專利名稱：：用于濃縮多肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于濃縮感興趣多肽的方法，涉及包含濃縮感興趣多肽的組合物作為用于皮下注射的藥物的用途并且涉及包含至少10mg/ml感興趣多肽的組合物。
背景技術(shù)：
：一些多肽用作藥物以預(yù)防和/或治療某些疾病。皮下注射藥物的能力是一種優(yōu)勢，因?yàn)檫@使得患者容易自己施用該藥物。由于對有可能皮下注射多大體積存在生理限制(physiologicalrestrain)，因此對于皮下施用的藥物而言，有利的是它們以高濃度可獲得，以確?；颊呓邮茏懔克幬锖?或避免多次皮下注射。W099/37325公開了治療和預(yù)防由屬于血紅素生物合成途徑的酶的活性缺乏或缺陷所致疾病的方法。W003/002731公開了用于工業(yè)規(guī)模地純化重組膽色素原脫氨酶的方法，并涉及所述純化產(chǎn)物用于制備藥物的用途。類似地，WO02/099092和WO2005/094874提供了溶酶體a-甘露糖苷酶及其治療性用途。最后，WO2005/073367提供用于純化芳基硫酸酯酶A的方法和該酶在治療異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良中的用途。本發(fā)明涉及用于濃縮感興趣多肽的方法，并且涉及包含濃縮感興趣多肽的組合物在制備用于皮下注射至哺乳動物的藥物中的用途。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明在一個方面涉及濃縮包含感興趣多肽的組合物的方法，其包括a)離心和/或過濾包含感興趣多肽的組合物，b)分別濃縮從步驟a)獲得的上清液或存留物。在另一個方面，本發(fā)明涉及包含至少10mg/ml感興趣多肽的組合物。在又一個方面，本發(fā)明涉及包含75-250mg/ml感興趣多肽的組合物在制備用于皮下注射至哺乳動物的藥物中的用途。在又一個方面，本發(fā)明涉及治療哺乳動物急性間歇性吟啉病的方法，其包4舌皮下注射含500-300mg/mlPBGD的組合物。在又一個方面，本發(fā)明涉及治療哺乳動物異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良的方法，其包括皮下注射含50-300mg/ml芳基硫酸酯酶A(ArylsulfataseA)的組合物。在又一個方面，本發(fā)明涉及治療哺乳動物溶酶體貯積病a-甘露糖香過多癥的方法，皮下注射50-300mg/ml溶酶體a-甘露糖苷酶的組合物。在又一個方面，本發(fā)明涉及治療哺乳動物克拉伯病的方法，其包括皮下注射含50-300mg/ml半乳糖基腦苷脂酶(galactosycerebrosidase)的組合物。定義為本發(fā)明的目的，序列的比對和同源性記分的計(jì)算可以使用可用于蛋白質(zhì)比對和DNA比對的完全Sm池-Waterman比對法進(jìn)行。默認(rèn)記分矩陣BLOSUM50和同一性矩陣分別用于蛋白質(zhì)比對和DNA比對。缺口(gap)中第一殘基的罰分對于蛋白質(zhì)是-12并且對于DNA是-16，而缺口中額外殘基的罰分對于蛋白質(zhì)是-2并且對于DNA是-4。比對可以用FASTA軟件包v20u6版本(W.R.Pearson和D.J.Lipman(1988),"用于生物序列分析的改良工具"，美國國家科學(xué)院院刊(PNAS)85:2444-2448和W.R.Pearson(1990)"用FASTP和FASTA的快速而敏感的序列比對"，酶學(xué)中的方法(MethodsinEnzymology)，183:63-98)進(jìn)行。蛋白質(zhì)序列的多重比對可以使用"ClustalW"(Thompson,J.D.,Higgins,D.G.和Gibson,TJ.(1994)CLUSTALW:通過序列加權(quán)、位置特異性缺口罰分和權(quán)重矩陣選擇而改良進(jìn)行性多重序列比對法的敏感性。核酸研究(NucleicAcidsResearch),22:4673-4680)而進(jìn)行。DNA序列的多重比對可以使用蛋白質(zhì)比對結(jié)果作為模板，以來自DNA序列的相應(yīng)密碼子替換氨基酸而進(jìn)行。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語"E.C."(酶分類)指國際認(rèn)可的酶分類系統(tǒng)，國際生物化學(xué)和分子生物學(xué)聯(lián)合會命名委員會推薦，學(xué)術(shù)出版社(AcademicPress),Inc。在氨基酸序列(例如蛋白質(zhì))或核酸序列的上下文環(huán)境下所用的術(shù)語"來源"將理解為意指從其中得到所述序列的生物。該序列可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的基因技術(shù)方法由另一種生物表達(dá)。該序列還包括已經(jīng)被化學(xué)合成的序列。此外，該序列可以包含細(xì)微的改變?nèi)缑艽a子優(yōu)化，即核酸序列中的不影響氨基酸序列的改變。發(fā)明詳述感興趣多肽本發(fā)明的多肽尤其可以為激素或激素變體(hormonevariant)、酶、受體或其部分、抗體或其部分、變應(yīng)原或報(bào)告分子。感興趣多肽尤其可以選自酶的六個主要分組之一，例如氧化還原酶(E.C.1)、轉(zhuǎn)移酶(E.C.2)、水解酶(E.C.3)、裂合酶(E.C.4)、異構(gòu)酶(E.C.5)或連接酶(E.C.6)中的酶。在更具體的方面，感興趣多肽可以是氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、過氧化氫酶、纖維素酶、纖維二糖水解酶、幾丁質(zhì)酶、角質(zhì)酶、環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶、脫氧核糖核酸酶、內(nèi)切葡聚糖酶、酯酶、a-半乳糖苦酶、(3-半乳糖香酶、葡糖淀粉酶、a-葡糖苷酶、P-葡糖苷酶、轉(zhuǎn)化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、葡聚糖酶(mutanase)、氧化酶、果膠降解酶、過氧化物酶、》岸脂酶、才直酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶、木聚糖酶或p-木糖苷酶。感興趣多肽尤其可以是可用作藥物的多肽。合適感興趣多肽的實(shí)例包括但不限于選自膽色素原脫氨酶、芳基硫酸酯酶、a-甘露糖香酶和半乳糖腦苷脂酶的其中之一的酶。原則上，從任何來源可獲得的感興趣多肽都可以根據(jù)本發(fā)明方法進(jìn)行處理。在具體實(shí)施方式中，感興趣多肽可以是人源的。尤其在使用感興趣多肽來制造將施用至人的藥物的情況下，所述多肽可以是人源的，因?yàn)檫@可以使不希望有的變態(tài)反應(yīng)的風(fēng)險最小化。術(shù)語"人類來源，，在本發(fā)明上下文中包括例如因多態(tài)性所致的人多肽的天然變異。感興趣多肽尤其可以作為重組蛋白進(jìn)行生產(chǎn)，即編碼感興趣多肽的核苷酸序列可以導(dǎo)入用于表達(dá)感興趣多肽的細(xì)胞。重組表達(dá)可以是同源的或異源的，即感興趣多肽可以在天然表達(dá)該多肽的細(xì)胞中天然地表達(dá)(同源性表達(dá))或它可以由不天然表達(dá)此多肽的細(xì)胞表達(dá)(異源性表達(dá))。重組感興趣多肽可以由適于重組產(chǎn)生特定感興趣多肽的任何細(xì)胞表達(dá)。合適細(xì)胞的實(shí)例包括但不限于原核細(xì)胞，如大腸桿菌(Eco//)細(xì)胞或芽孢桿菌(5ac/〃w)細(xì)胞。合適的真核細(xì)胞的實(shí)例包括但不限于酵母細(xì)胞或如中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)的哺乳動物細(xì)胞。備選地，它可以是人細(xì)胞。用于表達(dá)糖基化多肽的合適宿主細(xì)胞得自多細(xì)胞生物(multicellularorganism)。無脊推動物細(xì)胞的實(shí)例包括植物細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞。然而，宿主細(xì)胞也可以是脊推動物細(xì)胞，并且對培養(yǎng)(組織培養(yǎng))的脊推動物細(xì)胞增殖已經(jīng)變成常規(guī)方法。術(shù)語"重組多肽"或"重組感興趣多肽"在本文中指重組產(chǎn)生的多肽。對特定感興趣多肽稱謂在本發(fā)明的上下文中也包括感興趣多肽的功能等效部分或類似物。例如若感興趣多肽是酶，則該酶的功能等效部分可以是該酶的如此結(jié)構(gòu)域或次序列(subsequence),其包括能夠產(chǎn)生與全長酶或可選4奪的編碼催化劑的基因基本上相同的酶活性的必需催化位點(diǎn)。術(shù)語"基本上相同的酶活性"指具有至少50%、優(yōu)選至少60%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少75%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少85%、更優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%和最優(yōu)選地至少97%、至少98%或至少99%的天然酶活性的等效部分或類似物。酶的酶學(xué)等效類似物的實(shí)例可以是包括處于有功能形式下的該酶催化位點(diǎn)的融合蛋白，不過它也可以是得自另一個物種的該酶的同源變體。另外，模擬相關(guān)酶的專一性酶活性的完全人造分子也構(gòu)成"酶學(xué)等效類似物"。通常，技術(shù)人員將能夠輕易地設(shè)計(jì)用于測定酶活性的適宜測定法。然而對于PBGD,合適的測定法在WO03/002731中、在實(shí)施例2中及在本申請的實(shí)驗(yàn)部分中描述。除其天然底物之外，芳基硫酸酯酶也能夠催化合成性生色底物對-硝基兒茶酚硫酸酯(pNCS)的水解。對-硝基兒茶酚(pNC)產(chǎn)物吸收在515nm上的光線。用于測定芳基石克酸酯酶活性的測定法在WO2005/073367并在Fluharty等1978，酶學(xué)方法學(xué)(Meth.Enzymol).50:537-47中詳述。對于LAMAN，適宜的酶活性測定法在WO02/099092中公開。膽色素原脫氨酶在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的感興趣多肽可以是膽色素原脫氨酶(又稱作膽色素原氨-裂合酶(聚合作用))即E.C.4.3丄8.(Waldenstr6m1937，J.Acta.Med.Scand.Suppl.8)。膽色素原脫氨酶是血紅素生物合成途徑中的第三個酶。已經(jīng)將E.C.4.3.1.8改稱E.C.2.5.1.61,因此膽色素原脫氨酶(PBGD)現(xiàn)在位于這個E.C.編號下。膽色素原脫氨酶催化如此反應(yīng)4個膽色素原+H20=羥甲基膽色烷十4個NH3。PBDG與急性間歇性卟啉病(AIP)有重要關(guān)系，其中急性間歇性卟啉病是因人類中PBDG缺乏(活性降低50%)所致的常染色體顯性疾病(有關(guān)該疾病的其它細(xì)節(jié)，見WOO1/07065)。膽色素原脫氨酶簡稱為PBGD并且這兩個術(shù)語在本發(fā)明的上下文中可以彼此相互交換地使用。為PBGD的重組表達(dá)，宿主細(xì)胞尤其可以是酵母細(xì)胞或大腸桿菌細(xì)胞。對于構(gòu)建重組大腸桿菌細(xì)胞的詳細(xì)實(shí)例，參考WO01/07065的實(shí)施例1并且對于構(gòu)建能夠表達(dá)小鼠PBGD的重組HeLa細(xì)胞和重組NIH3T3細(xì)胞，參考WO01/07065的實(shí)施例6。術(shù)語"重組膽色素原脫氨酶(rPBGD)"在本文中指重組產(chǎn)生的PBGD。在下文中，這種酶及其重組的人PBGD形式將分別稱作"PBGD"和"rhPBGD"。在該術(shù)語中還包括PBGD的酶學(xué)等效部分或類似物。該酶的酶學(xué)等效部分的一個實(shí)例可以是該酶的如此結(jié)構(gòu)域或次序列，其包括能夠產(chǎn)生與全長酶或可選擇的編碼催化劑的基因基本上相同的酶活性的必需催化位點(diǎn)。術(shù)語"基本上相同的酶活性"指該酶的如此等效部分或類似物，其具有至少50%、優(yōu)選至少60%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少75%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少85%、更優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少95%和最優(yōu)選至少97%、至少98%或至少99%在WO03/002731的實(shí)施例2內(nèi)描述的rhPBGD活性測定法中所測量的天然人rhPBGD活性。該酶的酶學(xué)等效類似物的實(shí)例可以是包括處于有功能形式下的該酶催化位點(diǎn)的融合蛋白，不過它也可以是得自另一個物種的該酶的同源變體。另外，模擬相關(guān)酶的專一性酶活性的完全人造性分子也構(gòu)成"酶學(xué)等效類似物"。可以在本發(fā)明中使用的PBGD的實(shí)例包括在本申請序列1-10中所示或具有Genebank編號X04217、X04808或M95623的那些PBGD的任意一種。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方式中，感興趣多肽可以是芳基硫酸酯酶A(ArylsulfataseA)。芳基硫酸酯酶A催化下列反應(yīng)3-硫酸腦苷脂+!120=腦芬脂+硫酸鹽(sulphate)。已經(jīng)從包括人肝臟、胎盤和尿的多種來源中純化了ASA。ASA是具有低等電點(diǎn)的酸性糖蛋白。在大于pH6.5,此酶作為分子量大約110kDa的二聚體存在。ASA發(fā)生pH-依賴性聚合，在pH4:5上形成八聚體。在人尿中，該酶由63和54kDa的兩個不相同亞基構(gòu)成。從人肝臟、胎盤和成纖維細(xì)胞中純化的ASA也由大小略微不同的分子量在55和64kDa之間變化的兩個亞基構(gòu)成。如同其它溶酶體酶，ASA在膜結(jié)合核糖體上作為糖基化前體合成。這種糖基化前體隨后穿過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，在其中糖基化前體的N-連接寡糖得到加工，形成磷酸化及^L酸化的復(fù)雜型寡糖(WaheedA等生物化學(xué)及生物物理學(xué)報(bào)(BiochimBiophysActa).1985，847，53-61，BraulkeT等生物化學(xué)與生物物理學(xué)研究通訊(BiochemBiophysResCommun).1987,143,178-185)。在正常培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中，產(chǎn)生62kDa的前體多肽，該前體多肽通過甘露糖-6-磷酸受體結(jié)合作用而轉(zhuǎn)位(BraulkeT等生物化學(xué)雜志(JBiolChem).1990,265,6650-6655)至酸性前溶酶體內(nèi)體(KellyBM等細(xì)胞生物學(xué)歐洲雜志(EurJCellBio)1.1989，48，71-78)。芳基硫酸酯酶A尤其可以是人源的。人ASA信號肽的長度(18個氨基酸)以共有序列和信號序列的特異性加工位點(diǎn)為基礎(chǔ)。因此，對來自推導(dǎo)性人ASAcDNA(EMBLGenBank登錄號J04593和X521151)的信號肽的切割應(yīng)當(dāng)在全部細(xì)胞中在殘基編號18(Ala)之后進(jìn)行，產(chǎn)生成熟形式的人ASA。在下文中，重組芳基硫酸酯酶A將縮寫成rASA,成熟形式的芳基硫酸酯酶A(包括成熟形式的人ASA)將稱作"mASA"并且成熟的重組人ASA將稱作"mrhASA"。一種蛋白質(zhì)修飾已經(jīng)在兩種真核硫酸酯酶(ASA和芳基硫酸酯酶B(ASB))中確定，并且這兩種真核硫酸酯酶之一來自綠藻即團(tuán)藻(Volvoxcarteri)(SchmidtB等細(xì)胞(Cell).1995，82，271-278，SelmerT等生物化學(xué)歐洲雜志(EurJBiochem).1996，238，341-345)。這種修飾導(dǎo)致在已知硫酸酯酶中保守的半胱氨酸殘基轉(zhuǎn)化成2-氨基-3-氧代丙酸殘基(SchmidtB等Cell.1995,82,271-278)。這種新氨基酸衍生物也識別為C、甲酰甘氨酸(FGly)。在得自MSD細(xì)胞的ASA和ASB中，Cys-69殘基得以保留。因此，提出Cys-69至FGly-69的轉(zhuǎn)化對于產(chǎn)生催化活性ASA和ASB是必需的，并且這種蛋白質(zhì)修飾的缺乏是MSD的病因。Cys-69參照具有18殘基信號肽的前體ASA。在mASA中，所提及的半胱氨酸殘基是Cys-51。其它研究已經(jīng)證實(shí)在mASA中包圍Cys-51的一個16殘基線型序列足以指導(dǎo)這種轉(zhuǎn)化并且這種蛋白質(zhì)修飾發(fā)生在共翻譯性蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)位至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)之后或在其晚期，此時多肽仍沒有折疊成其天然結(jié)構(gòu)(DierksT等美國國家科學(xué)院院刊(ProcNatlAcadSci).1997，94，11963-1196,Wittke，D.等(2004)，神經(jīng)病理學(xué)學(xué)報(bào)(ActaNeuropathol).(Berl.),108，261-271)。多種形式的ASA已經(jīng)在來自人尿、白細(xì)胞、血小板、培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞和肝臟的酶制備物的電泳和等電聚焦電泳上證實(shí)。用內(nèi)切糖普酶H、唾液酸酶和堿性磷酸酶處理降低了分子大小和電泳圖案的復(fù)雜性，這表明ASA的大量電荷不均一性歸因于該酶的糖含量變化。芳基硫酸酯酶A尤其可以是能夠跨過血腦屏障的芳基^^酸酯酶A形式和/或具備用于進(jìn)入腦內(nèi)靶細(xì)胞的特異性標(biāo)簽的rASA形式。特別地，它可以是在體內(nèi)通過甘露糖-6-磷酸途徑而得到高效內(nèi)吞的rASA。因此，ASA尤其可以與作為載體的所謂標(biāo)簽、肽或蛋白質(zhì)或作為載體的毒素共價地連接，其中所述的載體通常能夠增加和/或促進(jìn)ASA運(yùn)輸穿過血腦屏障和/或跨過細(xì)胞膜(Schwarze等，細(xì)胞生物學(xué)趨向(TrendsCellBiol).2000;10(7):290-295;Lindgren等，藥理科學(xué)趨向(TrendsPharmacol.Sci).2000;21(3):99-103)。含有此類肽序列的ASA分子可以通過表達(dá)技術(shù)而產(chǎn)生。蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程不是細(xì)胞類型特異性的，并且該過程發(fā)生的機(jī)理未充分闡明，然而，據(jù)信此過程因受體依賴性的某種類型的膜擾動及穿透過程而發(fā)生。分子的部分解折疊狀態(tài)可能促進(jìn)該過程，但不是必需的。合適標(biāo)簽的實(shí)例包括但不限于甘露糖-6-磷酸標(biāo)簽。作為載體的肽或蛋白質(zhì)的實(shí)例包括但不限于所謂蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。合適白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，其中所述文獻(xiàn)通過參考在本文中并入。因此，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域可以是來自HIVTAT蛋白的11殘基堿性肽-YGRKKRRQRRR(Schwarze等，TrendsCellBiol.2000;10(7):290-295)、對序列賦予更多a-螺旋性和兩性特征的TAT的合成形式-YARAAARQARA(Ho等，癌癥研究(CancerRes),2001;6l(2):474-477)、由聚-R或與其它氨基酸組合的堿性-R與-K殘基的混合物構(gòu)成的合成性前導(dǎo)肽和以來自p-3整合素或卡波奇氏肉瘤FGF的疏水性信號序列部分為基礎(chǔ)的肽(Dunican等生物高聚物(Biopolymers)2001;60(1):45-60)。作為載體的合適毒素的實(shí)例包括但不限于在WO2005/073367中提及的那些毒素，其中所述文獻(xiàn)通過參考在本文中并入。ASA尤其可以包含這樣的核酸序列，其編碼(a)WO2005/073367中的SEQ[DNO:2的氨基酸序列;(b)在(a)中所述序列的部分，該部分與重組人芳基艱u酸酯酶A是酶學(xué)等效的；(c)氨基S菱序列類似物，其與(a)或(b)中的任一序列具有至少75%的序列同一性，并且與此同時包含與重組人芳基硫酸酯酶A為酶學(xué)等效的氨基酸序列。在本文的上下文中，氨基酸序列或氨基酸序列的部分是在如WO2005/073367的實(shí)施例1中所述的用于測量芳基硫酸酯酶A活性的測定法中測定時，能夠在37。C以與至少20U/mg多肽(優(yōu)選50U/mg多肽)的專一活性相對應(yīng)的速率水解一定量芳基硫酸酯酶A底物pNCS的多肽，和/或是在如溫育而分析時，能夠水解至少40。/。的加載至MLD成纖維細(xì)胞的標(biāo)記芳基硫酸酯酶A底物fx.14C棕櫚酰硫苷脂的多肽。ASA可以在另一個實(shí)施方式尤其包含(a)WO2005/073367中的SEQIDNO:1的核酸序列；(b)在(a)中所述序列的部分，該部分編碼與重組人芳基硫酸酯酶A為酶學(xué)等效的氨基酸序列；(c)核酸序列類似物，其與(a)或(b)中的任一序列具有至少75%的序列同一性并且與此同時編碼與重組人芳基硫酸酯酶A為酶學(xué)等效的氨基酸序列?？梢詢?yōu)選的是在上文提及的核酸序列與WO2005/073367的SEQIDNO:1之間的序列同一性程度是至少80%、如至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%?？梢酝葍?yōu)選的是在由上文提及的核S臾序列編碼的氨基S吏序列與WO2005/073367的SEQIDNO:2之間的序列同一性程度是至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。為本發(fā)明的目的，優(yōu)選芳基硫酸酯酶A是重組酶，特別優(yōu)選重組的人芳基硫酸酯酶A(rhASA)。優(yōu)選在哺乳動物細(xì)胞或細(xì)胞系中產(chǎn)生rASA,并且所述的哺乳動物細(xì)胞或細(xì)胞系產(chǎn)生rASA的糖形式，所述的糖形式在體內(nèi)通過甘露糖-6-磷酸受體途徑而得以高效內(nèi)吞。具體而言，rASA的優(yōu)選糖形式包含一定量暴露的甘露糖-6-磷酸，這促使rASA在體內(nèi)通過甘露糖-6-磷酸途徑的高效內(nèi)吞。在具體實(shí)施方式中，所產(chǎn)生的rASA糖形式至少之一與CHO細(xì)胞中所產(chǎn)生的糖形式相似。在成熟人芳基硫酸酯酶A的位置51中的半胱氨酸殘基的翻譯后修飾與該酶的活性相關(guān)。因此在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式中，芳基^J菱酯酶A或其等效物的產(chǎn)生以這樣的速率并且在如此條件下發(fā)生，其產(chǎn)生包含該酶同工型的產(chǎn)物，其中在所述的同工型中與WO2005/073367的SEQIDNO:2的Cys-69相對應(yīng)的氨基酸一皮轉(zhuǎn)化成與WO2005/073367的SEQIDNO:3的Fgly-51相對應(yīng)的甲酰甘氨酸。WO2005/073367的SEQIDNO:4代表切除18氨基酸信號肽后而在修飾C-51之前的成熟人芳基硫酸酯酶A。因此在本發(fā)明的另一個實(shí)施方式中，ASA或其酶等效物可以選自(a)WO2005/073367中的SEQIDNO:3的氨基酉1^列；(b)在(a)中序列的部分，該部分與重組人芳基硫酸酯酶A是酶學(xué)等效的；(c)氨基S菱序列類似物，其與(a)或(b)中的任一序列具有至少75%的序列同一性并且與此同時與重組人芳基硫酸酯酶A是酶學(xué)等效的?？梢詢?yōu)選的是在根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的酶與WO2005/073367的SEQIDNO:3或WO2005/073367的SEQIDNO:4之間的序列同一性程度是至少80%,如至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。因?yàn)轶w內(nèi)酶的生物學(xué)活性和作用需要是最佳的，因而若足量的酶已經(jīng)獲得如上所述的糖基化模式并且在位置51上已經(jīng)受到翻譯后修飾，則這是有利的。因此至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或98%的本發(fā)明ASA可以是上文所述的糖形式/同工型。本發(fā)明的ASA可以就其結(jié)構(gòu)而言異于根據(jù)2005/073367的SEQIDNO:3的rASA?？梢杂欣氖前鼑鶦ys-51的序列與SEQIDNO:3中的相應(yīng)序列相同或具有高程度的序列同一性。因此，可以優(yōu)選芳基硫酸酯酶A中包圍Cys-51的20氨基酸線型序列如19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5或4氨基酸殘基與2005/073367的SEQIDNO:3中的相應(yīng)序列相同或與所述相應(yīng)序列至少90%相同，如95%、96%、97%、98%或99%相同。由于溶酶體中rASA的活性形式是八聚體，本發(fā)明的ASA尤其可以是在生理?xiàng)l件下作為八聚體或裝配成八聚體的rASA。ASA的酶活性(其應(yīng)當(dāng)理解為rASA的催化活性)可以在這樣的酶測定法中測量，其中所述的酶測定法基于可檢測底物或?qū)Ξa(chǎn)生可檢測終產(chǎn)物的底物的rASA介導(dǎo)性水解。在優(yōu)選的方面，該測定法基于對具有終產(chǎn)物對-硝基兒茶酚(pNC)的合成性生色底物對-硝基兒茶酚^琉酸酯(pNCS)的水解，其中所述的對-硝基兒茶酚吸收在515nm上的光線。溶酶體a-甘露糖芬酶在又一個實(shí)施方式中，感興趣多肽可以是溶酶體a-甘露糖苷酶(LAMAN)。溶酶體a-甘露糖苦酶屬于EC3.2丄24并且是在N-連接糖蛋白有序降解期間從非還原性末端水解a-D-甘露糖苷中末端非還原性a-D-甘露糖殘基的外切糖苷酶(Aronson和Kuranda美國實(shí)驗(yàn)生物學(xué)會聯(lián)合會雜志(FASEBJ)3:2615-2622.1989)。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語溶酶體a-甘露糖苷酶可以與短語LAMAN交換地使用。本發(fā)明的LAMAN尤其可以是人源的。人源酶合成作為帶有一個49殘基推定信號肽的含1011個氨基酸的單一多肽，其中所述的推定信號肽加工成15kD、42kD和70kD的3種主要糖肽(Nilssen等人類分子遺傳學(xué)(Hum.Mol.Genet).6,717-726.1997)。編碼LAMAN(MANB)的基因位于第19染色體(19cen-ql2)(Kaneda等染色體(Chromosoma)95:8-12.1987)。MANB由24個外顯子構(gòu)成，覆蓋21.5kb(GenBank登錄號U60885—U60899;Riise等基因組學(xué)(Genomics)42:200-207.1997)。LAMAN轉(zhuǎn)錄物大約有3，500個核香酸(nt)并含有編碼1,011個氨基酸的可讀框(GenBankU60266.1)。已經(jīng)在三篇論文中發(fā)表對編碼LAMAN的人cDNA的克隆和測序(Nilssen等Hum.Mol.Genet6,717-726.1997;Liao等J.Biol.Chem.271,28348-28358.1996;Nebes等Biochem.Biophys.Res.Commun.200,239-245.1994)。令人好奇的是，這三種序列是不相同的。當(dāng)與Nilssen等的序列(登錄號U60266.1)比較時，Liao等和Nebes等找到了導(dǎo)致從纈氨酸至天冬氨酸置換的在位置1670和1671上TA至AT改變。在最優(yōu)選的實(shí)施方式中，溶酶體a甘露糖苷酶包含WO2005/094874的SEQIDNO.:1的氨基酸序列。處于實(shí)用和經(jīng)濟(jì)原因，優(yōu)選重組地產(chǎn)生本發(fā)明的LAMAN。通過重組生產(chǎn)，也可以有可能獲得該酶的制備物，其中大部分的酶含有甘露糖-6-磷酸。重組生產(chǎn)可以通過使用包含WO2005/094874的SEQIDNO.:2的序列的核酸序列轉(zhuǎn)染細(xì)胞而實(shí)現(xiàn)。a-甘露糖苷酶優(yōu)選地在哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)中產(chǎn)生，因?yàn)檫@將產(chǎn)生在例如身體內(nèi)臟器官的細(xì)胞中確保受體介導(dǎo)性高效攝取的糖基化形式。尤其，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)酶在CI-10、COS或BHK細(xì)胞中的產(chǎn)生確保通過添加甘露糖-6-磷酸殘基而充分地使酶轉(zhuǎn)錄后修飾。此外，獲得了正確的唾液酸化形式。已知為了阻止因暴露的半乳糖殘基所致的肝臟攝取，正確的唾液酸化是重要的。在甚至更優(yōu)選的實(shí)施方式中，哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)因而選自CHO、COS細(xì)胞或BHK細(xì)胞(Stein等生物化學(xué)雜志(JBiolChem).1989,264，1252-1259)。還可以優(yōu)選的是哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)是人成纖維細(xì)胞細(xì)胞系。在最優(yōu)選的實(shí)施方式中，哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)是CHO細(xì)胞系。在另一個實(shí)施方式中，溶酶體a-甘露糖苷酶可以是溶酶體a-甘露糖苷酶的如此制備物，其中所述制備物的一部分由具有攜帶甘露糖6-磷酸基一個或多個N-連接寡糖的溶酶體a甘露糖苷酶構(gòu)成。還優(yōu)選的是所述溶酶體a-甘露糖苷酶的一部分制備物能夠與甘露糖6-磷酸受體結(jié)合。該酶與甘露糖-6-磷酸受體結(jié)合的能力可以在如WO2005/094874的實(shí)施例1中所述的體外測定法內(nèi)測定。該酶對MPR親和300Matrix的結(jié)合提供了對此酶與甘露糖-6-磷酸受體結(jié)合能力的度量。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式中，酶對甘露糖-6-磷酸受體的結(jié)合在體外發(fā)生。在本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述的部分對應(yīng)于溶酶體a-甘露糖苷酶制備物的1-75%活性，如2-70%,如5-60%,如10-50%,如15-45%,如20-40%，如30-35%。因此，優(yōu)選溶酶體a-甘露糖苦酶具有這樣的甘露糖6-磷酸殘基含量，其允許2-100%、5-95%、10-卯％、20-80%、30-70%或40-60%量的酶與Man-6-P-受體基質(zhì)發(fā)生甘露糖6-磷酸依賴性結(jié)合。目前，磷S吏化程度已經(jīng)在幾批次的酶中加以分析并且通常30-45%的酶是磷酸化的并且結(jié)合親和基質(zhì)。還優(yōu)選的是占據(jù)所述溶酶體a-甘露糖芬酶量2-100%、5-卯％、10-80%、20-75%、30-70%、35-65%或40-60%的部分與Man-6-P-受體以高親和力結(jié)合。理論上，兩個甘露糖6-磷酸基團(tuán)必須在位置上相互靠近以便該酶以高親和力結(jié)合Man-6-P-受體。最近的觀察結(jié)果表明磷酸化甘露糖殘基之間的距離在必須是40A或更短，以便獲得高親和力結(jié)合。在根據(jù)WO2005/094874的SEQIDNO:1的人溶酶體a-甘露糖香酶中，兩個甘露糖6-磷酸殘基可以位于位置367和766中的天冬酰胺殘基處。因此，優(yōu)選本發(fā)明的藥物包含這樣的溶酶體a-甘露糖苷酶，它的一部分在這兩個天冬酰胺殘基處均攜帶甘露糖6-磷酸基團(tuán)。優(yōu)選地，a-甘露糖苷酶通過重組技術(shù)產(chǎn)生。在又一個實(shí)施方式中，a-甘露糖苷酶源于人(hLAMAN)并且仍更優(yōu)選是成熟的人a-甘露糖苷酶(mhLAMAN)或其片段。該片段可以受到修飾，然而，酶的活性部位應(yīng)當(dāng)保留。預(yù)期在本發(fā)明a-甘露糖苷酶的制備物中，該酶的一部分部由此酶的前體形式代表，而其它部分代表大約55和70kDa,的蛋白酶裂解加工形式。半乳糖腦苷脂酶在另一個實(shí)施方式中，感興趣多肽可以是半乳糖腦苷脂酶，其可以縮寫成GALC。半乳糖腦苷脂酶屬于E.C.3丄6.46并且是能夠催化以下反應(yīng)的酶D-半乳糖基-N-酰基鞘氨醇+&0=0-半乳糖+^?；拾贝?，因此GALC催化例如髓鞘中半乳糖脂的降解。得自人的GALC酶是包含643個氨基酸并具有72.8kDa分子量的糖基化溶酶體酶。本發(fā)明的GALC尤其可以是人源的。在又一個實(shí)施方式中，GALC可以在前文提及的宿主細(xì)胞中重組地表達(dá)。用于重組表達(dá)GALC的宿主細(xì)胞尤其可以是CHO細(xì)胞。在發(fā)明描述和在權(quán)利要求書中，參考下列氨基酸序列及核酸序列:序列描述序列識別符PBGD編碼序列1SEQIDNO.:1PBGD編碼序列2SEQIDNO.:2PBGD編碼序列3SEQIDNO.:3PBGD編碼序列4SEQIDNO.:4PBGD編碼序列5SEQIDNO.:5PBGD編碼序列6SEQIDNO.:6PBGD編碼序列7SEQIDNO.:7PBGD編碼序列8SEQIDNO.:8PBGD編碼序列9SEQIDNO.:9PBGD編碼序列10SEQIDNO.:10PBGD編碼序列，GenBank登錄號X04217SEQIDNO.:11PBGD編碼序列，GenBank登錄號X04808SEQIDNO.:12PBGD編碼序列，GenBank登錄號M95623SEQIDNO.:13PBGD來自編碼序列的氨基酸序列，GenBank登錄號M95623，組成型形式SEQIDNO.:14PBGD來自編碼序列的氨基酸序列，GenBank登錄號M95623，紅細(xì)胞生成形式SEQIDNO.:15ASA編碼序列GenBank登錄號J04593SEQIDNO.:16ASA編碼序列WO2005/073367的SEQIDNO.:1SEQIDNO.:17ASA氨基酸序列WO2005/073367的SEQIDNO.:2SEQIDNO.:18ASA氨基酸序列WO2005/073367的SEQIDNO.:3SEQIDNO.:19ASA氨基酸序列WO2005/073367的SEQIDNO.:4SEQIDNO.:20LAMAN氨基酸序列WO2005/094874的SEQIDNO.:1SEQIDNO.:21LAMAN編碼序列WO2005/094874的SEQIDNO.:1SEQIDNO.:22半乳糖腦苷脂酶編碼序列SEQIDNO.:23半乳糖腦苷脂酶氨基酸序列SEQIDNO.:24參考這些序列，感興趣多肽根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式包含選自以下所組成的組中的氨基酸i)如SEQIDNO.:14、SEQIDNO.:15、SEQIDNO.:18、SEQIDNO.:19、SEQIDNO.:20、SEQIDNO.:21和SEQIDNO.:24所定義的4壬意氨基酸序列；ii)如i)中所定義氨基酸序列的功能等效部分；以及iii)如i)或ii)中所定義氨基酸序列的功能等效類似物，所述類似物的氨基酸序列與如i)或ii)中所定義氨基酸序列至少75%相同。在具體實(shí)施方式中，在iii)中的類似物與如i)或ii)中定義的序列至少80%相同，例如至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%,或例如至少99.5%與如i)或ii)中定義的序列相同。,此外，感興趣多肽可以使用包含選自以下序列的核酸序列通過重組表達(dá)而獲得i)如SEQIDNO.:1-13、SEQIDNO.:16、SEQIDNO.:17、SEQIDNO.:22和SEQIDNO.:23所定義的任意核酸序列；ii)與如i)中所定義核酸序列至少75。/。相同的核S菱序列。為重組產(chǎn)生所述多肽，也可以優(yōu)選的是在ii)中的核酸序列與如i)或ii)中定義的序列至少80%相同，如至少85%,至少90%,至少95%,至少98%,至少99%,或如至少99.5%與如i)或ii)中定義的序列相同。包含感興趣多肽的組合物以下對包含感興趣多肽的組合物的描述涉及包含根據(jù)本發(fā)明方法加以濃縮的多肽的組合物，并且該描述也涉及包含至少10mg/ml感興趣多肽的本發(fā)明組合物。本發(fā)明也涉及包含至少10mg/ml感興趣多肽的組合物，其中，感興趣多肽可以是根據(jù)本發(fā)明的任何多肽，尤其如rhPBGD、芳基硫酸酯酶、a-甘露糖苷酶或半乳糖腦香脂酶。該組合物尤其可以包含至少25mg/ml感興趣多肽，如至少50mg/ml或至少75mg/ml或至少100mg/ml感興趣多肽。因此，該組合物尤其可以包含在10-1000mg/ml之間的感興趣多欣，如在10-500mg/ml之間、或在10-300mg/ml之間、或在10-200mg/ml之間、或在25-500mg/ml之間、或在25-400mg/ml之間、或在40-400mg/ml之間、或在40-300mg/ml之間、或在50-400mg/ml之間、或在50-300mg/ml之間、或在75-400mg/ml之間、或在75-300mg/ml之間、或在100-200mg/ml之間、或在100-150mg/ml之間的感興趣多肽。包含感興趣多肽的組合物尤其可以是水溶液。除了包含高濃度的多肽之外，該組合物尤其還可以不包含感興趣多肽的團(tuán)聚體或至少僅極少的團(tuán)聚體。因此，作為團(tuán)聚體存在的感興趣多肽的量尤其可以占組合物中感興趣多肽總量的小于5w/w%。尤其所述的團(tuán)聚體可以占小于4w/w%，如小于3w/w。/。或小于2w/w。/?；蛐∮?w/w。/?；蛐∮?.5w/w。/o或小于O.lw/w。/。的感興趣多肽總量。在本文環(huán)境中，術(shù)語"團(tuán)聚體"意指非單體性的感興趣多肽的任何形式。因此，該術(shù)語術(shù)語包括感興趣多肽的任何二聚體或多聚體。此外，若所述組合物僅包含感興趣多肽或至少僅痕量的其它蛋白質(zhì)(即異于感興趣多肽的蛋白質(zhì))，則有利。因此在具體方式中，該組合物包含除感興趣多肽以外小于1w/w。/o,如小于0.5w/wO/o、或小于0.1w/w。/o或小于0.05w/w%或小于0.01w/w。/。的其它蛋白質(zhì)。一系列因素影響多肽的穩(wěn)定性和活性，并且包含感興趣多肽的組合物因此可以尤其進(jìn)行優(yōu)化以盡可能維持感興趣多肽穩(wěn)定。pH通常影響感興趣多肽的穩(wěn)定性，因此包含感興趣多肽的組合物的pH尤其可以在7.5-8.5范圍內(nèi)，如具體在pH7.7-8.2之間，更具體地在pH7.8-8.0之間或在pH7.85-7.95之間，如pH7.8或pH7.9。如果感興趣多肽是PBGD，pH尤其可以是這樣的。因此，包含感興趣多肽的組合物尤其可以包含能夠維持組合物在所述pH范圍內(nèi)的緩沖劑。此類緩沖劑的實(shí)例包括但不限于三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽(TRIS-HCL)、檸檬酸鈉(Na-citrate)和Na2HP04。這種緩沖劑的濃度可以取決于對具體緩沖劑的選擇和組合物中其它成份的存在。若緩沖劑是Na2HP04，Na2HP04的濃度可以是0.5-15mM如1-10mM,或是1.5-7.5mM如1.83-7.4mM,或是1.5-3mM如1.83-3.7mM，或是1.83-2.45mM，或是3.5-7.5mM如3.6-7.4mM，或是5.4-7.4mM，如1.84mM或2.45mM或3.67mM或5.51mM或7,34mM。若緩沖劑是TRIS-HCL，TRIS-HCL的濃度其尤其可以是2-50mM,如2-40mM或2-30mM或2-20mM或2-10mM或5-25mM或5-20mM或8-12mM或9-11mM,例如10mM?；帷⑻?、醇和去垢劑。合適化合物的實(shí)例包括但不限于甘氨酸、甘露醇、蔗糖、L-絲氨酸、Tween80或一種或多種所述化合物的組合。這些化合物的濃度取決于具體化合物，不過對于甘氨酸，濃度尤其可以是1-200mM，如5-190mM或10-180mM或10-170mM或20-160mM或20-150mM或25-125mM，或者5-100mM或5-90mM或5-80mM或5-70mM或5-60mM,或者10-100mM或10-90mM或10-80mM或10-70mM或10-60mM或12-60mM或12-55mM或13.5-54mM或10-30mM,如13.5-27mM或13.5-18mM，或25-55mM如27-54mM,或40-55如40.5-54mM,如12.5mM、13mM、13.5mM、14mM、14.5mM、17mM、17.5mM、18mM、18.5mM、19mM、25mM、26mM、27mM、28mM、29mM、30mM、39.5mM、40mM、40.5mM、41mM、41.5mM或53mM、53.5mM、53mM、54.5mM或55mM。甘露醇的濃度尤其可以是50-1000mM，如50-卯0mM或50-800mM或50-700mM或50-600mM或100-900mM或100-800mM或100-700mM或100-600mM或100-500mM或120-525mM或125-500mM或100-300mM，如120-275mM或120-170mM或200-600mM,如225-550mM或240-510mM或370-525mM，如120mM、125mM、130mM、160mM、165mM、166.7mM、170mM、175mM、200mM、221mM、225mM、250mM、275mM、300mM、365mM、370mM、375mM、380mM、385mM、490mM、495mM、500mM、505mM或510mM.蔗糖的濃度尤其可以是1-200mM，如5-190mM或10-180mM或10-170mM或20-160mM或20-150mM或25-125mM或5-100mM或5-卯mM或5-80mM或5-70mM或5-60mM或10-100mM或10-90mM或10-80mM或10-70mM或10-60mM或12-60mM或12-55mM或13.5-54mM或10-30mM、如13.5-27mM或13.5-18mM或25-55mM、如27-54mM或40-55、如40.5-54mM,如12.5mM、13mM、13.5mM、14mM、14.5mM、17mM、17.5mM、18mM、18.5mM、19mM、25mM、26mM、27mM、28mM、29mM、30mM、39.5mM、40mM、40.5mM、41mM、41.5mM或53mM、53.5mM、53mM、54.5mM或55mM。若蔗糖包括在還包含甘露醇的組合物當(dāng)中，則甘露醇的濃度尤其可以對應(yīng)于蔗糖的濃度而降低；即甘露醇與蔗糖的合并濃度尤其可以與甘露醇將單獨(dú)使用時的甘露糖濃度相同。Tween80的濃度尤其可以是0.001-1w/v%，如0.005-1w/v。/o或0.01-1w/v%或0.001-0.5w/Vo/o或0.005-0.5w/v。/。或0.01-0.5w/v。/o或0.05-0.4w/v。/o或0.05-0.3w/v。/。或0.05-0.2w/v。/?；?.075-0.4w/v。/o或0.075-0.3w/v。/?；?.075-0.2w/v。/o或0.09-0.2w/v%，如0.075w/v%、0.08w/v%、0.09w/v%、0.1w/v%、0.125w/v%、0.15w/v%、0,175w/v。/?；?.2w/v%。包含感興趣多肽的組合物，其中多肽尤其可以是PBGD、芳基硫酸酯酶、溶酶體a-甘露糖苷酶或半乳糖腦苷脂酶，尤其可以包含一種或多種以上所提及化合物的組合。如此組合物的合適實(shí)例可以是除感興趣多肽之外還包含Na2HP04、甘氨酸和甘露醇的一種組合物。該組合物的pH和不同化合物的濃度可以是如上所述。因此，所述的組合物可以在一個實(shí)施方式中包含0.5-15mMNa2HP04、1-200mM甘氨酸、50-1000mM甘露醇和具有7.5-8.5的pH。上文所提及的化合物濃度與pH的任何組合由本發(fā)明包括。在包含感興趣多肽27mM甘氨酸、250mM甘露醇并具有7.7-7.9pH的一種組合物。合適組合物的其它實(shí)例包括，但不限于下列任意實(shí)例1.84mMNa2HP04，13.5mM甘氨酸，125mM甘露醇和pH7.7-7.9。2.45mMNa2HP04,18mM甘氨酸，167mM甘露醇和pH7.7-7.9。5.51mMNa2HP04，40.5mM甘氨酸，375mM甘露醇和pH7.7-7.9。7.34mMNa2HP04，54mM甘氨酸，500mM甘露醇和pH7.7-7.9。3.67mMNa2HP04,27mM甘氨酸，220mM甘露醇，30mM濕糖和pH7.7-7.9。3.67mMNa2HP04，245mM甘露醇，32mM蔗糖和pH7.7-7.9。3.67mMNa2HP04，27mML-絲氨酸，250mM甘露醇和pH7.7-7.9。10mMTRIS-HC1,27mM甘氨酸，250mM甘露醇和pH7.7-7.9。3.67mMNaCitrat,27mM甘氨酸，250mM甘露醇和pH7.7-7.9。3.67mMNa2HP04,27mM甘氨酸，220mM甘露醇，29mM蔗糖，0.1%(w/v)Tween80和pH7.7-7,9。3.67mMNa2HPC)4,27mM甘氨酸，220mM甘露醇，29mM蔗糖，0.l%(w/v)Tween80和pH7.7-7.9。包含感興趣多肽的組合物尤其可以用于哺乳動物中的治療性應(yīng)用。因此，包含感興趣多肽的組合物尤其可以相對于哺乳動物的組織是等滲的，例如它尤其可以具有200-400mOsm/kg,如250-350mOsm/kg或275-325mOsm/kg或295-305mOsm/kg，如295mOsm/kg或300mOsm/kg或305mOsm/kg的重量摩爾滲透壓濃度。濃縮感興趣多肽的方法本發(fā)明的方法包括a)離心和/或過濾包含感興趣多肽的組合物和b)濃縮來自步驟a)的組合物的步驟。本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過離心和/或過濾包含感興趣多肽的組合物，隨后濃縮該組合物，有可能獲得包含高度濃縮的感興趣多肽而沒有感興趣多肽的任何團(tuán)聚體或僅有少量團(tuán)聚體的組合物。此外，通常對于多肽的治療性應(yīng)用有利的是減少多肽團(tuán)聚體，例如因?yàn)樗鼈兛梢栽黾蛹ぐl(fā)針對所述多肽的免疫應(yīng)答的風(fēng)險。為皮下施用多肽，有利的是多肽組合物在小體積中具有高活性，因?yàn)閮H小體積可以作皮下注射。蛋白質(zhì)或多肽在濃縮時通常可以形成團(tuán)聚體。因此有利的是當(dāng)使用本發(fā)明的方法來濃縮感興趣多肽時，所述的方法沒有引起高比率的多肽團(tuán)聚體形成。如實(shí)施例中所示，由本發(fā)明的濃縮方法獲得的組合物中的PBGD團(tuán)聚體的量與未濃縮的PBGD組合物的PBGD團(tuán)聚體的量相似。在具體方式中，所述方法的步驟a)先于步驟b)進(jìn)行。步驟a)離心和/或過濾本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)在濃縮包含感興趣多肽的組合物之前，通過離心和/或過濾而預(yù)處理此組合物是有利的，因?yàn)橥ㄟ^這種預(yù)處理，除去了眾多或絕大部分的多肽團(tuán)聚體。當(dāng)步驟b)中的組合物濃縮通過依賴于使用濾器或膜的方法(如超濾法)進(jìn)行時，團(tuán)聚體的存在可以堵塞濾器或膜以至于小分子和液體不能夠通過濾器或膜。這可能降低組合物濃縮的速度和/或徹底阻止任何進(jìn)一步的濃縮。因此，對于這種類型的濃縮，根據(jù)步驟a)的預(yù)處理是有利的，因?yàn)槌F(tuán)聚體有可能獲得這樣的感興趣多肽組合物，其比組合物不作預(yù)處理時更濃縮。當(dāng)步驟b)中的組合物濃縮通過基于除去水的方法(如凍干法或蒸發(fā)法)進(jìn)行時，步驟a)中的預(yù)處理是有利的，在于預(yù)處理降低了濃縮組合物中存在的團(tuán)聚體的量。步驟a)可以通過下列三種方法之一進(jìn)行離心，過濾7或離心和過濾。如步驟a)包含離心和過濾，有利的是離心在過濾之前進(jìn)行，因?yàn)楸景l(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)離心除去了絕大部分大體積團(tuán)聚體并且過濾隨后除去了仍存在的較小團(tuán)聚體。離心為能夠除去團(tuán)聚體，包含感興趣多肽的組合物可以在1500-3000g的力范圍內(nèi)，如在1800-2500g或2000-2300g的力范圍內(nèi)進(jìn)行離心。一般，可以將組合物離心10-60分鐘，如15-50分鐘或20-40分鐘。由于溫度可以影響感興趣多肽的穩(wěn)定性，離心可以在溫度2-20。C,如3-15。C或3-10。C或3-8。C上進(jìn)行，如在4。C或5。C或6。C進(jìn)行。離心導(dǎo)致感興趣多肽團(tuán)聚體沉淀，即它們形成沉淀物，而單個的感興趣多肽分子留在溶液中。因此正是已離心組合物的上清液隨后在本發(fā)明方法中使用。過濾包含感興趣多肽的組合物可以經(jīng)過具有0.20-5(im孔徑，如0.2-2.5(im孔徑的濾器進(jìn)行過濾。除濾器的孔徑之外，制造濾器的材料可能影響對感興趣多肽的過濾。合適的膜濾器的實(shí)例包括但不限于聚醚砜(PES)、乙酸纖維素、再生性纖維素和聚偏二氟乙烯(PVDF)。當(dāng)對分子如蛋白質(zhì)過濾時，通常除去小分子，因此在過濾后，感興趣多肽通?？梢源嬖谟诖媪粑镏小Ｒ蚨ǔＴ诒景l(fā)明的后續(xù)步驟中使用來自過濾的存留物。步驟b)濃縮原則上，濃縮感興趣多肽組合物的任意方法可以在本發(fā)明步驟b)中使用。超濾超濾是其中使用液壓以迫使分子和溶劑穿過膜的分離方法，其中所述的膜包含特定大小(又稱作截留大小值(cut-offvalue))的孔。僅具有比膜的截留值更小的分子量的分子能夠穿過該膜，而分子量更大的那些分子則穿不過該膜并且形成所謂的存留物。因而存在于存留物中的分子因?yàn)槿軇┝鬟^膜而得到濃縮。在具體實(shí)施方式中，對包含感興趣多肽的溶液或組合物的濃縮可以通過切向流過濾法(TFF)。這種方法尤其用于大規(guī)模濃縮，即用于濃縮具有l(wèi)升-數(shù)百升體積的溶液。因此該方法尤其用于工業(yè)規(guī)模地產(chǎn)生感興趣多肽的濃縮溶液。TFF技術(shù)基于利用使待過濾溶液流過半透膜的特殊裝置半透膜；僅比膜孔小的分子會通過膜，形成濾液，留下待收集的較大物質(zhì)(存留物)。對于TFF方法，施加兩種不同的壓力；一種壓力將溶液泵入系統(tǒng)并使之在系統(tǒng)中循環(huán)(入口壓力)，而另一種壓力施加到膜上(膜壓力)以迫使分子及溶劑穿過膜。入口壓力一般可以是1-3bar,如1.5-2bar。膜壓力一般可以大于1bar。當(dāng)TFF用來濃縮該組合物時，感興趣多肽的濃縮組合物可以收集為存留物。用于TFF的膜通常可以由再生性纖維素或聚醚砜(PES)制成。膜的孔徑一般可以具有小于10.000Mw，如10-10.000Mw的分子量截留值。在另一個實(shí)施方式中，對包含感興趣多肽的組合物的濃縮可以通過使用離心裝置而進(jìn)行。這種方法的原理是溶液在膜上因?qū)δな┘与x心力而過濾。此類膜往往由分子量(Mw)截值表征，即這種分子量截留值是能夠穿過膜的化合物的最大尺度并且分子大小大于此值的化合物將不會穿過該膜。本發(fā)明中所用膜的Mw截留值尤其可以小于30000Mw，如在10-30000Mw之間。所述膜尤其可以由聚醚砜(PES)或再生性纖維素制成。如此的合適商業(yè)過濾裝置實(shí)例可以是CentriconPlus-80或CentriconPlus-15。濃縮一般可以通過在2000-4500g，如2500-4000g或2750-3500g或3000-3500g，如在3000g或3100g或3200g或3300g或3400g或3500g上離心而進(jìn)行。一般，離心可以進(jìn)行幾小時，例如持續(xù)超過l小時，如持續(xù)1-10小時。為了使得任何對感興趣多肽穩(wěn)定性的不利影響最小化，離心具體可以在溫度2畫20。C如3-15。C或3-10。C或3-6。C上進(jìn)行。去水濃縮去水濃縮的原理通常是除去全部或絕大部分水以獲得固體，并且隨后將該固體稀釋或溶解于如此體積的水中，其中所述的水體積小于該固體先前在其中稀釋或溶解的水體積。不過原則上，這可以通過僅除去必要量的水以獲得所需濃度而無需隨后再稀釋或再溶解所述化合物而進(jìn)行。去水濃縮的合適方法的實(shí)例包括凍干法和蒸發(fā)法。對于凍干法和蒸發(fā)法的三個最重要參數(shù)是溫度、壓力和時間。凍干方法可以包括以下三個或四個步驟冷凍階段、初級干燥階段和次級干燥階段和任選在冷凍階段之后的退火步驟。凍干尤其可以如作為本發(fā)明方法的其它步驟而包括的凍干法所述而進(jìn)行。其它步驟感興趣多肽可以得自天然來源，即來自天然表達(dá)感興趣多肽的細(xì)胞或感興趣多肽尤其可以重組表達(dá)。無論得自何處，感興趣多肽可以在接受本發(fā)明方法處理之前受到純化。這種"純化"尤其可以包括但不限于除去細(xì)胞殘片、除去不包括感興趣多肽雜內(nèi)的其它蛋白質(zhì)和除去可以在感興趣多肽得自其中的來源中存在的其它成份。因此在本發(fā)明的具體實(shí)施方式中，包含感興趣多肽的組合物包含小于5w/wO/o或小于1w/w^o或less0.5w/w。/o或小于0.1w/w。/o或小于0.05w/w。/o或小于0.01w/w。/。的除感興趣多肽以外的其它蛋白質(zhì)。因此，可以從包含感興趣多肽的組合物中除去由例如宿主細(xì)胞表達(dá)的其它蛋白質(zhì)，隨后在本方明方法中使用它們。因此在具體實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括在步驟a)之前的一個或多個下列步驟i)重組表達(dá)感興趣多肽，ii)通過一個或多個層析步驟純化感興趣多肽組合物，iii)換制劑緩沖液(formulationbuffer)。重組表達(dá)感興趣多肽尤其可以如先前對感興趣多肽所述而進(jìn)行。若感興趣多肽是PBGD,合適類型的層析實(shí)例包括但不限于親和層析、離子交換層析(IEC)和在羥基磷灰石柱上的層析。原則上可以使用這些層析方法的任意組合。本發(fā)明的發(fā)明人先前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對于PBGD有利的是至少開展親和層析步驟并且如果這個步驟與任何其它層析方法組合，則有利的是在其它層析步驟之前開展親和層析步驟(見例如WO03/002731)。對于其中感興趣多肽是PBGD的實(shí)施方式，市售親和層析柱的實(shí)例包括親和偶聯(lián)柱、基團(tuán)特異性親和柱及金屬螯合物親和柱。阿莫仙法瑪西亞生物技術(shù)(AmershamPharmaciaBiotech)公司2001年產(chǎn)品目錄給出親和偶聯(lián)柱的實(shí)例，如包含帶-NH2的固定化配體的柱和包含帶伯胺基的配體的柱。金屬螯合物親和柱特別優(yōu)選用于通過與暴露的組氨酸基團(tuán)形成金屬離子絡(luò)合物而純化蛋白質(zhì)。WO01/07065的實(shí)施例3描述了構(gòu)建帶"His-Tag"的重組人膽色素原脫氨酶。為了純化rhPBGD-His，優(yōu)選4吏用金屬螯合物親和柱，如具有鈷金屬親和樹脂的柱。其它合適的親和層析方法的實(shí)例包括但不限于以豬肝素作為配體的柱或以l-氨基-4-[[4-[[4-氯-6-[[3(或4)-硫代苯基]氨基]-1，3，5-三嗪-2-基]氨基]-3-硫代苯基]氨基]-9，10-二氫-9，10-二氧代-2-蒽磺酸(又稱作CibraconBlue3G)作為配體并且使用三。秦偶聯(lián)法作為配體偶聯(lián)方法的柱。后一種柱的市售實(shí)例是來自AmershamPharmaciaBiotech的藍(lán)色瓊月旨沖唐;疑月交6快速流(BlueSepharose6FastFlow)(FF)。因此，本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式涉及如本文中所述的方法，其中步驟(i)的親和層析柱是使用三漆偶聯(lián)法作為配體偶聯(lián)方法的柱，并且更優(yōu)選其中配體是CibacronBlue3G。術(shù)語"離子交換層析(正C)"在本文中應(yīng)當(dāng)根據(jù)本領(lǐng)域理解為這樣的柱，其以該柱在某個pH上的凈電荷為基礎(chǔ)，通過與此柱上的帶電基團(tuán)的靜電結(jié)合而分離分子如蛋白質(zhì)。離子交換指將一種類型的離子吸附至柱上以交換丟失至溶液內(nèi)的其它離子。合適IEC柱的實(shí)例是這樣的柱，如QSepharose柱、QSPSepharose柱或CMSepharose柱，尤其可以是二乙基氨基瓊脂糖(DEAESepharose)柱。合適的羥基磷灰石柱的實(shí)例是陶瓷羥基磷灰石柱。羥基磷灰石(Cas(P04)30H)2是可以用于分離和純化蛋白質(zhì)、酶、核酸、病毒和其它大分子的一種磷酸4丐形式。陶瓷羥基磷灰石是羥基磷灰石的球狀、大孔形式。CHTI型(伯樂(Bio-Rad))是合適的市售陶f:羥基磷灰石層析柱的實(shí)例。在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括在步驟a)之前的下列步驟i)重組表達(dá)PBGD;ii)使來自步驟i)的PBGD組合物接受親和層析；iii)使步驟ii)的PBGD組合物接受離子交換層析；在又一個實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法可以包括在步驟a)之前的下列步驟i)重組表達(dá)PBGD;ii)使來自步驟i)的PBGD組合物接受親和層析；iii)使來自步驟ii)的PBGD組合物接受離子交換層析；iv)使來自步驟iii)的PBGD組合物接受羥基磷灰石柱。這兩種方法可以任選地包括稀釋或滲濾從步驟ii)所獲得PBGD組合物的其它步驟。因此所述的步驟應(yīng)當(dāng)是在步驟ii)之后并且在iii)之前，即步驟iia。步驟iia)的目的是使鹽濃度降低至合適的電導(dǎo)率，例如<10mS/cm。當(dāng)使用DEAESepharose作為離子交換層析步驟即步驟iii)中的樹脂時，這可能尤其是重要的，因?yàn)檫@可以促進(jìn)所捕獲的PBGD對DEAESepharose樹脂的結(jié)合。柱'《>刀口^;1"Cj7JV3X迎^M"G7jv近^f丁艱濾步驟i)重組表達(dá)PBGD可以通過上文所述的任意方法進(jìn)行。在步驟ii)中的合適親和層析柱的實(shí)例可以是如上提及的任意親和層析在步驟iii)中開展離子交換層析的合適方法的實(shí)例可以是如上提及的任意方法。在步驟iv)中的合適羥基磷灰石層析柱的實(shí)例可以是如上提及的任意羥基磷灰石層析柱。在具體實(shí)施方式中，親和層析柱可以是這樣的柱，其使用三嗪偶聯(lián)法作為配體偶聯(lián)方法，并且尤其是其中配體為CibacronBlue3G的方法。這種柱尤其可以是BlueSepharose6FastFlow柱，并且離子交換層析柱可以是DEAESepharose柱，并且在其中所述方法還包括步驟iv)的實(shí)施方式中，這種柱尤其可以是陶瓷輕基磷灰石柱。本發(fā)明的方法也可以包含在該方法的步驟b)之后的其它步驟。此類步驟包括但不限于一個或多個下列步驟凍干包含濃縮感興趣多肽的組合物，改變包含濃縮感興趣多肽的組合物的緩沖劑，無菌過濾包含濃縮感興趣多肽的組合物，蒸發(fā)?？梢栽诒景l(fā)明方法中使用不同的凍干機(jī)、待凍干溶液的體積和其它參數(shù)。凍干機(jī)，其中將包含濃縮感興趣多肽(即在此例中是PBGD)的溶液填充在2ml和6ml注射劑玻璃小瓶(1型)內(nèi)并用橡膠(氯丁橡膠)塞封住。凍干可以通過下列三個步驟進(jìn)行；i)冷凍，ii)初級干燥，以及iii)次級千燥。步驟i)冷凍尤其可以通過如此方式進(jìn)行，即首先加載樣品并將樣品冷卻至0。C并在0。C保持30分鐘，此后以每分鐘1。C降低溫度至-40。C并使樣品在-40。C保持30分鐘。步驟ii)初級干燥尤其可以通過如此方式進(jìn)行，即抽成126mTorr真空壓力，以每分鐘rC升高溫度至0。C并將樣品在0。C保持360分鐘。步驟iii)次級干燥尤其可以通過如此方式進(jìn)行，即抽成完全真空，同時以每分鐘0.5。C升高溫度至+30。C并將樣品在+30。C保持360分鐘。在次級干燥后，樣品可以進(jìn)一步在真空下密封或在充以氮?dú)夂竺芊狻：线m的凍干方法的實(shí)例包括在本發(fā)明實(shí)例中描述的一種方法。凍干可以在其它實(shí)施方式中包括在初級干燥相之前的退火步驟。本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)在凍干方法中退火步驟的包括改善目視外觀，如看到更少的裂紋，和/或與使用無退火步驟的相同凍干方法時相比，導(dǎo)致凍干產(chǎn)物的重構(gòu)時間更短?？s短重構(gòu)凍干產(chǎn)物的時間是有利的，尤其當(dāng)凍干產(chǎn)物作為以溶液劑方式施用的藥物使用時。對于絕大多數(shù)產(chǎn)物而言，改善的目視外觀通常視作優(yōu)勢。因此，凍千可以包括下列步驟i)冷凍，ii)退火，iii)初級干燥，iv)次級干燥。冷凍、初級干燥和次級干燥步驟尤其可以如上所述而進(jìn)行。退火步驟即步驟ii)尤其可以可以通過如此方式進(jìn)行，即在冷凍30分鐘后，以例如每分鐘2。C的速率升高溫度至-10。C或-2(TC并保持該溫度持續(xù)120分鐘或420分鐘，并且隨后以例如每分鐘2。C的速率降低溫度至-40。C,在該溫度上可以將樣品保持60-90分鐘，此后開始初級干燥步驟。改變包含濃縮感興趣多肽的組合物的緩沖劑尤其可以通過如此方式進(jìn)行能夠，即a)將包含濃縮感興趣多肽的組合物在緩沖劑或制劑中稀釋例如5-15倍，b)再次濃縮稀釋的組合物并實(shí)行步驟a)和b)足夠次數(shù)，以至于在這些步驟之前存在于組合物內(nèi)的在緩沖劑或制劑中的賦形劑的量小于例如5v/v。/?；蛐∮?v/v。/。的在所述步驟進(jìn)行后存在于組合物內(nèi)的在緩沖劑或制劑中的賦形劑。尤其包含從步驟b)所獲得感興趣多肽的本發(fā)明組合物可以還具體包括無菌過濾所述組合物的步驟和/或凍干該組合物的步驟。無菌過濾通常通過將組合物經(jīng)過具有0.22或0.20jim孔徑的濾器過濾而進(jìn)行。凍干可以尤其如上所述而進(jìn)行。本發(fā)明也涉及通過本發(fā)明方法獲得的凍干組合物。皮下注射本發(fā)明也涉及包含50-300mg/ml感興趣多肽的組合物用于制造用以皮下注射至哺乳動物的藥物的用途。感興趣多肽可以是本發(fā)明的任意感興趣多肽，其包括但不限于PBGD、芳基硫酸酯酶A、溶酶體a-甘露糖香酶和半乳糖腦苷脂酶。術(shù)語皮下經(jīng)常筒寫成s.c.并且這兩個術(shù)語可以在本發(fā)明的上下文中交換使用。當(dāng)注射以皮下方式實(shí)施時，通常因生理性限制而不可能注射超過1.5mL。由于患者通常需要一定量的特定感興趣多肽，在包含需要施用至患者的感興趣多肽的組合物的體積與所述組合物中目的的多肽濃度之間存在關(guān)聯(lián)。因此對本發(fā)明有利的是含有感興趣多肽的組合物包含高濃度的感興趣多肽并且這種高濃度的感興趣多肽可以在不形成大量多肽團(tuán)聚體的情況下獲得。此類濃縮感興趣多肽組合物的使用有可能實(shí)現(xiàn)下列情況，即注射更小體積的所述組合物并且與此同時確保患者接受足量的感興趣多肽；因此更容易皮下施用感興趣多肽。包含感興趣多肽的以上提及的組合物尤其可以包含75-250mg/ml，如75-200mg/ml或75-150mg/ml或100-150mg/ml或100-125mg/ml或125-150mg/ml的感興趣多肽。如上所述，包含感興趣多肽的組合物的體積與所述組合物中感興趣多肽的濃度相關(guān)，其中需要注射所述的體積至至患者以確保該患者接受足量感興趣多肽。因而這種組合物的體積通常將根據(jù)組合物中感興趣多肽的濃度而調(diào)節(jié)。然而，所述體積通?？梢允?.1-1.5ml，如0.1-1.5ml或0.5-1.5ml或0.5-1.5ml或0.75-1.5ml或0.75-1.5ml或1-1.5ml或1-1.5ml。感興趣多肽的量對于施用至患者是重要的，它通常取決于個體體重和特定感興趣多肽。在一個實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及治療哺乳動物急性間歇性卟啉病的方法，其包括皮下注射含50-300mg/mlPBGD的組合物。PBGD的施用尤其可以用于治療急性間歇性卟啉病。然而，構(gòu)思PBGD的施用也可以用于治療其它吟啉癥，如遺傳性糞吟啉癥或變異型卟啉癥。卟啉癥是用來統(tǒng)稱由血紅素生物合成途中不同缺損所致的多種疾病的術(shù)語。因此，可構(gòu)思的是向患有任何類型卟啉癥的患者施用PBGD(例如與其它治療劑組合)可以幫助增力口血紅素生物合成途中不同中間體的整體轉(zhuǎn)換。例如MeissnerPN等，1986,臨床研究歐洲雜志(EuropeanJournalofClinicalInvestigation),第16巻，257-261;HiftRJ等，1997,S.Afr.Med丄第87巻，718-27和MeissnerP等,1993,臨床研究雜志(J.Clin.Invest.),第91巻，1436-44描述了ALA和PBG在遺傳性糞p卜啉癥和變異型卟啉癥中的積累。在這些疾病中，ALA和PBG的積累分別因形成ALA至PBG轉(zhuǎn)化的位于下游第四和第五步驟的酶缺陷所致。在兩篇最新論文中，描述了在變異型p卜啉癥患者中積累的卟啉原如何能夠抑制PBG-脫氨酶。在又一個實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及治療哺乳動物異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良的方法，其包括皮下注射含50-300mg/ml芳基疏酸酯酶A的組合物。異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(MLD)由溶酶體酶芳基^L酸酯酶A(ASA)中的常染色體隱性遺傳缺陷造成，導(dǎo)致髓鞘膜進(jìn)行性破壞(脫髓鞘)和半乳糖糖基硫脂(galatosylsulphatide)(硫酸腦香脂)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和外周神經(jīng)系統(tǒng)的白質(zhì)中積累。在組織學(xué)制備物中，半乳糖糖基硫脂形成異染性染色的球狀顆粒物質(zhì)。半乳糖糖基硫脂還積累在腎臟、膀胱及某些其它內(nèi)臟器官內(nèi)并且以過多量分泌于尿中。半乳糖基硫苷脂正常通過經(jīng)溶酶體酶芳基硫酸酯酶A(EC3丄6.8)(Austin等生物化學(xué)雜志(BiochemJ).1964,93,15C-17C)和稱作皂化蛋白B的鞘脂激活蛋白的聯(lián)合作用而水解3-0-硫酸酯鍵以形成半乳糖腦苷脂而加以代謝。芳基硫酸酯酶A的嚴(yán)重缺乏在來自患有嬰兒晚期、少年和成人形式MLD的患者的全部組織中存在(見下文)。在下文中，芳基硫酸酯酶A蛋白將稱作"ASA"。ASA的嚴(yán)重缺乏存在于來自MLD患者的全部組織中。在又一個實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及治療哺乳動物溶酶體貯積病CX-甘露糖苷過多癥的方法，其包括皮下注射含50-300mg/ml溶酶體a-甘露糖苷酶的組合物。a-甘露糖苷過多癥是在世界范圍以頻率1/1000000和1/500000發(fā)生的隱性常染色體疾病。甘露糖苷過多癥存在于歐洲、美洲、非洲和亞洲的全部種族分組中。在對溶酶體貯積病具有良好診斷服務(wù)的全部國家中以相似的頻率檢測到甘露糖苷過多癥。它們天生是外觀健康的；然而該疾病的癥狀是進(jìn)行性的。a-甘露糖苷過多癥表現(xiàn)臨床異質(zhì)性，從極嚴(yán)重形式至極溫和形式。典型臨床癥狀是精神發(fā)育遲緩、骨骼改變、免疫系統(tǒng)受損(導(dǎo)致反復(fù)感染)、聽力損傷，并且該病往往與典型面部特征相關(guān)，如顏面粗糙、前額凸出、鼻梁扁平、小鼻子和闊口。在絕大部分嚴(yán)重病例中(I型甘露糖苷過多癥)，兒童患有肝脾腫大癥并且其在生命的第一年期間死亡。這種早期死亡可能由免疫缺損導(dǎo)致的嚴(yán)重感染造成，其中所述的免疫缺損因甘露糖苷過多癥所致。在較溫和的病例中(2型甘露糖苷過多癥)，患者通常達(dá)到成人年齡?；颊叩墓趋捞撊踔率乖?0-40歲年齡時需要輪椅。該疾病引起腦彌散性功能障礙，這往往造成除最基本的簡單閱讀和寫作技能之外一無所有的羸弱精神能力(mentalperfomance)。伴隨聽力失能和其它臨床表現(xiàn)的這些問題使患者不能獨(dú)立生活，結(jié)果需要長期護(hù)理。在又一個實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及治療哺乳動物克拉伯病的方法，其包括皮下注射含50-300mg/ml半乳糖基腦苦脂酶的組合物。在人中，GALC酶的缺乏導(dǎo)致稱作克拉伯病或球樣細(xì)胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良的常染色體遺傳的遺傳性溶酶體貯積病。該酶通常在人的睪丸、腎臟、肝臟及腦內(nèi)表達(dá)并且GALC酶的缺乏通常導(dǎo)致髓鞘代謝和中樞神經(jīng)系統(tǒng)及外周神經(jīng)系統(tǒng)(分別是CNS和PNS)中的病癥。已經(jīng)在任何年齡、民族和性別的人中觀察到克拉伯病。應(yīng)當(dāng)指出在本發(fā)明方面之一的環(huán)境下所述的實(shí)施方式和特征也適用于本發(fā)明的其它方面。尤其，描述包含感興趣多肽的組合物的全部實(shí)施方式，如其它化合物的存在、緩沖劑和pH，也適用于包含本申請中所用感興趣多肽的組合物。當(dāng)本發(fā)明的對象或其特征或特性之一以單數(shù)形式提及時，這也指該對象或其特征或特性的復(fù)數(shù)形式。例如，當(dāng)提到"一種多肽"時，應(yīng)當(dāng)理解為指一個或多個多肽。在本說明書通篇范圍內(nèi)，詞匯"包含"或變形如"包含"或"包含"將理解成暗示包括所述的要素、總體或步驟，或成組要素、總體或步驟，但是不排除任何其它的要素、總體或步驟，或成組要素、總體或步驟。在本申請中提及的全部專利和非專利參考文獻(xiàn)因而在本文中通過參考而完整地并入。本發(fā)明現(xiàn)在將在以下非限制性實(shí)驗(yàn)部分中更詳細(xì)地描述。實(shí)驗(yàn)材料r固GD根據(jù)WO03/002731的實(shí)施例1中的方法2而獲得在以下實(shí)驗(yàn)中使用的rhPBGD,其中方法2是包括步驟IV即陶瓷幾基磷灰石層析步驟的方法。制劑緩沖液重組和純化的rhPBGD存在于以下含水制劑緩沖液中3.67mMNa2HP0427mM甘氨酸250mM甘露醇和pH7.9該制劑緩沖液隨后經(jīng)0.22pm濾器進(jìn)行無菌過濾。方法凍干純化rhPBGD溶液的凍干在Lyostar(FTM-Systems)凍干機(jī)中根據(jù)以下方案進(jìn)行<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>目視觀察(透明度和顏色)液體就顏色、透明度和沉積物方面根據(jù)以下方案進(jìn)行目測研究。顏色1:無色；2:淡黃色；3:黃色透明度1:清亮；2:略混濁；3:混濁其它標(biāo)志在一些例子中這里包括來自操作者的其它觀察結(jié)果(例如沉積物、不溶物質(zhì)等)。pH-測量pH計(jì)(Metrohm691pH計(jì))和電極(LLpH復(fù)合電極)用在4.00-9.00范圍內(nèi)的3種參比溶液(Merck)進(jìn)行校正。最終分析所述液體。蛋白質(zhì)濃度提取物、工藝過程樣品、原料藥和終產(chǎn)物中的蛋白質(zhì)濃度通過如此方法測定，其中所述方法利用了蛋白質(zhì)在堿性介質(zhì)中將012+還原成Cu+的原理(Biuret反應(yīng))。Cu+離子隨后與含有導(dǎo)致高度敏感和高度選擇性比色檢測的二辛可寧酸(bicinchoninicacid)的還原劑反應(yīng)。純度重組人膽色素原脫氨酶(rhPBGD)和rhPBGD變體根據(jù)它們依賴于流動相中有機(jī)調(diào)節(jié)物(乙腈)的百分含量而吸附和解吸附二氧化硅基固定介質(zhì)的能力進(jìn)行分離。rhPBGD活性膽色素原脫氨酶(PBGD)催化添加4分子的膽色素原(PBG)以形成線型四聚體-前尿卟啉原，其中前尿p卜啉原從酶中釋放出來并在體內(nèi)通過尿p卜啉原m合酶作用而環(huán)化成尿卟啉原III。前尿卟啉原可以用笨醌進(jìn)行化學(xué)氧化以形成吸收在405nm處光線的尿。卜啉。在每個實(shí)—驗(yàn)例子中對單個一只小藥瓶實(shí)行分析。為測定rhPBGD活性和蛋白質(zhì)濃度，分別一式兩份和一式三份對每個小藥瓶進(jìn)行試驗(yàn)。重量摩爾滲透壓濃度在l.OOmlMilliQ-水中重懸一只小藥瓶的凍干rhPBGD。將含有rhPBGD的冷凍水溶液的小藥瓶融化。滲透壓計(jì)(Vapro滲透壓計(jì))用在100-1000mOsm/kg(100mOsm/kg、290mOsm/kg、1000mOsm/kg)范圍內(nèi)的3種標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正。隨后分析所述液體。實(shí)施例1用離心過濾裝置濃縮冷凍的PBGD-本體溶液(7mg/mLrhPBGD,3.67mMNa2HP04，27mM甘氨酸，250mM甘露醇，pH7.9)在水浴中于20。C融化，在3200g下離心10分鐘并隨后由0.20fim-PES濾器(Nalgene聚醚工風(fēng)濾器)無菌過濾。將PBGD-本體溶液通過運(yùn)行離心過濾裝置CentriconPlus-80(Mw截留值30000)和CentriconPlus-15(Mw截留值30000)在3200g上持續(xù)幾個小時而濃縮至100mg/ml。濃縮溶液即存留物由0.22濾器(MillexGV)無菌過濾和并且最終將這種溶液的一部分用無菌制劑緩沖液稀釋以達(dá)到50mg/ml。5mg/ml的溶液通過用無菌制劑緩沖液直"f妄稀釋重組和純化的hPBGD而制備。隨后如上所述將5mg/mL、50mg/mL和100mg/mL的rhPBGD凍干。在40°C±2°C,75%±5%相對濕度(RH)下貯存各自含有5mg/mL、50mg/mL和100mg/mLrhPBGD的以上所提及凍干rhPBGD溶液的幾個小藥瓶和具有5mg/mLrhPBGD水溶液的幾個小藥瓶。小藥瓶在充分密封的第二包裝物(紙盒)內(nèi)避光貯存。在所示的時間點(diǎn)上時間點(diǎn)(即Ki存時間)，將一個小藥瓶的各個凍千樣品重懸于1.00mL密理博(Miilipore)水中。隨后就顏色、透明度和沉積物方面對每個重懸的rhPBGd小藥瓶和含水的rhPBGd小藥瓶作目測觀察，并且如上所述測量pH、蛋白質(zhì)濃度、純度和rhPBGD活性。結(jié)果在下表1-4中給出表l:凍干產(chǎn)物，5mg/mL<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表2:凍干產(chǎn)物；50mg/ml<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表3:凍干產(chǎn)物；100mg/ml<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>表4:含水產(chǎn)物；5mg/ml<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>實(shí)施例2通過離心過濾裝置濃縮rhPBGD組合物冷凍的PBGD-本體溶液(7mg/mLrhPBGD,3.67mMNa2HP04，27mM甘氨酸，250mM甘露醇，pH7.9)在水浴中于20。C融化，在3200g上離心10分鐘并隨后由0.20pm-PES濾器(Nalgene聚醚砜濾器)無菌過濾。將PBGD-本體溶液通過運(yùn)行離心過濾裝置CentriconPlus-80(Mw截留值30000)CentriconPlus-15(Mw截留值30000)在3200g下持續(xù)幾個小時而濃縮至100mg/ml。濃縮溶液即存留物由0.22jim-濾器(MillexGV)無菌過濾并且用無菌過濾的制劑緩沖液(見上文)稀釋以獲得較低濃度的溶液。以體積為單位的每種濃縮物的部分如上所述進(jìn)行凍干。凍干rhPBGD和rhPBGD水溶液的不同濃縮物在5°C士3。C或在-20。C士5°C(環(huán)境相對濕度(RH))貯存。全部小藥瓶在充分密封的第二包裝物(紙盒)內(nèi)避光貯存。在所示的時間點(diǎn)上時間點(diǎn)(即貯存時間)，將一個小藥瓶的各個凍干樣品重懸于1.00mLMillipore水中并且隨后與rhPBGD的水溶液一起通過目測方式觀察顏色、透明度和沉積物并通過測量pH、蛋白質(zhì)濃度、純度、重量摩爾滲透壓濃度和rhPBGD活性而檢驗(yàn)。結(jié)果在下表5-19中給出表5:含水產(chǎn)物；11mg/ml;貯存溫度十5。C<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表8:含水產(chǎn)物，17mg/ml;!3i存溫度+5°C<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表9:含水產(chǎn)物，17mg/ml;貯存溫度-20°C<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>表ll:含水產(chǎn)物；36mg/ml;貝i存溫度+5°C<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>表13:凍干產(chǎn)物，36mg/ml;貯存溫度5°C<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>表15:含水產(chǎn)物，50mg/ml;貯存溫度-20°C<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>16:凍干嚴(yán)物，50mg/ml;貯存溫度5°C<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>表17:含水產(chǎn)物，100mg/ml;貯存溫度5°C<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>實(shí)施例3用切向流過濾(TFF)濃縮rhPBGD組合物rhPBGD的本體溶液隨后在5'C和在黑暗中融化最少3日。融化的溶液隨后用200mL錐形離心管在2200g下離心大約10分鐘。溶液經(jīng)具有以下孔徑的一系列濾器進(jìn)4亍過濾5.00.65fim;0.45pm和0.20)Lim，隨后通過切向流過濾(TFF)進(jìn)行濃縮。TFF濃縮用密里伯實(shí)-險室類L才莫TFF系統(tǒng)(MilliporeLabscaleTFFSystem)和MilliporePelliconXL濾器以大約20-25psi的泵入口壓力和大約4-6psi在PelliconXL濾器上的壓力而進(jìn)行。rhPBGD在此方法期間通過由鋁箔片覆蓋TFF系統(tǒng)的樣品容器而避光防護(hù)。從TFF方法中獲得的濃縮rhPBGD溶液隨后針對在無菌水中制備的含有3.67mMNa2HP04.2H20、27mM甘氨酸及220mM甘露醇的制劑援沖液進(jìn)行緩沖劑改變。這通過連續(xù)地添加所述緩沖液至TFF-系統(tǒng)內(nèi)并迫使其跨過膜直至所述的緩沖液已經(jīng)替換先前緩沖液而進(jìn)行。濃縮并已改變緩沖劑的rhPBGD溶液隨后通過使該溶液經(jīng)過具有0.22|im孔徑的濾器而作無菌過濾。這種無菌過濾進(jìn)行兩次，每次用新濾器。將無菌濃縮的rhPBGD溶液隨后置于小藥瓶內(nèi)，此后如方法部分中所述而凍干。實(shí)施例4不同凍干it式和/或J!武形劑的量對重構(gòu)(reconstitution)時間的影響PBGD如實(shí)施例3中所述而濃縮并且在換緩沖劑后測定PBGD的濃度。濃縮的PBGD溶液隨后在Lyostar(FTM-Systems)凍干機(jī)中凍干。將溶液填充在2ml和6ml注射劑玻璃小瓶(1型)并用橡膠塞(氯丁橡膠)封住。樣品在環(huán)境溫度下加載并且將架子冷卻至0。C持續(xù)30分鐘。將溫度降低-40°C(每分鐘1°C)并在該溫度上維持30分鐘，并且隨后將真空抽至126mTorr并且初級千燥通過升高溫度至0°C(每分鐘rC)而開始。在初級千燥360分鐘后，將溫度升高至+30。C(每分鐘0.5°C)并且同時抽成完全真空(開始次級千燥)。將溫度在+30。C維持360分鐘并且隨后將小藥瓶在真空下塞住。絲適義步弱肝-在-40。C上持續(xù)30分鐘后，將溫度以每分鐘2'C的速率降低至-10。C或-20。C，其中在所述溫度上將樣品保持120分鐘或420分鐘，此后將溫度以每分鐘2。C再次降低至-4CTC，在此溫度上將樣品保持60-90分鐘，此后開始初級干燥。結(jié)果在表20中顯示，在表20中就賦形劑和凍干循環(huán)所用短語的意義如下1倍量的賦形劑指PBGD溶液包含在無菌水中制備的3.67mMNa2HP04x2H20,27mM甘氨酸和220mM甘露醇。1.5倍量的賦形劑指PBGD溶液包含在無菌水中制備的5.51mMNa2HP04x2H20，40.5mM甘氨酸和375mM甘露醇，即在lx緩沖劑內(nèi)存在的1.5倍每種成份。2x賦形劑指PBGD溶液包含在無菌水中制備的7.34mMNa2HP04x2H20,54mM甘氨酸和500mM甘露醇，即在lx緩沖劑內(nèi)存在的2倍每種成份。原初凍干循環(huán)如上所述。退火凍干循環(huán)如上所述，其中退火步驟包括將溫度升高至-10。C,樣品在此溫度上保持120分鐘，此后將溫度又降低至-4(TC。延長的退火凍干循環(huán)如上所述，其中退火步驟包括將溫度升高至-2(TC，樣品在此溫度上保持420分鐘，此后將溫度又降低至-40。C。表20:<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>實(shí)施例5不同凍干模式和/或賦形劑的量對凍千產(chǎn)物外觀的影響濃縮且凍干的PBGD溶液如實(shí)施例4中所述而制備并且對賦形劑的量和凍千循環(huán)類型的稱謂具有與實(shí)施例4中相同的意義。如下結(jié)果通過目禍^險查凍千產(chǎn)物而獲得A:比較從分別包含4.6mg/ml66.6mg/ml和109.4mg/mlrhPBGD的溶液中制備的3種產(chǎn)物，表明凍干產(chǎn)物中的裂紋數(shù)隨rhPBGD的濃度增加而增加。B:比較從包含150mg/mlrhPBGD和包含1倍量和1.5倍量賦形劑的溶液中制備的2種產(chǎn)物，表明凍干產(chǎn)物中的裂紋數(shù)對于包含1.5倍量賦形劑的產(chǎn)物而言比包含1倍量賦形劑的產(chǎn)物更少。C:比較從包含1倍量和2倍量賦形劑的150mg/mlrhPBGD溶液中制備的2種產(chǎn)物，表明含2倍量賦形劑的凍干產(chǎn)物中的裂紋數(shù)比包含1倍量賦形劑的產(chǎn)物更少。D:比較從150mg/mlrhPBGD溶液中通過利用原初凍干循環(huán)、退火凍干循環(huán)和延長的退火凍干循環(huán)而制備的3種產(chǎn)物，表明凍干產(chǎn)物中的裂紋數(shù)在根外，在根據(jù)延長的退火凍干循環(huán)而制備的產(chǎn)物中的裂紋數(shù)比根據(jù)退火凍干循環(huán)而制備的產(chǎn)物中的裂紋數(shù)更少。E:3種凍干產(chǎn)物分別從150mg/ml、175mg/ml和200mg/mlrhPBGD溶液中制備。凍干產(chǎn)物各自包含1.5倍量的賦形劑并且它們以退火循環(huán)進(jìn)行凍干。凍干產(chǎn)物均不包含任何裂紋。F:2種凍干rhPBGD產(chǎn)物從150mg/mlrhPBGD溶液中制備。其中一種凍干rhPBGD產(chǎn)物包含1倍量的賦形劑并根據(jù)原初凍干循環(huán)而制備，而另一種凍干rhPBGD產(chǎn)物包含1.5倍量的賦形劑并根據(jù)延長的退火凍干循環(huán)而制備。包含1.5倍量的賦形劑并根據(jù)延長的退火凍干循環(huán)而制備的產(chǎn)物比包含1倍量的賦形劑并根據(jù)原初凍干循環(huán)而制備的產(chǎn)物包含更少裂紋。G:2種凍干rhPBGD產(chǎn)物從150mg/mlrhPBGD溶液中制備。其中一種凍干rhPBGD產(chǎn)物包含1倍量的賦形劑并根據(jù)原初凍干循環(huán)而制備，而另一種凍干rhPBGD產(chǎn)物包含與1倍量賦形劑組合的0.1%Tween80并且根據(jù)延長的退火凍干循環(huán)而制備。包含與1倍量賦形劑組合的0.1%Tween80并根據(jù)延長的退火凍千循環(huán)而制備的產(chǎn)物包含比包含1倍量的賦形劑并根據(jù)原初凍干循環(huán)而制備的產(chǎn)物包含更少裂紋。實(shí)施例6不同回收體積、賦形劑的量和凍干模式對凍干rhPBGD的穩(wěn)定性的影響濃縮的rhPBGD溶液的凍干樣品如實(shí)施例4中所述而制備。"本體溶液"是PBGD在凍干前的濃縮溶液。表21顯示具有以下特征的rhPBGD溶液的結(jié)果rhPBGD濃度、賦形劑的量(與如實(shí)施例4中所用的定義相同)、凍干模式(與如實(shí)施例4中所用的定義相同)和填充體積(填充體積是組合物在凍干前的體積)與回收體積(回收體積是凍干產(chǎn)物重懸于其中的體積)的比率。溶液1:大約5mg/mlrhPBGD1倍量的賦形劑原初凍干循環(huán)填充體積=回收體積溶液2:大約70mg/mlrhPBGDl倍量的賦形劑原初凍干循環(huán)填充體積=2x回收體積溶液3:大約110mg/mlrhPBGD1倍量的賦形劑原初凍干循環(huán)》真充體積=回收體積溶液4:大約70mg/mlrhPBGDl倍量的賦形劑原初凍干循環(huán)》真充體積=1.5x回收體積溶液5:大約90mg/mlrhPBGD2/3倍量的賦形劑原初凍干循環(huán)》真充體積=1.5x回收體積溶液6:大約60mg/mlrhPBGD1/2倍量的賦形劑原初凍干循環(huán)填充體積=2x回收體積溶液7:大約110mg/mlrhPBGD1倍量的賦形劑退火凍干循環(huán)填充體積=回收體積溶液8:大約60mg/mlrhPBGD1倍量的賦形劑退火凍干循環(huán)填充體積=2x回收體積溶液9:大約150mg/mlrhPBGD1倍量的賦形劑退火凍干循環(huán)》真充體積=回收體積溶液10:大約150mg/mlrhPBGDl倍量的賦形劑原初凍干循環(huán)1真充體積、=回4史體積、盡管沒有在表21中顯示，還對每個時間點(diǎn)檢驗(yàn)了純度，如在全部情況下發(fā)現(xiàn)是100%。對溶液2在第4周和第9周時間點(diǎn)上并且對于溶液4在第9周時間點(diǎn)上使用了錯誤的回收體積。表21:<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>實(shí)施例7不同的賦形劑對rhPBGD穩(wěn)定性的影響rhPBGD如實(shí)施例4中所述而濃縮并且緩沖劑隨后對下文所述之一的緩沖劑加以改變。產(chǎn)物隨后如實(shí)施例4中所述以所包括的原初退火步驟而凍干，并且樣品的穩(wěn)定性如實(shí)施例6中所述進(jìn)行檢驗(yàn)。檢驗(yàn)了以下4種制劑對rhPBGD穩(wěn)定性的影響制劑A(對應(yīng)于實(shí)施例6中的溶液9):250mM甘露醇，27mM甘氨酸和3.67mMNa2HP04。制劑B:250mM甘露醇，27mM甘氨酸和10mMTRIS-HCL。制劑C:250mM甘露醇，27mM甘氨酸，3.67mMNa2HP04和0.1%Tween80。制劑D:221mM甘露醇，29mM蔗糖，27mM甘氨酸，3.67mMNa2HP04和0.1%Tween80。結(jié)果在表22中顯示。表22<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>權(quán)利要求1.一種濃縮包含感興趣多肽的組合物的方法，其包括a)離心和/或過濾包含感興趣多肽的組合物；b)分別濃縮從步驟a)獲得的上清液或存留物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述感興趣多肽選自以下所組成的組中膽色素原脫氨酶、芳基硫酸酯酶A、a甘露糖苷酶、半乳糖基腦苷脂酶，及其功能等效部分，以及它們的類似物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述感興趣多肽包含選自以下所組成的組中的氨基酸i)如SEQIDNO.:14、SEQIDNO.:15、SEQIDNO.:18、SEQIDNO.:19、SEQIDNO.:20、SEQIDNO.:21和SEQIDNO.:24所定義的任意氨基酸序列；ii)如i)中所定義氨基酸序列的功能等效部分；以及iii)如i)或ii)中所定義氨基酸序列的功能等效類似物，所述類似物的氨基酸序列與如i)或ii)中所定義氨基酸序列至少75%相同。4.根據(jù)權(quán)利要求l或2所述的方法，其中，步驟b)通過凍干或蒸發(fā)而進(jìn)行。5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，步驟b)通過超濾而進(jìn)行。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，步驟b)通過切向流過濾而進(jìn)行。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，步驟b)用離心裝置進(jìn)行。8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述包含感興趣多肽的組合物還包含選自由甘氨酸、L-絲氨酸、蔗糖和甘露醇所組成的組中的一種或多種成份。9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述包含感興趣多肽的組合物還包含選自由三(鞋甲基)氨基曱烷鹽酸鹽、檸檬酸鈉和Na2HP04所組成的組中的一種或多種緩沖劑。10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法還包括對包含從步驟b)所獲得感興趣多肽的濃縮組合物滅菌的步驟。11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法還包括凍干包含從步驟b)中所獲得感興趣多肽的濃縮組合物的步驟。12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，步驟a)中的離心在1800-2500g下進(jìn)行。13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，步驟a)中用于過濾的濾器具有范圍為0.20-5.0微米的孔徑。14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法還包括在步驟a)之前的一個或多個下列步驟i)重組表達(dá)感興趣多肽；ii)通過一個或多個層析步驟純化感興趣多肽；以及換制劑緩沖液。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，在步驟ii)中的層析選自以下所組成的組中親和層析、離子交換層析和羥基磷灰石層析。16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述方法包括在步驟a)之前的下列步驟i)重組表達(dá)感興趣多肽；ii)使包含來自步驟i)的感興趣多肽的組合物接受親和層析；和iii)使包含步驟ii)的感興趣多肽的組合物接受離子交換層析。17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述方法包括在步驟a)之前的下列步驟i)重組表達(dá)感興趣多肽ii)使包含來自步驟i)的感興趣多肽的組合物接受親和層析；iii)使包含來自步驟ii)的感興趣多肽的組合物接受離子交換層析；以及iv)使包含來自步驟iii)的感興趣多肽的組合物接受羥基磷灰石柱層析。18.根據(jù)權(quán)利要求14中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法包括利用核酸序列的重組表達(dá)，其中所述核酸序列包含選自以下序列所組成的組中i)如SEQIDNO.:1-13、SEQIDNO.:16、SEQIDNO.:17、SEQIDNO.:22和SEQIDNO.:23所定義的任意核S吏序列；ii)與如i)中所定義核酸序列至少75%相同的核酸序列。19.根據(jù)權(quán)利要求16或17中任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法還包括稀釋或滲濾包含從步驟ii)所獲得感興趣多肽的組合物的步驟。20.包含至少10mg/ml多肽的組合物，所述的多肽選自以下所組成的組中膽色素原脫氨酶、芳基^5危酸酯酶A、溶酶體a-甘露糖苷酶和半乳糖基腦苷脂酶。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的組合物，其中，所述多肽是如在權(quán)利要求3中定義的多肽。22.包含75-250mg/ml選自由膽色素原脫氨酶、芳基硫酸酯酶A、溶酶體(X-甘露糖苷酶和半乳糖基腦苷脂酶所組成的組中的多肽的組合物在制備用于皮下注射至哺乳動物的藥物中的用途。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的用途，其中，所述多肽是如在權(quán)利要求3中定義的多肽。24.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的用途，其中，所述的藥物用于治療急性間歇性卟啉病、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、溶酶體貯積病a-甘露糖苷過多癥或克拉伯病。25.治療哺乳動物急性間歇性口卜啉病的方法，其包括皮下注射含500-300mg/ml膽色素原脫氨酶的組合物。26.治療哺乳動物異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良的方法，其包括皮下注射含50-300mg/ml芳基硫酸酯酶A的組合物。27.治療哺乳動物溶酶體貯積病a-甘露糖苦過多癥的方法，其包括皮下注射50-300mg/ml溶酶體a-甘露糖苷酶的組合物。28.治療哺乳動物克拉伯病的方法，其包括皮下注射含50-300mg/ml半乳糖基腦苷脂酶的組合物。全文摘要本發(fā)明包括濃縮包含感興趣多肽的組合物的方法和這種濃縮后的組合物用于治療哺乳動物中疾病的用途，尤其是通過皮下注射治療哺乳動物中疾病的用途。文檔編號C07K1/00GK101410408SQ200780011523公開日2009年4月15日申請日期2007年4月4日優(yōu)先權(quán)日2006年4月4日發(fā)明者斯蒂芬·尼爾松申請人:希爾制藥愛爾蘭有限責(zé)任公司