一種從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸的方法，選用馬齒莧渣，經(jīng)亞臨界流體萃取的升高萃取壓力0.8MPa，升高萃取溫度40℃，萃取150min，皂化水解制備富集前混合脂肪酸，采用以尿素/富集前混合脂肪酸按m/m為1,富集前混合脂肪酸/乙醇按m/v為1:16，將尿素與無水乙醇在60℃下加熱攪拌回流，尿素溶解與富集前混合脂肪酸中混勻后60℃下加熱攪拌回流20min，冷卻至室溫，置于4℃中結(jié)晶24h，經(jīng)過濾得到富集后混合脂肪酸，制備的馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊和軟膠囊通過糖尿病大鼠試驗(yàn)證實(shí)可以有效降低血糖和胰島素水平，在制備預(yù)防和治療糖尿病的食品或者藥品中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值和前景。
【專利說明】一種從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及多不飽和脂肪酸提取制備的【技術(shù)領(lǐng)域】。具體的說，本發(fā)明涉及一種從 馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸的制備【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 多不飽和脂肪酸是一種對(duì)人類或動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育的不可或缺的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，主要包 括亞油酸、亞麻酸及二十碳五烯酸（EPA)還有二十二碳六烯酸（DHA)等，其中亞油酸、α -亞 麻酸在人體內(nèi)不能合成，只能從食物當(dāng)中攝取得到，因此稱為人體的必需脂肪酸。它具有很 多功效，比如降血脂、降血壓、抗血栓、提高機(jī)體免疫力、預(yù)防和調(diào)節(jié)心血管疾病等等，它以 獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)成分和藥用價(jià)值被廣泛地應(yīng)用在食品、醫(yī)療保健等的各個(gè)領(lǐng)域中。到目前為止， 多不飽和脂肪酸的主要來源多以植物、動(dòng)物以及微生物等為主，但是在國內(nèi)對(duì)多不飽和脂 肪酸的開發(fā)現(xiàn)狀還難以滿足市場(chǎng)的需求。
[0003] 馬齒莧以其耐干旱、抗病蟲害、生命力強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)在我國是一種產(chǎn)量高且適應(yīng)性強(qiáng) 的經(jīng)濟(jì)作物，是國家衛(wèi)生部認(rèn)定的藥食同源的野生植物之一。現(xiàn)有技術(shù)研究表明，馬齒莧油 進(jìn)行脂肪酸成分中亞油酸含量占脂肪酸總量33. 19%，亞麻酸含量占31. 04%。因此從馬齒莧 渣中萃取富集得到多不飽和脂肪酸并制備多不飽和脂肪酸微膠囊、軟膠囊等產(chǎn)品將具有廣 闊的市場(chǎng)前景。
[0004] 微膠囊(i/ZcroeflcaAswA?)是以天然的或合成的高分子材料作為壁材，通過物理 法、化學(xué)法或物理化學(xué)法將一種活性物質(zhì)(芯材）包裹起來形成具有半透性或密封囊膜的微 型膠囊。微膠囊化時(shí)，被包埋的物質(zhì)被稱作芯材，包埋芯材的成膜材料被稱為壁材。壁材 通常是由天然或合成的高分子材料形成，在微膠囊化過程中需要具備良好的流動(dòng)性和溶解 性，促進(jìn)芯材的包裹以形成較穩(wěn)定的乳化液體系，微膠囊化的方法有噴霧干燥法、包結(jié)絡(luò)合 物法、相分離法和界面聚合法等。由于多不飽和脂肪酸自身存在諸多不利因素，大大限制了 它的使用價(jià)值，采用微膠囊技術(shù)進(jìn)行包囊化處理，可以提高其穩(wěn)定性及其在功能性產(chǎn)品中 的可用性，促進(jìn)其生理功能的發(fā)揮。目前未見有關(guān)從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸 微膠囊的研究和報(bào)道，從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊存在許多技術(shù)瓶頸需 要加以解決。
[0005] 軟膠囊劑是繼片劑、針劑之后發(fā)展起來的一種新劑型，能將油狀藥物、藥物溶液或 藥物混懸液、糊狀物甚至藥物固體粉末、顆粒定量壓注并包封于膠囊內(nèi)，形成大小、形狀各 異的密封膠囊。與其它劑型相比，軟膠囊具有生物利用度高、藥液均勻穩(wěn)定性好、密封安全、 含量準(zhǔn)確、外型美觀、掩蓋不良?xì)馕兜忍攸c(diǎn)，適用于服用劑量小、疏水性藥物、低熔點(diǎn)藥物、 含油量高的各種保健用油、對(duì)光敏感、遇濕熱不穩(wěn)定、易氧化和易揮發(fā)性藥物的生產(chǎn)，已廣 泛用于制藥、食品、化妝品、家庭用品、化工和其它領(lǐng)域，其開發(fā)、應(yīng)用領(lǐng)域十分廣泛。目前未 見有關(guān)從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊的研究和報(bào)道，從馬齒莧渣制備馬齒 莧多不飽和脂肪酸軟膠囊存在許多技術(shù)瓶頸需要加以解決。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中未見有關(guān)從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸的研究和報(bào)道， 從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸存在如超臨界萃取設(shè)備容積小、造價(jià)高、耗能大、不 適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的缺陷及多不飽和脂肪酸高效提純等許多技術(shù)瓶頸需要加以解決。本 發(fā)明需要解決的技術(shù)問題就在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，旨在提供一種從馬齒莧渣制備馬齒 莧多不飽和脂肪酸的方法，選用馬齒莧渣為原料，通過亞臨界流體萃取法提取馬齒莧油，并 利用尿素包合技術(shù)對(duì)馬齒莧油中的多不飽和脂肪酸進(jìn)行分離純化，通過采用亞臨界流體萃 取技術(shù)與尿素包合技術(shù)集成工藝，設(shè)置混合壁材、真空冷凍干燥工藝制備微膠囊，設(shè)置混合 壁材、熱熔法壓丸工藝制備軟膠囊，并經(jīng)功效試驗(yàn)證明馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊及軟 膠囊具有顯著的降血糖功效，具有廣泛的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值，有效的克服目前多不飽和 脂肪酸高效提純中存在的技術(shù)瓶頸，具有現(xiàn)實(shí)的廣泛應(yīng)用價(jià)值。
[0007] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案： 本發(fā)明以生產(chǎn)馬齒莧濃縮汁殘留下來的馬齒莧渣為原料，通過采用亞臨界流體萃取技 術(shù)與尿素包合技術(shù)集成工藝，選用馬齒莧加工生產(chǎn)中的馬齒莧渣為原料制備得到含有高純 度多不飽和脂肪酸的富集后混合脂肪酸，設(shè)置混合壁材，通過磁力攪拌、高速勻漿、真空冷 凍干燥工藝制備微膠囊，通過熱熔法壓丸工藝制備軟膠囊，有效的克服目前多不飽和脂肪 酸高效提純中存在的技術(shù)瓶頸，為馬齒莧多不飽和脂肪酸的開發(fā)應(yīng)用研究提供了現(xiàn)實(shí)的基 礎(chǔ)，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
[0008] 本發(fā)明具體提供一種從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸的方法，產(chǎn)品形式是 以馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊和馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊兩種產(chǎn)品形式體現(xiàn)。
[0009] 具體的，本發(fā)明提供一種從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊的方法，％ 按照重量百分比計(jì)，具體方法步驟如下： (1)馬齒莧渣的制備：以鮮馬齒莧、生活飲用水為主要原料，鮮馬齒莧經(jīng)挑選、清洗、切 碎，按重量比1:3比例加水浸泡12h，80°C下熬煮6h，過濾獲得馬齒莧渣。
[0010] (2)采用馬齒莧渣為原料的預(yù)處理：采用馬齒莧加工生產(chǎn)中的馬齒莧渣或上述步 驟提供的馬齒莧渣為原料，經(jīng)70°C烘干、粉碎、過篩60目、稱量、填料。
[0011] (3)亞臨界異丁烷萃取技術(shù)提取馬齒莧油：進(jìn)行亞臨界流體萃取工藝，設(shè)定條件， 萃取壓力〇. 8MPa，萃取溫度40°C，萃取150min，將經(jīng)過萃取制備的馬齒莧油浸膏，待萃取三 次后合并每次得到的馬齒莧油浸膏，經(jīng)4000r/min離心15min、過濾后制備獲得成品馬齒莧 油。
[0012] (4)皂化水解制備富集前混合脂肪酸：按照g/mL計(jì)，將馬齒莧油與0.5mol/L Κ0Η-乙醇溶液按1 :20混合，即將上述步驟（3)制備的馬齒莧油加入Κ0Η的乙醇溶液，然后 放于75°C的水浴中攪拌、回流120min，得到皂化液；加入與0. 5 mol/L Κ0Η-乙醇溶液等量的 冰蒸餾水迅速冷卻，然后用與〇. 5 mol/L Κ0Η-乙醇溶液等量的石油醚萃取不皂化物，經(jīng)萃取 多次，取水層加一倍量水稀釋，緩慢加入10%的HC1，調(diào)至pH=2~3,此時(shí)可明顯看到油層和水 層，立即用與〇. 5mol/LK0H-乙醇溶液等量的石油醚萃取混合脂肪酸，萃取多次，通過分液 漏斗得到石油醚層；石油醚層用5%的NaCl溶液水洗至中性，再用無水硫酸鈉干燥、過濾后 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，即得富集前混合脂肪酸。
[0013] (5)采用尿素包合法富集多不飽和脂肪酸：按照g/g/mL計(jì)，將富集前的混合脂肪 酸、尿素和無水乙醇按照1:1 :16,即以尿素/富集前的混合脂肪酸按m/m，為1，富集前的 混合脂肪酸/乙醇按m/v為1:16,將尿素與無水乙醇在60°C下加熱攪拌回流，直至尿素全 部溶解，迅速倒入盛有上述步驟（4)制備的富集前的混合脂肪酸中，混勻后，于60°C下加熱 攪拌回流20min，冷卻至室溫，置于4°C中結(jié)晶24h后，將結(jié)晶包合物迅速抽濾，得到結(jié)晶包 合物和濾液兩部分，其中結(jié)晶包合物中含有多數(shù)的飽和脂肪酸和油酸；將濾液中未包合脂 肪酸，即將高純度的多不飽和脂肪酸經(jīng)過萃取，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后得到固體顆粒， 加入30%的水，HCL調(diào)至pH5飛，再加與無水乙醇等量的石油醚進(jìn)行萃取，用蒸餾水洗醚層至 用尿素試紙檢測(cè)無尿素為止，用無水硫酸鈉干燥4h，即可得到含有較高純度的多不飽和脂 肪酸的富集后混合脂肪酸； (6)多不飽和脂肪酸微膠囊的制備：選用阿拉伯膠、β-環(huán)糊精和變性淀粉作為壁 材，以富集后混合脂肪酸為芯材，以壁材和芯材按照重量比3:1配比，將稱取的阿拉伯膠、 β -環(huán)糊精和變性淀粉按照重量比1:1:2混合后在60°C條件下攪拌30min，然后經(jīng)攪拌，使 其充分溶解，放置室溫冷卻，得到水相；稱取上述步驟（5)制備的25%富集后混合脂肪酸，并 加入2%吐溫80在60°C條件下進(jìn)行攪拌溶解，得到油相；將油相緩慢加入到水相中繼續(xù)在 60°C條件下攪拌，使其充分溶解，然后用經(jīng)高速均質(zhì)10000r/min條件下分散3min，使油滴 均勻乳化在壁材溶液中，呈乳狀液狀態(tài)，最后置于_55°C的真空冷凍干燥箱中干燥12h，收 集產(chǎn)品，制備獲得馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊。
[0014] 同時(shí)，本發(fā)明具體提供一種從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊的方 法，％按照重量百分比計(jì)，具體方法步驟如下： (1)馬齒莧渣的制備：以鮮馬齒莧、生活飲用水為主要原料，鮮馬齒莧經(jīng)挑選、清洗、切 碎，按重量比1:3比例加水浸泡12h，80°C下熬煮6h，過濾獲得馬齒莧渣。
[0015] (2)采用馬齒莧渣為原料的預(yù)處理：采用馬齒莧加工生產(chǎn)中的馬齒莧渣或上述步 驟制備的馬齒莧渣為原料，經(jīng)70°C烘干、粉碎、過篩60目、稱量、填料。
[0016] (3)亞臨界異丁烷萃取技術(shù)提取馬齒莧油：進(jìn)行亞臨界流體萃取工藝，設(shè)定條件， 萃取壓力〇. 8MPa，萃取溫度40°C，萃取150min，將經(jīng)過萃取制備的馬齒莧油浸膏，待萃取三 次后合并每次得到的馬齒莧油浸膏，經(jīng)4000r/min離心15min、過濾后制備獲得成品馬齒莧 油。
[0017] (4)皂化水解制備富集前混合脂肪酸：按照g/mL計(jì)，將馬齒莧油與0.5mol/L K0H-乙醇溶液按1 :20混合，即將上述步驟（3)制備的馬齒莧油加入K0H的乙醇溶液，然后 放于75°C的水浴中攪拌、回流120min，得到皂化液；加入與0. 5 mol/L K0H-乙醇溶液等量的 冰蒸餾水迅速冷卻，然后用與〇. 5 mol/L Κ0Η-乙醇溶液等量的石油醚萃取不皂化物，經(jīng)萃取 多次，取水層加一倍量水稀釋，緩慢加入10%的HC1，調(diào)至pH=2~3,此時(shí)可明顯看到油層和水 層，立即用與〇. 5mol/LK0H-乙醇溶液等量的石油醚萃取混合脂肪酸，萃取多次，通過分液 漏斗得到石油醚層；石油醚層用5%的NaCl溶液水洗至中性，再用無水硫酸鈉干燥、過濾后 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，即得富集前混合脂肪酸。
[0018] (5)采用尿素包合法富集多不飽和脂肪酸：按照g/g/mL計(jì)，將富集前的混合脂肪 酸、尿素和無水乙醇按照1 :1 :16,即以尿素/富集前的混合脂肪酸按m/m，為1，富集前的 混合脂肪酸/乙醇按m/v為1:16,將尿素與無水乙醇在60°C下加熱攪拌回流，直至尿素全 部溶解，迅速倒入盛有上述步驟（4)制備的富集前的混合脂肪酸中，混勻后，于60°C下加熱 攪拌回流20min，冷卻至室溫，置于4°C中結(jié)晶24h后，將結(jié)晶包合物迅速抽濾，得到結(jié)晶包 合物和濾液兩部分，其中結(jié)晶包合物中含有多數(shù)的飽和脂肪酸和油酸；將濾液中未包合脂 肪酸，即將高純度的多不飽和脂肪酸經(jīng)過萃取，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后得到固體顆粒， 加入30%的水，HCL調(diào)至pH5飛，再加與無水乙醇等量的石油醚進(jìn)行萃取，用蒸餾水洗醚層至 用尿素試紙檢測(cè)無尿素為止，用無水硫酸鈉干燥4h，即可得到含有較高純度的多不飽和脂 肪酸的富集后混合脂肪酸。
[0019] (6)多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備：選用阿拉伯膠、β-環(huán)糊精和變性淀粉作為 壁材，以富集后的混合脂肪酸為芯材，以壁材和芯材按照重量比3:1配比，將稱取的阿拉伯 膠、β -環(huán)糊精和變性淀粉按照重量比1:1:2混合后在60°C條件下攪拌30min，然后經(jīng)攪拌， 使其充分溶解，放置室溫冷卻，得到水相；稱取上述步驟（5)制備的25%富集后的混合脂肪 酸，并加入2%吐溫80在60°C條件下進(jìn)行攪拌溶解，得到油相；將油相緩慢加入到水相中繼 續(xù)在60°C條件下攪拌，使其充分溶解，然后用經(jīng)高速均質(zhì)10000r/min條件下分散3min，使 油滴均勻乳化在壁材溶液中，呈乳狀液狀態(tài)；在溶膠罐中先加入甘油（15% )、純水（40% )， 攪拌并加熱到75°C后加入明膠（45% )，攪拌溶解60min使明膠完全溶解，抽真空，除去氣 泡，60°C保溫待用；將膠液和混合好的內(nèi)容物裝入制囊機(jī)中進(jìn)行壓丸，膠丸定型后自然干 燥，溫度控制在45°C?50°C，制備獲得馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊。
[0020] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案中充分考慮馬齒莧油中的多不飽和脂肪酸，主要是指亞麻 酸和亞油酸都以甘油酯的形式存在，而甘油酯的空間位阻較大，難以直接包合分離，為此在 進(jìn)行采用尿素包合法富集馬齒莧油中多不飽和脂肪酸前，先把脂肪酸甘油酯進(jìn)行皂化水解 制成富集前混合脂肪酸；本發(fā)明通過皂化水解反應(yīng)制備富集前混合脂肪酸，皂化的最佳工 藝條件為：K0H-乙醇濃度為0. 5 mol/L，皂化溫度為75°C，皂化時(shí)間為120min，混合脂肪酸 得率為57. 36%，富集前混合脂肪酸中的多不飽和脂肪酸占68. 12%，主要為亞油酸、亞麻 酸。
[0021] 本發(fā)明通過上述提供的制備方法，通過采用亞臨界流體萃取法提取馬齒莧油，并 利用尿素包合技術(shù)對(duì)馬齒莧油中的多不飽和脂肪酸進(jìn)行分離純化，得到含有高純度多不飽 和脂肪酸的富集后混合脂肪酸并制備多不飽和脂肪酸微膠囊及軟膠囊，制備的馬齒莧多不 飽和脂肪酸微膠囊產(chǎn)品顏色為乳黃色，無特殊氣味，粉末細(xì)膩均勻；表面含油率為17.3%， 包埋率為82. 7% ;微膠囊含水率為3. 80%，符合微膠囊水分含量要求；平均粒徑為306. 6nm。 制備的馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊產(chǎn)品顏色為淡黃色，無特殊氣味，粒度適中。
[0022] 進(jìn)一步，本發(fā)明提供了馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊和軟膠囊的降血糖功效實(shí) 驗(yàn)：設(shè)定馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊和軟膠囊的劑量一致，研究不同劑量對(duì)糖尿病大鼠 的降血糖功能的影響。通過大鼠降血糖功能實(shí)驗(yàn)證實(shí)：馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊及軟 膠囊降低血糖的同時(shí)，亦能升高糖尿病大鼠血清胰島素的含量，與模型組大鼠比較有顯著 性差異（P〈0. 01)。由此可知馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊及軟膠囊可以有效降低糖尿病大 鼠的血糖和胰島素水平，對(duì)于糖尿病的預(yù)防和治療具有積極的效果?？梢?，本發(fā)明通過糖尿 病大鼠試驗(yàn)證實(shí)制備的馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊及軟膠囊可以有效降低血糖和胰島 素水平，對(duì)于糖尿病的預(yù)防和治療具有積極的效果，表明本發(fā)明提供的馬齒莧多不飽和脂 肪酸微膠囊和馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊在制備預(yù)防和治療糖尿病的食品或者藥品中 具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值和前景。
[0023] 通過實(shí)施本發(fā)明具體的
【發(fā)明內(nèi)容】
可以達(dá)到以下有益效果： (1)本發(fā)明首先采用亞臨界異丁烷萃取技術(shù)提取馬齒莧油，考察了萃取壓力、萃取溫 度、萃取時(shí)間等單因素對(duì)馬齒莧油提取率的影響，依據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)以確定最 佳的工藝參數(shù)。結(jié)果表明：亞臨界流體萃取的馬齒莧油的最優(yōu)工藝條件：萃取壓力〇. 8MPa， 萃取溫度40°C，萃取時(shí)間150min，提取率為2. 91%，與本領(lǐng)域常見采用的超聲輔助酶解-索 氏提取聯(lián)用法相比提高了 1.2%。
[0024] (2)本發(fā)明通過采用亞臨界流體萃取法和本領(lǐng)域常見采用的超聲輔助酶解-索氏 提取聯(lián)用法兩種方法制備馬齒莧油，通過對(duì)馬齒莧油理化指標(biāo)的測(cè)定以及脂肪酸GC-MS分 析比較了兩種提油方法的優(yōu)劣。結(jié)果表明：采用傳統(tǒng)的超聲輔助酶解-索氏聯(lián)用法所得馬 齒莧油的多不飽和脂肪酸含量達(dá)到56. 39%，亞臨界流體萃取馬齒莧油的多不飽和脂肪酸含 量達(dá)到64. 23%，相比于前法提高了 7. 84%。亞臨界流體萃取的馬齒莧油酸值和過氧化值要 比超聲酶解-索氏提取聯(lián)用法低，品質(zhì)要好。
[0025] (3)本發(fā)明對(duì)馬齒莧油采用皂化水解制備富集前混合脂肪酸，以富集前混合脂肪 酸得率為指標(biāo)考察了 Κ0Η-乙醇、皂化時(shí)間、皂化溫度三因素對(duì)馬齒莧油的皂化反應(yīng)的影 響，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)以確定最佳工藝參數(shù)。皂化的最佳工藝條件為：Κ0Η-乙 醇濃度為〇. 5 mol/L，皂化溫度為75°C，皂化時(shí)間為120min，放大驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，得富集前混合脂 肪酸得率為57. 36%。
[0026] (4)本發(fā)明采用尿素包合法富集多不飽和脂肪酸，以富集后混合脂肪酸的碘值和 回收率為判定指標(biāo)，考察了尿素/富集前混合脂肪酸（m/m)、富集前混合脂肪酸/乙醇（m/ v)、回流時(shí)間及包合時(shí)間對(duì)尿素包合反應(yīng)的影響，通過單因素和正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定尿素包 合最優(yōu)條件，利用GC-MS分析純化后的產(chǎn)品脂肪酸成分；結(jié)果表明：尿素包合最佳工藝為： 尿素/富集前混合脂肪酸（m/m)為1，富集前混合脂肪酸/乙醇（m/v)為1:16,回流時(shí)間 20min，包合時(shí)間24h，在此工藝下得到的富集后混合脂肪酸與未包合前馬齒莧油的脂肪酸 相比，多不飽和脂肪酸含量由64. 23%提高到94. 56%。
[0027] (5)通過采用本發(fā)明提供的從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸的方法，制備 的馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊產(chǎn)品顏色為乳黃色，無特殊氣味，粉末細(xì)膩均勻；表面含油 率為17. 3%，包埋率為82. 7% ;微膠囊含水率為3. 80%，符合微膠囊水分含量要求；平均粒徑 為306. 6nm。制備的馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊產(chǎn)品顏色為淡黃色，無特殊氣味，粒度適 中。本發(fā)明通過糖尿病大鼠試驗(yàn)證實(shí)制備的馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊及軟膠囊可以有 效降低血糖和胰島素水平，對(duì)于糖尿病的預(yù)防和治療具有積極的效果，在制備預(yù)防和治療 糖尿病的食品或者藥品中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值和前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0028] 圖1從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸膠囊的工藝流程圖。
[0029] 圖2顯示為萃取壓力對(duì)提取率的影響圖。
[0030] 圖3顯示為萃取溫度對(duì)提取率的影響圖。
[0031] 圖4顯示為萃取時(shí)間對(duì)提取率的影響圖。
[0032] 圖5顯示為萃取次數(shù)對(duì)馬齒莧油提取率的影響圖。
[0033] 圖6顯示為Κ0Η-乙醇濃度對(duì)富集前混合脂肪酸得率的影響圖。
[0034] 圖7顯示為皂化溫度對(duì)富集前混合脂肪酸得率的影響圖。
[0035] 圖8顯示為皂化時(shí)間對(duì)富集前混合脂肪酸得率的影響圖。
[0036] 圖9顯示為尿素/富集前混合脂肪酸（m/m)對(duì)富集后混合脂肪酸尿素包合的影響 圖。
[0037] 圖10顯示為富集前混合脂肪酸/乙醇（m/v)對(duì)富集后混合脂肪酸尿素包合的影 響圖。
[0038] 圖11顯示為包合時(shí)間對(duì)富集后混合脂肪酸尿素包合的影響圖。

【具體實(shí)施方式】
[0039] 下面，舉實(shí)施例說明本發(fā)明，但是，本發(fā)明并不限于下述的實(shí)施例，本發(fā)明中基本 涉及到的％無特別指明都是重量百分比計(jì)。
[0040] 本發(fā)明中選用的所有原輔材料，所選用的所有試劑和儀器都為本領(lǐng)域熟知選用 的，但不限制本發(fā)明的實(shí)施，其他本領(lǐng)域熟知的一些試劑和設(shè)備都可適用于本發(fā)明以下實(shí) 施方式的實(shí)施。
[0041] 實(shí)施例一：馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊的制備 %按照重量百分比計(jì)，從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊的具體方法步驟 如下： (1)馬齒莧渣的制備：以鮮馬齒莧、生活飲用水為主要原料，鮮馬齒莧經(jīng)挑選、清洗、切 碎，按重量比1:3比例加水浸泡12h，80°C下熬煮6h，過濾獲得馬齒莧渣。
[0042] (2)采用馬齒莧渣為原料的預(yù)處理：采用馬齒莧加工生產(chǎn)中的馬齒莧渣或上述步 驟提供的馬齒莧渣為原料，經(jīng)70°C烘干、粉碎、過篩60目、稱量、填料。
[0043] (3)亞臨界異丁烷萃取技術(shù)提取馬齒莧油：進(jìn)行亞臨界流體萃取工藝，設(shè)定條件， 萃取壓力〇. 8MPa，萃取溫度40°C，萃取150min，將經(jīng)過萃取制備的馬齒莧油浸膏，待萃取三 次后合并每次得到的馬齒莧油浸膏，經(jīng)4000r/min離心15min、過濾后制備獲得成品馬齒莧 油。
[0044] (4 )皂化水解制備富集前混合脂肪酸：按照g/mL計(jì)，將馬齒莧油與0 · 5mo 1 /L Κ0Η-乙醇溶液按1 :20混合，即將上述步驟（3)制備的馬齒莧油加入Κ0Η的乙醇溶液，然后 放于75°C的水浴中攪拌、回流120min，得到皂化液；加入與0. 5 mol/L Κ0Η-乙醇溶液等量的 冰蒸餾水迅速冷卻，然后用與〇. 5 mol/L Κ0Η-乙醇溶液等量的石油醚萃取不皂化物，經(jīng)萃取 多次，取水層加一倍量水稀釋，緩慢加入10%的HC1，調(diào)至pH=2~3,此時(shí)可明顯看到油層和水 層，立即用與〇. 5mol/LK0H-乙醇溶液等量的石油醚萃取混合脂肪酸，萃取多次，通過分液 漏斗得到石油醚層；石油醚層用5%的NaCl溶液水洗至中性，再用無水硫酸鈉干燥、過濾后 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，即得富集前混合脂肪酸。
[0045] (5)采用尿素包合法富集多不飽和脂肪酸：按照g/g/mL計(jì)，將富集前的混合脂肪 酸、尿素和無水乙醇按照1 :1 :16,即以尿素/富集前的混合脂肪酸按m/m，為1，富集前的 混合脂肪酸/乙醇按m/v為1:16,將尿素與無水乙醇在60°C下加熱攪拌回流，直至尿素全 部溶解，迅速倒入盛有上述步驟（4)制備的富集前的混合脂肪酸中，混勻后，于60°C下加熱 攪拌回流20min，冷卻至室溫，置于4°C中結(jié)晶24h后，將結(jié)晶包合物迅速抽濾，得到結(jié)晶包 合物和濾液兩部分，其中結(jié)晶包合物中含有多數(shù)的飽和脂肪酸和油酸；將濾液中未包合脂 肪酸，即將高純度的多不飽和脂肪酸經(jīng)過萃取，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后得到固體顆粒， 加入30%的水，HCL調(diào)至pH5飛，再加與無水乙醇等量的石油醚進(jìn)行萃取，用蒸餾水洗醚層至 用尿素試紙檢測(cè)無尿素為止，用無水硫酸鈉干燥4h，即可得到含有較高純度的多不飽和脂 肪酸的富集后混合脂肪酸。
[0046] (6)多不飽和脂肪酸微膠囊的制備：選用阿拉伯膠、β -環(huán)糊精和變性淀粉作為壁 材，以富集后混合脂肪酸為芯材，以壁材和芯材按照重量比3:1配比，將稱取的阿拉伯膠、 β -環(huán)糊精和變性淀粉按照重量比1:1:2混合后在60°C條件下攪拌30min，然后經(jīng)攪拌，使 其充分溶解，放置室溫冷卻，得到水相；稱取上述步驟（5)制備的25%富集后混合脂肪酸，并 加入2%吐溫80在60°C條件下進(jìn)行攪拌溶解，得到油相；將油相緩慢加入到水相中繼續(xù)在 60°C條件下攪拌，使其充分溶解，然后用經(jīng)高速均質(zhì)10000r/min條件下分散3min，使油滴 均勻乳化在壁材溶液中，呈乳狀液狀態(tài)，最后置于_55°C的真空冷凍干燥箱中干燥12h，收 集產(chǎn)品，制備獲得馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊。
[0047] 經(jīng)上述制備方法制備的馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊產(chǎn)品顏色為乳黃色，無特殊 氣味，粉末細(xì)膩均勻；表面含油率為17. 3%，包埋率為82. 7% ;微膠囊含水率為3. 80%，符合微 膠囊水分含量要求；平均粒徑為306. 6nm。
[0048] 實(shí)施例二：馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備 %按照重量百分比計(jì)，從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊的具體方法步驟 如下： (1)馬齒莧渣的制備：以鮮馬齒莧、生活飲用水為主要原料，鮮馬齒莧經(jīng)挑選、清洗、切 碎，按重量比1:3比例加水浸泡12h，80°C下熬煮6h，過濾獲得馬齒莧渣。
[0049] (2)采用馬齒莧渣為原料的預(yù)處理：采用馬齒莧加工生產(chǎn)中的馬齒莧渣或上述步 驟制備的馬齒莧渣為原料，經(jīng)70°C烘干、粉碎、過篩60目、稱量、填料。
[0050] (3)亞臨界異丁烷萃取技術(shù)提取馬齒莧油：進(jìn)行亞臨界流體萃取工藝，設(shè)定條件， 萃取壓力〇. 8MPa，萃取溫度40°C，萃取150min，將經(jīng)過萃取制備的馬齒莧油浸膏，待萃取三 次后合并每次得到的馬齒莧油浸膏，經(jīng)4000r/min離心15min、過濾后制備獲得成品馬齒莧 油。
[0051] (4)阜化水解制備富集前混合脂肪酸：按照g/mL計(jì)，將馬齒覽油與0. 5mol/L K0H-乙醇溶液按1 :20混合，即將上述步驟（3)制備的馬齒莧油加入K0H的乙醇溶液，然后 放于75°C的水浴中攪拌、回流120min，得到皂化液；加入與0. 5 mol/L K0H-乙醇溶液等量的 冰蒸餾水迅速冷卻，然后用與〇. 5 mol/L Κ0Η-乙醇溶液等量的石油醚萃取不皂化物，經(jīng)萃取 多次，取水層加一倍量水稀釋，緩慢加入10%的HC1，調(diào)至pH=2~3,此時(shí)可明顯看到油層和水 層，立即用與〇. 5mol/LK0H-乙醇溶液等量的石油醚萃取混合脂肪酸，萃取多次，通過分液 漏斗得到石油醚層；石油醚層用5%的NaCl溶液水洗至中性，再用無水硫酸鈉干燥、過濾后 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，即得富集前混合脂肪酸。
[0052] (5)采用尿素包合法富集多不飽和脂肪酸：按照g/g/mL計(jì)，將富集前的混合脂肪 酸、尿素和無水乙醇按照1 :1 :16,即以尿素/富集前的混合脂肪酸按m/m，為1，富集前的 混合脂肪酸/乙醇按m/v為1:16,將尿素與無水乙醇在60°C下加熱攪拌回流，直至尿素全 部溶解，迅速倒入盛有上述步驟（4)制備的富集前的混合脂肪酸中，混勻后，于60°C下加熱 攪拌回流20min，冷卻至室溫，置于4°C中結(jié)晶24h后，將結(jié)晶包合物迅速抽濾，得到結(jié)晶包 合物和濾液兩部分，其中結(jié)晶包合物中含有多數(shù)的飽和脂肪酸和油酸；將濾液中未包合脂 肪酸，即將高純度的多不飽和脂肪酸經(jīng)過萃取，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后得到固體顆粒， 加入30%的水，HCL調(diào)至pH5飛，再加與無水乙醇等量的石油醚進(jìn)行萃取，用蒸餾水洗醚層至 用尿素試紙檢測(cè)無尿素為止，用無水硫酸鈉干燥4h，即可得到含有較高純度的多不飽和脂 肪酸的富集后混合脂肪酸。
[0053] (6)多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備：選用阿拉伯膠、β-環(huán)糊精和變性淀粉作為 壁材，以富集后的混合脂肪酸為芯材，以壁材和芯材按照重量比3:1配比，將稱取的阿拉伯 膠、β -環(huán)糊精和變性淀粉按照重量比1:1:2混合后在60°C條件下攪拌30min，然后經(jīng)攪拌， 使其充分溶解，放置室溫冷卻，得到水相；稱取上述步驟（5)制備的25%富集后的混合脂肪 酸，并加入2%吐溫80在60°C條件下進(jìn)行攪拌溶解，得到油相；將油相緩慢加入到水相中繼 續(xù)在60°C條件下攪拌，使其充分溶解，然后用經(jīng)高速均質(zhì)10000r/min條件下分散3min，使 油滴均勻乳化在壁材溶液中，呈乳狀液狀態(tài)；在溶膠罐中先加入甘油（15% )、純水（40% )， 攪拌并加熱到75°C后加入明膠（45% )，攪拌溶解60min使明膠完全溶解，抽真空，除去氣 泡，60°C保溫待用；將膠液和混合好的內(nèi)容物裝入制囊機(jī)中進(jìn)行壓丸，膠丸定型后自然干 燥，溫度控制在45°C?50°C，制備獲得馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊。
[0054] 通過上述制備的馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊，富集后混合脂肪酸脂肪酸相對(duì)于 富集前混合脂肪酸、馬齒莧油的總體抗氧化能力顯著，制備的馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠 囊產(chǎn)品顏色為淡黃色，無特殊氣味，粒度適中。
[0055] 實(shí)施例三：馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊及軟膠囊的制備 %按重量百分比計(jì)，馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊及軟膠囊的具體方法步驟如下： (1)采用馬齒莧渣為原料的預(yù)處理：以鮮馬齒莧、生活飲用水為主要原料，鮮馬齒莧經(jīng) 挑選、清洗、切碎，按重量比1:3比例加水浸泡12h，80°C下熬煮6h，過濾獲得馬齒莧漁，或采 用馬齒莧加工生產(chǎn)中的馬齒莧渣為原料，馬齒莧渣70°C烘干、粉碎、過篩60目、稱量、填料。
[0056] (2)亞臨界異丁烷萃取技術(shù)提取馬齒莧油：采用亞臨界流體萃取工藝，設(shè)定條件： 萃取壓力〇. 8MPa，萃取溫度40°C，萃取150min，將經(jīng)過萃取制備的馬齒莧油浸膏，待萃取三 次后合并每次得到的馬齒莧油浸膏，經(jīng)4000r/min離心15min、過濾后制備獲得成品馬齒莧 油。
[0057] (3)皂化水解制備富集前混合脂肪酸：稱取lg的由上述步驟（2)制備的馬齒莧油， 加入20mL 0. 5 mol/L濃度的K0H的乙醇溶液，然后放于75°C的水浴中攪拌、回流120min， 得到皂化液；加入與0. 5mol/LK0H-乙醇溶液等量的冰蒸餾水迅速冷卻，然后用與0. 5mol/ LK0H-乙醇溶液等量的30ml石油醚萃取不皂化物，經(jīng)萃取多次，取水層加一倍量水稀釋，緩 慢加入10%的HC1，調(diào)至pH=2?3,此時(shí)可明顯看到油層和水層，立即用與0. 5mol/LK0H-乙醇 溶液等量的20ml的石油醚萃取混合脂肪酸，萃取多次，通過分液漏斗得到石油醚層；石油 醚層用5%的NaCl溶液水洗至中性，再用無水硫酸鈉干燥、過濾后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，即得富集前混 合脂肪酸。
[0058] (4)采用尿素包合法富集多不飽和脂肪酸：取lg的尿素與16mL無水乙醇在60°C 下加熱攪拌回流，直至尿素全部溶解，迅速倒入盛有上述步驟（3)制備的lg的富集前混合 脂肪酸中，混勻后，于60°C下加熱攪拌回流20min，冷卻至室溫，置于4°C中結(jié)晶24h后，將結(jié) 晶包合物迅速抽濾，得到結(jié)晶包合物和濾液兩部分，其中結(jié)晶包合物中含有多數(shù)的飽和脂 肪酸和油酸；將濾液中未包合脂肪酸，即將高純度的多不飽和脂肪酸經(jīng)過萃取，將濾液旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)除去乙醇后得到固體顆粒，加入30%的5mL水，濃HCL調(diào)至pH5飛，再加與無水乙醇等量 的石油醚進(jìn)行萃取，用蒸餾水洗醚層至用尿素試紙檢測(cè)無尿素為止，用無水硫酸鈉干燥4h， 即可得到含有較高純度的多不飽和脂肪酸的富集后混合脂肪酸。
[0059] (5)多不飽和脂肪酸微膠囊的制備：選用阿拉伯膠、β -環(huán)糊精和變性淀粉作為壁 材，以富集前混合脂肪酸為芯材，以壁材和芯材按照重量比3:1配比；將稱取的阿拉伯膠、 β -環(huán)糊精和變性淀粉按照重量比1:1:2混合后在60°C條件下攪拌30min，然后經(jīng)攪拌，使 其充分溶解，放置室溫冷卻，得到水相；稱取上述步驟（4)制備的25%富集前混合脂肪酸，并 加入2%吐溫80在60°C條件下進(jìn)行攪拌溶解，得到油相；將油相緩慢加入到水相中繼續(xù)在 60°C條件下攪拌，使其充分溶解，然后用經(jīng)高速均質(zhì)10000r/min條件下分散3min，使油滴 均勻乳化在壁材溶液中，呈乳狀液狀態(tài)，最后置于_55°C的真空冷凍干燥箱中干燥12h，收 集產(chǎn)品，制備獲得馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊。
[0060] (6)多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備：選用阿拉伯膠、β-環(huán)糊精和變性淀粉作為 壁材，以富集后的混合脂肪酸為芯材，以壁材和芯材按照重量比3:1配比，將稱取的阿拉伯 膠、β -環(huán)糊精和變性淀粉按照重量比1:1:2混合后在60°C條件下攪拌30min，然后經(jīng)攪拌， 使其充分溶解，放置室溫冷卻，得到水相；稱取上述步驟（4)制備的25%富集后的混合脂肪 酸，并加入2%吐溫80在60°C條件下進(jìn)行攪拌溶解，得到油相；將油相緩慢加入到水相中繼 續(xù)在60°C條件下攪拌，使其充分溶解，然后用經(jīng)高速均質(zhì)10000r/min條件下分散3min，使 油滴均勻乳化在壁材溶液中，呈乳狀液狀態(tài)；在溶膠罐中先加入甘油（15% )、純水（40% )， 攪拌并加熱到75°C后加入明膠（45% )，攪拌溶解60min使明膠完全溶解，抽真空，除去氣 泡，60°C保溫待用；將膠液和混合好的內(nèi)容物裝入制囊機(jī)中進(jìn)行壓丸，膠丸定型后自然干 燥，溫度控制在45°C?50°C，制備獲得馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊。
[0061] 實(shí)施例四：亞臨界流體萃取馬齒莧油 1. 1亞臨界流體萃取馬齒莧油工藝流程簡(jiǎn)述：首先將馬齒莧渣經(jīng)烘干、粉碎、過篩，稱 取一定量分裝于200目尼龍袋內(nèi)，扎緊袋口，投入浸出罐中，抽浸出罐負(fù)壓至-O.OSMPa。將 溶劑由溶劑罐導(dǎo)入浸出罐，由于浸出罐容積較大，每次浸提溶劑量的少量誤差對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 影響較小，因此通過視鏡觀察使溶劑淹沒過物料約5cm為止。打開進(jìn)熱水閥和熱水泵對(duì)浸 出罐進(jìn)行循環(huán)加熱，當(dāng)溫度升至一定溫度，使馬齒莧中的油充分溶解，萃取一定時(shí)間后，用 加壓泵將萃取液導(dǎo)入蒸發(fā)罐，通過加熱使溶劑不斷氣化，用系統(tǒng)壓縮機(jī)將溶劑蒸汽通過冷 凝器回收至溶劑罐繼續(xù)使用，打開蒸發(fā)罐出油閥，用干凈容器盛接第一浸的馬齒莧油浸膏。 待萃取多次后合并每次得到的馬齒莧油浸膏，經(jīng)離心、過濾后既得成品馬齒莧油。
[0062] 1. 2馬齒莧油萃取率計(jì)算方法：萃取率=DO% m! 式中：1?為馬齒莧的質(zhì)量（g)，m2為萃取出的馬齒莧油的質(zhì)量（g)。
[0063] 1. 3單因素實(shí)驗(yàn) 1. 3. 1萃取壓力對(duì)馬齒莧油提取率的影響 取粉碎過篩（60目）后樣品4kg，萃取溫度30°C、萃取時(shí)間120min，考察在0. 7MPa、 0· 8MPa、0. 9MPa、l. 0MPa、l. IMPa不同萃取壓力對(duì)馬齒莧油提取效果的影響。
[0064] 由附圖2可知，馬齒莧油提取率隨著萃取壓力的升高而增加，當(dāng)壓力在0· 8MPa時(shí) 馬齒莧油提取率達(dá)到最大值2. 29%，當(dāng)超過0. 8 MPa后，提取率趨向穩(wěn)定。在亞臨界區(qū)域范 圍內(nèi)，壓力的增加使得流體溶劑的密度增加，溶解能力也隨之增加。而且隨著流體溶劑壓力 的增加，溶質(zhì)分子內(nèi)的相互作用也增加，所以馬齒莧油的溶解性也呈增加趨勢(shì)，因此提取率 增加。當(dāng)壓力高于〇.8MPa時(shí)，萃取壓力對(duì)提取率的影響不顯著，表明此時(shí)壓力的增加對(duì)馬 齒莧油的溶解性影響較小。因此，本發(fā)明的萃取壓力選用0. 8MPa為宜。
[0065] 1. 3. 2萃取溫度對(duì)馬齒莧油提取率的影響： 取粉碎過篩（60目)后樣品4kg，萃取壓力為0. 8MPa，萃取時(shí)間120min，考察25°C、30°C、 35 °C、40°C、45 °C不同萃取溫度對(duì)馬齒莧油提取效果的影響。
[0066] 由附圖3可知，在萃取的前段時(shí)間，馬齒莧油的提取率隨著溫度升高而增加。當(dāng)溫 度從25°C上升到35°C時(shí)，提取率顯著增加，從1. 87%上升到2. 57%，在35°C時(shí)獲得最大提取 率。這說明溫度的升高會(huì)使流體的傳質(zhì)系數(shù)增加，粘度下降，有利于萃取。但當(dāng)溫度繼續(xù) 上升時(shí)，提取率呈下降趨勢(shì)，這由于溫度的增高會(huì)降低流體流體的密度，溶劑有部分汽化趨 勢(shì)。不僅不能提高萃取率，反而增加系統(tǒng)危險(xiǎn)性，同時(shí)也不利于產(chǎn)品中生物活性的保留，能 耗消耗也增加，因此選擇35°C作為萃取的最適溫度。
[0067] 1. 3. 3萃取時(shí)間對(duì)馬齒莧油提取率的影響 取粉碎過篩（60目)后樣品4kg，萃取壓力為0. 8MPa，萃取溫度35°C，考察60min、90min、 120min、150min、180min不同萃取時(shí)間對(duì)馬齒覽油提取效果的影響。
[0068] 油脂在亞臨界流體中達(dá)到溶解平衡需要一定的時(shí)間。由附圖4可知，隨萃取時(shí)間 延長(zhǎng)，提取率呈現(xiàn)升高趨勢(shì)。當(dāng)萃取時(shí)間為120 min時(shí)達(dá)到最大值2. 6%，之后隨著時(shí)間延 長(zhǎng)，提取率下降，有可能萃取時(shí)間的延長(zhǎng)導(dǎo)致雜質(zhì)溶出量增加，使得馬齒莧油提取率呈現(xiàn)下 降趨勢(shì)。再延長(zhǎng)萃取時(shí)間，提取率稍稍有下降且趨向穩(wěn)定。這也說明了萃取時(shí)間并不是越 長(zhǎng)越好，一味延長(zhǎng)萃取時(shí)間，能耗升高，萃取效率下降。
[0069] 1. 3. 4萃取次數(shù)對(duì)馬齒莧油提取率的影響 取粉碎過篩（60目）后樣品4kg，萃取壓力為0· 8MPa，萃取溫度35°C，萃取時(shí)間40min， 考察萃取次數(shù)對(duì)馬齒莧油提取效果的影響。
[0070] 與超臨界流體萃取不同的是：超臨界萃取能夠?qū)崿F(xiàn)連續(xù)萃取、解析，而亞臨界萃取 由于解析過程中萃取劑與萃取物分離速度較慢，因此只能實(shí)現(xiàn)間歇式浸提。由附圖5可知， 萃取次數(shù)對(duì)亞臨界萃取的影響較為顯著，這是因?yàn)榱黧w流體對(duì)油脂的溶解性很強(qiáng)。當(dāng)萃取 次數(shù)到3次時(shí)，馬齒莧油提取率已達(dá)到2. 73%，隨著萃取次數(shù)的增加，油脂幾乎被完全萃 取，增加萃取次數(shù)，只能使能耗增加，萃取率不變。實(shí)驗(yàn)表明萃取次數(shù)為3次，萃取效率最 商。
[0071] 1. 4正交試驗(yàn)：根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以馬齒莧油提取率為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，設(shè)置三因素 三水平試驗(yàn)，選用L9 (34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組合重復(fù)三次，結(jié)果取其平均值。正 交試驗(yàn)因素水平表見表1-1，試驗(yàn)結(jié)果及方差分析表見表1 -2和表1-3。
[0072] 表1-1正交試驗(yàn)因素水平表

【權(quán)利要求】
1. 一種從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊的方法，其特征在于，％按照重 量百分比計(jì)，馬齒莧多不飽和脂肪酸的具體步驟如下： (1) 馬齒莧渣的制備：以鮮馬齒莧、生活飲用水為主要原料，鮮馬齒莧經(jīng)挑選、清洗、切 碎，按重量比1:3比例加水浸泡12h，80°C下熬煮6h，過濾獲得馬齒莧渣； (2) 采用馬齒莧渣為原料的預(yù)處理：采用馬齒莧加工生產(chǎn)中的馬齒莧渣或上述步驟提 供的馬齒莧渣為原料，經(jīng)70°C烘干、粉碎、過篩60目、稱量、填料； (3) 亞臨界異丁烷萃取技術(shù)提取馬齒莧油：進(jìn)行亞臨界流體萃取工藝，設(shè)定條件，萃取 壓力0. 8MPa，萃取溫度40°C，萃取150min，將經(jīng)過萃取制備的馬齒莧油浸膏，待萃取三次后 合并每次得到的馬齒莧油浸膏，經(jīng)4000r/min離心15min、過濾后制備獲得成品馬齒莧油； (4) 皂化水解制備富集前混合脂肪酸：按照g/mL計(jì)，將馬齒莧油與0. 5mol/L KOH-乙醇 溶液按1 :20混合，即將上述步驟（3)制備的馬齒莧油加入KOH的乙醇溶液，然后放于75°C 的水浴中攪拌、回流120min，得到皂化液；加入與0. 5 mol/L KOH-乙醇溶液等量的冰蒸餾水 迅速冷卻，然后用與〇. 5 mol/L K0H-乙醇溶液等量的石油醚萃取不皂化物，經(jīng)萃取多次，取 水層加一倍量水稀釋，緩慢加入10%的HC1，調(diào)至pH=2?3,此時(shí)可明顯看到油層和水層，立即 用與0. 5mol/LK0H-乙醇溶液等量的石油醚萃取混合脂肪酸，萃取多次，通過分液漏斗得到 石油醚層；石油醚層用5%的NaCl溶液水洗至中性，再用無水硫酸鈉干燥、過濾后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)， 即得富集前混合脂肪酸； (5) 采用尿素包合法富集多不飽和脂肪酸：按照g/g/mL計(jì)，將富集前的混合脂肪酸、尿 素和無水乙醇按照1:1 :16,即以尿素/富集前的混合脂肪酸按m/m，為1，富集前的混合脂 肪酸/乙醇按m/v為1:16,將尿素與無水乙醇在60°C下加熱攪拌回流，直至尿素全部溶解， 迅速倒入盛有上述步驟（4)制備的富集前的混合脂肪酸中，混勻后，于60°C下加熱攪拌回 流20min，冷卻至室溫，置于4°C中結(jié)晶24h后，將結(jié)晶包合物迅速抽濾，得到結(jié)晶包合物和 濾液兩部分，其中結(jié)晶包合物中含有多數(shù)的飽和脂肪酸和油酸；將濾液中未包合脂肪酸，即 將高純度的多不飽和脂肪酸經(jīng)過萃取，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后得到固體顆粒，加入30% 的水，HCL調(diào)至pH5飛，再加與無水乙醇等量的石油醚進(jìn)行萃取，用蒸餾水洗醚層至用尿素 試紙檢測(cè)無尿素為止，用無水硫酸鈉干燥4h，即可得到含有較高純度的多不飽和脂肪酸的 富集后混合脂肪酸； (6) 多不飽和脂肪酸微膠囊的制備：選用阿拉伯膠、β-環(huán)糊精和變性淀粉作為壁 材，以富集后混合脂肪酸為芯材，以壁材和芯材按照重量比3:1配比，將稱取的阿拉伯膠、 β -環(huán)糊精和變性淀粉按照重量比1:1:2混合后在60°C條件下攪拌30min，然后經(jīng)攪拌，使 其充分溶解，放置室溫冷卻，得到水相；稱取上述步驟（5)制備的25%富集后混合脂肪酸，并 加入2%吐溫80在60°C條件下進(jìn)行攪拌溶解，得到油相；將油相緩慢加入到水相中繼續(xù)在 60°C條件下攪拌，使其充分溶解，然后用經(jīng)高速均質(zhì)10000r/min條件下分散3min，使油滴 均勻乳化在壁材溶液中，呈乳狀液狀態(tài)，最后置于_55°C的真空冷凍干燥箱中干燥12h，收 集產(chǎn)品，制備獲得馬齒莧多不飽和脂肪酸微膠囊。
2. -種從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊的方法，其特征在于，％按照重 量百分比計(jì)，具體方法步驟如下： (1)馬齒莧渣的制備：以鮮馬齒莧、生活飲用水為主要原料，鮮馬齒莧經(jīng)挑選、清洗、切 碎，按重量比1:3比例加水浸泡12h，80°C下熬煮6h，過濾獲得馬齒莧渣； (2) 采用馬齒莧渣為原料的預(yù)處理：采用馬齒莧加工生產(chǎn)中的馬齒莧渣或上述步驟制 備的馬齒莧渣為原料，經(jīng)70°C烘干、粉碎、過篩60目、稱量、填料； (3) 亞臨界異丁烷萃取技術(shù)提取馬齒莧油：進(jìn)行亞臨界流體萃取工藝，設(shè)定條件，萃取 壓力0. 8MPa，萃取溫度40°C，萃取150min，將經(jīng)過萃取制備的馬齒莧油浸膏，待萃取三次后 合并每次得到的馬齒莧油浸膏，經(jīng)4000r/min離心15min、過濾后制備獲得成品馬齒莧油； (4) 皂化水解制備富集前混合脂肪酸：按照g/mL計(jì)，將馬齒莧油與0. 5mol/L KOH-乙醇 溶液按1 :20混合，即將上述步驟（3)制備的馬齒莧油加入KOH的乙醇溶液，然后放于75°C 的水浴中攪拌、回流120min，得到皂化液；加入與0. 5 mol/L KOH-乙醇溶液等量的冰蒸餾水 迅速冷卻，然后用與〇. 5 mol/L K0H-乙醇溶液等量的石油醚萃取不皂化物，經(jīng)萃取多次，取 水層加一倍量水稀釋，緩慢加入10%的HC1，調(diào)至pH=2?3,此時(shí)可明顯看到油層和水層，立即 用與0. 5mol/LK0H-乙醇溶液等量的石油醚萃取混合脂肪酸，萃取多次，通過分液漏斗得到 石油醚層；石油醚層用5%的NaCl溶液水洗至中性，再用無水硫酸鈉干燥、過濾后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)， 即得富集前混合脂肪酸； (5) 采用尿素包合法富集多不飽和脂肪酸：按照g/g/mL計(jì)，將富集前的混合脂肪酸、尿 素和無水乙醇按照1:1 :16,即以尿素/富集前的混合脂肪酸按m/m，為1，富集前的混合脂 肪酸/乙醇按m/v為1:16,將尿素與無水乙醇在60°C下加熱攪拌回流，直至尿素全部溶解， 迅速倒入盛有上述步驟（4)制備的富集前的混合脂肪酸中，混勻后，于60°C下加熱攪拌回 流20min，冷卻至室溫，置于4°C中結(jié)晶24h后，將結(jié)晶包合物迅速抽濾，得到結(jié)晶包合物和 濾液兩部分，其中結(jié)晶包合物中含有多數(shù)的飽和脂肪酸和油酸；將濾液中未包合脂肪酸，即 將高純度的多不飽和脂肪酸經(jīng)過萃取，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后得到固體顆粒，加入30% 的水，HCL調(diào)至pH5飛，再加與無水乙醇等量的石油醚進(jìn)行萃取，用蒸餾水洗醚層至用尿素 試紙檢測(cè)無尿素為止，用無水硫酸鈉干燥4h，即可得到含有較高純度的多不飽和脂肪酸的 _集后混合脂肪fe; (6) 多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備：選用阿拉伯膠、β -環(huán)糊精和變性淀粉作為壁材， 以富集后的混合脂肪酸為芯材，以壁材和芯材按照重量比3:1配比，將稱取的阿拉伯膠、 β -環(huán)糊精和變性淀粉按照重量比1:1:2混合后在60°C條件下攪拌30min，然后經(jīng)攪拌，使 其充分溶解，放置室溫冷卻，得到水相；稱取上述步驟（5)制備的25%富集后的混合脂肪酸， 并加入2%吐溫80在60°C條件下進(jìn)行攪拌溶解，得到油相；將油相緩慢加入到水相中繼續(xù) 在60°C條件下攪拌，使其充分溶解，然后用經(jīng)高速均質(zhì)10000r/min條件下分散3min，使油 滴均勻乳化在壁材溶液中，呈乳狀液狀態(tài)；在溶膠罐中先加入甘油（15% )、純水（40% )，攪 拌并加熱到75°C后加入明膠（45% )，攪拌溶解60min使明膠完全溶解，抽真空，除去氣泡， 60°C保溫待用；將膠液和混合好的內(nèi)容物裝入制囊機(jī)中進(jìn)行壓丸，膠丸定型后自然干燥，溫 度控制在45°C?50°C，制備獲得馬齒莧多不飽和脂肪酸軟膠囊。
3. 如權(quán)利要求1所述從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸的方法制備的馬齒莧多 不飽和脂肪酸微膠囊在制備預(yù)防和治療糖尿病的食品或者藥品中的應(yīng)用。
4. 如權(quán)利要求2所述從馬齒莧渣制備馬齒莧多不飽和脂肪酸的方法制備的馬齒莧多 不飽和脂肪酸軟膠囊在制備預(yù)防和治療糖尿病的食品或者藥品中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C11B1/10GK104059774SQ201410298157
【公開日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年6月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月30日
【發(fā)明者】敬思群, 劉璐萍, 楊飛飛, 童蓮花 申請(qǐng)人:新疆大學(xué), 新疆源森農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司