本發(fā)明涉及一種生物肥料。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)有的生物肥料大多是單一性的生物肥料。如：固氮菌肥，主要由具有固氮作用的細(xì)菌和真菌組成；又如：磷細(xì)菌，其功能是分解土壤中的有機(jī)磷，使之變?yōu)橐子诒恢参镂盏牧姿?；再如：?xì)菌，其功能是分解土壤中的鉀化合物，使之成為能被植物吸收利用的速效鉀。這些肥料在單獨(dú)使用時(shí)均能發(fā)揮各自作用，部分滿足植物對氮，磷，鉀三要素的需要。它們不會(huì)產(chǎn)生長期使用化肥所造成的土壤板結(jié)現(xiàn)象。但其不足在于：單獨(dú)使用上述三類生物肥料只能解決植物所需營養(yǎng)的一個(gè)方面，且成本較高，用量大，同時(shí)，將三者配合使用，又因難于做到比例適當(dāng)而造成施肥量的不足或浪費(fèi)。長期使用單一的或復(fù)合的生物肥料的實(shí)踐證明，它們只能替代化肥的30％以下。食用菌栽培用培養(yǎng)基在栽培使用后仍含有一定比例可以利用物質(zhì),如何高效利用食用菌栽培料,使其得到充分利用對于食用菌栽培產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的推動(dòng)作用,也對環(huán)境和資源的保護(hù)和利用是一個(gè)利好因素.蟹味菇和杏鮑菇是兩個(gè)個(gè)產(chǎn)量較大的食用菌品種,蟹味菇的培養(yǎng)基配方:棉籽殼40千克，木屑38千克，麩皮10千克，玉米粉10千克，碳酸鈣或硫酸鈣1千克，石灰1千克，PH值7.5—8，含水量65％。一種可以提高子實(shí)體鈣含量的栽培基質(zhì),申請?zhí)枺?01410403374.8,發(fā)明公開一種可以提高子實(shí)體鈣含量的栽培基質(zhì)，涉及栽培基質(zhì)
技術(shù)領(lǐng)域：
，其特征在于，由以下重量份數(shù)的組份組成：骨粉8-12份、秸稈20-40份、沼渣1-2份、木炭灰2-4份、苔蘚1-2份、荔枝殼1-2份、豆秸灰1-2份、松球1-2份、抹茶1-2份、富硒酵母0.5-1份、魚骨粉1-2份、紅曲米1-2份、窖泥4-6份、草炭土3-5份、鋸末4-6份、竹粉1-2份、龍蝦殼1-2份、魚鱗1-2份及殺菌劑1-2份。本發(fā)明基質(zhì)產(chǎn)出的子實(shí)體可以補(bǔ)充機(jī)體所需多重營養(yǎng)，調(diào)節(jié)腸胃功能，調(diào)節(jié)微循環(huán)，提高免疫力，特別適合骨質(zhì)疏松、骨質(zhì)增生、易骨折的人士，提高資源利用率，產(chǎn)生較高的經(jīng)濟(jì)效益。微生物肥是一種以微生物生命活動(dòng)及其產(chǎn)物導(dǎo)致農(nóng)作物得到特定肥料效應(yīng)的微生物活體制品，它在培肥地力、提高化肥利用率、抑制農(nóng)作物對重金屬及農(nóng)藥等有害物質(zhì)的吸收、凈化和修復(fù)土壤、促進(jìn)農(nóng)作物秸稈和城市垃圾的腐熟利用、提高農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)等方面有著不可替代的作用。微生物肥料的功效發(fā)揮主要是通過對傳統(tǒng)化肥、有機(jī)肥的增效作用，對土壤的改良活化作用，以及微生物的生理作用等方式來實(shí)現(xiàn)的。因此，微生物肥料就有了化肥、有機(jī)肥、有益生物菌的多種肥力和功效，是活化肥料養(yǎng)分、提高肥料效果、改良作物品質(zhì)、促進(jìn)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)增效的理想肥料。微生物肥料是活體肥料，它的作用主要靠它含有的大量有益微生物的生命活動(dòng)來完成。只有當(dāng)這些有益微生物處于旺盛的繁殖和新陳代謝的情況下，物質(zhì)轉(zhuǎn)化和有益代謝產(chǎn)物才能不斷形成。因此，微生物肥料中有益微生物的種類、生命活動(dòng)是否旺盛是其有效性的基礎(chǔ)，而不像其它肥料是以氮、磷、鉀等主要元素的形式和多少為基礎(chǔ)。正因?yàn)槲⑸锓柿鲜腔钪苿云浞市c活菌數(shù)量、強(qiáng)度及周圍環(huán)境條件密切相關(guān)，包括溫度、水分、酸堿度、營養(yǎng)條件及原生活在土壤中土著微生物排斥作用都有一定影響。而且目前市場上的農(nóng)用微生物菌劑主要為單一的微生物菌種，難以還原微生態(tài)結(jié)構(gòu)，同時(shí)普通菌種和農(nóng)作物的協(xié)同作用弱，不利如提高植物抗逆性和根系營養(yǎng)吸收，例如公布號(hào)為CN102888356A的專利申請，公開了一種利用枯草芽孢桿菌制備微生物肥料的方法及其應(yīng)用。雖然目前市場上已出現(xiàn)一些復(fù)合微生物菌劑，但其或者功能單一，或者其使用方法受到限制，使用后的作物增產(chǎn)效果還不能達(dá)到令人滿意，所以目前仍需要開發(fā)適用于多種施用途徑、具有綜合功能和良好增產(chǎn)效果的復(fù)合微生物菌劑或肥料。由于我國長期在生物肥料方面研究缺乏投入，使得我國的生物肥料產(chǎn)業(yè)依然存在整體水平不高、技術(shù)創(chuàng)新不足、產(chǎn)品質(zhì)量與應(yīng)用效果表現(xiàn)欠穩(wěn)定的問題。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種一種食用菌菌渣食用菌菌渣為原料的生物肥料，所述重量份數(shù)組成為:預(yù)處理蟹味菇菌渣20-40,苦參堿1-3，發(fā)酵牛糞4-10；預(yù)處理蟹味菇菌渣的制備方法如下：栽培后蟹味菇菌渣粉碎后添加粉碎玉米芯粉和秸稈粉，控制水分含量在10-35％，添加泡盛曲霉培養(yǎng)物，控制溫度在26-35℃通風(fēng)培養(yǎng)10-20小時(shí)調(diào)整溫度5-12℃保持2-5小時(shí)后調(diào)整溫度到20-28℃，噴灑酵母菌液培養(yǎng)10-20小時(shí)即得。發(fā)酵牛糞的制備方法如下：包括如下步驟：牛糞與粉碎秸稈和粉碎的苦豆子按照比例混合后添加黑曲霉培養(yǎng)物調(diào)節(jié)水分建堆發(fā)酵，溫度達(dá)到65-70℃后保持3-5小時(shí)，保持翻拌間隔為每3-4小時(shí)一次，待溫度達(dá)到20-32℃添加枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物發(fā)酵20-25小時(shí)后結(jié)束發(fā)酵處理；所述牛糞、粉碎秸稈、苦豆子和黑曲霉培養(yǎng)物重量份數(shù)組成:牛糞10-20份、粉碎秸稈5-10份，苦豆子2-5；黑曲霉培養(yǎng)物3-8份；所述枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物添加量為牛糞質(zhì)量的1-2％；發(fā)酵牛糞的水分含量應(yīng)控制在40～65％。酵母菌液的制備方法：酵母菌菌種接入液體培養(yǎng)基培養(yǎng)15-25小時(shí)添加L半胱氨酸后制得；所述枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物制備：從斜面轉(zhuǎn)接培養(yǎng)枯草芽孢桿菌，逐級(jí)擴(kuò)培后的種子液轉(zhuǎn)接入發(fā)酵罐中，發(fā)酵完畢發(fā)酵液經(jīng)過板框過濾、干燥后獲得枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物。泡盛曲霉培養(yǎng)物制備：菌種培養(yǎng)，固體發(fā)酵培養(yǎng)：孢子液接種到米曲霉固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)料中，26-33℃培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)料，低溫流化床干燥，粉碎干燥物?？莶菅挎邨U菌(Bacillussubtilissubsp)CGMCC7926泡盛曲霉(Aspergillusawamori)CGMCC3.6484上述菌種的保藏單位是中國普通微生物菌種保藏管理中心。地址：北京市中關(guān)村北一條13號(hào)中科院微生物研究所；郵編：100080。有益效果本發(fā)明的肥料能夠增強(qiáng)作物的抗旱能力，特別適合在鹽堿地使用本發(fā)明的肥料，能夠改良土壤。肥料中有益微生物能產(chǎn)生谷胱甘肽與植物粘液，礦物胚體和有機(jī)膠體結(jié)合在一起，可以改善土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)土壤的物理性能和減少土壤顆粒的損失，在一定的條件下，還能參與腐殖質(zhì)形成。所以施用微生物肥料能改善土壤物理性狀，有利于提高土壤肥力。本產(chǎn)品使用方法簡單，每畝地使用量0.3-1公斤，成本僅為80-100元/畝，拌種或生長期灌水前地表噴灑。土壤生物酶的轉(zhuǎn)化，在降低農(nóng)業(yè)生產(chǎn)成本、減少化肥的使用、恢復(fù)土壤生態(tài)地力和有效提高農(nóng)作物產(chǎn)量等方面均能起到顯著的作用，充分發(fā)揮土壤的有機(jī)質(zhì)效能。具體實(shí)施方式除非特別說明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實(shí)施方案應(yīng)理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的前提下，對這些實(shí)施方案中的反應(yīng)條件、分離提取條件進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述釀酒酵母菌株保藏編號(hào)為CGMCCNo.12789具體為釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)tlj2016，該菌株已于保藏于2016年7月15日中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12789，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。所述釀酒酵母tlj2016的最適生長pH為6.0-6.5,最適生長溫度為28-35℃；所述釀酒酵母tlj2016是從一株寧夏果園中分離得到的釀酒酵母出發(fā)菌株經(jīng)以下步驟得到：原始出發(fā)菌種→試管活化→硫酸二乙酯(DES)誘變→高滲平板篩選→亞硝基胍(NTG)誘變篩選→高滲平板初篩→搖瓶篩選→發(fā)酵復(fù)篩(產(chǎn)GSH能力)→傳代穩(wěn)定性試驗(yàn)。1、本發(fā)明所提供的釀酒酵母對葡萄糖的耐受能力達(dá)到300g/L，利于其在高濃度葡萄糖條件下生產(chǎn)GSH；2、本發(fā)明所提供的釀酒酵母在5L發(fā)酵罐中發(fā)酵生產(chǎn)GSH終濃度達(dá)到3308mg/L；3、本發(fā)明所提供的釀酒酵母耐受L-半胱氨酸的能力遠(yuǎn)高于出發(fā)菌株，在5mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能緩慢生長，在40mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能保持GSH大量合成；4、本發(fā)明所提供的釀酒酵母耐鹽能力達(dá)到18％，有利于擴(kuò)展其應(yīng)用領(lǐng)域。高糖條件下tlj2016發(fā)酵產(chǎn)GSH能力實(shí)驗(yàn)(1)搖瓶培養(yǎng)取tlj2016斜面菌種一環(huán)，接入裝有30mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL搖瓶中150rpm,30℃培養(yǎng)30h得種子液；搖瓶培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，pH6.0；(2)5L發(fā)酵罐培養(yǎng)將種子液按10％接種量，接入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，30℃,通氣量6L/min,罐壓0.03MPa，500rpm,恒pH6.0條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵至30h時(shí)，一次性添加終濃度為25mmol/L的L-半胱氨酸，總發(fā)酵時(shí)間為50h；發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO410、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O8、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1,pH6.0；發(fā)酵結(jié)束后，測定發(fā)酵液中GSH的含量為3308mg/L.L-半胱氨酸耐受力實(shí)驗(yàn)將出發(fā)菌株以及tlj2016斜面菌種各一環(huán)，分別接入裝有30mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL搖瓶中150rpm,30℃培養(yǎng)進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)至12h時(shí)，向搖瓶中加入不同終濃度的L-半胱氨酸，再培養(yǎng)10h，測定細(xì)胞干重，結(jié)果表2、3；搖瓶培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖20、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，pH6.0；表2：出發(fā)菌株L-半胱氨酸耐受力L-半胱氨酸濃度mmol/L0510152040出發(fā)菌株干重g/L22.615.710.24.32.20.8GSH濃度(mg/L)35.646.743.240.737.925.3表3tlj2016L-半胱氨酸耐受力L-半胱氨酸濃度mmol/L0510152040tlj2016干重g/L25.728.523.621.220.618.7GSH濃度(mg/L)73.298.3113.5121.7127.5135.8從表2的結(jié)果可以看出，對于出發(fā)菌株，培養(yǎng)基中添加L-半胱氨酸，細(xì)胞停止生長，并且開始自溶，導(dǎo)致GSH增長率隨著L-半胱氨酸濃度的升高而降低；而低濃度L-半胱氨酸下，tlj2016仍能夠緩慢生長，隨著L-半胱氨酸濃度的提高，tlj2016菌株的細(xì)胞干重緩慢下降，而GSH濃度持續(xù)增長，這一結(jié)果將有利于GSH生產(chǎn)過程中通過添加前體氨基酸-L-半胱氨酸提促進(jìn)GSH的生產(chǎn)。耐鹽能力實(shí)驗(yàn)取tlj2016菌液1mL接種菌種于含有不同NaCl濃度的(含量梯度為0％、2％、5％、10％、15％、18％)的10mLYPD液體培養(yǎng)基(pH＝6.5)，置于30℃下分別培養(yǎng)24h，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。各取1ml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋度溶液，取0.1ml稀釋液于YPD固體平板中涂布，于30℃生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)36小時(shí)(每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行)記錄計(jì)算平板上的菌數(shù)個(gè)數(shù)。結(jié)果見表4，可知該菌的耐鹽濃度為18％，說明tlj2016不僅可以在常規(guī)環(huán)境中生存，在高鹽條件下依然具有活力，可應(yīng)用于醬油、腌制品等高鹽食品加工過程中耗糖產(chǎn)谷胱甘肽。表4耐鹽能力檢測(×107cfu/ml)NaCl含量0％2％5％10％15％18％原始菌株5.16±0.424.38±0.422.15±0.210.12±0.1100tlj20165.33±0.285.10±0.714.83±0.423.98±0.332.57±0.480.83±0.15枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)Li-2013-02，該菌株已于2013年7月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào))，保藏號(hào)為CGMCCNo.7926。所述菌株特性是產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶的酶活力高，耐熱、耐酸性強(qiáng)。所述菌株制備的耐高溫α-淀粉酶酶活力為30000-35000u/ml；適用溫度范圍為105-115℃，最適反應(yīng)溫度110℃，在110℃酶活完全穩(wěn)定；適用反應(yīng)pH值范圍為3.0-7.0，在pH值為3.0時(shí)酶活完全穩(wěn)定，最適反應(yīng)pH值為4.2。所述菌株特點(diǎn)如下：所述菌株在固體平板上菌落顏色為乳白色，表面干燥不透明，邊緣整齊，為具有運(yùn)動(dòng)性的好氧菌。鏡檢為長桿狀，革蘭氏染色呈陽性。該菌可利用檸檬酸鹽，硝酸還原、V-P實(shí)驗(yàn)成陽性。所述枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)Li-2013-02由一株產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶的枯草芽孢桿菌Li-2013經(jīng)紫外線-氯化鋰-硫酸二乙酯復(fù)合誘變篩選獲得，具體篩選步驟如下：(1)菌懸液的制備將在平板劃線分離后長出的Li-2013單菌落接入種子培養(yǎng)基中，100r/min，40℃培養(yǎng)12h后，取1mL培養(yǎng)液離心后用生理鹽水洗滌兩次，并重懸與9mL生理鹽水中。(2)紫外線-氯化鋰-硫酸二乙酯復(fù)合誘變將菌懸液置于無菌平板中，在距離為30cm，功率15w的紫外燈下攪拌照射100s。將經(jīng)過照射的菌液經(jīng)梯度稀釋后涂布于氯化鋰平板，并以未經(jīng)紫外照射的菌液稀釋涂平板做對照。將上述涂布均勻的平板，用黑色的布或報(bào)紙包好，置40℃培養(yǎng)48h，在長出菌落的平板上篩選出水解圈與菌落直徑比值最大者挑至斜面保存，純化后配制成菌懸液，經(jīng)梯度稀釋后與硫酸二乙酯原液充分混合，并于40℃震蕩處理40min，將處理過的菌液經(jīng)梯度稀釋后涂布于氯化鋰平板。(3)高產(chǎn)菌種的初篩將上述涂布均勻的平板，置40℃培養(yǎng)48h，在長出菌落的平板上初篩出水解圈與菌落直徑比值較大者挑至斜面保存，純化后獲得三株菌Li-2013-01，Li-2013-02,Li-2013-03。(4)搖瓶發(fā)酵復(fù)篩將獲得的三株菌Li-2013-01，Li-2013-02,Li-2013-03在含有30mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL搖瓶中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，種子接種量10％(V/V)，40℃、100r/min培養(yǎng)72h，離心取發(fā)酵上清液制得粗酶液。(5)酶活測定酶活單位的定義：1mL粗酶液，于105℃、pH4.2條件下，1min液化1mg可溶性淀粉，即為1個(gè)酶活力單位，以U/mL表示。經(jīng)測定，菌株Li-2013-02,為穩(wěn)定的最高產(chǎn)菌株，且酶活達(dá)到30000U/mL。所述氯化鋰平板：淀粉1％，蛋白胨1％，(NH)2SO40.4％，K2HPO40.8％，CaCl20.2％，氯化鋰0.9％，瓊脂2％。所述的種子培養(yǎng)基：酵母粉0.5％，蛋白胨1％，可溶性淀粉1％，NaCl1％。所述的發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米粉5％-15％，豆餅粉4％-10％，(NH)2SO40.4％，K2HPO40.8％，CaCl20.2％。所述的搖瓶培養(yǎng)條件：該菌在含有30mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL搖瓶中，接種量10％(V/V)，100r/min、40℃發(fā)酵培養(yǎng)72h。所述耐高溫的α-淀粉酶，其酶學(xué)性質(zhì)如下：(1)該酶溫度適應(yīng)范圍較寬，最適作用溫度在100-110℃之間，且在110℃以下保存的，溫度穩(wěn)定性較好，而110℃以上保存長時(shí)間溫度穩(wěn)定性較差。(2)該酶最適反應(yīng)pH值為4.2。在pH值3.0-7.0之間均有較高酶活力，在pH值為3.0時(shí)酶活完全穩(wěn)定。(3)酶活性：由本發(fā)明所提供的突變株Li-2013-02,制備的耐高溫α-淀粉酶酶活力為30000-35000U/ml。泡盛曲霉菌劑的制備方法：斜面菌種活化培養(yǎng)：將泡盛曲霉斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，27℃培養(yǎng)3天。固體一級(jí)種子培養(yǎng)：挑取泡盛曲霉斜面菌種接入裝有100克培養(yǎng)基的500毫升三角瓶中進(jìn)行種子培養(yǎng)，30℃培養(yǎng)3天即可。固體二級(jí)種子培養(yǎng)：將上述培養(yǎng)好的固體一級(jí)種子攪拌為碎塊后加入裝有1000克培養(yǎng)基的5000毫升三角瓶中進(jìn)行種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：30℃培養(yǎng)3天即可。固體發(fā)酵培養(yǎng)：將二級(jí)搖瓶種子粉碎，加入裝有滅菌培養(yǎng)基的發(fā)酵池或托盤中混合均勻后培養(yǎng)，曲料培養(yǎng)溫度控制在26-35℃，濕度80-90％，每隔10小時(shí)翻料一次，培養(yǎng)時(shí)間5-7天；固體曲料的培養(yǎng)采用常用曲料培養(yǎng)技術(shù)；待培養(yǎng)料長滿菌絲即可結(jié)束培養(yǎng)，培養(yǎng)基預(yù)先經(jīng)高溫蒸煮滅菌處理，滅菌條件控制溫度121℃，時(shí)間1小時(shí)。干燥粉碎：發(fā)酵結(jié)束培養(yǎng)料在流化床或其他干燥設(shè)備上進(jìn)行干燥，干燥溫度控制在60℃，干燥到水分含量在10％以下，然后將固體培養(yǎng)料進(jìn)行粉碎，物料粉碎孔徑在60目以上。培養(yǎng)基組成：固體原料：麩皮80,豆餅粉10％,玉米淀粉10％，添加等量自來水；初始pH自然?？莶菅挎邨U菌培養(yǎng)物的制備方法：發(fā)酵液的獲得：采用斜面菌種逐級(jí)擴(kuò)培獲得枯草芽孢桿菌發(fā)酵液；(1)一級(jí)種子培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接入500毫升搖瓶中，培養(yǎng)基裝量100毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床180轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度30℃，培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)；(2)二級(jí)種子培養(yǎng)：將一級(jí)種子按照10％的接種量接入500毫升二級(jí)種子搖瓶中，培養(yǎng)條件與一級(jí)種子相同；(3)三級(jí)種子培養(yǎng)：將二級(jí)種子以10％接種量接入5000毫升三級(jí)種子搖瓶中，培養(yǎng)基裝量1000毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度30℃，培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)；(4)一級(jí)種子罐培養(yǎng)：將三級(jí)種子以10％接種量接入總?cè)莘e為150L的一級(jí)種子罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝量100L，培養(yǎng)溫度28℃，攪拌速度100轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1:0.5,罐壓0.05MPa,培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)；(5)發(fā)酵培養(yǎng)：將一級(jí)種子罐菌種以10％接種量接入總?cè)莘e為1.5噸二級(jí)種子罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝量1噸，培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度28℃，攪拌速度100轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量(V/V)1:0.5,罐壓0.05MPa,培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)。發(fā)酵完畢發(fā)酵液經(jīng)過板框過濾、干燥后獲得含枯草芽孢桿菌劑在內(nèi)的枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物。培養(yǎng)基組成：葡萄糖6％,酵母提取物1％,蛋白胨0.2％，CaCO31％,pH6.8。實(shí)施例1：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高效復(fù)合生物有機(jī)肥料，所述重量份數(shù)組成為:預(yù)處理蟹味菇菌渣30,苦參堿2，發(fā)酵牛糞8；預(yù)處理蟹味菇菌渣的制備方法如下：栽培后蟹味菇菌渣粉碎后添加粉碎玉米芯粉和秸稈粉，控制水分含量在18％，添加泡盛曲霉培養(yǎng)物，控制溫度在31℃通風(fēng)培養(yǎng)15小時(shí)調(diào)整溫度8℃保持3小時(shí)后調(diào)整溫度到25℃，噴灑酵母菌液培養(yǎng)15小時(shí)即得。發(fā)酵牛糞的制備方法如下：包括如下步驟：牛糞與粉碎秸稈和粉碎的苦豆子按照比例混合后添加黑曲霉培養(yǎng)物調(diào)節(jié)水分建堆發(fā)酵，溫度達(dá)到66℃后保持4小時(shí)，保持翻拌間隔為每3.5小時(shí)一次，待溫度達(dá)到41℃添加枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物發(fā)酵23小時(shí)后結(jié)束發(fā)酵處理；所述牛糞、粉碎秸稈、苦豆子和黑曲霉培養(yǎng)物重量份數(shù)組成:牛糞15份、粉碎秸稈8份，苦豆子4；黑曲霉培養(yǎng)物5份；所述枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物添加量為牛糞質(zhì)量的1％；發(fā)酵牛糞的水分含量應(yīng)控制在50-55％。苦參堿制備工藝如下:1、粉粹：將苦豆子粉粹至粗細(xì)度40目。2、浸泡：按料液比1:10(m：V)的重量在碳酸鈉和乙醇的混合溶液中浸泡3h，浸泡溫度控制在65℃；3、提取：將浸泡好的苦豆子混合物置于超聲波提取罐中提取苦參堿，超聲波頻率60-80kHz，提取時(shí)間35min，提取次數(shù)2次，溫度控制在65℃；4、提取液過濾濃縮：將提取好的苦參堿提取液經(jīng)真空濃縮設(shè)備濃縮至Brix15-16，PH6.5-7.0?？鄥A含量7.6％；苦參堿的提取率達(dá)93％以上。所述枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物制備：從斜面轉(zhuǎn)接培養(yǎng)枯草芽孢桿菌，逐級(jí)擴(kuò)培后的種子液轉(zhuǎn)接入發(fā)酵罐中，發(fā)酵完畢發(fā)酵液經(jīng)過板框過濾、干燥后獲得枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物。泡盛曲霉培養(yǎng)物制備：菌種培養(yǎng)，固體發(fā)酵培養(yǎng)：孢子液接種到米曲霉固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)料中，26-33℃培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)料，低溫流化床干燥，粉碎干燥物。所述生物肥制備方法如下：按照上述比例將各種菌劑混合，或混合后制粒?？莶菅挎邨U菌(Bacillussubtilissubsp)CGMCC7926泡盛曲霉(Aspergillusawamori)CGMCC3.6484上述菌種的保藏單位是中國普通微生物菌種保藏管理中心。地址：北京市中關(guān)村北一條13號(hào)中科院微生物研究所；郵編：100080。酵母菌發(fā)酵液培養(yǎng)制備，采用釀酒酵母菌株保藏編號(hào)為CGMCCNo.12789。(1)搖瓶培養(yǎng)取tlj2016斜面菌種一環(huán)，接入裝有30mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL搖瓶中150rpm,30℃培養(yǎng)30h得種子液；搖瓶培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，pH6.0；(2)5L發(fā)酵罐培養(yǎng)將種子液按10％接種量，接入裝有3L發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，30℃,通氣量6L/min,罐壓0.03MPa，500rpm,恒pH6.0條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵至14-15h時(shí)，一次性添加終濃度為16mmol/L的L-半胱氨酸得到酵母菌發(fā)酵液；發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：(NH4)2SO410、葡萄糖50、K2HPO4·3H2O8、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1,pH6.0；實(shí)施例2一種高效復(fù)合生物有機(jī)肥料，所述重量份數(shù)組成為:預(yù)處理蟹味菇菌渣20,苦參堿，發(fā)酵牛糞4；預(yù)處理蟹味菇菌渣的制備方法如下：栽培后蟹味菇菌渣粉碎后添加粉碎玉米芯粉和秸稈粉，控制水分含量在30％，添加泡盛曲霉培養(yǎng)物，控制溫度在35℃通風(fēng)培養(yǎng)10小時(shí)調(diào)整溫度5℃保持5小時(shí)后調(diào)整溫度到20℃，噴灑酵母菌液培養(yǎng)10小時(shí)即得。發(fā)酵牛糞的制備方法如下：包括如下步驟：牛糞與粉碎秸稈和粉碎的苦豆子按照比例混合后添加黑曲霉培養(yǎng)物調(diào)節(jié)水分建堆發(fā)酵，溫度達(dá)到65-70℃后保持4小時(shí)，保持翻拌間隔為每3-4小時(shí)一次，待溫度達(dá)到25℃添加枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物發(fā)酵20-25小時(shí)后結(jié)束發(fā)酵處理；所述牛糞、粉碎秸稈和苦參堿重量份數(shù)組成:牛糞20份、粉碎秸稈5份，苦豆子2；黑曲霉培養(yǎng)物8份；所述枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物添加量為牛糞質(zhì)量的2％；發(fā)酵牛糞的水分含量應(yīng)控制在65％。酵母菌液的制備方法：同例1。苦參堿制備工藝如下:粉粹：將苦豆子粉粹至粗細(xì)度40目。浸泡：按料液比1:12(m：V)的重量在碳酸鈉和乙醇的混合溶液中浸泡4h，浸泡溫度控制在60℃；所述碳酸鈉和乙醇的質(zhì)量比為1：6。提?。簩⒔莺玫目喽棺踊旌衔镏糜诔暡ㄌ崛」拗刑崛】鄥A，超聲波頻率60-80kHz，提取時(shí)間40min，提取次數(shù)1次，溫度控制在60-70℃；提取液濃縮：將提取好的苦參堿提取液經(jīng)真空濃縮設(shè)備濃縮至Brix16，PH6.5-7.0。苦參堿含量7.6％；苦參堿的提取率達(dá)93％以上。所述枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物制備：從斜面轉(zhuǎn)接培養(yǎng)枯草芽孢桿菌，逐級(jí)擴(kuò)培后的種子液轉(zhuǎn)接入發(fā)酵罐中，發(fā)酵完畢發(fā)酵液經(jīng)過板框過濾、干燥后獲得枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物。泡盛曲霉培養(yǎng)物制備：菌種培養(yǎng)，固體發(fā)酵培養(yǎng)：孢子液接種到米曲霉固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)料中，26-33℃培養(yǎng)至菌絲長滿培養(yǎng)料，低溫流化床干燥，粉碎干燥物。所述生物肥制備方法如下：按照上述物質(zhì)比例混合后制粒。枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilissubsp)CGMCC7926泡盛曲霉(Aspergillusawamori)CGMCC3.6484實(shí)施例3產(chǎn)品效果實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)地的選擇與試驗(yàn)設(shè)計(jì)：試驗(yàn)于2015年4月27日—2016年8月30日在天津靜?？h鹽堿地進(jìn)行。試驗(yàn)田達(dá)到田種植玉米5畝，分別在種植時(shí)使用本發(fā)明產(chǎn)品每畝0.4公斤，出苗1個(gè)月左右通過鋤地松土方式使用發(fā)明產(chǎn)品0.4公斤，對照組使用市售有機(jī)肥料。發(fā)明產(chǎn)品使用玉米地玉米產(chǎn)量達(dá)到500公斤，試驗(yàn)組發(fā)苗期病蟲害明顯減少，殺蟲藥物是對照組的40％；對照組達(dá)到260公斤；該地塊在第2年種植春小麥，春小麥產(chǎn)量達(dá)到了420公斤，比對照組單產(chǎn)提高了60％。且試驗(yàn)田土壤結(jié)構(gòu)良好，無板結(jié)。當(dāng)前第1頁1 2 3