一種香草蘭豆莢提取物、其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物提取【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種香草蘭豆莢提取物、其制備方法和應(yīng)用。該香草蘭豆莢提取物的制備方法包括以下步驟：獲得香草蘭豆莢；取所得香草蘭豆莢，經(jīng)冷凍，解凍，粉碎后，得第一產(chǎn)品；與水混合，得第二產(chǎn)品；取所得第二產(chǎn)品與果膠酶混合，于40℃～60℃、pH4～6條件下酶解6h～10h后，滅活，過濾，收集濾液，即得。本發(fā)明提供的制備方法操作簡單、成本低，所得香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量高，抗氧化能力強，可以應(yīng)用于制備香料，更有利于香草蘭資源的充分利用。
【專利說明】一種香草蘭豆莢提取物、其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物提取【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種香草蘭豆莢提取物、其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]香草蘭(Vanilla planifolia Andrews)又名香莢蘭、香子蘭、香果蘭，屬蘭科(Orchidaceae)香子蘭屬多年生熱帶藤本植物,其充分生長、生理成熟的香草蘭豆莢(也被稱為香草蘭豆)為香料原料，為高級食用香料，有“食用香料之王”之稱，被廣泛用于食品、煙、酒、茶、化妝品及醫(yī)藥產(chǎn)品中。但是，剛采收的鮮香草蘭豆莢沒有香草蘭的特征香味，必須經(jīng)過生香處理才能產(chǎn)生獨特的香氣。
[0003]傳統(tǒng)的利用香草蘭豆莢發(fā)酵生香的過程包括四個步驟:殺青、發(fā)酵、干燥、陳化生香，最終形成組分復雜的加工產(chǎn)品，其中包括烷烴、醇類、醛酮類、酯類、酚類、酸類,少量苯、醚類等。將香草蘭豆莢進行發(fā)酵生香后，用乙醇、丙二醇、異丙醇、丙酮、乙醚等有機溶劑進行浸提，即得香草蘭豆莢提取物，也稱之為香草蘭酊劑、香草蘭豆酊。香草蘭豆莢提取物為多種成分的混合物，以其中香蘭素含量的多少來衡量其質(zhì)量的好壞，香蘭素的含量越高其質(zhì)量越好。目前市場上常用香草蘭豆莢提取物作為配香原料，用于加工食品、制備高級煙、調(diào)制酒、茶、飲料、化妝品等。
[0004]研究發(fā)現(xiàn)，香草蘭豆莢生香后形成的加工產(chǎn)品中最重要的香味成分是香蘭素。為了滿足香蘭素的需求，科學家已經(jīng)研究出了香蘭素的化學合成方法，但是，化學合成的香蘭素存在安全性問題、風味 也較差，嚴重限制了其應(yīng)用，尤其是在高檔附加值產(chǎn)品中的應(yīng)用。天然香蘭素一般以香草蘭豆莢提取物為原料進一步分離提取獲得。目前，天然香蘭素的價格十分昂貴，天然香蘭素的價格昂貴的原因一方面在于香草蘭豆莢的來源非常有限，受產(chǎn)地、天氣等因素的限制，特別是香草蘭種植過程中需要對花朵進行人工授粉，難以大規(guī)模種植。另一方面，因為香草蘭豆莢的加工以傳統(tǒng)發(fā)酵生香的粗放形式為主，鮮香草蘭豆莢中葡萄糖香草醛的含量在15~20%，理論上經(jīng)酶解后能夠轉(zhuǎn)化為約5% (干基重)的香蘭素，但是經(jīng)過傳統(tǒng)的發(fā)酵生香方法，僅產(chǎn)生了約2% (干基重)的香蘭素，也導致了天然香蘭素價格昂貴。所以，對香草蘭豆莢提取物制備方法的研究是十分必要的。
[0005]盡管香草蘭傳統(tǒng)發(fā)酵生香技術(shù)比較成熟，但是其發(fā)酵時間長、香蘭素轉(zhuǎn)化率低限制了其在制備香草蘭豆莢提取物中的應(yīng)用和發(fā)展。目前，國內(nèi)外研究人員通過外源酶酶解香草蘭豆莢來提高香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量，為了提高酶解效率，一般采用復合酶法，例如，Ruiz-Teran等人采用纖維素酶和果膠酶處理香草蘭青豆莢使得香草蘭豆莢提取物中香蘭素含量達到了 3.66%。
[0006]雖然復合酶法能夠提高香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量，但是復合酶法操作復雜，成本較高，也不利于推廣，所以急需一種操作簡單、香蘭素含量高的香草蘭豆莢提取物的制備方法。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 有鑒于此，本發(fā)明的發(fā)明目的在于提供一種香草蘭豆莢提取物、其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明提供的香草蘭豆莢提取物的制備方法操作簡單、成本低，香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量高，所得香草蘭豆莢提取物可以應(yīng)用于制備香料，更有利于香草蘭資源的充分利用。
[0008]為了實現(xiàn)本發(fā)明的發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案:
[0009]本發(fā)明提供了一種香草蘭豆莢提取物的制備方法，包括以下步驟:
[0010]步驟1:獲得香草蘭豆莢；
[0011]步驟2:取步驟I所得香草蘭豆莢，經(jīng)冷凍，解凍，粉碎后，得第一產(chǎn)品；與水混合，
得第二產(chǎn)品；
[0012]步驟3:取步驟2制備獲得的第二產(chǎn)品與果膠酶混合，于40°C~60°C、pH4~6條件下酶解6h~IOh后，滅活，過濾，收集濾液，即得。
[0013]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟2中冷凍的溫度為-40°C~_80°C。
[0014]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟2中冷凍的時間為20h~28h。
[0015]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟2中解凍的溫度為20°C~30°C。
[0016]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟2中解凍的時間為0.4h~2.5h。
[0017]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，以g/U計，步驟I中香草蘭豆莢的干重與步驟3中果膠酶的酶活力之比為1:540~2160。
[0018]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟2中第一產(chǎn)品與水的質(zhì)量比為1:1~3。
[0019]在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的制備方法中，以U/mL計，步驟3中果膠酶的酶活力與第二產(chǎn)品的體積之比為100~200:1。
[0020]在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的制備方法中，以U/mL計，步驟3中果膠酶的酶活力與第二產(chǎn)品的體積之比為120~150:1。
[0021]在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟3中酶解所用攪拌槳的轉(zhuǎn)速為50~240轉(zhuǎn)/min。
[0022]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟3中滅活具體為:
[0023]90°C~100°C條件下,加熱 IOmin ~15min。
[0024]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟3中滅活之后、過濾之前還包括浸提步驟。
[0025]在本發(fā)明的一些實施例中，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟3中浸提所用的溶劑為有機溶劑。
[0026]在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟3中的有機溶劑為乙醇、丙二醇、異丙醇、乙醚或丙酮中的一種或兩者以上混合物。
[0027]在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟3中浸提所用的有機溶劑具體為乙醇。
[0028]在本發(fā)明的另外一些實施例中，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟3中浸提步驟具體為:加入有機溶液混合，提?。辉诩尤胗袡C溶劑混合之后得到的混合物中，以體積百分比計，其中有機溶劑的體積百分含量為40%~60%。
[0029]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟3中浸提所用的時間為30min~240min。[0030]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟3中浸提的溫度為30°C~55°C。
[0031]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟3中的過濾所用過濾介質(zhì)的孔徑為60目~150目。
[0032]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟I中香草蘭豆莢為生理成熟的香草蘭青豆莢。
[0033]更為優(yōu)選地，本發(fā)明提供的制備方法中，步驟I中香草蘭青豆莢具體為鮮香草蘭青豆莢，即為剛采收的新鮮的生理成熟的香草蘭青豆莢，其中香草蘭青豆莢中的水的質(zhì)量百分含量為70%~85%。
[0034]本發(fā)明提供的香草蘭豆莢提取物的制備方法首先采用“冷凍-融解”方法對香草蘭豆莢進行破壁處理，使其中的香蘭素前體物質(zhì)釋放出來；再通過加入果膠酶進行酶解，即將香蘭素前體轉(zhuǎn)化為了香蘭素。本發(fā)明提供的制備方法巧妙地將“冷凍-融解”與酶解結(jié)合在了一起，通過條件篩選實驗獲得了較佳的技術(shù)方案，相比復合酶酶解體系而言，更容易控制反應(yīng)條件、操作簡單、成本低；所得香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量為2.33%~
4.76%。實驗結(jié)果證實，本發(fā)明提供的制備方法與復合酶解法相比，所得香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量高，抗氧化能力強，可以用于制備香草蘭浸膏，也可以用于制備香料。
[0035]本發(fā)明還提供了一種香草蘭豆莢提取物，該香草蘭豆莢提取物的制備方法包括以下步驟:
[0036]步驟1:獲得香草蘭豆莢；
[0037] 步驟2:取步驟I所得香草蘭豆莢，經(jīng)冷凍，解凍，粉碎后，得第一產(chǎn)品；與水混合，
得第二產(chǎn)品；
[0038]步驟3:取步驟2制備獲得的第二產(chǎn)品與果膠酶混合，于40°C~60°C、pH4~6條件下酶解6h~IOh后，滅活，過濾，收集濾液，即得。
[0039]本發(fā)明還提供了一種香草蘭豆莢提取物在制備香料中的應(yīng)用，該香草蘭豆莢提取物的制備方法包括以下步驟:
[0040]步驟1:獲得香草蘭豆莢；
[0041]步驟2:取步驟I所得香草蘭豆莢，經(jīng)冷凍，解凍，粉碎后，得第一產(chǎn)品；與水混合，
得第二產(chǎn)品；
[0042]步驟3:取步驟2制備獲得的第二產(chǎn)品與果膠酶混合，于40°C~60°C、pH4~6條件下酶解6h~IOh后，滅活，過濾，收集濾液，即得。
[0043]本發(fā)明提供了一種香草蘭豆莢提取物、其制備方法和應(yīng)用。該香草蘭豆莢提取物的制備方法包括以下步驟:獲得香草蘭豆莢；取所得香草蘭豆莢，經(jīng)冷凍，解凍，粉碎后，得第一產(chǎn)品；與水混合，得第二產(chǎn)品；取所得第二產(chǎn)品與果膠酶混合，于40°C~60°C、pH4~6條件下酶解6h~IOh后，滅活，過濾，收集濾液，即得。相比復合酶酶解方法而言，本發(fā)明提供的香草蘭豆莢提取物的制備方法更容易控制反應(yīng)條件、操作簡單、成本低，所得香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量高，更有利于香草蘭資源的充分利用。實驗結(jié)果證實，本發(fā)明提供的制備方法與復合酶解法相比，所得香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量高，抗氧化能力強，可以用于制備香草蘭浸膏，也可以用于制備香料。
【具體實施方式】[0044]本發(fā)明公開了一種香草蘭豆莢提取物、其制備方法和應(yīng)用。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參考本文內(nèi)容，獲得該香草蘭豆莢提取物，實現(xiàn)其應(yīng)用，特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明內(nèi)。本發(fā)明的制備方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳的實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文制備方法和應(yīng)用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0045]本發(fā)明提供的一種香草蘭豆莢提取物、其制備方法和應(yīng)用中所用到的試劑和原料均可由市場購得。
[0046]為了使本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明:
[0047]實施例1實驗條件的篩選 [0048](I)不同的酶對香草蘭豆莢中香蘭素生成的影響
[0049]實驗設(shè)置兩組，實驗組I和實驗組2，實驗組I所用的酶為纖維素酶、實驗組2所用的酶為果膠酶，兩組所用香草蘭豆莢原材料相同，來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所；酶解方法相同:均采用單一酶酶解香草蘭豆莢。
[0050]實驗組I酶解方法為:取100g香草蘭豆莢，向所得香草蘭豆莢中加水200mL，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理5min后；加入纖維素酶0.27g (購買于國藥集團化學試劑有限公司公司，酶活力值為1.5萬~8)，酶解條件為:pH為5.4 ;溫度為53°C ;時間為7h。酶解完畢后，將酶解液于100°C沸水中水浴中處理IOmin滅活；加入乙醇使得乙醇的含量為47.5% (V/V)，提取lh，之后將所得液體通過100目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，收集濾液，即得香草蘭豆莢提取物。
[0051]實驗組2酶解方法為:取100g香草蘭豆莢，向所得香草蘭豆莢中加水200mL，進行打衆(zhòng)，用膠體磨進一步細化處理5min ;加入果膠酶0.135g (購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為4.2 ;溫度為50°C;時間為7h。酶解完畢后，將酶解液于100°C沸水中水浴中處理IOmin滅活；加入乙醇使得乙醇的含量為47.5% (V/V)，提取lh，之后將所得液體通過100目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，收集濾液，即得到香草蘭豆莢提取物。
[0052]香草蘭豆莢提取物中香蘭素含量的檢測方法為液相色譜檢測方法，具體為:采用1260型安捷倫液相色譜配備反相色譜柱(4.6mmX 100mm，3.5 μ m)，柱溫箱溫度為30°C，采用乙腈和水10:90 (v/v)進行等度洗脫,流速為lmL/min。配制不同濃度標準品溶液(20,40,60，80，100和120μ g/mL)繪制標準曲線，進樣量為5 μ L，紫外檢測波長設(shè)置為280nm。待測樣品過0.45 μ m濾膜進樣，根據(jù)標準曲線得出待測樣品中香蘭素的濃度，進一步計算出待測香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量，換算成干基含量)即為香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量，計算公式為:香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量(％)=香草蘭豆莢提取物中香蘭素的總量/香草蘭豆莢干重X 100。
[0053]實驗結(jié)果:實驗組I制備獲得的香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量為1.31%，實驗組2制備獲得的香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量為2.46%，實驗結(jié)果說明了相同條件下，用果膠酶處理香草蘭豆莢所獲得的香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量較高，說明果膠酶更適合用于酶解香草蘭豆莢，本發(fā)明選用果膠酶酶解香草蘭豆莢。[0054](2)冷凍-融解對香草蘭豆莢中香蘭素生成的影響
[0055]取100g香草蘭豆莢，于_40°C低溫冰箱處理24h，將冷凍的香草蘭豆莢置于25°C條件下進行融解，融解時間為lh，向所得香草蘭豆莢中加水200mL打漿，用膠體磨進一步細化處理5min后，pH5.3、50°C條件下放置7h ;將所得溶液于100°C沸水中水浴中處理IOmin滅活；加入乙醇使得乙醇的含量為47.5% (V/V)，提取lh，之后將所得液體通過100目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，收集濾液，即得到香草蘭豆莢提取物。
[0056]采用相同的檢測方法檢測所得香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量，得其中香蘭素的含量為0.98%，說明只采用冷凍-融解方法時，所得香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量較低，不適合用于提取香草蘭豆莢提取物。
[0057](3)冷凍-融解與酶解相結(jié)合對香草蘭豆莢中香蘭素的生成的影響
[0058]實驗組3:冷凍-融解與果膠酶酶解相結(jié)合對香草蘭豆莢中香蘭素的生成的影響:
[0059]取100g香草蘭豆莢，于_40°C低溫冰箱冷凍處理24h，將冷凍的香草蘭豆莢置于25°C條件下進行融解，融解時間為lh，向所得香草蘭豆莢中加水200mL打漿，用膠體磨進一步細化處理5min ;加入果膠酶0.135g (購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為4.2 ;溫度為50°C ;時間為7h ;將酶解液于100°C沸水中水浴中處理IOmin滅活；加入乙醇使得乙醇的含量為47.5% (V/V)，提取lh，之后將所得液體通過100目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，收集濾液，即得到香草蘭豆莢提取物。
[0060]實驗組4:冷凍-融解與 纖維素酶酶解相結(jié)合對香草蘭豆莢中香蘭素的生成的影響:
[0061]稱取100g香草蘭豆莢，_40°C低溫冰箱冷凍處理24h，將冷凍的香草蘭豆莢置于25°C條件下進行融解，融解時間為lh，向所得香草蘭豆莢中加水200mL打漿，用膠體磨進一步細化處理5min ;加入纖維素酶0.27g(購買于國藥集團化學試劑有限公司公司，酶活力值為1.5萬U/g)，酶解條件為:pH為5.4 ;溫度為53°C ;時間為7h ;將酶解液于100°C沸水中水浴中處理IOmin滅活；加入乙醇使得乙醇的含量為47.5% (V/V)，提取lh，之后將所得液體通過100目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，收集濾液，即得到香草蘭豆莢提取物。
[0062]采用相同的檢測方法檢測實驗組3和實驗組4所得香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量，得實驗組3制備獲得的香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量為4.63%，實驗組4制備獲得的香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量為2.18%。實驗結(jié)果表明“冷凍-融解”與果膠酶結(jié)合比與纖維素酶結(jié)合處理香草蘭豆莢所得的香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量更高，差異顯著(P < 0.05)，說明采用“冷凍-融解”結(jié)合果膠酶處理香草蘭豆莢制備香草蘭豆莢提取物的制備方法最優(yōu)。
[0063]實施例2香草蘭豆莢提取物的制備
[0064]稱取IOOkg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，其干重為30kg)，于_40°C低溫冰箱中冷凍處理28h，將冷凍的香草蘭豆莢置于30°C條件下進行融解，融解時間為0.4h，香草蘭豆莢被完全融解；向所得香草蘭豆莢中加水100kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理5min，得180L漿液。
[0065]將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入果膠酶1.20kg (購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為4 ;溫度為60°C ;時間為IOh ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為240轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于100°C水浴處理IOmin滅活；之后將所得液體通過150目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物100L。
[0066]實施例3香草蘭豆莢提取物的制備
[0067]稱取50kg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，為剛采收的新鮮的生理成熟的香草蘭青豆莢，其中香草蘭青豆莢中的水的質(zhì)量百分含量為70%，其干重為15kg)，于_80°C低溫冰箱中冷凍處理20h，將冷凍的香草蘭豆莢置于20°C條件下進行融解，融解時間為2.5h，香草蘭豆莢被完全融解；向所得香草蘭豆莢中加水50kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理8min，得80L漿液。
[0068]將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入果膠酶0.27kg (購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為6 ;溫度為40°C ;時間為6h ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為50轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于90°C水浴處理15min滅活；之后將所得液體通過60目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物43L。
[0069]實施例4香草蘭豆莢提取物的制備
[0070]稱取80kg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，為剛采收的新鮮的生理成熟的香草蘭青豆莢，其中香草蘭青豆莢中的水的質(zhì)量百分含量為85%，其干重為12kg)，于_60°C低溫冰箱中冷凍處理24h，將冷凍的香草蘭豆莢置于25°C條件下進行融解，融解時間為2h，香草蘭豆莢被完全融解；向所得香草蘭豆莢中加水80kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理5min，得140L漿液。
[0071]將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入果膠酶0.70kg (購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為5 ;溫度為45°C ;時間為7h ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于100°C水浴處理12min滅活；之后將所得液體通過150目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物76L。
[0072]實施例5香草蘭豆莢提取物的制備
[0073]稱取IOOkg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，為剛采收的新鮮的生理成熟的香草蘭青豆莢，其中香草蘭青豆莢中的水的質(zhì)量百分含量為80%，其干重為20kg)，于_60°C低溫冰箱中冷凍處理24h，將冷凍的香草蘭豆莢置于25°C條件下進行融解，融解時間為2h，香草蘭豆莢被完全融解；向所得香草蘭豆莢中加水300kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理5min，得360L漿液。
[0074]將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入果膠酶1.44kg (購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為5 ;溫度為45 V ;時間為7h ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于100°C水浴處理12min滅活；之后將所得液體通過150目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物196L。
[0075]實施例6香草蘭豆莢提取物的制備
[0076]稱取IOOkg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，為剛采收的新鮮的生理成熟的香草蘭青豆莢，其中香草蘭青豆莢中的水的質(zhì)量百分含量為70%，其干重為30kg)，于_ 60°C低溫冰箱中冷凍處理24h，將冷凍的香草蘭豆莢置于25°C條件下進行融解，融解時間為2h，香草蘭豆莢被完全融解；向所得香草蘭豆莢中加水300kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理5min，得360L漿液。[0077]將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入果膠酶1.68kg(購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為5 ;溫度為45°C ;時間為7h ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于100°C水浴處理12min滅活；之后將所得液體通過150目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物182L。
[0078]實施例7香草蘭豆莢提取物的制備
[0079]稱取IOOkg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，為剛采收的新鮮的生理成熟的香草蘭青豆莢，其中香草蘭青豆莢中的水的質(zhì)量百分含量為80%，其干重為20kg)，于_40°C低溫冰箱中冷凍處理24h，將冷凍的香草蘭豆莢置于20°C條件下進行融解，融解時間為2.5h，香草蘭豆莢被完全融解；向所得香草蘭豆莢中加水300kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理5min，得360L漿液。
[0080]將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入果膠酶1.44kg(購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為4.5 ;溫度為45°C ;時間為7h ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于100°C沸水中水浴處理12min滅活；加入乙醇使得乙醇的含量為47.5% (V/V)，于45°C溫度下，提取lOOmin，之后將所得液體通過100目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物372L。
[0081]實施例8香草蘭豆莢提取物的制備
[0082]稱取50kg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，為剛采收的新鮮的生理成熟的香草蘭青豆莢，其中香 草蘭青豆莢中的水的質(zhì)量百分含量為85%，其干重為12.5kg)，于_80°C低溫冰箱中冷凍處理24h，將冷凍的香草蘭豆莢置于30°C條件下進行融解，融解時間為0.4h，香草蘭豆莢被完全融解；向所得香草蘭豆莢中加水100kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理5min，得140L漿液。
[0083]將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入果膠酶0.70kg (購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為4.2 ;溫度為50°C ;時間為7h ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為240轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于100°C沸水中水浴處理IOmin滅活；加入乙醇使得乙醇的含量為60% (V/V)，于40°C溫度下，提取240min，之后將所得液體通過150目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物182L。
[0084]實施例9香草蘭豆莢提取物的制備
[0085]稱取IOOkg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，其干重為30kg)，于_60°C低溫冰箱中冷凍處理20h，將冷凍的香草蘭豆莢置于25°C條件下進行融解，融解時間為2h，香草蘭豆莢被完全融解；向所得香草蘭豆莢中加水100kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理5min,得162L衆(zhòng)液。
[0086]將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入果膠酶0.54kg (購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為4 ;溫度為60°C ;時間為6h ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為50轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于90°C水浴處理13min滅活；加入異丙醇使得異丙醇的含量為40% (V/V)，于55°C溫度下，提取30min，之后將所得液體通過60目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物143L。
[0087]實施例10香草蘭豆莢提取物的制備
[0088]稱取50kg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，其干重為17.5kg)，于_50°C低溫冰箱中冷凍處理28h，將冷凍的香草蘭豆莢置于28°C條件下進行融解，融解時間為lh，香草蘭豆莢被完全融解；向所得香草蘭豆莢中加水150kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理8min,得166L衆(zhòng)液。
[0089]將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入果膠酶1.1lkg(購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為6 ;溫度為40°C ;時間為IOh ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于95°C水浴處理15min滅活；加入異丙醇與乙醇的混合物(異丙醇與乙醇的體積比為1:3)使得混合物的含量為60% (V/V)，于30°C溫度下，提取240min，之后將所得液體通過150目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物216L。
[0090]實施例11香草蘭豆莢提取物的制備
[0091]稱取50kg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，為剛采收的新鮮的生理成熟的香草蘭青豆莢，其中香草蘭青豆莢中的水的質(zhì)量百分含量為85%，其干重為12.5kg)，于_80°C低溫冰箱中冷凍處理24h，將冷凍的香草蘭豆莢置于30°C條件下進行融解，融解時間為0.4h，香草蘭豆莢被完全融解；向所得香草蘭豆莢中加水100kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理5min，得140L漿液。
[0092]將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入果膠酶0.65kg (購買于杰能科公司，酶活力值為3萬U/g)，酶解條件為:pH為4.2 ;溫度為50°C ;時間為7h ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為240轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于100°C沸水中水浴處理IOmin滅活；加入乙醇使得乙醇的含量為60% (V/V)，于40°C溫度下，提取240min，之后將所得液體通過150目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物182L。
[0093]實施例12不同組別所得香草蘭豆莢提取物的質(zhì)量評價
[0094]采用以下方法分別測定實施例2至實施例11制備獲得的香草蘭豆莢提取物的濃度、其中香蘭素的含量、以及對DPPH自由基清除作用的IC5tl值，以評價香草蘭豆莢提取物的質(zhì)量，香蘭素的含量越高質(zhì)量越好、對DPPH自由基清除作用的IC5tl值越低抗氧化能力越好。以復合酶法制備獲得的香草蘭豆莢提取物作為對照組。
[0095]以復合酶法制備香草蘭豆莢提取物的具體步驟為:
[0096]稱取IOOkg香草蘭豆莢(來源于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所，為剛采收的新鮮的生理成熟的香草蘭青豆莢，其中香草蘭青豆莢中的水的質(zhì)量百分含量為70%，其干重為30kg)，將所得香草蘭豆莢中加水200kg，進行打漿，用膠體磨進一步細化處理5min，得280L漿液。將所得漿液全部加入到酶解罐中，加入戊聚糖復合酶(購買于諾維信公司，其中含有纖維素酶、半纖維素、阿拉伯糖酶、木聚糖酶)0.6kg，酶解條件為:pH為5.0 ;溫度為50°C;時間為7.1h ;攪拌槳的轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)/min。酶解完畢后，將所得酶解液于100°C水浴處理5min滅活；加入乙醇使得乙醇的含量為47.5% (V/V)，于45°C溫度下，提取lOOmin，之后將所得液體通過100目的自動壓濾機，過濾去除纖維和部分蛋白質(zhì)，得到香草蘭豆莢提取物156L。
[0097]采用以下方法檢測香草蘭豆莢提取物的濃度:將所得香草蘭豆莢提取物進行減壓回收乙醇和水，直至乙醇和水不再蒸出為止，即得浸膏，稱重，計算浸膏收率，以浸膏收率代表香草蘭豆莢提取物的濃度，其計算公式為:收率)=浸膏質(zhì)量/香草蘭豆莢提取物的質(zhì)量X 100。
[0098]香草蘭豆莢提取物中香蘭素含量的檢測方法為液相色譜檢測方法，具體為:采用1260型安捷倫液相色譜配備反相色譜柱(4.6mmX 100mm, 3.5 μ m),柱溫箱溫度為30°C，采用乙腈和水10:90 (v/v)進行等度洗脫,流速為lmL/min。配制不同濃度標準品溶液(20,40,60，80，100和120 μ g/mL)繪制標準曲線，進樣量為5 μ L，紫外檢測波長設(shè)置為280nm。樣品過0.45 μ m濾膜進樣，根據(jù)標準曲線算出樣品中香蘭素的濃度，進一步計算出所得香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量，換算成干基含量(％)即為香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量，計算公式為:香草蘭豆莢提取物中香蘭素的含量(％)=香草蘭豆莢提取物中香蘭素的總量/香草蘭豆莢干重X 100。
[0099]香草蘭豆莢提取物的抗氧化能力測試方法:首先準備0.6mol/L的DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)乙醇溶液，用乙醇配制香草蘭豆莢提取物的不同濃度溶液:0.05mg/mL,0.10mg/mL, 0.20mg/mL, 0.30mg/mL, 0.40mg/mL, 0.50mg/mL, 0.60mg/mL, 0.70mg/mL, 0.80mg/mL, 0.90mg/mL, 1.0Omg/mL, 1.lOmg/mL, 1.20mg/mL。分別吸取 DPPH 乙醇溶液和香草蘭豆莢提取物各0.5mL,混合，再加入4.45mL乙醇溶液充分混合，得混合物；在暗處反應(yīng)30min后，以Vc為對照品，采用紫外分光光度計測定混合物在517nm處的吸光值，以吸光度對香草蘭豆莢提取物濃度作圖。自由基清除能力用IC5tl值表示，IC50值代表混合物在517nm的吸光值降低50%時所對應(yīng)的香草蘭豆莢提取物的濃度，IC5tl值越低說明其抗氧化能力越好，根據(jù)吸光度對香草蘭豆莢提取物濃度圖即可獲得香草蘭豆莢提取物對DPPH自由基清除作用的IC5tl值。
[0100]各個實施例和對照 組所得香草蘭豆莢提取物的濃度、香蘭素的含量、以及對DPPH自由基清除作用的IC5tl值檢測結(jié)果見表1。
[0101]表1各個組別各個檢測項所得檢測結(jié)果
[0102]
【權(quán)利要求】
1.一種香草蘭豆莢提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1:獲得香草蘭豆莢； 步驟2:取所述香草蘭豆莢，經(jīng)冷凍，解凍，粉碎后，得第一產(chǎn)品；與水混合，得第二產(chǎn)品; 步驟3:取所述第二產(chǎn)品與果膠酶混合，于40°C~60°C、pH4~6條件下酶解6h~IOh后，滅活，過濾，收集濾液，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2中所述冷凍的溫度為-40°C~_80°C ;所述冷凍的時間為20h~28h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2中所述解凍的溫度為20°C~300C ;所述解凍的時間為0.4h~2.5h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，以g/U計，步驟I中所述香草蘭豆莢的干重與步驟3中所述果膠酶的酶活力之比為1:540~2160。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2中所述第一產(chǎn)品與所述水的質(zhì)量比為1:1~3。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3中所述滅活之后、所述過濾之前還包括浸提步驟。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟3中所述浸提所用的溶劑為有機溶劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟I中所述香草蘭豆莢為生理成熟的香草蘭青豆莢。
9.一種如權(quán)利要求1至8中任意一項所述的制備方法制備獲得的香草蘭豆莢提取物。
10.如權(quán)利要求9所述的香草蘭豆莢提取物在制備香料中的應(yīng)用。
【文檔編號】C11B9/02GK103981029SQ201410215755
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年5月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月21日
【發(fā)明者】張彥軍, 谷風林, 徐飛, 陸敏泉, 賀書珍, 譚樂和, 初眾, 莫麗梅 申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院香料飲料研究所