV垸基-CrC6-垸基、CrC6-烷基-d-CV?；?、d-CV酰基-C廣(V?；?、d-C6-垸基-CrCV芳基或CrCV芳基-d-C6-烷基可以任選地插入單個(gè)或多個(gè)、相同或不同的氧、硫或氮；或者磺?；?CVC6-烷基、氨磺?；蚯杌鶊F(tuán)，R3CVd2-芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、可以任選地被單或多取代的CVCV烷基或CrC6-?；?；或者Q-d2-芳基，其可以用以下基團(tuán)取代d-CV烷氧基、羥基、氰基、COr(C廣C6-烷基)、N-(C廣CV烷基)2、CO-NR4R5或CF3;C5-dr雜芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、Q-C6-垸基、Q-CV酰基、d-CV烷氧基、羥基、氰基、c02-(C廣C6-垸基)、N-(d-C6-垸基)2、CO-NR4r5或CF3;或者C3-C6-環(huán)烷基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、CF3、羥基、氰基、c02-(C廣C6-烷基)、C廣C6-烷基、C廣CV酰基、N-(CrCV烷基)2、CO-NR4R5或d-CV烷氧基，R4氫；CVC6-環(huán)垸基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代C廣CV烷基、d-Q-?；?、d-CV烷氧基或CF3;CVd2-芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、d-C6-烷基、C廣Q-酰基、CKV烷氧基、N畫d-CV烷基-CrQ-垸基、CF3或氰基；或者Cs-d2-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代卣素、d-C6-垸基、d-Q-酰基、d-CV烷氧基、N-CrC6-垸基-CrC6-烷基、CF3或氰基；或者可以任意取代的CrCV垸基，R5氫；CrC6-垸基-C3-(V環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代d-CV烷基、C廣C6-?；?、d-CV烷氧基或CF3;C3-C6-環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:C廣CV烷基、d-CV酰基、Q-CV垸氧基或CF3;CVd2-芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:鹵素、C廣CV垸基、C廣CV酰基、d-CV烷氧基、N-d-C6-烷基-Cr(V垸基、CF3或氰基；或者Cs-C,2-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、d-C6-垸基、Q-C6-?；?、C廣CV垸氧基、N-C廣CV烷基-CrC6-垸基、CF3或氰基；或者可以任意取代的Q-Q-垸基，和W和RS—起形成5-8元環(huán)，所述環(huán)可以包含其它雜原子，以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽，它們克服已知的缺陷，并表現(xiàn)出改良的性能，即表現(xiàn)出良好的效力、良好的溶解性和穩(wěn)定性。根據(jù)本發(fā)明的化合物抑制可溶性腺苷酸環(huán)化酶，因此防止精子獲能，從而提供男性節(jié)育。烷基在每種情況下意指直鏈或支鏈垸基殘基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基和己基。垸氧基在每種情況下意指直鏈或支鏈垸氧基殘基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、異戊氧基和己氧基。?；诿糠N情況下意指直鏈或支鏈殘基，例如甲?；⒁阴；⒈；⒍□；惗□；⑽祯；捅郊柞；?。環(huán)垸基意指單環(huán)垸基環(huán)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。所述環(huán)烷基殘基可以包含一個(gè)或多個(gè)雜原子例如氧、硫和/或氮代替碳原子。優(yōu)選具有3-6個(gè)環(huán)原子的雜環(huán)烷基。環(huán)中可以任選地包含一個(gè)或多個(gè)可能的雙鍵的環(huán)系統(tǒng)意指例如環(huán)烯基，例如環(huán)丙烯基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)戊二烯基、環(huán)己烯基、環(huán)庚烯基，其中偶聯(lián)可以發(fā)生在雙鏈和單鍵上。鹵素在每種情況下意指氟、氯、溴或碘。在每種情況下芳基殘基包含6-12個(gè)碳原子，且可以例如是苯并稠合的?？梢蕴峒耙韵禄鶊F(tuán)作為實(shí)例苯基、托品基、環(huán)辛二烯基、茚基、萘基、聯(lián)苯基、荷基(florenyl)、蒽基等。在每種情況下雜芳基殘基包含5-16個(gè)環(huán)原子，且可以包含一個(gè)或多個(gè)、相同或不同的雜原子，例如環(huán)中的氧、硫或氮代替碳，且可以是單、二或16三環(huán)，并可以在每種情況下又是苯并稠合的?？梢蕴峒耙韵伦鳛閷?shí)例噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、咪唑基、吡唑基、異噁唑基、異噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等及其苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、H引唑基、吲哚基、異tl引哚基等；或噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等及其苯并衍生物，例如喹啉基、異喹啉基等；或吖嗪基(azozinyl)、吲嗪基、嘌呤基等及其苯并衍生物；或喹啉基、異喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、咕噸基、氧雜^基(oxepinyl)等。所述雜芳基殘基在每種情況下可以是苯并稠合的。例如，可以提及以下作為5環(huán)雜芳族化合物噻吩、呋喃、噁唑、噻唑、咪唑、吡唑及其苯并衍生物，可以提及以下作為6環(huán)雜芳族化合物吡啶、嘧啶、三嗪、喹啉、異喹啉和苯并衍生物。雜原子意指氧、氮或硫原子。如果存在酸性官能團(tuán)，則生理學(xué)相容的有機(jī)和無機(jī)堿的鹽是適宜的鹽，例如易溶的堿金屬和堿土金屬鹽，以及N-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、賴氨酸、1,6-己二胺、乙醇胺、葡糖胺、肌氨酸、絲氨醇、三羥基甲基氨基甲烷、氨基丙二醇、Sovak堿、l-氨基-2,3，4-丁三醇。如果存在堿性官能團(tuán)，則生理學(xué)相容的有機(jī)和無機(jī)酸的鹽是適宜的，所述酸例如鹽酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、酒石酸等。特別優(yōu)選通式I的化合物，其中所述符號(hào)具有以下含義R1氫、鹵素、CF3、CVC6-環(huán)垸基；或者CrC6-垸基、d-CV芳基、d-CV酰基、鹵代-d-CV垸基、C廣CV垸基-d-C6-烷基、CrC6-垸基-d-Q-?；rCV?；?C廣Q-酰基、d-CV烷基-d-C6-芳基、d-C6-芳基-d-C6-烷基或CF3基團(tuán)，其中C廣C6-垸基、d-C6-芳基、d-CV?；Ⅺu代-c廣cv垸基、Ci-C6-烷基-d-C6-烷基、CrC6-垸基-CrCV?；?、d-CV酰基-Q-(V?；?、d-CV垸基-CrC6-芳基或d-C6-芳基-CrCV垸基可以任選地插入單個(gè)或多個(gè)、相同或不同的氧、硫或氮；或者磺酰基-d-Q-烷基、氨磺酰或氰基基團(tuán)，R2鹵素、CF3、C3-C6-環(huán)垸基，或者C廣CV烷基、d-C6-芳基、Q-C6-?；?、鹵代-C廣C6-烷基、d-CV垸基-Q-C6-垸基、C,-C6-烷基-d-CV酰基、d-C6-?；?d-C6-酰基、C-C6-垸基-d-CV芳基、C廣(V芳基-Q-C6-烷基或CF3基團(tuán)，其中Q-C6-烷基、d-CV芳基、CrCV酰基、鹵代-Q-C6-烷基、C廣C6-烷基-CrQ-烷基、CrC6-垸基-d-C6-酰基、Q-C6-?；?C廣C6-?；?、CrC6-垸基-d-C6-芳基或d-C6-芳基-C,-C6-垸基可以任選地插入單個(gè)或多個(gè)、相同或不同的氧、硫或氮；或者磺?；?CrC6-烷基、氨磺酰或氰基基團(tuán)，R3C6-Cu-芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、Ci-CV垸基、d-C3-?；-CV烷氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、COr(C廣Cr烷基)、CO-NR4R5或CF3;C5-Cu-雜芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代氯和/或氟、CrC6-垸基、CrCV酰基、d-Cr烷氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、C02-(C廣C3-烷基)、CO-NR4R5或CF3;C3-CV環(huán)垸基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代氯和/或氟、CF3、氰基、d-C3-烷基、d-C3-?；?、羥基、N-(CH3)2、C02-(C,-C3-垸基)、CO-NR4R5或C廣C3-烷氧基，R4氫；C3-C6-環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:C廣C3-烷基、d-C3-酰基、d-Cr垸氧基或CF3;Q-d2-芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:鹵素、C廣C3-垸基、C廣C3-酰基、C廣C3-烷氧基、N-d-C3-烷基-CVC3-烷基、CF3或氰基；或者C5-d2-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:鹵素、C廣Cr烷基、d-(V?；?、d-(V烷氧基、N-d-Q-垸基-d-C3-烷基、CF3或氰基；或者可以任意取代的CrCV垸基，R5氫；Q-C6-烷基-C3-CV環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代CrCV烷基、(VC6-?；r(V烷氧基或CF3;C3-CV環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:C廣CV垸基、d-CV?；?、d-Q-烷氧基或CF3;C6-d2-芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:鹵素、d-C3-垸基、C,-C3-?；?、CrC3-垸氧基、N-d-Cr垸基-C廣CV烷基、CF3或氰基；或者Cs-d2-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:鹵素、Q-C3-烷基、d-Cy酰基、C,-C3-烷氧基、N-d-Cr垸基-CVCr烷基、CF3或氰基；或者可以任意取代的C,-Q-烷基，以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。還優(yōu)選通式i的化合物，其中所述符號(hào)具有以下含義R氫，R2C3-CV環(huán)烷基、d-C6-烷基、CF3、氰基、溴，或者-OCF3、-S02-CH3基團(tuán)，R3C6-C,2-芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、d-(V垸基、Q-Cr?；?、d-Cr垸氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、COr(C廣C3-烷基)、CO-NR4R5或CF3;Cs-d2-雜芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代氯和/或氟、CrCV烷基、d-CV?；-C3-垸氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、COHd-C3-烷基)、CO-NR4r5或CF3;C3-CV環(huán)垸基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代氯和/或氟、CF3、氰基、d-C3-垸基、CrCV酰基、羥基、N-(CH3)2、COHCrCr垸基)、CO-NR4R5或d-C3-烷氧基，R4氫，R5氫；C3-CV環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:C廣Cr烷基、d-C3-酰基、Q-C3-烷氧基或CF3;(Vd2-芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:鹵素、CrC3-烷基、d-CV?；?、Q-C3-垸氧基、N-d-(V烷基-C廣C3-烷基、CF3或氰基；或者CVd2-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、C廣C3-烷基、d-C3-?；?、d-CV烷氧基、N-C廣CV垸基-Q-C3-烷基、CF3或氰基；或者可以任意取代的CrQ-烷基，以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。還優(yōu)選通式I的化合物，其中所述符號(hào)具有以下含義，R1氫，R2C3-CV環(huán)垸基、d-CV烷基、CF3、氰基、溴，或者在對(duì)位的-OCF3、-S02-CH3基團(tuán)，R3CVd2-芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或二、相同或不同地取代鹵素、C廣C3-垸基、乙?；?、甲氧基、乙氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、C02-(C廣C3-垸基)、CO-NHR5或CF3;Cs-d2-雜芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或二、相同或不同地取代氯和/或氟、CKV烷基、乙?；?、甲氧基、乙氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、C02-(CrCV垸基)、CO-NHR5或CF3;C3-CV環(huán)烷基，R4氫，R5氫；Ci-CV烷基-C3-C6-環(huán)垸基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代C廣C6-垸基、C廣C6-酰基、C廣C6-垸氧基或CF3;C3-C6-環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代C廣CV烷基、d-CV酰基、CVCV垸氧基或CF3;C6-C『芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、C廣Cr烷基、C廣CV?；廣C3-烷氧基、N-d-Q-烷基-。1-(:3-垸基、CF3或氰基；或者C5-d2-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、C廣C3-烷基、C廣C3-酰基、C廣C3-垸氧基、N-C廣C3-烷基-Q-C3-垸基、CF3或氰基；或者可以任意取代的CrCV烷基，以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。還優(yōu)選通式I的化合物，其中所述符號(hào)具有以下含義R1氫，R2叔丁基、異丙基、異丁基、仲丁基、氰基、溴，或者在對(duì)位的-0-CF3、-502-013基團(tuán)，R3基團(tuán)—(CH2)-CHCHrOH、—(CH2)2-0-CH3、-(CH2)2-OH、-CHCHrCHrOH，其中n^l-3，1以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。還優(yōu)選通式I的化合物，其中所述符號(hào)具有以下含義R1氫，R2叔丁基、異丙基、異丁基、仲丁基、氰基、溴，或者在對(duì)位的-0-CF3、-802-013基團(tuán)，R3基團(tuán)R4氫，R5氫或基團(tuán)"(CH2)-CHCH3-OH、~(CH2)2-0-CH:—CHCH3-CH2-OH、以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。極其優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的以下化合物1.5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-lH-吲哚-2-羧酸-(四氫吡喃-4-基)酰胺2.5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-lH-吲哚-2-羧酸-(2-嗎啉-4-基乙基)酰胺3.(士)-5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-lH-n引哚-2-羧酸-(2-羥基-l-甲基乙基)酰胺4.(士)-5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-lH』引哚-2-羧酸-(2-羥基丙基)酰胺5.5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-(3-氟苯基)-lH-吲哚-2-羧酸-(四氫吡喃-4-基)酰胺6.5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-(3-氟苯基)-111-吲哚-2-羧酸(2-嗎啉-4-基乙基)酰胺7.5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-(3-甲氧基苯基)-lH-吲哚-2-羧酸-(四氫吡喃-4-基)酰胺8.5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-(3-甲氧基苯基)-lH-吲哚-2-羧酸-(2-嗎啉-4-基乙基)酰胺9.5-(4-叔丁基苯基氨磺酰萄-3-苯基-lH』引哚-^羧酸-(吡啶斗基)酰胺本發(fā)明還提供用于制備根據(jù)本發(fā)明的通式I的化合物的方法，該方法的特征在于，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，使式II的化合其中R1、W和RS各自如以上定義，且W可以為氫或CKV烷基，優(yōu)選氫、甲基或乙基，與通式III的胺反應(yīng)，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>其中R"和RS各自如以上定義，隨后裂解任何所需的保護(hù)基。當(dāng)R"為氫時(shí)，可以首先通過活化酸官能團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)，例如首先通過在叔胺例如三乙胺存在下，用氯甲酸異丁酯將通式II的羧酸轉(zhuǎn)化成混合酸酐。所述混合酸酐與對(duì)應(yīng)胺的堿金屬鹽的反應(yīng)在惰性溶劑或溶劑混合物例如四氫呋喃、二甲氧基乙烷、二甲基甲酰胺、六甲基磷酰胺中，在-30。C+60。C，優(yōu)選在0°C~30°C的溫度進(jìn)行。進(jìn)一步的可能性在于通過試劑，例如HOBt或HATU活化通式II的羧酸。例如，酸與HATU的反應(yīng)在惰性溶劑，例如DMF中，在對(duì)應(yīng)的通式III的胺和叔胺，例如乙基二異丙胺存在下，在-50+60。C，優(yōu)選0。O30。C的溫度進(jìn)行。當(dāng)W為d-C6-烷基時(shí)，例如還可以在借助或不借助三烷基鋁試劑，優(yōu)選三甲基鋁的情況下，用對(duì)應(yīng)的胺將該酯直接胺解。用作原料的通式II的化合物例如可以通過以下常規(guī)方式獲得首先使已知的溴代吲哚酯IV其中R6為d-CV烷基，優(yōu)選甲基或乙基，與氯磺酸反應(yīng)以生成通式V的化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>然后使該化合物與通式(VI)的胺反應(yīng)，R1、NH2R2(VI),其中Ri和W各自如以上定義，形成通式VII的化合物HO—R6(VII)。然后，將通式vn的酯與通式vm的硼酸衍生物進(jìn)行Pd催化的反應(yīng)，/B(OH)2、R3^(菌)，其中w如以上定義，如果適當(dāng)?shù)脑?，在除去所需的保護(hù)基之后，且如果適當(dāng)?shù)脑挘S后通過例如用氫氧化鈉溶液進(jìn)行皂化，轉(zhuǎn)化成通式n的化合物(n)，其中R1、R2、113和116各自如以上定義。根據(jù)本發(fā)明的化合物抑制可溶性腺苷酸環(huán)化酶，而這又是它們例如對(duì)男性節(jié)育的作用基礎(chǔ)。腺苷酸環(huán)化酶是最常用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一的效應(yīng)分子，它們通過焦磷酸(PP)分裂由三磷酸腺苷(ATP)合成第二信使分子環(huán)腺苷酸(cAMP)。cAMP介導(dǎo)多種細(xì)胞對(duì)大量神經(jīng)遞質(zhì)和激素的反應(yīng)?？扇苄浴⒕犹禺愋韵佘账岘h(huán)化酶(sAC，人mRNA序列(GenBank)nm_018417，人基因ADCYX)為人類基因組中所述的十種腺苷酸環(huán)化酶之一。sAC表現(xiàn)出使其有別于其它腺苷酸環(huán)化酶的某些特定的性能。與所有其它腺苷酸環(huán)化酶不同，sAC被周圍介質(zhì)中碳酸氫鹽的濃度剌激，而不是被G蛋白刺激。sAC在其氨基酸序列中不具有任何跨膜區(qū)域，它不能被福司柯林抑制，錳對(duì)其的刺激比鎂更強(qiáng)，且其僅表現(xiàn)出與其它腺苷酸環(huán)化酶輕度的序列同源性(在氨基酸水平sAC的催化域I和II與其它腺苷酸環(huán)化酶具有S26%的同一性)。T.Braun等(1975，PNAS73:1097ff)首先描述了大鼠睪丸和精子中sAC的特異的、錳依賴性活性。N.Okamura等(1985，J.Biol.Chem260(17):9699ff)表明刺激公豬精液中的sAC活性的物質(zhì)為碳酸氫鹽。亦已表明可以被碳酸氫鹽刺激的AC活性僅可在大鼠睪丸和精子中檢測(cè)到，而不能在其它組織中檢測(cè)到。Buck禾nLevin小組(J.Buck等人1999，PNAS96:79ff,WO01/85753)首次從大鼠睪丸中純化sAC并測(cè)序。在重組表達(dá)蛋白上確證了其預(yù)期的性能(例如被碳酸氫鹽和鎂刺激的能力)(Y.Chen等2000，Science289:625ff)。可以根據(jù)sACmRNA分布和可由碳酸氫鹽刺激的sAC活性的數(shù)據(jù)來推定酶的睪丸特異性和精子特異性表達(dá)(MLSinclair等2000,MolReprodDevelop56:6ff;NOkamura等1985,J.Biol.Chem260(17):9699ff;J.Buck等1999,PNAS96:79ff)。在睪丸中，sACmRNA僅在形成精子的配子的后期表達(dá)，但不在體細(xì)胞中表達(dá)(MLSinclair等2000，MolReprodDevelop56:6ff)。已有多項(xiàng)關(guān)于哺乳動(dòng)物精子中sAC功能的藥理學(xué)研究。在精子穿透卵子的透明帶，然后與卵子的卵細(xì)胞膜融合之前，精子必須為此功能作好準(zhǔn)備。這個(gè)過程，即精子獲能，已被充分研究。獲能的精子的特征在于在被適宜地刺激時(shí)，其改變的運(yùn)動(dòng)模式和經(jīng)歷頂體反應(yīng)過程的能力(釋放分解酶，其可能用于精子穿透透明帶)。精子獲能發(fā)生在體內(nèi)和體外，且不依賴介質(zhì)中碳酸氫鹽濃度升高(PEVisconti&GSKopf(1998),BiolReprod59:lff;EdeLamirande等1997，MolHumReprod3(3):175ff)。精子獲能還可以通過添加適宜的透膜cAMP類似物例如雙丁酰cAMP(db-cAMP)和防止它們降解的抑制劑(例如IBMX)而被刺激。只是最近才通過遺傳缺失模型，即所謂的基因敲出小鼠確證了所假定的精子功能對(duì)sAC的依賴(GEsposito等2004:PNAS101(9):2993ff)。缺乏sAC基因的雄性小鼠表現(xiàn)出正常進(jìn)行的精子發(fā)生，但它們是不育的。其精子具有運(yùn)動(dòng)缺陷，且不能使卵子受精。所述動(dòng)物未表現(xiàn)出任何其它缺陷或異常發(fā)現(xiàn)，這與其它假定的sAC功能(JHZippin等人2003，F(xiàn)ASEB17:82ff))相矛盾。sAC具有單一序列，且與其它體細(xì)胞腺苷酸環(huán)化酶僅具有輕度的同源性。它是哺乳動(dòng)物精子中唯一的腺苷酸環(huán)化酶，其活性對(duì)于精子運(yùn)動(dòng)和獲能是必要的。因此，特定的sAC抑制劑代表控制男性生育力的重要可能性。因此，本發(fā)明涉及含有至少一種如權(quán)利要求1-7所要求保護(hù)的化合物的藥品。本發(fā)明還涉及如權(quán)利要求1-7所要求保護(hù)的化合物的用途。為了將根據(jù)本發(fā)明的化合物用作藥品，將它們轉(zhuǎn)化成藥物制劑的形式，所述藥物制劑除了活性物質(zhì)之外還包含藥用的適于腸內(nèi)和腸胃外施用的有機(jī)或無機(jī)惰性載體，例如水、明膠、阿拉伯膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石、植物油、聚亞烷基二醇等。所述藥物制劑可以是固體形式的，例如片劑、糖衣丸、栓劑或膠囊，或者是液體形式的，例如溶液劑、混懸劑或乳劑。需要時(shí)，它們還包含賦形劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑或乳化劑；用于改變滲透壓的鹽或緩沖劑。這些藥物制劑也是本發(fā)明的目的。在多羥基乙氧基化蓖麻油中的活性化合物的注射液或懸浮液，特別是水溶液，特別適于腸胃外施用。表面活性賦形劑例如膽汁酸鹽或者動(dòng)物或植物的磷脂以及它們的混合物和脂質(zhì)體或它們的組分也可以用作載體系統(tǒng)。具體而言，含有滑石和/或烴載體或粘合劑例如乳糖、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉的片劑、糖衣丸或膠囊適于口服。還可以以液體形式如汁給藥，必要時(shí)向所述汁加入甜味劑。為了陰道施用，例如栓劑是合適和常規(guī)的。本發(fā)明還涉及腸內(nèi)、腸胃外、陰道和口服施用?；钚晕镔|(zhì)的劑量可以隨給藥途徑、患者年齡和體重、待治療的疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性以及類似因素而變。日劑量為0.5-1000mg，優(yōu)選50-200mg，且所述劑量可以是一次性給藥的單一劑量，或者可以分成2次或更多次日根據(jù)本發(fā)明的通式I的化合物是非常良好的可溶性腺苷酸環(huán)化酶的抑制劑?？扇苄韵佘账岘h(huán)化酶抑制劑導(dǎo)致cAMP信號(hào)抑制。cAMP水平對(duì)在細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化和凋亡中起重要作用的過程的控制起決定作用。其中cAMP水平的抑制起決定作用的疾病，例如癌癥，可以由可溶性腺苷酸環(huán)化酶抑制劑調(diào)節(jié)。這種調(diào)節(jié)可能對(duì)患此病的患者具有預(yù)防和治療作用。目前，通過放射療法和化學(xué)療法治療與細(xì)胞增殖增加有關(guān)的疾病，如癌癥。這些方法是非特異性的，并且副作用的可能性大。因此，提供直接作用于特定耙部位的新物質(zhì)是有利的。本發(fā)明涉及通過抑制可溶性腺苷酸環(huán)化酶調(diào)節(jié)cAMP的生產(chǎn)的物質(zhì)。例如，可以通過調(diào)節(jié)或抑制cAMP的生產(chǎn)來減少或防止異常的細(xì)胞增殖。可以通過使用根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)抑制可溶性腺苷酸環(huán)化酶，從而減少細(xì)胞增殖。本發(fā)明涉及包含至少一種根據(jù)通式I的化合物的用于治療疾病的藥品，和含有適宜載體和賦形劑的藥品。所述疾病的特征在于它們是由第二信使cAMP的代謝障礙導(dǎo)致的。通過抑制可溶性腺苷酸環(huán)化酶降低cAMP的濃度可以提供調(diào)節(jié)精子獲能的方法。本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)用于降低和/或抑制雄配子生育力的用途，所述用途通過降低或抑制可溶性腺苷酸環(huán)化酶的活性及由此降低或抑制精子獲能來介導(dǎo)?？梢酝ㄟ^給藥有效量的導(dǎo)致cAMP生產(chǎn)抑制的物質(zhì)來防止卵子受精。本發(fā)明還涉及通式I的化合物用于生產(chǎn)非激素避孕用藥品的用途。如果沒有描述起始化合物的生產(chǎn)，則這些化合物是已知的，或者可以與已知化合物或本申請(qǐng)所述方法類似地生產(chǎn)。本申請(qǐng)所述的所有反應(yīng)還可以在平行反應(yīng)器中或者使用組合技術(shù)進(jìn)行?？梢酝ㄟ^常規(guī)方法，例如結(jié)晶法、色譜法或成鹽法將異構(gòu)體混合物分離成對(duì)映異構(gòu)體或E/Z異構(gòu)體。用常規(guī)的方法，通過向式I的化合物的溶液中加入等量或過量的的堿或酸(必要時(shí)在溶液中)，分離沉淀或以常規(guī)方式處理所述式I化合物的溶液來生產(chǎn)所述鹽。根據(jù)本發(fā)明的化合物的生產(chǎn)以下的實(shí)施例解釋根據(jù)本發(fā)明的通式I的化合物的生產(chǎn)，而不是將要求專利保護(hù)的化合物的范圍限制到這些實(shí)施例。根據(jù)本發(fā)明的通式I的化合物可以如下述生產(chǎn)。實(shí)施例1:5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-lH-剛哚-2-羧酸-(四氫吡將在1.2ml二甲基甲酰胺中的70mg在實(shí)施例ld)中制備的酸的溶液與64.7mgN-[(二甲基氨基)-l/f-l，2，3-三唑并[4,5-6]吡啶-l-基亞甲基]-7V-甲基甲垸六氟磷酸銨N-氧化物(HATU)和15.8mg4-氨基四氫吡喃混合。然后在0。C滴加29.60nl乙基二異丙胺，隨后在25°C攪拌20小時(shí)。接著加入20ml水，并用乙酸乙酯萃取3次。將合并的有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌一次，用硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮。用己垸/0-80%乙酸乙酯通過硅膠色譜法將如此得到的剩余物純化，得到67.1mg標(biāo)題化合物。NMR(300MHz,DMSO-d6):5=1.13(s，9H),1.26(2H),1.65(2H),3.32(2H)，3.68(2H),3.90(1H)，6.93(2H)，7.18(2H)，7.32-7.50(5H),7.53(1H)，7.58(1H)，7.86(1H)，7.91(1H),9.91(H),12.21(1H)。以上標(biāo)題化合物的原料如下制備la)3-溴-5-氯磺?；?lH』引哚-羧酸乙酯將2.48ml氯磺酸與2.0g3-溴-lH-吲哚-2-羧酸乙酯在-10。C混合，然后在25。C攪拌3小時(shí)。然后，用200ml乙酸乙酯稀釋，并每次用30ml水和飽和氯化鈉溶液各洗滌一次。用硫酸鈉干燥并過濾，然后減壓濃縮，得到1.93g標(biāo)題化合物，其不經(jīng)進(jìn)一步純化而進(jìn)一步反應(yīng)。NMR(300MHz,DMS0-d6):S=1,33(3H),4.34(2H),7.38(1H),7.57(1H),7.76(1H),12.25(1H).喃-4-基)酰胺lb)3-溴-5-(4-叔丁基苯基氨磺酰基)-lH-吲哚-2-羧酸乙酯將在51mlDMF中的1.93g在實(shí)施例la)中制備的磺酰氯的溶液與1.38ml乙基二異丙胺和0.84ml4-叔丁基苯胺在25。C混合，然后在25。C攪拌20小時(shí)。加入一些甲苯后，將混合物減壓濃縮，并用己烷/0-50%乙酸乙酯通過硅膠色譜法將剩余物純化，得到1.7g標(biāo)題化合物。應(yīng)R(300MHz,DMSO-d6):5=1.13(9H),1.32(3H),4.35(2H)，6.96(2H),7.18(2H)，7.57(1H),7.67(1H)，7.91(1H)，10.09(1H)。lc)5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-lH-卩引哚-2-羧酸乙酯將在67ml乙醇和67ml甲苯的混合物中的1.7g在實(shí)施例lb)中制備的溴化物的溶液與627mg苯硼酸和8.9ml1M碳酸鈉水溶液以及421mg氯化鋰混合。加入328mg四(三苯基膦)鈀之后，將反應(yīng)混合物回流20小時(shí)。冷卻至室溫后，用250ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，經(jīng)硅藻土(Celite)抽濾，并用乙酸乙酯洗滌過濾剩余物。用各10ml飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉溶液洗滌如此得到的有機(jī)相，并用硫酸鈉干燥。過濾之后，減壓濃縮濾液。用己烷/0-60%乙酸乙酯通過硅膠色譜法將如此得到的剩余物純化。通過從己垸/乙酸乙酯中重結(jié)晶如此得到的剩余物，得到1.03g標(biāo)題化合物。薩R(300MHz,DMSO-d6):S=1.13(3H),1.14(9H)，4.19(2H),6.93(2H)，7.18(2H)，7.31-7.48(5H)，7.58(1H),7.65(1H)，7.81(1H)，9.93(1H)，12.36(1H)。ld)5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-11^-吲哚-2-羧酸將在976mg在實(shí)施例lc)中制備的酯、24ml乙醇和12ml水的混合物與1.51g氫氧化鈉混合，并在25。C攪拌18小時(shí)。然后，將混合物用30ml水稀釋并用50%硫酸酸化。過濾沉淀并干燥，得到910mg標(biāo)題化合物，其不經(jīng)進(jìn)一步純化而進(jìn)一步反應(yīng)。畫R(300MHz,DMSO-d6):S=1.14(12H),6.93(2H)，7.18(2H),7.31-7.46(5H),7.55(1H)，7.62(1H)，7.79(1H)，9.92(1H),12.27(1H),13.14(IH)。實(shí)施例2:5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-lH-吲哚-2-羧酸-(2-嗎啉-4-基乙基)酰胺用70mg實(shí)施例ld)的酸和20.5pl2-(嗎啉-4-基)乙胺重復(fù)實(shí)施例1，得到62.9mg標(biāo)題化合物。NMR(300MHz，畫SO-d6):5=1.14(9H)，2.18(4H),2,25(2H),3.26(2H)，3.37(4H),6.92(2H)，7.10(1H)，7.18(2H)，7.35(2H),7.42(1H),7.47-7.55(3H)，7.58(1H)，7.76(1H)，9.卯(1H),12.21(1H)。實(shí)施例3:(士)-5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-lH-吲哚-2-羧酸-(2-夷基-l-甲基乙基)酰胺-5用70mg實(shí)施例ld)的酸和12.4^2-氨基-l-丙醇重復(fù)實(shí)施例1，得至U29.2mg標(biāo)題化合物。NMR(300MHz，DMSO-d6):S=0.94(3H)，1.14(9H)，3.17(1H)，3.34(1H)，3.90(1H)，4.62(1H)，6.93(2H),7.15(1H)，7.17(2H),7.33-7.50(5H)，7.53(1H)，7.58(1H)，7.83(1H),9.90(1H)，12.19(1H)。實(shí)施例4:(士)-5-(4-叔丁基苯基氨磺酰基)-3-苯基-lH』引哚-2-羧酸-(2-羥基丙基)酰胺用70mg實(shí)施例ld)的酸和12.1pll-氨基-2-丙醇重復(fù)實(shí)施例1，得到56.7mg標(biāo)題化合物。NMR(300顧z,DMSO-d6):5=0.91卿，1.14(9H),3.09(2H)，3.58(1H),4.59(1H)，6.93(2H),7.18(2H),7.29(1H),7,32-7.51(5H)，7.53(1H)，7.58(1H),7.79(1H),9.90(1H),12.18(1H)。生物實(shí)施例實(shí)施例l:sAC測(cè)定在適宜的緩沖液系統(tǒng)中，可溶性精子特異性腺苷酸環(huán)化酶催化三磷酸腺苷(ATP)向環(huán)腺苷酸(cAMP)和焦磷酸的轉(zhuǎn)化。然后將如此產(chǎn)生的游離cAMP用于競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)技術(shù)，在該技術(shù)中銪穴狀化合物Eu[K]標(biāo)記的抗cAMP抗體(抗cAMP-Eu[K]-AB)與用cAMP分子標(biāo)記的修飾的別藻藍(lán)蛋白-1分子的結(jié)合被阻止。在不存在外源性cAMP的情況下，在335nm處激發(fā)之后，在抗cAMP-Eu[K]-AB(FRET供體)和cAMP-XL665分子(FRET受體)之間存在熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)。基于FRET受體XL665發(fā)射(665nm和620nm)，此方法是定量、時(shí)間分辨的。信號(hào)的減少(測(cè)定為WellRatio;由下式計(jì)算[(E665nm/E620nm)x10000])可能歸因于cAMP的存在，并因此歸因于sAC的活性。首先，在384孔試驗(yàn)平板(聚苯乙烯;384，NV)的每孔中置1.5pl試驗(yàn)物質(zhì)(在30%DMSO中)，而在溶劑對(duì)照中僅有30%DMSO。然后應(yīng)用10pl稀sAC酶溶液(在300mMNaCl，10%甘油中的酶儲(chǔ)備溶液；pH7.6;酶中間產(chǎn)物和最終稀釋液a)l:10，和b)l:2000，均在1.0mMMnCl2;0.2%BSA;50mMTris，在水中，pH7.5)。通過加入5plATP底物溶液(200pMATP，在H20中)開始酶反應(yīng)，并在溫育之后(室溫下25分鐘)通過加入5pi停止液(200nMEDTA，在PBS中)停止反應(yīng)。最后，通過加入70jilPBS將整個(gè)反應(yīng)物調(diào)節(jié)至總體為91.5pl。然后，將8pl檢測(cè)液1置于384孔測(cè)量平板的孔中(測(cè)量平板聚苯乙烯；384，SV-黑色；檢測(cè)液1:50plcAMP-XL665;950pl再生緩沖液；2200nlPBS;cAMP-XL665:根據(jù)CisbioKit:#62AMPPEC的說明通過將5mlH20加到凍干產(chǎn)品來制備；儲(chǔ)存等分試樣，在-80。C)。接著，將91.5pl中的3ja加到對(duì)應(yīng)的試驗(yàn)平板的孔中。最后，加入8nl檢測(cè)液2(檢測(cè)液2:50pl抗cAMP-Eu[K]-AB;950pl再生緩沖液；2200|ilPBS;抗cAMP-Eu[K]-AB:根據(jù)CisbioKit:#62AMPPEC的說明制備；儲(chǔ)存等分試樣，在-80。C)。再在室溫下溫育卯分鐘之后，用PackardDiscovery或RubiStarHTRF測(cè)量?jī)x器測(cè)定HTRF結(jié)果(延遲50ps;積分時(shí)間400|is)。實(shí)施例2.從精液中分離人精子和獲能2丄分離精子在基于硅膠顆粒(商品名Percoll或ISolate)的雙層梯度系統(tǒng)中純化來自精液的人精子。將每份精液，2.5ml預(yù)熱的下層("卯％ISolatelowerlayer",購(gòu)自Irvine)置于15ml離心管(圓錐形，塑料)，小心地用2.5ml預(yù)熱的上層("50%ISolateupperlayer",購(gòu)自Irvine)覆蓋，并在水浴中在37°C保持<lh。用最多3ml正常的(在精液數(shù)量、運(yùn)動(dòng)性和液化方面)精液小心地覆蓋梯度。在1000xg和室溫下進(jìn)行精子沉降并持續(xù)25分鐘。使用玻璃毛細(xì)管，通過抽吸將兩層移至恰好在精子團(tuán)上方。為淘析ISolate梯度，將分別懸浮在大約200pi中的精子團(tuán)轉(zhuǎn)移至含12mlmHTF培養(yǎng)液(4mMNaHC03;0.01%BSA;37°C)的15ml塑料管中，并將精子在1000xg下沉降20分鐘。通過抽吸將培養(yǎng)液移至恰好在精子團(tuán)上方，并用mHTF培養(yǎng)液(4mMNaHC03;0.01°/。BSA;37。C)調(diào)節(jié)至1000pl。用Neubauer計(jì)數(shù)器測(cè)定精子數(shù)量，然后，為了隨后的獲能，必要時(shí)用mHTF培養(yǎng)液(4mMNaHC03;0.01%BSA;37。C)將其調(diào)節(jié)至4xl06精子/150pl。2.2.獲能如果要測(cè)試試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)頂體反應(yīng)的影響，必須將精子與試驗(yàn)物質(zhì)一起預(yù)溫育。該預(yù)溫育對(duì)于允許試驗(yàn)物質(zhì)在獲能開始之前穿透進(jìn)入精子，即實(shí)現(xiàn)精子中結(jié)合部位的預(yù)飽和，是必要的，特別是在該物質(zhì)不易穿過膜的情況下。它是必要的另一個(gè)原因是由于BSA高度的脂質(zhì)結(jié)合所導(dǎo)致的獲能過程中BSA濃度的增加，可能導(dǎo)致樣品中試驗(yàn)物質(zhì)的有效濃度的降低。將試驗(yàn)物質(zhì)溶于DMSO，并用mHTF培養(yǎng)液(4mMNaHC03;0.01%BSA;37。C)稀釋，從而使DMS在最終的400pl獲能樣品中的DMSO濃度為0.5°/。。在每種情況下，用移液管將150pl精子懸浮液加到150pl上述溫度控制的試驗(yàn)物質(zhì)的溶液中，然后在37°C預(yù)溫育15分鐘。精子獲能由加入100pimHTF培養(yǎng)液(88mMNaHC03;4%BSA;37。C)啟動(dòng)。在最終的400^獲能樣品中，精子的濃度為10xl06/ml，碳酸氫鹽的濃度為4mM，而BSA濃度為1%。在37。C，獲能在加熱箱中進(jìn)行3小時(shí)。為停止獲能，將樣品(分別400)il)分別完全轉(zhuǎn)移至含有1.5mlmHTF(4mMNaHC03;37。C)的15ml樣品試管中，在1000xg下離心5分鐘，并除去上清液。此步驟除去大量的蛋白質(zhì)和試驗(yàn)物質(zhì)。實(shí)施例3.流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定頂體反應(yīng)3丄通過用離子載體處理啟動(dòng)頂體反應(yīng)，并進(jìn)行同步CD46-FITC染色通過精子與透明帶(ZP)的結(jié)合觸發(fā)精子的頂體反應(yīng)(AR)。此反應(yīng)從頂體中釋放出酶，能使精子穿透ZP并到達(dá)卵子。在AR中，精子的質(zhì)膜與外層頂體膜(OAM)發(fā)生部分融合。結(jié)束時(shí)，精子頭仍受頂體內(nèi)膜(IAM)的限制。僅在IAM中可檢測(cè)CD46抗原。體外頂體反應(yīng)僅可以用適宜濃度的在獲能精子上的，而不是未獲能精子或其獲能受到試驗(yàn)物質(zhì)抑制的精子上的鈣離子載體A23187誘導(dǎo)。通過將FITC標(biāo)記的抗CD46抗體(購(gòu)自Pharmingen)加入IAM的方法，可以將發(fā)生頂體反應(yīng)的精子與頂體完整的精子區(qū)分開，頂體完整的精子的IAM在流式細(xì)胞儀中未暴露。通過用僅對(duì)具有缺陷DNA膜的細(xì)胞，即死細(xì)胞進(jìn)行染色的DNA染色劑乙啶同型二聚體(EhD)進(jìn)行同步染色，可以將死精子與活精子區(qū)分開。由于用于引發(fā)AR的離子載體稀釋液似乎非常不穩(wěn)定，且必須與用于同步染色的CD46-FITC溶液混合，所以，該離子載體稀釋液不能在試驗(yàn)開始之前制備，而是必須在處理獲能樣品的過程中制備。將精子團(tuán)再懸浮在上清液的剩余物中，并在水浴(37。C)上用450plmHTF(4mMNaHC03;0.01%BSA;37。C)稀釋。通過移液管將100jal等分試樣的精懸液轉(zhuǎn)移至制備的樣品-FACS流量管(在水浴上)。用移液管將150含離子載體和FITC標(biāo)記的抗CD46抗體的溶液加到精子。在mHTF(4mMNaHC03;0.01%BSA;37。C)中，最終濃度為離子載體800nm，和稀釋的抗CD46抗體1:125。將其中的精子溫育30分鐘，避光保護(hù)，置于37。C水浴中。加入3.5mlPBS/樣品，終止溫育，然后在700xg(室溫)下離心5分鐘，隨后抽吸除去上清液。離心后，將樣品置于加熱板上保溫，直至測(cè)試。3.2.EhD染色(為了區(qū)分死/活的發(fā)生頂體反應(yīng)的精子)在抽吸清除之后，將500pi新鮮制備的EhD溶液(150nmEhD，在PBS[w/oBSA]中；37。C)加到各精子團(tuán)中。然后用流式細(xì)胞儀(BDFacsCalibur)測(cè)定樣品。測(cè)量在激光激發(fā)波長(zhǎng)488nm處進(jìn)行，每次測(cè)量檢測(cè)10000個(gè)精子。在530nm處通過在FL-1過濾器中的CD46-FITC測(cè)定發(fā)生頂體反應(yīng)精子。在634nm處通過在FL-2過濾器中的EhD-DNA染色測(cè)定死精子。相應(yīng)地將測(cè)量通道預(yù)先進(jìn)行彼此的補(bǔ)償。3.3評(píng)價(jià)在FSC-H(前向散射)對(duì)SSC-H(側(cè)向散射)斑點(diǎn)印跡中選擇的精子為非常均一的細(xì)胞群。由于使用雙色熒光染色，通過象限分析法，在FL-l(EhD;35<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>w/o酚紅，w/oNaHC03);牛血清白蛋白，F(xiàn)ractionV(購(gòu)自Fluka);無水二甲基亞砜(DMSO)(購(gòu)自Merck);7.5。/。碳酸氫鈉溶液(893mM)(購(gòu)自IrvineScientific);Isolate-Gradient(購(gòu)自IrvineScientific);離子載體-A23187游離酸(購(gòu)自Calbiochem);乙啶同型二聚體(EhD)(購(gòu)自MolecularProbe)，小鼠抗人CD46:FITC(購(gòu)自Pharmingen)。參考文獻(xiàn)J.W.Carver-Ward,HumanReproductionVol.11，No.9,pp:1923ff，1996HighfertilizationpredictionbyflowcytometricanalysisoftheCD46antigenontheinneracrosomalmembraneofspermatozoaO.J.D、Cruz，G.G.Haas,FertilityandSterilityVol.65，No.4，pp:843ff,1996Fluorescence-labeledfiicolectinsaresuperiormarkersforflowcytometricquantitationofthespermacrosomereactionE.Nieschlag，H.M.Behre,Andrology，SpringerVerlag1996實(shí)施例:<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>從該表可以看出，在以IC50表示的對(duì)可溶性腺苷酸環(huán)化酶的抑制作用方面，根據(jù)本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出比已知的兒茶酚雌激素(OH-雌二醇)高大約10倍的活性。兒茶酚雌激素是有毒的，因此根據(jù)本發(fā)明的化合物遠(yuǎn)優(yōu)于已知的化合物。根據(jù)本發(fā)明的化合物也比Zippin提供的化合物的效力高大約10倍。權(quán)利要求1、通式(I)的化合物，其中使用以下符號(hào)R1氫、鹵素、CF3、任選地為多飽和的且任選地被多取代的C3-C6-環(huán)烷基；或者C1-C6-烷基、C1-C6-芳基、C1-C6-?；?、鹵代-C1-C6-烷基、C1-C6-烷基-C1-C6-烷基、C1-C6-烷基-C1-C6-?；1-C6-?；?C1-C6-酰基、C1-C6-烷基-C1-C6-芳基、C1-C6-芳基-C1-C6-烷基或CF3基團(tuán)，其中C1-C6-烷基、C1-C6-芳基、C1-C6-?；?、鹵代-C1-C6-烷基、C1-C6-烷基-C1-C6-烷基、C1-C6-烷基-C1-C6-酰基、C1-C6-?；?C1-C6-酰基、C1-C6-烷基-C1-C6-芳基或C1-C6-芳基-C1-C6-烷基可以任選地插入單個(gè)或多個(gè)、相同或不同的氧、硫或氮；或者磺酰基-C1-C6-烷基、氨磺酰或氰基基團(tuán)，R2鹵素、CF3、任選地為多飽和的且任選地被多取代的C3-C6-環(huán)烷基；或者C1-C6-烷基、C1-C6-芳基、C1-C6-?；Ⅺu代-C1-C6-烷基、C1-C6-烷基-C1-C6-烷基、C1-C6-烷基-C1-C6-酰基、C1-C6-酰基-C1-C6-?；1-C6-烷基-C1-C6-芳基、C1-C6-芳基-C1-C6-烷基或CF3基團(tuán)，其中C1-C6-烷基、C1-C6-芳基、C1-C6-?；Ⅺu代-C1-C6-烷基、C1-C6-烷基-C1-C6-烷基、C1-C6-烷基-C1-C6-?；?、C1-C6-酰基-C1-C6-?；1-C6-烷基-C1-C6-芳基或C1-C6-芳基-C1-C6-烷基可以任選地插入單個(gè)或多個(gè)、相同或不同的氧、硫或氮；或者磺?；?C1-C6-烷基、氨磺?；蚯杌鶊F(tuán)，R3C6-C12-芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、可以任選地被單或多取代的C1-C6-烷基或C1-C6-?；?；或者C6-C12-芳基，其可以用以下基團(tuán)取代C1-C6-烷氧基、羥基、氰基、CO2-(C1-C6-烷基)、N-(C1-C6-烷基)2、CO-NR4R5或CF3；C5-C12-雜芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、C1-C6-烷基、C1-C6-?；?、C1-C6-烷氧基、羥基、氰基、CO2-(C1-C6-烷基)、N-(C1-C6-烷基)2、CO-NR4R5或CF3；或者C3-C6-環(huán)烷基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、CF3、羥基、氰基、CO2-(C1-C6-烷基)、C1-C6-烷基、C1-C6-?；?、N-(C1-C6-烷基)2、CO-NR4R5或C1-C6-烷氧基，R4氫；C3-C6-環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代C1-C6-烷基、C1-C6-?；?、C1-C6-烷氧基或CF3；C6-C12-芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、C1-C6-烷基、C1-C6-?；?、C1-C6-烷氧基、N-C1-C6-烷基-C1-C6-烷基、CF3或氰基；或者C5-C12-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、C1-C6-烷基、C1-C6-?；1-C6-烷氧基、N-C1-C6-烷基-C1-C6-烷基、CF3或氰基；或者可以任意取代的C1-C6-烷基，R5氫；C1-C6-烷基-C3-C6-環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代C1-C6-烷基、C1-C6-?；1-C6-烷氧基或CF3；C3-C6-環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代C1-C6-烷基、C1-C6-?；?、C1-C6-烷氧基或CF3；C6-C12-芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、C1-C6-烷基、C1-C6-?；?、C1-C6-烷氧基、N-C1-C6-烷基-C1-C6-烷基、CF3或氰基；或者C5-C12-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、C1-C6-烷基、C1-C6-酰基、C1-C6-烷氧基、N-C1-C6-烷基-C1-C6-烷基、CF3或氰基；或者可以任意取代的C1-C6-烷基，和R4和R5一起形成5-8元環(huán)，所述環(huán)可以包含其它雜原子，以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。2、如權(quán)利要求1所要求的化合物，其中所述符號(hào)具有以下含義R1氫、鹵素、CF3、C3-CV環(huán)烷基；或者C廣(V烷基、C廣C6-芳基、C廣C6-?；?、鹵代-C廣CV烷基、C廣CV烷基-CrCV烷基、d-C6-垸基-d-CV?；廠CV?；?d-C6-?；?、CrC6-垸基-CrCV芳基、CrQ-芳基-d-C6-烷基或CF3基團(tuán)，其中CrCV烷基、d-CV芳基、d-(V?；Ⅺu代-d-C6-垸基、C廣CV烷基-d-C6-垸基、Ci-C6-垸基-d-C6-?；?、d-(V?；?C廣(V酰基、C,-C6-烷基-d-C6-芳基或CpC6-芳基-d-CV烷基可以任選地插入單個(gè)或多個(gè)、相同或不同的氧、硫或氮；或者磺酰基-C,-C6-垸基、氨磺酰或氰基基團(tuán)，R2鹵素、CF3、C3-C6-環(huán)烷基，或者C廣CV烷基、C廣C6-芳基、C廣C6-酰基、卣代-C廣C6-垸基、d-C6-垸基-CrC6-烷基、d-CV垸基-d-C6-?；?、CVC6-酰基-Q-C6-?；?、C廠C6-烷基-d-CV芳基、CKV芳基-CKV烷基或CF3基團(tuán)，其中d-CV烷基、d-CV芳基、CrCV?；?、鹵代-d-CV垸基、C廣C6-烷基-d-C6-烷基、C廠C6-垸基-d-C6-酰基、(VCV?；?C廣CV酰基、d-C6-垸基-CrCV芳基或CrC6-芳基-d-C6-烷基可以任選地插入單個(gè)或多個(gè)、相同或不同的氧、硫或氮；或者磺?；?CrC6-垸基、氨磺?；蚯杌鶊F(tuán)，R3CVd2-芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、d-C6-烷基、d-CV?；?、CKV烷氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、COHd-C3-烷基)、CO-NR4R5或CF3;Crd2-雜芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代氯和/或氟、CrCV烷基、d-Q-?；?、d-Cr垸氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、C02-(d-C3-烷基)、CO-NR4R5或CF3;C3-C6-環(huán)垸基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代氯和/或氟、CF3、氰基、d-C3-垸基、d-Cr?；⒘u基、N-(CH3)2、C02-(C廣C3-垸基)、CO-NR4R5或C廣C3-烷氧基，R4氫；C3-C6-環(huán)垸基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:C廣C3-垸基、d-C3-?；?、Cr(V垸氧基或CF3;Q-d2-芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:鹵素、CrC3-垸基、d-(V?；?、CKV烷氧基、N-d-C3-烷基-Q-C3-烷基、CF3或氰基；或者Cs-d2-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:鹵素、C,-C3-垸基、C廣C3-酰基、d-C3-烷氧基、N-d-C3-烷基-CrCV烷基、CF3或氰基；或者可以任意取代的C,-C6-烷基，R5氫；C,-C6-烷基-C3-C6-環(huán)垸基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代C,-C6-垸基、d-C6-?；?、C廣CV烷氧基或CF3;C3-CV環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:C廣CV垸基、CrQ-酰基、d-CV垸氧基或CF3;C6-C『芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、C廣C3-烷基、C廣C3-?；?、C廣Cr烷氧基、N-d-C3-烷基-Q-C3-垸基、CF3或氰基；或者Cs-d2-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、d-C3-垸基、d-C3-?；?、C,-C3-垸氧基、N-Q-C3-烷基-CrC3-垸基、CF3或氰基；或者可以任意取代的d-C6-烷基，以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。3、權(quán)利要求l-2所要求的化合物，其中所述符號(hào)具有以下含義R1氫，R2C3-CV環(huán)烷基、CrC6-垸基、CF3、氰基、溴，或者-OCF3、-S02-CH3基團(tuán)，R3C6-C,2-芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、Q-CV烷基、d-C3-?；?、d-C3-垸氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、COHC廣C3-烷基)、CO-NR4R5或CF3;Cs-d2-雜芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代氯和/或氟、C,-C6-垸基、d-C3-?；-C3-垸氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、C02-(C廣CV烷基)、CO-NR4R5或CF3;C3-C6-環(huán)垸基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代氯和/或氟、CF3、氰基、Q-Cr烷基、C「Cr酰基、羥基、N-(CH3)2、C02-(d-Cr垸基)、CO-NR4R5或d-C3-垸氧基；R4氫，R5氫；CrC6-烷基-C3-CV環(huán)烷基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代CrCV烷基、CrQ-?；?、C,-C6-烷氧基或CF3;C3-C6-環(huán)垸基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:C廣Cr烷基、d-CV酰基、CVC3-垸氧基或CF3;C6-C,2-芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:鹵素、C廣Cr烷基、d-C3-?；?、d-C3-烷氧基、N扁C廣C3-烷基-C廣C3-垸基、CF3或氰基；或者CVd2-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、C廣C3-烷基、d-CV酰基、d-C3-烷氧基、N-Q-Q-烷基-d-(V烷基、CF3或氰基；或者可以任意取代的CrQ-垸基，以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。4、權(quán)利要求l-3所要求的化合物，其中所述符號(hào)具有以下含義R1氫，R2C3-C6-環(huán)烷基、C-CV垸基、CF3、氰基、溴，或者在對(duì)位的-OCF3、-802-013基團(tuán)，R3CVd2-芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或二、相同或不同地取代鹵素、CVC3-垸基、乙酰基、甲氧基、乙氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、COHC廣Cr烷基)、CO-NHR5或CF3;Cs-C,2-雜芳基，其可以任選地用以下基團(tuán)單或二、相同或不同地取代氯和/或氟、CrCr垸基、乙?；⒓籽趸?、乙氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、C02-(CVC3-烷基)、CO-NHR5或CF3;C3-C6-環(huán)烷基,R4氫，R5氫；C,-CV烷基-C3-C6-環(huán)垸基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代C廣Q-垸基、C廣CV酰基、d-Q-烷氧基或CF3;C3-C6-環(huán)垸基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:C廣CV垸基、d-C6-酰基、d-C6-垸氧基或CF3;C6-d2-芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代:鹵素、d-C3-烷基、CKV?；?、CrCV烷氧基、N-C-Cr烷基-CVCV烷基、CF3或氰基；或者C5-Cn-雜芳基，其任選地用以下基團(tuán)單或多、相同或不同地取代鹵素、d-Cr烷基、d-C3-酰基、d-C3-垸氧基、N-d-Cr烷基-d-C3-烷基、CF3或氰基；或者可以任意取代的CrQ-烷基，以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。5、權(quán)利要求l-4所要求的化合物，其中所述符號(hào)具有以下含義R1氫，R2叔丁基、異丙基、異丁基、仲丁基、氰基、溴，或者在對(duì)位的-0-CF3、-802-(:1^基團(tuán)，R3基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>R4氫R5氫或基團(tuán)-(CH2)m-N-(CH3)2、-(CH2)2-CH3、—(CH2)2-NH-COCH:—(CH2)-CHCH3-OH、-(CH2)2-0-CH3、—(CH2)2-OH、—CHCHrCH2-OH，其中m=1-3,以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。6、權(quán)利要求l-5所要求的化合物，其中所述符號(hào)具有以下含義R1氫，R2叔丁基、異丙基、異丁基、仲丁基、氰基、溴，或者在對(duì)位的-0-CF3、-802-(:113基團(tuán)，R3基團(tuán)R4氫，R5氫或基團(tuán)-(CH2)-CHCH3-OH、-(CH2)2-0-CH3、-CHCH3-CH2-OH、以及它們的異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和鹽。7、權(quán)利要求l-6所要求的化合物，其選自以下化合物1.5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-lH-吲哚-2-羧酸-(四氫吡喃-4-基)酰胺丁宜紫龍每瞎而*龍、2itjnsmfl:，給鵬r>nantt4-甚7,某、酰胺3.(士)-5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-lH』引哚-2-羧酸-(2-羥基-l-甲基乙基)酰胺4.(士)-H4-叔丁基苯基氨磺酰基)-3-苯基-m-B引哚-2-羧酸-(2-羥基丙萄酰胺5.5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-(3-氟苯基)-lH-吲哚-2-羧酸-(四氫吡喃-4-基)酰胺6、5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-(3-氟苯基)-111-吲哚-2-羧酸(2-嗎啉-4-基乙基)酰胺7、5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-(3-甲氧基苯基)-lH』引哚-2-羧酸-(四氫吡喃-4-基)酰胺8.5-(4-叔丁基苯基氨磺酰基)-3-(3-甲氧基苯基)-lH-吲哚-2-羧酸-(2-嗎啉-4-基乙基)酰胺9.5-(4-叔丁基苯基氨磺?；?-3-苯基-1^吲哚-2-羧酸-(吡啶-4-基)酰胺。8、含有至少一種權(quán)利要求l-7所要求的化合物的藥品。9、權(quán)利要求8所要求的藥品，其含有有效劑量的通式1的化合物。10、用于生產(chǎn)藥品的權(quán)利要求l-7所要求的通式(I)的化合物。11、用于治療疾病的權(quán)利要求io所要求的藥品。12、權(quán)利要求11所要求的藥品，其中所述疾病是由cAMP代謝障礙導(dǎo)致的。13、用于避孕的權(quán)利要求IO所要求的藥品。14、用于抑制可溶性腺苷酸環(huán)化酶的權(quán)利要求IO所要求的藥品。15、含有適合載體和賦形劑的權(quán)利要求10-14所要求的藥品。16、權(quán)利要求1-7所要求的通式(I)的化合物的用途，其為用于腸內(nèi)、腸胃外、陰道和口服施用的藥物制劑形式。17、制備通式(I)的化合物的方法，其特征在于，使式II的化合物其中R1、W和RS各自如以上定義，且RS可以為氫或d-C6-烷基，與通式m的胺反應(yīng)，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(III)在裂解任何所需的保護(hù)基之后生成所述通式(I)的化合物。18、通式(II)的中間產(chǎn)物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中R1、W和RS各自如以上定義，且RS可以為氫或CKV烷基;或者通式(V)的中間產(chǎn)物或者通式(VII)的中間產(chǎn)物全文摘要本發(fā)明涉及通式(I)的化合物以及它們的生產(chǎn)和作為藥物的用途。文檔編號(hào)C07D209/04GK101448787SQ200780018643公開日2009年6月3日申請(qǐng)日期2007年3月22日優(yōu)先權(quán)日2006年3月23日發(fā)明者B·布赫曼,B·門岑巴赫,D·科澤蒙德,M·弗里奇申請(qǐng)人:拜耳先靈醫(yī)藥股份有限公司