專利名稱：一種從中藥蒺藜制備螺甾皂苷tts－12的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是從中藥蒺藜全草中制備螺甾皂苷替告皂苷元-O-3-β-D-吡喃木糖(1→2)-[β-D-吡喃木糖(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖(1→2)]-β-D-吡喃半乳糖苷(簡稱TTS-12)的新方法。
背景技術(shù)：
中藥蒺藜(Tribulus terrestris L.)中提取的粗皂苷制劑(如心腦舒通膠囊和心腦舒通片)在臨床上主要用于治療心腦血管疾病。從蒺藜中提取的總皂苷主要包括螺甾皂苷和呋甾皂苷等成分，目前已報道過17種螺甾皂苷成分[Xu YX，Chen HS，Liang HQ，et al.Three new saponins from Tribulus terrestris.Planta Med.2000；66(6)545～50；Yan W，Ohtani K，Kasai R，et al.Steroidal Saponins from fruits ofTriblus terrestris.Phytochemistry 1996；42(5)1417～22；Yan W，Ohtani K，KasaiR，et al.Steroidal Saponins from fruits of Triblus terrestris.Phytochemistry 1997；45(4)；811；S.B.Mahato，N.P.Sahu et al.J.Chem.Soc.Perkin Trans.I 1981；(9)2405；Wu，G.，Jiang，S.H.，and Jiang，F(xiàn).X.et al.Phytochemistry 1996；42(6)1677]。TTS-12是其中的一種螺甾皂苷，即替告皂苷元-O-3-β-D-吡喃木糖(1→2)-[β-D-吡喃木糖(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖(1→2)]-β-D-吡喃半乳糖苷，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為 其中
TTS-12為一種高效的抗真菌化合物，文獻報道的制備方法為中藥蒺藜原料用80％乙醇回流提取，提取液減壓濃縮后，濃縮液分別用石油醚、氯仿和正丁醇萃取。正丁醇萃取液回收溶劑后，殘留物再進行大孔樹脂吸附層析，分別用水、50％、70％、90％乙醇洗脫，90％乙醇洗脫部分，回收溶劑至干，殘留物再進行硅膠柱層析和C18反相中壓柱層析等層析過程才得到純的化合物TTS-12[XuYX，Chen HS，Liang HQ，et al.Three new saponins from Tribulus terrestris.PlantaMed.2000；66(6)545～50，文獻中該化合物的偏號為8]。該制備方法復(fù)雜，步驟多，制備成本高，且不適用于大量制備或工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種快速簡便、成本低廉、可適用于大量制備或工業(yè)化生產(chǎn)的TTS-12制備方法。具體制備方法如下1.TTS-12的提取 蒺藜全草用提取溶劑加熱回流，提取溶劑選用60～95％乙醇，優(yōu)選70～80％乙醇，用量為蒺藜草重量的15～25倍，優(yōu)選20倍。將切碎成段的蒺藜全草裝入多功能提取罐，分三次回流提取各2小時，合并乙醇提取液。
2.TTS-12的分離純化 將上述提取液減壓回收乙醇至餾出液無乙醇味，冷卻至沉淀完全，離心收集提取物沉淀，沉淀用95％乙醇加熱溶解后加100～200或200～300目柱層析硅膠(約10公斤蒺藜全草提取物加1公斤目硅膠)，攪拌分散，干燥，上100～200目或200～300目硅膠柱層析，用混合溶劑洗脫?；旌先軇┻x自氯仿-甲醇或二氯甲烷-甲醇，或先用氯仿∶甲醇＝5∶1(V/V)洗脫，至無洗脫物流出，再用氯仿∶甲醇＝4∶1(V/V)洗脫，或先用二氯甲烷∶甲醇＝4∶1(V/V)洗脫，至無洗脫物流出，再用二氯甲烷∶甲醇＝3∶1(V/V)洗脫，TLC檢測洗脫液，收集含TTS-12的洗脫液，回收溶劑后加入適量甲醇或乙醇熱溶后放置結(jié)晶，得到TTS-12粗品，再用甲醇或80％乙醇重結(jié)晶即得TTS-12純品。本發(fā)明制備方法簡便，降低了成本，且可適用于大量制備或工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式
下面通過實施例，對本發(fā)明作進一步說明。
實施例1制備化合物TTS-12
蒺藜全草40公斤，切碎成段裝入多功能提取罐，加入70％乙醇作為提取溶劑，使淹沒全部藥材，浸泡24小時后，加熱回流提取三次，每次2小時，提取液為蒺藜重量的20倍，合并提取液，過濾后減壓回收乙醇至餾出液無乙醇味，濃縮液放置冷卻，使充分沉淀，離心收集提取物沉淀，將沉淀用蒸餾水洗滌二次，每次用蒸餾水1升。于沉淀物中加95％乙醇3升加熱溶解，加100～200目柱層析硅膠5公斤攪拌分散，揮去乙醇后80℃干燥，研細過60目篩，即得提取物與硅膠混合的樣品。將100～200目柱層析硅膠6kg減壓裝入30cm×150cm不銹鋼層析柱，減壓抽緊密后加入上述提取物與硅膠混合的樣品，先用氯仿∶甲醇＝5∶1(V/V)的混合溶劑100升洗脫，TLC檢測進程(展開劑為CHCl3∶CH3OH∶H2O＝65∶35∶10，用下層，顯色劑為20％H2SO4乙醇液)，當(dāng)洗脫液中無洗出物斑點后，以氯仿∶甲醇＝4∶1(V/V)40升的混合溶劑洗脫，收集該部分洗脫液，減壓回收溶劑，剩余物中加入3升甲醇，加熱使溶解，放置，冷卻，析出針狀結(jié)晶，過濾，得TTS-12粗品25.4克。粗品用甲醇重結(jié)晶后得TTS-12純品23.0g，純度＞98％。
實施例2 制備化合物TTS-12蒺藜全草40公斤，切碎成段裝入多功能提取罐，加入70％乙醇作為提取溶劑，使淹沒全部藥材，浸泡24小時后，加熱回流提取三次，每次2小時，提取液為蒺藜重量的20倍，合并提取液，過濾后減壓回收乙醇至餾出液無乙醇味，濃縮液放置，冷卻，使充分沉淀，離心收集提取物沉淀，將沉淀用蒸餾水洗滌二次，每次用蒸餾水1升。于沉淀物中加95％乙醇3升加熱溶解，加200～300目柱層析硅膠5公斤攪拌分散，揮去乙醇后80℃干燥，研細過60目篩，即得提取物與硅膠混合的樣品。將200～300目柱層析硅膠6kg，減壓裝入30cm×150cm不銹鋼層析柱，減壓抽緊密后加入上述提取物與硅膠混合的樣品，先用二氯甲烷∶甲醇＝4∶1(V/V)的混合溶劑100升洗脫，TLC檢測進程(展開劑為CHCl3∶CH3OH∶H2O＝65∶35∶10，用下層，顯色劑為20％H2SO4乙醇液)，當(dāng)洗脫液中無洗出物斑點后，再以二氯甲烷∶甲醇＝3∶1(V/V)40升的混合溶劑洗脫，收集該部分洗脫液，減壓回收溶劑，剩余物中加入4升甲醇，加熱使溶解，放置，冷卻，析出針狀結(jié)晶，過濾，得TTS-12粗品28.6克。粗品用80％乙醇重結(jié)晶后得TTS-12純品20.5g，純度＞98％。
權(quán)利要求
1.一種從中藥蒺藜全草中制備螺甾皂苷TTS-12的方法，TTS-12的結(jié)構(gòu)式為 其中 具體操作步驟如下(1)TTS-12的提取 蒺藜全草用提取溶劑加熱回流提取，提取溶劑為60～95％乙醇，用量為蒺藜重量的15～25倍，得提取液；(2)TTS-12的分離純化 將提取液減壓回收乙醇至殘留液無乙醇味，冷卻至沉淀完全，離心收集提取物沉淀，沉淀用95％乙醇加熱溶解，加適量100～200或200～300目柱層析硅膠攪拌分散，干燥過篩，上100～200目或200～300目硅膠柱層析，用混合溶劑洗脫，混合溶劑選自氯仿-甲醇或二氯甲烷-甲醇，或先用氯仿∶甲醇＝5∶1(V/V)洗脫，至無洗脫物流出，再用氯仿∶甲醇＝4∶1(V/V)洗脫，或先用二氯甲烷∶甲醇＝4∶1(V/V)洗脫，至無洗脫物流出，再用二氯甲烷∶甲醇＝3∶1(V/V)洗脫，TLC檢測洗脫液，收集含TTS-12的洗脫液，回收溶劑，加入適量甲醇或乙醇熱溶，放置結(jié)晶，得到TTS-12粗品，然后用甲醇或80％乙醇重結(jié)晶即得TTS-12純品。
2.按權(quán)利要求1所述的從中藥蒺藜全草中制備螺甾皂苷TTS-12的方法，其特征在于所說的提取溶劑為70～80％乙醇。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是從中藥蒺藜中制備甾體皂苷替告皂苷元－O－3－β－D－吡喃木糖(1→2)－[β－D－吡喃木糖(1→3)]－β－D－吡喃葡萄糖(1→4)－[α－L－吡喃鼠李糖(1→2)]－β－D－吡喃半乳糖苷(簡稱TTS－12)的一種新方法。包括1.用乙醇回流提取甾體皂苷TTS－12提取液；2.減壓濃縮提取液，放置、離心得沉淀；3.沉淀通過硅膠柱層析分離純化得TTS－12粗制品，再用甲醇或乙醇重結(jié)晶得TTS－12純品。本發(fā)明制備方法快速簡便，成本低廉，可適用于大量制備或工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07J71/00GK1569887SQ200410018318
公開日2005年1月26日 申請日期2004年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月13日
發(fā)明者陳海生, 宣偉東, 梁爽 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)