專利名稱：用于熒光共焦顯微鏡檢查的方法和設(shè)備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及光學(xué)顯微鏡檢查領(lǐng)域，具體涉及共焦熒光顯微鏡檢查領(lǐng)域以及通過(guò)共焦熒光顯微鏡檢查獲得熒光標(biāo)記的目標(biāo)的圖像的方法。
背景技術(shù)：
通常，根據(jù)如何俘獲或處理熒光圖像信息，可將大多數(shù)熒光顯微鏡歸類為下列普通類別的其中之一寬視場(chǎng)顯微鏡在這些顯微鏡中，利用如在任何標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡中的常規(guī)寬視場(chǎng)策略并且收集熒光發(fā)射使目標(biāo)成像。通常，熒光污染或標(biāo)記的樣本利用適當(dāng)波長(zhǎng)的激發(fā)光來(lái)照亮，并且發(fā)射光用來(lái)獲得圖像；光學(xué)濾光片和/或分色鏡用來(lái)分離激發(fā)光和發(fā)射光。
結(jié)構(gòu)光顯微鏡這是對(duì)沿顯微鏡的光軸提供增強(qiáng)的空間分辨率的顯微鏡的修改。該特征考慮了成像標(biāo)本的光學(xué)切片。結(jié)構(gòu)光照明裝置的主要部件是一維光柵。光柵圖案被系統(tǒng)地投射到標(biāo)本上并且被移進(jìn)越過(guò)樣本的物鏡的焦平面；發(fā)射光被收集并被編輯以此產(chǎn)生圖像。在對(duì)光柵上不同位置俘獲的標(biāo)本的三幅圖像進(jìn)行處理之后，生成一幅這樣的“結(jié)構(gòu)光”圖像。
通常，投射的光柵圖像為物鏡焦平面上的物提供了較強(qiáng)的強(qiáng)度的空間調(diào)制，同時(shí)焦平面上方和下方面積上的強(qiáng)度調(diào)制被明顯減少。當(dāng)發(fā)射輻射被收集時(shí)，圖像處理算法消除來(lái)自如由光柵定義的原像平面上方或下方的較弱信號(hào)。由此生成的圖像因此無(wú)任何雜散光或離焦數(shù)據(jù)。另外，因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)光照明裝置利用基質(zhì)寬視場(chǎng)顯微鏡的照明光源，該顯微鏡的所有熒光能力被保持。
真實(shí)共焦顯微鏡共焦顯微鏡使用專用的光學(xué)系統(tǒng)來(lái)成像。在最簡(jiǎn)單的系統(tǒng)中，在相關(guān)熒光團(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)下工作的激光器被聚焦至樣本上的一點(diǎn)；同時(shí)，來(lái)自這個(gè)照明點(diǎn)的熒光發(fā)射在小面積檢測(cè)器上成像。自樣本的所有其他面積發(fā)射的任何光被位于檢測(cè)器前方的較小的針孔抑制，所述檢測(cè)器傳輸源自照明斑點(diǎn)的光。激發(fā)斑點(diǎn)和檢測(cè)器以光柵圖掃過(guò)樣本以此形成完整的圖像。存在有各種不同策略用來(lái)改進(jìn)和優(yōu)化本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的速度和透光率。
行-共焦顯微鏡這是對(duì)共焦顯微鏡的修改，其中熒光激發(fā)源是激光束；然而，射束在樣本上聚焦成一窄行而不是單個(gè)點(diǎn)。熒光發(fā)射接著通過(guò)充當(dāng)空間濾光片的狹縫在光學(xué)檢測(cè)器上成像。自樣本的任何其他面積發(fā)射的光保持離焦并且結(jié)果被狹縫所阻擋。為了形成二維圖像，所述行掃過(guò)樣本同時(shí)讀取行照相機(jī)。該系統(tǒng)可以通過(guò)利用適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)布置被擴(kuò)展成可同時(shí)使用若干激光器和若干照相機(jī)。
然而，這樣的行共焦顯微鏡通常是復(fù)雜且昂貴的，并且因此對(duì)于許多應(yīng)用來(lái)說(shuō)是不切合實(shí)際的。存在有對(duì)組合了共焦和行共焦顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)與其他系統(tǒng)的簡(jiǎn)單化及經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的顯微鏡的實(shí)際需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提出了一種新的改進(jìn)的共焦熒光顯微鏡。相對(duì)于現(xiàn)有的顯微鏡共焦成像器的實(shí)際應(yīng)用，新的顯微鏡具有明顯的優(yōu)勢(shì)。和以前的共焦成像器一樣，相對(duì)于常規(guī)寬視場(chǎng)和共焦熒光成像器，本發(fā)明具有若干優(yōu)勢(shì)。然而，本發(fā)明還在成本和復(fù)雜性方面解決了共焦技術(shù)的缺點(diǎn)，并且由于部件的簡(jiǎn)化以及消除了對(duì)比如物理空間濾光片(如針孔或狹縫)的需求而在這兩方面提供了明顯的節(jié)省。該系統(tǒng)還可與包括薄底96,386和1536-孔板、顯微鏡載玻片的許多微孔板相兼容，并且可支持各種熒光染料。
該系統(tǒng)包含至少一個(gè)或多個(gè)(優(yōu)選地為兩個(gè)或多個(gè))光源(優(yōu)選地為激光器)，所述光源將在與相應(yīng)的熒光或熒光污染或標(biāo)記的目標(biāo)對(duì)準(zhǔn)的不同激發(fā)波長(zhǎng)下工作。利用帶通光學(xué)濾光片過(guò)濾來(lái)自每個(gè)目標(biāo)的熒光發(fā)射，并且通過(guò)至少一個(gè)成像裝置(優(yōu)選地為兩個(gè)或多個(gè)成像裝置)收集發(fā)射數(shù)據(jù)。與上述現(xiàn)有的寬視場(chǎng)熒光顯微鏡相比該系統(tǒng)提供了某些截然不同的優(yōu)點(diǎn)，包括改進(jìn)的圖像質(zhì)量和增加的敏感度。更具體地說(shuō)，在普通的熒光顯微鏡中，自焦平面上方和下方的材料的熒光發(fā)射導(dǎo)致不想要的背景熒光。常規(guī)寬視場(chǎng)熒光顯微鏡未提供對(duì)這種背景的有效抑制，并且因此，這樣的顯微鏡將由加在較大背景信號(hào)上并被這個(gè)背景信號(hào)影響的目標(biāo)多孔材料產(chǎn)生相對(duì)較小的信號(hào)。例如，當(dāng)帶有生物樣本的微量滴定板通過(guò)寬視場(chǎng)熒光顯微鏡成像時(shí)，來(lái)自孔板的清潔的塑料底部的背景和多孔材料上方的介質(zhì)將通?；旧洗笥诙嗫撞牧系男盘?hào)。這種圖像的分析按照常規(guī)通過(guò)估計(jì)并且接著減去這種背景來(lái)實(shí)現(xiàn)。
然而，這種估計(jì)引入了下列問(wèn)題1、所關(guān)注信號(hào)中的統(tǒng)計(jì)噪聲作為背景的結(jié)果被增加。這降低了識(shí)別所關(guān)注特征的能力，因?yàn)檫@種背景熒光通常是形成圖像中＞90％的噪聲的原因并且必須通過(guò)估計(jì)背景噪聲的影響進(jìn)行校正。另外，因?yàn)檫@種估計(jì)涉及某些假定，這使得分析和解釋變得復(fù)雜并且它降低了系統(tǒng)的敏感度。
2、估計(jì)和去掉背景在計(jì)算上是昂貴的并且花費(fèi)了大量的時(shí)間。通常，在這樣的系統(tǒng)中～50％的分析時(shí)間專用于估計(jì)背景。對(duì)于其中背景具有不規(guī)則和高對(duì)比結(jié)構(gòu)的情形(如其中高熒光顆粒漂浮在介質(zhì)中的化驗(yàn))，圖像的顯著部分實(shí)際上可能是難以分析的，因?yàn)椴荒軜?gòu)建背景的精確模式。
共焦成像顯微鏡的使用將通常相對(duì)于來(lái)自焦平面的熒光信號(hào)將這種背景熒光抑制到原來(lái)的1/20或/1/100，從而允許獲得更精確的圖像。然而，共焦顯微鏡常常是昂貴的并且其操作和使用是復(fù)雜的。本發(fā)明系統(tǒng)通過(guò)引入簡(jiǎn)化的檢測(cè)子系統(tǒng)降低了系統(tǒng)的成本和復(fù)雜性，所述簡(jiǎn)化的檢測(cè)子系統(tǒng)包含能夠隨機(jī)訪問(wèn)用于檢測(cè)熒光發(fā)射的一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器。檢測(cè)器優(yōu)選地為低成本的CMOS光學(xué)傳感器，所述CMOS光學(xué)傳感器由于可以忽略的暗電流而使影響最小，即使當(dāng)傳感器是在室溫下工作的，然而還可以使用其他基于像素的檢測(cè)器(如適當(dāng)?shù)腃CD照相機(jī))。適當(dāng)?shù)臋z測(cè)裝置在Orly Yadid-Pecht和Ralph Etienne-Cummings(編輯者)、Springer(出版者)的第一版(2004年5月31日)的CMOS ImagersFrom Phototransduction to ImageProcessing進(jìn)行了描述，其內(nèi)容通過(guò)引用而被結(jié)合在此。
在優(yōu)選實(shí)施例中，檢測(cè)器還結(jié)合卷簾式快門單元來(lái)限制用于光檢測(cè)的檢測(cè)器的瞬時(shí)面積。這個(gè)面積的尺寸(如行共焦成像情形下的卷簾式快門的寬度)將通常小于或等于光共軛至檢測(cè)器的照明面積。
另外，系統(tǒng)使用至少一個(gè)以及優(yōu)選地為兩個(gè)或多個(gè)光源來(lái)提供激發(fā)光。事實(shí)上，可以使用具有或不具有濾光片的、能夠發(fā)射光的任何光源(如燈)。這種光源對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將是易于理解的。優(yōu)選的光源包括用于這種照明的更明亮的窄帶光源，更優(yōu)選地為激光器。
在優(yōu)選實(shí)施例中，激發(fā)光以行的形式而不是單個(gè)點(diǎn)的形式在目標(biāo)上聚焦，并且所述行掃過(guò)目標(biāo)的表面。如前面所討論的，行共焦成像器在本領(lǐng)域中是已知的，并且優(yōu)選的系統(tǒng)在沒(méi)有復(fù)雜性和高成本的情形下賦予了常規(guī)行系統(tǒng)的好處。成像目標(biāo)上的行形狀的照明面積可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何單元來(lái)產(chǎn)生，但是優(yōu)選地通過(guò)鮑威爾透鏡來(lái)產(chǎn)生。
在另外的優(yōu)選實(shí)施例中，行形成單元與CMOS檢測(cè)器配對(duì)，所述CMOS檢測(cè)器在卷簾式快門模式下工作以此產(chǎn)生低成本、簡(jiǎn)單并易于使用的行共焦掃描儀。
檢測(cè)器還可結(jié)合窄帶的激光線專用的濾光片，其可用來(lái)抑制激發(fā)光。這些類型的濾光片可以與具有被調(diào)節(jié)至熒光團(tuán)的發(fā)射光譜的光學(xué)帶寬的其他濾光片一起組合使用。一種優(yōu)選的組合是使用與Schott Veril線性可變?yōu)V光片串聯(lián)的Rugate陷波濾光片。通過(guò)適當(dāng)控制線性濾光片在光學(xué)檢測(cè)器前面的位置，能夠利用相同的激發(fā)激光器使若干熒光團(tuán)成像。
同樣地，靈活性允許可在多種模式下工作的混合顯微鏡的構(gòu)造。在這種混合裝置的優(yōu)選實(shí)施例中，在一種工作模式下，混合顯微鏡是以本發(fā)明的方式工作的行共焦顯微鏡；在第二種工作模式下，當(dāng)照明系統(tǒng)被調(diào)節(jié)成可照亮顯微鏡的整個(gè)視場(chǎng)時(shí)，混合顯微鏡按照標(biāo)準(zhǔn)的寬視場(chǎng)顯微鏡工作。


圖1示出了本發(fā)明的優(yōu)選設(shè)備的示意圖。
圖2示出了本發(fā)明的多波長(zhǎng)設(shè)備的示意圖。
具體實(shí)施例方式
圖1示意性示出了前面描述的本發(fā)明的共焦成像系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括如前面描述的用來(lái)激發(fā)熒光(或熒光污染或標(biāo)記的)目標(biāo)的一個(gè)或多個(gè)光源和用來(lái)檢測(cè)熒光發(fā)射的一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器。該系統(tǒng)可包含通常將在共焦和寬視場(chǎng)顯微鏡中發(fā)現(xiàn)的其他部件。下面的部分詳細(xì)描述了這些和其他的部件。對(duì)于許多部件來(lái)說(shuō)，存在有多個(gè)潛在的實(shí)施例。一般優(yōu)選實(shí)施例取決于目標(biāo)應(yīng)用。對(duì)于該文件來(lái)說(shuō)，優(yōu)選的目標(biāo)應(yīng)用是具有使各種熒光團(tuán)成像的能力的高透光率細(xì)胞篩選。
部件的描述激光光源雖然如前面所描述的光源可以是能夠?qū)⒓ぐl(fā)波長(zhǎng)的光傳遞至目標(biāo)的任何光源，但是優(yōu)選地是將一個(gè)或多個(gè)激發(fā)激光器組合進(jìn)系統(tǒng)。在優(yōu)選實(shí)施例中，存在有覆蓋了從近IR到近UV的光譜的4+激光器。來(lái)自這些激光器的每一個(gè)的光可以通過(guò)傳遞作為適當(dāng)直徑、方向和準(zhǔn)直度的自由空間射束的光或者經(jīng)由光纖光傳遞系統(tǒng)耦合至光學(xué)系統(tǒng)的其余部分。在另外的優(yōu)選實(shí)施例中，光作為具有特定射束直徑的高度準(zhǔn)直射束(標(biāo)準(zhǔn)方法可周來(lái)實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn))或經(jīng)由光纖(理論上使用單模偏振保留光纖)來(lái)傳遞。在優(yōu)選實(shí)施例中，每個(gè)激發(fā)激光器在TEM100模式下工作，其中M2＜1.2，RMS噪聲為1Hz至10MHz＜0.5％并且偏振處于已定義的狀態(tài)?？墒褂萌魏螌?shí)際數(shù)量的激光器。
激光器選擇模塊激發(fā)激光器的光被傳遞至激光器選擇模塊(2)。該模塊選擇來(lái)自其中一個(gè)激光器的光并且將其引導(dǎo)進(jìn)射束成形模塊(3)。來(lái)自其他激光器的光被阻擋。激光器選擇模塊的可能的實(shí)施例包括但不限于1、針對(duì)每個(gè)激光器的色散棱鏡加光學(xué)快門。所期望的激光器通過(guò)關(guān)閉除一個(gè)以外的所有快門來(lái)選擇。
2、針對(duì)每個(gè)激光器的反射光柵加光學(xué)快門。所期望的激光器通過(guò)關(guān)閉除一個(gè)以外的所有快門來(lái)選擇。
3、針對(duì)每個(gè)激光器的分色鏡疊層加光學(xué)快門。所期望的激光器通過(guò)關(guān)閉除一個(gè)以外的所有快門來(lái)選擇。
4、光纖開關(guān)。
5、基于旋轉(zhuǎn)反射鏡的射束偏轉(zhuǎn)器。旋轉(zhuǎn)反射鏡可用來(lái)將來(lái)自選擇的激光器的光引導(dǎo)至射束成形模塊。在這種情形下，所有激光束被(i)準(zhǔn)直到垂直于反射鏡的旋轉(zhuǎn)軸的同一光學(xué)平面上以及(ii)指向反射鏡至位于反射鏡的旋轉(zhuǎn)軸上的點(diǎn)。通過(guò)利用機(jī)械執(zhí)行元件(如電流計(jì))調(diào)節(jié)反射鏡的旋轉(zhuǎn)角度使所期望的激光器朝向射束成形模塊。這是優(yōu)選實(shí)施例，因?yàn)樗?jiǎn)單、低成本并且在激光器的輸出射束方向上提供了動(dòng)態(tài)校正漂移的能力。
射束成形模塊激發(fā)激光器的光通過(guò)射束成形器(3)被優(yōu)選地、適當(dāng)?shù)爻尚?。射束成形器的可能的?shí)施例包括但不限于激光束擴(kuò)展器。在優(yōu)選實(shí)施例中，使用了射束擴(kuò)展器并且針對(duì)色差校正它的光學(xué)元件以便在激光器之間切換時(shí)對(duì)射束擴(kuò)展器的焦距的調(diào)節(jié)最小。激光束的直徑優(yōu)先被擴(kuò)展成等于物鏡(7)的后光瞳的直徑。在備選的實(shí)施例中，所使用的射束擴(kuò)展器類型將取決于特定應(yīng)用并且可包括變形棱鏡，所述變形棱鏡后面跟有激光束擴(kuò)展器而沒(méi)有任何射束成形器，以及包括基于無(wú)色差反射鏡的射束擴(kuò)展器。
行形成模塊對(duì)于行共焦模式下的操作，激發(fā)激光器的光穿過(guò)行形成元件(4)，所述行形成元件(4)將激光的準(zhǔn)直射束轉(zhuǎn)換成只在一個(gè)方向上發(fā)散的聚焦光束。輸出射束的全擴(kuò)張角Δθ由下式給出Δθ＝2*arctan(D/(2*f)) (1)其中f是物鏡(7)的焦距，并且D是在垂直于圖1平面的方向上的目標(biāo)(8)上成像面積的線性維數(shù)。
行形成元件的優(yōu)選實(shí)施例包括但不限于鮑威爾透鏡(如美國(guó)專利4,826,299描述的，其內(nèi)容通過(guò)引用而被結(jié)合在此)。
第二錐筒表面的形狀優(yōu)選地被指定為可實(shí)現(xiàn)超過(guò)范圍Δθ的10％以內(nèi)的均勻照明和穿過(guò)物鏡(7)的大于80％的激光傳輸。
還可使用備選的行形成元件，如柱面透鏡、衍射光柵和全息元件。
掃描模塊掃描模塊提供了物鏡的焦平面上越過(guò)顯微鏡視場(chǎng)的激發(fā)光的掃描。
激發(fā)激光器的光優(yōu)選地被反射鏡(5)反射，所述反射鏡(5)可以繞圖1平面中的軸傾斜。傾斜角度由執(zhí)行元件(6)來(lái)設(shè)置。反射鏡(5)可選地包括集中于或軸向偏離物鏡(7)背面的窄反射鏡。這是優(yōu)選的實(shí)施例并且具有如下的優(yōu)選的幾何形狀和反射特性寬度～物鏡的后孔徑直徑的1/10倍。
長(zhǎng)度～物鏡的后孔徑直徑的1.6倍。
光學(xué)平面。
高度反射300nm至800nm。
反射鏡的這些特定性質(zhì)提供了若干關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)(1)使得能夠?qū)畏瓷溏R用于所有激發(fā)波長(zhǎng)。相對(duì)于多波段分色鏡，這大大地增加了使系統(tǒng)適應(yīng)各種激光器的靈活性。
(2)在其最寬的點(diǎn)處，它利用了物鏡的后孔徑。這導(dǎo)致衍射的最低可達(dá)到的水平，其又產(chǎn)生樣本處激光照亮的行的最窄可達(dá)寬度。
在利用簡(jiǎn)單的一個(gè)傾斜反射鏡策略的情況下可以達(dá)到的視場(chǎng)盡可能得大。通過(guò)使用兩個(gè)反射鏡，可同時(shí)改變射束方向并平移射束。
該系統(tǒng)還可以和可選的分色鏡一起使用。分射鏡的設(shè)計(jì)將使得來(lái)自所有激發(fā)激光器的輻射被有效地反射，并且使得與熒光發(fā)射相對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光被有效傳輸?；赗ugate技術(shù)的多波段反射鏡是優(yōu)選實(shí)施例。
掃描執(zhí)行元件執(zhí)行元件(6)的實(shí)施例包括但不限于具有用于檢測(cè)角位置的積分傳感器的電流計(jì)。電流計(jì)通過(guò)適當(dāng)調(diào)諧的伺服系統(tǒng)來(lái)驅(qū)動(dòng)。軸承系統(tǒng)以彎曲為基礎(chǔ)以此有效地消除磨損和軸承中的摩擦問(wèn)題。這是優(yōu)選的實(shí)施例。
顯微鏡物鏡激發(fā)激光器的光優(yōu)選地穿過(guò)物鏡(7)。在這個(gè)實(shí)施例中，物鏡·針對(duì)所期望的視場(chǎng)上的幾何和色差而被高度校正。
·具有良好像場(chǎng)平直度。
·傳輸自近UV至近IR的光。
·具有最高的實(shí)際數(shù)值孔徑以便于實(shí)現(xiàn)最好的實(shí)際光學(xué)分辨率以及以便于收集與實(shí)際同樣多的熒光發(fā)射。
·包括提供對(duì)由樣本支架(8)的光學(xué)厚度隨樣本的變化引入的球面像差的校正。
·具有至少1.2mm的工作距離以便于能夠在沒(méi)有使物鏡與樣本支架(8)接觸的風(fēng)險(xiǎn)的情況下通過(guò)多至1.5mm厚度的樣本支架(8)使樣本成像。
優(yōu)選實(shí)施例包括具有球面像差環(huán)的Plan-Fluor物鏡。對(duì)于優(yōu)選實(shí)施例，物鏡具有范圍為15X至30X的放大率和范圍為6.7mm至13.3mm的焦距。
在優(yōu)選操作中，激發(fā)激光器的光穿過(guò)支持樣本的固體、透明光學(xué)材料(8)。這個(gè)支持材料的厚度、曲率和光學(xué)性質(zhì)可以隨樣本變化。激發(fā)激光器的光入射到樣本(9)上。當(dāng)系統(tǒng)被適當(dāng)聚焦時(shí)，樣本被激光線照亮。樣本中的熒光材料發(fā)射熒光，作為結(jié)果被光線照亮。在優(yōu)選實(shí)施例中，照明光線上的距離是均勻的，且將超過(guò)0.8mm。
熒光穿過(guò)支架(8)并且被物鏡(7)收集。
根據(jù)反射鏡的實(shí)施例，熒光穿過(guò)或掠過(guò)反射鏡(5)。當(dāng)反射鏡(5)是二向色時(shí)，激光照明的有效抑制通過(guò)這個(gè)反射鏡來(lái)促成。這種抑制將減少光學(xué)濾光片(11)和(14)的阻擋要求。
熒光穿過(guò)可選的分色鏡(10)。該分色鏡用來(lái)將來(lái)自自動(dòng)聚焦系統(tǒng)(圖中未示出)的射束插入光程。
激光線抑制濾光片熒光穿過(guò)有效地傳輸熒光并阻擋激發(fā)激光的波長(zhǎng)的適當(dāng)濾光片(11)。濾光片可選地可繞垂直于圖1平面的軸傾斜以使自濾光片的反射位于照相機(jī)(16)的視場(chǎng)外。
如果使用多個(gè)濾光片，執(zhí)行元件(12)可用于濾光片改變。執(zhí)行元件(12)的優(yōu)選實(shí)施例包括但不限于·高速線性載玻片。當(dāng)濾光片(11)是3至6個(gè)濾光片的其中之一時(shí)，這是優(yōu)選實(shí)施例。
·雙態(tài)高速(＜25msec)執(zhí)行元件。當(dāng)濾光片(11)是兩個(gè)濾光片中之一時(shí)，這是優(yōu)選實(shí)施例。
·無(wú)執(zhí)行元件。這個(gè)選項(xiàng)適用于其中存在有單個(gè)濾光片(11)的情形或者當(dāng)所有光學(xué)濾光通過(guò)發(fā)射濾光片(14)來(lái)實(shí)施時(shí)。
濾光片(11)的優(yōu)選實(shí)施例包括但不限于Rugate陷波濾光片。可以將多個(gè)Rugate濾光片安裝進(jìn)系統(tǒng)。這些濾光片的每一個(gè)可具有與激發(fā)激光的波長(zhǎng)相對(duì)應(yīng)的多個(gè)狹窄并高度反射的波段。在安裝進(jìn)系統(tǒng)的濾光片當(dāng)中，存在有至少一個(gè)濾光片，所述的至少一個(gè)濾光片將有效地反射被安裝進(jìn)系統(tǒng)的每一個(gè)激發(fā)激光器發(fā)射的光。其他優(yōu)選實(shí)施例包括·單波段Rugate濾光片組·多波長(zhǎng)Rugate陷波濾光片。若干狹窄并高度反射的波段與安裝到系統(tǒng)上的所有激發(fā)激光的波長(zhǎng)相對(duì)應(yīng)。
·不同類型濾光片的組合。這樣的組合對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是已知的。
·無(wú)濾光片。當(dāng)所有光學(xué)濾光通過(guò)濾光片(14)來(lái)實(shí)施時(shí)，這個(gè)選項(xiàng)是可適用的。
在優(yōu)選實(shí)施例中，濾光片(11)將不會(huì)使熒光發(fā)射暈光。
筒內(nèi)透鏡熒光穿過(guò)圖像形成透鏡(13)。
在優(yōu)選實(shí)施例中·透鏡的幾何變形在由照相機(jī)(16)成像的區(qū)域上是非常低的(＜2％)。
·針對(duì)所有其他幾何和色差校正透鏡。
·高質(zhì)量的中距遠(yuǎn)攝照相透鏡將可能是適合的。
發(fā)射濾光片熒光穿過(guò)由可選的執(zhí)行元件(15)控制的適當(dāng)光學(xué)濾光片(14)。該濾光片有效地傳輸熒光并衰減其他波長(zhǎng)的光。
濾光片(14)的潛在實(shí)施例包括但不限于·線性可變?yōu)V光片，如Schott Veril濾光片。恒定光學(xué)帶通的行的取向平行于行形狀的照明面積。這是優(yōu)選的實(shí)施例。該濾光片可以與移動(dòng)的激發(fā)射束同步移動(dòng)以此在圖像采集期間提供恒定的光學(xué)帶寬。
·標(biāo)準(zhǔn)的、染料專用的熒光濾光片。
·無(wú)濾光片。當(dāng)所有光學(xué)濾光通過(guò)激光線抑制濾光片(11)來(lái)實(shí)施時(shí)，這個(gè)選項(xiàng)是可適用的。
在優(yōu)選實(shí)施例中，濾光片(14)將不會(huì)使熒光發(fā)射暈光。
光學(xué)檢測(cè)器如前所述，優(yōu)選的檢測(cè)器包括能夠檢測(cè)熒光并生成圖像的CMOS和CCD檢測(cè)器。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施例中，檢測(cè)器能夠獨(dú)立重置和讀出像素(隨機(jī)訪問(wèn)特征)。
在優(yōu)選實(shí)施例中，熒光發(fā)射在具有卷簾式快門(還稱為焦平面快門)的CMOS檢測(cè)器(16)上聚焦。對(duì)于這種類型照相機(jī)操作的描述參考Eastman Kodak公司出版的“Application Note MTD/PS-0259Shutter Operations for CCD and CMOS Image Sensors”，其內(nèi)容通過(guò)引用而被結(jié)合在此。
在行掃描模式下，激光被聚焦到取向平行于若干行CMOS檢測(cè)器的均勻照明的行上。在使該行精確地以于CMOS照相機(jī)的卷簾式快門上成像的樣本的面積為中心的(上述)位置上存在有控制機(jī)構(gòu)。該行隨著卷簾式快門移過(guò)照相機(jī)而移動(dòng)。這樣，由照明行生成的熒光發(fā)射通過(guò)傳感器來(lái)收集。
本發(fā)明的成像器基本上在這兩種模式下工作，即如下所述的順序的和同時(shí)多波長(zhǎng)成像。
優(yōu)選系統(tǒng)的操作在一般的操作中，包括一個(gè)或多個(gè)熒光標(biāo)記的一個(gè)或多個(gè)目標(biāo)將通過(guò)如下的成像設(shè)備來(lái)成像。
1、使來(lái)自具有同熒光標(biāo)記的吸收帶至少部分重疊的發(fā)射光譜的一個(gè)或多個(gè)光源的電磁輻射指向目標(biāo)，并且使用射束成形光學(xué)系統(tǒng)控制被攝體上照明范圍的形狀，其可具有點(diǎn)、線、圓和矩形的形狀。該目標(biāo)通過(guò)照明光學(xué)系統(tǒng)來(lái)照亮以此形成覆蓋整個(gè)成像面積或其中一部分的照明范圍。
2、接著利用可以與照明系統(tǒng)相同或不同的光收集系統(tǒng)從位于熒光范圍內(nèi)的熒光標(biāo)記上收集熒光發(fā)射，并且利用長(zhǎng)通、帶通或線性可變光學(xué)濾光片過(guò)濾熒光發(fā)射。
3、能夠獨(dú)立重置和讀出像素(隨機(jī)訪問(wèn)特征)的一個(gè)或多個(gè)二維的基于像素的光學(xué)接收器(檢測(cè)器)被置于光學(xué)共軛至成像面積的位置，并且光學(xué)檢測(cè)器內(nèi)檢測(cè)面積的形狀和尺寸被調(diào)節(jié)至等于或小于光學(xué)共軛的照明范圍的圖像。被傳遞至光學(xué)接收器的檢測(cè)面積的熒光發(fā)射通過(guò)讀取來(lái)自位于檢測(cè)面積內(nèi)像素的信號(hào)來(lái)檢測(cè)。位于檢測(cè)器的檢測(cè)面積之外的光學(xué)檢測(cè)器的像素被重置以便于(i)抑制照明面積之外和平面熒光之外接收的光學(xué)信號(hào)(如雜散光)；以及(ii)減少在總圖像采集時(shí)間期間另外將積累的內(nèi)在的檢測(cè)器噪聲(如熱噪聲)。
4、利用射束掃描系統(tǒng)在被攝體的成像面積內(nèi)掃描照明范圍，并且移動(dòng)光學(xué)接收器的檢測(cè)面積以此利用對(duì)光學(xué)檢測(cè)器的像素的隨機(jī)訪問(wèn)來(lái)維持同照明范圍的光學(xué)共軛。
5、被攝體的成像面積的圖像由越過(guò)成像面積的照明范圍的掃描期間獲得的來(lái)自接收器的檢測(cè)面積的信號(hào)(子圖像)構(gòu)成，并且針對(duì)多個(gè)光源的順序圖像采集重復(fù)前述的步驟。
順序成像模式下成像器的操作在順序模式下，利用一個(gè)熒光團(tuán)在時(shí)間通路上順序采集熒光圖像。
在順序模式下，本發(fā)明的成像系統(tǒng)將如下操作利用X-Y載物臺(tái)將目標(biāo)(9)移進(jìn)成像位置。來(lái)自期望的光源的激發(fā)輻射接著在目標(biāo)上聚焦以此產(chǎn)生熒光發(fā)射。
接著針對(duì)最佳焦距手工和/或利用自動(dòng)聚焦系統(tǒng)調(diào)節(jié)物鏡(7)的位置。
檢測(cè)器(16)被驅(qū)動(dòng)以此起動(dòng)曝光。關(guān)鍵采集參數(shù)是卷簾式快門的寬度和卷簾式快門“移”過(guò)照相機(jī)的速度。
當(dāng)卷簾式快門移過(guò)照相機(jī)(16)時(shí)，反射鏡(5)的傾斜被調(diào)節(jié)以使激發(fā)激光線的位置保持在卷簾式快門面積的中部。如果濾光片(14)是線性可變?yōu)V光片，則還必須在曝光期間改變這個(gè)濾光片的位置以此保持與照相機(jī)的卷簾式快門同步的濾光片的位置。
同時(shí)多波長(zhǎng)成像模式下成像器的操作在同時(shí)多波長(zhǎng)成像模式下，成像系統(tǒng)被配置成可同時(shí)俘獲多個(gè)熒光圖像。
設(shè)計(jì)同時(shí)多波長(zhǎng)共焦顯微鏡的其中一個(gè)主要問(wèn)題是顯微鏡物鏡的色差校正的有限范圍。其意味著1、對(duì)于照明光程一物鏡的色差校正的光譜范圍內(nèi)的激發(fā)行的照明面積(點(diǎn)或線)將是對(duì)焦的，并且位于校正的光譜范圍之外的激發(fā)波長(zhǎng)的照明面積(通常在UV范圍內(nèi))將是散焦的。
2、對(duì)于發(fā)射光程一在校正的范圍內(nèi)發(fā)射光的熒光目標(biāo)的圖像將是對(duì)焦的，但是遠(yuǎn)離校正的光譜范圍的發(fā)射的熒光目標(biāo)圖像將是散焦的。
這些問(wèn)題是本領(lǐng)域公知的。
為了利用多個(gè)激光器或其它光源實(shí)現(xiàn)同時(shí)成像，建議將所述波長(zhǎng)進(jìn)行分組。這些子組被選擇成以使針對(duì)每個(gè)子組的激發(fā)波長(zhǎng)的顯微鏡物鏡的色差將在可接受的范圍內(nèi)。
在優(yōu)選實(shí)施例中，系統(tǒng)要求在670、638、532、488、405和374nm的激發(fā)波長(zhǎng)下熒光成像。大約300nm(從670nm至357nm)的總波長(zhǎng)范圍比典型的顯微鏡物鏡的校正的光譜范圍寬得多，并且因此，在所有這些波長(zhǎng)下同時(shí)“對(duì)焦”成像是不可能的。然而，這些波長(zhǎng)可以分組為若干子組，比如-紅色組(670和638nm，32nm范圍)-藍(lán)色-綠色組(532和488nm，44nm范圍)-UV組(405和375nm，30nm)每個(gè)子組內(nèi)激發(fā)波長(zhǎng)的光譜范圍更窄(＜40nm)，并且在子組波長(zhǎng)下同時(shí)“對(duì)焦”成像變?yōu)榭赡堋?br> 在這種系統(tǒng)中光學(xué)檢測(cè)器的數(shù)目應(yīng)當(dāng)?shù)扔谧咏M中的波長(zhǎng)數(shù)目。
圖2示出了演示這種利用三個(gè)子組在兩個(gè)波長(zhǎng)下同時(shí)成像方法的系統(tǒng)的光學(xué)配置。
該系統(tǒng)利用六個(gè)激光器激發(fā)光源，所述的六個(gè)激發(fā)光源被分成每?jī)蓚€(gè)波長(zhǎng)的三個(gè)子組。每個(gè)子組中激光器的激光束利用下列方法之一進(jìn)行光學(xué)合并-偏振射束組合器，-二向色光束組合器-光纖光束組合器該系統(tǒng)操作如下1、基于激光選擇反射鏡的光學(xué)開關(guān)或任何其它適當(dāng)?shù)募夹g(shù)將來(lái)自選擇的子組的組合光束耦合進(jìn)光學(xué)系統(tǒng)。
2、組合光束穿過(guò)射束成形光學(xué)部件(射束擴(kuò)展器和鮑威爾透鏡)，自掃描反射鏡被反射，穿過(guò)顯微鏡物鏡并且在標(biāo)本上聚焦。
3、通過(guò)移動(dòng)掃描反射鏡使激發(fā)光掃過(guò)標(biāo)本。
4、通過(guò)顯微鏡物鏡收集激發(fā)的熒光發(fā)射。
5、熒光目標(biāo)的圖像通過(guò)筒內(nèi)透鏡形成。
6、通過(guò)分色鏡將熒光發(fā)射分成兩個(gè)通道。
7、每個(gè)通道的熒光發(fā)射穿過(guò)發(fā)射濾光片。可以在此添加激光線抑制濾光片以便于改進(jìn)信噪比。
8、每個(gè)通道的熒光圖像通過(guò)光學(xué)檢測(cè)器(如CMOS照相機(jī))來(lái)俘獲。
9、兩個(gè)檢測(cè)器均與掃描反射鏡同步。
10、每個(gè)檢測(cè)器以專利申請(qǐng)的其它部分(“卷簾式快門”模式)描述的方式采集圖像。
11、針對(duì)每個(gè)子組重復(fù)相同的過(guò)程。
12、在每個(gè)子組成像之前，必須實(shí)施系統(tǒng)的下列調(diào)節(jié)a、應(yīng)當(dāng)針對(duì)子組的中心波長(zhǎng)調(diào)節(jié)射束成形光學(xué)部件。
b、應(yīng)當(dāng)針對(duì)子組的中心波長(zhǎng)調(diào)節(jié)顯微鏡物鏡焦點(diǎn)位置。
c、應(yīng)當(dāng)將適當(dāng)?shù)姆稚R插入光程中。
d、應(yīng)當(dāng)將適當(dāng)?shù)陌l(fā)射濾光片安裝進(jìn)每個(gè)成像通道。
顯然，在沒(méi)有偏離本發(fā)明范圍和精神的情況下，可以進(jìn)行如上文提出的對(duì)本發(fā)明的修改和變更。在這里，僅僅通過(guò)舉例給出了所描述的特定實(shí)施例，并且本發(fā)明僅僅受限于所附權(quán)利要求的限制。
權(quán)利要求
1.一種用于熒光目標(biāo)的共焦熒光顯微鏡檢查掃描的設(shè)備，包含提供激發(fā)輻射的至少一個(gè)光源和檢測(cè)來(lái)自所述熒光目標(biāo)的熒光發(fā)射的至少一個(gè)檢測(cè)器，改進(jìn)包含使所述一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)單元能夠隨機(jī)訪問(wèn)讀取所述熒光發(fā)射。
2.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述至少一個(gè)光源選自下列項(xiàng)組成的組激光器、激光二極管、發(fā)光二極管、燈以及其中的組合。
3.如權(quán)利要求2所述的設(shè)備，其中所述光源包括兩個(gè)或多個(gè)激光器。
4.如權(quán)利要求3所述的設(shè)備，其中所述激光器以不同波長(zhǎng)進(jìn)行發(fā)射。
5.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)單元包括一個(gè)或多個(gè)二維的基于像素的光學(xué)接收器，所述光學(xué)接收器能夠獨(dú)立重置和讀出這樣的像素。
6.如權(quán)利要求5所述的設(shè)備，其中所述一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器包括CMOS檢測(cè)器。
7.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述至少一個(gè)光源包括用來(lái)照亮基本上所有要成像的面積的單元。
8.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述至少一個(gè)光源包括用來(lái)照亮所述目標(biāo)上單個(gè)點(diǎn)的單元并且還包括用來(lái)越過(guò)要成像的面積掃描所述點(diǎn)照明的單元。
9.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述至少一個(gè)光源包括用來(lái)照亮所述目標(biāo)的行部分的行形成單元。
10.如權(quán)利要求9所述的設(shè)備，其中所述行形成單元選自下列項(xiàng)組成的組鮑威爾透鏡、柱面透鏡、衍射光柵、全息元件以及其中的組合。
11.如權(quán)利要求9所述的設(shè)備，其中所述行形成單元在所述目標(biāo)上產(chǎn)生光線，所述光線通過(guò)一個(gè)或多個(gè)射束偏轉(zhuǎn)裝置移過(guò)所述目標(biāo)。
12.如權(quán)利要求2所述的設(shè)備，其中所述輻射來(lái)自一個(gè)以上或多個(gè)光源，并且來(lái)自所述一個(gè)或多個(gè)光源的所述輻射被耦合以通過(guò)光學(xué)選擇裝置提供所述目標(biāo)的照明，所述光學(xué)選擇裝置選自由具有光學(xué)快門的色散棱鏡、具有光學(xué)快門的反射光柵、具有光學(xué)快門的分色鏡、光纖開關(guān)和旋轉(zhuǎn)反射鏡組成的組。
13.如權(quán)利要求11所述的設(shè)備，其中所述射束偏轉(zhuǎn)裝置包括一個(gè)或多個(gè)電流計(jì)。
14.如權(quán)利要求11所述的設(shè)備，其中所述檢測(cè)器是CMOS檢測(cè)器，所述CMOS檢測(cè)器還包含卷簾式快門單元。
15.如權(quán)利要求14所述的設(shè)備，其中所述卷簾式快門具有小于或等于所述目標(biāo)上所述行的圖像的寬度的寬度。
16.如權(quán)利要求15所述的設(shè)備，其中所述卷簾式快門光學(xué)共軛至所述目標(biāo)上的所述行。
17.如權(quán)利要求14所述的設(shè)備，其中所述熒光發(fā)射的讀取與所述照明面積的掃描同步。
18.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述熒光目標(biāo)包括一個(gè)或多個(gè)熒光標(biāo)記。
19.如權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其中所述目標(biāo)位于顯微鏡載玻片上或微量滴定板上。
20.如權(quán)利要求8所述的設(shè)備，還包含集中于物鏡后面的反射鏡，用來(lái)將所述激發(fā)光耦合進(jìn)所述照明系統(tǒng)并且越過(guò)所述目標(biāo)掃描所述照明面積。
21.如權(quán)利要求11所述的設(shè)備，還包含位于所述檢測(cè)器單元前面的一個(gè)或多個(gè)光學(xué)濾光片，其有效地傳輸所述熒光目標(biāo)的所述發(fā)射波長(zhǎng)的光并且反射或衰減所述熒光目標(biāo)的所述激發(fā)波長(zhǎng)的光。
22.如權(quán)利要求21所述的設(shè)備，其中所述一個(gè)或多個(gè)濾光片是線性可變?yōu)V光片。
23.一種通過(guò)利用與熒光目標(biāo)的激發(fā)波長(zhǎng)相對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)的光掃描所述目標(biāo)并且在所述光移過(guò)所述目標(biāo)時(shí)收集熒光發(fā)射數(shù)據(jù)而獲得所述熒光目標(biāo)的圖像的方法，改進(jìn)包含在權(quán)利要求1所述的共焦成像設(shè)備上獲得所述圖像。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述光源包括一個(gè)或多個(gè)激光器。
25.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器單元包括一個(gè)或多個(gè)二維的基于像素的光學(xué)接收器，所述光學(xué)接收器能夠獨(dú)立重置和讀出這樣的像素。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器包括CMOS檢測(cè)器。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中所述CMOS檢測(cè)器還包含卷簾式快門單元。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述卷簾式快門具有小于或等于所述目標(biāo)上所述行的圖像的寬度的寬度。
29.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述卷簾式快門光學(xué)共軛至所述目標(biāo)上的行。
30.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述至少一個(gè)光源包括用來(lái)照亮基本上所有要成像的面積的單元。
31.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述至少一個(gè)光源包括用來(lái)照亮所述目標(biāo)上單個(gè)點(diǎn)的單元，并且還包括用來(lái)越過(guò)要成像的面積掃描所述點(diǎn)照明的單元。
32.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述至少一個(gè)光源包括行形成單元。
33.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述行形成單元選自下列項(xiàng)組成的組鮑威爾透鏡、柱面透鏡、衍射光柵、全息元件以及其中的組合。
34.如權(quán)利要求23所述的方法，還包含位于所述檢測(cè)單元前面的一個(gè)或多個(gè)光學(xué)濾光片，其有效地傳輸所述熒光目標(biāo)的發(fā)射波長(zhǎng)的光并且反射或衰減所述熒光目標(biāo)的所述激發(fā)波長(zhǎng)的光。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)濾光片是線性可變?yōu)V光片。
36.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)濾光片被移動(dòng)以此跟蹤越過(guò)所述目標(biāo)的所述激發(fā)光的移動(dòng)。
37.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述目標(biāo)位于顯微鏡載玻片上或微量滴定板上。
38.一種被攝體的成像方法，所述被攝體包括利用一個(gè)或多個(gè)熒光標(biāo)記所標(biāo)記的一個(gè)或多個(gè)目標(biāo)，所述方法包含下列步驟a.自具有與所述熒光標(biāo)記的吸收帶至少部分重疊的發(fā)射光譜的一個(gè)或多個(gè)光源發(fā)射電磁輻射；b.通過(guò)照明光學(xué)系統(tǒng)照亮所述被攝體，形成覆蓋所述被攝體的整個(gè)成像面積或其中一部分的照明范圍；c.利用可以與所述照明系統(tǒng)相同或不同的光收集系統(tǒng)，從位于所述照明范圍內(nèi)的所述熒光標(biāo)記收集熒光發(fā)射；d.將能夠獨(dú)立重置和讀出像素的一個(gè)或多個(gè)二維的基于像素的檢測(cè)器置于光學(xué)共軛至成像面積的位置；e.將所述光學(xué)檢測(cè)器內(nèi)檢測(cè)面積的形狀和尺寸調(diào)節(jié)至等于或小于光學(xué)共軛的照明范圍的圖像；f.通過(guò)讀取來(lái)自位于所述檢測(cè)面積內(nèi)的像素的信號(hào)，檢測(cè)被傳遞至所述檢測(cè)器的所述檢測(cè)面積的熒光發(fā)射；g.重置位于所述檢測(cè)器的所述檢測(cè)面積之外并且不與所述照明范圍光學(xué)共軛的所述檢測(cè)器的像素；h.利用射束掃描系統(tǒng)在所述被攝體的成像面積內(nèi)掃描所述照明范圍；i.移動(dòng)所述檢測(cè)器的所述檢測(cè)面積，以此利用對(duì)所述光學(xué)檢測(cè)器的像素的隨機(jī)訪問(wèn)來(lái)維持同所述照明范圍的光學(xué)共軛；j.由越過(guò)所述成像面積的所述照明范圍的掃描期間獲得的、來(lái)自所述接收器的檢測(cè)面積的信號(hào)(子圖像)形成所述被攝體的成像面積的圖像；k.針對(duì)多個(gè)光源的順序圖像采集為多個(gè)光源從步驟(a)重復(fù)所述方法。
39.如權(quán)利要求38所述的被攝體成像方法，還包含將射束成形光學(xué)系統(tǒng)用于控制所述被攝體上的照明范圍的形狀，其可具有點(diǎn)、線、圓和矩形形狀。
40.如權(quán)利要求38所述的被攝體成像方法，還包含一個(gè)或多個(gè)熒光標(biāo)記，所述方法包含下列步驟利用長(zhǎng)通、帶通或線性可變光學(xué)濾光片過(guò)濾所述熒光發(fā)射。
41.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述至少一個(gè)光源選自下列項(xiàng)組成的組激光器、激光二極管、發(fā)光二極管、燈以及其中的組合。
42.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)檢測(cè)器單元選自由CMOS檢測(cè)器和CCD檢測(cè)器組成的組。
43.如權(quán)利要求37所述的方法，其中所述目標(biāo)位于顯微鏡載玻片上或微量滴定板上。
全文摘要
本發(fā)明提出了一種新的改進(jìn)的共焦熒光顯微鏡。相對(duì)于現(xiàn)有的顯微鏡共焦成像器的實(shí)際應(yīng)用，新的顯微鏡具有明顯的優(yōu)勢(shì)。和以前的共焦成像器一樣，相對(duì)于常規(guī)寬視場(chǎng)和共焦熒光成像器，本發(fā)明具有若干優(yōu)勢(shì)。然而，本發(fā)明還在成本和復(fù)雜性方面解決了共焦技術(shù)的缺點(diǎn)，并且由于部件的簡(jiǎn)單化以及消除了對(duì)比如針孔或狹縫的空間濾光片的需求而在這兩方面提供了明顯的節(jié)省。
文檔編號(hào)G02B21/00GK101031837SQ200580031498
公開日2007年9月5日 申請(qǐng)日期2005年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月23日
發(fā)明者P·東德斯, C·扎拉特, P·A·福米喬夫 申請(qǐng)人:通用電氣醫(yī)療集團(tuán)尼亞加拉有限公司