專(zhuān)利名稱(chēng)：揭示傳染性海棉狀腦病-tse病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及了一種揭示揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法。它涉及生命科學(xué)領(lǐng)域、及醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
傳染性海棉狀腦病-TSE是一類(lèi)可以侵襲多種不同物種動(dòng)物及人類(lèi)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性腦病，潛伏期長(zhǎng)，具有100％致死率，并可在不同物種哺乳動(dòng)物間傳播。自1730年首次報(bào)道羊瘙癢病以來(lái)，目前已經(jīng)在20多種哺乳動(dòng)物動(dòng)物及人類(lèi)中發(fā)現(xiàn)了自然發(fā)生或感染的TSE，其中包括人類(lèi)的克-雅氏病-CJD、羊瘙癢病-Scrapie、瘋牛病-BSE等。動(dòng)物及人類(lèi)傳染性海棉狀腦病-TSE典型病理學(xué)改變表現(xiàn)為，造成動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦組織出現(xiàn)海棉狀空泡變性，蛋白淀粉樣沉積、神經(jīng)元丟失與反應(yīng)性膠質(zhì)增生。自美國(guó)科學(xué)家Prusiner在1992年，把能夠引發(fā)動(dòng)物傳染性海棉狀腦病-TSE僅對(duì)被感染動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成嚴(yán)重病理?yè)p傷、對(duì)外周神經(jīng)系統(tǒng)及其它器官也有一定損傷的致病傳染因子確定為，一種不含核酸、具有自我復(fù)制能力的感染性蛋白顆?！狿rPSc-朊病毒以后，現(xiàn)代科學(xué)對(duì)傳染性海棉狀腦病-TSE進(jìn)行了大量的相關(guān)科學(xué)研究。已經(jīng)揭示了傳染性海棉狀腦病-TSE的致病傳染因子，是由一種在人的細(xì)胞中和許多種哺乳動(dòng)物的細(xì)胞中都存在的PrP基因正常表達(dá)的，蛋白分子三維空間構(gòu)象含有40％α-螺旋沒(méi)有β折疊的正常PrP朊蛋白——PrPc所轉(zhuǎn)化出的，蛋白分子三維空間構(gòu)象含有43％β-折疊的不正常PrP朊蛋白感染性蛋白顆?！狿rPSc朊病毒蛋白；因而使其獲得了能夠與細(xì)胞所表達(dá)的，蛋白分子三維空間構(gòu)象含有40％α-螺旋沒(méi)有β折疊的正常PrP朊蛋白——PrPc相結(jié)合，再將PrPc復(fù)制為蛋白分子三維空間構(gòu)象含有43％β-折疊的不正常PrP朊蛋白感染性蛋白顆?！狿rPSc朊病毒蛋白，造成動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦細(xì)胞組織出現(xiàn)海棉狀空泡變性，蛋白淀粉樣沉積、神經(jīng)元丟失與反應(yīng)性膠質(zhì)增生的，超出了現(xiàn)代生命科學(xué)的傳統(tǒng)認(rèn)識(shí)思維的朊病毒蛋白也能夠具有自我復(fù)制性、傳染性、致病性的特殊生物生命性質(zhì)。但是現(xiàn)代生命科學(xué)對(duì)感染性蛋白顆粒——PrPSc-朊病毒的致病機(jī)制、與相關(guān)輔助致病因子、及輔助致病因子的致病機(jī)制等許多相關(guān)細(xì)節(jié)問(wèn)題仍然沒(méi)有搞清楚。
因而現(xiàn)代生命科學(xué)必須在針對(duì)傳染性海棉狀腦病-TSE致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，嚴(yán)重?fù)p傷感染動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的綜合致病機(jī)制中所必不可少的各種相關(guān)輔助致病因子、與相關(guān)輔助致病因子的綜合致病機(jī)制的綜合基礎(chǔ)科學(xué)研究方面，及科學(xué)認(rèn)識(shí)思維、科學(xué)方法取得具有開(kāi)拓創(chuàng)新重大科學(xué)突破；需要從認(rèn)識(shí)揭示傳染性海棉狀腦病-TSE致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物及人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)綜合致病機(jī)制中所必不可少的各種相關(guān)輔助致病因子、及相關(guān)輔助致病因子的致病機(jī)制細(xì)節(jié)問(wèn)題入手，進(jìn)行系統(tǒng)的、深入細(xì)致的綜合生命科學(xué)研究，并取得科學(xué)突破，才能夠在PrPSc-朊病毒嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物及人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的綜合致病機(jī)制的科學(xué)研究方面，取得科學(xué)突破。使現(xiàn)代生命科學(xué)未來(lái)能夠通過(guò)認(rèn)識(shí)揭示PrPSc-朊病毒需要與某些必不可少的相關(guān)輔助致病因子協(xié)同、才能?chē)?yán)重?fù)p傷動(dòng)物及人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的綜合分子致病機(jī)制，及它們的分子生物調(diào)控靶位，而尋找出可以有效抑制PrPSc-朊病毒嚴(yán)重?fù)p傷中樞神經(jīng)系統(tǒng)所必不可少的、相關(guān)輔助致病因子的分子生物損傷致病機(jī)制，進(jìn)而才會(huì)尋找出可以有效抑制傳染性海棉狀腦病-TSE的治療方法、及藥物！

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開(kāi)了一種揭示傳染性海棉狀腦病-TSE輔助致病因子的實(shí)驗(yàn)與方法通過(guò)建立由TSE致病傳染因子——PrPSc所造成的，嚴(yán)重?fù)p傷腦中樞神經(jīng)組織、及腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞的TSE模型，一定程度損傷脊髓中樞神經(jīng)組織、及脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞的TSE模型，與僅輕微損傷或不損傷外周神經(jīng)組織、及某些種神經(jīng)元細(xì)胞和某些種非神經(jīng)細(xì)胞的對(duì)比NTSE模型；由增、減輔助致病因子的外加條件所造成的，能夠增強(qiáng)PrPSc損傷缺乏輔助致病因子的神經(jīng)元細(xì)胞和非神經(jīng)細(xì)胞的TSE模型、減輕PrPSc損傷中樞神經(jīng)元細(xì)胞的NTSE模型，與它們相應(yīng)的那些缺乏輔助致病因子的神經(jīng)元細(xì)胞和非神經(jīng)細(xì)胞、僅會(huì)受到PrPSc輕微損傷或不會(huì)受到損傷的對(duì)比NTSE模型；并制作能夠清楚顯示表達(dá)那些模型的組織形態(tài)學(xué)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、亞分子形態(tài)學(xué)的變化與改變，可以通過(guò)計(jì)算機(jī)成象系統(tǒng)顯示出它們的高清晰立體成象的，高質(zhì)量的連續(xù)斷層切片電鏡標(biāo)本。揭示傳染性海棉狀腦病-TSE致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物及人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)綜合致病機(jī)制中所必不可少的某些種相關(guān)輔助致病因子、及相關(guān)輔助致病因子的致病機(jī)制。
本發(fā)明的目的是，提供一種揭示傳染性海棉狀腦病-TSE輔助致病因子的實(shí)驗(yàn)與方法。通過(guò)系統(tǒng)的建立由TSE致病傳染因子——PrPSc所造成的，嚴(yán)重?fù)p傷腦中樞神經(jīng)組織、及腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞的TSE模型，一定程度損傷脊髓中樞神經(jīng)組織、及脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞的TSE模型，與僅輕微損傷或不損傷缺乏輔助致病因子的外周神經(jīng)組織、及某些種神經(jīng)元細(xì)胞和某些種非神經(jīng)細(xì)胞的對(duì)比NTSE模型；由增、減輔助致病因子的外加條件所造成的，能夠增強(qiáng)PrPSc損傷缺乏輔助致病因子的神經(jīng)元細(xì)胞和非神經(jīng)細(xì)胞的TSE模型、減輕PrPSc損傷中樞神經(jīng)元細(xì)胞的NTSE模型，與它們相應(yīng)的那些缺乏輔助致病因子的神經(jīng)元細(xì)胞和非神經(jīng)細(xì)胞、僅會(huì)受到PrPSc輕微損傷或不會(huì)受到損傷的對(duì)比NTSE模型；并制作能夠清楚顯示表達(dá)那些模型的組織形態(tài)學(xué)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、亞分子形態(tài)學(xué)的變化與改變，可以通過(guò)計(jì)算機(jī)成象系統(tǒng)顯示出它們的高清晰二維、三維圖象的，高質(zhì)量的連續(xù)斷層切片電鏡標(biāo)本。系統(tǒng)的對(duì)比分析由TSE致病傳染因子——PrPSc所造成的，那些TSE模型標(biāo)本與對(duì)比NTSE模型標(biāo)本的組織形態(tài)學(xué)、細(xì)胞組織形態(tài)學(xué)發(fā)生的變化與改變的不同；對(duì)比分析由增添含有輔助致病因子外加條件所造成的那些增強(qiáng)PrPSc損傷的TSE模型標(biāo)本，與它們相應(yīng)的那些缺乏輔助致病因子僅會(huì)受到PrPSc輕微損傷或不會(huì)受到損傷的對(duì)比NTSE模型標(biāo)本的，組織形態(tài)學(xué)、細(xì)胞組織形態(tài)學(xué)發(fā)生的變化與改變的不同。而能夠揭示出傳染性海棉狀腦病(TSE)致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物及人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)綜合致病機(jī)制，與綜合致病機(jī)制中所必不可少的某些種相關(guān)輔助致病因子，及相關(guān)輔助致病因子的致病機(jī)制。使現(xiàn)代生命科學(xué)未來(lái)能夠通過(guò)認(rèn)識(shí)揭示PrPSc-朊病毒需要與某些必不可少的相關(guān)輔助致病因子協(xié)同，才能?chē)?yán)重?fù)p傷動(dòng)物及人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的綜合分子致病機(jī)制，及它們的分子生物調(diào)控靶位，而尋找出可以有效抑制PrPSc-朊病毒嚴(yán)重?fù)p傷中樞神經(jīng)系統(tǒng)所必不可少的、相關(guān)輔助致病因子的分子生物損傷致病機(jī)制，進(jìn)而才會(huì)尋找出可以有效抑制傳染性海棉狀腦病(TSE)的治療方法、及藥物！具體實(shí)施方式

為達(dá)到上述目的，實(shí)施本發(fā)明采用的方案準(zhǔn)備傳染性海棉狀腦病-TSE致病傳染因子——PrPSc。
PrPSc可取自于自然中存在的羊瘙癢病—Scrapie發(fā)病動(dòng)物、瘋牛病-BSE發(fā)病動(dòng)物、人克-雅氏病-CJD病人的TSE病變腦組織，可將其制作小塊或均勻漿或提取的PrPSc。
但是，最好還是要采用基因重組具有復(fù)制生物活性的PrPSc，因?yàn)槟X組織中存在PrPSc輔助致病因子可能會(huì)對(duì)以下的TSE實(shí)驗(yàn)造成干擾?？梢酝ㄟ^(guò)克隆羊瘙癢病-Scrapie、人克-雅氏病-CJD、瘋牛病-BSE的PrP表達(dá)基因，在原核或真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)生產(chǎn)基因重組的羊、人、牛的，三維空間構(gòu)象正常的PrP朊蛋白——PrPc。應(yīng)用液相色譜法-HIC、IEC、SEC、AFC對(duì)表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)生產(chǎn)的基因重組的蛋白及羊、人、牛的PrP朊蛋白——PrPc，實(shí)施復(fù)性提純、及改變它的蛋白分子三維空間構(gòu)象，獲得由人工改變出含有β-折疊三維構(gòu)象的基因重組的PrPSc。自1994年就有人首先利用AFC法，對(duì)基因重組的人朊病毒-rhPrion實(shí)施成功的復(fù)性——1.Sinha D，Bakhshi M，Vora R.Bio Techniques，1994，17509～514-2.Zahn R，Von Schroetter C，Wuthrich K.FEBS Lett，1997，417(3)400～404。“如果疏水色譜固定相給變性蛋白提供過(guò)高的能量，變性蛋白可能折疊成某些自然中不存在，但構(gòu)象穩(wěn)定的折疊中間體——摘自于耿信篤，白泉用疏水色譜復(fù)性并同時(shí)純化蛋白質(zhì)的機(jī)理及其應(yīng)用；中國(guó)科學(xué)B輯，2002年10月等32卷第5期”。相關(guān)于能夠?qū)⒃嘶蛘婧吮磉_(dá)系統(tǒng)表達(dá)生產(chǎn)的基因重組蛋白實(shí)施復(fù)性提純的細(xì)節(jié)問(wèn)題、與具體的科學(xué)方法，可向疏水色譜法HIC的發(fā)明人耿信篤等人直接請(qǐng)教、聯(lián)系。電話(huà)86-029-8303817，8302808；傳真86-029-8303817E-ailxdgeng@nwu.edu.cn。系統(tǒng)的建立由TSE致病傳染因子——PrPSc所造成的，嚴(yán)重?fù)p傷腦中樞神經(jīng)組織、及腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞的TSE模型，一定程度損傷脊髓中樞神經(jīng)組織、及脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞的TSE模型，與僅輕微損傷或不損傷缺乏輔助致病因子的外周神經(jīng)組織、及某些種神經(jīng)元細(xì)胞和某些種非神經(jīng)細(xì)胞的對(duì)比NTSE模型；由增、減輔助致病因子的外加條件所造成的，能夠增強(qiáng)PrPSc損傷缺乏輔助致病因子的神經(jīng)元細(xì)胞和非神經(jīng)細(xì)胞的TSE模型、減輕PrPSc損傷中樞神經(jīng)元細(xì)胞的NTSE模型，與它們相應(yīng)的那些缺乏輔助致病因子的神經(jīng)元細(xì)胞和非神經(jīng)細(xì)胞、僅會(huì)受到PrPSc輕微損傷或不會(huì)受到損傷的對(duì)比NTSE模型；并制作能夠清楚顯示表達(dá)那些模型的組織形態(tài)學(xué)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)、亞分子形態(tài)學(xué)的變化與改變，可以通過(guò)計(jì)算機(jī)成象系統(tǒng)顯示出它們的高清晰二維、三維圖象的，高質(zhì)量的連續(xù)斷層切片電鏡標(biāo)本。
創(chuàng)造動(dòng)物神經(jīng)組織TSE、NTSE對(duì)比模型及形態(tài)學(xué)標(biāo)本實(shí)驗(yàn)1應(yīng)用目前已有的生物個(gè)體遺傳差異最小的近交系實(shí)驗(yàn)大鼠品種，特別繁殖出，實(shí)驗(yàn)需要用8只必須是同胎出生的同性鼠，能夠使所創(chuàng)造的各種不同的TSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型、與對(duì)照NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的生物個(gè)體遺傳差異再近一步減小而可以忽略不計(jì)，每組需要有8只必須是同胎出生的同性鼠的，3組共24只同性近交系實(shí)驗(yàn)大鼠；將分為1、2、3組，每組8只實(shí)驗(yàn)大鼠分別編號(hào)1、2、3、4、5、6、7、8號(hào)。在每組實(shí)驗(yàn)鼠生長(zhǎng)到80天時(shí)，分別給每組的1~2號(hào)鼠的中腦中央灰質(zhì)、腰椎脊髓灰質(zhì)、頸上神經(jīng)結(jié)3個(gè)部位，應(yīng)用腦定位儀和微量注射器分別定位、定量接種，10ug基因重組具有復(fù)制生物活性的PrPSc、或動(dòng)物TSE病變腦組提取的PrPSc；在每組實(shí)驗(yàn)鼠生長(zhǎng)到130天時(shí)，分別給每組的3~4號(hào)鼠的中腦中央灰質(zhì)、腰椎脊髓灰質(zhì)、頸上神經(jīng)結(jié)3個(gè)部位，應(yīng)用腦定位儀和微量注射器分別定位、定量接種，10ug基因重組具有復(fù)制生物活性的PrPSc、或動(dòng)物TSE病變腦組提取的PrPSc；在每組實(shí)驗(yàn)鼠生長(zhǎng)到180天時(shí)，分別給每組的5~6號(hào)鼠的中腦中央灰質(zhì)、腰椎脊髓灰質(zhì)、頸上神經(jīng)結(jié)3個(gè)部位，應(yīng)用腦定位儀和微量注射器分別定位、定量接種，10ug基因重組具有復(fù)制生物活性的PrPSc、或動(dòng)物TSE病變腦組提取的PrPSc；創(chuàng)造具有不同PrPSc感染發(fā)病期的TSE的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，每組的7~8號(hào)作沒(méi)有受到PrPSc感染具有正常命機(jī)制的對(duì)照NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。在230天時(shí)，分別將24只實(shí)驗(yàn)大鼠麻醉后固定，應(yīng)用4％多聚甲醛、0.2％戊二醛、0.2％苦味酸的0.1mol/L磷酸緩沖液(PB)400ml冷的4℃固定液實(shí)施活體灌注，速度10ml/mim、15mim后，分別取出每只實(shí)驗(yàn)大鼠的完整的腦組織、脊髓定位接種點(diǎn)處半徑0.5cm的脊髓組織、頸上神經(jīng)結(jié)。把取出的第1、2組實(shí)驗(yàn)鼠的神經(jīng)組織保存在上述不含戊二醛的4℃固定液中備用。把取出的第3組實(shí)驗(yàn)鼠的6個(gè)TSE腦組織、6個(gè)TSE被接種處的脊髓組織、6個(gè)TSE頸上神經(jīng)結(jié)、2個(gè)NTSE腦組織、2個(gè)NTSE對(duì)照處的脊髓組織、2個(gè)NTSE頸上神經(jīng)結(jié)，分別制作出可以同時(shí)特異區(qū)分顯示出PrPc蛋白分子和PrPSc蛋白分子，在模型標(biāo)本的組織中、細(xì)胞中、亞分子細(xì)胞器中表達(dá)存在形態(tài)，能夠清楚顯示表達(dá)標(biāo)本的組織形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)、亞分子形態(tài)的，高質(zhì)量的掃描電鏡連續(xù)斷層切片標(biāo)本。通過(guò)計(jì)算機(jī)圖像分析儀，利用這些能夠清楚顯示表達(dá)標(biāo)本的組織形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)、亞分子形態(tài)，可以特異區(qū)分顯示出PrPc蛋白分子和PrPSc蛋白分子在模型標(biāo)本的組織中、細(xì)胞中、亞分子細(xì)胞器中的表達(dá)存在形態(tài)的，各種TSE模型標(biāo)本、與對(duì)照NTSE模型標(biāo)本的高質(zhì)量的掃描電鏡連續(xù)斷層切片的標(biāo)本圖像，做各種不同的二維或三維TSE綜合圖像對(duì)比形象定量分析，二維或三維TSE、NTSE綜合圖像對(duì)比形象定量分析，就可以顯示揭示實(shí)驗(yàn)大鼠的腦中樞神經(jīng)組織被PrPSc接種感染以后，腦中樞神經(jīng)組織、腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞、及它們的亞分子細(xì)胞器逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷改變形態(tài)的變量，PrPc蛋白分子在逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷的腦中樞神經(jīng)組織中、腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞中、及它們的亞分子細(xì)胞器中的表達(dá)存在形態(tài)逐漸發(fā)生改變的變量，PrPSc蛋白分子在逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷的腦中樞神經(jīng)組織中、腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞中、及它們的亞分子細(xì)胞器中的表達(dá)存在形態(tài)逐漸發(fā)生改變的變量；顯示揭示實(shí)驗(yàn)大鼠的脊髓中樞神經(jīng)組織被PrPSc接種感染以后，脊髓中樞神經(jīng)組織、脊髓樞神經(jīng)元細(xì)胞、及它們的亞分子細(xì)胞器逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷改變形態(tài)的變量，PrPc蛋白分子在逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷的脊髓中樞神經(jīng)組織中、脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞中、及它們的亞分子細(xì)胞器中的表達(dá)存在形態(tài)逐漸發(fā)生改變的變量，PrPSc蛋白分子在逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷的脊髓中樞神經(jīng)組織中、脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞中、及它們的亞分子細(xì)胞器中的表達(dá)存在形態(tài)逐漸發(fā)生改變的變量；顯示揭示實(shí)驗(yàn)大鼠的頸上神經(jīng)結(jié)組織被PrPSc接種感染以后，頸上神經(jīng)結(jié)組織、頸上神經(jīng)結(jié)神經(jīng)元細(xì)胞、及它們的亞分子細(xì)胞器逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷改變形態(tài)的變量，PrPc蛋白分子在逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷的頸上神經(jīng)結(jié)組織中、頸上神經(jīng)結(jié)神經(jīng)元細(xì)胞中、及它們的亞分子細(xì)胞器中的表達(dá)存在形態(tài)逐漸發(fā)生改變的變量，PrPSc蛋白分子在逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷的頸上神經(jīng)結(jié)組織中、頸上神經(jīng)結(jié)神經(jīng)元細(xì)胞中、及它們的亞分子細(xì)胞器中的表達(dá)存在形態(tài)逐漸發(fā)生改變的變量。而能夠創(chuàng)造出一個(gè)，可以綜合顯示揭示傳染性海棉狀腦病-TSE嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制；一定程度損傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠脊髓中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，一定程度損傷動(dòng)物脊髓中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制；僅輕微損傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠外神經(jīng)結(jié)組織、與外神經(jīng)結(jié)組織神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，輕微損傷動(dòng)物外神經(jīng)結(jié)組織、與外神經(jīng)結(jié)組織神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制的；綜合TSE、NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
特別繁殖出實(shí)驗(yàn)需要用8只必須是同胎出生的同性鼠，能夠使所創(chuàng)造的各種不同的TSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型、與對(duì)照NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的生物個(gè)體遺傳差異再近一步減小而可以忽略不計(jì)的，8只必須是同胎出生的同性近交系實(shí)驗(yàn)大鼠的方法在目前已有的生物個(gè)體遺傳差異最小的近交系實(shí)驗(yàn)大鼠品種繁殖種群的，青年繁殖母鼠中特別選出若干只剛生育過(guò)3~5胎、頭胎產(chǎn)仔不少于10只、以后產(chǎn)仔不少于12只、6~9月齡母性好的青年繁殖母鼠。從1只9~12月齡健康的青年種雄鼠體中人工采取精液，應(yīng)用流式細(xì)胞儀、或免疫磁珠細(xì)胞分離技術(shù)，分選出精液中的X精子、或Y精子，對(duì)發(fā)情的青年繁殖母鼠實(shí)施人工授精；使人工授精的青年繁殖母鼠能夠產(chǎn)出10~14只同性鼠。母乳哺育仔鼠2周后，對(duì)仔鼠實(shí)施定時(shí)、定量人工母乳哺育2周后，初選出不同個(gè)體之間的體重差不超過(guò)3g的仔鼠；再實(shí)施定時(shí)、定量飼養(yǎng)到80天，選出8只不同個(gè)體之間的體重差不超過(guò)5g的同胎出生的同性鼠。
制作可以同時(shí)特異區(qū)分顯示出PrPc蛋白分子和PrPSc蛋白分子在模型標(biāo)本的組織中、細(xì)胞中、亞分子細(xì)胞器中表達(dá)存在形態(tài)，能夠清楚顯示表達(dá)標(biāo)本的組織形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)、亞分子形態(tài)的高質(zhì)量的掃描電鏡連續(xù)斷層切片標(biāo)本的方法把取出的第3組實(shí)驗(yàn)鼠的腦組織置于2％多聚甲醛、0.5％戊二醛、0.2％苦味酸、0.1mol/L磷酸緩沖液的4℃固定液中固定浸泡4~6h后，把取出的脊髓組織、神經(jīng)結(jié)組織置于上述固定液中固定浸泡1~2h后，用PBS液漂洗5次，每次20mim；分別對(duì)每一個(gè)神經(jīng)組織塊做震動(dòng)切片厚20μm連續(xù)斷層切片、或應(yīng)用恒凍箱冷凍切片機(jī)做10μm連續(xù)斷層切片；將每個(gè)神經(jīng)組織的連續(xù)斷層切片分別編號(hào)；將組織切片放入15％甘油、20％蔗糖的PBS液中浸泡沉底后，用液氮速0.5~1mim后，用PBS液迅速回溫，再用PBS液漂洗5次，每次5mim后；用0.1/mol/L甘氨酸漂洗10mim，滅活自由醛基；用含有1％BSA的無(wú)鈣Dulbecco’sPBS液漂洗15mim，以阻斷對(duì)一抗的非特異結(jié)合；組織切片用適當(dāng)稀釋的、由10nm膠體金標(biāo)記的PrPc一抗4℃孵育24h后，再在室溫繼續(xù)孵育2h，用無(wú)鈣Dulbecco’sPBS液漂洗5次，每次5mim，以除去未結(jié)合的一抗；用含有1％BSA的無(wú)鈣Dulbecco’sPBS液漂洗15mim；用適當(dāng)稀釋的、由20nm膠體金標(biāo)記的PrPSc二抗4℃孵育24h后，再在室溫繼續(xù)孵育2h，用無(wú)鈣Dulbecco’sPBS液漂洗5次，每次5mim，以除去未結(jié)合的二抗；室溫下用2％多聚甲醛、2％戊二醛的4℃固定液中再固定1h；用0.1/mol/L二甲砷酸鈉緩沖液漂洗；可在暗房中再進(jìn)行銀加強(qiáng)染色、亦可不做銀加強(qiáng)染色；置于1％鋨酸、0.1mol/L磷酸緩沖液的4℃固定液中固定2h后；浸泡于2％單寧酸、5％戊二醛中做導(dǎo)電處理2h；用4℃雙蒸餾水沖洗3次，每次1h；再用1％鋨酸4℃固定2h；做脫水處理。首先制作出可以同時(shí)特異區(qū)分顯示出PrPc蛋白分子和PrPSc蛋白分子在模型標(biāo)本的組織中、細(xì)胞中、亞分子細(xì)胞器中表達(dá)存在形態(tài)的，掃描電鏡連續(xù)斷層切片標(biāo)本；先用掃描電鏡對(duì)切片標(biāo)本做30000倍掃描放大圖像，并在計(jì)算機(jī)中儲(chǔ)存圖像。而后將切片標(biāo)本鍍膜制作出能夠清楚顯示表達(dá)標(biāo)本的組織形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)、亞分子形態(tài)的高質(zhì)量的掃描電鏡連續(xù)斷層切片標(biāo)本；再用掃描電鏡對(duì)切片標(biāo)本做30000倍掃描放大圖像，并在計(jì)算機(jī)中儲(chǔ)存圖像。再將同一切片標(biāo)本的2種掃描放大電鏡圖像，用計(jì)算機(jī)圖像分析儀做綜合圖像分析、處理制作出那個(gè)切片標(biāo)本的，可以同時(shí)特異區(qū)分顯示出PrPc蛋白分子和PrPSc蛋白分子在模型標(biāo)本的組織中、細(xì)胞中、亞分子細(xì)胞器中表達(dá)存在形態(tài)，能夠清楚顯示表達(dá)標(biāo)本的組織形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)、亞分子形態(tài)的，高質(zhì)量的掃描放大電鏡圖像。
由于本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)是應(yīng)用生物個(gè)體遺傳差異最小的近交系實(shí)驗(yàn)大鼠品種特別繁殖出的8只同胎出生的同性鼠，創(chuàng)造揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的綜合TSE、NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，能夠使這個(gè)綜合科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)中的所有TSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型、與對(duì)照NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的生物個(gè)體遺傳差異再進(jìn)一步減小，而可以忽略不計(jì)。因而能夠通過(guò)計(jì)算機(jī)圖像分析儀，對(duì)這個(gè)綜合TSE、NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)所獲得的，能夠清楚顯示表達(dá)各種TSE模型標(biāo)本、與對(duì)照NTSE模型標(biāo)本的組織形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)、亞分子形態(tài)，可以特異區(qū)分顯示出PrPc蛋白分子和PrPSc蛋白分子在模型標(biāo)本的組織中、細(xì)胞中、亞分子細(xì)胞器中的表達(dá)存在形態(tài)的，高質(zhì)量的掃描電鏡連續(xù)斷層切片的標(biāo)本圖像，做各種不同的二維或三維TSE綜合圖像處理、對(duì)比形象定量分析，二維或三維TSE、NTSE綜合圖像處理、對(duì)比形象定量分析；顯示揭示傳染性海棉狀腦病-TSE的綜合病理機(jī)制，TSE傳染致病因子——PrPSc的綜合致病機(jī)制，與綜合致病機(jī)制中所必不可少的相關(guān)輔助致病因子、及相關(guān)輔助致病因子的致病機(jī)制。例如將具有不同PrPSc感染發(fā)病期的TSE的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型、對(duì)照NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的腦中組織相同部位切片標(biāo)本的高質(zhì)量的掃描放大電鏡圖像，用計(jì)算機(jī)圖像分析儀做各種不同的二維或三維TSE綜合圖像處理、對(duì)比形象定量分析，二維或三維TSE、NTSE綜合圖像處理、對(duì)比形象定量分析；能夠顯示揭示實(shí)驗(yàn)大鼠的腦中樞神經(jīng)組織被PrPSc接種感染以后，腦中樞神經(jīng)組織、腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞、及它們的亞分子細(xì)胞器逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷改變形態(tài)的變量，它們的TSE病理?yè)p傷改變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制；PrPc蛋白分子在逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷的腦中樞神經(jīng)組織中、腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞中、及它們的亞分子細(xì)胞器中的表達(dá)存在形態(tài)逐漸發(fā)生改變的變量，與調(diào)控它們的PrPc蛋白分子表達(dá)形態(tài)發(fā)生病理改變的過(guò)程-機(jī)制，及它的病理改變的過(guò)程-機(jī)制必須依賴(lài)某種或某些種能夠調(diào)控PrPc蛋白分子發(fā)生病理表達(dá)改變的輔助因子——即由腦中樞神經(jīng)細(xì)胞組織所表達(dá)分泌的、PrPSc綜合致病機(jī)制中所必不可少的輔助致病因子；PrPSc蛋白分子在逐漸發(fā)生TSE病理?yè)p傷的腦中樞神經(jīng)組織中、腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞中、及它們的亞分子細(xì)胞器中的表達(dá)存在形態(tài)逐漸發(fā)生改變的變量，與PrPSc蛋白分子能夠趨向病變組織、細(xì)胞中濃縮沉積損傷病理改變的過(guò)程-機(jī)制，及它的病理改變的過(guò)程-機(jī)制必須依賴(lài)某種或某些種PrPSc濃縮沉積的趨化輔助因子、或結(jié)合載體蛋白輔助因子——即由腦中樞神經(jīng)細(xì)胞組織所表達(dá)分泌的、PrPSc綜合致病機(jī)制中所必不可少的輔助致病因子。應(yīng)用相同的方法能夠顯示揭示傳染性海棉狀腦病-TSE一定程度損傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠脊髓中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，一定程度損傷動(dòng)物脊髓中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制；以及它與嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制的不同，和綜合致病機(jī)制的不同，是由在脊髓中樞神經(jīng)細(xì)胞組織中、不表達(dá)分泌PrPSc綜合致病機(jī)制中某些種輔助致病因子。應(yīng)用相同的方法能夠顯示揭示傳染性海棉狀腦病-TSE僅輕微損傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠外神經(jīng)結(jié)組織、與外神經(jīng)結(jié)組織神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，輕微損傷動(dòng)物外神經(jīng)結(jié)組織、與外神經(jīng)結(jié)組織神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制；以及它與嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制的不同，和綜合致病機(jī)制的不同，是由在外神經(jīng)結(jié)細(xì)胞組織中、不表達(dá)分泌PrPSc綜合致病機(jī)制中某些種所必不可少起關(guān)鍵作用的輔助致病因子。
在目前已有的近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠的品種中，能夠?qū)ふ业奖冉幌祵?shí)驗(yàn)大鼠品種生物個(gè)體遺傳差異更小的近交系實(shí)驗(yàn)小鼠品種；可以應(yīng)用近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠的品種中，生物個(gè)體遺傳差異最小的近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠品種，創(chuàng)造綜合TSE、NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。應(yīng)用近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物兔，繁殖出多只同胎出生的同性兔，創(chuàng)造綜合TSE、NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，由于實(shí)驗(yàn)兔的體型大于實(shí)驗(yàn)大鼠10倍，而具有更好的操作性。傳染性海棉狀腦病-TSE羊瘙癢病-Scrapie的傳染致病因子——PrPSc，是引發(fā)瘋牛病-BSE的、再由瘋牛病-BSE傳染致病因子——PrPSc引發(fā)人類(lèi)的克-雅氏病-CJD的傳染源。通過(guò)應(yīng)用羊創(chuàng)造綜合TSE、NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，與應(yīng)用近交系實(shí)驗(yàn)大鼠創(chuàng)造綜合TSE、NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，近交系實(shí)驗(yàn)小鼠創(chuàng)造綜合TSE、NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物兔創(chuàng)造綜合TSE、NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，綜合揭示多種不同物種哺乳動(dòng)物的傳染性海棉狀腦病(TSE)嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制；一定程度損傷動(dòng)物脊髓中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，一定程度損傷動(dòng)物脊髓中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制；僅輕微損傷動(dòng)物外神經(jīng)結(jié)組織、與外神經(jīng)結(jié)組織神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，輕微損傷動(dòng)物外神經(jīng)結(jié)組織、與外神經(jīng)結(jié)組織神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制；在不同哺乳動(dòng)物物種間存在的相同性、相似性、相異性，具有重大科學(xué)研究意義。創(chuàng)造動(dòng)物羊神經(jīng)組織TSE、NTSE對(duì)比模型及形態(tài)學(xué)標(biāo)本實(shí)驗(yàn)2實(shí)驗(yàn)應(yīng)用10只新出生的綿羊；最好是能夠應(yīng)用曾經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期自我封閉繁殖的小繁殖種群中，特別選出不同個(gè)體的形態(tài)性狀、與遺傳差異都盡可能相似的新生綿羊；分別編號(hào)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10號(hào)。在新生羊出生后0~3天，分別給1~2號(hào)羊的中腦中央灰質(zhì)、腰椎脊髓灰質(zhì)、頸上神經(jīng)結(jié)3個(gè)部位，應(yīng)用微量注射器分別定位、定量接種，10ug基因重組具有復(fù)制生物活性的PrPSc、或動(dòng)物TSE病變腦組提取的PrPSc；在新生綿羊生長(zhǎng)到50天時(shí)，分別給3~4號(hào)羊的中腦中央灰質(zhì)、腰椎脊髓灰質(zhì)、頸上神經(jīng)結(jié)3個(gè)部位，應(yīng)用微量注射器分別定位、定量接種，10ug基因重組具有復(fù)制生物活性的PrPSc、或動(dòng)物TSE病變腦組提取的PrPSc；在新生綿羊生長(zhǎng)到100天時(shí)，分別給5~6號(hào)羊的中腦中央灰質(zhì)、腰椎脊髓灰質(zhì)、頸上神經(jīng)結(jié)3個(gè)部位，應(yīng)用微量注射器分別定位、定量接種，10ug基因重組具有復(fù)制生物活性的PrPSc、或動(dòng)物TSE病變腦組提取的PrPSc；在新生綿羊生長(zhǎng)到150天時(shí)，分別給7~8號(hào)羊的中腦中央灰質(zhì)、腰椎脊髓灰質(zhì)、頸上神經(jīng)結(jié)3個(gè)部位，應(yīng)用微量注射器分別定位、定量接種，10ug基因重組具有復(fù)制生物活性的PrPSc、或動(dòng)物TSE病變腦組提取的PrPSc；創(chuàng)造具有不同PrPSc感染發(fā)病期的TSE的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，9~10號(hào)羊作沒(méi)有受到PrPSc感染具有正常命機(jī)制的對(duì)照NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。在1~2號(hào)實(shí)驗(yàn)羊中有一羊表現(xiàn)出病態(tài)時(shí)、或?qū)嶒?yàn)羊生長(zhǎng)到200天時(shí)；分別將10只實(shí)驗(yàn)羊麻醉后固定，取出頸上神經(jīng)結(jié)置于4℃固定液中，應(yīng)用4％多聚甲醛、0.2％戊二醛、0.2％苦味酸的0.1mol/L磷酸緩沖液(PB)冷的4℃固定液，分別對(duì)中腦腦室、脊髓腔室內(nèi)實(shí)施活體灌注，速度10ml/mim、30mim后，分別取出每只實(shí)驗(yàn)羊的中腦定位接種點(diǎn)處半徑1.5~2cm的腦組織、脊髓定位接種點(diǎn)處半徑1.5~2cm的脊髓組織。
將上述實(shí)驗(yàn)羊的神經(jīng)組織分別制作出，可以同時(shí)特異區(qū)分顯示出PrPc蛋白分子和PrPSc蛋白分子，在模型標(biāo)本的組織中、細(xì)胞中、亞分子細(xì)胞器中表達(dá)存在形態(tài)，能夠清楚顯示表達(dá)標(biāo)本的組織形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)、亞分子形態(tài)的，高質(zhì)量的掃描電鏡連續(xù)斷層切片標(biāo)本。通過(guò)用計(jì)算機(jī)圖像分析儀做各種不同的二維或三維TSE綜合圖像處理、對(duì)比形象定量分析，二維或三維TSE、NTSE綜合圖像處理、對(duì)比形象定量分析，創(chuàng)造出一個(gè)，可以綜合顯示揭示傳染性海棉狀腦病-TSE嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)羊腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，嚴(yán)重?fù)p傷動(dòng)物腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與腦中樞神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制；一定程度損傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)羊脊髓中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，一定程度損傷動(dòng)物脊髓中樞神經(jīng)系統(tǒng)、與脊髓中樞神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制；僅輕微損傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)羊外神經(jīng)結(jié)組織、與外神經(jīng)結(jié)組織神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)發(fā)生的病理變化與改變的微觀量變，與微觀量變發(fā)生過(guò)程-機(jī)制，致病傳染因子——PrPSc-朊病毒，輕微損傷動(dòng)物外神經(jīng)結(jié)組織、與外神經(jīng)結(jié)組織神經(jīng)元細(xì)胞的綜合致病機(jī)制的；綜合TSE、NTSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型科學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的方法，完全類(lèi)同于實(shí)驗(yàn)1。
權(quán)利要求
1.一種揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，其特征在于應(yīng)用傳染性海棉狀腦病-TSE致病傳染因子PrPSc(3)。接種多只近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(1)。的神經(jīng)組織(2)。創(chuàng)造具有不同神經(jīng)組織(2)。TSE病理改變的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型；分別把TSE實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的TSE病變神經(jīng)組織(2)。制作標(biāo)本，對(duì)比分析不同TSE神經(jīng)組織標(biāo)本形態(tài)的不同，揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，其特征在于多只近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(1)。是同胎出生的同性近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，其特征在于多只近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(1)。是同胎出生的同性近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，其特征在于多只近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(1)。是同胎出生的同性近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中所述的揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，其特征在于神經(jīng)組織(2)。是動(dòng)物的腦中樞神經(jīng)組織。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至4中所述的揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，其特征在于神經(jīng)組織(2)。是動(dòng)物的脊髓中樞神經(jīng)組織。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至4中所述的揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，其特征在于神經(jīng)組織(2)。是動(dòng)物的神經(jīng)結(jié)組織。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中所述的揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，其特征在于傳染性海棉狀腦病-TSE致病傳染因子PrPSc(3)。是動(dòng)物TSE病變腦組織。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至7中所述的揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，其特征在于傳染性海棉狀腦病-TSE致病傳染因子PrPSc(3)。是由動(dòng)物TSE病變腦組織中提取的PrPSc。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至7中所述的揭示傳染性海棉狀腦病-TSE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，其特征在于傳染性海棉狀腦病-TSE致病傳染因子PrPSc(3)。是基因重組PrPSc。
全文摘要
揭示傳染性海棉狀腦?。璗SE病理機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法，涉及生命科學(xué)領(lǐng)域、及醫(yī)藥領(lǐng)域。提供了一個(gè)能夠系統(tǒng)的、逐步深入地揭示傳染性海棉狀腦?。璗SE致病因子PrP
文檔編號(hào)G09B23/00GK1529298SQ031544
公開(kāi)日2004年9月15日 申請(qǐng)日期2003年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月29日
發(fā)明者葉新新 申請(qǐng)人:葉新新